JPH02152956A - 隣接基放射性金属キレート生成化合物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は広義において例えば放射性該種金属のような金
属と共に錯体を形成するキレート生成化合物に係わる。

［発明の背景］ 抗体のようなプロティンはこれに金属キレート化合物を
結合させることによって放射性同位体標識を行うことが
できる。キレート生成化合物は放射線診断及び放射線治
療剤の調製に用いられている。

放射性同位体標識されたキレート生成化合物は診断剤と
しても治療剤としても有用である０例えば、同位体ａｇ
ａされたエチレンジアミンテトラ酢酸（ＥＤＴＡ）及び
ジエチレントリアミンペンタアセテート（ＤＴＰＡ）が
腎機能の評価に有用であることをＫ　Ｉｉｎｇｅｎｓｉ
ｉｔｈ等がＪ、　Ｎｕｃｌ、Ｍｅｄ。

２３：３７７　（１９８２）で報告している。同様に、
Ｋａｓｉｎａ等はＪ　、　　ｅｄ、　Ｃｈｅｌ′１２９
：１９３３（１９８６）において有望な腎臓薬としてＮ
２３２ジアミド・ジメルカプチドのテクネチウム・キレ
ートを報告している。

ほかにも診断用の同位体標識キレートと、して次のよう
なものが報告されている。酒石酸塩及びオルト燐酸塩（
Ｍ　ｏｆ　１ｎｓｋｉ等の米国特許第３．’９８７，１
５７号）、プロピレン・アミノ・オキシム（Ｔ　ｒｏｕ
ｔｎｅｒ等の米国特許第４，６１５，８７６号）、ボ、
リヒドロキシ力ルボキシル酸（Ａｄｌｅｒ等の米国特許
第４，０２７゜００５号）、有機３置換３価燐化合物（
Ｄ　ｅａｎ等の米国特許第４，５８２，７（）０号）、
とスーチオセミ力ルバゾン（Ｖｅｄｅｅ等の米国特許第
４．５６４．４７２号）、フォスフオン酸塩配合ゲンチ
シル・アルコール（Ｆａｗｚｉの米国特許第４，２３２
，０００号）−メルカプトアセチルグリシルグリシルグ
リシン（ＭＡＧ３　）（ｅ　　２７：（１）−１１６（
１９８６）におけるＦｒｉｔｚｂｅｒｇ等の報告）、メ
ルカプトカルボキシル酸（Ｗｉｎｃｈｃｌｌ等の米国特
許第４，２３３，２８５号）、チオサツカライド（Ｋ　
ｕｂｉａｔｏｗｉｃｚ等の米国時第４，２０８、３９８
号）、ホモシスティン及び；１；モジスティンアミド誘
導体（Ｂ　Ｙｒｎｅ等の米国特許第４，５７１，４３０
号）、メタロチオネイン（’ｒｏｌＩｌａｎのヨーロッ
パ出願０４／１０／８４０１３７４５７　　Ａ　Ｚ　）
　、イソニトリル（Ｊ　ｏｎｅｓ等の米国特許筒４，４
５２．７７４号）、及びイミドジフォスフォネート（ｓ
　ｕｂｒａｎａｎｉａｎ等の米国特許筒３，９７４，２
６８号）。

このような化合物の一つのタイプとして、金属を結合で
きる作用基及び担体分子と反応する作用基を有する２官
能キレ一ト生成化合物がある。このタイプの化合物は放
射性核種を例えばプロティン、抗体及び抗体フラグメン
トのようなターゲット固有の生体分子と安定的に結合さ
せることができるだけに積極的に研究されつつある。

放射性金属／キレート／抗体複合体による生体内特定タ
ーゲット組織の診′Ｕｒ造影がＫ　ｈａｗ等によって報
告された（ｍ　２０９：２９５（１９８０））　、同様
に、細胞異常の治療に放射性金属／キレート／抗体複合
体を使用する試みがｃ　ａｎｓｏｗ等の米国特許筒４，
４５４，１０６号に開示されている。

キレート生成化合物への放射性金属挿入の手順は放射性
金属の化学的特性及びキレート生成化合物の化学構造に
応じて異なる。単官能キレート生成化合物に６２官能キ
レ一ト生成化合物にも種々の放射性金属を組込むことが
できる。いかなる放射性金属を選択するかは使用目的や
入手の難易などによって決定される。

一般に、治療剤として使用される放射性金属はα、β、
またはオージェ電子エミッタ、例えば、Ｐｄ、　　　Ａ
ｇ、　　　Ｓｂ％　　Ａｕ、Ａｕ、　　Ｃｕ、　　　Ｒ
ｈ、　　　Ｒｅ、　　　Ｒｅ、２１２Ｂｉなどである６
診断剤としては陽電子まなはγ光子エミッタ系の放射性
金属を使用するのが普通である０例えば、陽電子７放射
＠暦撮影では、Ｓｃ　、　　Ｓｃ　、５２Ｆ、ｅ　’％
　”５ＣＯ及び６８Ｇａを使用することができ、ｒカメ
ラ造影では２°３Ｐｂ、９７　　　　．１９７　　　　
６７　　　　　２０１　　　　　９９ｎＲｕ　　、　　
　Ｈａ　　、　　Ｇａ、　　　　７９％　　　ＴＣ，１
１３″Ｉｎ及び　　Ｉｎを使用するのが普通である。

上記放射性金属の多くは予備処理を施さない限りキレー
ト生成には不適当な酸化状態で提供され９９す る６例えば、　　Ｔｃは過テクネテート（Ｔｃ　０４−
）の形で提供され、キレート生成が起こるためにはもっ
と低い酸化状態まで還元しなければならない、この還元
は過テクネテート／キレート生成剤混合物にアルカリ性
ＥＩＨのＳｎ＋２やジチオナイトのような還元剤を添加
することによって行われるのが普通である。

究極のキレート化合物への放射性金属移転はＦｒｉｔｚ
ｂｅｒｇ等が報告（１９８６）　ｔ、ているように反応
混合物中に不安定な、または弱いキレート生成剤（ＷＣ
Ａ）を使用することによって促進されるこ９ｎ とが多い０例えば、　　Ｔｃの場合、グルコネートのよ
うなＷＣＡによって初期錯体を形成すればよい、　　　
Ｔｃ／グルコネート銘木が迅速に形成され、これによっ
て９９１１Ｔｃの再酸化が著しく抑制される６強いキレ
ート生成剤（ＳＣＡ）の存在において初期ＴＣ／ＷＣＡ
錯体を加熱すると、強キレート生成剤だけの存在におい
て過テクネテートの還元を行うよりもすぐれた収率で９
９１Ｔｃが強キレート生成剤へ転移する。

Ｐｏ１ｌａｃｋ等は強キレート生成剤間で金属を転移さ
せる問題の運動性を　ｒｉｔｉ　　　Ｊ　　　ｅａｌ。

Ｌ、　３４：２３１　　（１９７６）において取り上げ
ている。彼等はニトリロトリアセテートのような弱キレ
ート生成剤を使用すると転移°率が著しく高ま一番こと
を実証している。

強キレート生成剤への金属転移を促進することは特にキ
レート生成剤をプロティンに結合させる場合に重要であ
る０例えば、Ｃｈｉｌｄｓ等は放射性金属を抗体結合キ
レート生成剤と充分に結合させるのに必要な、むしろき
びしい条件、即ち、ｐＨ４という条件についてＪ　、　
Ｎｕｃｌ、］９１ｅｄ、　２６：２９３−２９９　　（
１９８５）で述べている。即ち、高温または両極端なｐ
Ｈ中に置かれると、キレート生成化合物が結合している
プロティンが変性したり損傷したりするおそれがある。

プロティンまたはこれと結合している強キレート生成剤
への金属転移を容易にするために使用されている弱キレ
ート生成剤の例として、Ｂｕｒｃｈｉｅｌ等はＪ、　Ｎ
ｕ　Ｉ　　ｅｄ、　２７：８９６　　（１９８６）にお
いてポリヒドロキシカルボキシレート及びグリコへ１ト
ネートを挙げ、Ｋａｓｉｎａ等は　ｏ　　　ｔ　　　Ｒ
ａｄｉ、　　　ｅ　　Ｓｎ＋　　２８９−７１（１９８
６）において酒石酸塩を挙げている。ターゲットとする
特定プロティンに接合された強キレート生成剤としては
、Ｃｈｉｌｄｓ等のＤＴＰＡ　（１９８５）；　Ｗ　１
ｅｄｅｒ等の米国特許第４，３５２，７５１号（１９８
２）が開示しているＥ　Ｄ　Ｔ　Ａ　；　’Ｉ’　ｏｌ
ＩＩａｎのヨーロッパ特許出願０１３７４５７　　（１
９８５）が開示しているメタロチオネインＨＡｒａｎＯ
等がＩ　ｎｔ、　Ｊ　　　ｕｃｌ　Ｍｅｄ。

Ｂ　ｉｏ、　１２　：　４２５　　（１９８６）に発表
し、米国特許第４゜２８７、３６２号にも開示されてい
るビス・チオセミカルボシフ　ｉ　Ｆ　ｒｉｔｚｂａｒ
ｇ等（１９８６）が報告しているジアミド・ジメルカプ
チド（Ｎ２　Ｓ２　）などがある。

強キレート生成化合物への放射性金属組込みを容易にす
るために弱キレート生成剤を使用する場合、ある程度苛
酷な条件を採用しない限り充分な動力学的効果は得られ
ない０例えば、Ｔｃ／酒石酸塩錯体から抗体／Ｎ２５２
複合体へのテクネチウム転移は遅く、１時間で所期の放
射性金属移転を達成するには５０℃に加熱しなければな
らないことが知られている。この点についてはヨーロッ
パ特許出願公告第１８８，２５６号を参照されたい、３
７℃以上に加熱すると、抗体のようなプロティンが凝集
するだけでなく、抗体自体が非特異ＷＡ識されることが
多い。

従って、生理的温度またはそれ以下の温度：において放
射性金属と共に迅速に安定キレートを形成できるキレー
ト生成化合物の実現が望まれる。ターゲットである生体
分子との接合に好適な２官能キレート生成剤の放射性同
位体標識は生体活性を維持するような条件下で可能でな
ければならない。

［発明の概要］ 本発明は放射性該種金属へ錯体が形成される第１部位と
放射性核種金層のキレートが形成される第２部位から成
り、錯体がキレートよりも形成速度が速くＪ熱力学的安
定度が低いものであり、放射性該種金属と反応すると第
１部位に先ず錯体を形成し、次いで、放射性該種金属を
第２部位に転移させて安定したキレートを形成するキレ
ート生成化合物を提供する。放射性該種金属は初期錯体
の形成後、化合物を約３７°Ｃまたはそれ以下の温度に
加熱することにより第２部位へ転移させることができる
。

本発明の一実施例では、キレート生成化合物がその第１
部位に、酸素、窒素及び（酸化物の形態を有する）燐か
ら選択され、かつ放射性該種金属と相互作用して錯体を
形成するように配列された２個以上の原子を持つ６本発
明の一実施例では、キレート生成化合物がその第２部位
に硫黄、窒素及び酸素から選択された少なくとも４個の
ドナー原子を含むヘテロ原子鎖を有し、ドナー原子のそ
れぞれと放射性該種金属との間に配位共有結合が形成さ
れることでキレートを生成させる。

本発明の好ましい実施例では、第２部位におけるヘテロ
原子鎖のドナー原子が少なくとも１個の２価硫黄原子と
少なくとも２個の窒素原子を含み、硫黄原子がヘテロ原
子鎖の末端に位置し、２個のドナー原子間に少なくとも
２個の炭素原子が介在するように６乃至７個の炭素原子
が配列されている０本発明の一実施例では、キレート生
成化合物がドナー原子として２個の窒素原子及び２個の
硫黄原子を持つ、キレート生成化合物がその第２部位に
ドナー原子として３個の窒素原子及び１個の硫黄原子を
持つこともある。それぞれの、隨黄ドナー原子に保護基
が結合していることが好ましい。

本発明の一実施例では１個または２個以上の硫黄原子が
これと結合している保護基と共にチオアセタールまたは
へミチオアセタール基を、構成する。

本発明のキレート生成化合物は第１及び第２部位を結合
する可撓２価リンカ−（結合子）を持つ。

このリンカ−は鎖中の２乃至６個のメチレン基またはメ
チレン等個物から成るのが普通である。

キレート生成化合物をプロティンに結合させたい場合、
キレート生成化合物はプロティンと反応してキレート生
成化合物をプロティンと結合させることのできる接合基
をも有する。

本発明は上記キレート生成化合物及び同位体標識すべき
プロティンから成る同位体標識プロティンを調製するた
めのキットをも包含する。このキットをプロティン及び
キレート生成化合物の複合体で構成してもよい、キット
のプロティンは例えば抗体やモノクローナル抗体、また
はそのフラグメントのように、ターゲット部位に固有の
プロティンであればよい。

本発明はまた、本発明の２官能キレ一ト生成化合物をプ
ロティンと反応させてキレート生成化合物／プロティン
複合体を形成し、この複合体を放射性該種金属と反応さ
せてキレート生成化合物の第１部位に放射性該種金属の
錯体を形成し、得られた複合体／放射性該種金属錯体を
３７℃またはそれ以下の温度に保温して第２部位への放
射性該種金属転移を促進することにより放射性該種金属
のプロティン結合キレートを形成する段階から成るプロ
ティン同位体標識方法をも包含する。プロティン同位体
標識方法の他の実施例では本発明のキレート生成化合物
を放射性該種金属と反応させて第１部位に放射性該種金
属の錯体を形成し、この錯体を保温して第２部位への放
射性該種金属転移を促進することによりキレートを形成
し、次いで、この化合物をプロティンと反応させること
によってキレート／プロティン複合体を生成させる。

本発明のキレート生成化合物（または同位体標識キレー
ト）をプロティンに結合させて成る複合体をも開示する
。放射性該種金属は例えば、９９ｎＴｃ、　　　　　Ｒ
ｅ　　％　　　　Ｒｅ、　　　Ｃｕ、　　　Ｃｕ。

２１２　　　　　　２１２　　　。

Ｐｂ、　　　Ｂｉ及び１（Ｌ９Ｐｄから選択される６プ
ロテインとしては、抗体、モノクローナル抗体、または
そのフラグメント、例えばガン細胞に固有のモノクロー
ナル抗体などが考えられる。

本発明はまた、放射性該種金属を上記キレート生成化合
物と反応させて第１部位に錯体を形成し、次いでこの錯
体を３７℃またはそれ以下の温度に保温して、第２部位
への放射性該種金属転移を促進することによりキレート
を形成する放射性該種金属のキレート調製方法をも提供
する。

［詳細な説明］°。

本発明の新規組成物は診断にも治療にも有用な放射性金
属キレートである。キレート生成化合物は放射性該種金
属と不安定な錯体を迅速に形成することのできる第１部
位と、放射性該種金属と安定した配位共有キレートを形
成することのできる第２部位を有する。第１部位に形成
される放射性該種金属錯体は、第２部位に形成される放
射性該種金属キレートに比較して形成速度は速いが熱力
学的安定度は低い、放射性該種金属をこのキレート生成
化合物と組合わせると、迅速に第１部位に錯体が形成さ
れ、次いで放射性金属が第２部位へ転移することにより
熱力学的に安定した放射性金属／キレート錯体を形成す
る。放射性該種金属を第２部位へ転移させるため、先ず
、放射性核種金。

属と錯体を形成したキレート生成化合物を加熱しなけれ
ばならない場合がある。−船釣には化合物を３７℃また
はそれ以下の温度に加熱すれば、不安定な第１部位から
熱力学的に安定な第２部位へ放射性金属を転移させるこ
とができる。第１部位から第２部位への金属移転を促進
するのに必要な温度は以下に詳しく説明するように、キ
レート生成化合物の化学構造などのような要因によって
決定される０本発明の化合物が有する利点は生理的温度
以上に加熱しなくても放射性金属と熱力学的に安定なｊ
ｆｉ？ｋを迅速に形成することにある。このような好ま
しい性質は隣接基効果によるものと考えられる。即ち、
この効果を発揮する化合物は反応全般に関与し、かつ反
ガ性隣接官能基を、含まない化合物よりも迅速な運動特
性を示す隣接官能基を持つ。

本発明の化合物は互いに配位共有結合している弱錯体形
成部位（部位１）と強キレート生成部位（部位２）とを
有する分子であると考えることができる。この化合物を
金属Ｍと混合すると、下式（璽）に従って比較的不安定
な錯体が迅速に形成されると考えられる。

次いで、充分な熱を加える（または場合によって室温に
保温する）と、分子の錯体形成分が強キレート生成分へ
金属をリリーズし、その結果、錯体は下式（２）に従っ
て転移する。

式（２）で表わされる転移の過程で金属が実際に溶液中
にリリーズされるとは考えられず、むしろこの転移は隣
接基効果によって起こるものと思われる。

（隣接基効果に関する　　ｒｇ　　　　　ｅｖ、２，２
９５−３２３　　（１９７３）に掲載されたＷ、Ｐａｇ
ｅの論文、及びＭｅ　Ｇｒａｗ−Ｈｉｌｌ、ＮＹ、刊、
Ｊ　、　ＭａｒＣｔｉ著Δｄｖａｎｃｅｄ　Ｏｒ　ａｎ
ｉｃ　　Ｃｈｅｌｔｒ　、第２版、Ｐ、２８（）を参照
されたい、） 第１部位（部位１）にあって弱錯体を形成する官能基は
一般に酸素、窒素、または（燐酸塩またはフォスフオン
酸塩のような酸化物の形を取る）燗から選択される２個
以上の原子から成る。第１部位に存在する好ましい官能
基は単独またはカルボキシル基と組合わされた水酸基ま
たはアミノ基から成る９本発明の化合物の、第１部位と
して作用する部分は例えばイミノジアセテート、アルキ
ル・フォスフォネート、アルキル・ジフォスフォネート
、Ｎ−グリシン、アミノアルキルポリアセテート、アル
キルヒドロキシカルボキシレート、ポリヒドロキシアミ
ノアルカン、アルキルアミノヒドロキシカルボキシレー
ト、及びアルキルジヒドロキシジカルボキシレートから
選択すればよい。

好ましい置換基Ｑとしては、ポリヒドロキシカルボキシ
レート、グルコネート、酒石酸塩、アルキル・フォスフ
ォネート、アルキル・ジフォスフォネート、グルコンア
ミド゛、Ｎ−グリシン、Ｎ−３−アミノプロパノエート
、α−ヒドロキシ酸ζα−ヒドロキシーｐ−アミノ酸（
例えば、α−ヒドロキシ−β−アミノ・プロパノエート
）、α−ヒドロキシ−α−アミノ酸、デオキシアミノ・
ウロン酸（例えば、６−アミノ−６−ゾオキシーＤ−グ
ルコン酸）、β−ジゲトンまたはそのエノール等個物、
及び下記の基を挙げることができる。

ただし、Ｒは炭素数１乃至５の低級アルキルであり、Ｒ
１７は水素、低級アルキル及びＲｔｓ　−Ｚから選択さ
れ、ここにＲＩＳは２価スペーサ、２は式Ｉに関連して
後述するようにプロティンと反応する基を表わす、第１
部位に初期錯体を形成するのに好適な官能基を有するそ
の他の化合物は上記の基の誘導体をも含む。

本発明のキレート生成化合物は一般に、その第２部位に
、硫黄、窒素及び酸素から選択された少なくとも４個の
ドナー原子を含有するヘテロ原子鎖を含む、これらのド
ナー原子は熱力学的に安定な放射性該種金属／キレート
が第２部位に形成されるように放射性核種との配位共有
結合を形成することができる。ドナー原子は少なくとも
１個の２価硫黄原子及び少なぐとも２個の窒素一原子を
含むことが好ましく、硫黄原子はへテロ原子鎖の一端に
位置することが好ましい、ヘテロ原子のほかに、ヘテロ
原子鎖は少なくとも炭素原子の２個が２個のドナー原子
の間に介在するように配列された６乃至７個の炭素原子
をも含む０本発明の一実施例では、ヘテロ原子鎖中のド
ナー原子は２個の窒素原子と２個の硫黄原子である。こ
のタイプのキレート生成化合物を以下にＮ２　Ｓ２化合
物と呼称する。この化合物中の硫黄原子は多くの場合２
価硫黄であり、窒素原子はそれぞれ独立にアミドまたは
アミン窒素である０本発明の他の実施例では、第２部位
へテロ原子鎖中のドナー原子が３個の窒素原子及び１個
のに黄原子から成る。このタイプの化合物を以下にＮ３
　Ｓ化合物と呼称するが、この化合物の場合、硫黄原子
が２価硫黄であり、窒素原子がそれぞれ独立にアミドま
たはアミン窒素である。

キレート生成化合物の第２部位は分子の強キレ−ト生成
部分である０強キレート生成部分として利用できる放射
性該種金属と強配位共有キレートを形成する化合物とし
て、例えばビス（メルカプトアルカノアミド）アルカン
酸のようなＮ２３２化合物が挙げられる。その例として
は、２．３−ジメルカプトアセトアミドブタノエート、
−ｙにＣ０２−ＤＡＤＳ化合物と呼ばれる４、５−ジメ
ルカプトアセトアミドペンタノエート、１．２−ジチオ
アセトアミドエタン（ＤＡＤＳ）、４．５−ジチオアセ
トアミドペンタン酸、さらには４−チオアセトアミド−
５−チオエチルアミノペンタン酸のようなアミノ・アミ
ド類がある。これらの化合物はＦ　ｒｉｔｚｂｅｒｇの
米国特許第４，４４４，６９０号、ヨーロッパ特許出願
公告第１８８，２５６号及び１９８７年Ｇ月１９日付米
国特許出願第０６５，０１７号に記載されている方法に
よって合成することができる。放射性該種金属と共に強
配位共有キレートを形成するＮ、Ｓ化合物の例としては
、Ｆ　ｒ；ｔｚｂｅｒｇ等が止−１匹ＩＪ４ｅｄ工２７
　：　（１）−１１６　　（１９８６）及びヨーロッパ
特許出願公告第１７３，４２４号に述べている方法によ
って合成されるメルカプトアセチルグリシルグリシルグ
リシン（ＭＡＧ３　）化合物がある。好適なＭＡＧ３化
合物としては、ＭＡＧ３そのもののほかに、末端グリシ
ンがβ、γまたはδアミーン醗で置き換えられた類似の
化合物、例えばメルカプトアセチルグリシルグリシル−
γ−アミノブチレートなども挙げることができる。

第２部位へテロ原子鎖中の各末ｒｆＡ硫黄原子は保護基
と結合していることが好ましい、ＶｆＬ黄丘護基は多様
であり、アシル基、チオ基のほが、以後の処理過程にお
いてチオ基を５Ｌ護する他の化合物ら含まれる。［黄保
護基は硫黄がキレート生成化合物自体の一部である基と
反応するのを阻止することによってキレート生成化合物
を安定化する機能をも果す０例えば、もし保護基を水素
と置き換えると、硫黄が活性エステル・プロティン結合
基をキレート生成化合物から変位させる可能性がある。

硫黄保護基の例としては、ベンゾイル、アセチル、アセ
トアミドメチル、ｍ−またはｐ−フタロイル、チオグリ
コリック、０−カルボキシチオフェノール、エチルチオ
カルボネート、β−メルカプトプロピオニック、テトラ
ヒドロピラニル、エトキシエチル、スルフォネート、ア
セトアミドメチルなどがある。環状２−または多硫化物
を形成してもよい、２硫化物はハロゲン化スルフィニル
、ジニトロチオフェノラート置換メルカプタンを余剰保
護基の存在において鞍やかに酸化することによって得ら
れる。

保護基は種々の方法で除去することができる。

千オニステルは水性アンモニア、ナトリウム・アルコラ
ードのアルカノール２Ｂ　？Ｆｉ、またはその池の公知
の方法で加水分解できる。２流化物はジチオトレイトー
ル、グルタチオン、β−メルカプトエチルアミン、また
はその他の公知試薬で分解することができる。２ＶＸ化
物の分解はポリペプチドと結合する前後に行えばよい。

本発明の一実施例では、硫黄保護基が被保護硫黄原子と
共にチオアセタールまたはへミチオアセタールを構成す
る。これらの硫黄保護基は金属によって促進される酸分
解と考えられる酸性ｐＨ下での放射性同位体標識反応の
過程で変位し、硫黄原子と放射性該種金属の°間に配位
共有結、念が形成される。これら硫黄保護基の利点とし
て、硫黄保護基を除去する段階を特別に設けなくて°も
よい。

従って、同位体標識が容易になり、このことは病院の実
験施設において使用直前にキレート生成化合物を同位体
標識したい場合特に有利である。また、公知の同位体標
識方法また他の硫黄保護基の除去方法において不可避で
あった塩基性ｐＨ及び苛酷な条件が回避される。従って
、キレート生成化合物中の塩基に対して不安定な基が同
位体ａ識の過程に＃Ｊｆｌｋ５で耐えることができる２
塩基に対して不安定な基とは塩基性ｐＨに露出すると破
壊されたり、加水分解されたり、さしなければ悪影響を
受けるようなすべての基を意味する。一般に、この種の
基としてはエステル、ミハエル形アクセプター（例えば
マレイミド）、イソチオシアネートなどが代表的である
。従って、生成したキレートをプロティンと結合させる
前にキレート生成化合物を放射性Ｆ！Ａ識する場合（ｆ
＆述する“プレフォ−ミング方式）、塩基に対して不安
定なプロティン結合基が放射性標識プロティンに耐え得
るから、チオアセタールまたはへミチオアセタール保護
基を使用するのが有利である。他の利点として、これら
の保護基（特にヘミチオアセタール）は比較的容易にキ
レート生成化合物から変位するがら、生理的に許容でき
るＩ）Ｈ及び温度条件の下で本発明のキレート生成化合
物を放射性標識することができる。

本発明に使用できるチオアセタール及びヘミチオアセタ
ールには、酸性条件下で金属放射性同位元素の存在にお
いて保護基が変位する放射性ＩＩＩ識の段階まで硫黄を
非反応状態に維持できるような基が含まれる。一般に、
ヘミチオアセタールＳ保護基は放射性標識反応の過程で
チオアセタール基よりもやや酸に対して不安定であり、
従って、チオアセタールよりは好ましい。

ヘミチオアセタール５１．護基を使用する場合、それぞ
れの被５１．護硫黄原子に別々の保護基が結合され、こ
の保護基が硫黄原子と共にヘミチオアセタール基を構成
する。好ましいヘミチオアセタールは下記一般式で表わ
され、この場合、硫黄原子はキレート生成化合物の硫黄
原子であり、キレート化合物中の各硫黄原子にそれぞれ
別個の保Ｍ−Ｍが結合している。

ただし、Ｒ３は好ましくは２乃至５個の炭素原子を有す
る低級アルキル基でムリ、Ｒ４は好ましくは１乃至３個
の炭素原子を有する低級アルキル基である。あるいはＲ
３−とＲ４が炭素原子及び式中・に示す酸素原子−と共
に、炭素原子及び式中に示す酸素原子のほかに好ましく
は３乃至７個の炭素原子を含む非芳香環を構成していて
もよい　Ｒ５は水素または低級アルキル基を表わし、ア
ルキル基の場合、１乃至３個の炭素原子を有するアルキ
ル基であることが好ましい、このような好ましいヘミチ
オアセタールの例を以下に示すが、これだけに限られる
わけではない。

−−ヒ′ロ　−二 一一′ロビーニレ ′口 キレート生成化合物が２個以上の硫黄ドナー原子を含む
場合、硫黄保護基は同じでもよいし、異なっていてもよ
い、場合によっては、各硫黄ドナー原子に異なる保護基
を結合することによって化合物の合成が容易になること
がある。例えば、２個の硫黄ドナー原子を有するキレー
ト生成化合物なら、１個のへミチオアセタール硫黄保護
基と１個のアセトアミドメチル硫黄保護基を含むことが
できる。

本発明のキレート生成化合物は不安定な錯体が形成され
る第１部位を熱力学的に安定なキレートが形成される第
２部位と結ぶ可ｍ２価リンカ−をも含む、可撓リンカ−
は約２個乃至約６個のメチレン基または共有δ−結合を
有する等価物を含み、かつ、エーテル、チオエーテル、
アミンまたはアミド基のいずれか１つまたは２つ以上の
基を含むことが好ましい、このような長さのメチレン鎖
またはその等価物は隣接基効果を呈する化合物の１次動
力学特性を介して放射性該種金属が第１部位から第２部
位へ転移するのを可能にする上で、長さ及び可視性の点
で好適である。

本発明のキレート生成化合物は、放射性該種金属と共に
強配位共有結合キレートを形成する化合物を、放射性該
種金属と共に迅速に不安定３１ト林を形成する化合物と
共有結合させることによって合成することができる。可
視２価リンカ−を介した化合物の共有結合は化合物の化
字梢造に応じて異なる公知の方法によって達成できる０
例えば、末Ｆ［黄がエトキシエチルまたはアセトアミド
メチルで保護されている２、３−ジメルカプトアセトア
ミドグロパノエートをＮ−ヒドロキシスクシンイミド及
びＮ、Ｎ’　−ｒシクロへキシルカルボジイミドと反応
させればよい、その結果得られる活性エステルを６−ア
ミノ−６−ゾオキシーＤ−グリコン酸と反応させること
により、２．３−ジ（Ｓ−エトキシエチルメルカプトア
セトアミド）−プロパノイル−６−アミノ−６−デオキ
シ−Ｄ−グルコン酸を生成させることができる。同様に
して得られる他の（２官能ではなく）単官能隣接基キレ
ート生成化合物として、４，５−ジ（Ｓ−エトキシエチ
ルメルカプトアセトアミド）−ペンタノイル−６−アミ
ノ−６−デオキシ〜Ｄ−グリコン酸や３，４〜ジ（Ｓ−
エトキシエチルメルカプトアセトアミド）−ブタノイル
−６−アミノ−６−デオキシ−Ｄ−グルコン酸を挙げる
ことができる。

このタイプの化合物は極めて安定な錯体を低速で形成す
る放射性該種金属／キレート・システムを交換するのに
特に有用である。このタイプの化合物としては、２硫化
物形成、酸化など、及びクラスター形成（即ち、２つ以
上のキレート生成化合物と会合する１個の金属原子）が
キレート生成速度を比較的低い速度に抑制するいくつか
のＴｃ及びＲｆ３ジアミド・ジメカプト錯体がある。た
だし、いったん形成されると、このような錯体は極めて
安定である。このような錯体はプロティン（抗体）を標
識するための２官能キレートとして実用に供せられてい
る。しかし、キレート生成速度が低いため、商業的利用
は小分子段階において加熱する（例えば、約７５’Ｃ）
ことによって放射性同位標識キレートを形成し、次いで
このキレートを室温でプロティンに結゛合させることに
−上って低速度の問題を克服することができるいわゆる
プレフォーミング方式（この方式については後述する）
に限られている（　１９８７年６月１９日付米国特許出
願第０６５，０１７号“診断及び治療用の放射性該種金
属ｍｓプロティン”を参照されたい）、この方式は既に
抗体と結合しているキレート生成化合物中に金属が特定
的にＮ２　Ｓ２形キレートを形成するボストフォーミン
グ方式（この方式については後述する）よりもはるかに
複雑である。ＴＣ及びＲｅとプロティンとの非特定的か
つ無制約の結合を回避することができるような応用例で
は標識処理が著しく簡単になり、従って、製品の調製も
容易になる。金属を転移させることによってＮ２３２キ
レート形成を促進するため第１部位で迅速に錯体を形成
させれば、抗体側の非特定結合部位と会合させるよりも
迅速に放射性該種金属をキレート化することができる。

このタイプの化合物は診断または治療用放射性該種金属
のキレート化に特に有用である。放射性９９ｍ　　　　
１８８　　　１８６ 金属として、例えば、　　’Ｉ’ｃ、　　　Ｒｅ、Ｒｅ
、　　Ｃｕ、　　Ｃｕ、　　　Ｐｂ、　　　Ｂｉ、Ｒｄ
、　　Ｒｕ、　　　Ｐｄなどが挙げられる。これらの同
位元素の製法は公知である０例えば９９ｎ＋Ｔｃを調製
するための装置としてモリブデン／テクネチウム・ジェ
ネレータが市販されている。１８６Ｒｅの製法について
は、Ｄ　ｅｕｔｓｃｈ等がＮｔｌＣｌ、Ｍｅｄ　　Ｂ　
ｉｏｌ、、１３二４：４６５−４７７（１９８６）に、
またＶ　ａｎｄｅｒｈｅｙｄｅｎ等が　　ｒ　　ｔ　　
　　　’Ｓ　　、２４：１６６６−１６７３（１９８５
）にそれぞれ開示しており、　　Ｒｅの製法については
Ｂ　１ａｃｈｏｔ等が　ｔ、Ｊｏｆ　　　Ｉｉｅ　　　
ａｄｉａｔ’ｏ　　ａｎｄ　　　　ｏ　　ｓ　　２０：
４６７−４７０（１９６２）に、ま゛なＫ　１ｏｆｕｔ
ａｒ等が　　　　　。

ｉｃａ土−３Ｌ拍υ、、　５：３−１０（１９７０）に
それぞれ開示している、　　　Ｐｄの製法については、
Ｆ　ａｗｗａｚ等が±−反匹五豆■、、２５　：　７９
６（１９８４）に開示しており、２１２Ｐｂ及び２１２
Ｂ、の製法についてはＧ　ａｎｓｏｗ等が　ｌ１ｅｒ、
ｃ　ａｎ　Ｓａｃ　　Ｓ　ｒａ　　Ｓｅｒ、、２４１：
２１５−２１７（１９ｇ４）に、Ｋ　ｏｚａｈ等がＰｒ
　　　ａｔ’　ｌ　　ｃａｄ、５（Ｌ−１」ミＡ、　８
３：　４７４−４７８（１９８６）にそれぞれ開示して
いる。

本発明の放射性該種金属／キレート製法は上記のような
放射性該種金属を本発明のキレート化成化合物と反応さ
せることにより、特に前記式（１）に示したように第１
部位に錯体を形成するというものである。この反応を進
行させるのに好適な条件は当業者にとって公知であり、
キレート化すべき放射性金属の種類やその正原子価に応
じて異なる。

例えば、テクネチウムの製造に際しては、（例えば、公
知の条件下で錫イオンやジチオナイトのような）還元剤
の存在に打いて本発明のキレート生成化合物を過テクネ
チウム酸塩溶液と反応させて第１部位に安定−した塩と
してテクネチウム錯体を形成すればよい、同様に、錫イ
オンま池はジチオナイトで過レニウム酸塩を還元するこ
とによってレニウム錯体を形成することができる０部位
１における　　Ｐｂ、　　　Ｂｉ及び１０９Ｐｄの錯ｆ
氷は放射性該種金属の適当な塩をキレート生成化合物と
反応させるだけで調製することができる。錯体形成の前
に鉛、ビスマス、パラジウム及び銅の同位元素を還元剤
で処理する必要はない、即ち、これらの同位元素は既に
錯体形成に好適な酸化状態にあるからである（例えばＦ
　ｒ＋ｔｚｂｅｒｇ等（１９８６）の論文を参照された
い）、初期錯体が形成されたら、これを適度の温度に保
温することにより第２部位への放射性該種金属の転移を
促進して、前記式（２）に示すように、熱力学的に安定
なキレートを形成する０本発明の好ましい化合物は３７
℃またはそれ以下の温度に加熱するだけで放射性該種金
属が第１部位から第２部位へ転移するような化合物であ
る。

第１部位から第２部位への放射性金属転移を促進するの
に必要な温度はキレート生成化合物の個々の化学構造な
との要因に応じて異なる０例えば、ある種の硫黄保護基
は放射性標識処理の過程で他の基よりも低い温度で変位
する。また、キレート生成化合物が１個または２個以上
のアミド基を含む場合（即ち、後述のように窒素ドナー
原子にカルボキシル基が隣接している場合）、放射性金
属の転移を促進するのにこれよりもやや高い温度が必要
とな器６本発明のキレート生成化合物のうち、室温に保
温するだけで第２部位への放射性金属転移を促進し、放
射性金属を強い、安定し°たキレートの形に結合できる
ものもある。原則として、放射性標識処理反応混合物は
冷却させることなく、第２部位への金属転移を促進する
に充分な時間に亘って周囲温度と約３７℃との中間温度
に保温してキレートを形成する。

本発明のキレート生成化合物はプロティンと反応してキ
レート生成化合物をプロティンと結合させることのでき
る接合基をも含む場合がある。このタイプのキレート生
成化合物を以下に２官能キレ一ト生成化合物と呼称する
。接合基はスペーサ基を介してキレート生成化合物の炭
素または窒素原子と結合しているのが普通である。プロ
ティンの生物学的活性を維持する条件下で水性反応媒中
のプロティンとの接合に好適な種々の官能基を利用する
ことができる。好適な接合基としては、エステル、活性
エステル、ハロメチルケトン、マレイミド基、その池の
ミハエル形アクセプター、遊離アミン、及びイソチオシ
アネート基が挙げられる。プロティンはキレート生成化
合物側のプロティン接合基と反応することのできる（例
えばカルボキシル酸や遊離アミン基のような）種々の官
能基を含む、放射性該種金属、プロティン、キレート生
成化合物の種類、及び接合の条件に応じて好ましい基も
異なる。ここに使用する“水性媒”という表現は完全な
水性媒だけでなく、水性／有機混合媒をも含むことを意
味するが、有機媒の比率は比較的低濃度でなければなら
ない、即ち、ポリペプチドに対する損傷（例えば変性）
を極力抑制できる低濃度でなければならない。

プロティン接合基としては、電子吸引基を含む芳香族エ
ステル、または（置換基が、例えば−ＣＨ２ＣＮ、−Ｃ
Ｈ２−ＣＯ−ＣＨ２ＣＨ３または−ＣＨ２−ＣＯ−Ｃ１
−［３のような電子吸引基である）α−置換メチル・エ
ステルなど種々のエステルを使用することができる。

本発明に使用するのに好ましいエステルはエステルに所
期の安定性と反応性を与えるいくつかの構造上の特徴を
有する１例えば、好ましいエステルは特に水溶液中での
加水分解に関して比教的安定でなければならない、この
ようなエステル二を含むキレート生成化合物を（放射性
標識処理またはグロテイン接合反応のため）水性反応混
合物または水性／有機反応混合物に添加しても、エステ
ル基の加水分解は比較的軽微である。従って、このよう
な耐加水分解エステルはプロティンと反応させるのに特
に有用である。なぜなら、このような反応は有機溶媒中
で起こり易−いプロティンの変性を回避する上で水性条
件・下に行われるのが好ましいからである。また、・エ
ステルは極めて安定性が高いからζあらかじめキレート
生成化合物を調製し、必要な時まで、たとえ温度の高い
条件下に貯蔵してもエステル基がほとんど変質しないと
いう点で有利である。

なお、“活性エステル”とは求核置換反応において高度
の反応性を有するエステルを指す０本発明に使用される
好ましい活性エステルはポリペプチド側の基に対して反
応し易いから、活性エステル含有キレート生成化合物は
この反応によってポリペプチドに結合される。エステル
とプロティン側のくリジン残基に存在する）遊離アミン
基との反応からアミド結合が生成する。これらの活性エ
ステルに含まれるその他の基（即ち、エステルＲ−ＣＯ
−ＯＲ’の一〇Ｒ′部分）は充分に電子吸引性であり、
カルボニルに対するプロティン側求核基の作用を促進す
る。反応速度はエステルがポリペプチド側の求核基と迅
速に反応するような速度であることが好ましい。その場
合、（特に反応が塩基１）Ｈで進行すると）加水分解し
易い遊離の未反応エステル基は短時間だけ水性反応条件
下に置かれる。従って、エステルの加水分解がさらに抑
制され、エステルの所要反応と加水分解との比率が比較
的高くなる。

使用されるエステルとしては。−及びρ−ニトロフェニ
ル、２−クロロ−４−ニトロフェニル、シアノメチル、
２−メルカプトピリジル、ヒドロキシベンズトリアゾー
ル、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド、トリクロロフェニ
ル、テトラフルオロフェニル、２−フルオロフェニル、
４−２刀ルオロフエニル、２．４−ジフルオロフェニル
、０−ニトロ−ｐ−スルフォフェニル、Ｎ−ヒト°ロキ
シフタルイミド、Ｎ、Ｎ−ジエチルアミノ、Ｎ−ヒドロ
キシピロリドン、テトラフルオロチオフェニルなどがあ
る。多くの場合、エステルは活性化フェノール、特にニ
トロ活性化フェノール、及びヒドロキシルアミンをベー
スとする環状化合物である。

ほかにも水酸基化合物が入手可能になれば、これらら本
発明に使用できる。

上述したような安定性及び高い反応性を有する活性エス
テルである２、３，５．６−チトラフルオロフエニルエ
ステルを使用することによって特にすぐれた成果が得ら
れる。プロティンに対して高い反応性を示す他のエステ
ル基にチオフェニルエステルがある。

ニトロ基を含むエテスルを使用することは場合によって
不利である０例えば、上述したように過テクネチウム酸
塩または過レニウム酸塩還元剤として錫イオンを添加す
る場合、錫イオンによってニトロ基が還元される可能性
がある。

プロティン及び／、またはキレート生成化合物を誘導す
ることにより、さらに他の反応性官能基を作用させるか
、またはこれを結合することもできる。この誘導プロセ
スはＰ　１ａｒｃｅ　Ｃｈｅｌｉｃａｌ　ＣＯｎｐａｎ
ｙ、　Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、　Ｉ　ｌ１ｉｎｏｉｓから販
売されているようなリンカ−分子を結合させることによ
っても達成でき（ｐ　１ｅｒｃｅの１９８６−８７　Ｇ
ｅｎｅｒａｌ　　Ｃａｔａｌｏｇ参照）、また、プロテ
ィンの化学的処理、例えば、グリコプロティン抗体の糖
分を過沃素酸塩でグリコール分解させることにより遊離
アルデヒド基を生成させるという方法でも達成できる。

抗体側の遊離アルデヒド基をキレート生成化合物側の遊
離アミンまたはヒドラジン基と反応させればキレート生
成化合物を抗体に結合させることができる（米国特許第
４，６７１，９５８号参照）、抗体または抗体フラグメ
ント側に遊雛スルフヒドリル基を生成させる方法も公知
である。スルフヒドリル基はマレイミド及びアミノ基と
反応する（米国特許第４．６５９，８３９号参照）。

キレート化合物を結合されるプロティンは放・耐性核種
金属の利用態様に応じて多岐に亘る。一般に、プロティ
ンは生体内の所期のターゲット部位にキレート化放射性
核種を供給する。好適なプロティンとしては、レセプタ
ー、ホルモン、リンフ才力イン、成長因子、基質、及び
特に細胞膜レセプターと結合し、錯体が細胞膜に結合し
たままが、内側へ取り込まれるような化合物を挙げるこ
とができる。レセプターには細胞膜レセプター　（モノ
クローナル抗体を含む）抗〜体、酵素、自然発生レセプ
ター、レクチンｔとがある。特に重要なものは免疫グロ
ブリンよ・たはその等個物であり、あらゆる抗体または
そのフラグメント、例えばＦａｂ、Ｆａｂ’　、Ｆ　（
ａｂ’う２、またはＦＶ７ラグメント、またはＴ＋ｌＪ
ｌ胞レセプターなどがこれに含まれる。

なお、ここで“プロティン”という場合、ポリペプチド
、プロティン、またはそのフラグメントがこれに含まれ
る。放射性ａ識されたポリペプチドを所期の診断または
治療に応用するのに必要な生物学的活性を維持できるな
ら、これらのプロティン及びポリペプチドを変性させて
もよい９例えば、所期の抗原との結合が起こるなら、変
性抗体またはそのフラグメントを使用することができる
。また、所期の生物学的活性（例えば特定ターゲット細
胞、組！ａまたは器官とプロティンの結合）が維持され
るなら、（例えば突然変異技術または部分削除によって
）プロティンのアミノ酸シーケンスを変えてもよい、プ
ロティンを変性させる方法としてはこのほかに、プロテ
ィン側の基だけでなくキレート生成化合物側のＺ基とも
反応して、リンク化合物を介してキレート生成化合物を
プロティンと結合させる２官能リンク化合物を結合させ
る方法もある。プロティンは天然の供給源から精製する
か、または合成すればよい（例えば、組換えＤＮＡ技術
または化学的合成方法による）。

所期の部位と結合するプロティンを“ターゲット固有”
のプロティンと呼ぶ０例えば、特定の抗原と結合する抗
体はその抗原にターゲット固有であるという、ただし、
これらのプロティンまたは抗体はターゲット部位に１０
０％固有であることはまれであり、他の組織と°のある
程度の交２差１反応が普通である。ターゲット部位の一
例がガン細胞である６種々のガン細胞と関連のある多く
の抗原が発見されており、このようなガン細胞関連抗原
に固有のモノクローナル抗体も知られている。使用でき
るモノクローナル抗体は多様であり、その例としては、
抗’Ｉ’　Ａ　Ｃ１またはその他のインターロイキン２
レセプター抗体、２５０キロドルｌン・ヒト黒色腫関連
１０チオグリカンに対する９、２．２７及びＮＲ−ＭＬ
−０５，３７−４０？ｆロダルトン・パンカルシツマ・
グリコプロティンに対するＮＲ−ＬｔＪ−１０、ガン胎
児性抗原（ＣＥＡ）及び結腸ガンに対するＮＲ−Ｇｏ−
０２、ＣＥ　Ａ　４：：対するＮＲ−ＣＥ−０１、及び
未確認ガン関連抗原に対する０ＶＢ３などがある。遺伝
子工学または蛋白工学によって得られる抗体も使用でき
る。このような抗体は本発明に使用できる多くのターゲ
ット固有プロティンのうちの掻く限られた例である。

本発明のキレート生成化合物の一例は下記梢遣式Ｉで表
わされる。

■ １）上記式において ａ）　ＴはＶＡ黄保脛基 Ｃ）Ｒｔ乃至ａｌｌで示すＲ基は、Ｃ００Ｈ１ＲＩ４及
びＲｔｓ　−Ｚからそれぞれ独立に選択され、 ■Ｒ７とＲａ　、及びＲ９とＲＩＯの双方が同時にオキ
ソ基を構成せず、 ■Ｒ２とＲ３、及びＲ４とＲ５の双方が同時にオキソ基
を構成せず、 ■Ｒ４、Ｒ５、Ｒ９及びＲＩＯが全体で炭化水素環を形
成してもよく、 ■Ｒ２とＲ３、またはＲ４とＲ５がオキソ基を構成′す
るならＲ６が水素であり：、■Ｒ７とＲｅ　、またはＲ
３とＲＩＯがオキソ基を構成するならａｌｌが水素であ
り、■Ｒ１１がＲｔｓ　　Ｚ、ｔたはＲａ６ならＲ７Ｒ
，、Ｒ，及びＲＩＯがいずれも水素であり、 ■Ｒ６がＲｔｓＺまたはＲ１６ならＲ２Ｒ３、Ｒ４及び
Ｒ５がいずれも水素で あり、 ■Ｒ６及びＲ１１がＣ０ＯＨではあり得な・髪１゛ との条件の下で、前記Ｒ基の２個が同一の炭素原子と結
合するとオキソ基を形成はＴｌ　１．なら他方のＲ１基
は水素である）との条件の下で、Ｒ１２及びＲｔ３は（
１１ＲｏがＳまたはＲｔｓ−Ｚであり、（２１Ｒｏがカ
ルボキソ基を形成し、 ｅ）Ｒｔｉは水素、低級アルキルまたはＲ１８であり、 ｆ）ｎ−１が２回以上成立しないとして、ｎは０または
１であり、 ＩＪ）Ｒｔｓは置換または被置換低級アルキルから選択
された２価のスペーサ、Ｒが炭素数１乃至３のアルキル
から選択されるとして−０−−ＮＨ−−ＮＲ−−ＣＯ　
− −ＣＯ２−−ＣＯＮＨ−−３−−３ Ｏ−−３Ｏ２−−ＣＯ２ＮＨ−１及び −３Ｏ２ＮＲ−から選択された１個または２個以上の基
をも含むことができ、 ｈ）　Ｚは、プロティン、プロティンフラグメト、また
はポリペプチドの生物活性を維持する条件の下で、プロ
ティン、プロティンフラグメント、またはポリペプチド
との反応に好（な官能基であり、 ２）前記化合物は少なくとも１個の置換基Ｒ１５−２を
含み、 ３）基Ｒ１乃至ＲＩ４の少なくとも１つは式（上記式に
おいて、 ａ）１個または２個以上のＲ１７基１よ炭素−または窒
素原子と結合しており、水素、低級アルキルまたはＲｔ
ｓ−Ｚであり、 ｂ）　Ｘは完全置換された炭素、窒素、酸素、Ｓｐ２ま
たはＳｐ炭素、またはアミドよたはイミド窒素であり、 Ｃ）■ｐが２または３ならＸは完全置換炭素、■ｐが４
ならＸは完全１換された炭素、窒素または酸素であり、
しがも３個の Ｘは完全置換炭素であり、 ■ｐが５または６なら、少なくとも３個のＸは完全置換
炭素であり、しかも１ 個のＸだけは３ｐ２またはｓｐ炭素、 アミドまたはイミド窒素である という条件下でｐ　４．を整ｉ＆２，３．４．５または
６であり、 ｄ）　Ｑは第１部位を表わす、） で表わされる置換基Ｒ（１）である。

式Ｉで表わされる化合物において、Ｑは第１部位、即ち
、本発明のキレート生成化合物中の弱錯体形成部分とし
て好適な上述の化合物及び構造から選択すればよい、キ
レート生成化合物をプロティンに結合したい場合には置
換基Ｒ＋ｓ　−Ｚが存在する。Ｚ基は上述したプロティ
ン接合基から選択すればよい。

式Ｉで表わされるキレート生成化合物は硫黄、酸素、及
び窒素から選択された４個のドナー原子を含むヘテロ原
子鎖を第２部位に有する。ドナー原子のうち２個はそれ
ぞれ独立にアミン窒素またはアミド窒素であり、ヘテロ
原子鎖の一端に位置するドナー原子は硫黄であり、他端
に位置するドナー原子はカルボキシル酸素、硫黄または
アミン窒素である。従って、式■で表わされる化合物は
第２部位におけるドナー原子組合わせによって呼称サレ
ル、即チ、ｍ２Ｓｏ、−Ｎ２Ｓ２、及び−下３Ｓと呼称
される。

ドナー原子のほかに、第２部位を構成するヘテロ原子鎖
には６個または７個の炭素原子が含まれる。炭素原子は
へテロ原子鎖中の２個のドナー原子間に少なくとも２個
の炭素原子が介在するように配列されている。２個のド
ナー原子間に２個の炭素原子が介在すると、この２個の
炭８原子が放射性該種金属と共に、勾テロ原子鎖の一部
に５員環を構成する。放射性該種金属と共に最も安定し
たキレートを形成することを可能にする平面的な構造で
あることから、第２部位にはこの５貝環が好ましい、従
って、ｎ＝ｏであるか、またはヘテロに原子鎖が合計６
個の炭素原子を含む時、式Ｉで表わされる最も好ましい
キレート生成化合物が得られる。この実施例はへテロ原
子鎖が放射性該種金属と共に、３個の５員環を構成する
極めて安定なキレート生成化合物を生成させる。

ｎ＝１が一度だけ成立し、ヘテロ原子鎖が合計７個の炭
素原子を含むなら、式Ｉにおいてｎ＝１の場合にも好適
なキレート生成化合物が得られる。

この場合、２個のドナー原子が３個の炭素原子によりて
分離されており、この３個の炭素原子は放射性該種金属
と共に、ヘテロ原子鎖の一部に６ｊｉ環を構成する。従
って、４個のドナー原子と７個の炭素原子が第２部位の
へテロ原子鎖を構成する場合、これらの原子が放射性該
種金属と共に、２個の５員環と１個の６貝環を構成する
。第２部位に２個以上の６員環を含む式Ｉで表わされる
キレート生成化合物は第１部位のドナー原子も放射性該
種金属のキレート化に参加しない限り、その安定性に問
題がある。

式Ｉで表わされるキレート生成化合物は、第１部位を第
２部位と結合さぜる可撓２価リンク基を含む０式Ｉにお
いて（Ｘ）ｏで示すこのリンク基は約２乃至６個のメチ
レンに相当する長さでよく、３７℃またはそれ以下の温
度に加熱することにょうて放射性該種金属の第１部位か
ら第２部位へ分子内転移が可能となる可撓°性を具える
もの、て１なければならない、従って、式■中のＰが２
または３なら、基Ｘは完全置換炭素でなければならない
、その例として−ＣＨ２−ＣＨ２−や−ＣＨ２−ＣＨ２
−ＣＨ２−などが挙げられる。これらの基に含まれる水
素は炭素原子が完全置換されたままであるなら、それぞ
れ独立に他の基で置換されてらよい。

Ｐが４なら、Ｘは完全置換された炭素、窒素または酸素
でなければならない、ただし、少なくとも３個の基Ｘは
完全置換炭素である。倒えば、ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２
−ＣＨ２−−ＣＨ２−０−ＣＨ２−ＣＨ２−−ＣＨ２−
ＣＨ２−ＮＨ−ＣＨ２−などである、完全置換酸素及び
窒素の位置は上記基中のどこでもよく、水素はそれぞれ
独立に他の基で置換されてもよい、ただし、基Ｘは完全
置換されたままでなければならない。

ｐが５または６なら、少なくとも３個の基Ｘは完全ｒ！
を換炭素でなければならない、その他の基は完全置換炭
素、窒素または酸素、うち１個はＳｐ２まなはｓｐ炭素
、アミドまたはイミド窒素であればよい６例えば−ＣＩ
２−ＣＩ２−ＣＩ２−ＣＨ２−ＣＨ２−−ＣＨ２−ＣＨ
２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＩ２−　−ＣＨ２−Ｎ
Ｈ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ
−ＣＯ−ＣＨ２−ＣＨ２−−ＣＨ２−ＮＨ−ＮＨ−ＣＯ
−ＣＨ２−−ＣＨ２−０−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ２
−などが挙げられる。炭素、窒素及び酸素の位置は基中
のどこでらよく、上述したように、１個の基Ｘだけが５
ｌ）２またはＳｐ炭素、アミドまたはイミド窒素ならば
、水素はそれぞれ独立に他の基で置換されていてもよい
。

上述した式Ｉの化合物は実験例として後述するような方
法で調製することができる。当業者ならば、この実験例
を読み、かつ式Ｉで表わされる構造を検討することによ
り、反応式中の試薬を適当に置き換えることで、式ｌで
表わされる多様な化合物を合成することができるであろ
う。

プロティンとの接合に好適な本発明の２官能化金物の例
として、下記式■乃至ＸＩＶで表わされる化合物が挙げ
られる。

ｖｌｌｌ ＸＩＶ 上記式において、記号Ｔ　＊　ＲＯ＋　Ｒ１ｒ　Ｒ８Ｒ
１１、Ｒ１２、Ｒ１３、及びｎが表わす内容は式Ｉの場
合と同じ、ただし、 （ａ）各化合物は少なくとも１個の置換基ＲＩＳ−Ｚ及
び１個の置換基Ｒ１６を含み、 （ｂ）ＲａがＲｌＢまたはＲ１５−Ｚなら、−Ｎ−Ｒ６
に隣接する炭素原子と結合している各Ｒ，基は水素であ
り、 （Ｃ）　Ｒ１１がＬｔａまたはＲＩ５−Ｚなら、−Ｎ−
Ｒ１１に隣接する炭素原子と結合している各Ｒ，基は水
素である。

式■乃至ＩＶで表わされる化合物はジアミドジメルカプ
ト・キレートを含み、このキレートの代表例としては、
５−１−エトキシエチルメルカプトアセチル−γ−（２
，３，５，６−チトラフルオロフエノキシ）−Ｌ−グル
タミル−α−８−アセタアミドメチルーＬ−システイニ
ル−６−アミノ−６−デオキシ−Ｄ−グルコン酸がある
０式ｖ■乃至ＩＸｔ−表わされる化合物は、４−Ｎ−（
Ｓ−１−エトキシエチルメルカプトアセチル）−５−Ｎ
’（インチオシアナートフェネチル）−Ｎ′−β−（Ｓ
−１−エトキシエチル）メルカプトエチルージアミノペ
ンタノイル−６′　−アミノ−６′　−デオキシ−Ｄ−
グルコン酸なと゛のようなモノアーニミノ・モノアミド
・メルカプチドを含む。式Ｘで表わされる化合物は、４
−Ｎ−メチル−Ｎ−β−（Ｓ−１−エトキシエチル）メ
ルカプトエチル−５−Ｎ’　　−＜ｐ−インチオシアナ
ートフェネチル）Ｎ′　−β−（Ｓ−１−エトキシエチ
ル）メルカグトエチルージアミノベンタノイル−６′　
−アミノ−６′　−デオキシ−Ｄ−グツ１コン酸のよう
なジアミノ・メルカプチドを會む、・式ｘＩ乃至ＸＩＶ
　−Ｃ表わされる好ましい化合物は、３−（β−１−エ
トキシエチルツーアセトアミド−４−Ｎ−（β−１−エ
トキシエチル）エチル−Ｎ−（Ｎ’　、Ｎ’　−ジカル
ボキシメチル）−アミノエチルフェニルイソチオシアネ
ートのような芳香族ブリッジを含むＮ２　Ｓ２キレート
である０本発明の好ましい化合物の１つは下記式Ｘｖで
表わされるような化学′ＪｒＰＪ遣を有する。

ｖ ただし、Ｚは活性エステル基またはイソチオシアネート
基を表わす。

式Ｉ乃至ｘｖで表わされるキレート生成化合物はプロテ
ィンを放射性標識するのに有用である。大別して、本発
明の２官能キレート生成剤でプロティンを放射性Ｆｓ識
処理する方法は２通りある。第１の方法はボストフォー
ミング法と呼ばれるものであり、式（３）乃至（５）に
関連して後述する。この方法に従って抗体のようなプロ
ティンを放射性標識処理する際には、先ず２官能キレ一
ト生成化合物を抗体と反応させることによってキレート
生成化合物／抗体複合体を形成し、次いで、放射性該種
金属／キレート／抗体の錯体を形成するのに好適な条件
の下で複合体を放射性該種金属と一混合することにより
、キレートの第１弱結合部位で放射性該種金属の錯体を
形成する。次いでこの゛錯体を約３７℃またはそれ以下
の温度に保温して錯体の分子内再配列を促すことにより
、金属を熱力学的に安定な第２部位へ転移させ、抗体と
結合した安定な放射性核種金ｍ／キレートを生成させる
。

７、ス　　　−≧゛パ゛ ボストフォーミング法に本発明の化合物を利用する場合
の利点の１つとして、プロティンの生物学的活性を維持
する条件下で、熱力学的に安定なキレート化放射性核′
８１金属を高収率で得ることができる。３７℃以下の温
度で安定なキレートを形成できるから、抗体の生物学的
活性を維持して変性や凝集を回避するのに極めて好まし
い、プロティンと複合された熱力学的に安定な金属／キ
レート月俸を形成する公知の方法ではキレート／抗体錯
体への放射性金属転移を促進するため弱また−３よ不安
定式レート生成剤を添加しなければならないことが多い
、このような工夫を用いても、キレート／杭木錯体へ金
属を転移させるためには５０°Ｃ乃至７５℃またはそれ
以上の温度に加熱する必要があり、抗体の生物学活性が
著しく失われる結果となる。

本発明の化合物を使用することの他の利点として、プロ
ティン自体と放射（核種金属との非特異結合が印刷され
る。非賢異結合が好ましくない理由は放射性該種金属が
抗体自体の側の弱放射性該種金属キレート°化部位と結
合することで、患者への投与過程に標識が失われること
にある０本発明の場合、キレート生成化合物の第１錯体
形成部位が抗体側放射性該種金属非特異結合部位を“圧
倒”する、第１部位に形成された錯体は（室温に保温し
たり、加熱したりする過程で）放射性金属を強キレート
生成部位へ転移させることにより、非特異結合の問題を
未然に防ぐ。

レ　　　　−竜ン　　゛ 本発明の２官能キレ一ト生成化合物はプレフォーミング
法によるプロティン放射性標識処理にも好適である。こ
の方法は下記式＋６１．（７１及び（８）によって表わ
される。この方法で抗体のようなプロティンを放射性標
識処理する際には、先ず、放射性該種金属がキレート生
成化合物の第１間詰合部位に迅速に錯体を形成するよう
な条件下で放射性該種金属を本発明のキレート生成化合
物と反応させる。この錯体を形成するのに必要な条件は
ボストフォーミング方法について上述した条件と本質的
に同じである。こうして形成された錯体を適当温度に保
温することによって分子内再配列を惹起させ、放射性該
種金属が最終的にはキレート生成化合物の第２部位に位
置して安定な放射性該種金属／キレートが形成されるよ
うにすればよい、この安定な放射性該種金属／キレート
を、複合に好適な条件下で抗体と混合すると、熱力学的
に安定な放射性金属／キレート／杭木複合体が得られる
。

プレフォーミング法に従って本発明の２官能キレ一ト生
成化合物を使用することの利点の１つとして、多くの公
知化合物を使用した場合よりも低い温度で安定な放射性
該種金属／キレートＢ体を形成することができることが
挙げられる。従って、金属キレート反応混合物をく例え
ば７５°Ｃ程度の）高温に加熱しなくてもよい、このこ
とは活性エステル、マレイミドのようなミハエル形アク
セプタ、活性ハロゲン化物、イソチオシアネートなどの
ような反応性共役結合基が加熱によって分解されるおそ
れがある場合、特に有利である。室温乃至約３７℃の温
度に保温すればよいから病院や臨床実験施設において好
都合である。しかし、本発明の化合物はおそらくは第１
及び第２部位が互いに物理的に結合しているため、放射
性標識処理反応における収率が高い。

放射性該種金属を抗体と結合させる際に以上に述べたプ
レフォーミング法を採用するか、ボストフォーミング法
を採用するかは使用される放射性金属の種類及びその正
原子価に応じて決定される。

好適な結合手順は当業者に公知である。

既に述べたように、過テクネチウム酸塩及び過レニウム
酸塩を還元剤と接触させることにより、錯体形成に適し
た酸化状態でそれぞれ９９１Ｒｅ及び１８８Ｒｅを生成
させる。放射性該種金属が再び酸化状態に戻る前に銘木
の形で迅速に結合す°るように、キレート生成化合物を
も含む反応混合物中で過テクネチウム酸塩または過レニ
ウム酸塩を還元剤と接触させればよい、特定のキレート
生成化合物（ｔ、たはこれと結合しているプロティン）
が還元剤との接触で悪影響を受りるような場合に使用で
きる他の方法としては、初期交換銘木を調製する方法が
ある。交換錯体番よ〜別の錯体形成分子（例えば、　　
Ｔｃの場合ならグルコン酸錫、１８８Ｒｅの場合ならク
エン酸錫）の存在において過テクネチウム酸塩または過
レニウム酸塩を還元して、　　グルコン酸テクネチウム
または１８８り９ｉ エン酸レニウムの交換銘木をそれぞれ形成することによ
って調製する。交換錯１氷を本発明のキレート生成物と
接触させると、放射性該種金属が第１部位へ転移し、究
極的には第２部位においてキレート化状態となる。

被験体である放射性該種金属／キレート／プロティン複
合は放射性金属を必要とする身体部位に応じて静脈内、
動脈内、腹膜内、腫瘍内などの注射によって９Ｍ乳動物
宿主に投与されるのが普通である。−数的には、宿主の
大きさに応じて、診断を目的とする場合には宿主の体重
に対して約０．ＯＯｌ乃至５０　ｕＣｉ　／　ｋｇの割
合で約０．１乃至２　ｎＬを注射する。宿主がヒトなら
ば、その体重に対して約１０−５０　ｒｇｃ　ｉ　７７
０ｋｇ、普通には２５−３５ｍＣ１／７０ｋｊＪが投与
される。放射性該種金属／キレート／プロティン複合本
をヒトの血流内へ注入する場合、聴性入量は比較的多量
となり、例えば、静脈注射で２０乃至３０１Ｌが投与さ
れる。比較的小さい開孔動物（例えばマウス）に対して
は、生体内分布を調べるのが目的なら約１乃至５０ｕＣ
ｉ、遺影が目的なら５００ｕＣｉ以上が投与される。放
射性該種金属／キレート／プロティン複合体を投与した
のち、その目的に応じて、即ち、検出、治療などの目的
に応じて種々の方法で宿主を処理すればよい。

このように本発明の放射性核種金Ｈ，／キレートプロテ
ィン複合体を診断に利用すれば、ヒトまたは咄乳動物宿
主の体内に°特定のターゲット部位が存在するか否かを
検出する方法が確立される。

−数的には、このような複合体を宿主に殺与し、ターゲ
ット部位に化合物が蓄積するのに必要な−９ｎ 定時間だけ待機したのち、　　ＴＣの生体内分布を検出
する。複合体中のプロティン成分及びその他の要因に応
じて診断の手順が異なる。

チク、ネチウム９９１　９９”ｒｃ　）の物理的半減期
は６時間である。血清中での全免疫グロブリンの生物学
的半減期は２４時間（ワイド・レンジ）であり９１ るから、　　Ｔｃ標識抗体の循環からのクリアランスは
９９ｎＴ、の物理的半減期に比較して遅い。

９９′ｌＴＣｌｌ１ｉｌｌＦ　（ａｂ’　）　２７５ダ
メ７　ｈハ全免１１グロブリンに比較して循環時間が短
（（Ｔ　１／２９−２０時間）、病変を効果的に遺影す
るのに充分な腫瘍、バックグラウンド比を得るための腫
瘍位置検出及び９９”ｒｃ　ｔＦｆｔｉ抗体フラグメン
トのバックグラウンド・クリアランスに好適である。Ｆ
ａｂ、Ｆａｂ、Ｆｖのような小さいフラグメントは循環
時間がさらに短＜　（Ｔ　１／２が１８０１ｎ以下）、
９９１ＴＣの物理的Ｔ１／２によく適合するから、造影
用として好ましい、他の放射性該種金属で遺影する場合
の抗体種の選択も放射性該種金属の物理的半減期とその
抗体の循環時間との関係によって決定される。

放射性該種金属を治療に用いる場合、抗体の分子構造選
択はさらに複雑である。物理的及び生物学的半減期のほ
かに、ｇ識抗体が肝癌中に滞留する時間、放射エネルギ
ー、及び特定器官投与に対する全身の寄与が抗体または
フラグメントの最適サイズを決定する鍵となる。モノク
ローナル抗体の場合、抗体の種類も選択に影響する。

１８８Ｒｅはその物理的半減期が１７時間であり、これ
に対してＦ（ａｂ”）２及びＦａＪ＋Ｊｃフラグメント
はｍ瘍位置検出及びバックグラウンド・クリアランスに
好適な血清半減期を有する。　　　Ｒｅ漂識Ｆａｂは骨
髄に対して毒性が低いと考えられるが、その親和力は、
１僅のため２価フラグメントよりも低いから、腫瘍中の
滞留時間が短い、ＪＩｌ瘍からの放射線カウントができ
るだけ長時間持続するように親和力を高めな１８８Ｒｅ
標識Ｆ　ａｂフラグメントが特に有用である。

１８６Ｒｅの物理的半減期は３．６７日であり−、全抗
体またはそのＦ（ａｂ’）２まなはさらに小さいフラグ
メントと併用できる。　　　　Ｒｅよりもβエネルギー
が小さいから、標識抗体は１８８Ｒｅの場合よりも長＜
ＩＩｉ！！瘍中に滞留しなければならない。

１０９Ｐｄの半減期は１４時間である０本発明の放射性
標識処理には全抗体ではなく抗体フラグメントが好適で
あると考えられる。

２１２Ｐｂの物理的半減期は１０．８時間であり、′１
２Ｐｂで標識されたＰａｂ’　、Ｆａｂ、　Ｆｖ　７ラ
ダメントを使用すれば、腫瘍取り込みもバックグラウン
ド・クリアランスもこの半減期内で最大となる。

２１２Ｐｂは崩壊して　　Ｂｉ　となり、　　Ｂｉはα
エネルギーを放射し、その物理的半減期は６０分である
、　　Ｂ１自体は、例えば腹腔的投与のような区分投与
を採用しない限り、実用的な標識ではない、　　Ｐｂは
投与部位において　　Ｂ１に変化するから、β崩壊から
の反跳に耐え得る配位子を利用する必要がある。

６７Ｃｕは物理的半減期が２．４４日であり、治療用と
してこの同位元素で放射性標識するには全抗体またはそ
のＦ（ａｂ’）２　フラグメントがｆｉｆｌである。

放射性該種金属／キレート／杭木複合体の投与は静脈内
または腹腔内、リンパ管内、鞘内、またはその他の体腔
内ルートを介して行えばよい、好ましくは１９８６年１
０月９日付米国特許出願第９１７，１７６号”Ｍｅｔｈ
ｏｄｓ　ｆｏｒ　　Ｉ　ｎｐｒｏｖｅｄ　Ｔａｒｇｅｔ
ｉｎｇ　ｏｆＡｎｔｉｂｏｄｙ、　　Ａｎｔｉｂｏｄｙ
　Ｆｒａｇｍｅｎｔｓ、ａｎｄ　　ＣＯｎｊｕｇａｔｅ
ｓ　Ｔｈｅｒｅｏｆ’に記載されているように、放射性
標識抗体を投与する前に本発明の放射性標識抗体と同じ
エピトープと反応する無標識抗体を投与する。無標識抗
体はあとに投与される放射性標識抗体がターゲットでな
い４１１ｍに存在する交差反応部位と結合するのを抑制
する“無標識特異遮断剤”として作用する。抗体は一般
に特定のターゲット＃ｌＩｍ以外の＃ｌＩａとある程度
交差反応する傾向を有するから、このような交差反応部
位を遮断することが必要である０例えｇｆ″、腫瘍に固
有の、抗原に対して投与される抗体の場合、Ｂ４１１胞
リンパ腫に対する抗イデイオタイプを除いてほとんど°
ずべての抗体が正常（即ち、非腫瘍）組織との間にある
程度の交差反応性を有する。

無標識（コールド）特異遮断剤は好ましくは放射性金属
／キレート／プロティン複合体を投与する約５分乃至約
４８時間前、最も好ましくは°約５分乃至約３０分前に
投与する。このような時間設定は抗体の性質や、ターゲ
ット部位及び交差反応結合部位への到達時間差などのよ
うな要因に応じて異なる。無標識特異遮断剤と放射性該
種金属／キレート／抗体複合体はエピトープが同じなら
、（１識の有無を除いて）同じでもよいし、異なってい
てもよい０本発明の一実施例では、無標識特異遮断剤は
２価形式抗体（例えば、全抗ｔ＋またはそのＦ（ａｂ’
）２フラグメント）であり、放射性ＷＡ識ポリペプチド
は同じ抗体の１価フラグメント（例えば＋、　Ｆａｂ’
　、ＦａｂまたはＦＶフラグメント）である、無標識特
異遮断剤として２価形式抗体を、放射性ＩｊＩＡＭ抗体
として１価形式を使用すれば、２価形式の方が親和力が
大きいなめ遮断剤が遅れて投与される放射性標識抗体水
によって交差反応部位から駆逐されるおそれが極めて小
さくなる。無標識特異遮断剤としてのポリペプチドは患
者の交差反応部位の少なくとら一部と結合できる（即ち
、遮断できる）量だけ投与される。その結果、放射性標
識ポリペプチドと交差反応部位との結合が抑制されてタ
ーゲット部位の診Ｕｔ遺影が改善され、多くの場合、放
射性ｔｌ！抗体の投与量がある程度少なくて済む、投与
量は患者の体重、ポリペプチドの性質などのような要因
に応じて異なるが、−般的にはヒトに対しては約５１ｇ
以上の無標識特異遮断剤が投与される。

米国特許出願第９１７，１７６号にも記絨されているよ
うに、放射性標識ポリペプチドの投与に先立って、゛無
関係”抗体と呼ばれる第２抗体をも患者に投与するのが
好ましい、無関係抗体とは特異的な（例えば、抗原結合
）メカニズムによって患者の体内部位と結合することは
ないが非特異メカニズム（例えば、細別系細胞側のＦｃ
レセプターへの無関係抗体Ｆｃ部分の吸着または結合）
でターゲット及び非ターゲット部位と結合する可能、性
がある抗体である。無関係抗体は患者の非ターゲット部
位のいくつかを遮断し、放射性標識ポリペプチドとこれ
らの非ターゲット部位との非特異結合を軽減する。これ
によってターゲット部位の診断遺影が改善され、放射性
標識抗体の投与量をある程度減らすことができる０例え
ば、現在までの知見としてヒトのいかなる組ＩＩＭ、ｃ
；対しても非特異的な無関係抗体をあらかじ゛め投与す
ることにより、ヒトの患者肝臓及び肝臓への放射性標識
全抗体及びＦ（ａｂ’−）２抗体の非特異的な吸収を効
果的に軽減することができた。

無関係抗体は放射性ＦＩＡｉポリペプチドを投与する５
分乃至４８時間前に投与するのが好ましく、特に１５分
乃至１時間前に投与するのが好ましい０時間設定は抗体
の性質などのような要因に応じて異なる。無関係抗体と
して使用できる好適な抗体が既に数多く知られている９
例えば、無関係抗体として使用でき、ヒトｌｌ１ｌｌＩ
に対して非特異的な多くの抗体が知られている０本発明
の一実施例では、Ｂ細胞リンパ睡イディオタイプに対す
るネズミのモノクローナル抗体く１個人のリンパ腫細砲
に対してのみ特異）を無関係抗体として投与する０本発
明の一実施例では、無関係ポリペプチドが全抗＃、また
はそのＦ（ａｂ’）２フラグメントである。

無関係ポリペプチドはもしこのポリペ１チドが存在しな
ければ放射性標識ポリペプチドの非特異結き（即ち、非
特異メカニズムによる結合）が起こる部位の少なくとら
一部を遮断できる旦だけ投与される。投与量はポリペプ
チドの性質や患者の体重などのような要因に応じて異な
る。一般的には、約１５ｎｇ以上（好ましくは２ＱＯ１
ｇ以下）の無関係抗体が投与される。

本発明は本発明の２官能キレ一ト生成化合物及び放射性
Ｆ！Ｊｉずべきプロティンから成る放射性該種金属／キ
レ−１へ／プロティン複合体を調製するためのキットを
も含む、プロティンは放射性標識された形で診断または
治療に使用される上記一連のプロテ不ンのうち、ど°れ
でもよい６本、ル明の一実施例では、キットを構成する
プロティンは抗体、好ましくはガンＩＫＪｍに対して特
異的なモノクローンのようなモノクローナル抗体である
０本発明の他の実施例では、本発明のキレート生成化合
物と複合体を形成するプロティンがキットに含まれる。

キレート生成化合物を放射性該種金属で放射性標識し、
キレート化合物をプレフォーミング方式またはボストフ
ォーミング方式でポリペプチドと共役結合させる反応に
使用される試薬らキットに含めることができる。このよ
うなキットは放射性標識されたポリペプチドを反応混合
物からｍ製する手段、及びキットの構成成分を使用して
放射性標識処理されたポリペ１チドを製造するための具
体的な指示書をら含むことができる。この種のキットは
主として病院などのような医学的施設で利用されること
になる。これらの施設は常時的にテクネチウムの同位体
などのような放射性該種金属を容易に取扱うことができ
、レニウム、鈴、ビスマス、パラジウム、銅の同位体は
上述したようにｙＡ製できるから、放射性該種金属をキ
ットに含めるかどうかは任意である。放射性該種金属を
除外すればキットの貯蔵が可能になるのに対して、放射
性該種金属を（独自した構成成分としてまたは放射性標
識されたキレート化合物の形で）含むキットならば、（
特定同位体の半減期に応じて）限られた時間の枠内で使
用しなければならない、さもなければ、放射性同位体の
放射性崩壊のため、放射性標識プロティンの使用目的で
ある診断または治療の効果が減殺される。　　　Ｒｅに
ついては、使用の際に放射性標識を行えば、β粒子放出
に起因する標識抗体の放射線分解減成を回避できる。

本発明のキットはキレート化剤を標識処理するのにいか
なる放射性同位体を使用するかに応じて診断用キットに
もなれば治療用キットともなる。

放射性該種金属を低酸化状態まで還元する必要があれば
（例えば上述したテクネチウムやレニウムの場合）、キ
レート生成化合物によってキレート化すべき特定の放射
性該種金属を、放射性該種金属／キレート錯体を形成で
きる酸化状態まで還元するのに有効な還元剤をもキット
に含めることができる。

２官能キレ一ト生成化合物はグロテインとの複合の前後
に放射性該種金属で放射性標識処理すればよい、プレフ
ォーミング方式に適したキットならば硫黄保護基を含有
する２官能キレ一ト生成化合物とプロティンとを別々に
容器に収容することが好ましい、ボストフォーミング方
式に適したキットの場合、２官能キレ一ト生成化合物と
プロティンを別々の容器に収容して一使用時に複合する
ようにしてもよいが、キレート生成化合物を既にプロテ
ィンと複合した形で提供してもよい、ここに使用しな１
別々の容器”という表現は別々の独立容器（例えばガラ
スびん）だけでなく、同一容器内の物理的に仕切られた
別々のコンパートメントをも意味する０本発明の２官能
キレ一ト生成化合物は既にプロティンと複合させである
方が好ましい 本発明の一実施例では、ボストフォーミング方式で使用
するのに適した診断用キットが概ね使用順に列記する下
記の試薬から成る（特に明記しない限り、これらは別々
の容器に収容されている）。

１、テクネチウム／キレート錯体を形成できるように過
テクネチウム酸塩（９９ＩＴｃ　０４−　）を中性乃至
酸性１）Ｈの低酸化状態まで還元するための還元剤、多
くの好適な還元剤が知られており、例えば、錫イオン（
例えば、塩化錫、弗化錫のような錫塩の形で）、金属鍋
、フォルムアミジン・スルフィン酸、塩化第２鉄、硫酸
第１鉄、アスコルビン酸第１鉄、水素化硼素アルカリ塩
などが挙げられる。好ましい還元剤は錫塩である。

２、上述したような咄乳動物の所期のターゲット器官、
組織、抗原、その他のターゲット部位に対して特異的な
プロティンまたはそのフラグメントと複合された本発明
のキレート生成化合物。

３、所期の放射性該種金属／キレート／プロティン複合
体を反応混合物から精製するための手段。

所期の放射性標識プロティン複合体を反応混合物中の他
の化合物から有効に分離できるなら、公知のプロティン
精製技術のうち任意の技術を利用すればよい、精製段階
では、例えば、サイ、ズまたは電荷の相違に基づいて不
純物から所要の複合体を分離することができる。適当な
精製法の一例として、例えば、陰イオン交換カラムまた
はゲル浸透カラムを利用するカラム・クロマトグラフィ
ーがある０例えば第４アミノエチル・セファデックス（
ＱＡＥ　−５１３ｐｈａｄｅＸ　）カラムやジメチルア
ミノエチル・セフ７デツクス（ＤＥＡＦＪ−Ｓｅｐ・ｈ
ａｄｅｘ　）カラムのような陰イオン交換カラムを利用
するカラム・クロマトグラフィーによってもすぐれた成
果が得られる。除去すべき不純￥ｌＪ（例えば、過テク
ネチウム酸ナトリウムや２酸化テクネチウム）はほとん
ど例外なく負電荷を帯びているから、正荷電カラムでほ
とんど阻止される。このようにワンステップのカラム精
製法によって精製の目的が達成される。

４、（例えば、Ｍ街液、アルコール、酸性化溶液、その
後述する試薬などのような）プロティン／キレート複合
体を放射性ＷＡ識処理するのに使用される池の試薬は医
学的施設では入手し易いものであるから、キットに含め
るかどうかは任意である。ただし、放射性該種金属／キ
レート／プロティン複合体は医療目的でヒトを含む曲孔
動物に投与されるものであるから、充分な純度及び無菌
性の試薬が使用されることを保証するため、これらの試
薬をキットに含めることが好ましい。

５、放射性標識されていない形でヒトまたは開孔動物に
投与されるポリペプチドの容器をキットに含めるかどう
かは任意である。このポリペプチドは放射性標識処理さ
れるポリペプチドとほぼ同じターゲット部位と反応し、
ターゲットでない組織の交差反応結合部位と放射性標識
ポリペプチドの結合を抑制する。双方のポリペプチドは
同じらのでもよいし、あるいは放射性標識されるポリペ
プチドは例えば無漂織の形で投与されるポリペプチドの
フラグメントであってもよい、無ＷＡ識ポリペプチドは
既に述べたように、所期のターゲット部位（例えば［瘍
）の診断造影を改善できる旦を（放射性標識ポリペプチ
ド投与に先立って）無標識特異ブロッカ−（遮断剤）と
して投与される。

６、放射性標識ポリペプチドが投与されるヒトまたは＋
４１１乳動物の体内の部位に特定メカニズムを介して結
合しないポリペプチドの容器をキラ訃に含めるかどうか
は任意である。このポリペプチドは既に述べたように、
ある種の放射性標識ポリペプチドの非特異吸収を軽減で
きる量を（放射性標識ポリペプチドの投与に先立って）
“無関係”ポリペプチドとして投与される。

［実施例］ 本発明の本質をさらに詳幌に説明するため、いくつかの
具体例を以下（ご示す、たにし、これらの例は本発明の
範囲を制限するものではない。

倒　　■ ジアミドジメルカプト２官能隣接基キレート：・　−Ｄ
−コン　の合成 以下に述べる合成は第１ａ図及び第１ｂ図を参　　で乾
燥させた。蒸発及び結晶の結果、ジペプチド照すること
で特に明らかになるであろう、　　　　　　誘導体Ｎ６
．’３が得られた°。

ム土止二上−一２２（デ」コン（化合物Ｎｏ、３）４−
ジメチルアミノピリジン＜２（１）０１）を含有する１
０　ｍＬの無水ジメチルフォルムアミドにＳ−（アセト
アミドメチルｉＬ−システィン（２（１）ｏｆ）を溶か
した溶液（ＮＯ，１）を塩水／氷浴中で０乃至−５℃に
冷却した。この溶液にあらかじめ冷却したインブチルク
ロロフォルメート（２ａｍｏｌ）を添加し、これをさら
に３０分間に亘って前記温度に保温した。　５　ＩＩＬ
のジメチルフォルムアミドにＮ−（ｔ−ブトキシカルボ
ニルｉＬ−グルタミン酸−γ−ブチル・エステルＮｏ、
２　（２ｍＩｌｏｆ）を溶かした溶液を、反応混合物の
温度が０℃以上にならない速度で添加した。

混合物をさらに１時間に亘ってこの温度に維持し、室温
まで自然上昇させた。溶液を２Ｘ２０＋ｉＬの塩化メチ
レンで抽出し、無水硫酸ナトリウム上−ζ−−ルコン　
（化合物Ｎｏ、５） ■　ＩＱｎＬの無水テトラヒドロフランに化合物Ｎｏ、
３　＜　Ｉ　ｌ１ｌａｌ）を溶かした溶液を、１．１ｍ
ｌ１ｏｌのＮ−しドロキシスクシンイミド及び１．１ｎ
ｈｏｌのＮ。

Ｎ′　−ジシクロへキシルカルボジイミドと共に攪拌し
た。翌朝まで攪拌したのち、沈澱したジシクロへキシル
ウレアを沢過し、Ｐ液を蒸発乾燥させた。残留物を２０
−２５ｍＬの酢酸エチルに溶かし、水で洗滌し、無水硫
酸ナトリウム上で有機層を乾燥させた。蒸発及び結晶の
結果、固体としてスクシンイミデート・エステルが得ら
れた。

■　１：１のアセトニトリル：水混合物に上記エステル
（Ｌｎｎｏｌ）を溶かした溶液に、（Ｋ、　Ｋｅｆｕｒ
ｔ等が　ａｆｆｅｃｔｉｏｎ　Ｃｚｅ　ｈｏｌ　Ｉｏｖ
、　Ｃｈｅｌ、Ｃ姐３．、４４．２５２６　（１９７９
）に発表した方法に従って１．２−０−イソプロピリジ
ン−α−Ｄ−グルコビラノースから調整された）６−ア
ミノ−６−ゾオキシーＤ−グルコン酸Ｎ０１４を添加し
、この混合物を室温で６時間撹拌した。蒸発させたのち
、シリカ・ゲルによるフラッシュ・クロマトグラフィー
によって生成物Ｎ０１５を分離した。

し、室温まで自然上昇させた。溶媒を真空除去し、残留
物を２０１Ｌの酢酸エチルに溶かし、水で洗滌した。有
機層を乾燥させ、蒸発させて化合物Ｎｏ。

６を得た。

一二エノとＬ圧（化合物Ｎｏ、６） （１）１１Ｑ＋の上記酸Ｎｏ、５、無水ジメチルフォル
ムアミド、及び０乃至−５°Ｃに維持された１　！１ｍ
ｏｌのＮ−メチルモルフォリンを含有する５　ｍＬの溶
液に１ｍｏｌのイソブチルクロロフォルメートを添加し
、この混合物を２０分間に亘ってこの温度に維持しな、
この溶液に、２ＩＩＬの（あらかじめＯ乃至−５℃に冷
却した）無水ジメチルフォルムアミドにトリメチルシリ
ルエタノール１ｎｏｌを溶かした溶液を添加し、この溶
液をこの温度で１時間攪拌−Ｌｈ（化合物Ｎｏ、７） 上記エステル（ｌｒｘｏｌ）を（あらかじめ０℃に冷却
した）５ｍｎｏｌ無水トリフルオロ酢酸に溶かし、３時
間攪拌した。この溶液を室温まで自然上昇させ、真空蒸
発させた。工・−チルと共にすりつぶして、トリフルオ
ロ酢酸塩としてのアミノ酸Ｎｏ、７を得た。

一二占ノとＬ±（化合物Ｎｏ、９） 先ず（後述するように）Ｓ−（１−エトキシエチル）メ
ルカプト酢ｆｉＮｏ、１６を調製することによって試薬
Ｎ００８を調製した。

１００１Ｌの無水ＴＨＦに溶かしたＮ−ヒドロキシスク
シンイミド（４，８５ｇ、４２．１ｉｎｏｌ）溶液に５
−（１−エトキシエチル）メルカプト＃酸（５，７６ｇ
、３５．１ｍ１ｏｆ）を混合し、これに、６５　ｎＬの
無水ＴＨＥに１，３−ジシクロへりル力ルポジイミド（
８，７０ｇ、４２．１ｉｎｏｌ　）を溶かした溶液を添
加した。この混合物を室温で２時間、またはＴＬＣ分析
がスクシンイミジル・エステルの完全な形成を指示する
まで攪拌した０次いでこの混合物を一過し、Ｐ液を粘性
残留物となるまで真空濃縮した。残留物を酢酸エチルに
溶かし、塩水で洗滌し、乾燥させた（Ｍｇ　ＳＯ４）、
溶媒を除去したのちに残るオイル状の粗スクシンイミジ
ル・エステルを、酢酸エチル、ヘキサンをカラム溶離剤
として使用するシリカ・ゲルによるフラッシュ・クロマ
トグラフィーによってさらに精製することにより、無色
オイルの形態を呈する５、１ｇの５−１−エトキシエチ
ルメルカプト酢酸スクシンイミジル・エステルＮ０．８
が得られた。

ｌｎ＋ｌｏｌの゛トリエチルア°ミンを含有する、１０
１１Ｌの無水ジメチルフォル・ムアミドに溶かしたＳＯ
０７（１ｍｏ１）の溶液に（１）１０１の５−（１−°
エトキシエチル）メルカプト酢酸スクシンイミデート・
エステルＮｏ、８を添加し、この溶液を周囲温度で３時
間攪拌した。溶媒を真空除去し、残留物を酢酸エチルに
溶かし、水で洗滌した。有ｖ！Ａ層を乾燥させ、かつ蒸
発させ、フラッシュ・クロマ−トゲラフイーによって生
成物を精製することにより生成物Ｎｏ、９を得た。

Ｕ土ま（化合物Ｎ　ｏ、　１０　） ２０１Ｌの無水テトラヒドロフランにＮｏ、９（１１Ｉ
Ｉｏｆ）を溶かした溶液に２．３．５．６−チトラフル
オロフエノール及びＮ、Ｎ’　−ジシクロヘキジルカル
ボジイミドを添加し、この溶液を室温で１０−１２時間
攪拌した。沈澱したジシクロへキシルウレアを一過し、
減圧下で蒸発させることによって溶媒を除去し、残留物
を２Ｏ−３０ｎＬの酢酸エチルに溶かし、水で洗滌した
。有ｉ層を乾燥１、蒸発させ、シリカ・ゲルよるフラッ
シュ・クロマトグラフィーによって生成物Ｎｏ、９を分
離した。

″　　ニーＤ−コン　（化合物Ｎｏ、１１）１０１Ｌの
無水テトラヒドロフランに１ｎｎｏｌの化合物Ｎ　ｏ；
１０を溶かした溶液に３　ｎＬの１Ｍテトラ−ｎ−ブチ
ル弗化アンモニウムを添加し、この溶液を周囲温度で６
−８時間攪拌した。溶媒を蒸発で除去し、フラッシュ・
クロマトグラフィーによって生成物Ｎｏ、１１を分離し
た。

例　　　■ アミン・アミド・ジメルカプト２官能隣接基キレート： Ｎ− −工 ぐ　工 乙土且之上の合成 下記の合成は特に第２ａ図及び第２ｂ図を参照すること
によって明らかになるであろう。

Ｎ−ｔ−シ　ル、ニル− ；工　　・　きＩ；′ン（化合物Ｎｏ、１５）■　　、
　　ｒ、　　ｈｅｌ、、Ｑ：３５２７（１９８４）に掲
載されたＲ、　Ｋ、　０ＩＳｅｎ及びＴ、　ｇｌｅｒｙ
の方法に従って、Ｌ−グルタミン酸−γ−メチル・エス
テルからＮ＝ｔ−ブトキシカルボニル− ミン酸−γ−メチル・エステルＮｏ．１２を調製した。

■　無水テトラヒドロフラン（　０．６８ｉＬ）に化合
物Ｎ　ｏ．　１２　（　　ｉ４３ｎｇ、０．５５１１ｉ
ｏｌ）を溶かした溶液にボラン：　ＴＨ　Ｆ　（　０．
６８１Ｌ、０．６ｆｌｌｎｎｏｌ　）の１．０Ｍｍ液を
添加し、この反応溶液を周囲温度で１時間攪拌したのち
、１０１Ｌのメタノールを添加することによって急冷し
た．次いで反応溶液を蒸発させてオイル（　　１６０１
ｍｇ）を得た．このオイルを７０１Ｌの酢酸エチルに溶
かし、飽和ＮａＨＣＯ３　　（２Ｘ３０１１Ｌ）で洗滌
した．有機層を無水ＭｇＳｏ。

上で乾燥させ、真空蒸発させることにより、無色オイル
状の化合物Ｎｏ．１３（　　１２０ｍｇ，　８８％）を
得た。

■　ピリジン＜８ｉＬ）にＮｏ．１３　（　　１．００
ｇ、４。

０５ｎｌｏ　Ｉ　）を溶かした水冷（０°乃至−５℃）
溶液に塩化Ｐートルエン・スルフォニル（　０．８５１
；ｌ、４。

４５ｕ＋ｏ　ｌ　）を添加し、この温度で翌朝まで攪拌
した。

この反応溶液を塩化メチレン（８０１ＩＬ）で希釈し、
ｐＨ　４．０榎街剤（３ｘ７０ｎＬ）で、さらに飽和重
炭酸塩（４０ｎＬ）でそれぞれ洗滌した．（ピリジンと
の共沸混合物を生成させるため）有機抽出物をトルエン
から繰返し蒸発させることによって褐色粘性オイル状の
トシレートＮ　ｏ．　１４を得、これをそれ以上精製す
ることなく次の段階に使用した。

■　ＤＭＦ　（１．５［、）中にＮａ　Ｈ　（９５１１
（Ｊ、３．７８ｎｉｏｌ）を懸濁させた懸濁液に、無水
ジメチルフォルムアミド（３．０＋ｌＬ）にトシレート
Ｎｏ．１４（　　１．３ｈ）を溶かした溶液を添加した
．反応混合物を１時間に亘うて攪拌し、水’（　４０Ｉ
ＩＬ）で希．釈し、塩化メチレン（　３　ｘ　４０＋ｎ
，　）で抽出した．混合塩化メチレン抽出物を乾燥させ
（Ｍｇ　ＳＯ４−）、蒸発させて黄色オイル（０．６６
！ｌ）を得た．このオイルをシリカ・ゲルによるフラッ
シュ・クロマトグラフィー（酢酸エチル：ヘキサン＝１
１）で精製することにより淡黄色オイルＮ　ｏ．　１５
を得た。

Ｎｏ．１９） ■　次に述べる方法に従って３−　（１−エトキシエチ
ル）メルカプト酢酸Ｎｏ．１６を調製した。

水化ｐ−トルエンスルホン酸（　Ｑ．２４ａ、１．２６
ｎｉｏｌ）を含有するジクロロメタン１２５１１Ｌにメ
ルカプト酢酸（１７．４　ｎＬ、２５０１＋１０１　）
を溶かした溶液を攪拌しながら−１８乃至−２５℃に冷
却した．１２５ｎＬのジクロロメタンにエチル・ビニル
・エーテル（２３．９１Ｌ、２５０（１）１０１　）を
溶かした溶液を上記冷溶液に９０分間に亘って滴下添加
した．この攪拌は−１８乃至−２５℃に維持された温度
でさらに３０分間継続した０次いで、２００１１　Ｌの
ｐＨ７燐酸塩榎街液を添加し、反応混合物を１０乃至１
５分間に亘って撹拌しながら自然に温度上昇させた。次
いで９００１１　Ｌの酢酸エチル及び２００ＩＩＬの水
を含むフラスコに混合物を注入した６層を分離させ、水
性層を酢酸エチルで２度に亘って抽出した。有機層を混
合し、塩水で洗滌し、乾燥させた（ＭＱ　ＳＯ４）、溶
媒を除去したのち、無色オイル状を呈する３１．４９の
５−（１−エトキシエチル）メルカプト酢１１Ｎｏ、１
６が残った（収率７７％）、同定分析の結果は次のとお
りである。Ｉ　ＨＮＭＲ（ＣＤ０ｇ３　）１．１５（ｔ
。

Ｊ＝　７．０Ｈｚ　、３Ｈ）、１．５２（ｄ、Ｊ＝　６
．４Ｈｚ　。

３Ｈ）、３．３６（ｓ、２Ｈ）　、３．６０（ｍ、２Ｈ
）、４．８４（ｑ、　Ｊ＝　６．４Ｈｚ　、　ＩＨ）　
、１１．６５　　（ｓ。

ＩＨ）、この材料はそれ以上精製せずに使用した。

■　６５１１Ｌの（０℃に維持された）無水テトラヒド
ロフランに３．０７ｇの化合物Ｎ　ｏ、　１６を溶かし
た溶液に９３．５　ｌｅのボラン／ＴＨＦ錯体（ＩＭ）
をゆっくり添加した。この混合物を０℃の窒素雰囲気中
で７．５時間に亘って攪拌した０１反応混合物に約５０
０ｎ　Ｌの水をゆっくり添加し、１５分間攪拌した。

この混合物を４０乃至５０℃において臭突濃縮し、水性
残留物を酢酸エチルで抽出した。酢酸ヱナル層を５０１
Ｌの１０％Ｎａ２ＣＯ３で洗滌した。水性層を２Ｘ２５
１１Ｌの酢酸エチルで再び洗滌した。混合有機層を塩水
で洗滌し、乾燥させ、−過し、蒸発させて　１．７ｇの
オイルを得た。このオイルをＨＰＬＣ中で精製して１．
３４ｇの無色オイル状の化合物Ｎｏ、１７を得た。

■　０℃に維持された１ＩＩｉｏｌのトリエチルアミン
を含む５　＋１Ｌの塩化メ′チレンに化合物Ｎｏ、１７
（ｌｉｍｏｌ）を溶かした溶液に塩化メタンスルジオニ
ル（１ｎ１ｖｉｌ）’　＊添加した。この溶液をこの温
度で１時間攪拌した。メシレートＮｏ、１８は不安定で
あるからアミド基置換は単離させないで行った。

上記溶液に１．１＋１（ＩＱＩのｐ−ニトロフェネチル
アミンを添加した。この溶液・をこの温度で２時間撹拌
し、周囲温度に自然上昇させた。室温で翌朝まで攪拌し
たのち、溶液を飽和亜炭酸塩で希釈し、塩化メチレンで
抽出した。混合有機抽出物を塩水で洗滌し、無水Ｍｇ５
Ｏ，上で乾燥させ、蒸発させることによって粘性オイル
状の化合物Ｎ０．１９を得、これをシリカ・ゲルによる
フラッシュ・クロマトグラフィーで精製した。

ｍ亘１！（化合物Ｎ　ｏ、２ｉ　） ■　無水テトラヒドロフラン（５ｉＬ）にＮ−七−ブト
キシカルボニル−β−カルボメトキシエチル・アジリジ
ンＮｏ、１５　（ｌ　ｎｎｏｌ）を溶かした溶液にＳ−
エトキシエチル−Ｎ−（ｐ−ニトロフェネチル）メルカ
プトエチルアミンＮ　ｏ、　１９を添加し、この混合物
を６乃至８時間に亘って還流しな、溶媒を真空除去し、
得られた生成物Ｎｏ、２０である４−Ｎ−（ｔ−ブトキ
シカルボニル）−５−Ｎ’（ｐ−ニトロフェネチル）−
Ｎ′−β−（Ｓ−エトキシエチル）−メルカプトエチル
−ジアミノ吉草酸メチル・エステルを、それ以上精製せ
ずに次の工程に使用した。

■　（５ｉＬのメタノールに（１）１０１溶かした）上
記化合物の溶液に０．７ｉＬの２Ｎ　　ＮａＯＨを添加
し、混合物を室温で翌朝まで撹拌した。この溶液ヲｓｔ
ｍｔ、、０．５Ｎ　　ＨＣ［”　１）Ｈ２−３まで酸性
化した。沈澱した固体Ｎｏ、２１を濾過によって回収し
、シリカ・ゲルによるフラッシュ・クロマトグラフィー
及び結晶化によって精製した。

ζ−〇−レコン　（化合物Ｎｏ、２３）■　１５　ｎＬ
の無水テトラヒドロフランに化合物Ｎｏ、２１　（１１
ＩＩｏｌ）を溶かした溶液を１．１１ｎｏｌのＮ−ヒド
ロキシスクシンイミド及び１．１　ｍ１ｏｌのＮ。

Ｎ′−ジシクロへキシルカルボジイミドと共に撹拌しな
、室温で翌朝まで撹拌したのち、沈澱した固体を濾過し
、この溶液を蒸発させた。残留物を２ｘ２０−２５ｎＬ
の酢酸エチルに溶かし、水で洗滌しな、有機層を無水Ｎ
ａ２ＳＯ４上で乾燥させ、蒸発させた。酢酸エチルから
結晶させて生成物ＮＯ３２２を得た。

■　２０　ｉＬのアセトニトリル：水（４：１）に上記
スクシンイミデートＮｏ、２２エステル（ｌＩｌｆｆｉ
ａｌ）を溶かし、これに１Ｉｌｉｏｌの６−アミノ−６
−ゾオキシーＤ−グルコン酸Ｎｏ４を添加し、混合物を
室温で３時間撹拌した。溶媒を真空中で除去し、残留物
をクロマトグラフ処理して固体状の生成物Ｎｏ、２３を
得た。

加した。混合物を室温で８乃至１０時間撹拌した。

溶媒を蒸発させ、残留物を結晶させ、酢酸エチル（２０
−２０ｎＬ）に溶かしたのち、塩水で洗滌し、無水Ｎａ
２５Ｏ，で乾燥させ、蒸発させてｔ、・−ブチルジメチ
ルシリル誘導体Ｎｏ、２４を得た。

￥ＩＪＮｏ、２４） トリエチルアミン（５ｎＩｌｏｌ）を含有する無水テト
ラヒドロフランに化合物Ｎ　ｏ、２３　（ｉ　ｎ＋ｎｏ
ｌ　）を溶かした溶液に塩化ｔ−ブチルジメチルシリル
を添Ｚ…（化合物Ｎ　ｏ、　２５　） ■　１００ｍｇの硫化Ｐｄ／Ｃ（５％）を含有する５０
　ｍＬのエタノールに化合物Ｎｏ、２４　（１■ａｌ）
を溶かした溶液を４．２ｋ（Ｊ　／ａｄ　（６０ｐｓｉ
）の圧力下でバール・コンバータ中で１５乃至２０時間
に亘ってシェーキングした。セライトで濾過することに
よって触媒を除去し、Ｐ液を蒸発させることによりオイ
ル状のアミン化合物４−Ｎ−（ｔ−ブトキシカルボニル
）−５−Ｎ′　−（ｐ−アミノフェネチル）Ｎ′　−β
−（Ｓ−１−エトキシエチル）メルカグトエチル・ジア
ミノペンタノイル−２’　、３’４’、５”　−テトラ
−０−１−ブチルジメチルシリル−６′　−アミノ−６
′　−デオキシ−Ｄ−グルコン酸を得、これをそれ以上
精製せずに次の工程に使用した。

■　２５１Ｌの塩化メチレンに上記アミン化合物を溶か
した溶液（こチオカルポニルジイミダゾル（１，ＩＴＩ
ＩＩｏｌ）を添加し、混合物を室温で翌朝まで撹拌した
。この溶液を別に用意した２０ＩＩＬの塩化メチレンで
希釈し、水で洗滌した。蒸発と結晶により、固体状のイ
ソチオシアネートＮｏ、２５を得た。

Ｚ放（化合物ＮＯ，２６） ■　化合物Ｎ　ｏ、２５　（１１ＩＩｏｌ　）の溶液を
５　ｎｌ、の無水ｌ−リフルオロ酢酸と共に室温で３乃
至４時間に亘って撹拌した。この反応混合物に（１）４
の水を加え、この混合物を蒸°発させてオイル、状生成
物を得た。この残留物を有機溶媒と共にすりつぶすこと
により、必要な中間生成物５−Ｎ−’＜ｐ−インチオシ
アナートフェネチル）−Ｎ−β−（Ｓ−１−エトキシエ
チル）メルカプトエチル−４，５−ジアミノベンタノイ
ル−６′　−アミノ−６′デオキシ−Ｄ−グルコン酸を
得た。

■　等モル呈のトリエチルアミンを含有する５１Ｌの無
水ジメチルフォルムアミドに上記化合物（ｌｎｎｏｌ）
を溶かした溶液に１．（１）１１０１の５−１＝エトキ
シエチルメルカプト酢酸スクシンイミデート・エステル
を添加し、この混合物を室温で６時間撹拌した。溶媒を
真空除去し、生成物Ｎ　ｏ、２６及びＮ−ヒドロキシス
クシンイミドを含有する残留物を酢酸エチルと共にシェ
ーキングすることにより、未反応ヒドロキシスクシンイ
ミドを除去した。

−過した固形物を分離用液体クロマトグラフィーで精製
して純粋な生成物Ｎｏ、２６を得た。

例　　　■ ジアミノ・ジメルカプト２官能隣接基キレート乙之ユ之
１の合成 下記の合成は第３ａ図及び第３ｂ図を参照することで特
に明らかになるであろう。

１工　　　　１１ １翌２（化合物Ｎ　ｏ、　３１　） ０１０　ｍＬの無水テトラしドロフランにｔ・ブトキシ
カルボニル−し−グルタミン酸−γ−メチル・エステル
Ｎｏ、１２　（１１Ｉｎａｌ）を溶かした溶液に、１．
１ｎｉｏｌのＮ、Ｎ’　−ジシクロへキシルカルボジイ
ミドを添加し、この溶液を翌朝まで撹拌した。

沈澱した固形物を一過し、Ｐ液を蒸発させた。残留物を
酢酸エチルに溶かし、水で洗滌し、無水Ｍｇ５ｏ、で乾
燥させ、蒸発させ、結晶させることにより化合物Ｎｏ、
２７　（Ｎ　−ｔ−ブトキシカルボニル−し−グルタミ
ン酸−（α−トリメチルシリルエステル）−γ−メチル
・エステル）を得た。

■　１０１′ＩＬの無水メチルブオルムアミドに、化合
物Ｎｏ、２７（Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−し−グル
タミン酸−（α−トリメチルシリルエステル）−γ−メ
チル・エステル）（ｌｎｏｌ）を溶かした溶液に３ｉｉ
ｏ１の酸化銀を添加し、混合物を一過し、蒸発乾燥させ
た。残留物をＣＨ２Ｃｇ２に溶かし、水で洗滌し、乾燥
させ、蒸発させて化合物Ｎ　ｏ、２８（Ｎ−ｔ−プトキ
シカルボニ、ルーＮ−メチル−し−グルタミン酸−（α
−″トリメチルシ−リルエステル）−γ−メチル・エス
テル）を得た。

■　１０１Ｌの無水テトラヒドロフランに化合物Ｎｏ、
２８（２ｎｉｏｌ）を溶かした溶液を５　ｍＬの１Ｍテ
トラ−ｎ−ブチル弗化アンモニウムと共に６時間に亘っ
て撹拌した。溶媒を除去し、残留物を水で洗滌し、乾燥
させ、蒸発させることにより、Ｎ−ｔ−ブトキシカルボ
ニル−Ｎ−メチル−Ｌ−グルタミン酸−γ−メチル・エ
ステルを得た。化合物Ｎ　Ｏ，１２からＮ　ｏ、　１３
への転化に関連して述べたのと同様の手順でこの化合物
を生成物４−（ｔ−ブトキシカルボニル−メチルアミノ
）−４−（ヒドロキシメチル）−酪酸メチル・エステル
Ｎｏ、２９に転化した。

■　１ｎｎｏｌの化合物ＮＯ，２９（４−（ｔ−ブトキ
シカルボニル−メチルアミノ）−４−（、ヒドロキシメ
チル）−酪酸メチル・エステル）溶液を５１１Ｌの無水
トリフルオロ酢酸と共に２時間に亘って撹拌し、蒸発乾
燥させた。残留物をエーテルと共にすりつぶすことによ
り、トリフルオロ酢酸塩である４−（メチルアミン）−
４−（ヒドロキシメチル）−酪酸メチル・エステルＮＯ
，３０を得た。

■　無水テトラヒドロフランに化合物Ｎｏ、３０（ｌｎ
ｏｌ）を溶かした溶液をピリジン／５０３１ｉ！１体（
１，１ｎｎｏｌ　）で処理して化合物Ｎｏ、３０のＯ−
スルフォン酸塩を得た。ＴＬＣ分析の結果始発材料の消
失が明らかになったら、溶液を翌朝まで加熱沸騰させる
ことにより、生成物Ｎｏ、３１（Ｎ−メチル−β−カル
ボメトキシエチル・アジリジン）を溶媒除去によって回
収した。

１庄（化合物Ｎｏ、３２） この化合物は化合物Ｎｏ、１５及びＮ　ｏ、　１９から
の化合物２０の調製に関連して上述したのと同様の手順
で化合物Ｎｏ、３１及びＮｏ、１９　（Ｓ　−１−エト
キシエエチルアミン）から調製した。

−−・　　−（化合物Ｎ０．３４） ■　等モル量の化合物Ｎｏ、３２及びＮｏ、１８　（Ｓ
　−エトキシエチル−β−メルカプトエタノール・メシ
レート）（例Ｉ）を１０　ＩＩＬの無水テトロヒドロフ
ラン中で６時間加熱した。溶媒を真空除去し、残留物を
酢酸エチルに溶かし、水で洗滌した。有機層を乾燥させ
、蒸発させて化合物Ｎｏ、３３、即ち、４−Ｎ−メチル
−Ｎ−β−（Ｓ−１−エトキシエチル）メルカプトエチ
ル−５−Ｎ’　−（ｐ−ニトロフェネチル）−Ｎ′　−
β−（Ｓ−１−エトキシエチル）メルカプトエチル−ジ
アミノ吉草酸メチル・エステルを得た。

■　化合物Ｎｏ、２０からＮｏ、２１ヘノ転化（例Ｉ）
に関連して上述したのと同様の手順で上記メチル・エス
テルＮ　ｏ、　３３を加水分解して遊離酸Ｎｏ、３４、
即ち、４−Ｎ−メチル−Ｎ−β−（ｓ−１−エトキシエ
チル）メルカプトエチル−５−Ｎ’　−（ｐニトロフェ
ネチル）−Ｎ′　−β−（Ｓ−１−エトキシエチル）メ
ルカプトエチル−ジアミノ吉草酸を得た。

■　化合物Ｎｏ、２１からＮｏ、２２への転化（例■）
に関連して上述したのと同様の手順で遊離酸Ｎｏ。

３４をスクシンイミデート・エステルＮｏ、３５、即ち
、４−Ｎ−メチル−Ｎ−β−（Ｓ−１−エトキシエチル
）メルカプトエチル−５−Ｎ′−（ｐ−ニトロフェネチ
ル）−Ｎ′　−β−（Ｓ−エトキシエチル）メルカプト
エチル−ジアミノ吉草酸スクシンイミデート・エステル
に転化した。

ル２１−−　　コン　（化合物Ｎｏ、３６）化合物Ｎｏ
、２２からＮ　ｏ、２４への転化（例Ｉ）に関連して上
述したのと同様の手Ｊ（ｒ［で２段階プロセスで化合物
Ｎｏ、３５をＮｏ、３８に転化しな。

０゜３７） 化合物Ｎｏ、２４からＮｏ、２５への転化（例■）に関
連して上述したのと同様の手順で２段階プロセスで化合
物Ｎｏ、３６をＮｏ、３７に転化した。

例　　　■ 芳香族ブリッジを有す°るジアミドジメ、ルカプト２官
能隣接基キレート：　−−８−工　　２ｚ−１）−レコ
ン　（化合物Ｎ　ｏ、　３８　）２１ＬのＩＮ塩酸を含
む１０ｍＬのアセトニトリル中で化合物Ｎ　ｏ、３７　
（１＋１ｌＩＯ＋）を２乃至３時間撹拌して化き物Ｎｏ
、３７の保護基を除き、目標の化合！１！ＪＮ　ｏ。３
８を得た。溶媒を蒸発させたのちＨＰ　Ｌ　Ｃで精製し
、純粋な状態で生成物Ｎｏ、３８を得た。

下記の合成は特に第４ａ図及び第４ｂ図を参照すること
で明らかになるであろう。

Ｓ−−工　　々エ　　−Ｎ−−” エ　　　　　　　　エ　　　ζン（化合物Ｎ　ｏ、　３
９　）Ｓ−エトキシエチル−０−メチル−メルカプトエ
タノールＮｏ、１８　（１ｌｉｏりの溶液（手順につい
ては例■参照）をアミノアセトアルデヒド・ジメチル・
アセタールと共に周囲温度で５乃至６時間撹拌した。こ
の溶液を飽和重炭酸塩で希釈し、塩化メチレンで抽出し
な、この混合有機抽出物を塩水で洗滌し、無水硫酸ナト
リウム上で乾燥させ、真空蒸発させることによって化合
物Ｎｏ、３５を得、これをシソ力・ゲルのフラッシュ・
クロマトグラフィーで精製した。

１０１Ｌの無水ジメチルフォルムアミドに２−クロロ−
４−ニトロアニリンＮｏ、４０　（１１ｌｌＩｌｏｌ）
を溶かした溶液に１．１ｍ１ｏｌの５−（１−エトキシ
エチル）メルカプト酢酸スクシンイミデート・エステル
Ｎｏ、８（例■参照）を添加し、この混合物を周囲温度
で６乃至８時間撹拌した。溶媒を真空除去し、残留物に
水を添加した。この混合物を酢酸エチルで抽出し、水で
洗滌し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、蒸発させて
化合物Ｎｏ、４１を得た。

二五旦べｌＩ２（化合物Ｎｏ、４２） ３−（β−８−エトキシエチル）−アセトアミド−４−
クロロニトロベンゼンＮｏ、４１及びＳ−エトキシエチ
ル−Ｎ−β−ジメトキシエチル−メルカプトエチルアミ
ンＮＯ，３９の等モル量混合物を無水ジメチルフォルム
アミドと共に４乃至５時間に亘って加熱した。溶媒を真
空除去し、残留物を水中に懸濁させた。この溶液を°Ｉ
Ｎ重炭酸ナト勺ヴムでアルカリ性にしたのち、塩化メチ
レンで抽出した。有機層を熱水硫酸ナトリウムで乾燥さ
せ、蒸発させて生成物Ｎｏ、４２を得た。

■　ｌ　　ＩＩＬの２Ｎ　−ＨＣｇを含む５１１Ｌの氷
酢酸で上記生成物〜（１ｍｏｌ）を処理し、室温で４乃
至５時間に亘って撹拌し、蒸発乾燥させた。残留物を酢
酸エチルに溶かし、水で洗滌した。有機層を乾燥、蒸発
させてフォルミル中間体を得た。

■　フォルミル中間体を１０　ｎＬの無水テトラヒドロ
フランに溶かし、０℃に冷却した。テトラヒドロフラン
等モル量のイミノジ酢酸ジメチル・エステルを溶かした
溶液を上記溶液に添加した。０℃で３０分間撹拌したの
ち、３乃至５当量のシアノボロン水素化ナトリウムを部
分添加し、混合物をさらに２時間撹拌し、室温まで自然
上昇させた。

溶媒を真空除去し、残留物を酢酸エチルに溶かした。有
ｖ！Ａ層を水で洗滌し、乾燥、蒸発させ、シリカ・ゲル
・クロマトグラフィーで精製して生成物ＮＯ，４３を得
た。

々　工　　・ニ　ロベン　ン（化合！＄Ｎｏ、４４）２
１Ｌのエタノール及び３　ｍＬの１ＮＮａ。

Ｈに４３　（（１）Ｉｏｌ）を溶かした溶液を室温で翌
朝まで撹拌した。この溶液を減圧下で蒸発させ、再び５
（１）、ノ水に溶かし、ＩＮ　　ＨＣｅで１）Ｈ３−４
まで酸性化した。沈澱した固形物を沢過し、乾燥させて
化合物Ｎｏ、４４を得た。

一工　　　２　エ　　　　　−　　セ　　　　ゝ−工　
　ζエ　　　エ Ｎ− 々　エ　し・　二ｌン（“化合物Ｎｏ、４５）例■で述
べた手順（化合物Ｎｏ、２５から対応のアミノ化合物へ
の還元）に従って還元を行゛つた一０物Ｎｏ、、４６） 例■で述べたのと同様の手１暇でチオカルポニルジイミ
ダゾルを利用してアミノ化合物Ｎｏ、４５をイソチオシ
アネートに転化した。

例　　　Ｖ 放射性源キレートとキレート生成化合物の複合及び同位
体による放射性標識処理 （ａ）５１１（＋のグルコン酸ナトリウム及び０．１ｍ
ｇの５ｎＣｆｆｉ２を含有する　１００ＡＪ、Ｌの水溶
液に５００．ｕＬの９！Ｊｎ、ｒＣＯ４−　　（過テク
ネチウム酸塩）を添加した。室温に１０分間保温してＴ
ｃ／グルコン酸塩錯体を形成したのち、１００μｇの（
１−１０パノール：酢酸　９０：１０に（１）ｇ／ＩＬ
溶液とした）キレート生成化合物、８０μＩ−の０．２
Ｎ　　ＨＣｅ、及び２００μＬのｌ−プロパツールをこ
の順序で添加した。キレート生成化合物は上記例Ｉ乃至
ＩＶにおいて調製された４′Ｉａのキレート生成化合物
Ｎｏ。

１１、　Ｎｏ、２６．　Ｎｏ、３６．及びＮ　ｏ、　４
６のいずれかでよい０反応混合物を１５分間に亘って３
７℃に加熱し、次いで水中で５分間冷却した。上記キレ
ートに１００μＬの重炭酸ｊ！！街液を添加することに
よって溶液のｐＨを約６．０に調整した０次に、４００
μＬの抗体くまたはフラグメント（５ｎｏ／ｎＬ　）　
）を同じ＃Ｉｔ街液に添加した。抗体は（黒色隨に対し
て特異性を有する）ＮＲ−ＭＬ−’０５、（ガン・モノ
クローナル抗体である）ＮＲ−ＬＵ−１０、（ガン胎児
性抗原（ＣＥＡ）及び結腸ガンに対して特異性を有する
）ＮＲ−ＣＯ−０２、または（抗ＣＥＡである）ＮＲ−
ＣＥ−０１と呼称されるモノクローナル抗体（またはそ
のフラグメント）である０反応混合物を必要に応じて３
０分乃至１時間に亘って室温に保温した。１２％ＴＣＡ
を使、用するＩＴＬＣ法（ｕｃｌｅａｒ　　　ｄｔｃｉ
ｎｅ−Ｔｅｃｈｎｏｌ　　　ａｎｄ　　　ｃｈｎ、Ｌ！
ｌＬ！ＪｉＬＬｅｄ、　Ｂ　ｅｒｎｉｅｒ、’　Ｄ　、
、　ＬＯｎＱａｎ、　Ｊ　、、ａｎｄ　ｗｅｔＩｓ、　
Ｌ、、’Ｔ’ｈｅ　　Ｃ，Ｖ、　Ｍｏ５ｂｙ　　ＣＯ、
、　Ｓｔ、Ｌｏｕｉｓ、　ＭＯ，（１９８１）　、　Ｄ
ｌ）、１７２−１７４＞を利用してプロティンに結合す
るキレートの％を測定する。

（ｂ）同様の手順で配位子の１８８Ｒｅキレートを調製
した。クエン酸７５ｎｇ、塩化第１　ｇＪｏ、７５ｎｇ
、ゲンシチン酸０．２５ｎｇ　、ラクトース１００１ｇ
から成る凍結乾燥混合物の入った容器に１８８Ｗ／１８
８Ｒｅ発生装置から得られた３　ＦＬ、１５ｉＣｉの過
レニウム酸ナトリウムを添加した。容器を静かに振って
内容物を混合し、室温で１０分間保温することによって
　１８８Ｒｅ／ク工ン酸塩錯体を形成した。

ＯＪＯｉｇのキレート化剤が入っている別の容器に０、
５０ｎ　Ｌのｉ−プロパツールを添加し、容器を２分間
振って化合物を完全に溶解させた０次いでこの溶液の０
．３ｎ　ＬをＲｅ／クエン酸塩錯体が入っている容器に
移した。反応混合物を１５分間に亘って３７℃に加熱し
、次いで水中で５分間冷却した。上記手順（ａ）で述べ
たのと全く同じ手順で、適量の重炭酸塩榎街液を利用し
て抗体くまたはそのフラグメント）と共に保温した。

いずれの場合にも、抗＃％／キレート複合体の最終的な
精製はこの複合体を５ｅｐｈａｄｅｘ　−Ｇ２５または
ＱＡＥカラムに通すことで達成される。複合体の純度は
被＠動物またはヒトに投与されるまでに９７％以上とす
るのが普通である。

し、　　　　　　八　　　ム　　　　　　　　　）れに
　　９９１１Ｔｃ　　び１８８Ｒｅに　る複合体の調製
： 抗体複合反応はＯ，１ｍｇ（６２μｍ０１）の−キーレ
ート生成化合物、１．１ｎｇのモノクローナル抗＃（Ｎ
＋Ｇ、７．３ｘ１０−１ｍｏｌ　）　、１乃至２　ｍＬ
ノ蒸溜’ジメチルフォルムアミド（キレート生成化合物
の安定化に必要な場合に必要）、及びｐＨ８，５のＯ，
０５Ｍ硼酸塩または０．５Ｍ重炭酸塩緩衝液から成る４
１Ｌの反応混合物中で行った。室温で９０分間撹拌した
のち、反応混合物を遠心分離処理して粒子を除き、上澄
みをゲルー過カラム・クロマトグラフィーで分別した。

カラム溶鍵液を２８０ｎｎでモニターし、モノマー抗体
複合体を含む部分をプールし、Ａｎｉｃｏｎ　Ｗｔ拌槽
中で濃縮した（３０，０００分子盆カットオフ）。

９ｎ ■　　　Ｔｃ酒石酸塩による抗体／キレート生成化合物
複合体のテクネチウム９９ｉ　ｆｉｌ識処理排気された
容器中に収容された０、５１ＩＬの第２酒石酸ナトリウ
ム＜　　１５０ｕ／ｍＬ　）及び０．１１Ｌの塩化第１
錫（１，０ｎｇ／ｎＬエタノール）から成る説気溶液か
ら窒素雰囲気下に酒石酸第１錫キッｌ−を調製した、こ
の酒石酸第１錫キツトに過テクネチウム・ナトリウム０
．５１Ｌ　（約１５１Ｃｉ）を添加し、１０乃至１５分
間に亘って５０℃に加熱した。室温に冷却したのち、メ
チルエチルケトン及び０．０１Ｍ酒石酸ナトリウムｐＨ
７，ｏ溶離剤をそれぞれ利用するＧｅ１ｌａｎ　Ｉ　Ｔ
　Ｌ　Ｃで酒石酸９９１１ＴＣ及び不可溶性９９１′Ｉ
ＩＴＣの品質管理を行った。酒石酸９９１１ＴＣ形成は
典型的には９８−９９％、可溶性９９１Ｔｃｆ１１は０
．１乃至０．２％であった。

脱気した容器に、１００μＬの食塩水、２００μＬの燐
酸ナトリウム（０，２Ｍ、ｐＨ８，０）及び２００μＬ
の抗体／キレート生成化合物複合体（１，９１１！７／
＋１Ｌ）を順次加えた。複合体を加えた直後、２５０μ
Ｌの酒石ｗ１９９″ＴＣ（約３乃至５ｍＣ１）を添加し
、１時間に亘って３７℃に加熱した。プロティンとのテ
クネチウム結合％及び過テクネチウム酸塩形成を、５０
％ＭｅＯＨ：１０％酢酸アンモニウム（１：　１）及び
１−ブタノールをそれぞれ溶離剤として使用したＩＴＬ
Ｃによって測定した。

■　Ｒｅ／クエン酸塩による抗体／キレート生成化合物
複合体のレニウム１８８標識処理同様の手順で１８８Ｒ
ｅ−１ｒレートを調製した。クエン酸７５１９、塩化第
１錫ｏ、ｙｓ＋Ｉｇ、ゲンチシン酸０゜２５１ｇ、及び
ラクトース１０１０１１Ｉから成る凍結乾０燥混合物が
入っている容器に過レニウム酸ナトリウムを添加し、容
器を静かに振って内容物を混合したのち、１０分間に亘
って室温に保温することによって１８８Ｒｅ／ク工ン酸
塩錯体を形成した０反応混合物を１５分間７５℃に加熱
してから５分間に亘って水中で冷却することに−より、
複合体を標識処理するためのＲ１）／クエン酸塩隨木を
調製した。

複合体の標識処理ば■においてＴｃに関連して述べたの
と同様の手順で行った。

例　　　■ 診断及び治療用キット （＾）酷断キット ■　プレフ、オーミング方式 ９９ＩＴＣ／放射性標識プロティン複合体を調製するた
めの試薬を含む診断キットは以下のように使用した。す
べての操作は生成物の滅菌状態が確保されるような条件
下に行った（例えば、可能な限り、滅菌容器及び滅菌試
薬を使用し、試薬は滅菌済みの注射器によって移送した
）、放射性同位元素を導入したのちは適当なシールド手
段を使用した。塩化第１鍋／グルコン酸ナトリウム錯木
（Ｍ　ｅｒｋ　Ｆ　ｒｏｓｓｔ、　Ｃａｎａｄａが乾燥
固形状で販売している５０Ｂグルコン酸ナトリウム及び
１．２ｔＩｇ無水塩化第１ｆｌＪ）が入っている滅菌容
器に１　　ｍＬの注入用滅菌水を加え、内容物が溶ける
まで容器を静かに振った。滅菌したインシュリン注射器
を利用して空の滅菌容器へ０．１１．の上記第１ｇ／グ
ルコン酸塩銘体溶液を注入した。過テクネチウム酸ナト
リウム（Ｄｕ　Ｐａｎｔ、Ｍｅｄｉｐｈｙｓｉｃｓ、　
ＭａｌｌｉｎｃｋｒＯｄｔ、またはＥ、　Ｒ，５ｑｕｉ
ｂｂから市販されている９９Ｍ０／９９ＴＣ発生装置°
から得られる０、７δＩＩＬ、７５−１００ｍＣｉ　）
を添加し、容器に静かに振って内容物を混合し、１０分
間に亘って室温にｉ温することによって９９ＩＩＴＣ／
グルコン酸塩錯体を得た。

９９１′ｒＣ／グルコン酸塩交ｆＡ銘体を得る他の方法
では、５１９のグルコン酸ナトリウム、０．１２Ｌ１ｇ
の無水塩化第１錫、約０．１ｍｇの安定化剤としてのゲ
ンチシン酸、及び約２０１１ｇの充填剤としての一ラク
トースから成る凍結乾燥混合物が入っている容器がキッ
トに含まれる。ゲンチシン酸の量は一定ではなく、約０
．１ｎｇまでは安定化を高めるのに効果釣である。約０
．２＋ｅｇ以上のゲンチシン酸を添加すると所期の反応
が妨げられるおそれがある。ラクトースの量も例えば２
０乃至１００１１ｇの範囲で選択すればよく、凍結乾燥
を助けるのに有効である。容器内のグルコン酸ナトリウ
ム及び塩化第１鍋の量が（上記実施例に比較して）少な
い場合、安定化剤及び充填剤の添加が特に重要である。

凍結乾燥混合物に１　ｍＬの過テクネチウム・ナトリウ
ム（約１００ｎＣｉ＞を直接添加した。容器を静かに振
って内容物を混合し、上述したように保温することによ
って９９１１Ｔｃグルコン酸塩錯体を形成した。

１−１０パノールに本発明のキレート生成化合物０．３
Ｉ１ｇを溶かした溶液を容器に定量注入したのち、Ｎ２
ガス雰囲気中で溶媒を除くことによって０．３ｇ＋ｍキ
レート化剤入りの容器を別に用意し、これをキットの一
部とした。この容器に０．８７＋＋Ｌの１００％１−１
０パノールを加え、容器を約２分間静かに振ってキレー
ト化剤を完全に溶がした１次いで、このキレート他剤７
Ｂ液の０．５８ｉＬを、０．１６１Ｌの氷酢酸１０．２
Ｎ　　ＨＣｇ（２：１４）が入っている容器へ移し、こ
の容器を静かに振った。この酸性化した溶液の０．５＋
１Ｌを、上記９９１Ｔｃ／グルコン酸塩錯体が入ってい
る容器に移し、静かに振って混合してから、３７℃水浴
中で１５分間保温し、０゛Ｃ氷浴へ移して２分間放置し
た。

０、５１′ｌＬの燐酸ｊＪｉｉ緩街食ｊ■水にモノク１
コーナル抗（４Ｆａｂ７ラグメント１　（ｌｎｇを混入
した液が入っている別の容器にｐＨ１０，０の１．０Ｍ
ｆｉ炭酸ナトリウム０．３７＋１Ｌを添加した。Ｆａｂ
フラグメントはモノクローナル杭木を公知の方法でパパ
イン処理することによって生成させた。次いで容器を静
かＱ振っな。

９９］１ＴＣａ識キレートの酸性化溶液が入っている上
記容器を水浴から取出し、０．１１Ｊ−の重炭酸ナトリ
ウム榎街液を添加し、容器を振って内容物を混合した。

これに緩衝された上記抗体溶液を添加し、静かに振って
混合し、２０分間室温に、保温することにより、放射性
！識キレートを抗体と複合させた。

隨イオン交換体Ｄ　Ｅ　Ｋ　Ｅ−Ｓ　ｅｐｔｒａｄｏｘ
またはＱＡ　Ｅ　−Ｓ　ｅｐｈａｄｅｘを充填しである
カラムを利用して複合体を精製した。カラムは次に述べ
るようにして無菌条件下で作成した。５本の１ｎＬＱＡ
Ｅ　−５ｅｏｈａｄｅｘカラムを直列接続して単一のカ
ラムを形成するか、あるいは単一の５ｎＬＱＡＥ−５ｅ
ｐｈａｄｅｘカラムを使用した。カラムを１）Ｈ６゜８
の３７１１　Ｍ烟酸ナトリウム冷夏街液５＋ｇＬで洗滌
した。　　（Ｍ　１ｌｌｉｐｏｒｅから販売されている
）１．２μフイルタをカラムに取付け、１．２μフイル
タに０．２μフイルタを取付けた。さらに、０．２μフ
イルタに無菌の非発熱性２２ゲージ・ニードルを取付け
た。

反応混合物を３１１Ｌまなは５１−注射器に°吸い−Ｌ
げ、溶液から気泡を除いた。ニードルを取外してから注
射器をＱ　Ａ　Ｅ　−Ｓ　ｅｐｈａｄｅｘのフィルタと
は反対側の端部に接続した。カラムのフィルタ端に取付
けである２２ゲージ・ニードルからニードル・キャップ
を取り外し、ニードルの尖端を無菌非発熱性試験管へ押
入した。２分間に亘ってゆっくりと反応混合物をカラム
へ注入した。試験管内に回収された溶離液を廃棄した。

ウラム用端に取付けられ、この時点で空になった注射器
を、（気泡を除去されている）　　７５［ＩＭ　（０，
４５％）塩化ナトリウム溶液５　ＩＬを含む５１１Ｌ注
射器に収替えた。

カラムの他端に取付けであるニードルを無菌の非発熱性
１ｏａｎ、血清容器へ無菌条件下で挿入した。

２分間かけてゆっくり、ＮａＣ１！溶液をカラムに注入
し、溶離液を血清容器に回収した。

線麓カリプレータを使用して血清容器中の総放射能を測
定した。放射性標識抗体の収率は６０％程度が普通であ
った。血清容器の内容物を一無菌、非発熱性の３０ｃｃ
注射器で吸い上げ、ヒト患者に注射するため無菌の０．
９％ＮａＣＱで総容積が３０１Ｌとなるまで希釈しな、
注射に先立ち、０．０１ｉＬ部分標本をインスタント薄
層クロマトグラフィーにかけて品質管理テストを行うの
が普通である。

放射化学的純度が８５％以下なら、ヒト患者に注射して
はならない、しかし、この方法を利」ずれば約９０％乃
至９９％の放射性化学純度が得られるはずである。注射
前に放射能の総量ら測定した。−数的には、１０乃至３
０ｎＣｉがヒト愚者に投与される。

放射性標識Ｆａｂフラグメント（診断用放射性標識抗体
フラグメント）の投手に先立ち、既に述べたように、診
断造影を改善するために無関係抗体及び無標識特異抗体
を患者に投手してもよい、無関係抗体及び無５識特異抗
体はそれぞれ別々の容器に収めてキットに加えられる。

放射性標識抗体フラグメン１−を含めて総ｉ　３０ＩＩ
Ｌのサンプルを患者に静脈注入投与した。この注入は約
５乃至約１５分間で完了した。サングル中の抗体フラグ
メント濃度は０．３３ｎｇ／ｎ　Ｌ、である。

■　ボストフォーミング方式 酒石酸錫キットは真空化した容器の０．５ＩＩＬの第２
酒石酸ナトリウム（１５０１ｇ／ＩＩＬ　）及び０．１
＋１Ｌの塩化第１　ａ　（１，０１／　ＩＬエタノール
）から成る脱気温液から窒素雰囲気中で調製した。酒石
酸第１ｇＪキットに０．５１１しく約１５ｎＣｉ）の過
テクネヂウム酸ナトリウムを添加し、１０乃至１５分間
５０℃に加熱した。室温まで冷却したのち、メチルエチ
ルクトン及びｐＨ７，０のＱ、ＯＩＭ酒石酸ナトリウム
を溶離剤としてそれぞれ使用するＧｅｌｍａｎ　ＩＴＬ
Ｃで９９１ＴＣ／酒石酸塩及び不可溶９９″ＴＣの品質
管９ｍ 環テストを行った。　　　ＴＣ／酒石酸塩の形成率Ｇ１
９８−９９％、　可’ｌｌｊ　９９ＩＩＴｃ　ｆｌｉハ
０．１乃至０．２％テあった。

真空容器に１００μＬの食塩水、２００μＬの燐酸ナト
リウム（０，２Ｍ、　　ｐＨ８，０＞及び２００μＬの
抗体／キレート生成化合物複合体（１，９ｎｇ／　ｎＬ
）を順次加えた。複合物を加えた直後、２５０μＬの９
９１１　Ｔｃ　７酒石酸塩（約３乃至５１Ｃｉ）を添加
し、１時間に亘って３７℃に加熱した。プロティンとの
テクネチウム結合％及び過テクネチウ入：酸塩形成％を
、５０％Ｍｅ　ＯＨ：　１０％酢酸アンモニウム（１：
１）及び１−ブタノールを溶離剤としてそれぞれ使用す
るＩＴＬＣによって測定した。

（Ｂ）治療用キット ■　プレフォーミング方式 同様の手順で１８８Ｒｅキレートを調整した。クエン酸
７５１ｇ、塩化第１ｇｏ、ｚｓす、ゲンチシン酸０゜２
５ｎｇ、及びラクト−久１００ｍ−ｇから成る凍結乾燥
混合物が入っている容器に過レニウム酸ナトリウム（１
８８Ｗ／１８８”Ｒ発生装置から得られる３ＩＩＬ、１
５ｍＣ１）を加え、容器を軽く振って内容物を混合し、
次いで１５分間７５℃に保温し、室温まで冷却すること
によって　１８８Ｒｅ／ク工ン酸塩錯体を形成した。　
０．５０ｎｇのキレート化剤が入っている別の容器に０
．５０　ｍＬのｉ−グロバノールを添加し、容器を２分
間に亘って振って化合物を完全に溶解させな０次いでこ
の溶液の０．３１Ｌを、Ｒｅ／クエン酸塩錯体が入って
いる容器に移し、約１時間室温に保温することによって
所期の１８８Ｒｅの標識キレートを生成させた。

Ｃ＋ａ逆相低圧材料（Ｂａｋｅｒ　　Ｃ１ｇカートリッ
ジ）を内蔵するカラム−を使用して　１８８ＲｅＷＡ識
キレートを精製した。カートリッジをエタノール及び水
でコンディショニングしたのち、サンプルを充填し、２
　ｍＬの水で２回、２１１Ｌの２０％エタノール１０、
ＯＩＭ燐酸塩綬街液で３回、洗滌した０次いでカラムを
真空乾燥し、１．０ＩＩＬのアセトニトリルで２回、溶
離した。

次いで、キレートをモノクローナル抗体のＦａｂフラグ
メントと複合させた。抗体フラグメントの緩衝溶液（５
ｎａ／’ｎＬ、０．５ｉＬ　）を精製１８８Ｒｅ漂識キ
レートに添加し、さらに０．５ＩＩＬの０．５Ｍ炭炭酸
塩型炭酸塩緩街液（ｐ）１９．５０）を添加した。

１５分間に亘って室温で反応を進行させ、次いで２５１
１ｇのし一リジン（０，１ｎＬ）を添加し、さらに１５
分間に亘って室温で反応を持続させた。

５ｅｐｈａｄｅｘ　−Ｇ２５を含むカラムを使用して１
８８Ｒｅ／キレ一ト／抗°体複合体を精糺した０反応混
合物をカラム頂部に装填し、ＰＢＳＭＩＷ４液を使用し
て反応容器を洗滌し、第３及び第”４分画を溶離処理す
ることによって１．２ｎＬの部分サンプルを回収した。

　　　Ｒｅ複合体の純度は通常９７％以上であった。こ
の複合体をさらにＰＢＳで希釈し、被験動物及びヒト被
験に注射する前に放射能を測定した。

■　ボストフォーミング方式 クエン酸７５１ｇ、塩化第１＄ｉ０．７５１１（］、ゲ
ンチシン酸０．２５ｍｇ、及びラクトース１１００ＩＩ
から成る凍結乾燥混合物が入っている容器に（１８８Ｗ
／１８８Ｒｅ発生装置から生成する３　ｎＬ、１５ｎＣ
ｉの）過レニウム酸ナトリウムを添加した。容器を静か
に振って内容物を混合し、１０分間に互って室温に保温
することにより　　Ｒｅ／クエン酸塩錯体を形成した。

この反応混合物を１５分間に亘って７５°Ｃに加熱し、
次いで５分間水中で冷却して、複合体の標識処理に備え
てＲｅ／クエン酸塩錯体を調製した。

配位子／抗体複合体の標識処理はＡ■に述べたのと同様
の手順で行った。

例　　　■ ヒトの腫瘍遺影 本発明の方法に従って９９１ＴＣで放射性標識処理した
抗体フラグメントをヒト患者に注射することにより、体
内の腫瘍部位（使用される抗体に応じて、口腔、肺、結
腸など）を検出した。使用される抗体フラグメントは特
定のターゲットＨＫの抗原に対して特異のモノクローナ
ル抗体のＦ（ａｂ’　＞２　、　Ｆａｂ’　、またはＦ
ａｂフラグメントである。

これらの７ラグメントは標準的な方法によって得られる
（即ち、Ｆ　（ａｂ’　＞２７ラグメントを得るにはモ
ノクローナル抗体をベグシン処理し、Ｆａｂフラグメン
トを得るにはモノクローナル抗体をパパイン処理し、Ｆ
ａｂ’フラグメントを得るにはジチオトレイトールのよ
うな還元剤で処理する）。

各患者に例Ｖにおいて述べた手順で調製しな９９１ＴＣ
／キレ一ト／抗体フラグメント複合体を投与した。放射
性Ｗａ抗体フラグメントはＭ製されており、例Ｖｌ　（
Ａ）■で述べたように品質管理テストが行われている。

放射性標識抗体を注入する約４０分乃至１時間３０分前
に、各患者に滅菌食塩水１２〜２０　ＩＩＬに４１〜５
０１ｇの無関係抗体を溶かし犬参孤液を静脈注入した。

また、放射性Ｂ諏特異抗体の注入と同時または約５分前
に、２０　ｎＬ滅菌食塩水に７．５Ｉ１ｇの無標識特異
抗体を溶かした溶液を静脈注入した。無標識特異抗体は
放射性標識用の抗体と全く同じであり、全抗体または゛
そのＦ（ａｂ′）２フラグメントの形態を取るのが普通
である。無関係抗体はモノクローナルに休−ＮＲ２ＡＤ
であり、これは抗イディオタイアと呼ばれ、唯ひとりの
患者のＢＩＳＩＩＩ胞リンパ腫とだけ結合し、他のヒト
組織とは結合しないネズミＩｇＧ２ａ免疫グロブリンで
ある。

放射性標識抗体フラグメントを含む２０乃至３０　ＩＩ
Ｌの無菌食塩水を各患者に静脈注入した。各患者に投与
される９９＋ｔＴＣ放射性同位元素は１１．４１１Ｃ１
乃至約３０１１Ｃｉである。投与される放射性同位元素
の望ましい上限は３０１１Ｃｉであり、Ｂ瘍の有効な造
影に必要な下限は約１０１１Ｃｉである。投与溶液中の
プロティン総量は２．５Ｉ１ｇ乃至１０ＩＩｇである。

γカメラによる遺影は基準映像を含めて種々の時点に行
われる。即ち、放射性ＷＡ識抗体注入の直後、及び“バ
ックグラウンド”がほとんどクリアされているが放射性
核種が依然として造影可能なレベルにある注入後２０時
間以内の種々の時点に行われる。採取された種々の組織
のそれぞれに集積している放射能の総線量を計算した。

腫瘍部位における放射能と他の組織における放射能との
比率も計算した。特定患者の腫瘍組織における“注入線
量／ｌＩＣ１％“をこの患者から抽出した非腫瘍組織サ
ンプルにおける“注入線量／１１９％”で除算すること
により、各非腫瘍組織サンプルごとの腫瘍／、ＩＩ織比
を求めた。

例　　　■ 生体内分布の調査 ９９ｎ、、Ｃまなは１８８Ｒｅで放射性ＷＡ識処理され
た抗体フラグメントを腫瘍のあるマウスに注射し、Ｈｗ
ａｎｇ等がＣａｎｅｒ　　ｅｓ、、４５：４１５０−４
１５５（１９８５）において報告した方法に従い、注射
の２０時間後に放射性該種金属／−Ｉｒレート／プロテ
ィン複合体の生体内分布を分析した。抗体フラグメント
は上述したモノクローナル抗体の１つ（ＮＭ−ＭＬ−０
５、Ｎ　Ｒ−Ｌ　Ｕ−１０、Ｎ　Ｒ−ＣＯ−０２、また
はＮＲ−ＣＥ−０１）のＦａｂフラグメントである。各
特定組織タイプごとの注入放射能／ｇ％及び注入放射能
の腫瘍／組織比に間してデータを集めた０組織のタイプ
は、尾、腫瘍、皮フ、筋肉、骨、肺、肝臓、肺臓、胃、
甲状島、腎臓、及、び腸である。すべてのマウスにおい
て腫瘍に高い％の注入放射能が集積した。

以上、本発明の好ましい実施例について説明したが、当
業者ならばこの明細書に基づいて種々の変更を試みるこ
とができるであろう、即ち、本発明は上述の実施例とは
異なる態様でも実施でき、本発明の範囲は頭書した請求
の＠囲によってのみ制限される。

【図面の簡単な説明】

第１ａ図及びＭ、ｌｌｂ図は２官能ジアミドジメル力プ
トｇＪ接基キレートの合成過程、第２ａ図及び第２ｂ図
は２官能アミド・アミノ・ジメルカプト１９９接基キレ
ートの合成過程、第３ａ図及び第３ｂ図は２官能ジアミ
ノ・ジメルカプト隣接基キレートの合成過程、８４８図
及び第４ｂ図は芳香族ブリッジを有する２官能ジアミド
ジメルカプト隣接基キレートの合成過程をそれぞれ示す
図である。

Claims (46)

【特許請求の範囲】
1. （１）放射性核種金属の錯体が形成される第１部位と放
   射性核種金属のキレートが形成される第２部位から成る
   キレート生成化合物であって、前記錯体が前記キレート
   よりも形成速度が速く、熱力学的安定度が低いものであ
   り、放射性核種金属を前記化合物と反応させると、第１
   部位の錯体が先ず形成され、次いで放射性該種金属が第
   ２部位に転移してキレートを形成することを特徴とする
   キレート生成化合物。
2. （２）錯体形成後、化合物を保温することによって放射
   性核種金属を第２部位へ転移させることを特徴とする請
   求項第（１）項に記載のキレート生成化合物。
3. （３）化合物を約３７℃またはそれ以下の温度に加熱す
   ることを特徴とする請求項第（２）項に記載のキレート
   生成化合物。
4. （４）第１部位が酸素、窒素、及び酸化物の形態をとる
   燐から選ばれた２個以上の原子から成り、前記原子が放
   射性核種金属と相互作用することによって錯体を形成す
   ることを特徴とする請求項第（１）項に記載のキレート
   生成化合物。
5. （５）第２部位が硫黄、窒素及び酸素から選ばれた少な
   くとも４個のドナー原子を含むヘテロ原子鎖から成り、
   前記ドナー原子のそれぞれと放射性核種金属との間に配
   位共有結合が形成されることでキレートを生成させるこ
   とを特徴とする請求項第（１）項または第（４）項に記
   載のキレート生成化合物。
6. （６）前記ドナー原子が少なくとも１個の２価硫黄原子
   と少なくとも２個の窒素原子を含み、硫黄原子がヘテロ
   原子鎖の末端に位置し、２個のドナー原子間に少なくと
   も２個の炭素原子が介在するように６乃至７個の炭素原
   子が配置されていることを特徴とする請求項第（５）項
   に記載のキレート生成化合物。
7. （７）前記ドナー原子が２個の窒素原子と２個の硫黄原
   子であることを特徴とする請求項第（６）項に記載のキ
   レート生成化合物。
8. （８）前記ドナー原子が３個の窒素原子と１個の硫黄原
   子であることを特徴とする請求項第（６）項に記載のキ
   レート生成化合物。
9. （９）少なくとも１個の硫黄原子がこれに結合されてい
   る保護基と共にヘミチオアセタール基を構成することを
   特徴とする請求項第（６）項に記載のキレート生成化合
   物。
10. （１０）前記第１部位が可撓２価リンカーを介して前記
    第２部位と結合していることを特徴とする請求項第（１
    ）項に記載のキレート生成化合物。
11. （１１）前記リンカーが鎖中の２乃至６個のメチレン基
    から成ることを特徴とする請求項第（１０）項に記載の
    キレート生成化合物。
12. （１２）前記化合物がプロテインと反応することによっ
    てキレート生成化合物をプロテインと結合させることの
    できる接合基をも含み、接合基がスペーサを介してキレ
    ート生成化合物の炭素または窒素原子と結合しているこ
    とを特徴とする請求項第（１）項に記載のキレート生成
    化合物。
13. （１３）構造式： ▲数式、化学式、表等があります▼ で表わされる請求項第（１）項に記載のキレート生成化
    合物であって、 １）上記式において ａ）Ｔは硫黄保護基であり、 ｂ）Ｒ＿０はＳ−Ｔまたはカルボキシル酸素または▲数
    式、化学式、表等があります▼であり、 ｃ）Ｒ＿１乃至Ｒ＿１＿１で示すＲ基は、ＣＯＯＨ、Ｒ
    ＿１＿４及びＲ＿１＿５−Ｚからそれぞれ独立に選択さ
    れ、 ［１］Ｒ＿７とＲ＿８、及びＲ＿９とＲ＿１＿０の双方
    が同時にオキソ基を構成せず、 ［２］Ｒ＿２とＲ＿３、及びＲ＿４とＲ＿５の双方が同
    時にオキソ基を構成せず、 ［３］Ｒ＿４、Ｒ＿５、Ｒ＿９及びＲ＿１＿０が全体で
    炭化水素環を形成してもよく、 ［４］Ｒ＿２とＲ＿３、またはＲ＿４とＲ＿５がオキソ
    基を構成するならＲ＿６が水素であり、 ［５］Ｒ＿７とＲ＿８、またはＲ＿９とＲ＿１＿０がオ
    キソ基を構成するならＲ＿１＿１が水素であり、［６］
    Ｒ＿１＿１がＲ＿１＿５−ＺまたはＲ＿１＿６ならＲ＿
    ７、Ｒ＿８、Ｒ＿９及びＲ＿１＿０がいずれも水素であ
    り、 ［７］Ｒ＿８がＲ＿１＿５−ＺまたはＲ＿１＿６ならＲ
    ＿２、Ｒ＿３、Ｒ＿４及びＲ＿５がいずれも水素であり
    、 ［８］Ｒ＿８及びＲ＿１＿１がＣＯＯＨではあり得ない との条件の下で、前記Ｒ基の２個が同一 の炭素原子と結合するとオキソ基を形成 してもよく、 ｄ）Ｒ＿１＿２及びＲ＿１＿３はオキソ基、Ｒ＿０はＮ
    （これら２個のＲ＿１の一方がＲ＿１＿５−ＺまたはＲ
    ＿１＿６なら他方のＲ＿１基は水素である）との条件の
    下で、Ｒ＿１＿２及びＲ＿１＿３は（１）Ｒ＿０がＳ−
    Ｔまたは▲数式、化学式、表等があります▼ならそれぞ
    れ独立にＲ＿１＿４またはＲ＿１＿５−Ｚであり、（２
    ）Ｒ＿０がカルボキシル基酸素または▲数式、化学式、
    表等があります▼なら、双方でオキ ソ基を形成し、 ｅ）Ｒ＿１＿４は水素、低級アルキルまたはＲ＿１＿６
    であり、 ｆ）ｎ＝１が２回以上成立しないとして、ｎは０または
    １であり、 ｇ）Ｒ＿１＿５は置換または被置換低級アルキルから選
    択された２価のスペーサ、Ｒが炭素数 １乃至３のアルキルから選択されるとして −Ｏ−、−ＮＨ−、−ＮＲ−、−ＣＯ−、 −ＣＯ＿２−、−ＣＯＮＨ−、−Ｓ−、−ＳＯ−、−Ｓ
    Ｏ＿２−、−ＣＯ＿２ＮＨ−、及び−ＳＯ＿２ＮＲ−か
    ら選択された１個または２個以上の基をも含むことがで
    き、 ｈ）Ｚは、プロテイン、プロテインフラグメト、または
    ポリペプチドの生物活性を維持 する条件の下で、プロテイン、プロテイン フラグメント、またはポリペプチドとの反 応に好適な官能基であり、 ２）前記化合物は少なくとも１個の置換基Ｒ＿１＿５−
    Ｚを含み、 ３）基Ｒ＿１乃至Ｒ＿１＿４の少なくとも１つは式▲数
    式、化学式、表等があります▼ （上記式において、 ａ）１個または２個以上のＲ＿１＿７基は炭素または窒
    素原子と結合しており、水素、低級ア ルキルまたはＲ＿１＿５−Ｚであり、 ｂ）Ｘは完全置換された炭素、窒素、酸素、Ｓｐ＾２ま
    たはＳｐ炭素、またはアミドまたはイミド窒素であり、 ｃ）［１］ｐが２または３ならＸは完全置換炭素、［２
    ］ｐが４ならＸは完全置換された炭素、窒素または酸素
    であり、しかも３個の Ｘは完全置換炭素であり、 ［３］ｐが５または６なら、少なくとも３個のＸは完全
    置換炭素であり、しかも１ 個のＸだけはＳｐ＾２またはＳｐ炭素、 アミドまたはイミド窒素である という条件下でｐは整数２、３、４、５ま たは６であり、 ｄ）Ｑは第１部位を表わす。） で表わされる置換基Ｒ＿１＿６である、 上記キレート生成化合物。
14. （１４）Ｑが、イミノジアセテート、アルキルフォスフ
    ォネート、アルキルジフォスフォネート、Ｎ−グリシン
    、アミノアルキルポリアセテート、アルキルヒドロキシ
    カルボキシレート、ポリヒドロキシアミノアルカン、ア
    ルキルアミノヒドロキシカルボキシレート、及びアルキ
    ルジヒドロキシジカルボキシレートから成る群から選択
    されることを特徴とする請求項第（１３）項に記載のキ
    レート生成化合物。
15. （１５）Ｑが、ポリヒドロキシカルボキシレート、グル
    コン酸塩、酒石酸塩、アルキルフォスフォネート、アル
    キルジフォスフォネート、グルコンアミド、Ｎ−グリシ
    ン、Ｎ−３−アミノプロパノエート、α−ヒドロキシ酸
    、α−ヒドロキシ−β−アミノ酸、α−ヒドロキシ−α
    −アミノ酸、デオキシアミノ・ウロン酸、β−ジケトン
    またはそのエノール等価物、 ▲数式、化学式、表等があります▼；▲数式、化学式、
    表等があります▼；▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼；▲数式、化学式、
    表等があります▼；▲数式、化学式、表等があります▼ 及びその誘導体から成る群から選択されることを特徴と
    する請求項第（１３）項に記載のキレート生成化合物。
16. （１６）Ｚが、活性エステル、イソチオシアネート基、
    マレイミド基、ミハエル形アクセプター、アミン基及び
    ハロメチルケトンから成る群から選択されることを特徴
    とする請求項第（１３）項に記載のキレート生成化合物
    。
17. （１７）１個または２個以上の置換基Ｔが、結合してい
    る硫黄原子と共にヘミチオアセタールを構成する保護基
    であることを特徴とする請求項第（１３）項に記載のキ
    レート生成化合物。
18. （１８）前記ヘミチオアセタールがエトキシエチル、テ
    トラヒドロピラニル、２−メチルテトラヒドロピラニル
    、６−カルボキシテトラヒドロピラニル、テトラヒドロ
    フラニル、２−メチルテトラヒドロフラニルから成る群
    から選択されることを特徴とする請求項第（１７）項に
    記載のキレート生成化合物。
19. （１９）請求項第（１２）項または第（１３）項に記載
    のキレート生成化合物及び同位体識別すべきプロテイン
    から成ることを特徴とする同位体識別プロテイン調整キ
    ット。
20. （２０）前記プロテイン及び前記キレート生成化合物が
    共役体として前記キットに含まれていることを特徴とす
    る請求項第（１９）項に記載のキット。
21. （２１）前記プロテインがモノクローナル抗体またはそ
    のフラグメントであることを特徴とする請求項第（１９
    ）項に記載のキット。
22. （２２）前記モノクローナル抗体がガン細胞に固有であ
    ることを特徴とする請求項第（２１）項に記載のキット
    。
23. （２３）ａ）請求項第（１２）項または第（１３）項に
    記載のキレート生成化合物を前記プロテインと反応させ
    ることにより、キレート生成化合物／プロテイン複合体
    を形成し、 ｂ）前記複合体を放射性金属と反応させる ことにより、第１部位に前記放射性金属の錯体を形成し
    、 ｃ）形成された複合体／放射性核種金属錯 体を保温することにより、第２部位への放射性核種金属
    の転移を促進して放射性核種金属のプロテイン結合キレ
    ートを形成する 段階から成ることを特徴とするプロテインの同位体標識
    方法。
24. （２４）保温段階において約３７℃またはそれ以下の温
    度に加熱することを特徴とする請求項第（２３）項に記
    載の方法。
25. （２５）放射性核種金属が、＾９＾９＾ｍＴｃ、＾１＾
    ８＾８Ｒｅ、＾１＾８＾６Ｒｅ、＾６＾７Ｃｕ、＾６＾
    ４Ｃｕ、＾２＾１＾２Ｐｂ、＾２＾１＾２Ｂｉ、＾１＾
    ０＾５Ｒｄ、＾９＾７Ｒｕ及び＾１＾０＾９Ｐｄから成
    る群から選択されることを特徴とする請求項第（２３）
    項に記載の方法。
26. （２６）放射性核種金属が、＾９＾９＾ｍＴｃ、＾１＾
    ８＾８Ｒｅ及び＾１＾８＾６Ｒｅから選択されることを
    特徴とする請求項第（２５）項に記載の方法。
27. （２７）プロテインが抗体であることを特徴とする請求
    項第（２３）項に記載の方法。
28. （２８）抗体がモノクローナル抗体またはそのフラグメ
    ントであることを特徴とする請求項第（２７）項に記載
    の方法。
29. （２９）モノクローナル抗体がガン細胞に固有であるこ
    とを特徴とする請求項第（２８）項に記載の方法。
30. （３０）前記モノクローナル抗体が、ＮＲ−ＭＬ−０５
    、抗ＴＡＣ、ＮＲ−ＬＵ−１０、ＯＶＢ＿３、ＮＲ−Ｃ
    Ｏ−０２及びＮＲ−ＣＥ−０１から成る群から選択され
    ることを特徴とする請求項第（２９）項に記載の方法。
31. （３１）ａ）請求項第（１２）項または第（１３）項に
    記載のキレート生成化合物を放射性核種金属と反応させ
    ることにより、第１部位に放射性核種金属の錯体を形成
    し、 ｂ）錯体を保温することにより、第２部位 への放射性核種金属の転移を促進してキレートを形成し
    、 ｃ）キレートをプロテインと反応させるこ とにより、キレート／プロテイン複合体を生成させる 段階から成ることを特徴とするプロテインの同位体標識
    方法。
32. （３２）放射性核種金属が、＾９＾９＾ｍＴｃ、＾１＾
    ８＾８Ｒｅ、＾１＾８＾６Ｒｅ、＾６＾７Ｃｕ、＾６＾
    ４Ｃｕ、＾２＾１＾２Ｐｂ、＾２＾１＾２Ｂｉ、＾１＾
    ０＾５Ｒｄ、＾９＾７Ｒｕ及び＾１＾０＾９Ｐｄから成
    る群から選択されることを特徴とする請求項第（３１）
    項に記載の方法。
33. （３３）放射性核種金属が＾９＾９＾ｍＴｃ、＾１＾８
    ＾８Ｒｅまたは＾１＾８＾６Ｒｅであることを特徴とす
    る請求項第（３２）項に記載の方法。
34. （３４）プロテインが抗体であることを特徴とする請求
    項第（３１）項に記載の方法。
35. （３５）抗体がモノクローナル抗体またはそのフラグメ
    ントであることを特徴とする請求項第（３４）項に記載
    の方法。
36. （３６）モノクローナル抗体がガン細胞に固有であるこ
    とを特徴とする請求項第（３５）項に記載の方法。
37. （３７）前記モノクローナル抗体がＮＲ−ＭＬ−０５、
    抗ＴＡＣ、ＮＲ−ＬＵ−１０、ＯＶＢ＿３、ＮＲ−ＣＯ
    −０２及びＮＲ−ＣＥ−０１から成る群から選択される
    ことを特徴とする請求項第（３６）項に記載の方法。
38. （３８）保温段階において約３７℃またはそれ以下の温
    度に加熱することを特徴とする請求項第（３１）項に記
    載の方法。
39. （３９）放射性核種金属を請求項第（１）項に記載のキ
    レート生成化合物と反応させることにより、第１部位に
    錯体を形成し、次いで錯体を保温することにより、第２
    部位への放射性核種金属の移転を促進してキレートを形
    成する段階から成ることを特徴とする放射性核金属のキ
    レート調製方法。
40. （４０）保温段階において約３７℃またはそれ以下の温
    度に加熱することを特徴とする請求項第（３９）項に記
    載の方法。
41. （４１）化合物が下記構造式II乃至ＸIVのいずれか１つ
    によって表わされることを特徴とする請求項第（１３）
    項に記載のキレート生成化合物（ただし、ａ）Ｒ＿６が
    Ｒ＿１＿６またはＲ＿１＿５−Ｚなら、−Ｎ−Ｒ＿６に
    隣接する炭素原子と結合している各Ｒ＿１基は水素、 ｂ）Ｒ＿１＿１がＲ＿１＿６またはＲ＿１＿５−Ｚなら
    、−Ｎ−Ｒ＿１＿１に隣接する炭素原子と結合している
    各Ｒ＿１基は水素である）。 ▲数式、化学式、表等があります▼II ▲数式、化学式、表等があります▼III ▲数式、化学式、表等があります▼IV ▲数式、化学式、表等があります▼Ｖ ▲数式、化学式、表等があります▼VI ▲数式、化学式、表等があります▼VII ▲数式、化学式、表等があります▼VIII ▲数式、化学式、表等があります▼IX ▲数式、化学式、表等があります▼Ｘ ▲数式、化学式、表等があります▼Ｘ I ▲数式、化学式、表等があります▼ＸII ▲数式、化学式、表等があります▼ＸIII ▲数式、化学式、表等があります▼ＸIV
42. （４２）化合物が下記構造式を有することを特徴とする
    請求項第（１）項または第（１３）項に記載のキレート
    生成化合物（ただし、Ｚは活性エステル基またはイソチ
    オシアネート基を表わす）。 ▲数式、化学式、表等があります▼ＸＶ
43. （４３）請求項第（１２）項または第（１３）項に記載
    のキレート生成化合物が結合しているプロテインから成
    ることを特徴とする複合体。
44. （４４）前記プロテインがモノクローナル抗体またはそ
    のフラグメントであることを特徴とする請求項第（４３
    ）項に記載の複合体。
45. （４５）前記モノクローナル抗体がガン細胞に固有であ
    ることを特徴とする請求項第（４４）項に記載の複合体
    。
46. （４６）前記モノクローナル抗体が、ＮＲ−ＭＬ−０５
    、抗ＴＡＣ、ＮＲ−ＬＵ−１０、ＯＶＢ＿３、ＮＲ−Ｃ
    Ｏ−０２及びＮＲ−ＣＥ−０１から成る群から選択され
    ることを特徴とする請求項第（４５）項に記載の複合体
    。