JPH02186267A - カブトガニ・アメボサイト・ライセートｇ因子活性化阻害剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 く技術分計〉 本発明は成る種の酵素前駆体の活性化を阻害する薬剤に
関し、さらに詳しくは、カブトガニ・アメボサイト・ラ
イセートの凝固系に関与する因子のうち、（１→３）−
β−Ｄ−グルカンとの反応により凝固が開始する系の（
１→３）−βーＤーグルカン感受性因子すなわちＧ因子
の活性化を阻害する物質、すなわちＧ因子活性化阻害剤
に関する。

〈背景技術〉 カブトガニ・アメボサイト・ライセート（Ｌｉｍｕｌｕ
ｓ　　Ａ　ｍｅｂｏｃｙｔｅ　　Ｌ　ｙｓａｔｅ−以下
、ＬＡＬとり記することがある）が、１９６４年Ｌｅｖ
ｉｎとＢａｎｇによりダラム陰性細菌の毒素（エンドト
キシン）で直ちに凝固（ゲル化）するという現象が発見
されて［Ｊ　、Ｌｅｖｉｎ　　ａｎｄ　　Ｆ．Ｂ．Ｂａ
ｎｇ（１　９　６　４）Ｂｕｌｌ．　Ｊｏｈｎｓ　　Ｈ
ｏｐｋｉｎｓ　　Ｈｏ５ｐ．、　　ｌ　Ｉ　５、２６　
５　−　２　７　４．　１以来、ＬＡＬはエンドトキシ
ン（細菌内毒素）の特異的検出測定法、いわゆる［リム
ルステストＪ　　（　Ｌ　ｉｍｕｌｕｓ　ｔｅｓｔ）試
薬として広く利用されている。カブトガニの現存種は３
属４種ゆが知られており、中でも北米産のＬ　、　ｐｏ
ｌｙｐｈｅｍｕｓ，日本、中国産のＴ　、Ｌｒ１ｄｅｎ
ＬａＬｕｓのアメボサイトライセートを用いる「リムル
ステスト」試薬の商品化が行なわれている。［例えば、
Ｐ　ｒｏｇｒｅｓｓｉｎ　　Ｃ　ｌ１ｎｉｃａｌ　　ａ
ｎｄ　　Ｂ　ｉｏｌｏｇｉｃａｌ　　Ｒ　ｅｓｅａｒｃ
ｈ　；ｖｏｌｕｍｅ　９　３，　Ｅｎｄｏｔｏｘｊｎｓ
　　ａｎｄ　　ｔｈｅｉｒ　　ＤａｔｅｃＬｉｏｎ　　
ｗｉｔｈ　　ｔｈｅ　　ＬｉｍｕＪｕｓ　　Ａｍｅｂｏ
ｃｙｔｅ　　Ｌｙｓａｔｅ　　Ｔｅ５ｔ，　５ｔａｎｌ
ｙ　　Ｗ．　ＷａＬｓｏｎ，　Ｊａｃｋ　　Ｌｅｖｉｎ
　　ａｎｄ　　Ｔｈｏｍａｓ　　Ｊ　、Ｎｏｖｉｔｓｋ
ｙ，　Ｅｄｉｔｏｒｓ：　Ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ　　ｉｎ
　　１９８２　　ｂｙ　　Ａｌａｎ　　Ｒ．　Ｌｉ５ｓ
。

Ｉｎｃ．　ｐａｇｅ　　７　−　２　４　、　Ｔｉｔｌ
ｅ：　Ｔｈｅ　　ＬｉｍｕｌｕｓＴｅｓｔ　　ａｎｄ　
　Ｂａｃｔｅｒｉａｌ　　ＥｎｄｏＬｏｘｉｎｓ：Ｓｏ
ｍｅＰ　ｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ　　ｂｙ　　Ｊ　、　
　Ｌ　ｅｖｉｎ参照Ｊ。

ＬＡＬは当初エンドトキシンのみに特異的に反応すると
考えられていたが、最近の研究でＬＡＬの凝固系は、哺
乳動物の血液凝固系と同様に、複数の凝固因子の段階的
反応による系からなり、エンドトキシンにより反応開始
する系（Ｃ因子活性化系）の他に、（１→３）−β−Ｄ
−グルカンによって反応開始する系（Ｃ因子活性化系）
も存在することが確認されている［Ｔ　、Ｍｏｒｉｔａ
　ｅｔ　ａｌ。

（１９８１）ＦＥＢＳ　　ＬＥＴＴＥＲ５，１２９，３
１８−３２１及びＳ　、　Ｉ　ｖａｎａｇａ　ｅｔ　ａ
１，　　（１９８６）　Ｊ　、Ｐｒｏｔｅｉｎ　　Ｃｈ
ｅｌｌ１，、　５．２５５−２６８１゜そのため、リム
ルステストをできるだけエンドトキシン特異的にするた
めの研究が行なわれており、例えば、Ｔ、０ｂａｙａｓ
ｈｉ　ｅｔ　ａ１，　　（１９８５）　ＣＩｉｎ、　Ｃ
ｈｉ１１、　Ａｃｔａ、　　ｌ　４９．５５−６５には
、ＬＡＬの凝固因子の分画−再構成によりＧ因子を分離
除去した試薬を用いたエンドトキシンの測定法が提案さ
れており、これによるエンドトキうン特異的測定キント
が生化学工業（株）より「エントスベン−」なる商品名
で販売されている。

しかし、上記提案の測定法はエンドトキシンに特異的な
検出ｉ！ＩＩ定法としては極めて強い要求があるが、複
数の凝固系因子からなるカブトガニ・アメボサイト・ラ
イセードからＧ因子を分離除去することは、■エンドト
キシンや（ｌ→３）−β−Ｄ−グルカンの不在下で各因
子の分画操作を行う必要があり、このために用いる器具
、装置、薬剤に対するエンドトキシンや（ｌ→３）−β
−Ｄ−グルカンの完全除去を事前に行う煩雑な操作が伴
うこと、■分画操作に伴いアメポサイトライセートの希
釈化が起り、必要に応じ濃縮操作を要すること、■操作
が加わる毎に各因子の活性低下や両分の損失が伴うこと
、■Ｇ内因子共にコアギュローゲン（凝固タンパク前駆
体）が分離除去されるため、他の因子の再構成により得
られる測定法は、［リムルステストｊのうちゲル化現象
を利用するゲル化法、比濁法、比濁時間分析法等には適
用できず、合成基質法にのみ適用できるという使用制限
が伴う等の欠点を有する。

本発明者らは、ＬＡＬ凝固機構のうち、（ｌ→３）−β
−Ｄ−グルカンの関与により凝固（ゲル化）反応が開始
する系（Ｃ因子活性化系）について詳細に研究を行なっ
ている過程で、これまでＧ因子の活性化にのみ関与する
と考えられた（１−３）−β−〇−グルカンのうち、（
１→３）−β−Ｄ−グルコシド構造単位が特定の個数だ
け連続して結合している構造部分を含有するものは、全
く意外にも、Ｇ因子の活性化とは全く逆の阻害作用を示
すことを見い出し本発明を完成するに至りｌ：　、。

〈発明の開示〉 かくして、本発明によれば、下記式 ライ上−１−Ｇ因子活性化阻害剤が提供される。

本発明によればまた、上記ポリグリコシドの有効量を、
カブトガニ・アメボサイト・ライセート（ＬＡＬ）に添
加することからなる、ＬＡＬ中に存在するＧ因子の活性
化を阻害する方法が提供される。

以下、本発明についてさらに詳細に説明する。

本発明の阻害剤において有効成分として使用されるポリ
グルコシドは、下記式 で示される（ｌ→３）−β−Ｄ−グルコシド構造単位（
分子量：１６２）が連続して２〜３７０個結合したポリ
−（１−３）−β−Ｄ−グルコシド構造部分を少なくと
も１つ含有するポリグルコシドを有効成分とするカブト
ガニ・アメボサイト・で示される（１−３）−β−Ｄ−
グルコシド構造単位が連続して２〜３７０個、好ましく
は３〜３１０個、より好ましくは４〜１８０個結合した
ポリ−（１−３）−β−Ｄ−グルコシド構造部分［以下
、便宜上これを「ポリ（１，−３）グルコシド構造部分
」という］を１１分子に少なくとも１つ含有するポリグ
ルコシドである。

かくして、本発明で使用されるポリグリコシドは、ポリ
（１−３）グルコシド構造部分を１分子中に少なくとも
１つ含有するものである限り、該ポリグルコシド分子の
他の部分の構造は、特に制限はなく広い範囲から選ぶこ
とかでさる。ただし、他の構造部分はエンドトキシン及
びＣ因子活性化系と実質的に相互作用しないものである
ことが重要である。例えば、本発明で使用されるポリグ
ルコシドは、実質的に１つのポリ（ｌ→３）グルコシド
構造部分のみからなるもの、例えば下記式で示される（
ｌ→４）−β−Ｄ−グルコシド構造単位の１つもしくは
それ以上及び／又は下記式で示される（１→６）−β−
Ｄ−グルコシド構造単位の１つもしくはそれ以上及び／
又は下記式式中、 ｎは２−３７０、好ましくは３〜３１０、より好ましく
は４〜】８０の整数である、で示されるポリ−（１−３
）−β−Ｄ−グルコシドであることができ、或いは１つ
のポリ（Ｉ→３）ゲルコンド構造部分に、下記式 式（ｒＶ）、（Ｖ）、ｌ）中、Ｒ１、Ｒ８及びＲ１の少
くとも１つはメチル基、ヒドロキシメチル基、カルボキ
ンメチル基、アセチル基、硫酸基、リン厳基等化学的に
導入し得る官能基およびそれらの金属塩、アンモニウム
塩及び何機アミン塩から選ばれる残基を表わし、そして
残りは水素原子を表わす、 で示される修飾されたβ−Ｄ−グルコシド構造単位の１
つもしくはそれ以上から構成される糖鎖が結合した［こ
のＭ１１４は前記ポリ（１−３）グルコシド構造部分に
分岐鎖として結合していてもよい］構造のものであって
もよい。

さらにまた、本発明で使用するポリグリコシドは、２つ
又はそれ以上の前記ポリ（１−３）ゲルコンド構造部分
が、他の糖鎖構造部分を挾んで下記式 ％式％ 式中。

ＡＩ、Ａｚ、　　・・・・・はそれぞれ前記式（Ｉ）で
示される（１−３）−β−Ｄ−グルコシド構造単位が連
続して２〜３７０個、好ましくは３〜３１０個、より好
ましくは４〜１８０個結合したポリ−（ｌ→３）−β−
Ｄ−グルコシド構造部分を表わし、ＡいＡ２、・・・・
・の各構造部分を構成する式（１）の単位の数は互に異
なっていてもよく、そしてＢ３、Ｂ２、・・・・・は各
々同一もしくは相異なる他の糖鎖構造部分を表わす、 で示されるように連結した構造のものであってもよい。

ここで、Ｂ　１．Ｂ　２、・・・・・によって表わされ
る他の糖鎖構造部分としては、例えば前記式（■）、ｌ
）、（ＩＶ）、ｌ）又は（■）？’示される構造単位の
１個又は２個以上のブロックからなる構造部分が挙げら
れる。

さらにまた、本発明で使用するポリグルコシドは、前記
ポリ（１−３）グルコシド構造部分が、上記Ｂ３、Ｂ！
、・・・・・によって表わされる如き他の糖鎖構造を挾
んで前記式（Ｉ）で示される（１→３）−β−Ｄ−グル
コシド構造単位が連続して３７１個以上結合した長鎖の
ポリ−（１−３）β−Ｄ−グルコシド構造部分が連結し
た構造のものであってもよい。

従って、本発明で使用されるポリグリコシドは前記ポリ
（１−３）グルコシド構造部分を１分子中に少なくとも
１つ含有するものである限り、その分子量は特に制約さ
れるものではないが、水に対する溶解度が低下したり、
粘度が増大することにより取扱が困難となり、エンドト
キシン測定キット調製時の一定品質を得る点等から不利
を生ずることがあるので、一般には分子量が５００．０
００以下、好ましくは５００〜２４０，０００、さらに
好ましくは６５０〜ａｏ、ｏｏｏの範囲内のものが好都
合である。

また、本発明で使用されるポリグルコシドは前記のポリ
（１−３）グルコシド構造部分を１分子中に少なくとも
１つ含有するものから実質的になることが好ましいが、
しかし必ずしもそうである必要はなく、例えば、前記式
（Ｉ）で示される（ｌ−３）−β−Ｄ−グルコシド構造
単位が連続して３７１個以上結合した高分子量のポリ−
（ｌ→３）β−Ｄ−グルコシド構造部分を含有する他の
ポリグルコシドが混在していてもよい。何んとなれば、
本発明によるポリグルコシドは、ＬＡＬのＧ因子活性化
系の開始因子であるＧ因子に、Ｇ因子活性化物質である
高分子量のポリ−（１−３）−β−Ｄ−グルコシドより
も速く強く結合して活性化Ｇ因子への活性化を阻害し、
かかる高分子量のポリ＝（１−３）−β−Ｄ−グルコシ
ドの存在によってその阻害作用に実質的な影響がないか
らである。

上記の如く他の成分が混在するポリグルコシドを阻害剤
として使用する場合、本発明によるポリグルコシドの阻
害剤中における含有量には特に制限はないが、その含有
量があまりにも少ないと、Ｇ因子の活性化の阻害に多量
の該ポリグルコシドを使用することが必要となり不経済
であるので、一般には、少なくとも５重量％、好ましく
は１０重量％以上、さらに好ましくは２０重量％を占め
ることが望ましい。

なお、本明細書においてポリグルコシドの分子量は、分
子量既知の！！ｌｌ［準物質を用い下記の条件でゲルバ
ーミエイシコンクロマトグラフイーを行ない標準曲線を
作成し、次に供試試料について同じ条件でクロマトグラ
フィーを行ない、その結果を漂嘔曲線と対比することに
より求めた値である。

カラム：　ＴＳＫｇｅｌ　Ｇ−ＰＷＸＬシリーズ（東ソ
ー株式会社）７．８Ｘ３０Ｏｍｍ数種数本 移動相：　Ｑ、３ＭＮａＯＨ 流　速：　０．５ｍｌ／　ａｋｉｎ 試料溶液濃度：　０．１−５ｍｇ／　＋ｗｌ試料溶液注
入量；　０．ｌＩ＋！１ カラム温度二室温 度用室温示差屈折計（Ｌ　Ｋ　Ｂ社）による測定又はフ
ェノール硫酸法による糖室量 標準物質：　ＴＳＫ標準ポリエチレンオキシド（東ソー
株式会社）およびポリエチレングリ コール（半井化学薬品株式会社）の重 量平均分子量が１，０００から８６０゜０００の１０種
を使用。

本発明においてＧ因子活性化阻害剤として用いられる上
記の如き特性をもつポリグルコシドは、天然に由来する
ものであってもよく、或いは合成されたもの又は前記式
（Ｉ）で示される（１−３）−β−Ｄ−グルコシド構造
単位を３個以上含有するポリ（ｌ→３）−β−Ｄ−グル
コシドの一部を化学的に修飾したものであってもよい。

通常は天然に由来するものの方が入手容易である。その
ようなポリグルコシドの具体例としては以下に記載する
ものが挙げられる。

（１）　　前記式（１）で示される（１→３）−β−〇
−グルコシド構造単位のみから実質的になる実質的に直
鎖状のポリグルコシド：例えば、アルカリ土類金属（Ａ
　Ｉｃａｌｉｇｅｎｅｓ）バクテリア由来の（１−３）
−β−Ｄ−グルカン：１１Ｉ毛藻（Ｅ　ｕｇｌａｎａ）
由来のパラミロン；高等植物の繊維組織のβ−グルカン
又は篩管から抽出される力ロース；上記（１−３）−β
−Ｄ−グルカンやＬ　ａｍｉｎａｒｉａ（コンブ属）、
Ｅ　１ｓｅｎｉａ　（アラメ属）等の褐藻類由来のラミ
ナラン類等の部分水解物中に含まれる高重合度の（１−
３）−β−結合からなるＤ−グルコース重合体；ラミナ
リデキストリン（重合１ｆｌＯ〜２０のもの）、ラミチ
リオリゴ類（重合度１０以下のもの）、等。

（２）前記式（Ｉ）で示されるポリ−（１−３）−β−
Ｄ−グルコシド構造単位と前記式（Ｉ［［）で示される
（ｌ→６）−β−Ｄ−グルコシド構造単位の両者を含有
するβ−ポリグルコシド：例えば、ａ）（１−”３）−
β−結合からなる主鎖に１〜数個の（１−６）−β−結
合が連鎖したグルコース又はグルコース重合体が組込ま
れたもの、例えば、Ｅ　１ｓｅｎｉａ　（アラメ属）褐
藻類由来のラミナラン類。

ｂ）上記ａ）の（１−３）−β−結合で連鎖したグルコ
ース又はグルコース重合体にさらに（ｌ→３）−β−結
合のＭ５ｊ４が（１−６）−β−結合で分岐し、また特
に糖鎖の一部に他の糖部分を含みうるもの、例えば、Ｌ
　ａｍｉｎａｒｉａ　（コンブ属）褐藻類由来のラミナ
ラン類、ＯｃｈｒｏｍｏｎａＳ、　Ｐ　ｈａｅｏｄａｃ
ラン類、Ｐｏｒｉａ（ブクリヨウ菌）由来のバキマン等
。

Ｃ）さらに多くの分岐をもち、樹状構造を有するもの、
例えば旦恥遅樹痣匣すの細胞壁由来のグルカン、等。

ｄ）（１−３）−β−結合よりなる直鎖状グルカンに（
ｌ→６）−β−結合でグルコースが連結しているもの、
例えばグルコース単位３残基当りｌ残基の割合で分岐の
あるＳ　ｃｌｅｒｏＬｉｎｉａ由来のスｍａ【１ｎｉａ
等に由来するスクレログルカン類等。

また、（１−３）−β−結合よりなる直鎖状グルカンの
グルコース単位５残基当り２残基の割合で（１−６）−
β−結合でグルコースが結合しているもの、例えば、Ｌ
　ｅｎｔｉｎｕｓ　（ンイタケ）のレンチナン、等。

ｅ）（１→６）−β−結合よりなる直鎖状グルカンのグ
ＪレコースのＣ−３位力）ら（１→３）−β−結合でグ
ルコース鎖が複数分岐しているもの、例えば、Ｓ　ａｃ
ｃｈａｒｏｍｙｅｅｓ　（パン酵母）の細胞壁由来のβ
−グルカン、等。

（３）前記式（Ｉ）で示される（ｌ→３）−β−Ｄ−グ
ルコシド構造単位と前記式（ｆｆ）で示される（１−４
）−β−Ｄ−グルコシド構造単位の両者を含有するポリ
グリコシド：例えば、Ｃｅｔｒａｒｉａ、　Ｕ　５ｎｅ
ａ、　Ｅ　ｖｅｒｎｉａ等に由来するりヒエチン類、オ
オムギ胚乳中に含まれるβ−グルカン等の（ｌ−４）−
β−オリゴグルコシドが（ｌ→３）−β−結合により連
結した糖鎖構造からなるもので、所々に（１−３）−β
−オリゴグルコシド構造を含むもの。

以上に述べたポリグルコシドの成る種のものは市販品と
して入手することができ、それらはそのまま本発明の阻
害剤として利用することができるが、必要に応じて、糖
類を部分的に分解し及び／又は分別処理に付して、前記
式（Ｉ）で示される（ｌ→３）−β−Ｄ−グルコシド構
造単位を前記特定量で含有するポリグルコシドに富む画
分を調製し、それを本発明の阻害剤に利用してもよい。

かかる糖鎖の部分的分解及び分別処理はそれ自体既知の
方法で行なうことができる。例えば、糖鎖の部分分解は
酸またはアルカリ、β−グルカナーゼを用いる加水分解
、加酢分解、音波九理等により行うことができる。また
分子量分画は、アルフール、アセトン、エーテル等の有
機溶媒や塩類を用いる分別沈澱法、分子篩剤や分子篩膜
を用いる分画により行うことができる。

また、上記（１）〜（３）に例示した如きポリグルコシ
ドは、糖鎖の一部を、メチル基のようなアルキル基、ヒ
ドロキシメチル基のようなヒドロキシアルキル基、カル
ボキシメチル基の如きカルボキシアルキル基、硫酸基、
リン酸基などの酸基、その他の官能基によって化学的に
修飾されていてもよい。

それらはそれ自体既知の方法でかかる官能基を導入する
ことによって調製することができる［例えば、（１）安
藤、寺山、西沢、山用編、生化学研究法Ｉ、２８４〜３
０３　（＋９６７）、朝倉書店；（２）Ｗｈｉｓ＋ｌｅ
ｒ、Ｒ，Ｌ、　ｅｄ、；　Ｍｅｔｈｏｄ　ｉｎ　Ｃａｒ
ｂｏｈｙｄｒａｔｅＣｈｅｎ＋１ｓｔｒｙ　Ｉ＋、１９
３−２６７．２７１〜３３１（１９６４）　、　Ａｃａ
ｄｅ＋＋＋ｉｃ　Ｐｒｅｓｓ等参照１゜特に、Ｇ因子活
性化作用をもつ分子量が約６０，０００以上の（１−３
）−β−Ｄ−グルカンは部分的な化学的修飾によって、
そのポリ−（１−３）−β−〇−グルコシド構造部分に
８ける前記式ＣＩ）で示される（！→３）−β−Ｄ−グ
ルコシド構造単位のｉ統結合数を３７０個以下にするこ
とにより、本発明の阻害剤として使用できるようになる
。

しかして、本発明において好適に使用しうるポリグルコ
シドの具体例を示せば次のとおりである。

・分子量３４２〜１．６３８のラミナリオリゴ糖、・分
ＩＬ１．８００−３，２５８のラミナリデキストリン、 ・平均分子量２，０００〜６０，０００の（１→３）〜
β−Ｄ−グルカン、 ・平均分子量３，０００〜２３，０００のラミナラ・平
均分子ｉ３，０００〜２０，０００のスクレロタン、 ・平均分子量５００．０００以下のシゾフイラン、・平
均分子量１，１００，０００以下のレンチナン、・平均
分子量１２，０００以下のパン酵母グルカン水可溶物、 ・平均分子量３３，０００以下のリヒエナン、・平均分
子量２００，０００以下の大麦β−グルカン、 （例えばカードランの部分カルボキシメチル化により得
られる）平均分子１４０，０００〜２４０．０００の部
分カルボキンメチル化（１→３）−β〜Ｄ−グルカンお
よびその金属塩（置換度：０．００３〜１．０）、 ・平均分子１２３，０００以下の部分カルボキシメチル
化ラミナランおよびその金属塩（置換度二）、０以下）
、 ・平均分子量ｇｏ、ｏｏｏ以下の部分メチル化（ｌ−３
）−β−Ｄ−グルカン（置換度：Ｏ，ＯＯ３〜１．０）
、 ・平均分子量２３，０００以下の部分硫酸化ラミナラン
およびその金属塩（置換度＝１．０以下）。

以上に述べた本発明に従うポリグルコシドは、後述する
実施例において実証されているように、ＬＡＬ中に存在
するＧ因子の活性化を強力に阻害する作用を有している
ので、リムルステストにおいてＧ因子活性化系による影
響を受けずに検体中のエンドトキシンを特異的に検出測
定するために使用することができる。その使用に際して
、Ｇ因子活性化阻害剤としてのポリグルコシドは、通常
、リムルステストに用いられるＬＡＬに対し、該ＬＡＬ
中のＧ因子の活性化を完全に阻止するのに必要な量販上
を■検出測定時に添加するか、■ＬＡＬに事前に添加す
るか、■ＬＡＬの抽出調製時に添加することができる。

ここでＬＡＬ中のＧ因子の活性化を完全に阻止するのに
必要な阻害剤の量は、例えば、次のようにして決定する
ことができる。

水冷下、一定量のＬＡＬに、通常の測定条件下において
ＬＡＬを充分に活性化する一定量のＧ因子活性化物質（
エンドトキシンを含有しないもの、またできる限りＧ因
子活性化阻害剤を含まないもの）を加え、これに対して
阻害剤（エンドトキシンを含有しないもの）を濃度を変
えて加え、通常のＬＡＬ使用時と同条件で反応させる。

この条件下でＬＡＬの活性化を１００％阻害する阻害剤
の濃度を求める。

次に、上で求めた濃度の阻害剤を上記の一定量のＬＡＬ
に加え、更にＧ因子活性化物質の量を変化させて加え、
どの濃度で加えてもＬＡＬが活性化されないことを確認
する。

上記の操作で一定量のＬＡＬ中のＧ因子の活性化を完全
に阻害するのに必要な阻害剤の量（Ｉｋ度）を求めるこ
とができる。

このようにして求めた各種市販のライセードのＧ因子活
性化を完全に阻止するのに要するＧ因子活性化阻害剤の
量を示せば次のとおりである。

表二↓ ライセード（商品名） プレゲル（生化学工業） ブレゲル−Ｓ（生化学工業） リムルステスト試薬−（和光補薬） リムルスＨ３−テストワフ−（和光補薬）パイロチル（
ケープコツト社） パイロセード（ヘマケム社） パイロテスト（デイフコ社） パイロデイック（生化学工業） トキシカラ−（生化学工業） エンドトギシン（カビービトラム社） 上記表−１に示す阻害剤の必要量から明らかなように、
ＬＡＬからなるリムルステスト試薬には、本発明による
ポリグルコシドをＬＡＬ１ｍＱ当り少なくとも５０ｎ、
？、好ましくは１００ｎ、、９以上、さらに好ましくは
１００〜２３Ｃ）ｎ１，最も好ましくは２３０〜５００
　ｎｌの範囲内で添加するのが適当である。

以下、本発明のＧ因子活性化阻害物質の調製法、作用機
作、該阻害物質を用いたリムルステスト試薬、キット等
についてさら１こ詳細に説明する。

ｆ本発明のＧ因子活性化阻害物質の調製法〕本発明のＧ
因子活性化阻害物質は、例えば、以下の調製例に示す方
法により調製できる。また、市販品の（ｌ→３）−β−
Ｄ−グルカンのうち、本発明の範囲にあるものは、その
まま使用することが出来る。

（注）零Ｇ因子活性化阻害剤ニ調製例４−１で得たカー
ドランキ酸分解物のＧＰＣ分 画画分４（表２中、試料Ｎｏ、ｌ　４）。

カードラン（和光補薬工業、試薬、ＬＯＬ　　ＮＯ。

ＰＥＱ　　９０８０、Ｍｎ＞　１　３６，０００、Ｍｌ
ｖ／Ｍｎ＞　２．７６　）試料Ｎｏ、１０１の１ｇを０
．３ＭＮａ０　＋−（に５Ｂ、／ｍ４の濃度に溶解して
、１００＊Ｑづつ、室温下、以下の条件下でゲルバーミ
エイションクロマトグラフイ−（以下ＧＰＣ）を行なっ
た。

１カラム：　Ｔ　Ｓ　ＫｇｅｌＧ　６０００　Ｐ　ＷＸ
ＬとＧ５０００　Ｐ　ＷｘＬ（ともに７．８　Ｘ　３０
０ｍｍ）とを直列に連結、移動相：０．３ＭＮａＯＨ，
流速：０，５ｍＱ、／ｍＩｎ）　、溶出してきた低分子
画分（Ｎｏ、４４〜４６）を採取し、再クロマトグラフ
ィーにかけ、数平均分子量が３．０５０、多分散度が１
．２９の試料０．０！５ｍｇを得た（試料Ｎｏ、ｌ）。

上記ＧＰＣ分画パターンを添付の２８１図に示す。更に
第１図中Ｎｏ、４４〜４６画分を再クロマトした分画パ
ターンを添付の第２図に示す。

本試料Ｎｏ、ｌをβ−１，３−グルカナーゼ（ザイモリ
エイズー１００７、生化学工業製）で消化し、該酵素消
化液をＧＰＣ（カラム：ＴＳＫｇｅｆｆＧ　４０００　
ＰＷｘｔ、Ｇ３０００ＰＷ工１、Ｇ２５００　ｒ’　ｗ
ｘｔ直列；移動相：蒸留水、流速：０．６ｍ（２／馴ｎ
）で分析し、酵素消化液中の糖組成（グルコース４０％
、ラミナリビオース３０％、ラミナリトリオース２０％
、ラミナリテトラオース８％、ラミナリベンタオース２
％、回収率９４％）が確認出来た。このことから本試料
（ＮＯ，ｌ）の糖構造は（１−３）−β−Ｄ−グルコシ
ド構造部分を含有するβ−ポリグリコシドであることが
わかる。

調製例２：カードランの水に対する溶解度差による分画 市販カードラン（試料Ｎｏ、１．　Ｏｌ）　５０ｇを蒸
留水に懸濁し、下記のフローシートに示す操作により分
画を行った。

試料Ｎｏ、　ｌ　Ｏｌ　（５０ｇ）／蒸留水２，５Ｑ↓ 撹拌、室温下、１時間 ↓ 不円浴＠ガー拭糾Ｎｏ、ン 調製例３：カードラン水水不溶精糖分のギ酸分解による
調製 試料Ｎｏ、１０２の４５ｇをに、Ｏｇａｖａらの方法［
Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ、　Ｒｅｓ、、　　２９　、　３９
７〜４０３（１９７３）］によりギ酸分解を行った。操
作内容を下記の７０−シートに示す。

試料Ｎｏ、ＩＯ２ 撹拌２０分（８５〜９０℃） 再懸濁 試料Ｎｏ、３ 先に示した調製例３で得た水可溶性画分（ｉｌｔ料Ｎｏ
、３）０．１５ｇを蒸留水３０ｍＱに溶解しＧＰＣ（カ
ラム：ＴＳＫ　ｇｅｆｆＧ３０００ＰＷ、ｔＸ２、Ｇ２
５００　ＰＷ、ＬＸ　１，移動相：蒸留水、流速０゜５
　ｍＱ／　ｍ１ｎ）により各０．５ｍ（ｌ宛分画採取し
、再クロマトにより分子量の異なる６種の試料（Ｎｏ、
１１〜１　６　）　　を　ｅ多　に　。

調製例３で得た水不溶性画分（試料Ｎｏ、４）の０．２
ｇを４０ｍＱの０．３ＭＮａＯＨ溶液に溶解し、ＧＰＣ
（カラム：ＴＳＫ　ｇｅＱ　Ｇ３０００ＰＷｘｔＸ２、
Ｇ２５００ＰｗｘＬｘ１，移動相：０．３ＭＮａＯＨ溶
液、流速０　、５　ｍＱ／　ｍ１ｎ）を用い上記調製例
４−１と同様の操作にて分画、再クロマトを行い溶出液
に０　、３　Ｍ　ＨＣＱ溶液を加えて中和し、分子量の
異なる２種の試料（Ｎｏ、１７及び１８）を得／こ。

試料Ｎｏ、１０２のＩｇを約１００ｍＱの５ｍＭＮａＯ
Ｈ溶液に懸濁し、水冷下音波発生機、ソニケータ−ＴＭ
　（大量製作所、型式５２０２ＰＺＴ。

東京）により２０ＫＨｚ、８０ｖで１２分間音波処理に
より低分子化を行った。

旭理液を５ＭＮａＯＨを用い、最終０．３ＭＮａ、ＯＨ
溶液とし、上記調製例４−２に準じクロマト分画を行い
分子量の異なる８種類の試料（Ｎｏ、１９〜２２及び１
０３〜１０６）を得た。

調製例６−１＝海藻由来の阻害物質の調製（Ｉ）アラン
（Ｅ　１ｓｅｎｉａ　ｂｉｃｙｃｌｉｓ）由来の試料は
、Ｔ、ＵｓｕｉらＡｇｒｉｅ、　　Ｂｉｏ１，　Ｃｈｅ
ｗ、　　４３．６０３〜６１１　（１９７９）の方法に
従い市販アラン乾燥藻体（東京、吹田商店）１００ｇを
粉砕後、８０％エタノールにより低分子可溶画分を抽出
除去し、残渣から、２％ＣａＣＱ、水溶液を用いラミナ
ラン画分を抽出する。次いで該抽出液にエタノール９５
％を用い終濃度７５％溶液とし、生じた沈澱を遠沈によ
り集め、エタノール洗浄後、粗ラミナラン試料を得る。

該粗試料を蒸留水に再溶解し、陰イオン交換体（ＤＥＡ
Ｅ−）ヨパール）にヨリ夾雑する酸性物質（アルギン酸
等）及び色素類を除き、エタノール再沈澱から試料Ｎｏ
、２５を得た。

調製例６−２＝海藻由来の阻害物質の調製（ＩＩ）マコ
ンブＬａｍ１ｎａｒｉａ　ｊａｐｏｎｉｃａ由来の試料
はＪ。

Ｊ　、Ｃｏｎｎｅｌｌら、Ｊ　、Ｃｈｅｍ、Ｓｏｃ、、
　　３４９４　　（１９５０）の方法に従い、市販マコ
ンブ乾燥藻体（東京、吹田商店）１００ｇを粉砕後、０
．０９ＭＨＣＱ溶液にて約３日間静置抽出し、不溶物を
濾ヌ１１し、濾液を更に１日静置し、生ずる少量の沈澱
を遠心分離により除去し、上清に３倍容のエタノールを
加え、約７５％溶液とし、生ずる沈澱を遠沈により集め
、アルコール洗浄、乾燥後水溶性ラミナラン画分（試料
Ｎｏ、２７）を得た。

調製例７−■：真菌由来の阻害物質の調製ＣＩ）真菌Ｓ
　ｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ　ｌ１ｂｅｒｔｉａｎａ由来の
試料スクレロタンは、北原ら、岐大農報　旦、１００〜
１０５（１９５７）の方法に従ってＳ　ｃｌｅｒｏｔｉ
ｎｉａｌｉｂｅｒｔｉａｎａの菌核の脱脂乾燥粉末（３
０ｇ）を水で充分に抽出して得た残渣を７％ＮａＯＨ溶
液で抽出し、抽出液に１０％Ｃｕ５Ｏａ溶液を加えて沈
澱させ、これを分別して塩酸酸性メタノールで洗浄して
銅を除き、８０％メタノールで洗浄して■１Ｃρを除き
、メタノール、エーテルで洗浄乾燥することを３回繰返
して精製し、６ｇの試料Ｎ０９２８を得た。

調製例７−２：真菌由米の阻害物質の調製（Ｉｔ）真菌
Ｓ　ｃｈｉｚｏｐｈｙｌ　ｌｕｍ　ｃｏｍｍｕｎｅ　：
スエヒロタケ由来の試料は、市販ンゾフイラン（科研製
薬：商品名ンニフイラン、医薬品：　Ｌｏｔ　Ｎｏ、Ｊ
　６１０４０）をに、ＴａｂａＬａら、Ｃａｒｂｏｈｙ
ｄｒ、Ｒｅｓ、、　　８９１２１−１３５　（１９８１
）の方法に従い前記調製例５の操作に準じ、水溶液中１
０時間音波処理後、アルカリ条件下分子篩分画により分
子量の異なる３種類の試料（Ｎｏ２９．３０．３１）を
得！二　。

調製例７−３：真菌由米の阻害物質の調製（ＩＩＩ）酵
ｆ５Ｓ　ａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｃｅｒｅｖｉｓｉ
ａｅ　：パン酵母由来のβ−グルカン試料は、市販パン
酵母グルカン（シグマ社Ｌｏｔ　Ｎｏ、５６Ｆ−４０２
７）９０ｍｇに蒸留水５０ｍｄを加え、室温で２時間撹
拌後、遠心分離上清約５０ｍ＜１を、減圧濃縮により１
ｍ１２とし不溶物を再度遠心除去し、上清から０．６４
ｍｇの試料（Ｎｏ、３３）を得た。

調製例８：大麦β−グルカン由来の試料の調製市販大麦
β−グルカン（シグマ社、ＬｏＬＮｏ。

５６Ｆ−０６５２）を０．３Ｍ　ＮａＯＨにより５…ｇ
／ｍＱの溶液とし、前記調製例４−２に準じアルカリ条
件下、分子篩分画により分子量分布の狭いβ−グルカン
試料（Ｎｏ、３６）を得た。

また、上記市販の大麦β−グルカンを５　ｍｌ／　ｍＱ
の濃度にて熱水に溶解し、その遠心（３，５００ｒｐｎ
、１０分）上清を前記調製例４−１に準じて蒸留水を移
動相として１００μσづつ５０回ＧＰＣ分画採取し、更
に同条件下にて再分画採取して分子量の異なる２種の試
料（試料Ｎｏ、３７．３８）を得ｔ：。

調製例２に準じて得たカードラン水不溶物をＡ。

Ｅ、Ｃ１ａｒｋｅ　　ａｎｄ　Ｂ、Ａ、５Ｌｏｎｅ：Ｐ
ｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　　　ｌ　。

１７５〜１８８　（１９６２）の方法に従って、カルボ
キシメチル化した。即ち、１００．９のカードラン水不
溶物を窒素気流下Ｏ′Ｃで１１２の５Ｍ苛性ソーダ水溶
液に溶解し、これを撹拌しながら２３６ノのモノクロル
酢酸を２００ｍ１２の水に溶解したものを滴下して加え
、添加後、６０〜６５℃で２時間撹拌する。生ずるゲル
を２．５倍容のエタノール中で強く撹拌し細粉化し濾過
する。７０％のエタノールで充分洗滌してからエタノー
ル、エーテル、エーテルで洗滌し乾燥する。このものを
水７Ｉ２に溶解し、１Ｍ酢酸で中和し、活性炭４０ノを
加え、室温で１時間撹拌し、濾過する。濾液を減圧濃縮
してＩＱとし、３倍容のエタノールを加えて沈澱とし、
エタノール、エーテルで洗滌し、濃硫酸上減圧乾燥し、
ｌ１３．８５＆を得た。

得られたカードラン部分カルボキシメチル化（Ｉ→３）
−β−Ｄ−グルカンは、Ｄ、　Ｆ、　Ｄｕｒｓｏの硝酸
ウラニル法ＭｅＬｈｏｄｓ　ｉｎ　Ｃａｒｂｏｂｙｄｒ
ａｔｅ　Ｃｈｅｗ、■。

１２７−１２９　（１９８０）参照に従って測定すると
エーテル化度（置換度：　Ｄｅｇｒｅｅ　ｏｆ　Ｓｕｂ
ｓＬｊｔｕＬｉｏｎ：ＤＳ）は０．６３であった。これ
はｍ鎖を形成しているグルコース残基１個当りの置換し
得る水酸基３箇のうちの０．６３個が置換されたことを
意味するものである。

得られた部分カルボキシメチル化（１→３）−β−Ｄ−
グルカンの２５ｍ２を５ｍ＋ｌのＯ，１Ｍ酢酸アンモニ
ウム水溶液に溶解し、ＧＰＣ（カラム：トヨバールＨＷ
６５Ｆ、５Ｘ１００ｃｍ；移動相：Ｑ、１Ｍ酢陛アンモ
ニウム水溶液；流速＝５　、８　ｍＱ／　ｍ１ｎ）によ
り分画採取し、別のカラムを用いたＧＰＣ（カラム：　
ＴＳＫｇｅｌＧ６０００ＰＷｘｔ＋Ｇ５０００ＰＷｘｔ
＋Ｇ３０００ＰＷｘｔを直列に使用；移動相：　０．１
Ｍ酢酸アンモニウム水溶液：流速＋　０　、６　ｔｍＱ
／　ｍ１ｎ）により再分画採取し、分子量分布の狭い試
料Ｎｏ、４１（Ｍｎ−２３１，０００）を得た。

また、部分カルボキシメチル化（１→３）−βＤ−グル
カンの０．３２を蒸留水３０ｍＱに溶解し、音波処理（
９ｋＨｚ１１８０−１３０Ｗ、１時間、音波発生機とし
て久保田製作所、ＫｕｂｏＬａ。

Ｉｎ５ｏｎａＬｏｒ　Ｍｏｄｅｌ　２０　！　Ｍを使用
）により低分子化した後、そのうち４．５ｍ１２に０．
５ｍＱの１Ｍ酢酸アンモニウム水溶液を加えて混和後、
上記の試料Ｎｏ、４１を得るだめの操作と同様な操作に
て、ＧＰＣ分画採取およびＧＰＣ再分再分散採取い、分
子量の異なる２種の試料（Ｎ　ｏ　、３９．４０）を　
漫　ｌこ　。

調製例９によって得られＩ；置換度（ＤＳ）０．６３の
カルボキシメチル Ｄーグルカン１０，？を窒素気流下０°Ｃで２５ｍ１２
の１０、５Ｍ　　ＮａＯＨに加えてペーストとしよく撹
拌しながら、それにモノクロル酢酸水溶液（　ｌ　Ｏｌ
　／　ｌ　２ｄ）を加え、６０℃に加温し、４時間撹拌
し、冷却してから２Ｍ　　ＭＣ（１３０ｍｄを加え、次
いで２００ｍ４の塩酸酸塩エタノール（４０ｍＱＨＣＱ
，エタノール）中に注いで生ずる沈澱を集め、７０％エ
タノールで洗滌後、エタノール、エーテルで洗滌し、減
圧乾燥し、試料ＮＯ．Ｉ０７の標品を得た。

調製例９に示したＤＳ−０．６３の部分カルボキシメチ
ル化（　１．　−　３　）−β−Ｄ−グルカンと同様の
方法で置換度を測定しｊ：結果このものはＤＳ−１．２
０であった。

調製例２＋部部分カルボキシメチル化ラミクラン調製 部分カルボキシメチル化ラミナランはＬａｍｉｎａｒｉ
ａ　ｄｉｇｉｔａｉａのラミナラン（シグマ社Ｌｏｔ　
　Ｎｏ。

７７Ｆ−３８８５）を用い、調製例９の部分カルボキン
メチル化法と同様、Ａ．　Ｅ．　Ｃｌａｒｋｅ　ａｎｄ
　Ｂ。

Ａ．　Ｓｔｏｎｅ：Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍ．　　Ｉ　、　
　ｌ　７　５　（１　９　６　２）に記載の方法に準じ
調製し、試料Ｎｏ．４２（ＤＳ−０．０６）の標品を得
た。

調製例２に準じて得たカードラン水不溶物３、０２をＭ
．　Ｓａｍｅｃ，　Ｋｏｌｌｏｉｄ−Ｂｅｉｈｅｆｔｅ
　５↓，３６９（１９４０）の方法に従い、水８０ｎｆ
ｌに懸濁し、窒素気流下、飽和苛性ソーダ水溶液１．３
５ｍＲを加え、完全に溶解させ、４℃で、こへにジメチ
ルｉ酸６０２を徐々に加え、約１時間後、アセトン中に
反応液を滴下し、生ずる沈澱を集め、アセトンで充分洗
滌し、濃硫酸上減圧乾燥し、標記調製品（試料Ｎｏ．４
３、ＤＳ−０．１　６）の３．１３２　　を　を与　Ｉ
こ　。

化はピリジン中でピリジン−３酸化硫黄後合体（和光補
薬工業、Ｌｏｔ　　Ｎｏ．ＰＰＬ８８２３）を用いて次
の如く行った。

充分に乾燥したＬａｍｉｎａｒｉａ　　ｄｉｇｉＬａＬ
ａのラミナラン（シグマ社、Ｌｏｔ　　Ｎｏ．７７Ｆ　
　３８８５）０、５２を５０ｏｆ２の脱水ピリジンに溶
解し、ピリジン−３酸化硫黄複合体１２を加え、６０℃
で１時間反応させ、水１００ｍ（２を加え、冷却し、苛
性ソーダで中和し、あらかじめアルカリ水溶液で充分洗
滌してグルカンを除去した透析膜（スペクトロポアｉ．
ｏｏｏカット）を用いて水に対して透析した後、濃縮し
、２倍容のアセトンを加えて糖成分を沈澱せしめ、アセ
トンで洗滌後、濃硫酸上減圧乾燥し、０．３８．？の標
記調製品を得た（試料Ｎｏ、４４、ＤＳ−０，１４）。

なお、ｍ製ｆ１１２〜１３に示した各標品のメチル基及
び硫酸基の置換度は、下記文献■、■の方法に従い測定
算出した。

■　踏台、滓出、版本；存機定量分析法（微量篇）、南
山堂（＋９５６）； ■　Ｗｈｉｓｔｌｅｒ、　Ｒ，Ｌ、　ｅｄ、、　Ｍｅｔ
ｈｏｄ　ｉｎ　Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ　Ｃｈｅｍｉ
ｓｔｒｙ　ＩＩＩ、　ｐ２２９−２３５．２７７−２８
０　（１９６４）　、　Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ
［市販試料］ 下記市販試料は物性を確認後、そのまま又はアルカリ可
溶化後中和し、測定に供した。

グルコース：（和光補薬、ＪＩＳ特級試薬）：試料Ｎｏ
、１０８ ラミナリオリゴ糖：（生化学工業、ピュアー試薬）：試
料Ｎｏ、５〜１０ ラミナラ７　　Ｅ　１ｓｅｎｉａ　ａｒａｂｏｒｅａ由
米：（牛丼化学、／／　　　　Ｅ　、ａｒａｂｏｒｅａ
由来＝　（東京化成、試薬）：試料Ｎｏ、２４ ／／　　　　Ｌ　ａｍｉｎａｒｉａ　ｄｉｇｉＬａｔａ
由来：　（シグマ社試薬）：試ＭＮｏ、２６ レンチナン　Ｌｅｒ＋ｔｉｎｕｓ　ｅｄｏｄｅｓ（シイ
タケ）由来：（山之内製薬、医薬Ｌｏｔ　Ｎｏ、ＣＫ　
Ｃ７）：試料Ｎｏ、３２ リヒエナン　Ｃｅｔｒａｒｉａ　１ｓｌａｎｄｉｃａ由
来：　（シグマ社、試薬）：試料Ｎｏ、３４ ツノ　　　Ｕｓｎｅａ　ｂａｒｂａｔａ由来：　（シグ
マ社、試薬）：試料Ｎｏ、３５ 実施例１〜４４ 上記の各試料の分子量、Ｇ因子活性化阻害力価等の測定
結果を下記表−２に示す。

試薬）：試料Ｎｏ、２３ 表中の分子量は前記ゲルバーミエイションクロマトグラ
フイ−（以下ＧＰＣと略記することがある）により求め
た下式で定義される数平均分子量（Ｍｎ）で表し、まＩ
；、分子量分布は、下式で定義される多分散度（Ｍ　ｖ
／　Ｍ　ｎ）で表わす。

ΣＨｉ 多分散度＝Ｍｖ／Ｍｎ ただし、Ｈｉはタロマドグラムを時間で等分に多分割し
たときのｉ番目のピーク高さ（試料濃度）を、Ｍｉはｉ
番目の分子量を表わす。

Ｇ因子活性化阻害力価は下記に示す［Ｇ因子活性化阻害
物質の活性力価測定法］にて測定しｍｇ当りの単位とし
て示した。

［Ｇ因子活性化阻害物質（以下Ｇｌと略記することがあ
る）の活性力価測定法］ 反応混合液２００μα中には以下のものを含む。

（１）検体（注１）Ｇｌ試料又は純水　５０．ｕ４［Ｇ
因子活性化物質　　　　　　１０ｐｇ添加又は（ＧＡと
略記、注２）］　　　　無添加（２）カブトガニライセ
ード凝固酵素 前駆体画分（Ａｌｌ。−２，５８注３）３０μα（３）
カブトガニライセードＧ因子画分（Ａ！、。−０゜９）
（注３）　　　　２０μＱ（４）トリス−ＨＣＱ緩衝液
（ｐＨ８−０）２０ｐ　ｍｏｌｅ（５）ＭｇＣＬ　　　
　　　　　　　　　　２０μ、。１８（６）Ｂｏｃ　−
Ｌｅｕ　−Ｇｌｙ　−Ａｒｇ　−ｐＮＡ　　　　Ｏ，１
３／７　ｍｏｌｅ上記反応液を３７℃で３０分間インキ
ュベートした後、遊離するｐＮＡの量を０．０４％亜硝
酸ナトリウム（０，４８Ｍ　　Ｈ（ｌ溶液）、０．３％
スルファミン酸アンモニウム、０．０７％Ｎ−１−ナフ
チルエチレンジアミンニ塩酸塩のそれぞれ０゜５、、Ｑ
を順次加え、ジアゾカップリングにより色調変換し、５
４５ｎｍにおける吸光度（Ａ１４１）量として測定する
。

Ｇｌ活性は次式により算出する。

この条件下において、ＧＡによるＧ因子の活性化を１０
０％阻害するＣ、Ｉ量を１００単位とする。

（注ｌ）検体のうち、水不溶性のものは、０，３ＭＮａ
ＯＨに溶かした後、等容の０．３ＭＨＣｌ２を加えて中
和して用いる。

（注２）前記調製例５で調製したカードラン音波処理物
のＧＰＣ分画精製標品（表−２、ＮＯ，１０６，分子量
２１６，０００）。

（注３）文献［Ｔ、　０ｂａｙａｓｈｉ　ｅＬ　ａ１，
、　Ｃ１１ｎ、　Ｃｈｉｌｎ。

Ａｃｔａ、１４９．５５〜６５　（１９８５）コに従い
日本産カブトガニＴ、Ｌｒ１ｄｅｎｔａｔｕｓから調製
した。

上記表−２の内容から以下のことが明らかである。

（ａ）　Ｇ因子活性化物質として知られる市販カードラ
ン（試料Ｎｏ、１Ｏ１）中には、水溶性低分子量のＧ因
子活性化阻害物質が混在している（試料Ｎｏ、１，　２
）。

（ｂ）　　（１−３）−β−Ｄ−グルコシド構造部分か
らＷＩＲされるポリグルコシドの（１−３）−β−Ｄ−
グルコシド構造部分の連結個数が２〜３７０の範囲内に
あるポリグルコシドは本発明のＧ因子活性化阻害作用を
示す。

（Ｃ）阻害活性の認められない高分子量β−グルカン画
分（試料Ｎｏ、ｌ０２）から各種低分子化操作により調
製して得られた分子量ａｏ、ｏｏｏ以下の画分がＧ因子
活性化阻害力価を発現した（試料Ｎｏ、３．４、ＩＩ〜
２２）。

（ｄ）重合度が１０以下のポリ−（ｌ→３）−β−Ｄ−
グルコシド構造部分とポリ−（Ｊ−４）−β−Ｄ−グル
コシド構造部分とがブロック状に連結している大麦β−
グルカン［Ｂａｌ　１ａｎｃｅらＣａｒｂｏｈｙｄ、Ｒ
ｅｓ、、６１．１０７−１１８（１９７８）参照］　（
調製例８、試料Ｎｏ、３６．３７．３８）は何れもラミ
ナリテトラオースないしラミナリペンタオース相当の活
性を示し、グルカン全体の分子量が６０，０００以下又
は以上であっても、本発明の阻害剤として使用できる。

（ｅ）調製例ＩＯで得た（１−３）−β−Ｄ−グルカン
の部分カルボキシメチル化したもののうち平均置換度が
１．０以上の試料（試料ＮＯ，１０７ＤＳ−１，２）で
はＧ因子活性化阻害効果が消失しており、また、試料Ｎ
ｏ、２６に挙げた高Ｇ因子活性化阻害力価を示す試料を
部分カルボキシメチル化（調製例１１）により（１−３
）−β−Ｄ−グルコシド部分の鎖長を短縮した場合（試
料Ｎｏ、４２）及び調製例１３の硫酸エステル修飾によ
り（１−３）−β−Ｄ−グルコシド構造部分を短縮した
場合、Ｇ因子活性化阻害効果も低減することが併せて確
認された。

（ｆ）　　（１−３）−β−Ｄ−グルコシド構造部分の
重合度が３７０以上を有し、分子量が６０．０００以上
のＧ因子活性化効果を示す（１→３）−β−グルカンで
あっても、部分メチル化（調製例１２）、部分カルボキ
シメチル化（調製例９、試料Ｎｏ、４１）により本発明
で規定する構造のものとなった場合Ｇ因子活性化阻害効
果を生ぜしめることが確認できた。

［Ｇ因子に対する本発明の阻害物質の作用機作］カブト
ガニ血液凝固系のうちＧ因子活性化系は、Ｔ、Ｍｏｒｉ
ｔａ　　ｅｔ　　ａ１，、ＦＥＢＳ　　Ｌｅｔｔｅｒｓ
、　　１２９．３１８〜３２１．（１９８１）により報
告されたとおり下記チャートのごとく示される。

本発明の阻害物質が上記凝固系のどの部分を阻害するか
を明らかにする目的で、次の実験を行った。

反応混合液２００μＱ中には、Ｇ因子活性化阻害物質（
ラミナリヘブタオース、試料番号ＩＯ１■と略記）５μ
ｇ、　Ｇ因子活性化物質（カードラン音波処理物ＧＰＣ
分画画分、試料番号１０６、Ａと略記）３μｇ、文献［
Ｔ　、Ｏｂａｙａｓｈｉ　ｅｔ　ａＱ、ＣＩｉｎ、Ｃｈ
ｉｍ、ＡｃＬａ、　１４９、５５−６５　　（１９８５
）Ｊに従いＬＡＬから調製したＧ因子画分（Ｇと略記）
２０μＱ、凝固酵素前駆体画分（Ｐと略記）３０　ｐＱ
、　Ｔｒｉｓ−ＨＣＱ緩衝液（ｐＨ８，０）２０、ｕｍ
ｏｌｅ、　ＭｇＣＬ　　２０μｍｏｌｅ、合成基質Ｂｏ
ｃ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−ｐＮＡ（Ｓと略記）Ｏ−
１３μｓ。

ｌｅを含む。

各成分の添加順序および加温条件を変えて、Ｇ因子活性
化系の活性化阻害の程度を、それぞれの実験（１〜５）
において、阻害剤無添加時をコントロールとして測定し
た結果を以下に示す。

０℃ ０℃ ０℃ ０℃ ０°Ｃ 実験１，２．３から明らかなごとく、Ｇ因子（前駆体）
に本発明の阻害物質（Ｉ）を添加した場合、Ｇ因子活性
化物質（Ａ）の存在の有無にかかわらず、Ｇ因子の活性
化は１００％阻害される。

一方、実験４．５から明らかなごとくＧ因子が（Ａ）に
より一旦活性化された後は阻害物質（１）を共存せしめ
ても活性型Ｇ因子の阻害は起らない。

従って本発明の阻害物質（ｉ）は、Ｇ因子（前駆体）の
みに作用する物質といえる。

尚、ＬＡＬ中に存在するＧ因子の活性化を１００％阻害
する量の本発明の阻害物質（１）があれば、如何に活性
化物質（Ａ）の量を多量存在せしめても、Ｇ因子の活性
化は生じない。しかし、Ｇ因子を１００％阻害し得ない
少量の阻害物質（１）の存在下に活性化物質（Ａ）が多
量存在せしめた場合は、阻害物質（１）により阻害され
なかったＧ因子が活性化物質（Ａ）により活性化される
ことも確認出来た。

このことにより、Ａ　、　Ｋ　ａｋｉｎｕｍａらが、Ｂ
　１ｏｃｈｅ＋＋＋。

Ｂｉｏｐｈｙｓ、Ｒｅｓ、Ｃｏｍｍｕｎ、Ｉ　　Ｏ１，
４３４〜４　３　９（１９８１）に指摘した、（ｌ→３
）−β−Ｄ−グルカン誘導体や、Ｔ、Ｍｏｒｉｔａらが
Ｐ　ｒｏｇ、　Ｃｈｉｍ。

Ｂｉｏ１，　Ｒｅｓ、、　　１８９．５３〜６４　（１
９８５）に示した各種β−グルカンによるカブトガニＧ
因子活性化能における最大活性化濃度の存在を解析出来
た。

実施例４５：Ｇ因子活性化阻害物質添加、非添加キット
のエンドトキシン特異的測定 能比較 本発明のＧ因子活性化阻害物質をＬＡＬ−Ｔｅｓｔに添
加した場合及び添加しなかった場合のエンドトキシン特
異性比較を次の操作により、各種検体を用いて行った。

用いたＬＡＬ−Ｔｅｓｔの商品は、次の構成からなるト
キシカラーテストＴＭ（比色法、生化学工業製）である
。

■過塩素厳、■水酸化ナトリウム、■緩衝液、■ライセ
ード十発色合成基質、■エンドトキシンフリー蒸留水、
■エンドトキシン標準品、■塩酸、■亜硝酸ナトリウム
、■スルファミン酸アンモニウム、［相］Ｎ−（１−す
７チル）エチレンジアミンニ塩酸塩。

上記キット構成のうち、■緩衝液にＧ因子活性化阻害物
質として試料Ｎｏ、１３を５μｇ／ｍＱの濃度で溶解し
た溶液を用いて■のＬＡＬ反応主剤を溶解した反応液群
（Ａ−キット）及び該阻害物質を含まない緩衝液■を用
いて■を溶解した反応液群（Ｂ−キット）として、各種
検体に対するＡ１８両キットの反応性を比較し、 下記衣−３に示す。

検体Ｎｏ、１〜５は、トキシカラーテストの測定マニュ
アルに従い検体を溶媒にそのまま溶解し、そのＯ、Ｉ　
ｍ１２を試料として反応を行い、また検体Ｎｏ、６　（
ａ−ｒ）は、Ｔ　、　Ｏｂａｙａｓｈ　ｉの方法［Ｊ、
Ｌａｂ。

Ｃｌ１ｎ、Ｍａｄ、、１０４，３２１−３３０　（１９
８４）１に従って、上記キット構成■、■を用い血漿検
体を前処理した後その０　、１　ｍＱを試料として反応
に供した。

Ａ、８両キットの反応性は、各検体を、キット構成■、
■を用いて調製した反応液に加え、３７℃、３０分間反
応せしめ、生ずるｐＮＡを■〜［相］のカップリング試
薬にて発色せしめ５４５ｎｍの吸光度値で示した。

尚、本キット組成の場合の最大反応性はへＡ　ｓ＋ｓ−
１、５であった。

表−３から判るように、本発明のＧ因子活性化阻害物質
を含むＡ−キットならびに従来品Ｂ−キットともに、エ
ンドトキシン検体（Ｎｏ、１）に対し、同一の反応性を
示す結果であったが、Ｇ因子活性化物質であるカードラ
ン水不溶性画分（検体Ｎｏ。

２）は、Ｂ−キットにおいて、極めて高度の反応性を示
した。一方、Ａ−キットにおいて該検体は反応性がまっ
たく示さなかったものの、エンドトキシンと併せた場合
（検体Ｎｏ、３）は検体Ｎｏ、１のエンドトキシンと同
一の反応性を示した。

リムルステスト陽性物質（非エンドトキシン性）として
知られているセルロース系透析膜水洗液（Ｆ　、Ｃ、Ｐ
ｅａｒｓｏｎ　　ａｔ　ａｔ２．、　ＡｒｔｉＬ　Ｏｒ
ｇａｎｓ。

８．２９１〜２９８　（１９８４）］　を検体（ＮＯ９
４、Ｎｏ、５）として用いた場合の結果も、Ａ−キット
、Ｂ−キットともに上記カードラン水不溶性画分および
／またはエンドトキシン添加の場合の挙動と同様の結果
が示された。

以上の結果により、本発明のＧ因子活性化阻害剤をＬＡ
Ｌと併用することは、エンドトキシン特異的測定を可能
とすることが判る。

更に従来のＬＡＬ−Ｔｅｓｔで、真のエンドトキセミア
か否か、明確に判定出来ないとされた臨床血液検体につ
いて、本発明によるΔ−キットと従来品のＢ−キットの
比較により、菌培養の結果、ダラム陰性菌の存在が確認
された検体（Ｎｏ、６；ｂ−ｇ）においてはＡ、８両キ
ットともに高い反応性が示されたが、一方、（］→３）
−β−Ｄ−グルカンを菌体細胞壁に有することが知られ
ている真菌の存在が確認された検体（同：ｈ−７１）に
おいては、Ａ−キットでの反応性が示されず、Ｂ−キッ
トに高い反応性が示された。また、臨床症状からはエン
ドトキセミアとは見なされない血液透析患者（慢性腎不
全）の検体（同：ｍ−ｒ）においてもＡ−キットでの反
応性は見られず、Ｂ−キットでの異常高値は透析膜由来
の（１−３）−β−Ｄ−グルカンによるものであること
が予測された。

ＬＡＬ−Ｔｅｓｔと本発明のＧ因子活性化阻害剤との組
合せにより、上記検体のごときエンドトキシンの存在の
有無が明確でない感染症、敗血症を疑われている臨床検
体を測定することは、真のダラム陰性菌感染症（エンド
トキセミア）を的確に判別出来る利点に加えるに、真菌
感染症を判別出来ることから、感染歯タイプの早期判定
による該感染歯への適切な治療薬剤の選択、処置、並び
にその治療効果の解析を可能とし、本発明の阻害剤を含
むキットの提供は診断、医療等医学の進歩に多大の寄与
が期待出来る。

以下に参考例として、本発明のＧ因子活性化阻害物質と
カブトガニ・アメボサイト・ライセードの組合せによる
エンドトキシン特異的検出測定用キットの調製例を示す
。

１−１．リムルステスト試薬（凍結乾燥品）は常法通り
、指定された溶解液（蒸留水または緩衝液）で溶解し、
これにＧ因子活性化該阻害剤を検体と同時あるいは別々
に添加する（添加順は問わない）ことによって目的を達
成する方法：例えば、［プレゲルＳＪ（凍結乾燥品；ゲ
ル化法リムルステスト製品；生化学工業（株））に蒸留
水０　、　ｌ　ｖａＱを加えて溶解し、該阻害剤（カー
ドランのギ酸分解物のＧＰＣ分画画分４；表２、Ｎｏ。

ｌ４）の水溶液（１，２ｐｇ／１ｎＱ）　０．０１　ｍ
Ｑ。

（１２０ｍｌ　／ｍ＊ＬＡＬ）と検体０　、１　ｍ１２
とを加えて静かに振り混ぜ、３７°Ｃで６０分間静置加
温する時、エンドトキシンのみと反応し、ゲルを形成す
る。

１−２．リムルステスト試薬溶解液にあらかじめ該阻害
剤を溶解し、これを用いてリムルステスト試薬を溶解す
ることによって目的を達する方法：例えば、「コーチス
ト・エンドトキシン」　（合成基質法リムルステスト製
品；カービービトラム社）を使用する場合は、ＬＡＬ　
（凍結乾燥品）ｌバイアルを、あらかじめ該阻害剤（ラ
ミナランｉ表２中、Ｎｏ、２６）０．７μｇを溶かした
蒸留水１゜４ｍＱで溶解する。そのＯ，１，ｍｄ（５０
０ｎｌ　／ｖａＱＬ　Ａ　Ｌ　）に検体０　、１　ｍＱ
を加えて３７°Ｃ！、１０分間加温し、合成基質（Ｓ−
２４２３）含有緩衝液０　、２　ｍ（２を加えて３７℃
、３分間加温する時、エンドトキシンのみと反応し、黄
色を呈する。定量Ｉｚ際しては、５０％酢酸溶液を２０
０μα添加し、４０５ｎｍで吸光度を測定する。

参考例２：Ｇ因子活性化阻害剤をＬＡＬに事前に２−１
．市販のＬＡＬ　（いわゆるゲル化法リムルステスト試
薬）に事前に該阻害剤を添加することによって、目的を
達する方法： 例ｔば、「リムルスＨ３−テストワコー」　（凍結乾燥
品；ゲル化法リムルステスト製品；和光補薬工業（株）
）を使用して比濁時間分析法により測定する場合は、Ｌ
Ａ、Ｌ（凍結乾燥品）１バイアルを、あらかじめ該阻害
剤（カードランギ酸分解物のＧＰＣ分画画分４；表２中
、Ｎｏ、］　４）Ｏ−５μｇを溶かした蒸留水５ｍ１２
で溶解する。その０−１ｍｄ（１００ｎ７／＋ｎＱＬＡ
Ｌ）を反応用試験管に分注し、さらに検体０　、１　ｍ
Ｑを加えて、静かに振り混ぜ、比濁時間分析装置「トキ
シンメーターＥＴ−２０１Ｊ　　（和光補薬工業）の専
用アナリシスモジュール（３７℃）の所定の測光位置に
セットし、スタートスイッチを入れる。エンドトキシン
のみが反応し、ゲル化時間が表示される。

２−２．あらかじめ調製したＬＡＬに検体添加前に該阻
害物質を添加することによって目的を達する方法： 例えば、ＬＡＬを用いて比濁法により測定する場合は、
カブトガニ（Ｔ　ａｃｈｙｐｌｅｕｓ　　け１ｄｅｎｔ
ａｔｕｓ）の血球から低張緩衝液を用いて抽出されたラ
イセ）０．１ｍ１２１：該阻害剤（ラミナラン；表２中
、Ｎｏ、２６）を１ｍＱ当り０．５μｇ溶がした１ＭＴ
ｒｉｓ−ＨＣＱ−Ｉ　Ｍ　ＭｇＣ１２２緩衝液（ｐＨ８
，０）溶液０．０１ｍＱ（５０ｎ２　／ｍ１２ＬＡＬ）
を加える。

これに検体０　、１　ｍＱを加えて、３７℃で加温する
。

エンドトキシンのみが反応し、白濁する。経時的に６６
０ｎｍで吸光度を測定すれば定量できる。

方法 たとえば、カブトガニ（Ｔ　ａｃｈｙｐｌｅｕｓ　ｔｒ
ｉｄｅｎｔａｔｕｓ、　Ｔ　、　ｇｉｇａｓ、Ｌ　ｉｍ
ｕｌｕｓ　ｐｏｌｙｐｈｅｍｕｓ、　Ｃａｒｃｉｎｏｓ
ｃｏｒｐｉｕｓ　　ｒｏｔｕｎｄｉｃａｕｄａ　　のど
れでもよい）の血リンパ液を採取し、遠心分離して血球
（約２０ｇ）を得、これに２．０ｍｇ／Ｑの該阻害剤（
部分カルボキシメチル化ラミナラン；表２中、Ｎｏ、４
２）を蒸留水または０．０２Ｍ　　Ｔｒｊｓ−ＨＣΩ　
緩衝液（ｐＨ８，０）のような低張緩衝液に溶解した該
阻害剤溶液１００＋ｎＱを加えで、ワーリング・ブレン
ダーでホモゲナイズした後、遠心分離（８゜０００ｒｐ
ｎ＋；　３０分間；４℃）に上り上清と沈澱物に分画す
る。この操作をもう一度繰り返し、上溝合計約１５０ｍ
４をＬＡＬとして得る。このＬＡＬの一定量を従来法で
抽出されたＬＡＬの代わりに用いてリムルステスト試薬
（ゲル化法、比濁法、比濁時間分析法、合成基質法）を
調製するとき、エンドトキシンにのみ特異的に反応する
エンドトキシン特異的リムルステスト試薬を製造するこ
とができる。

なお、合成基質法エンドトキシン特異的リムルステスト
試薬の製造法としては、たとえば米国特許第４，４９５
，２９４号明細書（Ｍｅｔｈｏｄ　　ｆｏｒ　ｄｅｔｅ
ｒｍｉｎｉｎｇ　　ｂａｃｔｅｒｉａｌ　　ｅｎｄｏｔ
ｏｘｉｎ　　ａｎｄ　　ｋｉｔｔｈｅｒｅｆｏｒ）で開
示されている基質ならびにＲ−ＩＩＣ−Ｇ　！ｕ　−Ａ
　ｌａ　−Ａ　ｒｇ　−ｐＮ　Ａ　、　ｍｅｔｈｏｘｙ
ｃａｒｂｏｎｙｌ　−Ｄ−ｈｅｘａｈｙｄｒｏＬｙｒｏ
ｓｙｌ−Ｇｌｙ　−Ａｒｇ−ｐＮ　Ａ　ｌＡｃＯＨ等の
基質を使用すれば、高感度の試薬が製造できる。ここで
、Ｒはアセチル基、α−Ｎ−ベンゾイル基、σ−Ｎ−力
ルポベンゾキシ基、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカフレボニ
ルＭ、ｐ−）Ｊレニンスルホニル基、その他アミノ酸Ｎ
端保護基を表わす。

−例を示すと、ライセード０．０４ｍｆｆにＭｇＣ１１
ｆｉ１．５μｇおよび合成基質（Ｎ　−ｔｅｒＬ−ブト
キシカルボニル−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−ｐ−−−ト
ロアニリド）４．０　μｇを加えて凍結乾燥することに
よって製造することができる。この凍結乾燥品に０゜２
Ｍ　　Ｔｒｉｓ−ＨＣ（２緩衝液（ｐＨ８，０）Ｏ，１
ｍ＋２および検体Ｑ　、　ｌ　ｍＱを加えて３７℃、３
０分間加温する時、エンドトキシンのみと反応し、黄色
を呈する。また、ゲル化法、比濁法、比濁時間分析法の
ためのＬＡＬ試薬は、ライセー）Ｑ、１．ｍ１２にＭｇ
Ｃｆｆｚ　　ｔｏ、ｏμｇを加えて凍結乾燥することに
よって製造することができる。この試薬を参考例１−１
，２−１，２−２と同様にして測定するとき、エンドト
キシンのみと反応する。

〈産業上の利用可能性〉 以上述べたとおり、本発明のＧ因子活性化阻害剤は、Ｌ
ＡＬと組合わせることにより、エンドトキシン特異的Ｌ
　Ａ　Ｌ−Ｔｅｓｔを提供し、エンドトキシンの存在の
有無が明確でない感染症、敗血症を疑われている臨床検
体を測定するときに特に有用であり、真のダラム陰性菌
感染症（エンドトキシンア）を的確に判別出来る利点に
加えるに、従来のＬ　Ａ　Ｌ−Ｔｅｓｔを併用すること
により真菌感染症を判別出来ることから、感染菌タイプ
の早期判定による該感染菌への適切な治療薬剤の選択、
処置、並びにその治療効果の解析を可能とし、本発明の
阻害剤を含むキットの提供は診断、医療等医学の進歩に
多大の寄与が期待できる。

【図面の簡単な説明】

第１図は市販カードランの分子篩（ｃ　ｐ　ｃ）分画パ
ターンであり、 第２図は第１図中Ｎｏ、４４〜４６画分の再クロマト分
画パターンである。 第 ］ 図 両分番号 ０，５ｍｌ　／画分） 第２図 両分番号 ロ、５ｆｆｉｌ／画分）

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、式 ▲数式、化学式、表等があります▼（１） で示される（１→３）−β−Ｄ−グルコシド構造単位が
   連続して２〜３７０個結合したポリ−（１→３）−β−
   Ｄ−グルコシド構造部分を少なくとも１つ含有するポリ
   グリコシドを有効成分とするカブトガニ・アメボサイト
   ・ライセートＧ因子活性化阻害剤。 ２、ポリ−（１→３）−β−Ｄ−グルコシド構造部分が
   、式（ I ）で示される（１→３）−β−Ｄ−グルコシ
   ド構造単位が連続して３〜３１０個結合したものからな
   る請求項１記載の阻害剤。 ３、ポリ−（１→３）−β−Ｄ−グルコシド構造部分が
   、式（ I ）で示される（１−３）−β−Ｄ−グルコシ
   ド構造単位が連続して４〜１８０個結合したものからな
   る請求項１記載の阻害剤。 ４、ポリグルコシドが分子量３４２〜１，６３８のラミ
   ナリオリゴ糖である請求項１記載の阻害剤。 ５、ポリグルコシドが分子量１，８００〜３，２５８の
   ラミナリデキストリンである請求項１記載の阻害剤。 ６、ポリグルコシドが平均分子量２，０００〜６０，０
   ００の（１→３）−β−Ｄ−グルカンである請求項１記
   載の阻害剤。 ７、ポリグルコシドが平均分子量３，０００〜２３，０
   ００のラミナランである請求項１記載の阻害剤。 ８、ポリグルコシドが平均分子量３，０００〜２０，０
   ００のスクレロタンである請求項１記載の阻害剤。 ９、ポリグルコシドが平均分子量５００，０００以下の
   シゾフイランである請求項１記載の阻害剤。 １０、ポリグルコシドが平均分子量１，１００，０００
   以下のレンチナンである請求項１記載の阻害剤。 １１、ポリグルコシドが平均分子量１２，０００以下の
   パン酵母グルカン水可溶物である請求項１記載の阻害剤
   。 １２、ポリグルコシドが平均分子量３３，０００以下の
   リヒエナンである請求項１記載の阻害剤。 １３、ポリグルコシドが平均分子量２００，０００以下
   の大麦β−グルカンである請求項１記載の阻害剤。 １４、ポリグルコシドが平均分子量４０，０００〜２４
   ０，０００の部分カルボキシメチル化（１→３）−β−
   Ｄ−グルカンおよびその金属塩（置換度：０．００３〜
   １．０）である請求項１記載の阻害剤。 １５、ポリグルコシドが平均部分２３，０００以下の部
   分のカルボキシメチル化ラミナランおよびおよびその金
   属塩（置換度：１．０以下）である請求項１記載の阻害
   剤。 １６、ポリグルコシドが平均分子量８０，０００以下の
   部分メチル化（１→３）−β−Ｄ−グルカン（置換度：
   ０．００３〜１．０）である請求項１記載の阻害剤。 １７、ポリグルコシドが平均分子量２３，０００以下の
   部分硫酸化ラミナランおよびその金属塩（置換度：１．
   ０以下）である請求項１記載の阻害剤。 １８、請求項１記載のポリグルコシドの有効量を、カブ
   トガニ・アメボサイト・ライセートに添加することから
   なる該カブトガニ・アメボサイト・ライセート中に存在
   することがあるＧ因子の活性化を阻害する方法。 １９、請求項１記載のポリグルコシドの有効量を含有す
   るエンドトキシンに特異的なリムルステスト試薬。 ２０、請求項１記載のポリグルコシドを、カブトガニ・
   アメボサイト・ライセート１ｍｌ当り少なくとも５０ｎ
   ｇ含有するエンドトキシンに特異的なリムルステスト試
   薬。