JPH02124832A

JPH02124832A - インターヘェロンβ組成物

Info

Publication number: JPH02124832A
Application number: JP1174811A
Authority: JP
Inventors: Shiyoujirou Yamazaki; 山崎　晶次郎; Makoto Taniguchi; 誠谷口; Michio Hara; 原　三千雄
Original assignee: Toray Industries Inc
Current assignee: Toray Industries Inc
Priority date: 1988-07-08
Filing date: 1989-07-05
Publication date: 1990-05-14

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】（産業上の利用分野）本発明は安定なインターフェロン−β（以下ＩＦＮ−β
と略す）組成物に関し、特に経鼻投与剤および生薬等に
適した組成物に関する。

（従来の技術）ウィルス増殖を抑制する作用を持つＩＦＮ−βは、細胞
培養法や遺伝子組換え法によって大量に製造する方法が
開発され、すでに医薬品として市販されている。医薬品
としての要請からＩＦＮ−βは高度に精製されるが、精
製が進むに従って安定性が低下するという問題が存在す
る。ＩＦＮ−βの安定性向上に関しては、ポリオールの
使用（特開昭５８−９２６１９号公報等）、ヒト血清ア
ルブミンの使用（国際公開ＷＯ３３１０１１９８）、有
機酸緩衝剤の使用（特開昭５８−９２６２１号公報）等
の方法がすでに提案され、一定の安定化効果が達成され
ている。

一方、ランタニド塩およびカルシウム塩はＩＦＮ溶液に
加えることができ、そしてＩＦＮが熱と機械力を受けた
とき、その生物学的活性の保存を助けるということも、
すでに特開昭５６−６５８２２号公報で知られているが
、界面活性剤等の失活要因となり得る物貰の共存下では
、たとえこれら金属塩が加えられても、十分な安定性は
得られていない。

ＩＦＮ−βは主に注射剤として投与されているが、呼吸
器系のウィルス怒染を予防するという観点からは経鼻投
与剤が検討され、またＢ型肝炎治療等には直腸投与剤も
考えられる。これら剤型は吸収促進剤を使用するものが
多く、。

経鼻投与剤では胆汁酸塩等の界面活性剤（特開昭６２−
１８５０３０号公報）、半割ではサリチル酸塩およびそ
の誘導体等がよく知られるところである。

ところが、これら胆汁酸塩およびサリチル酸塩等はＩＦ
Ｎ−βの失活要因となり、これら物質共存下でのＩＦＮ
−β安定化に対しては解決の糸口が見い出されていない
。

（発明が解決しようとする課題）本発明の目的は安定なＩＦＮ−β組成物、特に経鼻投与
剤、経肺投与剤および坐薬等に適したＩＦＮ−β組成物
を提供することにある。

（課題を解決するための手段）本発明の目的は、アルカリ土類金属塩またはランタニド
塩、アルブミンおよびインターフェロン−βを含んでな
るインターフェロン−β組成物により達成される。

本発明に用いられるＩＦＮ−βは細胞培養法によって得
られるものおよび遺伝子組換え法によって得られるもの
の両者を包含する。またその濃度はいかなる濃度であっ
てもよいが、通常は１０３〜１０８ＩＵ／ｒｎｌで用い
られる。

アルブミンはヒトおよび動物血清アルブミン、卵白アル
ブミンなどをさすが、好ましくは、ヒト血清アルブミン
（以下Ｈ８Ａと略す）である。

またその添加量は、ＩＦＮ−β１．０Ｘ１０６ＩＵ当た
り通常０．１〜２００■の範囲であるが、好ましくは０
．３〜１０■とするのが良い。

本発明で用いられるアルカリ土類金属塩は、例えば、マ
グネシウム塩、カルシウム塩で、塩としては塩化物など
の無機塩、酢酸塩等の有機酸塩等が挙げられるが１、好
ましくはその塩化物および乳酸塩である。また濃度は通
常０．０１〜５．０モルで、好ましくは０．１〜２．０
モルの範囲が良い。またランタニド塩はランタン塩、セ
リウム塩、ネオジム塩、サマリウム塩、カドリニウム塩
、ジスプロシウム塩、エルビウム塩、エルビウム塩、イ
ッテルビウム塩等で、塩としては塩化物などの無機塩、
酢酸塩等の有機酸塩で、好ましくはその塩化物が用いら
れる。

またその濃度は通常０．０００００５〜０，０１モルで
、好ましくは０．００００１〜０．０００５モルの範囲
がよい。

また吸収促進剤を添加する場合は界面活性剤、サリチル
酸塩誘導体、エナミン誘導体、Ｎ−アセチル化コラーゲ
ン誘導体、融合性脂質、脂肪酸塩等が用いられ、その濃
度は０．１〜８０％質量濃度の範囲である。

具体的には、本発明組成物を経鼻投与剤として使用する
場合は、吸収促進剤として界面活性剤が通常用いられる
。これらの界面活性剤としては、例えば、グリココール
酸、タウロコール酸のような胆汁酸のアルカリ金属塩、
ポリオキシエチレ・ンラウリルエーテル、ポリオキシエ
チレンセチルエーテル、ポリオキシエチレンノニルフェ
ニルエーテルのような非イオン界面活性剤、ならびにサ
ポニン等が挙げられる。これら界面活性剤の含有量はそ
の種類により適宜用いられるが一般には０．１〜１０質
量濃度（ｗ／Ｖ％）の範囲で用いられる。

経肺投与剤、坐薬として使用する場合にも上記界面活性
剤が用いられるが、吸収促進剤として次のものが通常用
いられる。例えば、上述の界面活性剤の他、サリチル酸
のアルカリ金属塩およびサリチル酸誘導体すなわち５−
メトキシサリチル酸のアルカリ金属塩、エナミン誘導体
、Ｎ−アセチル化コラーゲン誘導体、カプリン酸等の脂
肪酸塩、モノグリセリド、ジグリセリドなどを含む融合
性脂質等が挙げられる。これらの含有量も種類によって
異なり、適宜用いられるが、−収約には０．１〜８０％
質景濃度の範囲で用いられる。

本発明の組成物は、凍結乾燥剤、粉末剤、液剤１．ゲル
、スプレー、軟膏等の種々の剤型に製剤化が可能である
。

本発明の組成物には、クエン酸緩衝液や、酢酸Ｍ＠液の
ような有機酸緩衝液（ｐＨ３〜７〉あるいは、トリス−
塩酸緩衝液（ｐ　Ｈ７〜９）等を添加する場合があるが
、そのｐＨが３〜９の範囲であれば問題はない。

（実施例）次に実施例により、本発明をさらに具体的に説明する。

なお実施例中のＩＦＮ−β力価測定はサンドイッチＥＩ
Ａ　（酵素免疫測定法）により行い、国際標準品で較正
したＥＩＡ用標準品を用い、国際単位（ＩＵ）に換算し
た。また、シンドビスウィルスあるいは■ＳＶウィルス
およびヒト羊膜由来の株化細胞（ＦＬ細胞）を用いた細
胞変性効果（ＣＰＥ）阻止法によってもＩＦＮ−β力価
がＥＩＡによる結果と一致することを確認した。

実施例１〜２７および比較例１〜９細胞培養法によって製造されたヒト２倍体繊維芽細胞由
来のＩＦＮ−β２Ｘ１０４〜１×１０５ＩＵ／ｍｌを用
い、０．１１Ｍ）リス−塩酸緩衝液（ｐＨ７）あるいは
酢酸Ｍ街液中での各種組成物を調製した。これら組成物
を３７℃で３あるいは２４時間放置後、力価を測定し、
初期力価を１００％としてＩＦＮ−β力価残存率を算出
した。結果を表１〜表６に示す。

表１では、Ｈ３Ａ無添加のＩＦＮ−βにＹｂＣｌ３を添
加してもＩＦＮ−β安定化効果は現われない（比較例１
．２）が、ＩＳＡ共存下で０゜５ｍＭＹｂＣｌ３添加し
た組成物にはその効果が現われることは明らかである（
実施例１）。０゜５Ｍ　　ＣａＣｌ２またはＨｇＣｌ２
添加組成物においても同様である（比較例３．４．実施
例２．３）。

（以下余白）ＩＦＮ−β 比活性使用濃度Ｈ９Ａ濃度ｂＣ１ｓＣａＣＩ＊　　および緩衝液１ｘ１０・　！υ／ｍｇ２ｘｌＯ’　　１０７ｍ１３３８ｇ７ｍ１０、　５　　ｍＭ０．５Ｍ０．１１Ｍトリス−ＭＣＩ（ｐＨ＊　：　３７℃、２４時間後の力価残存率を示した。

表２ではさらに失活要因となり得るグリココール酸ナト
リウム（ＳＧＣ）３ｍａ／ｍｌ共存下において、０．５
　ｍＭＹｂｃ１３．０．５Ｍ　　ＣａＣｌ　２またはＨ
に１ｃ１２添加組成物のＩＦＮ−β安定化を示したもの
である（実施例４〜６）、また、これら組成物のｐＨが
トリス−塩酸緩衝液のｐＨ７でも、酢酸緩衝液のｐＨ５
，５でも、ＩＦＮ−β組成物の安定性に変わりのないこ
とを示す（表２−Ａ、Ｂ）。

ＩＦＮ−β 比活性使用濃度Ｈ８Ａ浪度ＹｂＣｌ寥Ｃａ１ｌ置　およびＳＧＣ緩衝液１ｘｌＯ’　　ＩＵ／ｍｇ１ｘｌＯ’　　１０７ｍ１３３　μｇ／ｍｌＱ、５ｍＭ０、５　Ｍ３　　ｍｇ／ｍ１０．１１Ｍ）リス−）ＩＣＩ（ｐＨ７）２１ｍ言ｆｍｆ
ｉ＋ｍＮ＊富ｔｐ　量１−　カＩＦＮ−β 比活性使用濃度ＨＳＡ濠度Ｙ　ｂ　ＣＩ　５ＣａＣＩ＊　　および　Ｍ［ＣＩ。

ＧＣ緩衝液１ｘｌＯ”　　ＩＵ／ｍｇ１ｘｌＯ’　　ＩＵ／ｍ１３３　μｇ／ｍ１０．５ｍＭ０、５　　Ｍ３　　ｍｇ／ｍ＋０．１２Ｍ　　酢酸績街液（ｐＨ５，５）３７℃。

３時間後の力価残存率を示した。

表３に示す通り、本発明のＩＦＮ−β組成物はＩＳＡ添
加が不可欠であるが、その濃度は３３〜１０００　μｇ
／ｍｌの範囲でＳＧＣ共存ＩＦＮ−β組成物の安定性に
はまったく影響なく、良好な結果を示す。

ＩＦＮ−β 比活性使用濃度ＭｇＣ１宕ＧＣＭ新液１ｘｌＯ’　　ｒＵ／ｍｇ１ｘ１０曝　ＴＵ／ｍ１０、５　Ｍ３　　ｍｇ／ｍ１７０　　ｍＭ　　酢酸Ｍ衝液（ｐＨ５，５）＊　　：３７℃、３時間後の力価残存率を示した。

ＳＧＣ共存ＩＦＮ−β組成物中に添加されるＹｂＣ１３
、Ｈ（ＩｃＩ　２の濃度は表４１表５に示すように、Ｙ
ｂＣ１：＋で１０ＭＭ以上、ｏｇｃ＋２で１０ｍＭ以上
でＩＦＮ−β組成物安定化効果が示される。

ＩＦＮ−β ＳＡＧＣｙＩ折液３３　μｇ／ｍ１３　　ｍｇ／ｍ１７０　　ｍＭ　　酢酸Ｍ新液（ｐＨ５，５）３７℃。

３時間後の力価残存率を示した。

−支定首ＩＦＮ−β 比活性使用濃度ＳＡＧＣｙＩ衝新液　　　１ｘｌＯ’　　ＩＵ／ｍｇ１　ｘｌ’Ｏ’　　Ｉ　Ｕ／ｍ　１３３　μｇ／ｍｌ：　　　３　　ｍｇ／ｍｌニア０ｍＭ　　酢酸）！ｆｆｉ液（ｐＨ５，５）傘　：
　３７℃、３時間後の力ｇ１残存率を示した。

失活要因物置としてはＳＧＣの他に、サリチル酸ナトリ
ウム（ＳＳ）共存ＩＦＮ−β組成物においても、ＹｂＣ
ｌ３、Ｈｃ＋ＣＩ２あるいはＣａＣｌ２の添加によるＩ
ＦＮ−β安定化効果が示されることが明らかとなった。

また、ＳＧＣ共存ＩＦＮ−β組成物の場合と同様、組成
物中に添加される緩衝液またそのｐＨには影響されない
（表６−Ａ、Ｂ）。

ＩＦＮ−β 比活性使用濃度ＳＡｂＣＩｍＣａＣ１＊およびＳＳ濃度緩衝液１ｘｌＯ”　　Ｉυ／　ｍ　ｇ１ｘｌＯ’　　Ｉυ／ｍ１３３　μｇ／ｍ１０、　５　　ｍＭ０、５　　ＭＯｌ　５　％０．１１Ｍ）リス−ＭＣＩ　（ｐＨ７）：　３７℃、３
時間後の力価残存率を示した。

ＩＦＮ−β 比活性使用濃度ＳＡＣａＣ１ｍおよびＳＳ濃度緩衝液１ｘｌＯ”　　ｒＵ／ｍｇ１ｘｌＯ＠　ＩＵ／ｍ１３３　μｇ／ｍ１０、５　Ｍ０、　５　　％０、　１２Ｍ　　′＃ｌｌ綬衝液（新液５゜＊　：　３７℃、３時間後の力１歿存率を示した。

表７に示すように、細胞培養法によって得られたヒトＩ
ＦＮ−βの他に大腸菌由来遺伝子組換えヒトＩＦＮ−β
（ｒｅＩＦＮ−βと略す）も同様に０　、　１　ｍＭＹ
ｂｃｌ　３．０．５ＭＨｇＣＩｚを添加すると安定な組
成物が得られることがわかった（実施例２６．２７＞。

ＳＡｂＣＩｓＭｇＣＩ＊ＳＧＣＭ新液：　　３４　μｓ／ｍ１０．１ｍＭ０、５　Ｍ３ｍｇ／ｍ１７０ｍＭ　　酢ｖＩｙＩ街液（ｐＨ５，５）３７℃。

３時間後の力価残存率を示した。

実施例２８および比較例１０表８に示される組成の乾燥粉末を各々メノー乳鉢で均一
によく混合し、１００メツシユのふるいにかけ、均一な
粉末状組成物を得た。

−群３羽のニューシーラントホワイト雌性家兎（体重３
．０〜３．５ｋｇ＞の鼻腔内に下記組成製剤をそれぞれ
ｌＸ１０６ＩＵ１５■／　ｋｓｒ（比較例１０）、ｌＸ
１０６　ＩＵ１５．６７■／ｋｇ（実施例２８）投与し
、投与後１５分、３０分、１時間、３時間目の家兎の耳
静脈より採血した。粉剤の投与は簡易型噴霧器を使用し
て無麻酔下正常の状態で行なった。

表８　　ＩＦＮ−β組成物の家兎経鼻投与実験マグネシ
ウム；２■を含むマグネシウム含有製剤は非含有製剤に比べ鼻粘膜より吸
収され血液中に現れる量として同等以上の量を示した。

これは鼻粘膜上で溶解した製剤の安定性にマグネシウム
塩が寄与しているためである。

（発明の効果）本発明のＩＦＮ−β組成物はＩＦＮ−β失活要因物贋共
存下でさえもＩＦＮ−βを安定に保つことができ、特に
失活要因物質を吸収促進剤として用いる経鼻投与剤、経
肺投与剤および生薬等に適した組成物を特徴する特許出願大東し株式会社

Claims

【特許請求の範囲】

（１）アルカリ土類金属塩またはランタニド塩、アルブ
ミンおよびインターフェロン−βを含んでなるインター
フェロン−β組成物。
（２）アルカリ土類金属塩またはランタニド塩、アルブ
ミン、吸収促進剤およびインターフェロン−βを含んで
なるインターフェロン−β組成物。