JPH0222294A - ブラジキニン拮抗ペプチド類 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 技術分野 本発明は、ブラジキニン生物活性の拮抗剤として作用す
る新規ペプチド類に関する。

発明の背景 ブラジキニン並びにその生理学上重要な関連ペプチド類
のカリジン（リシン−ブラジキニン）及びメチオニン−
リシン−ブラジキニンは、平滑筋を収縮させ（例えば、
下痢、炎症性腸疾患及び喘息を生じさせる）；血圧を低
下させ；アレルギー関節炎及び喘息の場合のように炎症
を媒介し；血液凝固及び体内の補体媒介反応に関与し；
鼻炎（ウィルス性、アレルギー性及び非アレルギー性）
を媒介し；及び、敗血症性ショック、急性膵炎、遺伝性
血管神経症性浮腫、胃切除後ダンピング症蚊群、カルチ
ノイド症候群、アナフィラキシ−ショック、精子運動性
減少及び他のある症候群のような病状に際して過剰産生
される。ブラジキニン産生の結果として病状箇所で痛み
を発生させ、しかもブラジキニンの過剰産生はブラジキ
ニンによる刺激を介して直接に、又はプロスタグランジ
ン類及びロイコトリエン類を産生ずるアラキドン酸経路
の活性化により及び／又は他のニューロペプチド類の放
出によって痛みを増強させる。ブラジキニン及びブラジ
キニン関連キニン類は動物自体から産生されるのみなら
ず、刺創及び咬傷の結果としでも体内注入される。スズ
メバチ（ｈｏｒｎｅｔ）及びジガバチ（ｗａｓｐ）のよ
うな昆虫はブラジキニン関連ペプチドを体内注入して、
これが痛み、はれ及び炎症も生じさせることが知られて
いる。ブラジキニン及び関連ペプチドのこれらの作用に
ついて記載した参考文献は、実験薬理学ハンドブック（
Ｉｌａｎｄｂｏｏｋ　ｏｒＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　
Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ）　。

第２５４巻　１９７０年及び第２５巻増刊号。

１９７９年、スブリンガーーフエルラッヒ（Ｓｐｒｌｎ
ｇｃｒ−Ｖｅｒｌａｇ）で見られる。

ブラジキニンの存在、活性及びペプチド構造は、約１９
６０年以降公知であった〔ボイソナス。

Ｒ，Ａ、　　（Ｂｏｌｓｓｏｎｎａｓ、Ｒ，Ａ、）　、
　　Ｓ、　　ガツトマン（Ｓ、Ｇｕｔｔｉａｎｎ）、　
　Ｐ、　　Ａ、　　ジャックノード（Ｐ、Ａ。

Ｊａｑｕｅｎｏｕｄ）、　　Ｈ，コンゼット（Ｈ，Ｋｏ
ｎｚｅｔｔ）　　＆　Ｅ　。

スチューマー（Ｅ、５ｔｕｒｉｅｒ）　、“ブラジキニ
ンに関連したペプチド類の合成及び生物活性”、エクス
ペリメンタ（Ｐ、ｘｐｅｒｔｉｅｎＬａ）　、第１６巻
、１９６０年。

第３２６頁〕。ブラジキニンは天然作用物質であって、
ＩＰｉ１７以上の特異的生物学的レセプターに結合しか
つヒトを含めた哺乳動物において痛み及び炎症の応答並
びに平滑筋収縮を促進する。ノナペプチドとしてのブラ
ジキニン構造の解明によって、類似構造をもつペプチド
類はブラジキニンのように組織の痛み及び炎症応答を促
進せずにブラジキニンレセプターに結合することにより
ブラジキニン拮抗剤として作用しうるという考え方が出
てきた。数百のこのような配列関連ペプチドアナログが
合成され、生物系で試験された；スチュアート。

Ｊ　、　　Ｍ、　　（Ｓｔｃｖａｒｔ、Ｊ、Ｍ、）＆　
Ｄ、　　Ｗ、　　ウーリー（Ｄ、Ｗ、１１０ｏｌ　Ｉｅ
ｙ）　、“特異的抗ブラジキニン活性に関するペプチド
類の研究“、ハイポテンジブ・ペブタイデス（Ｈｙｐｏ
Ｌｅｎｓｉｖｅ　Ｐｅｐｔｉｄｅｓ）、スブリンガ一フ
ェルラッヒ・ニューヨーク社、第２３−３３頁；シュロ
ーダ−、Ｅ、　　（Ｓｃｈｒｏｄｅｒ、Ｂ、）、“キニ
ン類の構造−活性関係“実験薬理学ハンドブック。

第２５巻、１９７０年、スブリンガーーフエルラッヒ２
第３２４−３５０頁；スチュアート、Ｊ。

Ｍｌ、“ブラジキニンに関連したペプチド類の化学及び
生物活性“、第２５巻増刊号、１９７９年。

スブリンガーーフェルラッヒ　第２２７−２７２頁；ス
チュアーｈ、　　Ｊ、　Ｍ、　＆Ｒ，Ｊ、バブレフ（Ｒ
，Ｊ、Ｖａｖｒｃｋ）　、　　“ブラジキニン化学二作
用剤及び拮抗剤“、アトパンセス・イン・エクスベリメ
ンタル・メディシン・アンド・バイオロジー（＾ｄｖａ
ｎｃｃｓ　　Ｉｎ　　ＥｘｐｅｒｉＩｌｅｎｔａｌ　　
Ｍｅｄｌｃｌｎｅ　　ａｎｄＢｉｏｌｏｇｙ）　、第１
５６巻、１９８３年、第５８５５８９頁。

１９８７年９月１５日付でスチ二アート＆バブレクに発
行された米国特許第４，６９３．９９３号明細書（１９
８６年１２月１８日付で公開された対応ＰＣＴ特許出願
第ＷＯ３６１０７２６３号明細書も参＠、）では、ブラ
ジキニン拮抗剤と口されるペプチド類について開示しか
つ特許請求している。しかしながら、スチュアート＆バ
ブレク′９９３号のペプチド類は、周知かつ許容された
鎮痛性及び抗炎症性インビボアッセイ法（スチュアート
＆バブレク″９９３号では開示されていない）により試
験されるが、これらのペプチド類は作用活性又は混合作
用／拮抗活性を示すことが判明した。

本発明の目的は、ブラジキニン拮抗剤としての活性を有
する新規ペプチド類を提供することである。

本発明のもう１つの目的は、測定しえない又は最少の作
用活性でしかないこのようなブラジキニン拮抗ペプチド
類を提供することである。

本発明の他の目的は、ブラジキニン拮抗ペプチド類を含
有した新規医薬組成物を提供することである。

本発明の更にもう１つの目的は、ヒト又はより下等の動
物にこのようなブラジキニン拮抗ペプチド類を投与する
ことにより、鎮届及び／又は平滑筋弛緩を生じさせるた
めの、かつブラジキニンにより媒介される炎症、鼻炎、
鼻漏、咽喉症、うっ血及び／又は他の症状を治療するた
めの新規方法を提供することである。

発明の要旨 本発明は、下記構造を有するブラジキニン拮抗ペプチド
類： １１−Ｌ−Ｑ−Ｔ−Ｕ−Ｖ−Ｗ−Ｘ−Ｙ−Ｚ−Ａｒｇ−
０１１（１）〔上記式中、 （ａ）Ｌは非存在、Ｄ−又はＬ−配置の単一塩基性アミ
ノ酸残１、Ｄ−又はＬ−配置のアミノ酸残基約２〜約４
（そのうちの少なくとも１つは塩基性である）を含有し
たペプチド、並びにアシル型保、ＩＭ、芳δ族つレタン
型保護基及びアルキル型保護基からなる群のＮ末端酵素
保護基からなる群より選択される； （ｂ）ＱはＡｒｇ、　Ｌｙｓ及びＯｒｎからなる群より
選択される； （ｃ）Ｔ及びＵは各々独立してＤ−及びＬ−環状アミノ
酸残基、Ｄ−及びＬ−脂肪族アミノ酸残基、Ｌ−芳香族
アミノ酸残基、Ｌ−酸性アミノ酸残基、Ｌ−アミドアミ
ノ酸残基並びにＬ−ヒドロキサメートアミノ酸残基から
なる群より選択され；その場合にＴ及びＵのうち少なく
とも１つはＬ−酸性アミノ酸残基、Ｌ−アミドアミノ酸
残基及びＬ−ヒドロキサメートアミノ酸残基からなる群
より選択される； （ｄ）ＶはＤ〜又はＬ−脂肪族、Ｄ−又はＬ−環状及び
Ｄ−又はＬ−芳香族アミノ酸残基からなる群より選択さ
れる； （ｅ）ＷはＬ−脂肪族及びＬ−芳香族アミノ酸残基から
なる群より選択される； （ｆ）ＸはＤ−又はＬ−芳香族及びＤ−又はＬ−脂肪族
アミノ酸残基からなる群より選択される；（ｇ）ＹはＤ
−芳香族アミノ酸残基からなる群より選択される； （ｈ）ＺはＬ−芳香族及びＬ−脂肪族アミノ酸残基から
なる群より選択される〕 及びその薬学上許容される塩類に関する。

発明の詳細な説明 本発明は、具体的配列でのアミノ酸残基の縮合体である
ペプチド類に関する。

本出願の目的のために、アミノ酸残基は、それらの官能
基の一次特徴に基づいて、脂肪族、環状、芳香族、塩基
性、酸性又はアミドとして分類される。

本発明で用いられる脂肪族アミノ酸残基は、下記化学構
造を有する： Ｒ１ 上記式中、Ｒ１は各々独立して水素及び炭素原子１〜約
６を有する飽和もしくは不飽和、直鎖もしくは分岐鎖、
非置換もしくは置換アルキルからなる群より選択される
。炭素に結合した１つのＲ１は、炭素及びそれに結合し
た他のＲ１の間に二重結合が存在するように非存在であ
ってもよい。置換されたＲ１は、実質上中性（酸性でも
塩基性でもない）の非芳香族置換基を有している。好ま
しいＲ１は非置換であるか又はヒドロキシ、炭素原子１
〜約３を有するアルコキシ、ハロもしくはニトロで置換
されており、更に好ましいＲ１は非置換であるか又はヒ
ドロキシで置換されている。好ましいＲ１は、直鎖であ
るか又は単一のメチル分岐鎖を有するＣニー０４アルキ
ルである。好ましいＲは飽和されている。窒素に結合し
たＲ１が水素であってかつ炭素に結合したＲ１のうち少
なくとも１つが水素である脂肪族アミノ酸残基も好まし
い。

本発明で用いられる環状アミノ酸残基は、下記化学構造
を有する： 上記式中、Ｒ１は前記と同義である；上記式中、Ｒ２は
炭素原子約１〜約６を有する飽和もしくは不飽和、直鎖
もしくは分岐鎖、非置換もしくは置換アルキルである；
上記式中、Ｒ７は非存在又はＣＨ２である；及び上記式
中、Ｊは非存在、イオウ及び酸素からなる群より選択さ
れる。Ｊは非存在又はイオウであることが好ましく、最
も好ましくはＪは非存在である。Ｒ７は非存在であるこ
とが好ましい。Ｒ２は好ましくはＣ−Ｃ更に好２　　　
４ゝ ましくはＣ３−Ｃ４、最も好ましくはＣすある。

Ｒ２は飽和されていることが好ましい。Ｒ−は直鎖であ
ることが好ましい。置換されたＲ２は、実質上中性の非
芳香族置換基を有している。Ｒ２は非置換であるか又は
ヒドロキシ、炭素原子１〜約３を有するアルコキシ、ハ
ロもしくはニトロで置換されていることが好ましく、Ｒ
−は非置換であるか又はヒドロキシで置換されているこ
とが更に好ましく、Ｒ２は非置換であることが最も好ま
しい。Ｒ１は水素であることが好ましく、Ｊが非存在で
ある場合には、Ｒは炭素及びＲ２の間に二重結合か存在
するように非存在であってもよく、最も好ましくはＲ１
は水素である。

本発明で用いられる芳谷族アミノ酸残基は、下記化学構
造を有する： ケ ドリル及びイミダゾリルからなる群より選択されること
が好ましく、最も好ましいＡｒは非置換又は置換フェニ
ルである。置換されたＡ「は、実質上中性の非芳香族置
換基を有している。Ａｒは非置換であるか又はヒドロキ
シ、Ｃ１−０３アルコキシ、ニトロもしくはハロで置換
されていることが好ましく、Ａ「は非置換であるか又は
ヒドロキシで置換されていることが更に好ましく、Ａ「
は非置換であることが最も好ましい。

本発明で用いられる塩基性アミノ酸残基は、下記化学構
造を有する： 上記式中、各Ｒは前記と同義である；Ｒ３は非存在、メ
チレン及びエチレンからなる群より選択される；及びＡ
「は非置換又は置換アリールである。

各Ｒは水素であることが好ましい。Ｒ３はメチル ンであることが好ましい。Ａｒは非置換及び置換フェニ
ル、ナフチル、チエニル、ピリジル、イン上記式中、各
Ｒは前記と同義である；Ｒ４は炭索原子約１〜約６を有
する飽和もしくは不飽和、直鎖もしくは分岐鎖の非置換
アルキルである；Ｇは非存在及び−Ｎｌ−Ｃ（ＮＨ）−
からなる群より選択される。各Ｒ１は水素であることが
好ましい。Ｒ４は０３−Ｃ４であることが好ましい。Ｒ
は飽和されていることが好ましい。Ｒ４は直鎖であるこ
とか好ましい。

本発明で用いられる酸性アミノ酸残基は、下記化学構造
を有する 上記式中、各Ｒ１は前記と同義である；Ｒ５及びＲ６は
炭素原子約１〜約６を有する飽和もしくは不飽和、分岐
鎖もしくは直鎖の非置換アルキルである。各Ｒ１は水素
であることが好ましい。Ｒ５Ｒ５及びＲ６は飽和されて
いることが好ましい。

Ｒ及びＲ６は直鎖であることか好ましい。Ｒ５はＣ１−
Ｃ２であることが好ましく二ＲはＣ３であることが好ま
しい。

本発明で用いられるアミドアミノ酸残基は、前記の酸性
アミノ酸残基と同様の化学構造を有しているが、但し前
記式中−ＣＯＯＩＩは−ＣＯＮＨ２又は−ＮＩＩＣ（０
）ＣＩ＋３のいずれかで置き換えられる。

本発明で用いられるヒドロキサメートアミノ酸残基は、
−ＣＯＮＨ２部分を有する前記アミドアミノ酸残基と同
様の化学構造を有しているが、但し前記式中のかかる一
ＣＯＮＨ２は−ＣＯＮＩＩＯ１１で置き換えられる。

下記第１表は、本発明のペプチド類の一部である特定の
アミノ酸残基、かかるアミノ酸残基を表わすために本明
細書中で用いられる略号及びこれらのアミノ酸残基の化
学構造に関しての例を掲げている。

第１表 〜Ｎ−Ｃｌ１−Ｃ〜である。

アミノ酸残基 脂肪族 略号８ 構造 環状 芳香族 〜Ｕ−υ〜 アミド Ｎ・アセチルオルニチル 塩基性 酸性 ＳＢ−Ｕ〜 ＊この第１表で示されているいずれの３字略号もＬ−配
置のアミノ酸残基に関する（但し、グリシルを除く）。

Ｄ−配置のアミノ酸残基は文字“Ｄ“に続く同じ３字略
号によって表示される。

林集合的Ｎａｐ 本発明は、下記構造を有するブラジキニン拮抗ノナ（又
は史に大きな）ペプチド類に関するコ１１−Ｌ−Ｑ（−
Ｕ−Ｖ−Ｗ−Ｘ−Ｙ−Ｚ−Ａｒｇ−Ｏｆ（（１，）位置
：　　０１２３４５６７８　９ 構；？ｉ　（１）において、Ｌは非存在；Ｄ−又はＬ−
配置の単一塩基性アミノ酸残基；Ｄ−又はＬ配置のアミ
ノ酸残基２〜約４（そのうちの少なくとも１つは、塩基
性アミノ酸残基である）を含有したペプチド；並びに例
えばアセチル、ｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）及び
ベンジルオキシカルボニルのようなアシル型保護基、芳
香族ウレタン型保：Ｊｔ基及びアルキル型保ａＭｉから
なる群のＮ末端酵素保護基から選択される。Ｌの好まし
い例としては、Ａｒｇ　ｓ　ＤＡｒｇ、　Ｌｙｓ　５Ｄ
Ｌｙｓｓ　Ｌｙｓ−Ｌｙｓ　％　Ｍｅｔ−Ｌｙｓ　、　
Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ｍｃｔ−Ｌｙｓ　、　ＤＬｙｓ−Ｌｙ
Ｓ、　Ｏｒｎ　、　ｌ１ａｒ　ｓＤｌｌａｒ、　５−グ
アニジノペンタノイル、６−グアニジノヘキサノイル、
６−アミノヘキサノイル及び５−アミノペンタノイルが
ある。更に好ましいしはＩ）ＡｒｇＳＬｙｓ−Ｌｙｓ及
び非存在からなる群より選択され：最も好ましいＬはＬ
　ｙ　ｓ−Ｌｙ　ｓ及び特にＤＡｒｖ、である。

構造（１）において、ＱはＡｒｇＳＬｙｓ及びＯｒｎか
らなる群より選択される。最も好ましいＱはＡｒｇであ
る。

構造（１）において、Ｔ及びＵは各々独立してＤ−及び
Ｌ−環状アミノ酸残基、Ｄ−及びＬ−脂肪族アミノ酸残
基、Ｌ−芳香族アミノ酸残基、Ｌ−酸性アミノ酸残基、
Ｌ−アミドアミノ酸残基並びにＬ−ヒドロキサメートア
ミノ酸残基からなる群より選択される。しかも、Ｔ及び
Ｕのうち少なくとも１つはＬ−酸性アミノ酸残基、Ｌ−
アミドアミノ酸残基及びＬ−ヒドロキサメートアミノ酸
・残基からなる群より選択される。Ｔ及びＵの好ましい
例としては、Ｐｒｏ　ｓ　ＤＰｒｏ、　）Ｉｙｐ　、　
Ａｚｔ　、　Ｔｈｚ　。

Ｉｎｐ　、　Ｅｐｒ　、　Ａｓｐ　、　Ｇｌｕ　、　Ａ
ｓｎ　、　Ｇｌｎ　、　Ｃｐｒ　。

Ｃａ１ｐ　、　Ａａｐ　、Ａｏｒ　ｓ　Ｎｈａ及びＮｈ
ｇがある。Ｔ又はＵのうち１つ（好ましくはＴ）は、好
ましくはＤ−及びＬ−環状アミノ酸残基、Ｄ−及びＬ−
脂肪族アミノ酸残基及びＬ−芳香族アミノ酸残基、更に
好ましくはＰｒｏ　、ＤＰｒｏ、Ｈｙｐ　５ＡＺＬ　、
Ｔｔｔｚ　。

Ｉｎｐ及びＥｐｒ　、更に一層好ましくはＰｒｏ及びｕ
ｙｐからなる群、最も好ましくはＰｒｏから選択され；
一方Ｔ又はＵのうち他方（好ましくはＵ）は、Ｌ酸性ア
ミノ酸残基、Ｌ−アミドアミノ酸残基及びＬ−ヒドロキ
サメートアミノ酸残基、更に好ましくはＡｓｐ　１Ｇｌ
ｕ　５Ａｓｎ　５Ｇｌｎ　１Ｃｐｒ　１Ｃ１ｌｌｐ　５
Ａａｐ　、　Ａｏｒ　、　Ｎｈａ及びＮｈｇ　、更に一
層好ましくはＡｓｎ　、　Ｃｌ１ｐ　％　Ａａｐ　５Ｇ
ｌｎ　５Ａｏｒ　、　Ｎｈａ及びＮｈｇ　。

最も好ましくはＡｓｎ及びＧｌｎからなる群より選択さ
れる。

構造（１）において、ＶはＤ−又はＬ−配置の脂肪族、
環状及び芳香族アミノ酸残基からなる群より選択される
。好ましいＶは、Ｇｌｙ　、　Ａｌａ　。

ＤＰｒｏ、　Ｄｌｌｙｐ及びＳａｒからなる群より選択
され；更に好ましいＶはＧｌｙ及びＤＰｒｏであり：最
も好まし１、ＳＶはｃ＋ｙである。

構造（１）において、ＷはＬ−配置の脂肪族及び芳香族
アミノ酸残基、好ましくはＬ−芳香族アミノ酸残基から
なる群より選択される。Ｗの好ましい例としては、Ｐｈ
ｅ　、　Ｔｈｉ　、　Ｎａｐ　、　Ｐｙｒ　、　Ｎｐｈ
　。

Ｃｐｈ　、Ｈｔｙ及びＴｙｒがある。更に好ましいＷは
Ｐｂｅ及びＴｙｒからなる群より選択され；最も好まし
いＷは円１ｅである。

構造（１）において、ＸはＤ−又はＬ−配置の芳香族及
び脂肪族アミノ酸残基からなる群より選択される。Ｘの
好ましい例としては、Ｓｅｒ　、Ｔｈｒ　。

Ａｌａ　、　Ｇｌｙ　、　ＤＰｈｅ、　ＤＴｈｉ、　Ｄ
ＮａｐＳＤＰｙｒ及びＤＣｐｈである。更に好ましいＸ
は３（３ｒＳＴｈｒ　、　Ａｌａ及びＧｌｙからなる群
より選択され；最も好ましいＸはＳｃｒである。

構造（１）において、ＹはＤ−配置の芳香族アミノ酸残
基からなる群より選択される。Ｙの好ましい例としては
、ＤＰｈｅ、　ＤＴｙｒＳＤＴｈｉ、ＤＮａｐＳＤＰｙ
ｒ、ＤＮｐｈ、ＤＣｐｈＳＤＭＬｙ、　ＤＴｒｐ、　Ｄ
ｔｌｌｓＳＤｌｌｐｈ及びＤＰｇ　ｌであり；更に好ま
しいＹはＤＰｂｃ、　ＤＴｙｒ、　ＤＴｒｐ及びＤｌｌ
ｉｓからなる群より選択され；最も好ましいＹはＤＰｈ
ｅである。

構造（１）において、ＺはＬ−配置の芳香族及び脂肪族
アミノ酸残基からなる群より選択される。

Ｚの好ましい例としては、Ｐｈｅ　、　Ｔｙｒ　％　Ｐ
ｒｏ　５Ｔｈ１　、Ｐｙｒ　、　Ｎａｐ　、　Ｍｔｙ　
５Ｎｐｈ及びＣｐｈがある。

更に好ましいＺはＰｈｅ及びＴｙｒからなる群より選択
され；最も好ましいＺはＰｈｅである。

保護されたアミノ酸残基の誘導、活性化及びカップリン
グを含めた構造（１）のペプチド類の合成、及びそれら
の精製、並びに同定及び純度を調べるだめの分析方法は
、例えば液相合成に関してキスファルディ−，Ｌ　（Ｋ
ｉｓｒａｌｕｄｙ、ｌ、、）、　　“溶液中での再現方
法”、ザ・ペブタイデス （Ｔｈｅ　Ｐｅｐｔｉｄｅｓ）の第６章、第２巻、アカ
デミツク・プレス（Ａｃａｄｅａ＋ｉｃ　Ｐｒｅｓｓ）
　（出版）、１９８０年及びメリフィールド（Ｍｅｒｒ
ｉ　ｒ　Ｉｅｌｄ）の同相法による合成に関してスチュ
アート　Ｊ、Ｍ、＆Ｊ、Ｄ。

ヤング（Ｊ　、　Ｄ、　Ｙｏｕｎｇ）　、ソリッド番フ
ェース・ペプチド・シンセシス（Ｓｏｌｉｄ　Ｐｈａｓ
ｅ　Ｐｅｐｔｉｄｅ５ｙｎｔｈｅｓｉｓ）　、フリーマ
ン（Ｆｒｃｃｍａ、ｎ）　　（出版）。

１９６９年で記載されているように、ペプチド化学の知
識全体の中に含まれている。ペプチド合成の当業者であ
れば、標準溶液法により又は手動もしくは自動固相法に
よって構造（１）のペプチド類を合成することができる
。

ペプチド合成例 下記の非限定的例は、本発明のペプチド類及びそれらの
製造方法について更に説明している。

例１ ｆｌｏｅ−Ａｒｇ（Ｔｏｓ）−ポリスチレン樹脂〔カリ
フォルニア州トレンスのベーチェム社（Ｂａｃｈｅｍ　
Ｉｎｃ、））（Ｔｏｓ−トシル）Ｉｇをバイオサーチ（
Ｂｉｏｓｃａｒｃｈ）９５００自動ペプチドシンセサイ
ザーの反応容器中に入れる。ペプチド合成プログラムは
、アミノ酸−樹脂（Ｏ１３０ｉｍｏｌ／ｇ）を下記のよ
うなりｏｃ除去過程に付すことにより開始される。

Ｂｏｃ除去過程ニ アミノ酸−樹脂（又はペプチド−樹脂）を塩化メチレン
（２０ｍｌ、１５秒間／洗浄）で５回洗浄する。Ｂｏｅ
ＪＪを塩化メチレン中４５％トリフルオロ酢酸、２，５
％アニソールでの２回連続処理（６０秒間／処理）によ
り除去する。次いで、脱保護された樹脂を塩化メチレン
で２回及び塩化メチレン：ジメチルホルムアミドの１；
１混合物で３回洗浄し、中和過程に移す。

中和過程； アミノ酸−樹脂のトリフルオロ酢酸塩を塩化メチレンで
２回洗浄し、しかる後塩化メチレン中１０％ジイソプロ
ピルエチルアミンで３回処理する。遊離アミノ基を含む
アミノ酸−樹脂を塩化メチレンで５回洗浄し、しかる後
カップリング過程の用意をする。

カップリング過程ニ アミノ酸−樹脂を塩化メチレン：ジメチルホルムアミド
の２：１混合物で１回洗浄する。カップリング反応を塩
化メチレン（６，６７モル過剰）中０．６Ｍジイソプロ
ピルカルボジイミド〔ウィスコンシン州ミルウォーキー
のアルドリッチ・ケミカル社（＾１ｄｒｉｃｈ　Ｃｈｅ
ｍｉｃａｌ　Ｃｏｍｐａｎｙ））　　：　０．　６Ｍｌ
３ｏｃ−Ｌ−フェニルアラニン（ベーチェム社）の１＝
１混合物の添加によって開始させる。カップリング反応
液を１時間にわたり窒素導入下で混合する。試薬が濾去
された後、樹脂を１：１塩化メチレン：ジメチルホルム
アミド（２Ｘ）、塩化メチレン（２Ｘ）、１０％ジイソ
プロピルエチルアミン（ＩＸ）、塩化メチレン（５×）
及び１：１塩化メチレン：ジメチルホルムアミドで連続
洗浄する。次いで、樹脂をＢｏｃ−Ｌ−フェニルアラニ
ン：ジイソプロピルカルポジイミドの１：１混合物（６
，６７モル過剰）と１時間かけて再カップリングさせる
。過剰試薬の除去後、ジペプチド樹脂を塩化メチレン：
ジメチルホルムアミドの１：１混合物で２回洗浄する。

次いで、ｆｌｏｅ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ（Ｔｏｓ）−樹脂を
前記１３０Ｃ除去過程しかる後前記中和過程で処理する
。次いで、遊離アミン−ジペプチド−樹脂を前記カップ
リングａ　程で１３ｏｃ−Ｄ−フェニルアラニンとカッ
プリングさせて、１３ｏｃ−ＤＰｈｅ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ
（Ｔｏｓ）−樹脂（トリペプチド−樹脂）を形成させる
。

残りのアミノ酸を下記順序で加える：　Ｂｏｃ−８ｃｒ
、ＢｏＣ−Ｐｈｅ　ｓ　Ｂｏｃ−Ｇｌｙ　ｚ　Ｂｏｃ−
Ａｓｎ　％　ＢｏＣ−Ｐｒｏ　、　Ｂｏｃ−Ａｒｇ（Ｔ
ｏｓ）の順序で下記例外を除き前記と同様のＢｏｃ除去
、中和及びカップリング過程を行う：１−ヒドロキシベ
ンゾトリアゾール（アルドリッチＨ：）１．５当量をＡ
ｓｎ及び＾ｒｇカップリング時に加えて、これら残基の
カップリングに際して生じる公知の望ましくない副反応
を抑制する。

ノナペプチド（アミノ酸９個のペプチド）が前記のよう
な樹脂上で組立てられた後、ペプチドを下記ＨＦ（フッ
化水素酸）反応によってポリスチレン樹脂から開裂させ
る。

ＨＦ開裂反応： 完成されたペプチド−樹脂（２，３ｇ）を−７８℃でア
ニソール２ｍｌ含有濃フッ化水索酸４０ｍ１に懸濁する
。反応液を一７８℃で１時間しかる後Ｏ℃で１時間攪拌
する。反応容器中に無水アルゴンガスを徐々に導入しな
がら、液体ＨＦを０℃減圧下で除去する。樹脂−ペプチ
ド混合物を２Ｎ酢酸で洗浄することにより、遊離ペプチ
ドを樹脂から抽出する。酢酸洗液を合わせ、真空下で濃
縮して、粗ペプチド生成物を得る。

最初に粗ペプチドをＧ−１０セフアデツクスカラム〔ミ
ズーリー州セントルイスのシグマ争ケミカル社（ＳＩｇ
ａ＋ａ　Ｃｈｅａ＋Ｉｃａｌ　Ｃｏｍｐａｎｙ））に通
してＩＮ酢酸で溶出させることにより、ペプチドを精製
する。適切な両分を薄層クロマトグラフィーによる分析
後にプールし、しかる後凍結乾燥させて、白色非晶質固
体物を得る。ペプチドを０１８シリカカラム（２，１４
Ｘ３０ｃｍ）［マサチューセッツ州つォルバーンのレイ
ニン・インスツルメンツ社（Ｒａｌｎｌｎ　Ｉｎｓｔｒ
ｕｍｅｎｔｓ、Ｉｎｃ、））逆相クロマトグラフィーに
より溶媒Ａと混合された１０〜４０％溶媒Ｂ（溶媒Ａ−
水中０．１％トリフルオロ酢酸、溶媒Ｂ−アセトニトリ
ル中０．１％トリフルオロ酢酸）の３０分間勾配で溶出
させて更に精製する。

適切な両分をプールし、凍結乾燥させて、精製されたペ
プチド生成物を得る。

ペプチドは、グリセロールマトリックスから高速原子衝
撃イオン化技術を用いたフィニガン（ＦＩｎｎｉｇａｎ
）モデルＴＳＱ−４６Ｃｈリプル・クアドラポール（ｑ
ｕａｄｒａｐｏｌｅ）装置での質量スペクトル分析によ
って特徴付けられる。観察された分子イオンＭ十Ｈ−１
１２７は、所望構造に関して８１算された分子量と一致
する。合成ペプチドは、更に合成ペプチドの構造を確認
するために、自動アプライド・バイオシステムズ（Ａｐ
ｐＨｃｄ　１３１ｏｓｙｓｔｃｍｓ）＃４２０シークエ
ネーター（ｓｃｑｕｃｎａｔｏｒ）でエドマン（Ｅｄｍ
ａｎ）分解配列決定法を用いることにより配列決定され
る。

例２ ペプチド配列中３位のカップリング反応においてＡｓｎ
からＧ１１１に置換え、例１記載と同様の方法によりペ
プチドを製造する。最終ペプチドは例１で記載のような
質量スペクトル分析によって分析され、正確な分子イオ
ンＭ＋Ｈ−１１４１を示した。

例３ ペプチド配列中４位のカップリング反応においてｃｉｙ
からＤＰｒｏに置換え、例１記載と同様の方法によりペ
プチドを製造する。最終ペプチドは例１で記載のような
質量スペクトル分析によって特徴付けられ、正確な分子
イオンＭ＋Ｈ−１１６７を示した。

例４ Ｈ−Ａｒｇ−Ａｓｎ−Ｐｒｏ−ＧＩ　ｙ−Ｐｈｅ−８ｃ
ｒ−ＤＰｈｅ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−０１１（Ａｓｎ　　、
　ＤＰｈｅ７−ブラジキニン）ノ製造ペプチド配列中容
々２及び３位のカップリング反応においてＰｒｏからＡ
ｓｎに及びＡｓｎからＰｒｏに置換え、例１記載と同様
の方法によりペプチドを製造する。最終ペプチドは例１
で記載のような質量スペクトル分析によって特徴付けら
れ、正確な分子イオンＭ＋Ｈ−１１２７を示した。

例５ Ｈ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−３ｃｒ
−ＤＰｈｅ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−ＯＨ（Ａｓｐ　　、　Ｄ
Ｐｈｅ７−ブラジキニン）の製造ペプチド配列中３位の
カップリング反応においてＡｓｎからＡｓｐに置換え、
例１記載と同様の方法によりペプチドを製造する。最終
ペプチドは例１で記載のような質ニスベクトル分析によ
って特徴付けられ、正確な分子イオンＭ＋Ｈ−１１２８
を示した。

例６ １１−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａａｐ−ＧＩｙ−Ｐｈｅ−８ｅ
ｒ−ＤＰｈｅ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｏｆ（Ａａｐ　　、　
ＤＰｈｅ７−ブラジキニン）の製造及びアミノナペプチ
ドの自動合成に先立ち、非天然アミノ酸残基Ｎ−アセチ
ル−４−アミノプロリル（Ａａｐ）の前駆体を下記操作
に従い製造する。

Ｎ　−Ｂｏｃ−４−ヒドロキシプロリンベンジルエステ
ル： Ｎ−ｔｃｒｔ−ブトキシカルボニル−４−ヒドロキシプ
ロリン（Ｂｏｃ−Ｈｙｐ）　　（ベーチェム社）を下記
のようにしてそのベンジルエステルに変換する。Ｂｏｃ
−１１ｙｐ　　（２０ｇ、　　８６ｖＩｌｏｌ）をジメ
チルホルムアミド（５００ｍｌ）に溶解し、炭酸カリウ
ム（５当瓜）を加える。混合物を激しく攪拌しながら、
臭化ベンジルを１５分間かけて滴下する。反応液を５５
℃に加熱し、その温度で１，５時間攪拌する。室温まで
冷却後、反応混合物を酢酸エチル１．５ｇで希釈し、分
岐ロートに入れる。酢酸エチル層を水（２Ｘ１．２ｇ）
、０．５Ｎ塩酸（ＩＮ）、水（１，Ｍ）及び飽和塩化ナ
トリウム（１，５Ｎ）で連続洗浄する。有機層を硫酸マ
グネシウムで乾燥し、濾過し、蒸発乾固させる。得られ
た粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーによ
り溶離液として７０　：　３０ヘキサン：アセトンを用
いて精製する。適切な両分をＴＬＣ分析後にプールし、
透明粘稠性液体２２．８ｇ　（８２％）を得た。

Ｎ　−Ｂｏｃ−４−アジドプロリンベンジルエステル前
記Ｎ　−Ｂｏｃ　−４−ヒドロキシプロリン（１０ｇ。

３１、　２ｏ＋１ｏｌ）をジメチルホルムアミド（１４
ｍｌ）に溶解し、トリエチルアミン（１０，７ｍ１）を
加える。溶液を０℃に冷却し、メタンスルホニルクロリ
ド（メシルクロリド４．１．ｍｌ）を１２分間かけて滴
下する。反応液を０℃で１時間しかる後室温で１時間攪
拌する。４−０−メシルプロリン中間体は単離しないが
、但し上記反応混合物中にアジ化ナトリウム（１５，２
ｇ）を添加してアジドに直接変換し、しかる後室温で２
０時間攪拌する。

最初の２０時間経過後、アジ化ナトリウム１５．２ｇを
追加し、反応液を室温で更に７２時１０１攪拌する。反
応混合物を分液ロートに移し、水１ｇで希釈する。水性
混合物を酢酸エチル（２×ＩＮ）で２回抽出し、酢酸エ
チル抽出液を合わせ、水（１ｇ）、０．５Ｎ塩酸（１ｇ
）、水（１ｇ）、飽和塩化ナトリウム（１ｇ）で洗浄す
る。酢酸エチル層を硫酸マグネシウムで乾燥し、蒸発乾
固させる。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマ
トグラフィーにより８：２へキサン：アセトンで溶出さ
せて精製する。適切な両分をＴＬＣ分析後にプールし、
生成物３．４ｇを得た（ＩＲにおいて２１００ｃｍ−１
で強バンドを示す）。

Ｎ　−Ｂｏｃ−４−アミノプロリンニ 前ｄ己Ｎ−Ｂｏｃ−４−アジドプロリンベンジルエステ
ル（３，４ｇ、　　９．８ｍｍｏｌ）をメタノールに溶
解し、不活性雰囲気下におく。パラジウム炭素（３８０
ｍｇ、１０％）を加え、反応容器をバール（Ｐａｒｒ）
水素添加装置中に入れ、水素ガス４０ｐｓｉ（約２．８
ｋｇ／ｃＩ＃）で加圧する。反応容器を３時間激しく振
盪し、しかる後バール装置から取出す。

得られた混合物をセライトで濾過し、メタノールを真空
下で除去する。得られた白色固体生成物を下記アセチル
化反応で直接用いる。

（１−Ｎ−Ｂｏｃ−Ｎ−アセチル−４−アミノプロリン
：前３ｅ、　Ｎ　−Ｂｏｃ　−４−アミノプロリン（１
，４ｇ。

６、　１＋ＩＩａｏｌ）を２．５Ｎ　　ＮａＯＨ９ｍ１
に溶解し、ｐ−ジオキサン９ｍｌを加える。得られた混
合物を水浴で約１０℃に冷却し、無水酢酸（１，０ｍ１
）を１０分間にかけて滴下する。反応液を０℃で３０分
間攪拌し、しかる後室温で１時間攪拌する。

反応混合物を水（２００ａ＋１）で希釈し、エチルエー
テルで２回抽出する。水層を固体硫酸水素カリウムの添
加でｐＨ２〜３に酸性化し、しかる後酢酸エチル（２Ｘ
２００ｍｌ）で抽出する。酢酸エチル抽出液を合わせ、
飽和塩化ナトリウムで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥
し、蒸発乾固させる。最終生成物は　Ｈ−及び１３Ｃ−
ＮＭＲにより分析さ■ れ、質量スペクトルＭ＋−２７２であって、正確な構造
を示した。

Ｎ−アセチル−４−アミノプロリンを、例１の記載と同
様のペプチド合成法により、前記の本例で示されたペプ
チド配列の３位に組込む。ノナペプチドの構造は、例１
で記載のような質量スペクトル分析（Ｍ＋Ｈ−１１６７
）及びアミノ酸配列決定により確認される。

例７ １１−Ａ　ｒｇ−Ｐ　ｒｏ−Ｃｐ　ｒ−Ｇ　ｌ　ｙ−Ｐ
ｈｅ−８ｅ　ｒ−ＤＰｈｅ−Ｐｈｅ−Ａ　ｒｇ−０１１
（Ｃｐｒ　　、　ＤＰｈｅ７−ブラジキニン）の製造及
びアミノナペプチドの自動合成に先立ち、非天然アミノ
酸残基４−カルボキシプロリル（Ｃ’ｐｒ）の前駆体を
下記操作に従い製造する。

ユ ま 旦 旦 メトキシカルボニル誘導体（２）； ０、　Ｎ−アセタール（１１）を−７８℃で激しく攪拌
しながらＴＨＦＨＦビジイソプロピルアミドリチウム液
（ジイソプロピルアミン及びｎ−ブチルリチウムから常
法により製造される）に加える。−７８℃で更に３０分
間攪拌後、若干過剰モルのメチルシアノホルメートを加
え、温度を更に１時間攪拌下−１５℃に高める。反応停
止及び精製により化合物２を得る。

保護プロリノール誘導体（３）： 化合物２を加温ＴＨＦ中ローエッソン （Ｌａｖｅｓｓｏｎ）試薬で処理し、対応チオラクタム
を得る。これを還元終了時まで還流エタノール中ラネニ
ッケルで処理する。精製により化合物３を得る。

４−メトキシカルボニル−し−プロリノール（４）： 化合物３を、出発物質が消費されるまで、メタノール中
４５ｐｓｉ　　（約３．　２ｋｇ／ｃｄ）で１０％パラ
ジウム炭素による水素添加分解に付す。精製により化合
物４を得る。

Ｎ−Ｂｏｅ−４−メトキシカルボニル−し−プロリノー
ル（５）： 化合物４を室温で一夜にわたりトリエチルアミン含有メ
タノール中（Ｂｏｃ）２０で処理する。精製により化合
物５を得る。

Ｎ−Ｂｏｃ−４−メトキシカルボニル−し−プロリン（
６）　： 化合物５を水性アセトン中捻やかなアルカリ性過マンガ
ン酸塩で酸化する。精製により化合物６を得る。

化合物６を、例１の記載と同様のペプチド合成法により
、上記の本例で示されたペプチド配列の３位に組込む。

化合物６のメチルエステルをペプチドの最終フッ化水素
開裂法により樹脂から開裂させ、前記のように３位でア
ミノ酸残基Ｃｐｒが得られる。ノナペプチドの構造は、
例１で記載のような質量スペクトル分析（Ｍ十Ｈ−１１
５４）及びアミノ酸配列決定により確認される。

■トツタチル、　　Ｊ、　　Ｋ、　、　　Ｊ、　　Ｌ、
モニオット。

Ｒ，Ｈ，ミューラー、Ｍ、に、Ｙ、　　ウォング、Ｔ。

Ｐ、キシツク、ジャーナル拳オブーオーガニック・ケミ
ストリー、第５１巻、１９８６年。

第３１４０頁ｃ’ｒｈｏｔｔａｔ旧１．Ｊ、に、、Ｊ、
Ｉ、、Ｍｏｎ１ｏＬ、Ｒ，ＩＩ、Ｍｕｅｌｌｅｒ、Ｍ、
に、Ｙ、Ｗｏｎｇ、Ｔ、Ｐ、Ｋ１５ｓｌｃｋ、Ｊｏｕｒ
ｎａｌ　ｏｒＯｒｇａｎｉｃ　Ｃｈｅｍｌｓｔｒｙ、Ｖ
ｏｌ、５１．（１９８Ｇ）ｐ、３１４０）例８ １トＡ　ｒｇ−Ｐｒｏ−Ｃｍｐ−Ｇ　Ｉ　ｙ−Ｐｈｅ−
８ｅｒ−ＤＰｈｅ−Ｐｈｅ−Ａ　ｒｇ−Ｏｌｌ（Ｃｍｐ
３．　ＤＰｈｅ７−ブラジキニン）の製造及びアミノナ
ペプチドの自動合成に先立ち、非天然アミノ酸残基４−
カルバモイルプロリル（Ｃｍｐ）の前駆体を下記操作に
従い製造する。

Ｎ　−Ｂｏｃ−４−カルバモイル−し−プロリン（Ｂｏ
ｃ−Ｃ＋ａｐ）　（７）　　： 例７の化合物６をアンモニアで飽和されたメタノールで
処理する。精製により化合物７を得る。

化合物７を、例１の記載と同様のペプチド合成法により
、上記の本例で示されたノナペプチド配列の３位に組込
む。ノナペプチドの構造は、例１で記載のような質ニス
ベクトル分析 （Ｍ＋Ｈ−１１５３）及びアミノ酸配列決定により確認
される。

例９ Ｉｔ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｃｆｆｌｐ−ＧＩｙ−Ｐｈｅ−
３ｅｒ−ＤＰｈｅ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｏｆｆ（ＣＩＩｌ
ｐ　　、　ＤＰｈｅ７−ブラジキニン）の製造及びアミ
旦 ノナペプチドの自動合成に先立ち、非天然アミノ酸残基
４−カルボキサミドブロリン（ＣＩＷｐ）の前駆体を下
記操作に従い製造する。

しｌ−１７）’ｎ Ｃ）４２ｐＨ Ｎ−ペンジルピログルタミノール（２）：ＴＨＦＨＦラ
ボラン、４当量）の溶液をアルゴン下Ｏ℃でＴＨＦ中Ｎ
−ベンジル−Ｌ−ピログルタミン酸〔１；ピータ−セン
、Ｊ、Ｓｌ、Ｇ、フエルズ＆Ｈ，ラボボート、ジャーナ
ル・オブ・ザ・アメリカン・ケミカル・ソサエティー第
１０６巻、１９８４年、第４５３９頁（Ｐｅｔｅｒｓｏ
ｎ、Ｊ、Ｓ、、Ｇ、Ｆｅ１ｓ　＆Ｉ１．Ｉ？ａｐｏｐｏ
ｒｔ、Ｊｏｕｒｎａｌｏｒｔｈｅ　Ａｍｅｒｉｃａｎ　
Ｃｈｅｍｉｃａｌ　５ｏｃｉｅｔｙ、Ｖｏｌ、ｌＯ［ｉ
。

（１９８４）ｐ、４５３９参照〕の攪拌溶液に滴下する
。次（１で、溶液を室ｌＨで一夜攪拌する。反応を飽和
水性Ｋ　２　ＣＯ３添加により停止させ、しかる後酢酸
エチルで抽出する。抽出液を乾燥し、濃縮し、残渣をク
ロマトグラフィー（シリカゲル；　ＣｌＩＣ！３／Ｈｅ
’１ｌ−９７／３）により精製する。生成物はＥｔＯＡ
ｃ／ヘキサンから結晶化され、ｍｐ８Ｂ−８４℃を有す
る。

Ｎ−ペンジルピログルタミノールベンジルエーテル（３
）： ＴＨＦＨＦ金化合物２液をアルゴン下Ｏ℃でＴＨＦに懸
濁された若干過剰の水素化カリウムに加える。１時間攪
拌後、臭化ベンジルを加え、溶液を室温まで加温し、更
に１時間攪拌する。反応を水性Ｎａ１ｌＣＯ３で停止さ
せ、エーテルで抽出する。

抽出液を乾燥し、濃縮し、残渣をクロマトグラフィー（
シリカゲル；　ＣｌＩ２　ＣＩ２　／ＥＬＯＡｃ　−９
０／　１０）により精製する。化合物３は油状物として
得られる。

メトキシカルボニル誘導体（４）： 化合物３をＴＨＦに溶解し、−７８℃でＴＨＦＨＦ中ソ
イソプロピルアミドリチウム当Ｑ）の溶液（ジイソプロ
ピルアミン及びｎ−ブチルリチウムから常法に従い製造
される）に加える。溶液を１時間かけて３０℃まで加温
し、しかる後メチルシアノホルメート（１，０５当量）
が添加される際に再度−７８℃まで冷却する。１０分間
後、溶液を５％水性クエン酸に注ぎ、１ＥｔＯＡｃで抽
出する。

抽出液を乾燥し、濃縮し、残渣をクロマトグラフィー精
製し、化合物４を油状物として得る。

チオラクタム（５）： 化合物４を６０℃で５時間にわたりトルエン中ローエッ
ソン試薬で処理する。クロマトグラフィーにより、化合
物５を油状物として得る。

保護プロリノール誘導体（６）： 化合物二を室温で１時間にわたりＣ１１２Ｃ＋。中トリ
エチルオキソニウムテトラフルオロボレート（１，１当
量）で処理する。溶媒を蒸発させ、メタノールと交換す
る。水素化ホウ素ナトリウム（２当量）を加え、混合物
を１時間攪拌する。精製して化合物６を得る。

カルボキサミド誘導体（７）： 化合物６をアンモニア飽和メタノールに溶解し、３１１
間攪拌する。蒸発させて、純粋な化合物７を得る。

カルボベンゾキシ誘導体（８）： 化合物７を１０％パラジウム炭素で処理された氷酢酸に
溶解し、双方のベンジル基が除去されるまで水素（４５
ｐｓｉ；約３．２ｋｇ／ｃｄ）下で振盪する。触媒を濾
去し、溶媒を蒸発させる。残渣をＮａ０Ｈ（３当量）含
有水に溶解し、ベンジルクロロホルメートで処理する。

混合物を４時間にわたり激しく攪拌し、しかる後Ｐｔ０
Ａｃで抽出する。

抽出液を乾燥し、濃縮し、残渣をクロマトグラフィー精
製し、化合物８を得る。

Ｎ−Ｚ−４−カルボキサミドブロリン（９）：化合物８
をアセトンに溶解し、０℃でアセトン中ジョーンズ（Ｊ
ｏｎｅｓ）試薬の攪拌溶液に加える。

数時間攪拌後、イソプロピルアルコールを加え、攪拌を
更に２０分間続ける。有機溶媒除去後、残渣を水で希釈
し、ＩＥｔＯＡｅで抽出する。抽出液を乾燥し、濃縮し
て、化合物９を得る。

Ｎ−Ｂｏｃ−４−カルボキサミドブロリン（１０）：化
合物９のＺ基をメタノール中パラジウム炭素触媒での水
素添加により除去する。次いで、二級アミンを水性ＴＨ
Ｆ中（Ｂｏｃ）２０及びトリエチルアミンと共に攪拌す
ることにより、Ｎ−ＢｏＣ基を導入する。純粋な化合物
１０を得るためには、逆相クロマトグラフィーが必要と
される。

化合物１０を、例１の記載と同様のペプチド合成法によ
り、前記ペプチド配列の３位に組込む。

前記のフッ化水素開裂及び精製により、ノナペプチドを
得る。ノナペプチドの構造は、例１で記載のような質ロ
スベクトル分析（Ｍ＋Ｈ−１１５３）及びアミノ酸配列
決定により確認される。

例１０ １１−＾ｒｇ−Ｐｒｏ−＾ｍｐ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−８ｅ
ｒ−ＤＰｈｅ−Ｐｈｅ−＾ｒｇ−Ｏ１１（Ａｍｐ３．　
ＤＰｈｅ７−ブラジキニン）の製造及びαノナペプチド
の自動合成に先立ち、非天然アミノ酸残基４−アミノプ
ロリン（Ａｍｐ）の前駆体を下記操作に従い製造する。

ａ−Ｎ−Ｂｏｃ−Ｎ−Ｚ−４−アミノプロリン二Ｎ−Ｂ
ｏｃ−４−アミノプロリン（例６参照）をジオキサン及
び２．５Ｎ　　ＮａＯＨの１：１混合物に溶解する。水
冷後、ベンジルクロロホルメートを加え、混合物を氷上
で３０分間しかる後室温で１時間攪拌する。混合物を水
で希釈し、エーテルで洗浄し、しかる後ｐ　Ｈ２に酸性
化する。ＥＬＯＡｅ抽出及び溶媒除去により、白色固体
物としてαＮ−Ｂｏｃ−Ｎ　−Ｚ　−４−アミノプロリ
ンを得る。

α−Ｎ−Ｂｏｃ−Ｎ−Ｚ−４−アミノプロリンを、例１
の記載と同様のペプチド合成法により、前記ペプチド配
列の３位に組込む。Ｚ、！にをペプチドの最終フッ化水
素開裂法により樹脂から除去し、前記のように３位でア
ミノ酸残Ｊ！Ａａ＋ｐが得られる。

ノナペプチドの構造は、例１で記載のような質量スペク
トル分析（Ｍ＋Ｈ−１１２５）及びアミノ酸配列決定に
より確認される。

例１１ １ｆ−Ａ　ｒｇ−Ｐ　ｒｏ−Ａｏ　ｒ−Ｇ　Ｉ　ｙ−Ｐ
ｈ　ｅ−８ｅ　ｒ−ＤＰｈｅ−Ｐｈ　ｅ−Ａ　ｒｇ−Ｏ
ｌｌ（Ａｏｒ３．　ＤＰｈｅ７−ブラジキニン）の製造
：ノナペプチドの自動合成に先立ち、アミノ酸残゛基Ａ
ｏｒの前駆体を下記操作に従い製造する。

水中（１０ｍｌ）　Ｎ　（２）−ＢｏＣ−オルニチン（
ベーチェム社）　　（２ｍｎ＋ｏｌ）及び炭酸ナトリウ
ム（４ＩＩｌ１１ｏ１）の溶液に無水酢酸（２，５ｍｍ
ｏｌ）を加える。この混合物を室温で３時間攪拌し、し
かる後固体クエン酸で酸性化し、クロロホルムで数回抽
出する。

乾燥及び揮発性物質除去により、Ｎ−Ｂｏｃ−Ａｏｒを
得る。

ペプチド配列３位のカップリング反応におけるＮ−Ｂｏ
ｃ−Ａｏｒの置換えに関して、例１に記載と同様の方法
に従いペプチドを製造する。開裂及び精製を例】のよう
に行うが、但し逆相クロマトグラフィーに関する勾配は
２０〜３５％溶媒Ｂである（例１参照）。精製されたペ
プチドは、正確な分子イオン（Ｍ＋Ｈ−１１６９）を示
す例１で記載の質量スペクトル分析及び例１で記載のア
ミノ酸配列決定により分析される。

例１２ ＩＩ−ＤＡｒｇ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−＾５ｎ−Ｇ　ｌ　ｙ
−Ｐｈｅ−８ｅｒ−ＤＰｈｅ−Ａ　ｒｇ−Ｏｌｌ（ＤＡ
ｒｇＯ，Ａｓｎ”　、　ＤＰｈｅ７−ブラジキニン）の
製造：ペプチドは例１で記載と同様の方法により製造さ
れるが、但しＢｏＣ−ＤＡｒｇ（Ｔｏｓ）の付加残基は
例１で記載のＢｏｃ除去過程に従いペプチドのＮ末端に
付加される。最終ペプチドは、正確な分子イオン（Ｍ＋
Ｈ−１２８３）を示す例１で記載の質量スペクトル分析
及び例１で記載のアミノ酸配列決定により分析される。

例１３ 造： ペプチドは例１で記載と同様の方法により製造される。

配列は例６の場合と同一であるが、但しＤＡｒｇの付加
残基は例１で記載のＢｏｃ除去過程に従いペプチドのＮ
末端にＢｏａ−ＤＡｒｇ（Ｔｏｓ）をカップリングする
ことによってＮ末端に付加される。最終ペプチドは、正
確な分子イオン（Ｍ＋Ｈ−１３２３）を示す例１で記載
の質量スペクトル分析及び例１で記載のアミノ酸配列決
定により分析される。

例１４ 造。

ペプチドは例１で記載と同様の方法により製造される。

配列は例７の場合と同一であるが、但しＤＡｒｇの付加
残基は例１で記載のＢｏｃ除去過程に従いペプチドのＮ
末端にＢｏｃ−ＤＡｒｇ（Ｔｏｓ）をカップリングする
ことによってＮ末端に付加される。最終ペプチドは、正
確な分子イオン（Ｍ十Ｈ−１３０９）を示す例１で記載
の質量スペクトル分析及び例１で記載のアミノ酸配列決
定により分析される。

例１５ 例１６ 造： ペプチドは例１で記載と同様の方法により製造される。

Ｎ（４）−ヒドロキシアスパラギン（Ｎｈａ）は、３位
のカップリング反応でＮ−ＢｏＣ−アスパラギン酸β−
メチルエステルを用いることにより、ペプチド中に組込
まれる。ＤＡ　ｒｇはＢｏｃ−ＤＡ　ｒｇ　（Ｔｏｓ　
）を用いて０位に組込まれる。フッ化水素開裂により、
完全なメチルエステルを得る。開裂後、ペプチドを水溶
液中ヒドロキシルアミンで処理し、Ｎｂａ残基を形成さ
せる。次いで、精製を例１で記載のように行う。最終ペ
プチドは、正確な分子イオン（Ｍ十Ｈ−１２９９）を示
す例１で記載の質ニスベクトル分析及び例１で記載のア
ミノ酸配列決定により分析される。

ン）の製造： ペプチドは例１で記載と同様の方法及び同様の順序で製
造されるが、但しＡｒｇｌがカップリングされた後Ｂｏ
ｃ除去過程が再度用いられる。次いで、Ｎ　（２）−Ｂ
ｏｃ−Ｎ　（６）−ＣＢＺ−リシンをカップリングさせ
、ペプチドを例１で記載のように開裂させ、ＨＰＬＣ精
製によりペプチドを得る。最終ペプチドは、正確な分子
イオン（Ｍ十Ｈ−１，３８３）を示す例１で記載の質ニ
スベクトル分析及び例１て記載のアミノ酸配列決定によ
り分析される。

ブラジキニン拮抗活性のｉＰｊ定方法 下記試験方法は、本発明のペプチド類のブラジキニン拮
抗活性を測定するために用いられる操作について記載し
ている。異なるアッセイ法が、異なる組織におけるペプ
チド類の活性を予測するために考えられている。あるア
ッセイにおいて拮抗剤であるペプチドは、他のアッセイ
では作用剤であるかも］、れない。好ましいブラジキニ
ン拮抗ペプチドは、・すべての予測アッセイにおいて拮
抗剤である。

試験法１ モルモット回腸アッセイ ブラジキニン拮抗剤は、スチュアート。

Ｊ、Ｍ、、　　“ブラジキニンに関連したペプチド類の
化学及び生物活性“、ブラジキニン、カリジン及びカリ
クレインの第５章、　（ハンドブック・オブ・エクスベ
リメンタル・ファーマコロジー（Ｉｌａｏｄｂｏｏｋ　
ｏ［’　Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　ＰｈａｒＩｌａｃ
ｏｌｏｇｙ））Ｅ、　Ｇ、　、１ルドーズ（Ｅ、Ｇ、Ｅ
ｒｄｏｅｓ）　（編集）。

第２５巻、スブリンガー拳フェルラッヒ（Ｓｐｒｉｎｇ
ｅｒ　Ｖｅｒｌａｇ）（発行）、１９７０年、第２４２
２４３頁で記載されているようなブラジキニン及び関連
キニン類について一般的に許容されるアッセイ法に従い
、ブラジキニンの筋肉収縮活性の阻害に関しモルモット
回腸で試験される。阻害能は、シールド、　Ｈ，０，（
Ｓｃｈｌｌｄ、１１．０．）、　　’薬物拮抗作用の７
１ｐＪ定に関する新尺度ｐＡ”、ブリティッシュ−ジャ
ーナル・オブ・ファーマコロジ−（Ｂｒｉｔｉｓｈ　Ｊ
ｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ）、第
２巻、第３号、１９４７年、第１８９−２０６頁で生物
活性化合物の拮抗性に関して記載された一般的に許容さ
れる方法に従い、摘出モルモット回腸でｉｉｐ＋定され
る。アッセイにおいて、用量一応答曲線は参照物質ブラ
ジキニンに関して求められる。組織の半最大収縮を起こ
すブラジキニン用量は、Ｅ　Ｄ　５゜用量である。２倍
のＥＤ５ｏ用瓜に用量するブラジキニン量が、−用量分
の拮抗剤での組織インキュベート開始３０秒後に組織に
投与される。拮抗剤用量は、−用量分の拮抗剤との前イ
ンキュベートが２ＸＥＤ５ｏ用二のブラジキニン応答性
からＩＸＥＤ５ｏ用二のブラジキニン応答性まで収縮性
を減少させるまで、このプロトコールにおいて増加され
る。Ｔ）　Ａ　２値は拮抗剤のモル濃度の逆対数を表わ
すが、その際には作用剤が単独で与えられた場合と同様
の応答性を示すために２倍の作用剤量を要する。１１１
１位のｐＡ２値は能力の変化度の程度を表わす。比較の
ために、ブラジキニン用量、即ち組織の！１−最大収縮
を起こす用量の逆対数は、ｐ　Ｄ　２値として一般に知
られる。ブラジキニンの場合のｐＤ２値は、モルモット
回腸において７．４である。

試験法２ モルモット気管における血漿溢出 体重４５０〜７００ｇの雄性ハートレー（ｌｌａｒＬｌ
ｅｙ）系モルモットをベントパルビタールナトリウムで
麻酔する。右頚静脈に０．９％塩水充填シラスティック
（ｓｉｌａｓｔｌｅ）チューブでカテーテル挿入する。

右頚動脈にカニユーレ挿入する。エバンスブルー（［Ｅ
ｖａｎｓ　ｂｌｕｅ）色素を頚静脈カテーテルから徐々
に投与する。５分間後、ブラジキニン（ｆｌｙ、　４ｍ
ｌ／ｋｇ）及び試験アナログ（０，４ｍｌ／ｋｇ）を動
脈内から同時投与する。更に５分間経過後、脈管構造内
に頚静脈から０．　９％塩水をｈａ流させる。分岐点の
直接」二の気管組織１．　ｃｍ部分を切除し、秤量する
。組織をホルムアミド含有チューブに入れる。チューブ
を５０℃水浴中に２４時間置く。溶媒サンプルをチュー
ブからキュベツトに移し、ケイ光スペクトロフォトメー
ターで、’ＩＩＩＪ定する。計算は、組織内の色素含有
量を７ｉｐ＋定するために行われる。データは色素ｎｇ
／ａ＋ｇ組織として表される。

試験法３ マウス腹部収縮試験 本発明の化合物は、マウス腹部収縮アッセイを用いて鎮
痛活性に関し試験される。このアッセイは、ヘンダーシ
ョット、　　Ｌ、Ｃ，（ＩＩｅｎｄｅｒｓｈｏＬ、Ｌ。

Ｃ，）＆Ｊ、　フォーサイス（Ｊ、ＰｏｒｓａｌＬｈ）
、　　’弱鎮痛剤及び非鎮痛剤によるマウスにおけるフ
ェニルキノン誘導柱身もだえ頻度の拮抗性”、ジャーナ
ル・オブ・ファーマコロジー（Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ’
Ｐｈａｒｍａｃｏｔｏｇｙ）　、第１２５巻、１９５９
年。

第２３７−２４０頁並びにメソッズ・イン・ナルコティ
クス俸リサーチ（Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｉｎ　Ｎａｒｃｏｔ
ｉｃｓＲｅｓｅａｒｃｈ）　、　Ｓ　、　　エーレンブ
レイス（Ｓ、Ｅｈｒｃｎｐｒｃｉｓ）及びＡ、ネードル
（Ａ、Ｎｃｌｄｌｃ）　（編集）、マーセルΦデツカー
社（Ｍａｒｃｅｌ　Ｄｃｋｋｃｒ、ｌｎｃ、）、ニュー
ヨーク（発行）、１９７５年、第６４−６５頁で記載さ
れているが、これら文献のいずれの開示もそれら全部が
参考のため本明細書に組込まれる。

体重約２０ｇの一夜絶食させた雄性ＣＦ−１マウス〔チ
ャールズ・リバー・ブリーディング・ラボラトリーズ社
（Ｃｈａｒｌｃｓ　Ｒｉｖｅｒ　ＢｒｅｅｄｉｎｇＬａ
ｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、　Ｉｎｃ、））をこれらのアッ
セイで用いる。試験化合物は腹腔内（ｉｐ）注射用に調
製され、その場合に本発明の化合物は適量が２０ｇマウ
スに０．２ｍｌ中で投与されるように蒸留脱イオン水中
で調製される。０．０２％フェニルキノン（２，５ｍｇ
／ｋｇ）のｉｐ注射は、０．２５ｍ１／２　Ｑ　ｇ体重
の濃度で行われる。５分間後、マウスに試験化合物のｉ
ｐ注射をする。試験化合物ｉｐ注射の５分間後に、全身
もだえ回数が連続１０分間にわたり計測される。このア
ッセイにおける鎮痛率は下記のように計算される： マウス腹部収縮アッセイは、第２表に示された本発明の
ペプチド類及び関連ペプチド類の拮抗活性を測定するた
めに用いられた： 第２表 マウス腹部収縮アッセイ 結果 １　１１−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｈｙｐ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ　
　　２５　　　　−３１−８ｃｒ−ＤＰｈｅ−Ｐｈｅ−
＾ｒｇ−０１１２Ｈ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ
−Ｐｈｅ　　　５０　　　　　５７−８ｅ５７−８ｅｒ
−ＤＰｈｅ−Ｐｈｅ−Ａｒ　　　Ｈ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−
Ａｓｎ−ＤＰｒｏ−Ｐｈｅ　　５０　　　　　７２．［
ｉｌ−８ｅｒ１１−８ｅｒ−ＤＰｈｅ−Ｐｈｅ−Ａｒ　
　　Ｈ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａａｐ−Ｇ！ｙ−Ｐｈｅ　　
　５０　　　　　４Ｂ−８ｅｒ−ＤＰｈｅ−Ｐｈｅ−Ａ
ｒｇ−ＯＨ化合物１は、米国特許節４，６９３，９９３
号明細書で開示されたペプチドである。このアッセイに
おける陰性結果は、このペプチドがこのアッセイでブラ
ジキニン作用剤であることを示している。化合物２．３
及び４は本発明のペプチド類である。これら化合物のす
べてが、アッセイにおいてブラジキニン拮抗活性を示し
ている。

試験法４ 細胞培養法 背景；　多くの異なる組織及び単離細胞群において、ブ
ラジキニンはシトソール遊離カルシウム（ＣＣａ”＋〕
ｉ　）の濃度に関してレセプター媒介性の上昇を誘導す
る。培養ＮＧ１０８−１５神経細１抱〔カリフォルニア
州すンクランシスコのサンフランシスコカリフォルニア
大学、セル・カルチャー・ファシリティ−（Ｃｅｌｌ　
Ｃｕ１ｔｕｒｅ　Ｆａｃｉｌｉｔｙ））の場合には、ブ
ラジキニンは最大有効濃度（１×１０’Ｍ）のブラジキ
ニン時において基底濃度約２６０　ｎＭから約１１００
０ｎまで用量依存的に（［：Ｃａ２＋）　　ｉ　）を増
加させる。ブラジキニンの半最大自゛効濃度（ＥＣ）は
３Ｘ１０−９Ｍである。

ブラジキニンレセプター拮抗能は、ブラジキニン〔カリ
フォルニア州トレンスのベーチェム〕ＩＸＩＯＭで誘導
される［Ｃａ２”：ｌ　　ｉの増加を５０９６　（Ｉ　
Ｃ５０）阻害するために必要とされる拮抗剤濃度を測定
することにより評価される。

ＮＧ１０８−１５細胞培養：　　ＮＧ１０８１５細胞は
、７５ｃＩ！ｌコーニング（Ｃｏｒｎｊｎｇ）フラスコ
〔オハイオ州シンシナティーのフィッシャサイエンティ
フィック　（Ｐｌｓｈｃｒ　５ｃｉｃｎｔｉｒｉｃ））
内の５９６　生胎児血’／ｆｊ　（ユタ州ローガンのハ
イクローン（ｌｌｙｃ　Ｉ　ｏｎｅ）　）及びＨＡＴ　
［ヒボキサンチン−アミノプテリン−チミジン：ミズー
リー州セントルイスのシグマ（Ｓｉｇｍａ））含有ダル
ベツコ（Ｄｕ　ｌ　ｂｃｃｃｏ）修正最少必須培地〔高
グルコース・ニューヨーク州グランドアイランドのギブ
コ（Ｇｉｂｃｏ））中で培養する。

２＋ シトソール遊ＭＣａ　　（（Ｃａ２”）　　ｉ）の濃度
は、オースギら〔ジャーナルやオブ・ファーマコロジ豐
アンド・エクスペリメンタル・セラポイティクス（Ｊｏ
ｕｒｎａｌ　ｏｆ’　Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ　ａｎ
ｄｌＥｘｐｃｒｉｍｅｎｔａ！　Ｔｈｃｒａｐｅｕｔｉ
ｃｓ）、第２４０巻１９８７年、第６１７−６２２頁〕
で記載のように、Ｃ；ン感受性ケイ光指示薬フラー２　
（ｒｕｒａ−２）で必ず担持された培養Ｎ０１０８−１
５細胞の懸濁液中でＡｆｌ定される。集密的（ｃｏｎｒ
　Ｉｕｃｎｔ）細胞フラスコを、最終濃度２μＭでフラ
ー２アセトキシメチルエステル〔オレゴン州ニージエン
のモレキュラー〇ブローブス社（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　
Ｐｒｏｂｅｓ、Ｉｎｃ、））含イイＨＥＰＥＳ緩衝液［
１４ｈＭ　ＮａＣｌ、５．４ｍＭ　ＭＣＩ。

０．８ｄ　Ｍｇ５０　　１．０ｄ　ＣａＣｌ２．２０Ｉ
ＩＭＨＥＰＥＳ　　（Ｎ　−４′ ２−ヒドロキシエチルピペラジン−Ｎ′−２−エタンス
ルホン酸；カリフォルニア州うジョラのベーリング・ダ
イアグノスティクス（Ｂｅｈ　ｒ　ｉ　ｎｇＤｉａｇｎ
ｏｓＬｉｃｓ））　、　１０１１１Ｍグルコース、　０
．２５％牛血清アルブミン（カタログ＃Ａ−４５０３；
ミズーリー州セントルイスのシグマ・ケミカル社（Ｓｉ
ｇｎ＋ａＣｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏ、）））　２０ｍ１中
３７℃で６０分間インキユヘートする。次いで、フラス
コをＨＥＰＥＳ緩衝液３０＋ｏｌで２回洗浄し、細胞を
）ｉＥＰＥＳ緩衝液１５ｍ１でフラスコから取出す。細
胞懸濁液を２５℃３５０Ｘｇで５分間遠心分離し、細胞
ベレットを１フラスコ当たり最終容量約１０ｍ１のＨＥ
ＰＥＳ緩衝液に再懸濁する。細胞懸濁液を使用前に室温
で維持する。

フラー２担持ＮＧ１０８−１５細胞のケイ光は、磁気ス
ターラー及びサーモスタット制御セルホルダー装備パー
キン−エルマー（Ｐｅｒｋｉｎ−ＩＥＩｍｅｒ）　Ｌ　
Ｓ５ケイ光スペクトロフオトメ一ター中励起波長３４０
ｎＭ（１０ｎＭスリット）及び放射波長５００ｎＭ（１
０ｎＭスリット）で測定される。細胞懸濁液のアリコー
ト（ａｌｉｑｕｏｔ）　　（１，３７ｍ１）をテフロン
被覆攪拌棒内左円ｉ型ガラスキュベツト（内径８ｍｍ）
に入れ、水浴中で３７℃に加温する。５分間後、キュベ
ツトをフルオロメーターのセルホルダーに入れ、試験サ
ンプル添加直前に攪拌が開始される。一般には、試験サ
ンプルは（１００倍濃度溶ｉｆ＆０．　０１４ｍ１）　
Ｉ　Ｘ　１０−”Ｍブラジキニン添加の３０秒前にキュ
ベツトに加えられる。ケイ光は、試験サンプル及びブラ
ジキニンの添加中に継続的に記録される。

ケイ光測定終了後、細胞は最終濃度１０％（Ｖ／ν）の
トリトン（Ｔｒｌｔｏｎ）Ｘ　−１００で溶解され、Ｃ
ａ２＋飽和フラー２　（Ｆ　　　；　１　ｍＭｃａ””
ｆ’ｆ’在丁のケイ光）１ｌａｘ 及びＭｎ２＋停止フラー２（自己ケイ光（ＡＦ）；２　
ｍＭＭｎ２＋存在ドのケイ光）のケイ光が調べられる。

試験サンプル及び／又はブラジキニンの添加前後におけ
る（Ｃａ２＋）　　ｉは、これらＦ　　及びＡＦのＤａ
Ｘ 値並びに下記式を用いて、観察されたケイ光値（Ｆｏｌ
）Ｓ）から求められる： Ｆ　　、　　　−ＡＦ＋　　（Ｆ　　　　−ＡＦ）／３
．７ｍ　ｌ　ｎ　　　　　　　　　　　　　　　１Ｉｌ
ａＸ（Ｃａ’）　　ｉ　−Ｋ　　（Ｆ　　　−Ｆ　　、
　　）　／Ｄ　　　　　ｏｂｓ　　　　　ｌ＋＋＋ｎ（
Ｆ□、−Ｆ。ｂｓ） 上記式中、Ｋ　は色素に対するＣａ”（７）結合性に関
り する解離定数である〔２２４　ｎＭ　；グリンキーウィ
クツら、ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミスト
リー、第２６０巻、１９８５年。

第３４４０−３４５０頁（Ｇｒｙｎｋｉｃｗｉｃｚ　ａ
ｔ　ａｌ、＋Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｂｉｏｌｏｇｉｃ
ａｌ　Ｃｈｃｍｉｓｔｒｙ、Ｖｏｌ、２００゜（１９８
５）　、ｐｐＪ４４０−３４５０））。

拮抗剤による阻害度を求めるために、基底ＣＣａ””）
　　ｉ　　（即ち、ブラジキニン添加直前の２＋ ［Ｃａ）ｉ）からの〔Ｃａ２＋〕ｉのピーク増加が拮抗
剤の存在及び非存在下でΔ−１定される。阻害率、６は
下記式から計算される： 作用活性は、試験サンプル添加直後にケイ光増加として
検出される。

細胞培養法は、第３表に示された本発明のペプチド類及
び関連ペプチド類の拮抗活性を測定するために用いられ
た： 第３表 細胞培養法 結果 化合物 岡　　　　ペプチド　　　　　　　上８皿１、　１＋−
＾ｒｇ−Ｐｒｏ−１１ｙｐ−Ｇｌｙ−Ｐｂｅ　　　　　
部分的−８ｅｒ−ＤＰｌｉｅ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−０１１
作用剤８２　ト＾ｒｇ−Ｐｒｏ−＾５ｎ−Ｇａｙ−Ｐｈ
ｅ　　　　　５　Ｘ　ＩＯ’Ｍ−３ｅｒ−ＤＰｈｅ−Ｐ
ｈｅ−Ａｒｇ−Ｏｌｌ５　　トＤＡｒｇ−Ａｒｇ−Ｐｒ
ｏ−Ｉｌｙｐ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ　　　Ｉ　Ｘ　１０８Ｍ
−８ｃｒ−ＤＰｈｅ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｏｌｌ　　　　
（ｔｏ％作用剤　）６　１１−ＤＡｒｇ−Ａｒｇ−Ｐｒ
ｏ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ　　２．２ｘｌＯ−８Ｍ−
８ｃｒ−ＤＰｈｅ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｏｌｌ９化合物１
及び５は、米国特許第４，６９３゜９９３号明細書で開
示されたペプチドである。化合物１は、拮抗能がこのア
ッセイから計算されえない程高い作用（ブラジキニン様
）活性を示している。化合物５も、わずかな作用活性を
示している。

化合物２及び６は本発明のペプチドであって、双方とも
このアッセイで拮抗（無作用）活性のみを示している。

本発明のもう一つの面は、治療の必要なヒト又はより下
等の動物に本発明のブラジキニン拮抗ペプチド類を投与
することによる、ヒト又はより下等の動物において抗炎
症活性及び／又は鎮痛作用を発揮しあるいは鼻炎、鼻漏
及び／又はうっ血を治療するための方法に関する。安全
自゛効瓜は、治療中に１回の投薬又は多数回の繰返し投
薬で投与される。本発明のペプチド類を投与するために
ｆ−ｉ効な方法としては、経口、非経口（例えば、静脈
内、筋肉内、腹腔内、皮下）、局所（上皮、歯肉、真皮
又は経皮）、経鼻、吸入、舌下、経膣、経直腸、経口腔
又は他の経内部投与手段がある。本発明のペプチド類の
好ましい投与方法としては、真皮、経皮、経鼻及び吸入
がある。

本明細書で用いられる“安全有効量″という語句は、通
常の医学的判断の範囲内において、治療すべき症状を有
意に改筈するために十分高いが但し深刻な副作用を避け
るために（妥当な利益／危険比て）十分低い本発明のペ
プチド又は医薬組成物の瓜を意味する。ペプチド又は組
成物の安全有効量は、治療すべき具体的症状、治療すべ
き患者の年齢及び身体条件、症状の程度、治療期間、併
用療法の種類、用いられる具体的なペプチド又は組成物
、用いられる具体的な薬学上許容される担体、並びに担
当医の知識及び熟練度に属する同様のファクターに応じ
て変動する。

本発明のブラジキニン拮抗ペプチド類は、ブラジキニン
により媒介されるか又はブラジキニンの過剰産生により
悪化されることが知られている１種以上の外傷性、炎症
性、病因性の又は自然な症状の治療にとって有用である
。これらの症状は、痛み、炎症、うっ血及び／又は平滑
筋収縮を伴う。

このような症状としては、創傷、熱傷、発疹、ヘビかみ
傷、昆虫による虫偏及び虫さされ、アンギナ、関節炎、
喘息、アレルギー、鼻炎、鼻漏、咽喉炎、うっ血、ショ
ック、炎症性腸疾患、低血圧、痛み及び炎症の全身的治
療、及び／又は雄生殖不能症を起こす低精子運動がある
。

本発明のブラジキニン拮抗ペプチド類の治療用途として
は、動物によるブラジキニン又は関連キニン類の産生の
治療に限らず、刺創及び咬傷の結果として動物体内への
ブラジキニン関連ペプチド類注入の治療の場合であって
もよい。本発明のブラジキニン拮抗剤の単独での又は皮
下利用との併用での局所適用は、痛み、炎症、浮腫及び
／又は平滑筋収縮を引き起こすブラジキニン関連ペプチ
ド類の作用を治療するために用いることができる。

創傷、熱傷、発疹及び咽喉炎の痛み及び炎症のような症
状の場合の局所適用向は投与量範囲は、約０．　１〜約
５００＋ｎｇ／用量、好ましくは約１〜約１０ａ＋ｇ／
用量である。鼻炎、アレルギー及び喘息の治療に適した
経鼻又は吸入スプレー処方剤の場合には、適切な投与量
範囲は約０．０１〜約１００１１１に／ｍ；、好ましく
は約０．５〜約５ｍｇ／用ユである。全身性炎症、ショ
ック、関節炎、アレルギー、喘息の治療及び低精子運動
性の増加のために適した静注用処方剤の場合には、適切
な投り、全範囲は約０．　１〜約５００ｍｇ／ｋｇ／用
量、好ましくは約５〜約５０ｆｆ１ｇ／ｋｇ／用量であ
る。炎症性腸疾患又は全身的痛み及び炎症の治療用の経
口処方剤の場合には、適切な投与量範囲は約１〜約１０
００　ｍｇ／　ｋｇ／用量、好ましくは約５０〜約５０
０ｍｇ／ｋｇ／用量である。

本発明の更にもう一つの面は、本発明のペプチド及び薬
学上許容される担体を含有した医薬組成物に関する。本
発明のペプチドは、本発明の医薬組成物中重量で約０．
　１〜約１０％、好ましくは約０．　５〜約５％、最も
好ましくは約１〜約３％を占める。

本明細書で用いられる″薬学上許容される担体。

という語句は、ヒト又はより下等な動物への投与に適し
た１種以上の適合しうる固体もしくは液体フィラー希釈
剤又は被包用物質を意味する。本明細書で用いられる“
適合しうる”という語句は、通常の使用状況下で医薬組
成物の薬学的効力を実質上減少させる相互反応が生じな
いように医薬組成物の各成分が本発明の化合物と及び互
いに混合されうることを意味する。勿論、薬学上許容さ
れる担体は、治療されるヒト又はより下等な動物への投
与向けににそれらが適合しうるように十分高い純度及び
十分低い毒性でなければならない。

薬学上許容される担体として機能しうる物質の一部の例
としては、ラクトース、グルコース及びスクロースのよ
うな糖類；コーンスターチ及びポテトスターチのような
デンプン類；カルボキシメチルセルロースナトリウム、
エチルセルロース、酢酸セルロースのようなセルロース
及びその誘導体；粉末トラガカント：麦芽；ゼラチン；
タルク；ステアリン酸；ステアリン酸マグネシウム；硫
酸カルシウム；ピーナツ油、綿実油、ゴマ油、オリーブ
浦、コーン油及びテオブロマ属油のような植物浦；プロ
ピレングリコール、グリセリンソルビトール、マンニト
ール及びポリエチレングリコールのようなポリオール類
；糖；アルギン酸；無発熱物質水；等張塩；リン酸緩衝
液；カカオ脂（生薬基剤）；ツイーンズ（Ｔｖｅｅｎｓ
■）のような乳化剤−並びに、医薬処方剤に用いられる
他の無毒性の適合しうる物質がある。湿潤剤及びラウリ
ル硫酸ナトリウム等の滑沢剤、並びに菅色剤、香味剤、
賦形剤、造錠剤、安定化剤、酸化防止剤及び保存剤も存
在することができる。

本発明の具体的態様が記載されてきたが、本明細書で開
示されたペプチド及び組成物に関する様々な変更及び修
正が本発明の精神及び範囲から逸脱することな〈実施さ
れうろことは、当業者にとって明らかであろう。特許請
求の範囲内には本発明の範囲内に属するこのようなすべ
ての修正を包含していると考えられる。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、下記構造： Ｈ−Ｌ−Ｑ−Ｔ−Ｕ−Ｖ−Ｗ−Ｘ−Ｙ−Ｚ−Ａｒｇ−Ｏ
   Ｈ〔上記式中、 （ａ）Ｌは非存在、Ｄ−又はＬ−配置の単一塩基性アミ
   ノ酸残基、Ｄ−又はＬ−配置のアミノ酸残基２〜約４（
   そのうちの少なくとも１つは、塩基性アミノ酸残基であ
   る）を含有したペプチド、並びにアシル型保護基、芳香
   族ウレタン型保護基及びアルキル型保護基からなる群の
   Ｎ末端酵素保護基から選択される； （ｂ）ＱはＡｒｇ、Ｌｙｓ及びＯｒｎから選択される；
   （ｃ）Ｔ及びＵは各々独立してＤ−及びＬ−環状アミノ
   酸残基、Ｄ−及びＬ−脂肪族アミノ酸残基、Ｌ−芳香族
   アミノ酸残基、Ｌ−酸性アミノ酸残基、Ｌ−アミドアミ
   ノ酸残基並びにＬ−ヒドロキサメートアミノ酸残基から
   選択され；その場合にＴ及びＵのうち少なくとも１つは
   Ｌ−酸性アミノ酸残基、Ｌ−アミドアミノ酸残基及びＬ
   −ヒドロキサメートアミノ酸残基から選択される； （ｄ）ＶはＤ−又はＬ−配置の脂肪族、環状及び芳香族
   アミノ酸残基から選択される； （ｅ）ＷはＬ−配置の脂肪族及び芳香族アミノ酸残基か
   ら選択される； （ｆ）ＸはＤ−又はＬ−配置の芳香族及び脂肪族アミノ
   酸残基から選択される； （ｇ）ＹはＤ−配置の芳香族アミノ酸残基から選択され
   る； （ｈ）ＺはＬ−配置の芳香族及び脂肪族アミノ酸残基か
   ら選択される〕 を有することを特徴とするブラジキニン拮抗ペプチド及
   びその薬学上許容される塩。 ２、（ａ）Ｌは非存在、Ａｒｇ、ＤＡｒｇ、Ｌｙｓ、Ｄ
   Ｌｙｓ、Ｌｙｓ−Ｌｙｓ、Ｍｅｔ−Ｌｙｓ、Ｇｌｙ−Ａ
   ｒｇ−Ｍｅｔ−Ｌｙｓ、ＤＬｙＳ−ＬｙＳ、Ｏｒｎ、Ｈ
   ａｒ、ＤＨａｒ、５−グアニジノペンタノイル、６−グ
   アニジノヘキサノイル、６−アミノヘキサノイル及び５
   −アミノペンタノイルから選択される； （ｂ）ＱはＡｒｇ、Ｌｙｓ及びＯｒｎから選択される；
   （ｃ）Ｔ及びＵは各々独立してＰｒｏ、ＤＰｒｏ、Ｈｙ
   ｐ、Ａｚｔ、Ｔｈｚ、Ｉｎｐ、Ｅｐｒ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ
   、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｃｐｒ、Ｃｍｐ、Ａａｐ、Ａｏｒ、
   Ｎｈａ及びＮｈｇから選択され；その場合にＴ及びＵの
   うち少なくとも１つはＡｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ
   、Ｃｐｒ、Ｃｍｐ、Ａａｐ、Ａｏｒ、Ｎｈａ及びＮｈｇ
   から選択される；（ｄ）ＶはＧｌｙ、Ａｌａ、ＤＰｒｏ
   、ＤＨｙｐ及びＳａｒから選択される； （ｅ）ＷはＰｈｅ、Ｔｈｉ、Ｎａｐ、Ｐｙｒ、Ｎｐｈ、
   Ｃｐｈ、Ｍｔｙ及びＴｙｒから選択される； （ｆ）ＸはＳｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｌａ、Ｇｌｙ、ＤＰｈｅ
   、ＤＴｈｉ、ＤＮａｐ、ＤＰｙｒ及びＤＣｐｈから選択
   される；（ｇ）ＹはＤＰｈｅ、ＤＴｙｒ、ＤＴｈｉ、Ｄ
   Ｎａｐ、ＤＰｙｒ、ＤＮｐｈ、ＤＣｐｈ、ＤＭｔｙ、Ｄ
   Ｔｒｐ、ＤＨｉｓ、ＤＨｐｈ及びＤＰｇｌから選択され
   る； （ｈ）ＺはＰｈｅ、Ｔｙｒ、Ｐｒｏ、Ｔｈｉ、Ｐｙｒ、
   Ｎａｐ、Ｍｔｙ、Ｎｐｈ及びＣｐｈから選択される；請
   求項１に記載のペプチド。 ３、（ａ）ＬはＤＡｒｇ、Ｌｙｓ−Ｌｙｓ及び非存在か
   ら選択される；好ましくはＬはＤＡｒｇである；（ｂ）
   ＱはＡｒｇである； （ｃ）Ｔ及びＵは各々独立してＰｒｏ、Ｈｙｐ、Ａｓｐ
   、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｃｐｒ、Ｃｍｐ、Ａａｐ、
   Ａｏｒ、Ｎｈａ及びＮｈｇから選択され：その場合にＴ
   及びＵのうち少なくとも１つはＡｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ
   、Ｇｌｎ、Ｃｐｒ、Ｃｍｐ、Ａａｐ、Ａｏｒ、Ｎｈａ及
   びＮｈｇから選択される； （ｄ）ＶはＤＰｒｏ、ＤＨｙｐ、Ｇｌｙ及びＡｌａから
   選択される；好ましくはＶはＧｌｙ又はＤＰｒｏである
   ；（ｅ）ＷはＰｈｅ及びＴｙｒから選択される；好まし
   くはＷはＰｈｅである； （ｆ）ＸはＳｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｌａ及びＧｌｙから選択
   される；好ましくはＸはＳｅｒである； （ｇ）ＹはＤＰｈｅ、ＤＴｙｒ、ＤＴｒｐ及びＤＨｉｓ
   から選択される；好ましくはＹはＤＰｈｅである； （ｈ）ＺはＰｈｅ及びＴｙｒから選択される；好ましく
   はＺはＰｈｅである； 請求項２に記載のペプチド。 ４、Ｔ又はＵのうち一方、好ましくはＴが Ｐｒｏ及びＨｙｐから選択され、Ｔ又はＵのうち他方、
   好ましくはＵはＡｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｃｐ
   ｒ、Ｃｍｐ、Ａａｐ、Ａｏｒ、Ｎｈａ及びＮｈｇ、好ま
   しくはＡｓｐ、Ｇｌｕ、Ａａｐ、Ａｓｎ及びＧｌｎ、最
   も好ましくはＡａｐ、Ａｓｎ及びＧｌｎから選択される
   、請求項１、２又は３に記載のペプチド。 ５、（ａ）ＱはＡｒｇである； （ｂ）ＴはＰｒｏ又はＨｙｐである； （ｃ）ＵはＡａｐ、Ａｓｎ又はＧｌｎである；（ｄ）Ｖ
   はＧｌｙ又はＤＰｒｏである； （ｅ）ＷはＰｈｅである； （ｆ）ＸはＳｅｒである； （ｇ）ＹはＤＰｈｅである； （ｈ）ＺはＰｈｅである；及び （ｉ）ＬはＤＡｒｇである； 構造を有する、請求項２に記載のペプチド。 ６、【遺伝子配列があります】 及び 【遺伝子配列があります】 から選択される構造を有することを特徴とするペプチド
   。 ７、ａ）請求項１〜６のいずれか一項に記載のペプチド
   ；及び ｂ）製薬上の担体； を含有することを特徴とする医薬組成物。 ８、ａ）０．１〜１０重量％のペプチド；及び ｂ）製薬上の担体； を含有する、請求項７に記載の医薬組成物。 ９、痛み、炎症、うっ血又は平滑筋収縮を治療する医薬
   の製造のための請求項１〜６のいずれか一項に記載の安
   全有効量のペプチドの用法。