JPH0198415A

JPH0198415A - パナツクス属雑種幼苗の大量生産方法

Info

Publication number: JPH0198415A
Application number: JP62255087A
Authority: JP
Inventors: Hideo Kishiyoshi; 日出男岸良; Yasuto Hirakawa; 平川　康人; Masaaki Takada; 高田　正昭; Hideo Kurosawa; 黒沢　日出夫
Original assignee: YAMAJIRUSHI JOZO KK; Nippon Mining Co Ltd
Current assignee: YAMAJIRUSHI JOZO KK; Eneos Corp
Priority date: 1987-10-09
Filing date: 1987-10-09
Publication date: 1989-04-17
Also published as: JPH0380452B2

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】産呈上優雅■公団本発明は、組織培養の手法を利用してパナックス属雑種
の幼苗を効率良く、大量に生産する方法に関する。

従　の　′ｒとｒ□　占オタネニンジン（Ｐａｎａｘ　ｇｉｎｓｅｎｇ　Ｃ，Ａ
、Ｍｅｙｅｒ）、チクセツニンジン（Ｐａｎａｘ　ｊａ
ｐｏｎｉｃｉｕｍ　Ｃ，Ａ、Ｍｅｙｅｒ）及びアメリカ
ニンジン（Ｐａｎａｘ　ｑｕｉｎｑｕｅｆｏｌｉｕｍ　
Ｌ、）等のパナックス（Ｐａｎａｘ）属は、重要な薬用
植物として栽培され、通常は種子により増殖されている
。

最近、これらのニンジンの相互間において、耐病性等の
新形質の導入や雑種強勢等を目的として、交雑によりパ
ナックス属雑種を作出することが試みられ、優れた雑種
強勢を示すことが知られている。しかし、これらの雑種
は、不稔性が強いため後代が得られず、また上記オタネ
ニンジン、チクセツニンジン及びアメリカニンジンは、
自殖性であるので雑種種子の効率的かつ大量採取が困難
であるという問題があり、雑種の実用性はないと考えら
れていた。

一方、オタネニンジンについては、組織培養により増殖
することが試みられ、この方法として、オタネニンジン
の根、茎、葉等の植物組織をオーキシン類及びサイトカ
イニン類を含有するカルス誘導培地を用いてカルスを誘
導し、当該カルスを増殖し、次いで、該カルスを光照射
下に再分化させる方法（特開昭６１−２１６６１９号公
＠Ｉ）また、カルスから不定胚をｆｆｌ導増殖して、次
いで再分化させる方法（Ｗ、Ｃ，Ｃｈａｎｇ、　Ｙ、１
．Ｈｓｔｎｇ：セオリテイカルアンドアプライドゼネテ
イクス（Ｔｈｅｏｒｉｔｉｃａｌ　ａｎｄＡｐｐｌｉｅ
ｄ　Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）５７，１３３（１９８０））等
が、提案されている。

この場合、オタネニンジンのＭｉ織暗培養行うための外
植片として、根、葉柄、葉、花柄等が試みられている（
Ｒ，Ｇ、［１ｕｔｅｎｋｏ　ｅｔ、ａｌ、：　ボタニチ
ェスキイ　ジェルナール（Ｂｏｔａｎｉｃｈｅｓｋｉｉ
　Ｚｈｕｒｎａｌ）　７＋９０６（１９６８）　）。尚
、パナックス属雑種の組織培養についての報告例はみら
れない。

ところで、上記オタネニンジンの根、茎、葉からカルス
を誘導して再分化する方法が、パナックス属雑種につい
ても同様に適用できるか否か全く判らず、しかも、上述
の如く、交配によっては、雑種種子を効率良く大量に採
取できず実用化できないという問題もあった。

日が解決しようとする課本発明者は、これらの問題を解決するために鋭意研究を
進めた結果、パナックス属雑種の組織からカルスを誘導
し、不定胚形成を行わせることが可能なこと、外植片と
して花芽を用いると、根、茎、葉、花柄等を用いた場合
に比べて、カルスから不定胚が極めて短期間のうちに誘
導され、またその誘導率も極めて高いこと、不定胚から
形成されるシュート（ｓｈｏｏｔ）を増殖してマルチプ
ルシュート（ｍｕｌｔｉｐｌｅ　５ｈｏｏｔ）化できる
こと、さらには、未熟な不定胚は継代培養することによ
り二次胚形成により増殖し、再分化できること、等を見
出した。

したがって、本発明は、パナックス属雑種の生組織を組
織培養することにより、短期間に、しかも効率良くパナ
ックス属雑種のクローン苗を大量に生産し得る方法を提
供することを課題とする。

以下本発明の詳細な説明する。

光五見１底本発明の主要な特徴は、パナックス属雑種植物体の生組
織を組織培養することにより幼苗を産生ずることにある
。

また、本発明は、上記組織培養により、カルス化、カル
スからの不定胚及びその再分化を行うことも特徴とする
。

なお、ここでいう“パナックス属雑種”とはオタネニン
ジンとチクセツニンジン、オタネニンジンとアメリカニ
ンジン及びチクセツニンジンとアメリカニンジンの逆交
雑を含む６種の組合わせによる雑種植物を意味する。

ｉ；Ｉｒ−”°するための手本発明においては、上記パナックス属雑種植物体の生組
織、すなわち、根、茎、葉、葉柄及び花芽等の切片をツ
イーン（Ｔｗｅｅｎ）　８０を添加した次亜塩素酸ナト
リウム水溶液又はエタノール等の滅菌液で滅菌したもの
を組織培養に供する。

Ｍｉ織暗培養、上記植物体の切片を、２．４−ジクロロ
フェノキシ酢酸（２，４−Ｄ）　、インドール酢酸（Ｉ
ＡＡ）、ナフタレン酢酸（ＮＡＡ）等のオーキシン類、
或いはベンジルアミノプリン（ＢＡＰ）、カイネチン等
のサイトカイニン類を添加したムラシゲ−スクーグ（Ｍ
Ｓ）、ホワイト、す゛ンスマイヤー・スクーグ、ガウス
レット、ヘラ−等のカルス化及び不定胚誘導培地で、暗
黒下に、約１２週間培養することにより行われる。

この培養により、植物体組織はカルス化し、次いで不定
胚が誘導される。

このように誘導された不定胚のうち成熟胚は、光照射下
にサイトカイニン類及びジベレリン（ＧＡ）等を含有さ
せた再分化用培地で培養することにより、４週間程度で
発芽し、苗条（シュート）が得られる。

一方、未成熟胚は、暗黒下に、サイトカイニン類および
オーキシン類等を含有させた培地で継代培養し、胚の成
熟促進と二次胚の形成増殖を行い、上記再分化用培地で
再分化させるとよい。

上記シュートは、ＢＡＰ−ＧＡ又はＮＡＡ−ＢＡＰを添
加した培地で、光照射下に培養するとマルチプルシュー
トを形成する。

このようにして得られたシュートは、ＮＡＡ、インドー
ル酪酸（ＩＢＡ）等のオーキシン類を含む発根培地で、
光照射下に培養すると７週間程度で発根し、幼苗が得ら
れる。

この幼苗を土壌へ移植することにより、パナックス属雑
種を栽培することができる。

以下実施例により本発明及びその効果を具体的に説明す
る。

本実施例で用いたパナックス属雑種は、下記手順により
作成した。

パナックス属雑種の作成：長野県産のオタネニンジン、チクセツニンジン、アメリ
カニンジンを交配親株として用いた。尚、アメリカニン
ジンは、他のニンジンと開花時期が異なったため、開花
時期の調節を行うか、花粉を貯蔵して行った。また、こ
れらは、いずれも０殖性が強いので、交配に用いる母方
の株は、開花前に雄しべを取り除いておいた。雄しべを
除いた母方の花の柱頭に、父方の花粉を受粉させて交配
させ、オタネニンジン×チクセツニンジン、オタネニン
ジン×アメリカニンジン、チクセツニンジン×アメリカ
ニンジン及びこれらの逆交配の全てで雑種種子が得られ
た。得られた雑種種子は、オタネニンジンと同じ方法で
、催芽、播種することにより栽培できた。

実施例１上記方法で栽培されたオタネニンジン×チクセツニンジ
ンの雑種筒の芽から、発芽後２週間目の花芽の花柄およ
び花がくを除いた５ＩＩＩＩＩ＋の花芽切片をツイーン
８０を０．１重量％添加した３重量％の次亜塩素酸ナト
リウム水溶液で１０分間、さらに７０容量％のエタノー
ル溶液で３０秒間滅菌した後、滅菌精製水で２回洗浄し
た。

この滅菌後の花芽切片を、２．４−　Ｄを第１表に示す
濃度添加したＭＳ培地に移植し、２５±１℃の温度で、
暗黒下に１２週間培養した。この結果、８０％以上がカ
ルス化し、第１表に示すような割合で不定胚形成が認め
られた。

第１表この不定胚のうち成熟胚を取り出し、ＭＳ培地組成液を
２倍に希釈し、これにＢＡＰ及びＧＡをそれぞれ０．５
ｐｐ＋ｓづつ、さらにシュークロース（ｓｕｃｒｏｓｅ
）を１．５重量％あるいは３重量％添加して調製した寒
天培地に移植し、２２±１℃の温度で１６時間／日照明
下に４週間培養した。この結果、７０％の胚から正常な
シュートが得られた。

尚、上記不定胚のうち未熟胚について、ＮＡＡ２ｐｐｍ
、　Ｂ　Ａ　Ｐ２．５ｐρ−添加したＭＳ寒天培地で継
代培養した結果、未熟胚は、すべて成熟し、二次胚形成
による不定胚の増殖が盛んに起こった。この成熟胚を上
記シュクロース１．５重量％添加の培地で、同様の条件
で培養した結果、上記と同様に正常なシュートが得られ
た。

上記で得られたシュートまたはこのシュートを、ＭＳ培
地組成液を２倍に希釈し、これにＧＡ及びＢＡＰをそれ
ぞれｏ、ｓｐｐｍづつ、さらにシュクロース１．５％を
添加した寒天培地で、２２±１℃の温度で、１６時間／
日照明下に８週間培養しマルチプルシュート化して増殖
させたシュートを、ＮＡＡ、ＩＢＡをそれぞれｌｐｐｍ
づつ添加したＭＳ寒天培地で、２０±１℃の温度で、１
６時間／日照明下に７週間培養した結果、ＮＡＡを添加
した培地で７５％、ＩＢＡを添加した培地で３０％のシ
ュートが発根し、クローン苗が得られた。

この幼苗を土壌に移植したが、順調に生育している。

実施例２実施例１の花芽を得たのと同じオタネニンジン×チクセ
ツニンジンの雑種の組織から根、茎、葉の部分を用いて
実施例１と同様の培地でカルス及び不定胚の誘導を行っ
た。尚、この場合、根は、表皮を除き厚さ約２１、直径
約５ＩＩＩｍの円盤状の切片とし、茎は、厚さ約２＋ｌ
１）１）の円盤状の切片とし、葉は、葉身約１ｃｍ角の
切片として用いた。

この結果、根、茎、葉の切片のいずれにおいても、８０
％以上がカルス化し、９ケ月経過後は、第２表に示すよ
うな割合で不定胚が形成された。

第２表実施例３オタネニンジン×アメリカニンジンの雑種苗を発芽後２
週間目の花芽を用いて、実施例１に記載したのと同様の
方法及び培地で、カルス化し、次いで不定胚形成を行っ
た。この結果、８０％以上がカルス化し、２．４−Ｄを
１０ｐｐｍ添加したＭＳ培地で、８５％の割合で不定胚
形成が認められた。

この不定胚のうち成熟胚を取り出し、実施例１と同様の
培地、方法で培養した結果、７０％の胚から正常なシュ
ートが得られた。

このシュートを、ＮＡＡ、ＩＢＡをそれぞれｌｐｐｍづ
つ添加したＭＳ寒天培地で、２０±ｌ’ｃの温度で、１
６時間／日照明下に７逓間培養した結果、ＮＡＡを添加
した培地で７９％、ＴＢＡを添加した培地で４５％のシ
ュートが発根し、クローン苗が得られた。

この幼苗を土壌に移植したが、順調に生育している。

実施例４チクセツニンジン×アメリカニンジンの雑種苗を発芽後
２週間目の花芽を用いて、実施例１に記載したのと同様
の方法及び培地で、カルス化し、次いで不定胚形成を行
った。この結果、８０％以上がカルス化し、２．４−Ｄ
をｌＱｐｐｍ添加したＭＳ培地で、７３％の割合で不定
胚形成が認められた。

この不定胚のうち成熟胚を取り出し、実施例１と同様の
培地、方法で培養した結果、７５％の胚から正常なシュ
ートが得られた。

このシュートを、ＮＡＡ、ＩＢＡをそれぞれ１））Ｉ）
ＩＩづつ添加したＭＳ寒天培地で、２０±１℃の温度で
、１６時間／日照明下に７週間培養した結果、ＮＡＡを
添加した培地で６５％、ｒＢＡを添加した培地で２０％
のシュートが発根し、クローン苗が得られた。

この幼苗を土壌に移植したが、順調に生育している。

２５Ｒと１果以上述べたように、本発明は、パナックス属雑種の植物
体組織を組織培養により増殖させるため、短期間にしか
も効率良くパナックス属雑種の不定胚が誘導でき、クロ
ーン苗を大量に得ることができるという格別の効果を奏
するものである。

Claims

【特許請求の範囲】

（１）パナツクス属雑種植物体の生組織を組織培養する
ことにより幼苗を産生することを特徴とするパナツクス
属雑種幼苗の大量生産方法。
（２）上記生組織がパナツクス属雑種植物体の花芽であ
る特許請求の範囲第（１）項記載の大量生産方法。
（３）上記組織培養による幼苗の産生を、上記生組織を
カルス化し、カルスから不定胚を誘導増殖した後、再分
化させて行う特許請求の範囲第（１）項記載の大量生産
方法。
（４）上記再分化は、不定胚から苗条（シュート）を形
成し、該苗条を増殖させた後、発根させるものである特
許請求の範囲第（３）項記載の大量生産方法。
（５）上記不定胚が未熟胚のとき、該未熟胚の成熟と二
次胚の形成増殖を行つた後、再分化させるものである特
許請求の範囲第（３）項記載の大量生産方法。