JPS61181394A - リボ核酸の単離取得方法 - Google Patents
リボ核酸の単離取得方法Info
- Publication number
- JPS61181394A JPS61181394A JP2259285A JP2259285A JPS61181394A JP S61181394 A JPS61181394 A JP S61181394A JP 2259285 A JP2259285 A JP 2259285A JP 2259285 A JP2259285 A JP 2259285A JP S61181394 A JPS61181394 A JP S61181394A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- solution
- rna
- extract
- ribonucleic acid
- yeast
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
（産業上の利用分野）
本発明は、リボ核酸の単離取得方法、特に廃糖蜜などの
培養液で増殖した酵母菌体中のリボ核酸（以下、ＲＮＡ
という）を単離取得する方法に関する。
培養液で増殖した酵母菌体中のリボ核酸（以下、ＲＮＡ
という）を単離取得する方法に関する。
（従来の技術）
酵母菌体から熱食塩水によってＲＮＡを抽出し、得られ
た抽出液を酸で処理してＲＮＡを沈降させ単離取得する
方法は公知である。このようなＲＮＡ抽出液中には濁り
成分、すなわち菌体内物質などに由来するコロイド状ま
たは懸濁状の不溶解分（以後、不溶解分という）が存在
しており、酸によってＲＮＡを沈降させるときにこの不
溶解分が共に沈降して混入するため得られたＲＮＡの純
度を低下させる。この不溶解分を除去するには、蛋白質
類の凝集剤とじて知られているポリアクリル酸ナトリウ
ムなどを抽出液に加えてこの不溶脇骨を凝集沈降させ分
離して、得られた清澄な抽出液に酸を添加して酸性にす
ることにより高純度のＲＮＡを得る方法（特公昭５６−
４６８３７号公報）が適用できる。また、抽出液に蛋白
質分解酵素を作用させて、抽出液中の不溶脇骨を分解し
て除去することは微生物産生物の精製法として慣用され
ており、この方法も酵母からのＲＮＡ抽出液に適用でき
る。従来、亜硫酸パルプ廃液（リグニンスルフォン酸塩
を含む）中の糖を資化させて増殖した酵母から熱食塩水
によってＲＮＡを抽出した場合には、この不溶脇骨は抽
出液に対して５〜１００ ｐｐｍのポリアクリル酸ナト
リウムなどの凝集剤を添加して凝集沈降させるか、また
は抽出液に蛋白質分解酵素を作用させて分解させること
によって比較的有効に除去でき、高純度のＲＮＡを取得
することができた。
た抽出液を酸で処理してＲＮＡを沈降させ単離取得する
方法は公知である。このようなＲＮＡ抽出液中には濁り
成分、すなわち菌体内物質などに由来するコロイド状ま
たは懸濁状の不溶解分（以後、不溶解分という）が存在
しており、酸によってＲＮＡを沈降させるときにこの不
溶解分が共に沈降して混入するため得られたＲＮＡの純
度を低下させる。この不溶解分を除去するには、蛋白質
類の凝集剤とじて知られているポリアクリル酸ナトリウ
ムなどを抽出液に加えてこの不溶脇骨を凝集沈降させ分
離して、得られた清澄な抽出液に酸を添加して酸性にす
ることにより高純度のＲＮＡを得る方法（特公昭５６−
４６８３７号公報）が適用できる。また、抽出液に蛋白
質分解酵素を作用させて、抽出液中の不溶脇骨を分解し
て除去することは微生物産生物の精製法として慣用され
ており、この方法も酵母からのＲＮＡ抽出液に適用でき
る。従来、亜硫酸パルプ廃液（リグニンスルフォン酸塩
を含む）中の糖を資化させて増殖した酵母から熱食塩水
によってＲＮＡを抽出した場合には、この不溶脇骨は抽
出液に対して５〜１００ ｐｐｍのポリアクリル酸ナト
リウムなどの凝集剤を添加して凝集沈降させるか、また
は抽出液に蛋白質分解酵素を作用させて分解させること
によって比較的有効に除去でき、高純度のＲＮＡを取得
することができた。
（発明が解決しようとする問題点）
しかしながら、廃糖蜜などのリグニンスルフォン酸塩を
含まない培地で培養した酵母菌体から熱食塩水によって
抽出したＲＮＡ抽出液は、ポリアクリル酸ナトリウムな
どの凝集剤または蛋白質分解酵素による不溶脇骨の除去
効果が不充分であり、したがって前記の亜硫酸バルブ廃
液に由来する酵母からのＲＮＡ抽出液に比較して、ＲＮ
Ａの取得率が著しく低下するという問題点があった。
含まない培地で培養した酵母菌体から熱食塩水によって
抽出したＲＮＡ抽出液は、ポリアクリル酸ナトリウムな
どの凝集剤または蛋白質分解酵素による不溶脇骨の除去
効果が不充分であり、したがって前記の亜硫酸バルブ廃
液に由来する酵母からのＲＮＡ抽出液に比較して、ＲＮ
Ａの取得率が著しく低下するという問題点があった。
（問題点を解決するための手段）
本発明者等はこの問題点を解決するため鋭意研究した結
果、廃糖蜜などのりゲニンスルフォン酸塩を含まない培
地で培養した酵母を食塩水で抽出して得たＲＮＡ抽出液
に、先ず蛋白質分解酵素を作用させ、次いでこの抽出液
にポリアクリル酸ナトリウムと第２鉄塩およびアルミニ
ウム塩から選ばれた水溶性金属塩とよりなる凝集剤を添
加することによって抽出液中の不溶脇骨を凝集沈降させ
て除去した後、得られた清澄な抽出液に塩酸を添加して
酸性にすると、蛋白質分解酵素と凝集剤を併用しない場
合と比較してより高純度のＲＮＡを著しく高い収率で取
得できることを見出して本発明を完成した。
果、廃糖蜜などのりゲニンスルフォン酸塩を含まない培
地で培養した酵母を食塩水で抽出して得たＲＮＡ抽出液
に、先ず蛋白質分解酵素を作用させ、次いでこの抽出液
にポリアクリル酸ナトリウムと第２鉄塩およびアルミニ
ウム塩から選ばれた水溶性金属塩とよりなる凝集剤を添
加することによって抽出液中の不溶脇骨を凝集沈降させ
て除去した後、得られた清澄な抽出液に塩酸を添加して
酸性にすると、蛋白質分解酵素と凝集剤を併用しない場
合と比較してより高純度のＲＮＡを著しく高い収率で取
得できることを見出して本発明を完成した。
本発明に係るリボ核酸の単離取得方法は、酵母から食塩
水によって抽出したリボ核酸の抽出液に、この抽出液の
液量に対して５０〜１ｏｏｏｐｐｍの蛋白質分解酵素を
液温３０〜８０℃にて１〜８時間作用させる工程と、前
記抽出液の液温を５０〜９０℃に調整し前記液量に対し
てポリアクリル酸ナトリウム５〜１００ ｐｐｍと第２
鉄塩およびアルミニウム塩から選ばれた水溶性金属塩４
０〜５００ ｐｐｍとを添加して前記抽出液中の不溶脇
骨を凝集沈降させて除去する工程と、前記抽出液の上澄
液に酸を添加して酸性としリボ核酸を沈降させる工程と
よりなることを特徴とする。
水によって抽出したリボ核酸の抽出液に、この抽出液の
液量に対して５０〜１ｏｏｏｐｐｍの蛋白質分解酵素を
液温３０〜８０℃にて１〜８時間作用させる工程と、前
記抽出液の液温を５０〜９０℃に調整し前記液量に対し
てポリアクリル酸ナトリウム５〜１００ ｐｐｍと第２
鉄塩およびアルミニウム塩から選ばれた水溶性金属塩４
０〜５００ ｐｐｍとを添加して前記抽出液中の不溶脇
骨を凝集沈降させて除去する工程と、前記抽出液の上澄
液に酸を添加して酸性としリボ核酸を沈降させる工程と
よりなることを特徴とする。
本発明で用いる酵母はりゲニンスルフォン酸塩を含まな
い培養液で増殖した酵母が好ましく、酵母の種類はＲＮ
Ａの蓄積量が多いものがより好ましいが属種は選ばない
。
い培養液で増殖した酵母が好ましく、酵母の種類はＲＮ
Ａの蓄積量が多いものがより好ましいが属種は選ばない
。
酵母からのＲＮＡの抽出は熱食塩水によって行われる。
具体的にはまず培養を終了した酵母培養液に食塩を添加
するか、この培養液から分離した酵母に食塩水を加えて
酵母の固形分濃度として７〜１４重量％、食塩濃度とし
て４〜７重量％の液とじＰＨは７〜８に調整することが
好ましい。次に、この液を９０〜９９℃にて好ましくは
９５〜９９℃にて３〜６時間加熱することによりＲＮＡ
が液相に抽出される。このＲＮＡ抽出液を冷却した後、
まず蛋白質分解酵素を作用させる。本発明で用いる蛋白
質分解酵素は中性乃至微アルカリ性領域において活性を
有するものであればよく、例えばトリプシン（ｔｒｙｐ
ｓｉｎ ）、パパイン（ｐａｐａｉｎ）あるいはバチル
ス属（Ｂａｃｉ１１ｕｓ属）、ストレプトマイセス属（
Ｓ ｔｒｅｐ ｔｏｍｙｃｅｓ属）、アスペルギルス属
（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ属）、ストレプトコツカス属
（Ｓ ｔｒｅｐ ｔｏｃｏｃｃｕｓ属）等の微生物が産
出する蛋白質分解酵素があげられる。これらの酵素の添
加量はＲＮＡ抽出液の液量に対して５０〜１１０００ｐ
ｐが好ましく、酵素を作用させる条件は初期ＰＨを４〜
８とし、液温３０〜８０°Ｃ１好ましくは４０〜７５°
Ｃにおいて１〜８時間である。次に、酵素処理を終了し
た抽出液の液温を５０〜９０°Ｃに調整して、ポリアク
リル酸ナトリウムと塩化第２鉄、硫酸第２鉄などの第２
鉄塩および硫酸アルミニウム等のアルミニウム塩から選
ばれた水溶性金属塩を添加して抽出液中の不溶解分を凝
集沈降させる。本発明のポリアクリル酸ナトリウムは分
子量５００万以上好ましくは１０００万以上のものが用
いられ、分子量３００万以下のものは効果が劣る。ポリ
アクリル酸ナトリウムおよび前記金属塩の添加量は、そ
れぞれ５〜１１００ｐｐおよび４０〜５００ ｐｐｍで
あることが好ましい。水溶性金属塩の併用によって不溶
解分の凝集がより効果的に行われるが、その添加量が多
過ぎるとＲＮＡの一部が共に沈降して失われる恐れがあ
る。凝集は室温においても可成り進行するが、液温を５
０〜９０℃に保持することによって凝集物の成長が促進
される。以上のようにして凝集沈降させられた不溶解分
は、遠心分離、濾過あるいは５０〜９０°Ｃで１〜４時
間静置することよりなる自然沈降法によって除去され、
前記ＲＮＡ抽出液は清澄な抽出液となる。
するか、この培養液から分離した酵母に食塩水を加えて
酵母の固形分濃度として７〜１４重量％、食塩濃度とし
て４〜７重量％の液とじＰＨは７〜８に調整することが
好ましい。次に、この液を９０〜９９℃にて好ましくは
９５〜９９℃にて３〜６時間加熱することによりＲＮＡ
が液相に抽出される。このＲＮＡ抽出液を冷却した後、
まず蛋白質分解酵素を作用させる。本発明で用いる蛋白
質分解酵素は中性乃至微アルカリ性領域において活性を
有するものであればよく、例えばトリプシン（ｔｒｙｐ
ｓｉｎ ）、パパイン（ｐａｐａｉｎ）あるいはバチル
ス属（Ｂａｃｉ１１ｕｓ属）、ストレプトマイセス属（
Ｓ ｔｒｅｐ ｔｏｍｙｃｅｓ属）、アスペルギルス属
（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ属）、ストレプトコツカス属
（Ｓ ｔｒｅｐ ｔｏｃｏｃｃｕｓ属）等の微生物が産
出する蛋白質分解酵素があげられる。これらの酵素の添
加量はＲＮＡ抽出液の液量に対して５０〜１１０００ｐ
ｐが好ましく、酵素を作用させる条件は初期ＰＨを４〜
８とし、液温３０〜８０°Ｃ１好ましくは４０〜７５°
Ｃにおいて１〜８時間である。次に、酵素処理を終了し
た抽出液の液温を５０〜９０°Ｃに調整して、ポリアク
リル酸ナトリウムと塩化第２鉄、硫酸第２鉄などの第２
鉄塩および硫酸アルミニウム等のアルミニウム塩から選
ばれた水溶性金属塩を添加して抽出液中の不溶解分を凝
集沈降させる。本発明のポリアクリル酸ナトリウムは分
子量５００万以上好ましくは１０００万以上のものが用
いられ、分子量３００万以下のものは効果が劣る。ポリ
アクリル酸ナトリウムおよび前記金属塩の添加量は、そ
れぞれ５〜１１００ｐｐおよび４０〜５００ ｐｐｍで
あることが好ましい。水溶性金属塩の併用によって不溶
解分の凝集がより効果的に行われるが、その添加量が多
過ぎるとＲＮＡの一部が共に沈降して失われる恐れがあ
る。凝集は室温においても可成り進行するが、液温を５
０〜９０℃に保持することによって凝集物の成長が促進
される。以上のようにして凝集沈降させられた不溶解分
は、遠心分離、濾過あるいは５０〜９０°Ｃで１〜４時
間静置することよりなる自然沈降法によって除去され、
前記ＲＮＡ抽出液は清澄な抽出液となる。
次に、得られた清澄な抽出液を３〜１５℃に冷却した後
、塩酸を添加してＰＨを約１．５にするとＲＮＡが沈澱
する。この沈澱物を回収して水酸化ナトリウム水溶液を
用いて塩酸を中和することにより溶解させる。このよう
にして得られた溶液をスプレードライヤーなどを用いて
乾燥することにより、高純度のＲＮＡを高収率で取得す
ることができる。
、塩酸を添加してＰＨを約１．５にするとＲＮＡが沈澱
する。この沈澱物を回収して水酸化ナトリウム水溶液を
用いて塩酸を中和することにより溶解させる。このよう
にして得られた溶液をスプレードライヤーなどを用いて
乾燥することにより、高純度のＲＮＡを高収率で取得す
ることができる。
（作用）
本発明に用いる廃糖蜜などのリグニンスルフォン酸塩を
含まない培養液で増殖した酵母菌体から本発明の方法に
よって高純度のＲＮＡが高収率で安定して得られるのは
、次のような理由によるものと考えられる。すなわち、
前記培養条件による酵母から熱食塩水によって抽出され
たＲＮＡのある部分は蛋白質との複合体を形成しており
、その複合体は酸によって沈澱しない性質のものであり
、この抽出液に直接に塩酸を添加したとき沈澱するＲＮ
Ａ０中に含まれてこないので、ＲＮＡの収率が低下する
ものと推測される。これに反して本発明の方法によれば
、ＲＮＡ抽出液に、まず蛋白質分解酵素を作用させるこ
とにより前記ＲＮＡ−蛋白質複合体の大部分がＲＮＡと
部分的に分解された蛋白質とに分離される。したがって
次の工程でポリアクリ剤を用いて凝集沈降させることに
より、ＲＮＡの損失を伴わずに蛋白質などの不溶解分（
不純物）が有効に除去される。したがって、得られた清
澄なＲＮＡ抽出液に塩酸を添加して酸性にすることによ
り、最初から遊離状態にあったＲＮＡに加えて複合体か
ら分離されたＲＮＡも確実に回収されるので高純度のＲ
ＮＡが高収率で安定して得られるものと推測される。
含まない培養液で増殖した酵母菌体から本発明の方法に
よって高純度のＲＮＡが高収率で安定して得られるのは
、次のような理由によるものと考えられる。すなわち、
前記培養条件による酵母から熱食塩水によって抽出され
たＲＮＡのある部分は蛋白質との複合体を形成しており
、その複合体は酸によって沈澱しない性質のものであり
、この抽出液に直接に塩酸を添加したとき沈澱するＲＮ
Ａ０中に含まれてこないので、ＲＮＡの収率が低下する
ものと推測される。これに反して本発明の方法によれば
、ＲＮＡ抽出液に、まず蛋白質分解酵素を作用させるこ
とにより前記ＲＮＡ−蛋白質複合体の大部分がＲＮＡと
部分的に分解された蛋白質とに分離される。したがって
次の工程でポリアクリ剤を用いて凝集沈降させることに
より、ＲＮＡの損失を伴わずに蛋白質などの不溶解分（
不純物）が有効に除去される。したがって、得られた清
澄なＲＮＡ抽出液に塩酸を添加して酸性にすることによ
り、最初から遊離状態にあったＲＮＡに加えて複合体か
ら分離されたＲＮＡも確実に回収されるので高純度のＲ
ＮＡが高収率で安定して得られるものと推測される。
なお、亜硫酸パルプ廃液中の糖（リグニンスルフォン酸
塩を含む）を資化させて増殖した酵母からのＲＮＡ抽出
液においても、蛋白質分解酵素と凝集剤とを併用するこ
とによりＲＮＡの純度および収率が向上する場合がある
がリグニンスルフォン酸塩を含有しない培地で培養した
酵母におけるような顕著な効果は示さない。
塩を含む）を資化させて増殖した酵母からのＲＮＡ抽出
液においても、蛋白質分解酵素と凝集剤とを併用するこ
とによりＲＮＡの純度および収率が向上する場合がある
がリグニンスルフォン酸塩を含有しない培地で培養した
酵母におけるような顕著な効果は示さない。
（実施例）
以下、実施例によって本発明の方法をさらに詳細に説明
するが本発明の方法はこの実施例に限定されるものでは
ない。
するが本発明の方法はこの実施例に限定されるものでは
ない。
（実施例１および比較例１）
廃糖蜜（モラセス）を原料として培養したサツ力ロミセ
スセレビシｘ （Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ５ｅｒ
ｅｖｉｓｉａｅ）の菌体を遠心分離により分離、洗浄し
、菌体ケーク１ ｋｇを得た。これを３１！の水に懸濁
し食塩１５０ｇを添加して溶解後、９５℃で４時間加熱
処理しリボ核酸（ＲＮＡ）を抽出した。
スセレビシｘ （Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ５ｅｒ
ｅｖｉｓｉａｅ）の菌体を遠心分離により分離、洗浄し
、菌体ケーク１ ｋｇを得た。これを３１！の水に懸濁
し食塩１５０ｇを添加して溶解後、９５℃で４時間加熱
処理しリボ核酸（ＲＮＡ）を抽出した。
次に遠心分離により菌体を除去した後、この菌体を８０
０ｍβの水で洗浄しこの洗浄液も加えてＲＮＡ抽出液３
．８βを得た。このＲＮＡ抽出液を２等分し、一方は本
発明の方法により、もう一方は比較例として従来の方法
によりＲＮＡの精製、回収を試みた。
０ｍβの水で洗浄しこの洗浄液も加えてＲＮＡ抽出液３
．８βを得た。このＲＮＡ抽出液を２等分し、一方は本
発明の方法により、もう一方は比較例として従来の方法
によりＲＮＡの精製、回収を試みた。
（実施例１）
上記のＲＮＡ抽出液１．９ ｊ２を用い、苛性ソーダで
ＰＨ６に調整後、パパイン（蛋白質分解酵素）を対液３
００ ｐｐｍ添加し、攪拌しつつ４０℃で６時間保った
後、７０℃まで昇温し塩化第２鉄を対液２００ ｐｐｍ
添加して攪拌し、さらにポリアクリル酸ナトリウムを対
液４０ｐｐｍ添加することにより、不溶解分を凝集沈降
させた。濾過により凝集スラッジを除去して得られた清
澄なＲＮＡ溶液を５℃に冷却した後、塩酸を用いてＰＨ
を１．５に調整する事によりＲＮＡを沈澱させた。
ＰＨ６に調整後、パパイン（蛋白質分解酵素）を対液３
００ ｐｐｍ添加し、攪拌しつつ４０℃で６時間保った
後、７０℃まで昇温し塩化第２鉄を対液２００ ｐｐｍ
添加して攪拌し、さらにポリアクリル酸ナトリウムを対
液４０ｐｐｍ添加することにより、不溶解分を凝集沈降
させた。濾過により凝集スラッジを除去して得られた清
澄なＲＮＡ溶液を５℃に冷却した後、塩酸を用いてＰＨ
を１．５に調整する事によりＲＮＡを沈澱させた。
沈澱したＲＮＡを遠心分離によって回収した後、水に懸
濁し苛性ソーダでＰＨ５，６に調整し溶解した後、スプ
レードライ法によりＲＮＡ製品１２ｇを得た。本方法に
よるＲＮＡ抽出液からのＲＮＡの収率は９６％であり、
得られたＲＮＡの純１度は８６．５％であった。
濁し苛性ソーダでＰＨ５，６に調整し溶解した後、スプ
レードライ法によりＲＮＡ製品１２ｇを得た。本方法に
よるＲＮＡ抽出液からのＲＮＡの収率は９６％であり、
得られたＲＮＡの純１度は８６．５％であった。
（比較例１）
実施例１で使用したものと同じＲＮＡ抽出液１．９ｉを
用いパパインによる処理を行わない他は実施例１と同様
の操作を行い、ＲＮＡ製品１０．５ｇを得た。本比較例
におけるＲＮＡの収率は８４％、得られたＲＮＡの純度
は７６％であった。
用いパパインによる処理を行わない他は実施例１と同様
の操作を行い、ＲＮＡ製品１０．５ｇを得た。本比較例
におけるＲＮＡの収率は８４％、得られたＲＮＡの純度
は７６％であった。
（実施例２および比較例２）
グルコースを原料として培養したキャンディダウチルス
（Ｃａｎｄｉｄａ ｕｔｉｌｉｓ）の菌体を遠心分離に
より分離、洗浄し菌体ケーク２ ｋｇを得た。
（Ｃａｎｄｉｄａ ｕｔｉｌｉｓ）の菌体を遠心分離に
より分離、洗浄し菌体ケーク２ ｋｇを得た。
これを６１の水に懸濁し食塩水３００ ｇを添加して溶
解後９５℃で４時間加熱処理しＲＮＡを抽出した。遠心
分離により菌体を除去した後、菌体を１．６１の水で洗
浄し、洗浄液を合わせてＲＮＡ抽出液７．６１を得た。
解後９５℃で４時間加熱処理しＲＮＡを抽出した。遠心
分離により菌体を除去した後、菌体を１．６１の水で洗
浄し、洗浄液を合わせてＲＮＡ抽出液７．６１を得た。
このＲＮＡ抽出液を２等分し、一方を本発明の方法によ
り、もう一方は比較例として従来の方法により、ＲＮＡ
の精製、回収を試みた。
り、もう一方は比較例として従来の方法により、ＲＮＡ
の精製、回収を試みた。
（実施例２）
上記のＲＮＡ抽出液３．８βを用い苛性ソーダでＰＨ６
に調整後、微生物産生の蛋白質分解酵素プロチンＰＣ−
１０（大和化成製）を対液３００ ｐｐｍ添加し、攪拌
しつつ７５℃で６時間保った後、塩化第２鉄を対液１５
０ ｐｐｍ添加して攪拌し、さらにポリアクリル酸ナト
リウムを対液３０ｐｐｍ添加する事により不溶解分を凝
集沈降させた。
に調整後、微生物産生の蛋白質分解酵素プロチンＰＣ−
１０（大和化成製）を対液３００ ｐｐｍ添加し、攪拌
しつつ７５℃で６時間保った後、塩化第２鉄を対液１５
０ ｐｐｍ添加して攪拌し、さらにポリアクリル酸ナト
リウムを対液３０ｐｐｍ添加する事により不溶解分を凝
集沈降させた。
遠心分離により凝集スラッジを除去し、得られた清澄な
ＲＮＡ溶液を５℃に冷却した後、塩酸でＰＨを１．５に
調整し、ＲＮＡを沈澱させた。
ＲＮＡ溶液を５℃に冷却した後、塩酸でＰＨを１．５に
調整し、ＲＮＡを沈澱させた。
沈澱したＲＮＡを遠心分離により回収した後、水に懸濁
し苛性ソーダでＰＨ５，６に調整し、溶解した後、スプ
レードライ法によりＲＮＡ製品２４、１ ｇを得た。本
方法による、ＲＮＡ抽出液からのＲＮＡの収率は９６．
４％であり、得られたＲＮＡの純度は、８７％であった
。
し苛性ソーダでＰＨ５，６に調整し、溶解した後、スプ
レードライ法によりＲＮＡ製品２４、１ ｇを得た。本
方法による、ＲＮＡ抽出液からのＲＮＡの収率は９６．
４％であり、得られたＲＮＡの純度は、８７％であった
。
（比較例２）
実施例２で使用したものと同しＲＮＡ抽出液３．８１を
用い、実施例２と同じようにプロチンＰ Ｃ−１０を用
いて処理した後、凝集剤を添加する事なく５°Ｃに冷却
し以後実施例２と同じ操作によりＲＮＡ製品２２．４ｇ
を得た。本比較例におけるＲＮＡの収率は８９．６％、
ＲＮＡの純度は、７８％であった。
用い、実施例２と同じようにプロチンＰ Ｃ−１０を用
いて処理した後、凝集剤を添加する事なく５°Ｃに冷却
し以後実施例２と同じ操作によりＲＮＡ製品２２．４ｇ
を得た。本比較例におけるＲＮＡの収率は８９．６％、
ＲＮＡの純度は、７８％であった。
（発明の効果）
以上説明してきたように、本発明の方法によれば酵母か
ら熱食塩水によって抽出して得たＲＮＡ抽出液に、まず
蛋白質付酵素を次にポリアクリル酸ナトリウムなどの凝
集剤を特定条件の下で順次作用させることにより、この
抽出液中の不溶脇骨を有効に除去して、高純度のＲＮＡ
を高収率で確実に安定して回収、取得できる。
ら熱食塩水によって抽出して得たＲＮＡ抽出液に、まず
蛋白質付酵素を次にポリアクリル酸ナトリウムなどの凝
集剤を特定条件の下で順次作用させることにより、この
抽出液中の不溶脇骨を有効に除去して、高純度のＲＮＡ
を高収率で確実に安定して回収、取得できる。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 酵母から熱食塩水によって抽出したリボ核 酸の抽出液に、この抽出液の液量に対して５０〜１００
０ｐｐｍの蛋白質分解酵素を液温３０〜８０℃にて１〜
８時間作用させる工程と、前記抽出液の液温を５０〜９
０℃に調整し前記液量に対してポリアクリル酸ナトリウ
ム５〜１００ｐｐｍと第２鉄塩およびアルミニウム塩か
ら選ばれた水溶性金属塩４０〜５００ｐｐｍとを添加し
て前記抽出液中の不溶解分を凝集沈降させて除去する工
程と、前記抽出液の上澄液に酸を添加して酸性としリボ
核酸を沈降させる工程とよりなることを特徴とするリボ
核酸の単離取得方法。
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2259285A JPS61181394A (ja) | 1985-02-06 | 1985-02-06 | リボ核酸の単離取得方法 |
| FI850864A FI85385C (fi) | 1985-02-06 | 1985-03-04 | Foerfarande foer producering av ribonukleinsyra. |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2259285A JPS61181394A (ja) | 1985-02-06 | 1985-02-06 | リボ核酸の単離取得方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS61181394A true JPS61181394A (ja) | 1986-08-14 |
Family
ID=12087114
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2259285A Pending JPS61181394A (ja) | 1985-02-06 | 1985-02-06 | リボ核酸の単離取得方法 |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS61181394A (ja) |
| FI (1) | FI85385C (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6122226A (en) * | 1996-09-05 | 2000-09-19 | Citizen Watch Co., Ltd. | Combination electronic watch |
| CN1110265C (zh) * | 1996-02-29 | 2003-06-04 | 宇宙食品株式会社 | 酵母提取液的制造 |
| JP2015062406A (ja) * | 2013-08-31 | 2015-04-09 | 栄研化学株式会社 | 核酸増幅に適した試料の調製方法及び試薬キット |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5646837A (en) * | 1979-09-27 | 1981-04-28 | Kowa Yakuhin Kogyo Kk | Preparation of ibuprofen clathrate compound |
-
1985
- 1985-02-06 JP JP2259285A patent/JPS61181394A/ja active Pending
- 1985-03-04 FI FI850864A patent/FI85385C/fi not_active IP Right Cessation
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5646837A (en) * | 1979-09-27 | 1981-04-28 | Kowa Yakuhin Kogyo Kk | Preparation of ibuprofen clathrate compound |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1110265C (zh) * | 1996-02-29 | 2003-06-04 | 宇宙食品株式会社 | 酵母提取液的制造 |
| US6122226A (en) * | 1996-09-05 | 2000-09-19 | Citizen Watch Co., Ltd. | Combination electronic watch |
| JP2015062406A (ja) * | 2013-08-31 | 2015-04-09 | 栄研化学株式会社 | 核酸増幅に適した試料の調製方法及び試薬キット |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| FI85385C (fi) | 1992-04-10 |
| FI850864L (fi) | 1986-08-07 |
| FI850864A0 (fi) | 1985-03-04 |
| FI85385B (fi) | 1991-12-31 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP1362119B1 (en) | Glucosamine and method of making glucosamine from microbial biomass | |
| DE60033572T2 (de) | Verfahren zur herstellung eines sojaproteinhydrolysates | |
| US20030181419A1 (en) | Glucosamine and method of making glucosamine from microbial biomass | |
| JPH0577681B2 (ja) | ||
| JP2004149736A (ja) | コンドロイチン硫酸Ｎａ，コンドロイチン硫酸含有物及びそれらの製造方法 | |
| JPS61181394A (ja) | リボ核酸の単離取得方法 | |
| US5061627A (en) | Method for preparing enzymes from crustaceans | |
| EP0651791B1 (en) | Method for purification of an aqueous enzyme solution | |
| US4133904A (en) | Treatment of single cell protein | |
| GB2272697A (en) | Process for producing crystalline type A botulinum toxin | |
| JPH0593000A (ja) | 高純度の酸可溶性魚鱗コラーゲンの製造法 | |
| CA1308097C (en) | Polysaccharide isolation process | |
| JP2891081B2 (ja) | 水溶性多糖類の製造法 | |
| RU2081915C1 (ru) | Способ получения нуклеината натрия | |
| US3121665A (en) | Anti-infectious materials from yeast | |
| US2954321A (en) | Process for preparing heparin | |
| US2794800A (en) | Preparation of antitryptic substance from soybean | |
| JPS6157520A (ja) | フコイダン純度の高い溶液又は、フコイダンの製造方法 | |
| JP2804005B2 (ja) | Ｌ−アスパラギン酸の製造方法 | |
| CN1110265C (zh) | 酵母提取液的制造 | |
| JP2685424B2 (ja) | プロタミンの製造方法 | |
| JP4224313B2 (ja) | アミラーゼ阻害物質の調製方法 | |
| RU2103365C1 (ru) | Способ получения рибонуклеиновой кислоты | |
| JPH10179084A (ja) | 酵母エキスの製造法 | |
| JPS6342686A (ja) | プロテア−ゼの製造法 |