JPH02145193A - 遺伝子の組換えによる酵母でのヒト・アルファ・インターフェロンの製造方法 - Google Patents
遺伝子の組換えによる酵母でのヒト・アルファ・インターフェロンの製造方法Info
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- JPH02145193A JPH02145193A JP1492989A JP1492989A JPH02145193A JP H02145193 A JPH02145193 A JP H02145193A JP 1492989 A JP1492989 A JP 1492989A JP 1492989 A JP1492989 A JP 1492989A JP H02145193 A JPH02145193 A JP H02145193A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
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Description
【発明の詳細な説明】
産業上の利用分野
本発明は、高価な医薬品であるヒト・アルファ・インタ
ーフェロンの製造方法に関する。
ーフェロンの製造方法に関する。
従来の技術
インターフェロンは、人体内の正常染色体をもっている
細胞から生産される生理活性物質で、１９５７年イサク
（ｌ５ＳＡＣ）とリンデマン（ＬＩＮ［）ＥＮＭＡＮＮ
）に依ってその存在が知られて以来、インターフェロン
の抗ウイルス効果と抗腫瘍効果に依る癌の治療およびウ
ィルス性疾患の予防・治療などの応用を研究しており、
痘状・庖疹なとウィルス性皮膚炎の治療用軟膏剤として
利用されはじめた小単位、高価、高役価の医薬品である
。
細胞から生産される生理活性物質で、１９５７年イサク
（ｌ５ＳＡＣ）とリンデマン（ＬＩＮ［）ＥＮＭＡＮＮ
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の抗ウイルス効果と抗腫瘍効果に依る癌の治療およびウ
ィルス性疾患の予防・治療などの応用を研究しており、
痘状・庖疹なとウィルス性皮膚炎の治療用軟膏剤として
利用されはじめた小単位、高価、高役価の医薬品である
。
発明が解決しようとする問題点
これまで還伝子組換え技術に依るヒト・アルファ・イン
ターフェロンの生産に主として使用された国土は大腸菌
である（韓国特許公開番号８ｌ−７２７８）。しかし、
大腸菌のばあい、原核生物であるから、糖蛋白質の生産
に問題点があり、大量培養に於て安全でなく成長条件も
複雑である。
ターフェロンの生産に主として使用された国土は大腸菌
である（韓国特許公開番号８ｌ−７２７８）。しかし、
大腸菌のばあい、原核生物であるから、糖蛋白質の生産
に問題点があり、大量培養に於て安全でなく成長条件も
複雑である。
また、組換え遺伝子の発現および生産後の分離精製に於
ても、有害物質の包含などの問題点を有する。
ても、有害物質の包含などの問題点を有する。
問題点を解決するための手段
本発明に於てはヒト・アルファ・インターフェロン遺伝
子を遺伝子組換え方法に依って、大腸菌−酵母共域運搬
体にクローニングさせつつ、これを大腸菌に形質転換さ
せながら適切なものを選んで酵母に形質転換させ、この
ように形質転換された酵母を利用してインターフェロン
製造を可能にすることによって、高価な医薬品を経済的
に大ｍ生産する上に有利な役割を果すようにした。
子を遺伝子組換え方法に依って、大腸菌−酵母共域運搬
体にクローニングさせつつ、これを大腸菌に形質転換さ
せながら適切なものを選んで酵母に形質転換させ、この
ように形質転換された酵母を利用してインターフェロン
製造を可能にすることによって、高価な医薬品を経済的
に大ｍ生産する上に有利な役割を果すようにした。
酵母は細菌に比して成長条件が、複雑でなく、大量培養
に於ても有害物質が生産されず、安全である上、細菌よ
り高等な生命体であるから、必要に依って糖を付着させ
て、より有用な医薬品の生産も可能であるので、生産菌
主に酵母を利用するために大腸菌−酵母共域運搬体にヒ
ト・アルファ・インターフェロン遺伝子をクローニング
させた。
に於ても有害物質が生産されず、安全である上、細菌よ
り高等な生命体であるから、必要に依って糖を付着させ
て、より有用な医薬品の生産も可能であるので、生産菌
主に酵母を利用するために大腸菌−酵母共域運搬体にヒ
ト・アルファ・インターフェロン遺伝子をクローニング
させた。
また、この実験で利用した組換えプラスミドでは酸性ホ
スファタービプロモーター（ＡＣＩＤＰＨＯ８ＰＨＡＴ
ＡＳＥ ＰＲＯＭ０ＴＥＲ）が使われるので、インタ
ーフェロン発現要求に当り、特殊化学物質に依る誘導が
不必要であり、単純に培地内に無機燐１ｍ度変化で発現
を誘導することができる。
スファタービプロモーター（ＡＣＩＤＰＨＯ８ＰＨＡＴ
ＡＳＥ ＰＲＯＭ０ＴＥＲ）が使われるので、インタ
ーフェロン発現要求に当り、特殊化学物質に依る誘導が
不必要であり、単純に培地内に無機燐１ｍ度変化で発現
を誘導することができる。
これは大腸菌から組換えられたヒト・アルファ・インタ
ーフェロンの生産にあたり、高価の誘導（ＩＮＤＵＣＥ
Ｒ＞物質などが使用されるのを考慮するとき、生産単価
を下げる利点があるのである。
ーフェロンの生産にあたり、高価の誘導（ＩＮＤＵＣＥ
Ｒ＞物質などが使用されるのを考慮するとき、生産単価
を下げる利点があるのである。
実施例
本発明の概要を区分説明すれば次の通りである。
１、ベクタープラスミド
第１図の通り、クローニングに使用されたプラスミドＰ
ＡＨ８２は大腸菌−酵母共域運搬体であり、大腸菌の
？Ｉ製根源遺伝子をもっており、大腸菌の桑物抵抗性ン
ー力−でエンピシリン抵抗性遺伝子をもっており、酵母
の２μ−由来根源遺伝子と自動複製順列（ＡＵＴＯＮＯ
ＭＯＵＳ ＲＥＰＬＩＣＡＴＩＮＧ ５ＥＱＵＥＮ
ＣＥ）ＡＲ３１を複製根源遺伝子にもっており、酵母形
質転換にあたりマーカーとなる１、 Ｅ Ｕ ２遺伝子
をもち、外部遺伝子挿入位置としてはＸ ｈｏ ｌ制限
酵素切断部位が酸性ホスファターゼのすぐ後に存在する
。
ＡＨ８２は大腸菌−酵母共域運搬体であり、大腸菌の
？Ｉ製根源遺伝子をもっており、大腸菌の桑物抵抗性ン
ー力−でエンピシリン抵抗性遺伝子をもっており、酵母
の２μ−由来根源遺伝子と自動複製順列（ＡＵＴＯＮＯ
ＭＯＵＳ ＲＥＰＬＩＣＡＴＩＮＧ ５ＥＱＵＥＮ
ＣＥ）ＡＲ３１を複製根源遺伝子にもっており、酵母形
質転換にあたりマーカーとなる１、 Ｅ Ｕ ２遺伝子
をもち、外部遺伝子挿入位置としてはＸ ｈｏ ｌ制限
酵素切断部位が酸性ホスファターゼのすぐ後に存在する
。
２、 生産菌主
この発明に使用された生産菌主は酵母菌属セレビシェ（
ＳＡＣＣＨＡＲＯＭＹＣＥＳ ＣＦＲＥＶＩＳＩＡＥ
）で国土ｊＲ号はＡＨ２２である。
ＳＡＣＣＨＡＲＯＭＹＣＥＳ ＣＦＲＥＶＩＳＩＡＥ
）で国土ｊＲ号はＡＨ２２である。
これは２μｍプラスミドをもっており、染色体上のＬ
Ｅ Ｕ ２ ｍ伝子に突然変異が起ったロイシン栄養要
求主（ＡｔＪＸＯＴＲＯＰＨ）ｒあり、ｆＱ１時にヒス
チジン栄養要求主である。このＡＨ２２は無機燐の濃度
が高ければ酸性ホスファターゼの生産が阻害され、数ｍ
Ｍの無機燐濃度から、または無機燐が完全に除去された
培地から酸性ホスファターゼが生産される。
Ｅ Ｕ ２ ｍ伝子に突然変異が起ったロイシン栄養要
求主（ＡｔＪＸＯＴＲＯＰＨ）ｒあり、ｆＱ１時にヒス
チジン栄養要求主である。このＡＨ２２は無機燐の濃度
が高ければ酸性ホスファターゼの生産が阻害され、数ｍ
Ｍの無機燐濃度から、または無機燐が完全に除去された
培地から酸性ホスファターゼが生産される。
このような抑制酸性ホスファターゼはＰＨ０５遺伝子に
依ってエンコーディングされ、この他にも無機燐濃度に
関わらず生産される。構成酸性ホスファターゼも生産さ
れるのであるが、この酵素は無機燐に依って誘導され、
ＰＨ０３遺伝子にエンコーディングされるが、ＰＨ０６
とＰＨ０７遺伝子も酵素合成に関与している。
依ってエンコーディングされ、この他にも無機燐濃度に
関わらず生産される。構成酸性ホスファターゼも生産さ
れるのであるが、この酵素は無機燐に依って誘導され、
ＰＨ０３遺伝子にエンコーディングされるが、ＰＨ０６
とＰＨ０７遺伝子も酵素合成に関与している。
ａ プラスミド製造り法
共域プラスミドＨｉｆ−２ＨのＰｓｔｌの位置にあるヒ
ト・アルファ・インターフェロン遺伝子を、大腸菌−酵
母共域運搬体であるＰＡＮ８２と相（ＰＨＡＳＥ）を合
わせて接合させる。
ト・アルファ・インターフェロン遺伝子を、大腸菌−酵
母共域運搬体であるＰＡＮ８２と相（ＰＨＡＳＥ）を合
わせて接合させる。
ベクタープラスミドとインターフェロン遺伝子の相は次
の方法で合わせる。
の方法で合わせる。
第 １ 表
↑
ＰＡＭ８２のＸｈＯＩ切断断片
上記第１表の通り遺伝子が構成されて（するのでｐ
８２（７）単１（ＳＩＮＧＬＥ ５ＴＲＡＮＤ）を＾
Ｈ 切断し、インターフエＯ＞遺伝子の単鎖部分をみたして
重鎮（ＤＯＵＢＬＥ ５ＴＲＡＮＤ）にして接合する
と、相が第２表の通りに一致する。
８２（７）単１（ＳＩＮＧＬＥ ５ＴＲＡＮＤ）を＾
Ｈ 切断し、インターフエＯ＞遺伝子の単鎖部分をみたして
重鎮（ＤＯＵＢＬＥ ５ＴＲＡＮＤ）にして接合する
と、相が第２表の通りに一致する。
第 ２ 表
↑
１−１ｉｔ−２１−（のｐＳｔ切断断片プラントエンド
連結反応 以下、本発明の製造方法をその実施例である製造工程に
依って詳細に説明すれば次の通りである。
連結反応 以下、本発明の製造方法をその実施例である製造工程に
依って詳細に説明すれば次の通りである。
実施例１
ＰＡＭ８２プラスミド遺伝子（ＰＬＡＳＭＩＯＤＮＡ＞
とＨｉｒ−２Ｈプラスミドの断片を得るためＰＡＭ８２
をＸｈＯＩ制限酵素で切断し、ＨＤ−２８をＰＳｔＩで
切断して寒天ゲル＜ＡＧＡＲＯ３Ｅ ＧＥＬ）電気泳
動して、Ｐ ＡＨ８２−Ｘ ｈｏ （１，ＩＪ断断片（
ＤＩＧＥＳＴ ＦＲＡＧＭＥＮＴ）とインターフェロ
ン遺伝子を得てフェノール抽出、エタノール洗浄（ＥＴ
ＨＡＮＯＬ ＲＩＮＳＩＮＧ）、真空乾燥を絆で、Ｔ
ＥＦｌ函溶液で溶かしたのちｅＸ。
とＨｉｒ−２Ｈプラスミドの断片を得るためＰＡＭ８２
をＸｈＯＩ制限酵素で切断し、ＨＤ−２８をＰＳｔＩで
切断して寒天ゲル＜ＡＧＡＲＯ３Ｅ ＧＥＬ）電気泳
動して、Ｐ ＡＨ８２−Ｘ ｈｏ （１，ＩＪ断断片（
ＤＩＧＥＳＴ ＦＲＡＧＭＥＮＴ）とインターフェロ
ン遺伝子を得てフェノール抽出、エタノール洗浄（ＥＴ
ＨＡＮＯＬ ＲＩＮＳＩＮＧ）、真空乾燥を絆で、Ｔ
ＥＦｌ函溶液で溶かしたのちｅＸ。
■とクレノー（ＫＬＥＮＯＷ）断片（ＦＲＡＧＭＥＮＴ
）を処理した。
）を処理した。
クレノー断片処理にあたっては１０倍反応緩衝溶液で５
０ｍＭの燐酸カリウム緩衝溶液（ＰＨ７５）、塩化マグ
ネシウム３０ｍＭ （ＭｉｌｌＣｒ２）、１０ｍＭベー
タ・メルカプトエタノール（β−ｍｅｒｃａｐｔｏｅｔ
ｈａｎｏｌ ）の組成をもっている溶液を使用する。
０ｍＭの燐酸カリウム緩衝溶液（ＰＨ７５）、塩化マグ
ネシウム３０ｍＭ （ＭｉｌｌＣｒ２）、１０ｍＭベー
タ・メルカプトエタノール（β−ｍｅｒｃａｐｔｏｅｔ
ｈａｎｏｌ ）の組成をもっている溶液を使用する。
この１０倍反応緩衝溶液５μ克とＴＥ緩衝溶液に溶かし
たＨｉｔ−２ＨのＰｓｔ１断片２５μえ、ｄＮＴＰ （
ｄＡ工Ｐ、ｄＴＴＰ、ｄＣＴＰ、ｄＧＴＰ）各５μ乏と
混合して、ｅｘｏ Ｖ［酵素を添加して３７℃で１時間
培養してインターフェロン遺伝子を含むプラントエンド
（ＢＬＵＮＴ ＥＮＤ）の遺伝子断片を製造する。
たＨｉｔ−２ＨのＰｓｔ１断片２５μえ、ｄＮＴＰ （
ｄＡ工Ｐ、ｄＴＴＰ、ｄＣＴＰ、ｄＧＴＰ）各５μ乏と
混合して、ｅｘｏ Ｖ［酵素を添加して３７℃で１時間
培養してインターフェロン遺伝子を含むプラントエンド
（ＢＬＵＮＴ ＥＮＤ）の遺伝子断片を製造する。
実施例２
上記実施例１でのＰ ＡＨ８２−Ｘ ｈｏ ■断ハを遺
伝子操作に適合するよう変形させるために次の通り処理
する。
伝子操作に適合するよう変形させるために次の通り処理
する。
使用された１０倍反応緩衝溶液の造成は６７０ｍｖｇ４
酸カリウム緩衝溶液、８３ｍＭ Ｅ、Ｄ。
酸カリウム緩衝溶液、８３ｍＭ Ｅ、Ｄ。
Ｔ、Ａ （ＥＤＴＡ、Ｎａ２）、１００ｍＭベータ・メ
ルカプトエタノールである。この１０倍反応緩衝溶液１
５μ乏にＴＥ！！衝溶液に溶かしたＰＡＭ８２−Ｘ ｈ
ｏ １切断断片５ｏμｅ、蒸溜水８５μｅ。
ルカプトエタノールである。この１０倍反応緩衝溶液１
５μ乏にＴＥ！！衝溶液に溶かしたＰＡＭ８２−Ｘ ｈ
ｏ １切断断片５ｏμｅ、蒸溜水８５μｅ。
ｅｘｏ Ｖｌ酵素０．５μ２を添加して３７℃で１時間
培養してプラント１ンドＰＡＭ８２断片を製造する。
培養してプラント１ンドＰＡＭ８２断片を製造する。
実施例３
ｅｘｏ’ＶＩＩＷ素とクレノー断片（ＫＬＥＮＯＷ
ＦＲＡＧＭＥＮＴ）処理した遺伝子断片溶液をフェノー
ル抽出、エタノール洗浄、真空乾燥を経てＴＥ緩衝溶液
に溶かしたのち、連結反応を遂行してＰＡＭ８２プラス
ミドにＰｓｔ１部位をもつインターフェロン遺伝子の入
っている組換え大腸菌−酵母共域運搬体を製造する。
ＦＲＡＧＭＥＮＴ）処理した遺伝子断片溶液をフェノー
ル抽出、エタノール洗浄、真空乾燥を経てＴＥ緩衝溶液
に溶かしたのち、連結反応を遂行してＰＡＭ８２プラス
ミドにＰｓｔ１部位をもつインターフェロン遺伝子の入
っている組換え大腸菌−酵母共域運搬体を製造する。
このようなプラスミド製造全課程を図式化すれば第２図
の通りである。
の通りである。
実施例４
上記（実施例３）で製造された組換え大腸菌−酵母共域
運搬体を含む混合物を使用して大腸菌に形質転換をさせ
て、エンピシリンをマーカーとするコロニーを得た。
運搬体を含む混合物を使用して大腸菌に形質転換をさせ
て、エンピシリンをマーカーとするコロニーを得た。
このような大腸菌形質転換体コロン（ＣＯＬＯＮＥ）で
酵母に形質転換さゼる。
酵母に形質転換さゼる。
この酵母細胞をバルクホルダー（ＢＬＩＲＫ ＨＯＬ
ＤＥＲ）最少培地で高度の無機燐濃度で培養したのち、
遠心分離して細胞のみを無機燐のないバルクホルダー最
少培地に移してヒト・アルファ・インターフェロンの生
産を誘導する。
ＤＥＲ）最少培地で高度の無機燐濃度で培養したのち、
遠心分離して細胞のみを無機燐のないバルクホルダー最
少培地に移してヒト・アルファ・インターフェロンの生
産を誘導する。
バルクホルダー最少培地の造成は製造溶液１Ｌ当萄萄糖
２０ｇ、砿酸マグネシウム（Ｍ（ｌ ５Ｏ４７Ｈ２０）
０．５ｇ、７スバ７ジン（ＡＳＰＡＲＡＺＩＮＥ）２．
０ｇ、塩化カルシウム（ＣａＣＩｚ。
２０ｇ、砿酸マグネシウム（Ｍ（ｌ ５Ｏ４７Ｈ２０）
０．５ｇ、７スバ７ジン（ＡＳＰＡＲＡＺＩＮＥ）２．
０ｇ、塩化カルシウム（ＣａＣＩｚ。
２Ｈ２０） ０．３３ ｇ、硫安（（ＮＨ４）２８０
４ ）２．０ｇ、ヨードカリウム＜ＫＩ＞０．１η、ヒ
スチジン２０ａｙであり、ここに微ｍ元素で硼素０．０
１０ｐｌ 、マンガン０．０１ ＤＩ）ｌ 、亜鉛０．
０７ ｐｐｍ 、銅ｏ、ｏｉ ｐｐｓ 、モリブデン０
．０１ ｐｐｎ 、鉄０．０５１１ＥＩＩを添加する。
４ ）２．０ｇ、ヨードカリウム＜ＫＩ＞０．１η、ヒ
スチジン２０ａｙであり、ここに微ｍ元素で硼素０．０
１０ｐｌ 、マンガン０．０１ ＤＩ）ｌ 、亜鉛０．
０７ ｐｐｍ 、銅ｏ、ｏｉ ｐｐｓ 、モリブデン０
．０１ ｐｐｎ 、鉄０．０５１１ＥＩＩを添加する。
また、ビタミンでジアミン２００μグ、リボアラビン１
００μグ、ビリドクシン２００μ９．ナイアシン２００
μび、ビオチン０．２μび、パントセニツク・エキシー
ド２００μ９．イノシトール１００μ９を添加したのち
高度の無機燐濃度培養液には燐酸カリウム（ＫＨ２ＰＯ
４） １．５ｇヲ入ｔｔ、ｓｔａ燐のない培養液には
塩化カリウム（ＫＣＩ ） １．５ｇを入れる。
００μグ、ビリドクシン２００μ９．ナイアシン２００
μび、ビオチン０．２μび、パントセニツク・エキシー
ド２００μ９．イノシトール１００μ９を添加したのち
高度の無機燐濃度培養液には燐酸カリウム（ＫＨ２ＰＯ
４） １．５ｇヲ入ｔｔ、ｓｔａ燐のない培養液には
塩化カリウム（ＫＣＩ ） １．５ｇを入れる。
実施例５
ヒト・アルファ・インターフェロンが発現された酵母細
胞の全体蛋白質をソディウム・トメシル・ツルベイト・
ポリ・アクリル・アミド・ゲル（ＳＤＳ−ＰＯＬＹＡＣ
ＲＹＬ ＡＭＩＤＥ ＧＥＬ）電気泳動模にクーマ
シ−（ＣＯＯＭＡＳＳＩＥ）染色をした。
胞の全体蛋白質をソディウム・トメシル・ツルベイト・
ポリ・アクリル・アミド・ゲル（ＳＤＳ−ＰＯＬＹＡＣ
ＲＹＬ ＡＭＩＤＥ ＧＥＬ）電気泳動模にクーマ
シ−（ＣＯＯＭＡＳＳＩＥ）染色をした。
この電気泳動結果を第３図に示した。
このようにできた本発明は大腸菌を使用せずに形質転換
された酵母からインターフェロンを製造させることによ
って高価のインターフェロンを経−・）的に大量生産で
きるのである。
された酵母からインターフェロンを製造させることによ
って高価のインターフェロンを経−・）的に大量生産で
きるのである。
第１図は、本発明によるクローニングで使用されたプラ
スミドＰ ＡＨ８２の大略的地図。 第２図は、本発明の製造方法の過程の系統図。 第３図は、ヒト・アルファ・インターフェロンが発現し
た酵母ｍ胞全体蛋白質の電気泳動写真である。 ＦＩ３．１ １：＝≧−：飄・ｊζｄ８２： ｆ；１８．、＋ヨ：
ｉ勧ｈｕ 二Ａｉ＋二；：：、ごｔｇ％−八’ｌｆＬ’
；＠−（！１Ｆ托、２ 目、ω１；へｆ／１に繰 總機り坏−枳 鵡へう電珈、慣り し 発掃７ ＩＧｊ
スミドＰ ＡＨ８２の大略的地図。 第２図は、本発明の製造方法の過程の系統図。 第３図は、ヒト・アルファ・インターフェロンが発現し
た酵母ｍ胞全体蛋白質の電気泳動写真である。 ＦＩ３．１ １：＝≧−：飄・ｊζｄ８２： ｆ；１８．、＋ヨ：
ｉ勧ｈｕ 二Ａｉ＋二；：：、ごｔｇ％−八’ｌｆＬ’
；＠−（！１Ｆ托、２ 目、ω１；へｆ／１に繰 總機り坏−枳 鵡へう電珈、慣り し 発掃７ ＩＧｊ
Claims (2)
- （１）共域プラスミド（Ｈｉｆ−２Ｈ）からヒト・アル
ファ・インターフェロン遺伝子を分離し、これを大腸菌
−酵母共域運搬体であるＰ＾Ａ＾Ｍ８２にクローニング
させたあとこれを大腸菌に形質転換をさせてこのうち、
適切なものをえらんで酵母に形質転換させたあと無機燐
濃度変化に依ってインターフェロン生産を誘導発現させ
ることを特徴とする遺伝子組換え方法に依る酵母に於て
のヒト・アルファ・インターフェロンの製造方法。 - （２）共域プラスミド（Ｈｉｆ−２Ｈ）から制限酵素Ｐ
ｓｔ１を利用してヒト・アルファ・インターフェロン遺
伝子を分離し、両端をＴ４ＤＮＡポリマレイズでブラン
ドエンドにつくり大腸菌−酵母共域運搬体であるＰ＾Ａ
＾Ｍ８２の酸性ホスファターゼプロモーターのすぐ後に
あるＸｈｏ I 部位をブランドエンドにつくったのち、
クローニングして酵母内でインターフェロン生産が可能
なベクターを製造することを特徴とする請求項１記載の
遺伝子組換え方法に依る酵母でのヒト・アルファ・イン
ターフェロンの製造方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1988-15252 | 1988-11-19 | ||
| KR880015252 | 1988-11-19 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH02145193A true JPH02145193A (ja) | 1990-06-04 |
Family
ID=19279415
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP1492989A Pending JPH02145193A (ja) | 1988-11-19 | 1989-01-24 | 遺伝子の組換えによる酵母でのヒト・アルファ・インターフェロンの製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH02145193A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AU648214B2 (en) * | 1991-12-31 | 1994-04-14 | Lucky Limited | Recombinant gene coding for human alpha interferon and expression vector thereof, etc. |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5948082A (ja) * | 1982-08-09 | 1984-03-19 | チバ−ガイギ−・アクチエンゲゼルシヤフト | 酵母発現ベクター系 |
| JPS6291196A (ja) * | 1986-05-10 | 1987-04-25 | Science & Tech Agency | Ｂ型肝炎ウイルス表面抗原の製法 |
-
1989
- 1989-01-24 JP JP1492989A patent/JPH02145193A/ja active Pending
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5948082A (ja) * | 1982-08-09 | 1984-03-19 | チバ−ガイギ−・アクチエンゲゼルシヤフト | 酵母発現ベクター系 |
| JPS6291196A (ja) * | 1986-05-10 | 1987-04-25 | Science & Tech Agency | Ｂ型肝炎ウイルス表面抗原の製法 |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AU648214B2 (en) * | 1991-12-31 | 1994-04-14 | Lucky Limited | Recombinant gene coding for human alpha interferon and expression vector thereof, etc. |
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