JPH02141666A - エンドトキシンの不活化方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［発明の利用分野］ 本発明は、被検試料中のエンドトキシン（以下、ＥＴと
略記する。）を選択的に不活化してカブトガニの血球成
分（Ａｍｏｅｂｏｃｙｔｅ　　Ｌｙｓａｔｅ）抽出液（
以下、ＡＬ温溶液略記する。）と反応しないようにする
（以下、不活化と略記する。）方法、及びこの方法によ
り処理を行った被検試料中に含まれるＥＴ以外のＡＬ温
溶液反応してゲル化反応を生じせしめる物質（以下、ゲ
ル化物質と略記する。

）の測定方法に関する。

［発明の背景］ ＡＬ温溶液、主にダラム陰性菌の細胞表層中に存在する
リボ多糖であり、発熱物質（Ｐｙｒｏｇｅｎ）の一種と
しても知られるＥＴと反応してゲル化する性質を持つこ
とは広く知られており、この現象を利用した、所謂リム
ルステストがその簡便性、費用が安価な点等から、ＥＴ
の測定法として広く利用されている。

しかしながら、とのＡＬ温溶液ＥＴ以外のゲル化物質５
例えばカルボキシメチル化したβ−１，３−グルカンと
も反応することが見出され［Ｋａｋｉｎｕｍａｅｔ　ａ
ｌ、、Ｂｉｏｃｈｅｍ、Ｂｉｏｐｈｙｓ、Ｒｅ５ｅａｒ
ｃｈ　　Ｃｏｍ＋ａｕｎｉｃａｔｉｏｎ　ｅ月■工ｆｉ
、４３４−４３９（１９８１）コ、その現象は、ＡＬ溶
液中に存磁するβ−１，３−グルカン（以下、ＯＬと略
記する。）と反応して凝固反応を惹起する因子（以下、
ＧＬ感受性因子と略記する。）がＯＬ又はその誘導体（
以下、ＧＬＤと略記する。）と反応することにより惹起
されることが明らかにされた［岩永ら２日本細菌学雑誌
、揶山陸、７８１−８０３（１９８３）］　。

そのため、現在市販されているリムルステストの大部分
は、ＥＴのみならずＯＬ又はＧＬＤとも反応してゲル化
し、この測定法では試料中に存在しているのがＥＴであ
るのかＯＬ又は／及びＧＬＤであるのか、或はこれらの
混合物であるのかを判定することは難しい。

このような問題点を解決すべく、ＡＬ温溶液らＥＴに特
異的な試薬、或はＧＬ又は／及びＧＬＤに特異的な試薬
をａｆａする方法が報告されている（特開昭５８−１３
５１６号公報、特開昭５９−２７８２８号公報）しかし
ながら、これらに開示された方法は、何れもＡＬ温溶液
ゲル濾過法或はヘパリン、デキストラン硫酸を結合させ
た担体を用いたクロマトグラフィ等によって処理し、凝
固酵素前駆体の分画、ＧＬ感受性因子の分画及びＥＴと
反応してゲル化反応を惹起する因子（以下、ＥＴ感受性
因子と略記する。）の分画に分離するという極めて煩雑
な操作を要する方法である。そのため、この操作を行う
ための専用装置等が必要であり、しかも、最終的にＥＴ
、若しくはＧＬ又は／及びＧＬＤに特異的な試薬を得る
には各分画を改めて適宜混合しなければならないという
欠点を有していた。

［発明の目的コ 本発明は、上記した如き状況に鑑みなされたもので、被
検試料中のＥＴを選択的に且つ簡便に不活化する方法、
及びこのような処理を行った被検試料（以下、処理済試
料と略記する。）中のＥＴ以外のゲル化物質を測定する
方法を提供することを目的とする。

［発明の構成］ 本発明は、被検試料を加熱処理することにより行うこと
を特徴とする、被検試料中のＥＴの不活化方法、及び処
理済試料とＡＬ温溶液を反応させ、その際に生ずるゲル
化反応に基づく変化を測定することにより行うことを特
徴とする、被検試料中に含まれるＥＴ以外のゲル化物質
の測定方法である。

即ち、本発明者は、ＥＴ、ＧＬ、ＧＬＤ等と反応してゲ
ル化反応を生じるＡＬ温溶液用いてのゲル化物質の特異
的測定方法につき研究の途上、被検試料を加熱処理する
と、被検試料中のＥＴは不活化されＡＬ温溶液反応し得
なくなるが、ＥＴ以外のゲル化物質は不活化されず、Ａ
Ｌ温溶液反応することを見出し１本発明を完成するに至
った。

本発明を実施するには１例えば以下の如く行えばよい。

即ち、先ず、要すれば注射用蒸留水等で希釈した被検試
料を加熱処理することにより、被検試料中のＥＴを選択
的に不活化する。このようにして得られた処理済試料を
ＡＬ温溶液反応させ、その結果生じるゲル化反応に基づ
く変化を測定することにより、被検試料中のＥＴ以外の
ゲル化物質を測定する。

本発明の不活化方法に於いて、被検試料の加熱処理の加
熱温度としては、６０℃以上であれば特に制限されない
が、例えば水浴を使用する場合には通常７０〜１００℃
１例えばオートクレーブを使用する場合には通常７０〜
１４０℃の範囲で選択されるが、温度コントロールが容
易なことから１００℃付近（沸謄水の温度付近）が好ま
しく利用される。また、加熱時間としては、加熱温度と
被検試料中のＥＴ量により変化するが、加熱温度が１０
０℃付近の場合通常６０分以上が選択される。更に具体
的には、例えば被検試料中にＥＴが８〜ｌ０ＥＬＩ／ｍ
ｌ程度含まれている場合には、加熱温度１００℃付近で
１２０分程度の加熱時間が適当である。

一方、本発明の不活化方法に於いて、被検試料が例えば
血漿、血清等の蛋白含量の多いものの場合には、通常の
加熱処理ではＥＴの不活化が起こらない場合がある。こ
の原因は定かではないが、おそらく被検試料中のある種
の成分とＥＴとが何らかの相互作用を起こし、その結果
ＥＴの熱に対する安定性が向上するためではないかと考
えられる。このよ・うな場合は被検試料に、例えばメタ
ノール、エタノール、ｎ−プロパツール、イソプロパツ
ール、ｎ−ブタノール、　５ｅｅ−ブタノール、　ｔｅ
ｒｔ−ブタノール、ジオキサン、アセトン、アセトニト
リル等の水溶性の有機溶媒を適宜共存させた状態で加熱
処理を行えばよい、それにより前記した如き被検試料の
場合に於いてもＥＴを選択的に効率良く不活化すること
ができる。このことも本発明者が初めて見出した意外な
事実である。

共存させる有機溶媒の量は、被検試料中のある種の成分
とＥＴとの相互作用を妨害し得る量であれば特に限定さ
れないが、通常被検試料１諷１に対して、０．５〜３．
０ｍｌの割合で、より好ましくは０．８〜１．５＋１の
割合で添加される。

但し、ＥＴの不活化処理を、このように有機溶媒を添加
して行った場合には、その有機溶媒の処理済試料中の残
留量が多いと、引き続き行うゲル化物質の測定に於いて
、この残存有機溶媒がＡＬ温溶液ゲル化物質との反応を
妨害する場合があるので注意が必要である。このような
可能性がある場合には、予め加熱時間を延長して有機溶
媒をある程度蒸発させたり、ロータリーエバポレーター
等を利用する等して処理済試料から有機溶媒を除去する
ことが望ましい。

尚、被検試料を加熱処理するすることにより好ましから
ざる共存物質を除去する分路Ｐ例えば血漿中に含まれる
、ＡＬ温溶液ＥＴとの反応阻害物質を加熱により不活化
する方法が従来から知られている（Ｍ、Ｓ、Ｃｏｏｐｅ
ｒｓｔｏｃｋ　ａｔ　ａｌ、、Ｐｏ５ｓｉｂｌｅ　ｐａ
ｔｈｏｇｅｎｉｃ　　ｒｏｌｅ　　ｏｆ　　ｅｎｄｏｔ
ｏｘｉｎ　　ｉｎ　　Ｒｅｙ’ｓ　　ｓｙｎｄｒｏｍｅ
、　Ｌａｎｃｅｔ、　１：　ｐ１２７２−１２７４．１
９７５等）、この方法は、注射用蒸留水で３倍希釈した
被検試料を１００℃で１０分間加熱するというものであ
るが、この処理によってはＥＴは不活化されないと言う
前提に立った上で初めて可能となっている方法である。

従って、同様な方法で単に加熱時間を長くしただけで、
ゲル化物営の中でＥＴのみが不活化されて。

ＥＴ以外のゲル化物質は不活化されないという現象が生
じることは、当業者と言えども到底予測がつかなかった
。

本発明の測定方法に於いて使用できるＡＬ温溶液しては
、通常のＥＴの測定に使用できるものでＯＬ又はＧＬＤ
とも反応してゲル化反応が生じるものであれば特に限定
されることなく使用することができるが１例えば、　Ａ
ＣＣ（ＡＳＳＯＣＩＡ丁ＥＳ　０ＦＣＡＰＥ　Ｃ０Ｄ）
社、ヘマケム社、ＭＡＢ社、マリンクロット社、帝国臓
器（株）社等によって製造された市販のＡＬ温溶液凍結
乾燥品から調製されたものを用いてもよいし、リムルス
（Ｌｉｍｕｌｕｓ）属、タキプレウス（Ｔａｃｈｙｐｌ
ｅｕｓ）属或はカルシノスコルピウス（Ｃａｒｃｉｎｏ
ｓｃｏｒｐｉｕｓ）属に属するカブトガニの血球から抽
出されたもので、ＥＴ、ＯＬ又はＧＬＤとの反応により
ゲル化反応が生じるものであれば、特に限定されること
なく挙げられる。

本発明のＥＴ以外のゲル化物質の測定方法は。

ＡＬ温溶液反応させる被検試料を、予め加熱処理してお
く以外には、ＡＬ温溶液用いた自体公知のＥＴ１！定法
に準じてこれを行えばよく、使用されるその他の試薬等
も自体公知のＥＴ？ｌＩ！Ｉ定法に於いて用いられる試
薬に準じて、適宜選択して用いればよい。ＡＬ温溶液用
いた自体公知のＥＴ測定法としては、例えばＡＬ温溶液
試料を混合した後、適当な温度で一定時間インキユベー
トし、凝固によるゲル生成の有無を調べるゲル化転倒法
、凝固に伴って生ずる濁度を測定する比濁法、凝固に伴
って生ずる濁度が一定の値に達するまでの時間を測定す
る比濁時間分析法、ＡＬ温溶液成分とＥＴとの反応に伴
って活性化されるプロテアーゼの活性を合成基質を用い
て測定する合成基質法等が挙げられるが、本発明の適用
範囲はこれらに限定されるものではなく、ＡＬ温溶液Ｅ
Ｔとの反応を利用した測定方法であれば、何れにも適用
可能である。

本発明の測定方法に於いて、ＡＬ温溶液処理済試料とを
反応させる際のｐＨとしては、ＡＬ溶液中のＥＴ以外の
ゲル化物質と反応して凝固反応を起こす因子が失活しな
いｐＨであれば何れにてもよいが１通常６〜８の範囲が
好ましく用いられる。

尚、処理済試料のＰＨによる影響を回避して、常にこの
ＰＨ範囲内で測定が行えるようにするためには、反応時
にトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（Ｔｒｉｓ
）やグツド緩衝剤（Ｇｏｏｄｓ’Ｂｕｆｆｅｒ）等の通
常生化学の分野で広く用いられる緩衝剤を共存させてお
くことが望ましい、また、ＡＬ温溶液処理済試料とを反
応させる際の温度としては、ＡＬ溶液中のＥＴ以外のゲ
ル化物質と反応して凝固反応を起こす因子が失活しない
温度であればよいが、通常、０〜４０℃、より好ましく
は２５〜４０℃が用いられる。

本発明の測定方法は１例えばトキシノメータＥＴ−２０
１（和光純薬工業（株）製）、ＬＡＬ−５０００（ＡＣ
Ｃ社製）等の比濁時間分析法専用装置を利用して実施す
ることもできるし１分光光度計等のその他の光学的原理
を利用した測定装置を用いても同様に実施できる。

本発明の方法により測定できるゲル化物質としては、例
えばＧＬ及びＧＬＤが挙げられ、これらＧＬ及びＧＬＤ
としては、ＧＬをその構成成分として含む多糖類であれ
ば特に限定されることなく挙げられるが、例えば各種細
菌類（例えば、Ａｌｃａｌｉ（ｅｎｅｓ属、　Ｌａｍ１
ｎａｒｉａ属、　Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ属等）、
酵母類（例えば、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ属等）、
キノコ類（例えば、シイタケ、スエヒロタケ、カワラタ
ケ等）等の細胞壁から得られる天然の多糖、具体的には
例えば、カードラン、パキマン、スクレロタン、レンチ
ナン、シゾフイラン、コリオラン等。

或は、藻類（例えば、褐藻、ユーグレナ、ケイ藻等）の
貯蔵性多糖、具体的には例えばラミナラン。

パラミロン等、或は又これらに常法、例えば大有機化学
第１９巻、第７版、７０〜１０１頁、小竹無二雄監修、
昭和４２年５月１０日、朝食書店；　Ａ、Ｅ、Ｃ１ａｒ
ｋｅら、　ＰｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙＪ、１７５−
１８８（１９６７）；Ｔ、５ａｓａｋｉら、　Ｅｕｒｏ
ｐ、Ｊ、Ｃａｎｃｅｒ、ｌｉ、２１１−２１５（１９６
７）等に記載された方法に準じてカルボキメチル基、カ
ルボキシルエチル基、メチル基、ヒドロキシエチル基。

ヒドロキシプロピル基、スルホプロピル基等を導入して
得られる誘導体等が挙げられる。

また、本発明の測定方法により、処理済試料中のＧＬ又
は／及びＯＬＤを測定した場合、ＧＬの由来やＧＬＤに
導入された置換基の種類や個数等によりＡＬ温溶液の反
応性が異なる場合も有り得る。そのため、本発明の方法
によりＧＬ又は／及びＧＬＤを測定する場合には、特定
のＧＬ又はＧＬＤを基準物質とし、その基準物質に換算
した濃度として被検試料中に含まれるＧＬ又は／及びＧ
ＬＤ濃度を示すことが望ましい。

本発明の測定方法を利用して、例えば血漿中のＥＴ以外
のゲル化物質を測定した場合、細菌感染症の種類の判別
、例えば敗血症と真菌症の判別が可能となる。また、血
中のＥＴの濃度としては、正常値が１０ｐｇ／ｍ１前後
、ＥＴ血症の場合でも最高数１１００ｐ／ｍｌと言われ
ている。従って、上記のような判別を行うために血漿中
のＥＴＵ外のゲル化物質の測定を行う場合、血漿の加熱
処理は、Ｉ　Ｂ／ｍｌ程度のＥＴを不活化し得る条件で
行えばよいと考えられる。

以下に参考例、実験例及び実施例を挙げ、本発明を更に
詳細に説明するが１本発明はこれらにより何ら限定され
るものではない。

［実施例］ 参考例１．カルボキシメチル化カードランの調製カード
ラン（和光純薬工業（株）ＩＩＩＫ）６０ｇにトルエン
５４０ｍ１とエタノール６０ｍ１を加え、これに５０％
水酸化ナトリウム水溶液８１ｇを滴下した後、５０℃に
加熱し、１時間攪拌した。これに、モノクロル酢酸３５
ｇをトルエン：エタノール＝９＝１の混合溶媒１００ｍ
１に溶解したものを加え、更に５０℃で１時間攪拌した
。この反応液に更に水酸化ナトリウム水溶液とモノクロ
ル酢酸溶液を加える前記の操作を、２度繰り返した後、
冷却し、−晩装置した。これを、９０％メタノール　１
１中に流し込み、生じた沈殿を濾取し、乾燥して１４２
ｇの粗結晶を得た。得られた粗結晶を１４２０ｍ１の蒸
留水に溶解し、この溶液のｐＨを希塩酸を用いて８に調
整した。

これに、メタノール１２．７８１を、攪拌下に滴下し、
生じた沈殿を濾取し、９０％メタノール５００ｍ１で洗
浄後、乾燥し、目的のカルボキシメチル化カードラン（
以下、ＣＭＯＬと略記する。）を得た。

実施例１゜ （試薬） ・ＥＴ溶液 エンドトキシン（デイフコ社製、Ｅ、ｃｏｌｉ　０１１
１：８４株由来のリボ多１１）を注射用蒸留水を用いて
溶解し、これを適宜希釈したものを使用した。

・ＯＬ温溶 液Ｔを含まないカードラン（和光純薬工業（株）製）を
、ＥＴを含まない５０ｍＭ　ＮａＯＨ水溶液に５ｍｇ／
ｍｌとなるように溶解した後、注射用蒸留水で適宜希釈
したものを用いた。

・ＡＬ温溶 液ムルス属のカブトガニ由来のＡＬ温溶液凍結乾燥品（
以下、ＬＡＬと略記する。和光線薬工業（株）製、ゲル
化感度：　０．０３　Ｅｌ／ｍｌ、５＋ｎｌ用。）をＥ
Ｔを含まない０．１Ｍ　Ｔｒｉｓ−塩酸緩衝液（ｐＨ７
，３）　５ＩＩ１１に溶解して得たり、ＡＬ温溶液使用
した。

（検体） 上記のＥＴ溶液、ＯＬ温溶液び注射用蒸留水を用いて、
　　ｌｎｇ／ｍｌ　ＥＴ溶液、５ｏｎ（／ｍｌ　Ｇ　Ｌ
溶液及び、Ｅ　Ｔ　：　ｌ　ｎｇ／ｍｌ及びＧ　Ｌ　：
　５０ｎｇ／ｍｌを含む溶液を調製して検体とした。

（操作法） 検体０．．１＊ｌに注射用蒸留水０．９＊ｌを混合し、
沸騰水浴中に所定時間放置した後、氷冷し、注射用蒸留
水で全量１＋ａｌにメスアップしたものを処理済試料と
して、トキシンメーターＥＴ−２０１，（和光純薬工業
（株）Ｗ４）を用いて、常法に従い以下の手順で測定を
行った。

０．１＊ｌのＬＡＬ溶液に０．１＊ｌの処理済試料を加
え、攪拌後、３７℃保温下に、透過光量比（％）（ＬＡ
Ｌ溶液と検体との混合直後の透過光量を１００％とした
場合の、所定時間に於ける透過光量の相対値、）が５％
減少するまでの時間（以下、Ｔｇと略記する。）を測定
した。

（結果） 結果を、表１に示す。

表１ 表１の結果から明らかな如く、検体中のＥＴは約１００
℃、６０分間の加熱処理で殆ど不活化されＧＬの測定へ
の影響は殆どなくなっているが、ＯＬは約１００℃、１
２０分間の加熱処理でも不活化されずにＬＡＬ溶液と反
応することが判る。

実験例１．血漿中のＥＴへの加熱処理による影響（試薬
） 実施例１と同じものを使用した。

（検体） Ｌｏｎｇ／ｍｌのＥＴ溶液０．１＊ｌと新鮮な正常人血
漿０．９＊ｌとを混合したものを検体とした。

（操作法） 検体０．１ａ＋１を注射用蒸留水０　、９＊ｌと混合し
、沸騰水浴中に所定時間放置した後、氷冷し、注射用蒸
留水で全量１＋ａｌにメスアップしたものを処理済試料
として、トキシンメーターＥＴ−２０１を用いて、実施
例１と同様の操作法により測定を行った。

また、対照として、処理済試料の代りに、１　ｎｇ／ｍ
ｌのＥＴ溶液を用いて同様の操作を行いＴ　ｇ　（＋Ｉ
Ｉを求めた。

（結果） 結果を、表２に示す。

以下余白 表２ ノール（９９，５％）を０．１ｍｌ添加し、それ以外は
前記と同様の操作を行ってＴｇ値を測定した。

結果を表３に示す。

表３ 表２の結果から明らかな如く、血漿中のＥＴは単に加熱
処理するだけでは不活化されないことが判る。また、新
鮮人血漿中にはＥＴとＬＡＬ溶液とのゲル化反応を阻害
する物質が存在し、この物質は沸騰水浴中で１０分間加
熱処理することにより不活化され・ることも判る。

そこで１次に、加熱処理をする際に、更にエタ表３の結
果から明らかな如く、エタノールを共存させて加熱処理
を行った場合、１２０分後には血漿中のＥＴが不活化さ
れたことが判る。

実験例２．血漿中のＥＴ以外のゲル化物質の測定（試薬
） ＬＡＬ溶液は実施例１と同じものを使用した。

・ＣＭＧＬ溶液 参考例１で得られたＣＭＧＬを注射用蒸留水に所定濃度
となるように溶解したものをＣＭＯＬ溶液とした。

（検体） 所定濃度のＣＭＧＬ溶液０．１■ｌと新鮮な正常人血漿
０．９＋１とを混合したものを検体とした。

（操作法） 検体０．１１１を注射用蒸留水０．９＋＊１と混合し沸
騰水浴中で１０分間放置したもの（第１＃）、及び検体
０．１■ｌ、注射用蒸留水０．９■ｌ及びエタノール０
．１■ｌを混合し沸騰水浴中で１２０分間放置したもの
（第２群）を、各々氷冷し、注射用蒸留水で全１ｋｌＩ
ｌｌにメスアップしたものを処理済試料として、トキシ
ノメーターＥＴ−２０１を用いて、実施例１と同様の操
作法により測定を行った。

尚、処理済試料の代りに、検体０．１■ｌと注射用蒸留
水０．９■ｌとを混合しただけのもの（第３１＃）につ
いても同様に測定を行った。

また、対照として、処理済試料の代りに、所定濃度のＣ
ＭＯＬ溶液と注射用蒸留水０．９■ｌとを混合しただけ
のものを用いて同様の操作を行いＴｇ値を求めた。

（結果） 結果を、表４に示す。

表４ 表４の結果から明らかな如く、エタノールを共存させて
加熱処理を行った場合でも、ＣＭＧＬは不活化されない
ことが判る。

また１表４の結果から新鮮人血漿中にはＣＭＧＬとＬＡ
Ｌ溶液とのゲル化反応を阻害する物質が存在し、この物
質は沸騰水浴中で１０分間加熱処理することにより不活
化されることも判る。

実験例３．血漿中のＥＴの不活化 （試薬） 実施例１と同じものを使用した。

（検体） 所定濃度のＥＴ溶液０．１ｍｌと新鮮な正常人血漿０　
、９＋ａｌとを混合したものを検体とした。

（操作法） 検体０．１ｍｌを注射用蒸留水０．９ｍｌと混合し沸騰
水浴中で１０分間放置したもの（第１群）、及び検体０
．１ｍｌ、注射用蒸留水０．９ｍｌ及びエタノール０．
１ｍｌを混合し沸騰水浴中で１２０分間放置したもの（
第２＃）を、各々水冷し、注射用蒸留水で全量１＋ａｌ
にメスアップしたものを処理済試料として、トキシノメ
ーターＥＴ−２０１を用いて、実施例１と同様の操作法
により測定を行った。

（結果） 結果を、表５に示す。

表５ 表５の結果から明らかな如く、約１０％のエタノール共
存下の加熱処理により、血漿中のＥＴ量として１　ｎｇ
／＋＊ｌまでは不活化できることが判る。

実施例２．血漿中のＥＴの不活化とＥＴ以外のゲル化物
質の測定 （試薬） ＥＴ溶液及びＬＡＬ溶液については実施例１と同じもの
を、ＣＭＧＬ溶液については実験例２と同じものを使用
した。

（検体） 所定濃度のＣＭＯＬ溶液０．１ｍｌと新鮮な正常人血１
ＪｌＯ，８ａ＋１とに、１０ｎｇ／ｍｌのＥＴ溶液若し
くは注射用蒸留水の０．１ｍｌを加えて混合したものを
検体とした。

（操作法） 検体０．１ｍｌ、注射用蒸留水０．９＋１及びエタノー
ル０．１ｍｌを混合し沸騰水浴中で１２０分間放置した
ものを、氷冷し、注射用蒸留水で全量１＋ｗｌにメスア
ップしたものを処理済試料として、トキシノメーターＥ
Ｔ−２０１を用いて、実施例１と同様の操作法により測
定を行った。

（結果） 結果を１表６に示す。

以下余白 表６ 表６の結果から明らかな如く、本発明の測定方法によれ
ば、血漿中のＥＴ以外のゲル化物質を簡便に且つ効率良
く測定し得ることが判る。

参考例２．血漿中のＥＴ以外のゲル化物質濃度と感染症
との関連性の検討 （試薬） 実施例１と同じものを使用した。

（検体） 新鮮人血１１１１２０検体を検体とした。

（操作法） 検体０．１＋ｍｌ、注射用蒸留水０　、９ｍｌ及びエタ
ノール０．１ｍｌを混合し沸謄水浴中で１２０分間放置
したものを、氷冷し、注射用蒸留水で全量１ｍｌにメス
アップしたものを処理済試料として、トキシンメーター
ＥＴ−２０１を用いて、実施例１と同様の操作法により
測定を行った。

また、所定濃度のＧＬ溶液を用いて、ＧＬＩＩ度とＴｇ
値との検量線を作成し、この検量線を用いて検体中のＥ
Ｔ以外のゲル化物質濃度をＧＬに換算して測定した。

（結果） 血漿中のゲル化物質濃度と感染症との相関関係を、第１
図に示す。

この結果から明らかな如く、血漿中のＥＴ以外のゲル化
物質は真菌症で有為に増加することが判る。

［発明の効果］ 以上述べた如く、本発明は、被検試料中に存在するＡＬ
溶液と反応してゲル化反応を起こす物質のうち、ＥＴの
みを選択的に且つ簡便に不活化し得る方法、及び被検試
料中のＥＴ以外のゲル化物質の測定方法を提供するもの
であり、従来の方法では判別及び定量の難しかった、試
料中に共存するＥＴとＥＴ以外のゲル化物質のうち−Ｅ
Ｔ以外のゲル化物質の定量を簡便に且つ精度良く行える
点に甚だ顕著な効果を奏するものであり、斯業に貢献す
るところ大なる発明である。

【図面の簡単な説明】

第１図は参考例２により得られた、血漿中のＥＴ以外の
ゲル化物質濃度と感染症との相関関係を示すものであり
、横軸の正常人又は各感染症患者の血漿中のＥＴ以外の
ゲル化物質濃度（ｐｇ／ｍｌ）を縦軸に沿ってプロット
したものである。 特許出願人　和光純薬工業株式会社 手続補正書 第１図 １、事件の表示 昭和６３年　特許願第２９６９５２号 ２、発明の名称 エンドトキシンの不活化方法 ３、補正をする者 事件との関係　特許出願人 〒　５４１ 住所　大阪府大阪市中央区道峰町三丁目１番２号ｒ平成
元年２年１３日住居表示変更」 ５、補正の対象 明細書の発明の詳細な説明の欄。 ６、補正の内容 （１）明細書１１頁６行目に記載のｒＧｏｏｄｓ’　Ｂ
ｕｆｆｅｒＪをｒＧｏｏｄ’ｓ　ＢｕｆｆｅｒＪと補正
する。 （２）明細書１２頁５行目に記載のｒＬａｍｉｎａｒｉ
ａ属」を削除する。 （３）明細書１２頁７行目から８行目にかけて記載の「
カワラタケ等）」の後に「、カビ類（例えば、Ａｓｐｅ
ｒｇｉｌｌｕｓ属等）」を挿入する。 以上

Claims (5)

【特許請求の範囲】
1. （１）被検試料を加熱処理することにより行うことを特
   徴とする、被検試料中のエンドトキシンの不活化方法。
2. （２）６０℃以上で少なくとも６０分加熱処理する請求
   項１に記載の不活化方法。
3. （３）加熱処理を行う際に水溶性の有機溶媒を共存させ
   る、請求項１又は２に記載の不活化方法。
4. （４）請求項１、２又は３の方法により処理を行つた被
   検試料とカブトガニ血球成分抽出液とを反応させ、その
   際に生ずるゲル化反応に基づく変化を測定することによ
   り行うことを特徴とする、被検試料中に含まれるエンド
   トキシン以外のゲル化物質の測定方法。
5. （５）試料中に含まれる、エンドトキシン以外のゲル化
   物質がβ−１，３−グルカン又は／及びその誘導体であ
   る、請求項４に記載の測定方法。