JPH02109974A - 微生物菌体の分離方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、微生物菌体の分離方法に関し、さらに詳細に
は、微生物菌体の自己消化液から、この自己消化液中に
含まれている自己消化した微生物廃菌体を分離・除去す
る方法に係わる。

〔従来の技術、発明が解決しようとする問題点〕従来、
たとえば、カタラーゼ、ペルオキシダーゼ、アミラーゼ
およびプロテアーゼなどのような各種の酵素が、工業上
に多く使用されている。しかして、これらの酵素は、一
般に、微生物菌体に含有されており、これらの微生物菌
体内から、これらの微生物菌体を、たとえば、自己消化
させるなどによりこれらの酵素をこれらの微生物菌体外
に排出させて採取されていた。しかしながら、この自己
消化液から目的とする酵素を採取するためには、これに
先立って、自己消化した微生物廃菌体を自己消化液から
分離除去する必要がある。

微生物菌体の自己消化液から自己消化廃菌体を分離する
ために、環境保全上、全く問題のないことから、高分子
凝集剤であるキトサンを使用して、微生物廃菌体が凝集
・分離されている。この場合に、自己消化された微生物
廃菌体の凝集・分離が不充分であり、そのために自己消
化された微生物廃菌体の除去が困難となることが多く、
さらにまた、目的とする酵素の活性が低下することが少
なくなかった。

〔問題点を解決するための手段、作用〕本発明者らは、
キトサンを使用して微生物菌体の自己消化液中の自己消
化廃菌体を凝集・分離させるに際して、自己消化廃菌体
を、速やかに、かつ、確実に凝集・分離させ、しかも、
目的とする酵素の活性を低下させないような方法を開発
すべく、鋭意、研究を重ねた結果、キトサンとともにポ
リアクリル酸系界面活性剤を添加することにより、目的
とする酵素の活性を低下させることなく、自己消化廃菌
体を、速やかに、かつ、確実に凝集・分離させ、以て、
自己消化液中の自己消化された微生物廃菌体の除去が容
易になることを発見して、この発見に基づいて、本発明
に到達した。

すなわち、本発明は、微生物菌体の自己消化液から微生
物廃菌体を分離する方法において、微生物菌体の自己消
化液にキトサンおよびポリアクリル酸系界面活性剤を添
加して、自己消化した微生物廃菌体を凝集・分離させる
ことを特徴とする微生物菌体の分離方法である。

本発明を適用する微生物の自己消化液には、特に制限が
ない。すなわち、微生物の種類および目的とする酵素の
種類ならびに自己消化の方法および条件などには特に制
限がなく、自己消化は常法により行われる。なお、本発
明の方法により、自己消化した微生物廃菌体（以下単に
　廃菌体　と記すこともある）を、目的とする酵素の活
性を低下させず、しかも、確実に、かつ、効率よく凝集
・分離させるためには、たとえば、次のようにして自己
消化して得られた自己消化液が好ましい。

すなわち、微生物の培養液から、たとえば、遠心分離お
よび濾過のような常法により菌体を分離・回収する。こ
の分離された菌体（以下　分離菌体　と記す）は、分離
・回収直後または保存後に自己消化に付される。なお、
この保存においては、たとえば、−１０″Ｃ程度のよう
な低温で冷凍保存すれば、４〜１０か月程度経過しても
目的とする酵素の活性の低下はほとんどない。また、保
存に際しては、分離菌体をりん酸緩衝液に懸濁すること
が好ましい。

この分離菌体を自己、消化するには、自己消化開始時の
自己消化液の菌体濃度（乾燥菌体重換算以下同様）は、
通常は、１０〜２０ｗ　ｔχ程度とされる。

この菌体濃度の範囲内にあれば、分離菌体をそのまま自
己消化してもよく、また、分離菌体を、たとえば、りん
酸緩衝液のような緩衝液に懸濁させて自己消化してもよ
い。

自己消化は、酸素のない雰囲気で行うことが好ましく、
そのためには、密閉容器中で窒素ガス雰囲気中で行われ
る。分離・回収直後の分離菌体を自己消化する場合には
、たとえば、ベンゼンおよびシクロヘキサンなどのよう
な自己消化剤を使用することが好ましく、保存後の分離
菌体を自己消化する場合には、このような自己消化剤を
強いて使用する必要はないが、自己消化剤を使用するこ
とを妨げない。

自己消化の条件は、使用する微生物の種類、目的とする
酵素の種類などによって異なるが、通常は、たとえば、
次の如くである。すなわち、分離・回収直後の分離菌体
を自己消化するには、たとえば、自己消化液のｐＨは７
〜８．５程度、シクロヘキサンの使用量は分離菌体また
は菌体懸濁液に対して０．５〜５νｏｌχ程度、好まし
くは１〜２νＯ１χ程度、温度は２０〜６０’Ｃ程度、
好ましくは３５〜４５°Ｃ程度、緩い撹拌下で行われる
。なお、自己消化液のｐｌ＋の調整は、２０〜３０ｗ　
ＬＸの水酸化カリウム水溶液で行うことが好ましい。こ
の場合の所要時間は、使用する微生物の種類ならびに温
度およびｐＨなどによって異なり、−概に特定し得ない
が、通常は、１０〜４０時間程度で充分である。

分離・回収した分離菌体を、たとえば、−１０°Ｃ程度
の低温で、たとえば、４ケ月程度の長期間にわたって保
存した菌体を自己消化するには、たとえば、自己消化液
のｐＨは６〜９程度、好ましくは７〜９程度、温度は１
０〜６０°Ｃ程度、好ましくは２０〜４５°Ｃ程度、緩
い撹拌下または撹拌しないで行われる。

なお、自己消化液のｐＨの調整は２０〜３０−ｔχの水
酸化カリウム水溶液で行うことが好ましい。

この自己消化の所要時間は、使用する微生物の種類、保
存時間ならびに温度およびｐｉなどによって異なり、−
概に特定し得ないが１、通常は、２〜２４時間程度とさ
れる。なお、たとえば、６〜２４か月のように保存期間
の長い分離菌体の場合には、室温乃至常温で４〜２４時
間程度放置するだけで、自己消化する場合もある。

このようにして自己消化を終了した自己消化液の廃菌体
濃度（乾燥廃菌体換算　以下同様）は、自己消化開始時
の自己消化液の菌体濃度の約半分となり、５〜１０ｗ　
ｔ％程度となる。

このような自己消化液が、本発明方法の凝集・分離に付
される（本発明方法の凝集・分離に付される自己消化液
を　被処理液　と記すこともある以下同様）。

被処理液は、自己消化後、出来る限り時間を経過しない
ものが好ましく、たとえば、保存温度が５°Ｃ程度の場
合には、長くても２週間であり、１週間以下が好ましい
。自己消化後の時間が長くなる程、目的とする酵素の活
性低下が大きくなり、しかも、凝集・分離が悪くなる。

特に、冷凍保存菌体を解凍して自己消化剤を使用するこ
となく自己消化した液から、廃菌体を凝集・分離させる
ときには、自己消化後、可及的速やかに凝集・分離処理
することが好ましい。

被処理液の廃菌体濃度が高い場合には、廃菌体の凝集・
分離が悪くなるので、本発明方法において被処理液の廃
菌体濃度は、６ｗｔ％以下とされる。

一方、この被処理液の廃菌体濃度が低い場合には、廃菌
体の分離・回収はよくなるが、得られる酵素液中の酵素
の含有率が低くなる。このようなことを考慮して、本発
明方法において被処理液の廃菌体濃度は適宜決定される
が、実用上、好ましくは、５〜２０ｗ　ｔχの範囲から
選択される。

自己消化液の廃菌体濃度が、この廃菌体濃度よりも高い
場合には、この自己消化液を希釈することが好ましいが
、このときの希釈剤として、たとえば、目的とする酵素
を緩衝液に溶解した溶液、純水、グリセリン、メタノー
ルおよびエタノールなどを使用することができる。

この被処理液に、キトサンおよびポリアクリル酸系界面
活性剤が添ｉｎされる。

キトサンは、キチンの脱アセチル化物であり、高分子凝
集剤として公知の物質であるが、本発明で使用されるキ
トサンは、その原料、製法、脱アセデル化の方法および
条件、脱アセチル化率、平均分子量ならびに状態などに
は特に制限はなく、市販品を好適に使用することができ
る。

また、キトサンは、そのまま自己消化液に添加すること
もできるが、実用上、水、希薄な目的とする酵素溶液、
グリセリンとエタノールと水との混合溶液およびメタノ
ール水溶液などで希釈された希釈液として添加すること
が好ましい。

市販品の代表例として、ハイモロツク６００３Ｌおよび
ハイモロツク６００３　（いずれも井守有機研究所製）
などがあるが、これらは、いずれもキトサン濃度が１０
−ｔχとされたキトサンの酢酸水溶液であり、これらの
中に含有されているキトサンは、いずれも、脱アセチル
化率は約７０〜８０χであり、分子量は、前者では１万
程度、後者では７〜８万程度である。

キトサンの使用量は、被処理液に含有されている廃菌体
量（乾燥廃菌体重量換算　以下同様）に対して、キトサ
ンとして（以下同様）４〜８ｗｔχ程度、好ましくは、
５〜６ｗ　ＬＸ程度とされる。

ポリアクリル酸系界面活性剤としては、実用上、ポリア
クリル酸ソーダが好適に使用される。

ポリアクリル酸ソーダは、その製法、平均分子量および
状態には特に制限はなく、凝集剤として使用されている
市販品を好適に使用することができる。この市販品の代
表例として井守有機研究所製食品グレードがあるが、こ
れは、平均分子量が１．５万〜２万程度のポリアクリル
酸ソーダを０．２〜１ｗｔχ含有するポリアクリル酸ソ
ーダ水溶液である。なお、ポリアクリル酸ソーダの濃度
が１ｗｔχを越えるポリアクリル酸ソーダ水溶液は、そ
の粘度が高すぎて作業性が悪（なる。

ポリアクリル酸ソーダの使用量は、キトサンの使用量、
ポリアクリル酸ソーダ水溶液のポリアクリル酸ソーダ濃
度、微生物の種類および自己消化液の廃菌体濃度によっ
て異なり、−概に特定し得ないが、一般に、被処理液中
の廃菌体量に対して０．５〜１．５ｗｔχ程度とされる
。　ポリアクリル酸ソーダまたはポリアクリル酸ソーダ
水溶液は、使用に先立って滅菌することが好ましい。

キトサンとポリアクリル酸系界面活性剤との添加順序に
は、本質的に特に制限はないが、被処理液が、保存期間
が、たとえば、２週間を越えるような比較的長期間の自
己消化液の場合および冷凍保存菌体を解凍して使用し自
己消化剤を使用しないで自己消化させた自己消化液の場
合には、一般に、ポリアクリル酸系界面活性剤の全量ま
たは一部を先に添加するとポリアクリル酸系界面活性剤
を後に添加するよりも凝集・分離し易いことがある。

処理温度は、５〜２０°Ｃ程度であり、この範囲で低い
方が好ましい。被処理液のｐＨは、５〜８程度、好まし
くは、６〜７程度とされるが、凝集処理の初期において
は、約７程度とし、後期においては６．４程度とするこ
とが特に好ましい。

自己消化液としては、自己消化時に緩く撹拌されたもの
が好ましい。

自己消化液の保存期間が長くなる程、また、冷凍保存菌
体を解凍して使用し自己消化剤を使用しないで自己消化
した液については、一般に、凝集・分離しにくくなるが
、このような場合に、たとえば、前記のようにポリアク
リル酸系界面活性剤を先に添加するほかに、キトサンの
使用量を増加したり、硫酸マグネシウムおよび硫酸鉄な
どの金属塩ならびにりん酸緩衝液を添加するなどにより
凝集・分離を速やかに、かつ、確実にすることができる
。

このようにして処理された被処理液では、廃菌体が凝集
して肉眼で見える程度のフロック状となるが、このフロ
ック状となった廃菌体を分離・除去して、目的とする酵
素を含有する液が得られる。

この被処理液を放置すると、比較的短時間で容易に２〜
３層に分離するが、この上層が、凝集・分離した廃菌体
の層であり、中間層および／または下層が酵素を含有す
る層であり、透明であるか乃至は僅かに濁っている。こ
の上層を傾瀉などにより除去することにより、廃菌体を
除去・分離し、この中間層および／または下層を回収し
て、目的とする酵素を含有する液が得られる。この目的
とする酵素を含有する液には微量の廃菌体が含有するこ
とが多いので、必要に応じて、この目的とする酵素を含
有する液をさらに濾過または遠心分離してもよい。

また、この被処理液を、たとえば、遠心分離および晒綿
布などを使用した濾過により凝集・分離された廃菌体を
分離・除去して、目的とする酵素を含有する濾液が得ら
れる。

本発明の方法は、カタラーゼを製造するためにカタラー
ゼを含有するハンセヌラ　ポリモルファＨａｎｓｅｎｕ
ｌａ　ｐｏｌｙｍｏｒｐｈａのような酵母菌体をヘキサ
ンで自己消化して得られた自己消化液に好適に適用され
る。

〔実施例〕

本発明を実施例によりさらに具体的に説明する。

なお、本発明は、これらの実施例に限定されるもきでは
ない。

実施例　１ 自己消化液の調製： カタラーゼを得るために、ハンセヌラ　ポリモルファ　
Ｈａｎｓｅｎｕｌａ　ｐｏｌｙｍｏｒｐｈａの自己消化
液を調製した。

すなわち、ハンセヌラ　ポリモルファＨａｎｓｅｎｕ−
Ｉａ　ｐｏｌｙｍｏｒｐｈａ　ＩＦＯ−１０２４の培養
液から、遠心分離によって菌体を分離・回収した。

この分離直後の菌体をりん酸緩衝液（ｐｌ＋７．０）懸
濁させた（菌体濃度２０ｗ　ｔり。

この懸濁液に３５ｗｔＸの水酸化カリウム水溶液を加え
てそのｐＨを８．５に調製した液に、この液に対して１
．５ｖｏｌχとなるようにシクロヘキサンを加え、次い
で、容器を密閉して、この容器内の空隙部の空気を窒素
ガスで置換したのち、液温を４５°Ｃに保ちつつ、７時
間にわたって撹拌して、自己消化液を得た。

この自己消化液の活性値及び廃菌体濃度は、それぞれ、
１２万ユニツト／滅および１０ｎｔχであった。

凝集・分離： この自己消化液（享菌体濃度１０−１χ）を、約５℃で
５日間保存し、これを凝集・分離処理に付した。

すなわち、活性値１２万ユニツ）　／　ｍｌ、　ｐＨ７
，０の自己消化液５０ｄをビーカーに入れ、これに、純
水３２−とハイモロツク６３００Ｌ　（キトサン濃度１
０ｗｔＸのキトサンの酢酸溶液）３−とを混合して得ら
れたキトサン希釈液を撹拌しつつ添加して、次いで、１
分間強く撹拌した。これに、ポリアクリル酸ソーダの濃
度が０．５Ｗｔχのポリアクリル酸ソーダ水溶液５−を
添加して、廃菌体のフロックの生成を確認して撹拌を停
止した。なお、この処理期間中は、液温を約７°Ｃに保
った。この時の処理液のｐ＋＋は６．４であった。また
、フロックの大きさは、３〜４ｍｍ程度であった。

この処理液を、晒綿布で濾過してフロックを除去し、活
性値が７．２万ユニツ）　／　ａｌｌであり、透明な粗
カタラーゼ液５８．８Ｍｉを得た。

このときの自己消化液の活性値に対するカタラーゼ液の
活性値収率は、７０．５χであった。

また、端線布上には、約３０ｃＩ！のフロックがあった
が、このフロックを約１５−の純水でリンスした結果、
２万ユニット／−の希薄刃タラーゼ液１３．５−を得た
。この希薄カタラーゼ液のカタラーゼも加算すると活性
収率は７５．１χとなる。

実施例　２ 実施例１と同様にして得られ、約５℃でｌＯ日間保存さ
れた自己消化液をつぎのように処理してカタラーゼ液を
得た。

すなわち、活性値１２万ユニット／ｙｔｄｌ、　ｐＨ７
，０の自己消化液５０ａｌｌをビーカーに入れ、これに
、実施例１と同様にして得られた活性値２万ユニツト／
ｍｌのリンス希薄カタラーゼ液３２−とハイモロツク６
３００Ｌ　（キトサン濃度１０ｉｖｔχのキトサンの酢
酸溶液）３ａｄとを混合して得られたキトサン希釈液を
撹拌しつつ添加して、ついで、１分間強く撹拌した。

これに、ポリアクリル酸ソーダの濃度が０．５Ｗｔχの
ポリアクリル酸ソーダ水溶液５−を添加して、廃菌体の
フロックの生成を確認して撹拌を停止した。なお、この
処理期間中は、液温を約７°Ｃに保った。　　この時の
処理液のｐＨは６．４であった。また、フロックの大き
さは、３〜４ｒｍｎ程度であった。

この処理液を、晒綿布で濾過してフロックを除去し、活
性値が８，０６万ユニット／−であり、透明なカタラー
ゼ液５８．８ｍを得た。

このときの自己消化液の活性値に対するカタラーゼ液の
活性値収率は、７１．４χであった。

実施例　３ 実施例１と同様にして得られ、約５℃で１４日間保存さ
れた自己消化液をつぎのように処理してカタラーゼ液を
得た。

すなわち、活性値１２万ユニッｌ−／ｍｆ、　ｐＨ７，
０の自己消化液５０ｄをビーカーに入れ、これに、純水
１８　ｍｌ、グリセリン１０　ｍｌおよびエタノール４
−から成る混合液とハイモロツク６３００Ｌ　（キトサ
ン濃度１０ｗｔχのキトサンの酢酸溶液）：Ｍとを混合
して得られたキトサン希釈液を撹拌しつつ添加して、つ
いで、１分間強く撹拌した。これに、ポリアクリル酸ソ
ーダの濃度が０．５Ｗｔχのポリアクリル酸ソーダ水溶
液７ｍを添加して、廃菌体のフロックの生成を確認して
撹拌を停止した。なお、この処理期間中は、液温を約７
℃に保った。この時の処理液のｐＨは６．４であった。

また、フロックの大きさは、３〜４Ｍ程度であった。

この処理液を、晒綿布で濾過してフロックを除去し、活
性値が７．２万ユニツ）　／　ｍｌであり、透明なカタ
ラーゼ液５８．７−を得た。

このときの自己消化液の活性値に対するカタラーゼ液の
活性値収率は、７０．４χであった。

実施例　４ 実施例１と同様にして得られ、約５°Ｃで１０日間保存
された自己消化液をつぎのように処理してカタラーゼ液
を得た。

すなわち、活性値１２万ユニツト／ｍｌ、　ｐＨ７，０
の自己消化液５０ｍ１ｌをビーカーに入れ、これに、メ
タノールｌ〇−を純水２２ｍに熔解したメタノール水溶
液とハイモロツク６３００Ｌ　（キトサン濃度１０ｗｔ
％のキトサンの酢酸溶液）３−とを混合して得られたキ
トサン希釈液を撹拌しつつ添加して、ついで、１分間強
く撹拌した。これに、ポリアクリル酸ソーダの濃度が０
．５Ｗｔχのポリアクリル酸ソーダ水溶液９ｍｌを添加
して、廃菌体のフロックの生成を確認して撹拌を停止し
た。なお、この処理期間中は、液温を約７”Ｃに保った
。この時の処理液のｐＨは６．４であった。また、フロ
ックの大きさは、３〜４ｍｍ程度であった。

この処理液を、晒綿布で濾過してフロックを除去し、活
性値が７．０５万ユニット／−であり、透明なカタラー
ゼ液６０．４ｍｌを得た。

このときの自己消化液の活性値に対するカタラーゼ液の
活性値収率は、７１．０χであった。

実施例　５ 実施例　１と同様にして菌体懸濁液を得た。

この菌体懸濁液に３５ｈ　ｔχの水酸化カリウム水溶液
を加えてそのｐｌ＋を７．０に調製した液を一１０°Ｃ
で約６日間冷凍保存した。この時にこの冷凍菌体の約５
０ｗ　ｔχ程度が自己消化されていた。この冷凍菌体を
解凍して得られた液に３５Ｗｔχの水酸化カリウム水溶
液を加えてｐＨ８，５に調整し２０’Ｃで約１２時間撹
拌しないで密閉状態に保ち、自己消化液を得た。

この自己消化液の活性値および廃菌体濃度は、それぞれ
１２万ユニツト／ｄおよび１０ｎｔＸであった。

この自己消化液を１０″Ｃに冷却して、凝集・分離に付
した。

凝集・分離： この自己消化液５０ｍ１に、０．５ｗｔχポリアクリル
酸ソーダ水溶液２．５ｍｌを添加して撹拌して充分に混
合した。次で、これに、純水３２ｍ１とハイモロツク６
３００Ｌ　（キトサン濃度１０−ｔχのキトサンの酢酸
溶液）３ｍｌｌとを混合して得られキトサン希釈液を添
加して、ゆるく撹拌しつつ再度０．５ｗｔχポリアクリ
ル酸ソーダ水溶液２　、５　ｍｌを添加して混合した後
、廃菌体のフロックの生成を確認して撹拌を停止した。

なお、この処理期間中は、液温を約１０″Ｃに保った。

この時の処理液のｐＨは６．４であった。また、フロッ
クの大きさは、３〜４Ｍ程度であった。

この処理液を、晒綿布で濾過してフロックを除去し、活
性　値が７，２万ユニツト／　ｍｐ、であり、透明な粗
カタラーゼ液５９ｍ１を得た。

原料総活性値に対する濾液の粗カタラーゼ液の活性値収
率は、７０．８χであった。

実施例　６ １０−ｔχキトサン溶液３ｍ１ｌを実施例　１と同様に
して得られた活性値２万ユニツト／　ｒｒ１４のリンス
希薄刃タラーゼ液３２ｍで希釈したキトサン希釈液を使
用したほかは実施例　５と同様に行なって、濾液として
活性値が８．０６万ユニツト／ｍｌの僅かに濁った粗カ
タラーゼ液５８．８ｍを得た。

原料総活性値に対する濾液の粗カタラーゼ液の活性値収
率は、７１．４χであった。

実施例　７ １０−ｔχキトサン溶液３ｍｌを純水２２ｍｆｆ１およ
びグリセリン１０ｉｎ１で希釈したキトサン希釈液を使
用し、１回あたりの０．５ｗｔχポリアクリル酸ソーダ
水溶液の量を５−とじたほかは実施例　５と同様に行な
って、濾液として活性値が７．６万ユニツト／　ｍｌの
僅かに濁った粗カタラーゼ液５８．７ｍＮを得た。

原料総活性値に対する濾液の粗カタラーゼ液の活性値収
率は、７４．３χであった。

実施例　８ １０−ｔχキトサン溶液３ｒｒｄを純水２７Ｗｄ！、お
よびエタノール５ｍｌで希釈したキトサン希釈液を使用
し、１回あたりの０．５ｗｔχボリア、クリル酸ソーダ
水？容液の量を３．５ｍｌとしたほかは実施例　５と同
様に行なって、濾液として活性値が７．１万ユニツト／
ｍｌの僅かに濁った粗カタラーゼ液５９．２ｍｌを得た
。

原料総活性値に対する濾液の粗カタラーゼ液の活性値収
率は、？０．１χであった。

実施例　９ １０ｗｔχキトサンキトサン希液３−８ｍ２、グリセリ
ンＬＯｍｌｈよびエタノール４ｍｌで希釈したキトサン
希釈液を使用し、１回あたりの０　、５ｗ　ＬＸポリア
クリル酸ソーダ水溶液の量を５ｍＲとしたほがは実施例
　５と同様に行なって、濾液として活性値が６．９５万
ユニツト／ｒｎｌの僅かに濁った粗カタラーゼ液５９ｍ
２を得た。

原料総活性値に対する濾液の粗カタラーゼ液の活性値収
率は、６８．３χであった。

実施例１０ １０ｗｔχキトサンキトサン希液３水２２ｍβおよびメ
タノールｌＯｍβで希釈しなキトサン希釈液を使用し、
１回あたりの０．５ｉ４ｔχポリアクリル酸ソーダ水溶
液の量を４．５−としたほかは実施例　５と同様に行な
って、濾液として活性値が７．０５万ユニツト／ｍｌの
僅かに濁った粗カタラーゼ液６０．４−を得た。

原料総括性値に対する濾液の粗カタラーゼ液の活性値収
率は、７１χであった。

実施例１１ 実施例　５と同様にして得られた自己消化液５０ｍ１に
、３０ｗ　ｔχりん酸緩衝液（りん酸１カリ　１重量部
およびりん酸２カリ３重量部、ｐＨ７，０）　１　ｍｌ
を添加して充分に混合し、この液に１０−ｔχキトサン
溶液３ｍｅを純水３１−で希釈したキトサン希釈液を添
加して１分間強く撹拌し、これに０　、５ｗ　ｔ！ポリ
アクリル酸ソーダ水溶液５−を添加して撹拌し、廃菌体
のフロックが生成されてから撹拌を停止した。

なお、処理期間中は、液温を約１５℃に保った。この時
の処理液のｐＨは６．４であり、また、フロックの大き
さは３〜４ｍｍ程度であった。

この処理液を晒綿布で濾過して濾液５Ｂ、８ｍｆｆ１が
得られた。この濾液は、透明な、活性値が７．２万ユニ
ツト／　ｍｌの粗カタ、ラーゼ液であった。

原料総括性値に対する濾液の粗カタラーゼ液の活性値収
率は、７０．６χであ、た。

実施例１２ １０ｗｔχキトサン溶液３１Ｒ１を実施例　１と同様に
して得られた活性値２万ユニット／−のリンス希薄刃タ
ラーゼ液３１ｍ１で希釈したキトサン希釈液を使用した
ほかは実施例１１と同様に行なって、濾液として活性値
が８．０６万ユニシ）　／　ｍｌの透明な粗カタラーゼ
液５８．８ｍｌを得た。

原料総括性値に対する濾液の粗カタラーゼ液の活性値収
率は、７１．６χであった。

実施例１３ １０ｗｔχキトサンキトサン希液３純水２１ｍＲおよび
グリセリン１０Ｉｎ１で希釈したキトサン希釈液を使用
し、０．５ｗｔχポリアクリル酸ソーダ水溶液の量を７
ｍβとしたほかは実施例１１と同様に行なって、濾液と
して活性値が７．２万ユニツト／ｍβの透明な粗カタラ
ーゼ液５８．７ｒｎ１を得た。

原料総括性値に対する濾液の粗カタラーゼ液の活性値収
率は、７０．４χであった。

実施例１４ １０ｗｔχキトサン溶液を純水３　ｍｌ　１７　ｍｌｌ
　、グリセリン１０ｍ１およびエタノール４ｄで希釈し
たキトサン・希釈液を使用し、０．５ｗｔχポリアクリ
ル酸ソーダ水溶液の量を１ｍｆｌとしたほかは実施例１
１と同様に行なって、濾液として活性値が７，１万ユニ
ツト／　ｍｅの透明な粗カタラーゼ液５９．２＃Ｌ１！
を得た。

原料総括性値に対する濾液の粗カタラーゼ液の活性値収
率は、７０．１χであった。

実施例１５ １０ｗ　Ｌ′ｔキトサン溶液溶液３壱Ｂ水２１ｍ１およ
びメタノール１Ｏｒｎ１で希釈したキトサン希釈液を使
用し、０．５ｗｔ２：ポリアクリル酸ソーダ水溶液の量
を１ｍｌ。

とじたほかは実施例１１と同様に行なって、濾液として
活性値が７，０５万ユニツト／　ｍｌの透明な粗カタラ
ーゼ液６０．４−を得た。

原料総括性値に対する濾液の粗カタラーゼ液の活性値収
率は、７１．０！であった。

実施例１６ 実施例　５と同様にして得られた自己消化液５０ｍ１に
、３０ｗ　ｔχりん酸緩衝液（りん酸１カリ　１重量部
およびりん酸２カリ３重量部、ｐＨ７，０）　１ｍｊ！
および２０ｗ　ＬＸ硫酸マグネシウム水溶液１ｍｌを添
加して充分に混合し、この液に１０ｗｔχキトサンキト
サン希液３純水３０ｒｎｌｌで希釈したキトサン希釈液
を添加して１分間強（撹拌し、これに０．５ｗｔχポリ
アクリル酸ソーダ水溶液５ｍｆを添加して撹拌し、フロ
ックが生成されてから撹拌を停止した。なお、この処理
期間中は、液温を約１０°Ｃに保った。この時の処理液
のｐＨは６．４であり、また、フロックの大きさは４〜
５ｍｍ程度であった。

この処理液を晒綿布で濾過して濾液５６．９ｍｆが得ら
れた。この濾液は、透明な、活性値が７．４万ユニツト
／ｍβの粗カタラーゼ液であった。

原料総括性値に対する濾液の粗カタラーゼ液の活性値収
率は、７０．２χであった。

実施例１７ １０ｗｔχキトサン溶液３ｒｎＲを実施例　１と同様に
して得られた活性値２万ユニッｌ−／ｍｆｆ１のリンス
希薄カタラーゼ液３０−で希釈したキトサン希釈液を使
用したほかは実施例１６と同様に行なって、濾液として
活性値が８．１万ユニツ）／ｍｆの透明な粗カタラーゼ
液５８Ｉｎｌを得た。

原料総活性値に対する濾液の粗カタラーゼ液の活性値収
率は、７１．２χであった。

実施例１８ １０ｗｔχキトサンキトサン希液３２０−およびグリセ
リン１０ｍ１で希釈したキトサン希釈液を使用し、０．
５ｗｔχポリアクリル酸ソーダ水溶液の量を６ｄとした
ほかは実施例１６と同様に行なって、濾液として活性値
が７．１万ユニツト／ｒｎＲの透明な粗カタラーゼ液６
０．１−を得た。

原料総活性値に対する濾液の粗カタラーゼ液の活性値収
率は、７１．１χであった。

実施例１９ １０ｗｔχキトサンキトサン希液３水１６−、グリセリ
ン１０艷およびエタノール４−で希釈したキトサン希釈
液を使用し、０．５ｗｔχポリアクリル酸ソーダ水溶液
の量を１ｍｌとしたほかは実施例１６と同様に行なって
、濾液として活性値が７．０５万ユニント／　ｔａｌｌ
の透明な粗カタラーゼ液６０．４−を得た。

原料総活性値に対する濾液の粗カタラーゼ液の活性値収
率は、７１．０χであった。

実施例２０ １（ｂｖｔχキトサン溶液３−を純水２０ｒＩｄｌおよ
びメタノールＩＯ−で希釈したキトサン希釈液を使用し
、０．５ｗｔχポリアクリル酸ソーダ水溶液の量を１ｍ
ｌとしたほかは実施例１６と同様に行なって、濾液とし
て活性値が７．１万ユニット／−の透明な粗カタラーゼ
液５９．２ｍを得た。

原料総活性値に対する濾液の粗カタラーゼ液の活性値収
率は、７０．１χであった。

〔発明の効果〕

本発明により、環境を汚染せずに、目的とする酵素の活
性を実質的に低下させることなく、簡便な方法で、自己
消化液中の廃菌体を容易に除去することが可能となる。

特許出願人　三菱瓦斯化学株式会社 代表者西川　禮二

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 微生物菌体の自己消化液から自己消化した微生物廃菌体
   を分離する方法において、微生物菌体の自己消化液にキ
   トサンおよびポリアクリル酸系界面活性剤を添加して、
   自己消化した微生物廃菌体を凝集・分離させることを特
   徴とする微生物菌体の分離方法。