JPH013128A - 二官能性抗体構造体及び細胞集団を選択的に破壊する方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、新規な抗体構造体（ａｎｔｉｂｏｄｙ　ｃｏ
ｎｓｔｒｕｃｔｓ）及び細胞集団を選択的に破壊する方
法に関する。特に、本発明は、ヘテロダイマー抗体複合
体（ｈｅｔｅｒｏｄｉｍｅｒｉｃ　ａｎｔｉｂｏｄｙ　
ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ）　（本明細書中では“′抗体ヘ
テロダイマー″と呼ぶことがある）、抗体／細胞表面結
合性分子複合体（ａｎｔｉｂｏｄｙ　／ｃｅｌｌ　ｓｕ
ｒｆａｃｅ−ｂｉｎｄｉｎｇ　ｍｏｌｅｃｕｌｅ　ｃｏ
ｎｊｕｇａｔｅＳ）及びハイブリッド抗体、ここに、こ
れらのすべては、活性化されたリンパ球及び細胞表面分
子の両者に対する二重の結合特異性を有する、から選ば
れる新規な二官能性抗体構造体（ｂｉｆｕｎｄｔｉｏｎ
ａｌａｎｔｉｂｏｄｙ　ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｓ）に関し
、そして、活性化されたＴ細胞及びナチュラルキラー細
胞の如き活性化されたリンパ球を増援（ｒｅｃｒｕｉｔ
ｉｎｇ）させて新規な抗体構造体によって選択的に標的
細胞を攻撃させることにより、腫瘍細胞又は他の病気に
かかった細胞（ｄｉｓｅａｓｅｄ　ｃｅｌｌｓ）を包含
する特定の標的細胞を破壊する方法に関する。

新形成（ｎｅｏｐｌａｓｉａ）の治療において腫瘍標的
を溶解又は殺すためにリンパ系細胞（ｌｙｍｐｈｏｉｄ
　ｃｅｌｌＳ）の活性化された集団を使用することは興
味深い研究の主題であった［ステアルツ・ダブリュ・デ
ー・及ヒベバン・エム・ジェー・　イムノロジー・ツー
デイ、第７巻、２４１−２４５　（１９８６）（Ｓｔｅ
ａｒｚ　Ｗ、　Ｄ、　ａｎｄ　Ｂｅｖａｎ　Ｍ、　Ｊ、
、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　Ｔｏｄａｙ　　７：　２４１−
２４５　（１９８６）　］。特に、Ｔ細胞由来の糖タン
パク質、インターロイキン−２（ＩＬ−２）により活性
化された末梢リンパ球、即ちリンホカインで活性化され
たキラー細胞（ＬＡＫ細胞）の集団は、動物モデルにお
いて生体内で腫瘍を首尾よく処置するのに使用され［マ
ズムラー・ニー・及びローゼンバーグ・ニス・ニー・　
ジャーナル・オブ・エキスペリメンタル・メデイシン、
第１５９巻、４９５−５０７　（１９８４）　（Ｍａｚ
ｕｍｌｅｒ　Ａ−ａｎｄ　Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ　Ｓ、　
Ａ、、　Ｊ、　Ｅｘｐ、　Ｍｅｄ、　１５９　：　４９
５−５０７　（１９８４）］そして、最近では標準治療
養生に抵抗性のヒト腫瘍の処置に使用されている［ロー
巻、８８７−８９７　（１９８７）　（Ｒｏｓｅｎｂｅ
ｒｇ　Ｓ。

Ａ、　ｅｔ　ａｌ、、　ＮＥＪＭ　３１６：　８８９−
８９７　（１９８７））］　、　　しかしながら、この
形態の処置は、有効であるためには非常に大きい投与量
で与えなければならないＩＬ−２の毒性により制限され
てきた［ローゼンバーグ・ニス・ニー・等、ニュー・イ
ングランド・ジャーナル・オブ・メディシン、第３１６
巻、８８７−８９７　（１９８７）］。故に、悪性腫瘍
を処置するのに活性化されたリンパ系細胞を使用すると
いう考えは非常に興味深いけれども、これらの細胞の生
体外及び生体内活性化の可能性として毒性の少ない手段
に注意が向けられた。

リンパ系細胞は種々の系統特異的表面抗原（ｆｉｎｅａ
ｇｅ　５ｐｅｃｉｆｉｃ　５ｕｒｆａｃｅ　ａｎｔｉｇ
ｅｎｓ）を発現しており、これらの幾らかはこれらの細
胞を細胞溶解作用するように活性化することに直接関与
している［ラインへルツ　イー・エル・　モイエル　ニ
ス・シー・及ヒシュロッスマン　ニス・エフ・　４ｈノ
ロジカル・レヒコース、第７４巻、　　８３−１１２　
（１９８３）　（Ｒｅｉｎｈｅｒｚ　Ｅ、　Ｌ、、　Ｍ
ｅｕｅｒ　Ｓ、　Ｃ。

ａｎｄ　Ｓｃｈｌｏｓｓｍａｎ　Ｓ、　Ｆ、、　Ｉｍｍ
ｕｎｏｌ、　Ｒｅｖ、　７４：　８３−１１２　（１９
８３）］　ｏ従来は、リンパ系細胞の２つの主要な表面
構造体がこの細胞溶解活性化に関与することが見出ださ
れている。即ち、Ｔ細胞抗原−受容体／Ｔ３複合体（Ｔ
−ｃｅｌｌ　ａｎｔｉｇｅｎ−ｒｅｃｅｐｔｏｒ／　Ｔ
３ｃｏｍｐｌｅｘ）（ＴＣＲ−Ｔ３）及びＴｌ１分子で
あり、Ｔ１．］分子はＥ−ロセット受容体（Ｅ−１−＋
）ｓｅＬｔｅｒｅｃｅｐｔｏｒ）としても知られている
［モイエル　ニス・シー・等、ダ酉、　第３６巻、８９
７−９０６（１９８４）及びエットゲン　エイチ・シー
・及びテルホルス］・　シー・　ヒユーマン・４Ａ／ロ
ジー、第１８巻、１８７−２０４　（１９８７）（Ｍｅ
ｕｅｒ　Ｓ、　Ｃ，、ＥＴ　ＡＬ、、　Ｃｅ１ｌ　３６
：　８９７−９０６　（１９８４）ａｎｄ　　Ｏｅｌ、
ｔｇｅｎ　　Ｉｌ、Ｃ，ａｎｄ　　Ｔｅｒｌｌｏｒｓｔ
、Ｃ，、Ｈｕｍａｎ　　１ｍ胛函１服：１８７−２０４
　（１９８７）］。ＴＣＲ−Ｔ３はすへての成熟した細
胞溶解性Ｔ細胞（ＣＴ　Ｌ　）及び少数の゛ナチュラル
キラー″′細胞（ＮＫ細胞）上に発現されておりそして
ＴｌｌはＣＴＬ及びＮＫ細胞の両者に発現されている［
ラインへルツイー・エル拳等、イムノロジカルφレビコ
ーズ、第７４巻、８３−１１２　（１９８６）；シュミ
ツ５６　　（］　９８６　）　（Ｒｅｉｎｈｅｒｚ　Ｅ
、　Ｌ、、　ｅｔ　ａｌ、、　　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　Ｒ
ｅｖ、　７４　：　８３−１１２　（１９８６）；　Ｓ
ｃｈｍｉｔ、　Ｒ，、ｅｔａｌ、、　　Ｊ、　Ｅｘｐ、
　Ｍｅｄ、　１６４　：　３５１−３５６　（１９８６
）］　。

更に特定的には、ＴＣＰ−Ｔ３複合体又はＴｌｌに対す
る成る種の抗体は、ＣＴＬ又はＮＫ細胞による殺傷を誘
発及び／又は高めることが示された９１（１９８５）；
シリチアノ　アール・エフ・等、ネイチャー、第３１７
巻：　４２８−４２９　（１９８５）（Ｓｐｅｔｓ　　
Ｈ，、ｅｔ、ａｌ、、Ｅｕｒ、Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ。

１５　　：　　８５−９１　　（１９８５）；　　５ｉ
ｌｉｃｉａｎｏ　Ｒ，Ｆ、ｅｔ　　ａｌ、。

Ｎａｔｕｒｅ　３１７　：　４２８−４２９　（１９８
５）　］　、更に、ヒｌ−ＣＴＬは、無関係のヒト腫瘍
標的（ｉｒｒｅｌｅｖａｎｔ　ｈｕｍａｎ　ｔｕｍｏｒ
　ｔａｒｇｅｔｓ）　（即ち、ＣＴＬにとって普通は特
異的であるこれらの細胞そのものではないヒト標的）を
、Ｔ３又はＴ細胞受容体（ＴＣＲ）及び腫瘍上の表面決
定基を認識する二官能性ハイブリッド抗体又はヘテロダ
イマー抗体複合体の存在下に生体外でこれらのＣＴ　Ｌ
と標的をインキコベーションすることにより、殺すよう
に誘発されうろことが見出だされた［ペレッツ　ピー・
等、ネイチャー　第３１６巻：３５４−３５６　（１９
８５）；ステルツ　等、ネイチャー　第３１４巻＝６２
８−６３１　（１９８５）及びピーエヌエーエス　第８
３巻：１４５３−５７　（１９８６）；リウ　等、ピー
エヌエーエス　第６２巻：８６４８−８６５２　（］　
９８５）　　（Ｐｅｒｅｚ　ｅｔ、　ａｌ、、　Ｎａｔ
ｕｒｅ　３１６　：３５４−３５６　（１９８５）；　
５ｔａｅｒｚ　ｅｔ　ａｌ、、　Ｎａｔｕｒｅ　３１４
　＋６２８−６３１　（１９８５）　ａｎｄ　ＰＮＡＳ
　８３：　　１４５３−５７　（１９８６）；Ｌｉｕ　
　ｅＬ　ａｔ、、　　ＰＮＡＳ　　８２：　　８６４８
−８６５２　　（１９８５））コ　　。　多分、ハイブ
リッド抗体又はヘテロダイマー抗体複合体は、二官能性
ハイブリッド抗体又はヘテロダイマー抗体複合体の架橋
作用によりＴ細胞と腫瘍標的との密接な細胞間接触を可
能とし、その際、ハイブリッド抗体の一端又はヘテロダ
イマー抗体複合体の］つの抗体が腫瘍細胞に結合しそし
てハイブリッド抗体の他端又はヘテロダイマー抗体複合
体の他方の抗体がＴＣＰ−７３複合体に結合しモしてＣ
ＴＬを活性化するのであろう。この研究は生体外での大
きな将来性を示すけれども、このようなハイブリッド抗
体又はヘテロダイマー抗体複合体の生体内注入は、身体
内の莫大な量の活性化されていない普通のＴ細胞かＴ３
を発現するという事実により複雑になるであろう。これ
らの細胞は、ハイブリッド抗体又はヘテロダイマー抗体
複合体に結合することについて活性化されたＴ細胞と競
合するであろう。更に、抗Ｔ３／腫瘍抗体ハイブリッド
及び複合体は、Ｔ３陰叶である大多数のＮＫ細胞を活性
化しないであろう。

従って、本発明の１つの目的は、身体中の活性化されて
いない普通のＴ細胞が抗体構造体に結合することについ
て活性化されたＴ細胞と競合しない抗体構造体を使用し
て、細胞集団を選択的に破壊する方法を提供することで
ある。

本発明の他の目的は、ＣＴＬ細胞及びＮＫ細胞の両者の
大多数を活性化する抗体構造体を使用して、細胞集団を
選択的に破壊する方法を提供することである。

本発明の更なる目的は、有害な副作用なしに成る種の疾
患の処置のために特定の細胞集団を破壊するようにリン
パ球を活性化及び指向させる方法を提供することである
。

これらの目的及び他の目的は、本発明の１つの態様にお
いては、抗リンパ球抗体成分（ｂ）に結合した抗原的細
胞抗体成分（ａ）を含んで成り、該抗リンパ球抗体成分
は活性化されたリンパ球に対して特異的であることを特
徴とする二官能性ヘテロダイマー抗体複合体を提供する
ことにより達成された。

本発明の他の態様においては、（ａ）標的細胞表面分子
に結合することができる、抗体以外の分子成分と（ｂ）
活性化されたリンパ球に対して特異的である抗リンパ球
抗体成分とを含んで成る二官能性抗体／細胞表面結合性
分子複合体が提供される。

本発明の更なる態様においては、（ａ）抗標的細胞結合
部位成分と（ｂ）抗リンパ球結合部位成分とを含んで成
り、該抗リンパ球結合部位成分は活性化されたリンパ球
に対して特異的であることを特徴きする、二官能性ハイ
ブリッド抗体か提供される。

本発明は、 （１）１種又は１種より多くの、前記二官能性抗体構造
体の成分（ａ）を標的細胞に結合させ、（２）リンパ球
を活性化させ、 （３）前記二官能性抗体構造体の成分（ｂ）に前記活性
化されたリンパ球を結合させることを含んで成り、前記
工程（１）、（２）及び（３）は、−１１＝ 工程（２）が常に工程（３）と同時に又は工程（３）の
前に行なわれるという条件下に、同時に又は任意の順序
で行うことができることを特徴とする、標的細胞集団を
選択的に破壊する方法も提供する。

添付図面は、ＣＡＬＬＡ発現細胞及びＴ１１２／　Ｔ　
ｌ　１　ｓ発現細胞に対するＪ５、抗Ｔｌ１２、抗Ｔ１
１．及び複合体Ｊ５−抗Ｔｌ　１２及びＪ５−抗Ｔｌ１
３の結合を示す蛍光活性化細胞ソーター（Ｆｌｕｏｒｅ
ｓｃｅｎｃｅ−Ａｃｔｉｖａｔｅｄ　　Ｃｅ１ｌ　　５
ｏｒｔｅｒ　　（ＦＡＣ５）／（ターンを与える。ナマ
ルワ細胞（Ｎａｍａｌｗａ　ｃｅｌｌｓ）　（群ａ乃至
ｈ）又はＲＥＸ細胞（群ｉ乃至ｐ）を抗体なしくｎｏ　
ａｎｔｉｂｏｄｙ）　　（ａ　、　ｉ　）、Ｊ５（ｂ、
ｊ）、抗Ｔｌ１２（ｃ、ｋ）、抗Ｔ　ｌ　ｌ　３　（ｄ
、　＋　）　、抗Ｔ３（ｅ、ｍ）、Ｊ５−抗Ｔ　１１２
　（ｆ　、　ｎ　）、Ｊ５−抗Ｔ１１．（ｇ、０）、又
はＪ５−抗Ｔ３　（ｈ。

ｐ）とインキュベージジョンした。

上述の如く、本発明は、上述の先行のＴＣＲ−Ｔ３活性
化経路にまさるいくつかの利点を示す、別の活性化″経
路を提供する。第一に、Ｔｌ１分子はすべてのＮＫ細胞
及びＣＴＬ細胞上に存在し、そして（ａ）ヘテロダイマ
ー抗体複合体、（ｂ）抗体／細胞表面結合性分子複合体
又は（ｃ）二官能性ハイブリッド抗体の一部としての適
当な抗Ｔｌｌ抗体又はＴｌｌ結合部位は、リンパ系細胞
の両集団を増援させて腫瘍標的を溶解することができる
。第二に、活性化のためにその発現が必要なＴｌ１分子
のエピトープは、ＴＣＲ−Ｔ３と違って、休止している
非活性化状態では発現されない。このいわゆる“’Ｔｌ
１３”エピトープは、マイトジェン、抗原、リンホカイ
ン又は他の抗体、例えば抗Ｔ　ｌ　ｌ　２（ａｎｔｉ−
Ｔｌｌ□）　［モイエル　ニス・シー等、丸西　第３６
巻：　８９７−９０６　（１９８４）　（Ｍｅｕｅｒ　
Ｓ、　Ｃ，、Ｃｅ１ｌ　３６：　８９７−９０６　（１
９８４）］、抗Ｔ　３　（ａｎｔｉ−Ｔ３）及び抗２　
ＨＩ　（ａｎｔｉ−２旧）による活性化の後Ｔｌｌ陽性
細胞上にのみ発現される。

本発明に従う新規な二官能性抗体構造体は、腫瘍細胞の
如き標的細胞に向けて活性化されたリンパ球のみを指向
させる（ｄｉｒｅｃｔ）のに使用することができる。こ
れは、例えば腫瘍細胞を試験管内又は生体内で、リンパ
球特異的成分が活性化されたリンパ球に対して特異的な
抗体（又は、もし構造体がハイブリッド抗体であるなら
ば、抗体の１つの結合部位）である、リンパ球特異的／
腫瘍細胞特異的二官能性抗体構造体に結合させることに
より達成される。このような抗体には、例えば、抗Ｔ１
１３抗体、ＩＬ２受容体に対して特異的な抗ＴＡＣ抗体
、抗Ｔａ１抗体、Ｔ１０分子に対して特異的な抗ＴＩＯ
抗体及び、トランスフェリン受容体に対して特異的な抗
ｌ・ランスフェリン受容体抗体が包含され、これらのす
へては活性化された細胞上に選択的に発現される［モイ
エル　ニス・シー等、幻と　第３６巻：８９７−９０６
　（１９８４）；フォックス　デー・エヌ等、シャー’
：Ｊ＝火ｆ−オブ・イムノロジー　第１３３巻：１２５
０−１２５６　（１９８４）；ヘルセント、チー・等、
鴫−マン・イムノロジー　第３巻：２４７−２５９（１
９８１）；及びロッゾ、アール・ジエー・等、ジャーナ
ル・オブ・エクスペリメンタル・メデイシン　第１６０
巻：１１２６−１１４６　（１９８４）　（Ｍｅｕｅｒ
　Ｓ、　Ｃ，ｅｔ　ａｌ、、　Ｃｅ旦３６　：　８９７
−９０６（１９８４）；　Ｆｏｘ、　Ｄ、　Ｎ、　ｅｔ
　ａｌ、、　　Ｊ、　　１ｍｍ、　　１３３　：　　１
２５０−１２５６　　（１９８４）；　　Ｈｅｒｃｅｎ
ｄｔ、Ｔ、ｅｔ　ａｌ、、Ｈｕｍ、１ｍｍｕｎｏ１．３
　　：　　２４７−２５９　　（１９８１）；　　ａｎ
ｄ　Ｒｏｂｂ、Ｒ，Ｊ、ｅｔ３１、、　Ｊ、　Ｅｙｐ、
　Ｍｅｄ、−…：　１１２６−１１４６　（１９８４）
］　。

この方法においては、リンパ球特異的／標的細胞特異的
抗体構造体は、試験管内で又は身体中への注入の後生体
内で標的腫瘍細胞に結合するであろう。抗体構造体が標
的細胞に結合した後、リンパ球は、生体内又は生体外で
種々の方法で、しかし好ましくは、Ｔ細胞及びＮＫ細胞
の両者を活性化させる抗体抗Ｔｌｌ□及び抗Ｔ１１３の
組み合わせによるリンパ球の処理によって活性化させる
ことができる。これらの活性化されたリンパ球は次いで
、活性化されたリンパ球に対して特異的な抗リンパ球抗
体又は一つの抗体結合部位成分で被覆された標的細胞に
向かって進み”　（”ｈｏｍｅ−ｉｎ”）、この抗体構
造体に結合し、この抗体構造体はリンパ球を標的細胞と
接触させそして結合した活性化されたリンパ球は標的細
胞を溶解する。

本願においては、抗腫瘍抗体と抗Ｔ１１３の多数の抗体
構造体の製造が開示されている。これらの構造体は、活
性化されたＴｌ１発現細胞に腫瘍標的細胞を殺さしめる
ことが今回見出だされた。

更に、これらの構造体は、Ｔｌ　］発現細胞が抗Ｔ１１
゜に結合することができるときも、腫瘍標的細胞を殺す
ようにＴｌ１発現細胞を活性化させる。

抗腫瘍抗体と抗Ｔｌｌ□の構造体の製造も開示されてい
る。これらの抗体構造体は、Ｔｌ１発現細胞か抗Ｔ１１
３に結合するときも、腫瘍標的細胞を殺すようにＴｌ１
発現細胞を活性化させることが見出だされた。

二官能性抗体構造体及びそれらの合成 ３つの別個の二官能性抗体構造体が本発明により提供さ
れる。

これらは、 （１）ヘテロダイマー抗体複合体、 （２）抗体／細胞表面結合性分子複合体、及び（３）ハ
イブリッド抗体、である。

用語“二官能性′″は、」１記構造体の各々が２つの異
なった結合特異性を有することを示すのに使用される。

この用語は結合部位の実際の数に関するものではない。

その理由は、例えは、ヘテロダイマー抗体複合体は普通
は４つの結合部位−一標的細胞に対して特異的な２つの
結合部位及び活性化されたリンパ球に対して特異的な２
つの結合部位を有するからである。反対に、ハイブリッ
ド抗体は２つの結合部位−一１つは標的細胞に対して特
異的でありそしてもう１つは活性化されたリンパ球に対
して特異的であるｍ−しか持っていない。

更に特定的には、本発明に従えば、二官能性ヘテロダイ
マー抗体複合体は相互に結合した２つの抗体を含んで成
り、１つの抗体１ｉ標的細胞に対して特異的でありそし
て他の抗体は活性化されたリンパ球に対して特異的であ
る。

二官能性抗体／細胞表面結合性分子複合体は１つの抗体
と、抗体以外の１つの分子とを含んで成る。抗体成分は
活性化されたリンパ球に対して特異的であり、一方、例
えはホルモン、リンホカイン、オリゴ糖、等の如き非抗
体分子は標的細胞表面分子に結合する。

二官能性ハイブリッド抗体は２つの異なった抗原に対す
る抗原結合部位を持った１つの抗体である。本発明に従
えば、１つの抗原結合部位は標的細胞に対して特異的で
あり、他の抗原結合部位は活性化されたリンパ球に対し
て特異的である。

本明細書で使用される゛′標的細胞′″という用語は、
殺され又は溶解されるべき、腫瘍細胞又は他の病気にか
かった細胞、例えばウィルス感染細胞、寄生虫感染細胞
、等を包含する細胞として定義される。

使用されうる標的細胞の特定の例には、腫瘍細胞、特に
充実性腫瘍細胞、ウィルス感染細胞、寄生虫感染細胞、
自己免疫細胞、即ち、自己抗体を生産する細胞及び活性
化された細胞、即ち、移植片拒絶又は移植片対宿主疾患
に関与する細胞が包含される。

本明細書で使用される“リンパ球″という用語は、血液
中で循環している及びリンパ節、牌臓及びリンパ管中に
見出だされ、ライトの染色（Ｗｒｉｇｈｔ’ｓ　　５ｔ
ａｉｎ）で染色すると濃密に詰まったクロマチンと細胞
質の小さな縁を有しそして細胞溶解機能の潜在能力を有
する、即ち、標的細胞を溶解することができる、単核細
胞どして定義される。

適当なリンパ球の例には、ＣＴＬ　（ＣＤ８＋又はＣＤ
４＋）、ＮＫ細胞（ＣＤ２＋）、及びＴヘルパー細胞（
ＣＤ４＋）が包含される。

本明細書で使用される゛′活性化されたリンパ球″とい
う用語も又、その細胞溶解機能が種々の手段、そのいく
らかを下記に示す、により作動せしめられた（ｔｕｒｎ
ｅｄ　ｏｎ）リンパ球を意味する。

標的細胞に対して特異的な抗体はポリクローナル又は七
ツクローナルのいずれでもよく、そして＋　ＩｇＭ、ｒ
ｇＧＳ　ＩｇＧ２ａ　　、ｒｇＧ２ｂ　　、ＴｇＧ３、
ＴｇＧい　ＩｇＡ、ＩｇＥ及びＩｇＤ、のいかなるアイ
ソタイプであってもよい。更に、この抗体はヒト、マウ
ス、ラット、ハムスター、又は他の哺乳動物種起源のも
のであるべきである。

標的細胞に対して特異的な抗体は下記の如き慣用の方法
に従って製造及び精製することができる。

第一に、ヒトを含めて、マウス、ラット、ハムスター又
は他の哺乳動物を、無傷の標的細胞、標的細胞から単離
された抗原、全ウィルス（ｗｈｏｌｅｖｉｒｕｓ）、弱
毒化全ウィルス（ａｔｔｅｎｕａｔｅｄ　ｗｈｏｌｅ　
ｖｉｒｕｓ）及びウィルスコートタンパク質の如きウィ
ルスタンパク質のような問題の抗原で免疫する。大抵の
場合に、免疫のために完全標的細胞（ｅｎｔｉｒｅｔａ
ｒｇｅｔ　ｃｅｌｌ）が使用される。免疫に使用される
抗原は慣用の方法により製造及び精製される。例えば、
アール・アイ・ミツシェル　、“′細胞免疫学における
選ばれた方法″ビー・ビー・ミソシェル及びニス・エム
Ｏシージ、編）サンフランシスコ、（１９８０）、２８
−６５頁（Ｒ，１，Ｍｉｓｈｅｌｌ　ｉｎ”５ｅｌｅｃ
ｔｅｄ　Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｉｎ　Ｃｅ１ｌｕｌａｒ　Ｉ
ｍｍｕｎｏｌｏｇｙ”（Ｂ、　Ｂ、　Ｍｉｓｈｅｌｌ　
＆Ｓ、　Ｍ、　Ｓｈｉｉｇｉ、　ｅｄｓ、　）Ｓａｎ　
Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ、　（１９８０）　ｐｐ２８−６５
）参照。別法として、前免疫ヒト（ｐｒｅ−ｉｍｍｕｎ
ｅ　ｈｕｍａｎ）が血清学的スクリーンにより同定され
る。問題の抗体、例えば抗リンパ球抗体を生産すること
が血清学的に証明されたヒト、例えば全身性エリテマト
ーデス又は他の自己免疫疾患を持った患者又は抗腫瘍抗
体を生産す＝２０− る患者が選ばれる。

次ぎに、免疫された動物又は前免疫ヒトからＢ細胞のソ
ース（牌臓、末梢血液、リンパ節等）を採取して、例え
ば、オイ及びヘルツエンバーブ、゛″細胞免疫学におけ
る選ばれた方法″′ビー・ビー・ミツシェル及びニス・
エム・シージ、編）サンフランシスコ、（１９８０）、
３５１−３６８頁（Ｏｉ　ａｎｄ　Ｈｅｒｔｚｅｎｂｅ
ｒｇ　　ｉｎ　”５ｅｌｅｃｔｅｄ　Ｍｅｔｈｏｄｓ　
１ｎＣｅｌｌｕｌａｒ　Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙｌｌ（Ｂ
、　Ｂ、　Ｍｉｓｈｅｌｌ　＆Ｓ、　Ｍ。

Ｓｈｉｉｇｉ、　ｅｄｓ、　）Ｓａｎ　Ｆｒａｎｃｉｓ
ｃｏ、　（１９８０）　ｐｐ　３５１−３６８）に従う
、例えばポリエチレングリコール（ＰＥＧ）法の如き慣
用の方法によって、ＭＳ−１（Ｐ３／ＮＳ　Ｉ／１−Ａ
ｇ４−１）ｒケーラー、ジー・等、ヨーロピアン・ジャ
ーナル・オブ・イムノロジー、第６巻、２９２−２９５
　（１９７６）（Ｋｏｈｌｅｒ、　Ｇ、　ｅｔ　ａｔ、
、　Ｅｕｒ、　Ｊ、　１ｍｍ、　６：　２９２−２９５
（１９７６））−−（ＡＴＣＣＮｏ、　　ＴＩＢ　　１
ｇ）］又は５Ｐ２１０　（ＳＰ２１０−Ａｇ　１４）［
エム・シュルマン等、ネイチャー　第２７６巻、２６９
−２７０　（１９７８）　（Ｍ、　Ｓｈｕｌｍａｎ　ｅ
ｔ　ａｌ、。

Ｎａｔｕｒｅ　２７６：　２６９−２７０　（１９７８
））　−（Ａ　Ｔ　ＣＣＮｏ、　　　ＣＲＬ　　１５８
１）］　の如き不ズミミエローマ（ｍｕｒｉｎｅ　ｍｙ
ｅｌｏｍａ）又は適当なヒトミエローマと融合させる。

融合した細胞を次いで、例えば上述のオイ及びヘルツエ
ランバーブに記載の如き慣用の方法にすべて従って、培
養し、スクリーニングしそしてクローン化して、選ばれ
た抗体を生産する永久分裂するクローン（ｉｍｍｏｒｔ
ａｌｉｚｅｄ　ｃｌｏｎｅ）を得る。

試験管内免疫の慣用の方法も使用することがでキル［ア
ール・ニー・ルベツ等、モレキュラー・堕込）ｌしＺ二
　第１７巻、６３５−６３９（１，９８０）及びヘンガ
ードナー　エイヂ・等、カレント・トピックス・イン・
マイクロバイオロジカル・工み又」乏−二　第８１巻、
９２−９９（１，９７８）（Ｒ，Ａ、　Ｌｕｂｅｎ　ｅ
ｔ　ａｌ、、　Ｍｏ１．　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　１７＋　
６３５−６３９　（１９８０）　ａｎｄ　Ｈｅｎｇａｒ
ｔｎｅｒ　Ｈ，ｅｔ　ａｌ、、　Ｃｕｒｒ、　Ｔ。

ｐ、　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ　、　　Ｉｍｍｕｎｏｌ　、
　８１．、：　９２−９９　（１９７８）］　　。

問題のクローンを単離した後、Ｂ　ａ　Ｉ　１）　／　
Ｃ又はヌードマウスの腹水腫瘍（ａｓｃｉｔｅｓ　ｔｕ
ｍｏｒｓ）中で増殖した又は慣用の大規模細胞培養法を
使用して試験管内で増殖したハイブリドーマ細胞により
モノクローナル抗体を製造することができる。抗体は、
硫酸アンモニウム沈澱、イオン交換クロマトグラフィー
及びゲルろ過［パルハム（Ｐａｒｈａｍ）等、（１９８
２）］、チバクロン青色染料（Ｃｉｂａｃｒｏｎｂｌｕ
ｅ　ｄｙｅ）にカップリングした樹脂によるイオン交換
クロマトグラフィー［プルツク（Ｂｒｕｃｋ）等、ジャ
ーナル・オブ・イムノロジカル・メソッド、第５３巻、
３　］　３−３１９　（１９８２）及びブルッ６（１９
８６）］、ヒドロキシルアパタイトによルクロマトグラ
フィ−［スタンカー（Ｓｔａｎｋｅｒ）等、ジャーナル
・オブ・イムノロジカル・メソッド、第７６巻、１５７
−１６９　（１，９８５）及びジュアレッツーザリナス
（Ｊｕａｒｅｚ−３ａ　］　１ｎａｓ）等、Ｌ又ヱド・
イン・エンザイモロジー、第１２１巻、６１５−６２２
　（］　９８６）］　、及びスタフィロコックス・アウ
レウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　　ａｕｒｅｕ
ｓ）からの固定化されたプロティンＡを使用するアフィ
ニティークロマトグラフィー［ゴーディング（Ｇｏｄｉ
ｎｇ）、ジャーナノ１ニオブ・イムノロ偽ｈ　Ｊ＋／　
・メソン工、第３９巻、２８５−３０８　（１９８０）
］を包含する種々の方法で腹水液から精製することがで
きる。抗体の純度は、等電点ゲル電気泳動（ｉｓ。

ｅｌｅｃｔｒｏｆｏｃｕｓｉｎｇ　ｇｅｌ　ｅｌｅｃｔ
ｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ）により評価することができる［
ゴールドマツハ−（Ｇｏｌｄｍａｃｈ　ｅ　ｒ　）等、
ジャーナノ１ニオブ・イムノロ＊−１第１３６巻、３２
０−３２５　（１９８６）］。

標的細胞に結合する抗体の特定の例は下記実施例１に記
載されている。

標的細胞に対して特異的なポリクローナル抗体の製造及
び精製は、当業界で公知の慣用の方法に従って行うこと
ができる。

活性化されたリンパ球に対して特異的な抗体はポリクロ
ーナル又はモノクローナルのいずれであってもよくそし
て標的細胞に対して特異的な抗体に＝２４一 ついて述べた如きアイソタイプである。更に、標的細胞
に対して特異的な抗体については、活性化されたリンパ
球に対して特異的な抗体は哺乳動物種起源であるべきで
ある。

活性化されたリンパ球に対して特異的な抗体は、下記の
如くして製造及び精製することができる。

ヒトリンパ系細胞でマウスを免疫しそして、標的細胞に
対する抗体の製造について前記した如く、永久分裂する
抗体生産クローンをつくることによって抗体は製造され
る。ヒトリンパ系細胞は適当なヒト供与者の末梢血液か
ら得られる。問題のクローンは、例えば、適切な細胞に
対するクローンの上澄液のＦＡＣ３（蛍光活性化細胞ソ
ーター）分析により同定される。次いでクローンを適当
なマウス系中で増殖させそして悪性腹水腫瘍（ｍａ　ｌ
　ｉ　ｇｎａｎｔ　ａｓｃｉｔｅｓ　ｔｕｍｏｒｓ）と
して増殖したハイブリドーマ細胞から大量の抗体を製造
することかできる。

抗体は、中空繊維装置又はローラーボトル中でハイブリ
ドーマ細胞を増殖させるなとの標準方法により試験管内
で大量に製造することもできる。これらは周知の工業的
方法でありそして必要な装置は使用するための適当な機
器と共に商業的に得ることができる。

モノクローナル抗体は前記の方法により精製することが
できる。

２つのこのような抗体の特定の例、即ち抗Ｔ１１、及び
抗Ｔ　ｌ　ｌ　ｚは実施例１に記載されている。

活性化されたリンパ球に対して特異的なポリクローナル
抗体の製造及び精製は、当業界で公知の慣用の方法に従
って行うことができる。

更に、活性化されたリンパ球に対して特異的な幾つかの
適当な抗体がすでに存在しておりそして、成熟Ｔ細胞上
に見出だされるＴｌ１分子の異なるエピトープに結合す
るモノクローナル抗体である抗Ｔ　ｌ　ｌ　２　（不ズ
ミ（ｍｕｒｉｎｅ）　ｒ　ｇ　Ｇ　２　ａ　）及び抗Ｔ
１１３（ネズミＩｇＧａ）［モイエル、ニス・シー・等
、丸止、第３６巻、８９７−９０６　（１９８４）］；
抗トランスフェリン受容体抗体；及び抗ＴＡＣ抗体を生
産するハイブリドーマを含めて公に入手可能である。　
抗Ｔｌ１２及び抗Ｔ１１３は、マサチューセッツ州、ケ
ンブリッジの、イムノケン・インコーホレーテッド（１
ｍｍｕｎｏＧｅｎ　Ｉｎｃ）から入手可能である。抗ト
ランスフェリン受容体抗体は、メリーランド州、ロック
ビレのアメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション
（Ａｍｅｒｊｃａｎ　Ｔｙｐｅ　Ｃｕ１ｔｕｒｅ　Ｃｏ
１１ｅｃｙｉｏｎ）から入手可能である（ＡＴＣＣＮｏ
、　　ＨＢ２１）、抗ＴＡＣ抗体を生産するハイブリド
ーマは、カリフォルニア州、マウンテンビューのベクト
ン・ジッキンソン（Ｂｅｃｔｏｎ　Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ
）から商業的に入手可能である。

抗Ｔｌ　１３は抗リンパ球抗体として好ましいものであ
る。

これらの公に入手可能な抗体は（ハイブリドーマにより
供給される場合には）製造することができそして（必要
に応じて）上記の方法により精製することができる。

本発明のヘテロダイマー抗体複合体を製造するために、
ベーター（Ｏｅｔｅｒｓ）等、アニュアル・レビュー・
オブ・バイオケミストリー（Ａｎｎｕａｌ　Ｒｅｖｉｅ
ｗ　Ｂｉｏｃｈｅｍ）、第４６巻、５２３−５５１（１
９７７）：＝２７− ジ（Ｊｉ）、メソッヅ・イン・エンザイモロジー（Ｍｅ
ｔｈｏｄｓ　Ｅｎｚｙｍｏｌ）、第９１巻、５８０−６
０９　（１９８３）：ブラットラー（Ｂｌａｔｔｌｅｒ
）等、バイオケミストリー（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ
）、第２４巻、１５１７−１５２４　（２９８５）及び
その中の参考文献により記載されているようなタンパク
質の化学的架橋のための慣用の方法のいずれかを使用す
ることにより、２つの異なる抗体を相互に接合すること
ができる。

これらの架橋試薬の多くは例えば、イリノイ州、ロック
７オードのピアース・ケミカルφカンパニ（Ｐｉｅｒｃ
ｅ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏｍｐａｎｙ）、ミズリー州
、セントルイスのシグマ・ケミカル・カンパニー（Ｓｉ
ｇｍａ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏ）、インデイアナ州、
インデイアナポリスのベーリンガ・マンハイム・バイオ
ケミカッ１ス（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ　Ｍａｎｎｈｅｉ
ｍ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ）、ス工−デン、ウプサ
ラのファーマシア（ｐｈａｒｍａｃ　ｉａ）から商業的
に入手可能である。好ましくは、２つの異なる抗体は相
補的反応性基、例えばマレイミド基及びスルフヒドリル
基を導入するヘテロニ官離性架橋試薬により変性され、
次いでこの異なる変性された抗体は次ぎに下記の反応式
ｌに記載の如く、高収率でヘテロダイマーのみを生成す
る相補的基の反応により架橋される。

反応式１ 反応式Ｉにおいて、抗体−しは、すべてのクンバク質に
見出だされるアミン基と反応する２−イミノチオランで
変性されてこの抗体にスルフヒドリル基が導入される［
トラウド（Ｔｒａｕｔ）等、ハエオ乞辷りワニ、第１２
巻、３２６６−３２７５（１９７３）；ランバー１□　
（Ｌａｍｂｅｒｔ）等、旦オケミス］・リー、第１７巻
、５４０６−５４］６（１９７８）］。スルフヒドリル
基は、Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチ
オ）プロピオネートの如き多数の他の試薬を使用し［カ
ールソン（Ｃａｒ　１ｓｓｏｎ）等、バイオケミカル・
ジャニ丈ル（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｊ、）、第１７
３巻、７２３−７３７（１９７８）］　そして例えは］
２−メルカプトエタノール２−２０ミリモル）又はジチ
オ１・レイトール（ｌ−２ミリモル）で短い時間（１５
−４０分）４°Ｃ又は周囲の温度で抗体を処理すること
による、還元剤による穏やかな還元ど、続いてゲルろ過
又は透析して過剰の還元剤を除去することにより、抗体
に導入することかできる。

反応式１において、抗体７は、ずべてのタンパク質に見
出だされるアミン基と反応するスクシンイミジル−４−
（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボ
キシレート（ＳＭＣＣ）で変性されて、抗体にマレイミ
ド基が導入される第２６０巻、］　２０３５−１２０４
１．（１９８５）］。

マレイミド基は、他のへテロ三官能性試薬、例えば、イ
リノイ州、ロックフォードのピアース・ケミカル・カン
パニーから商業的に入手可能な２つの化合物であるｍ−
マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキンスクシンイミド
エステル及びスクシンイミジル−４−（ｐ−マレイミド
フェニル）ブチレート、インデイアナ州、インデイアナ
ポリスのベーリンガー・マンハイム・バイオケミカルス
から商業的に大手可能なマレイミドヘキサノイル−Ｎ−
ヒドロキシスクシンイミドエステル及びブラットラー等
、バイオケミストリー、第２４巻、１５１７−１５２４
　（１９８５）参照、を使用してタンパク質に導入する
こともできる。他の基、例えば、α−クロロ−１α−ブ
ロモ−又はα−ヨード−カルボニル基も又スルフヒドリ
ル基と反応性でありそしてこのような基は、抗体上と抗
体又を効率良く架橋させることができるようにマレイミ
ド基の代わりに抗体又に導入されうる。例えは抗体又を
Ｎ−スクシンイミジルヨードアセテ−１・で変性して抗
体にヨードアセチル基を導入することができる。２−ピ
リジルジチオ基も又遊離のスルフヒドリル基と反応性で
ありそしてこのような基も又、例えばＮ−スクシンイミ
ジル−３−（２−ピリジルジチオ）プロピオネートとの
反応により抗体λに導入することができる。この場合に
、抗体上と抗体λとの架橋反応は、ジスルフィド結合を
含有する架橋結合を生じるであろう［ランバート等、ジ
ャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミスｈ　は−二、
第２６０巻、１２０３５−１．２０４１（１９８５）参
照１゜ 抗体上と抗体７間の架橋結合の有効な形成のために、ス
ルフヒドリル基は抗体上又は抗体スのいずれか１つに導
入することができそしてマレイミド基のようなスルフヒ
ドリル基と反応する基は、抗体又又は抗体上のいずれか
１つに導入することができる。

スルフヒドリル基は両方の抗体に導入することができ、
次いでこれらの抗体を酸化してジスルフィド結合を形成
させ、ジスルフィド結合のいくらかが抗体上と抗体スを
結合させることができる。両方の抗体に導入されたスル
フヒドリル基は、二官能性アルキルシバライド又はＮ、
Ｎ−０−フェニレンジマレイミド及び旦スマレイミドヘ
キサンの如き二官能性ビス−マレイミドにより架橋させ
ることもできる。

抗体１−抗体２架橋結合を形成させることができる他の
方法は、抗体の１つを、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド
ビオチン又はスルホスクシンイミジル　６−（ビオチン
−アミド）ヘキサノエート（ピアース・ケミカル・カン
パニー、イリノイ州、ロックフォード）の如き、タンパ
ク質と反応する商業的に入手可能なビオチンの誘導体の
１つを使用してビオ−チンに結合させ、そして前記に要
約した２つのタンパク質を結合させるための架橋方法又
は例えば、ランバート等、ジャーナル・オブ・バイオル
ジカル・ケミストリー、第２６０巻、１２０３５−１２
０４１　（１９８５）参照、のいずれかを使用して、ア
ビジン又はストレプトアビジンに第２抗体を結合させる
ことである。アビジン及びストレプトアビジンはビオチ
ンに結合し、かくしてビオチンを含有する抗体上とアビ
ジン又はストレプトアビジンに架橋した抗体又は、２つ
のこのように変成された抗体を一緒に混合すると、両抗
体を含む複合体を形成するであろう。

本発明に従う抗体／細胞表面結合性分子複合体は、標的
細胞に対して特異的な抗体を、細胞表面分子に結合する
ことができる抗体以外の分子で代替することを除いて、
ヘテロダイマー抗体複合体を製造するための前記した方
法に従って製造することができる。抗体／細胞表面結合
性分子複合体において使用することができる適当な分子
の例には、例えば、ホルモン、例えばインシュリン、Ｔ
ＲＨ（チロトロピン放出ホルモン）　、ＭＳＨ（メラノ
サイト刺激ホルモン）；リンホカイン類、例えばＩＬ−
２、ＩＬ−３、インターフェロン（例えば、α、γ、β
）及びコロニー形成刺激因子（Ｃ３Ｆ’ｓ）、例えばＧ
−Ｃ３Ｆ、、ＧＭ−Ｃ３Ｆ等が包含される。

本発明に従う異なった特異性を有する結合部位を含有す
るハイブリット抗体はいくつかの慣用の方法により製造
することができる。

（１）２つの抗体生産性ミエローマをコツトン（Ｃｏｙ
ｙｏｎ）及びミルスタイン（ＭｉｌｓｔｅｉｎＸネイチ
ャニ　第２４４巻、４２−４３　（１９７３）に従って
融合させてハイブリドーマを形成することができる。

（２）モノクローナル抗体を生産するハイブリドーマ細
胞を、適当な抗原で免疫されたマウスの肺臓細胞と融合
させることができる［例えば、ケイ・ニス・ウェッブ等
、キャンサー・トリートメント・レポーツ（ｑ匹、覚旦
１０秒、）、第６９巻、６６３　（１９８５）参照］。

（３）各々がモノクローナル抗体を生産する２３５一 つのハイブリドーマ細胞を融合させることができる［例
えば、ステアルツ及びベバン（Ｓｔｅａｒｚ　ａｎｄＢ
ｅｖａｎ）、ＰＮＡＳ　　第８３巻、１４５３−１４５
７（１９８６）参照］。

方法（１）、（２）又は（３）に従う融合は、典型的に
は、オイ及びヘルツエンバーブ、“細胞免疫学における
選ばれた方法″（ミツシェル　ビー、シ〜ジ　ニス、編
者）オツクスフオー１’１９８０．３５１−３６８頁［
Ｏｉ　ａｎｄ　Ｈｅｒｔｚｅｎｂｅｒｇｉｎ　”５ｅｌ
ｅｃｔｅｄ　Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｉｎ　Ｃｅ１ｌｕｌａｒ
　１ｍｍｕｎｏｌｏｇｙ”（Ｍｉｓｈｅｌｌ　Ｂ、、　
Ｓｈｉｉｇｉ　Ｓ、　ｅｄｓ、　）　０ｘｆｏｒｄ　１
９８０゜ｐｐ、　３５１−３６８］に従って行なわれる
。

（４）遺伝子工学を使用して、例えば、ニス・デー・ギ
リース（Ｓ、　Ｄ、　Ｇ１１ｌｉｅｓ）等、セル（Ｃｅ
ｌｌ）、第３３巻、７１７−７２８　（１９８３）に記
載の如き抗体生産性ハイブリドーマ細胞に他のＨ鎖又は
Ｌ鎖の遺伝子を導入することができる。

このようにして合成された二官能性抗体構造体は下記の
如くして更に使用するために精製される。

ヘテロタイマー抗体複合体及び抗体／細胞表面結合性分
子複合体はゲルろ過により精製することができる。特に
ヒドロキシルアパタイト・クロマトグラフィー　（ｈｙ
ｄｒｏｘｙｌａｐａｔｉｔｅ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａ
ｐｈｙ）［ジュアレッツーサリナス（Ｊｕａｒｅｚ−５
ａｌｉｎａｓ　）等、メソッド・イン・ユンザイモロジ
ー（Ｍａｔｈ、　Ｅｎｚｙｍす旦σ）、第１２１巻、６
１５−６２２（１９８６）］を含む他の慣用の方法を使
用することもできる。

下記の実施例３は、特異的なヘテロダイマー抗体複合体
を精製するための方法を詳細に述べている。この方法は
いかなるこのような複合体にも適用することができる。

ハイブリッド抗体は、上記のヒドロキシルアパタイト・
クロマトグラフィーを使用すると共にモノクローナル抗
体を精製するための前記の方法により精製することがで
きる。

ヘテロダイマー抗体複合体がそれぞれの細胞に結合する
能力は下記の如くして評価することができる。

ヘテロダイマーの１つの成分に対する表面抗原を発現し
ているが他の成分に対しては発現していない細胞系を使
用する。細胞を、濃度Ｘ１例えば５０ｐｇ／ｍ（ｌのダ
イマーと又は濃度１／２ｘ。

例えは２５μｇ　／　ｍ　（ｌの遊離抗体と氷上で約３
０分間インキュベーションし、次いで細胞を２回洗浄し
そしてフルオレセインイソチオシアネート（Ｆ　Ｉ　Ｔ
Ｃ）の如き適当な標識に結合した適当な希釈率のヤギ抗
マウス免疫グロブリン又はウザギ抗マウス免疫グロブリ
ンにより氷上で約３０分間染色する。次ぎに細胞を再び
洗浄しそしてサイ］・フルオログラフにより蛍光強度に
ついてアッセイする。ヘテロダイマー抗体複合体は、も
しも完全に機能的であるならば、このアッセイにおいて
は、遊離抗体と同じ蛍光強度分布を与え、かくして、複
合体が細胞の適切な抗原に等しく十分に結合することを
示すであろう。

抗体／細胞表面結合性分子複合体及びハイブリッド抗体
かそれぞれの細胞に結合する能力は、当業者に周知され
た同様な慣用の方法により評価することができる。

リンパ球は生体内又は生体外のいずれでも活性化するこ
とができる。標的細胞の処理が生体内でありそしてリン
パ球が生体外で活性化されるならば、リンパ球は活性化
の後身体に注入される。

リンパ球の生体内活性化は、抗Ｔｌ１２、抗Ｔ３にュー
ジャーシー州、ラリタンのオルソ・ファーマンニーティ
カルから○ＫＴ−３という名称で入手可能である）又は
抗２ＨＩの如き活性化抗体を、二官能性抗体構造体の注
入の数時間前に注入することにより達成される。

リンパ球の生体内活性化は、 （１）抗Ｔ］　１２、抗２ＨＩ　　［抗２Ｈｒ生産性ハ
イブリドーマはメリーランド州、ロックヒレのアメリカ
ン・タイプ・カルチャー・コレクション（Ａｍｅｒｉｃ
ａｎ　Ｔｙｐｅ　Ｃｕ１ｔｕｒｅ　Ｃｏ１１ｅｃｔｉｏ
ｎ）に寄託番号ＡＴＣＣＨＢ　　９３９９で寄託されて
いる］又は抗Ｔ３の注入によりＴｌ１３の発現を誘発さ
せるか、又は、 （２）前記の如きＴ１１３の発現及びＩ　Ｌ　−２、Ｂ
ＳＦ−１及びγ−ＩＦＮの如きリンホカインによる活性
化を誘発させることにより行うことができる。

好ましい物質には活性化抗体抗Ｔ　ｌ　］　２及び抗Ｔ
３及び抗２　ｔｌ　Ｉが包含される。

リンパ球の生体外活性化は、二官能性抗体構造体の注入
の数日前に行うことができる。

リンパ球の生体内活性化は、慣用の医学装置による細胞
泳動（ｃｙｔｏｐｈｏｒｅｓｉｓ）により血液から取り
出された末梢血リンパ球（ＰＢＬ’　　ｓ）をＩＬ−２
、抗Ｔｌｌ。、抗Ｔ３又は抗２ＨＩとインキュベーショ
ンすることにより達成される。インキュベーションは、
例えは、ＩＯｐｇ／ｍ（ｌＣｌｐｇ／ｍＱ乃至１００　
ｐ　ｇ／ｍＱ）の可溶性抗Ｔ１１２又は抗２　ＨＩ又は
例えば１．０−１０００Ｕ／ｍＱ。

のＩ　Ｌ　−２又は例えは１０ｐｇ／ｍＱｃｌｐｇ／ｍ
Ｑ乃至１００μｇ／ｍＱ）のプレートに付着しているか
もしくはヒーズに結合している抗Ｔ３と共に０．５ＸＩ
Ｏ’個細胞／ｍＱにてｌＯ％ヒトＡＢ血清を補充された
ＲｐＭｒ　　１６４０培地中で３７°Ｃで１００％湿度
及び５−１０％ＣＯ２の雰囲−４０＝ 気で行なわれる。

生体外でリンパ球を活性化するのに使用することができ
る物質にはＴＬ−２、抗Ｔ　］　ｌ　２、抗Ｔ３及び抗
２　ＨＩが包含される。

好ましい物質には抗Ｔ１１２、抗Ｔ３及び抗２ＨＩか包
含され、特に好ましいのは抗Ｔｌｌ□である。

生体内でリンパ球を活性化させる物質の能力は、前述の
抗体の如き活性化物質を患者に注入し、次いで血液を採
取し、ＰＢＬ　ｓを単離しそして、例えばＴ　ｌ　ｌ　
３発現についてアッセイし及び適当に対応する二官能性
抗体構造体による殺傷能力をアッセイすることにより決
定することができる。アッセイの特定の条件は当業者に
より容易に決定することができる。

物質の生体外でリンパ球を活性化させる能力は、例えは
、前記の活性化試薬と共に３日間試験管内培養の後キラ
ー細胞を発生させるその物質の能力により決定すること
かできる。キラー細胞機能は、本発明の二官能性抗体構
造体の１つを使用して標的を殺す活性化されたＰＢＬ’
　　ｓの能力を監視するか、又は慣用の方法に従ってレ
クチン媒介溶解（Ｉｅｃｔｉｎ　ｍｅｄｉａｔｅｄ　Ｉ
ｙｓｉｓ）を監視することにより測定される。

本発明を好ましい態様に関して更に説明するが、本発明
はそれにより限定されるものとみなすべきではない。

本発明のこの好ましい態様においては、ヘテロダイマー
抗体複合体は、抗リンパ球抗体成分として抗Ｔｌ１３を
含有しそして抗腫瘍細胞抗体成分として抗腫瘍細胞抗体
を含有する。この態様に従えば、生体内で循環する巨大
な数の活性化されていないＴｌ１発現細胞に複合体が結
合する心配なしに、活性化された細胞の注入の前に抗Ｔ
　ｌ　１３／抗抗腫瘍細胞体複合体を注入することがで
きる。

かくして、これらの循環している普通の活性化されてい
ないＴ細胞上のＴ　ｌ　１３エピトープの非常に低い発
現は、抗Ｔ１１３−抗腫瘍細胞抗体複合体が生体内で標
的腫瘍細胞に効率良く結合することを許容する。その後
に活性化されたリンパ球か注入されるならば、活性化さ
れたリンパ球は、抗Ｔ１１３−抗腫瘍細胞抗体複合体で
被覆された腫瘍細胞を特異的に標的とする。

例えば、１つの方法においては、Ｔ細胞は抗Ｔ１１２に
より生体外で処理することができ、これはＴ細胞の表面
の抗Ｔ１１３エピトープを露出させるであろう。宿主の
身体に注入して戻すと、抗Ｔｌ　１２で被覆されｔ−細
胞は抗Ｔ　ｌ　ｌ　、ヘテロダイマー抗体複合体で被覆
された標的細胞に結合する。

かくしてＴ細胞は、抗Ｔｌｌ。と抗Ｔ１１３の結合によ
り活性化されそして、ヘテロダイマー抗体複合体橋によ
り標的腫瘍細胞と密接な細胞間接触をして、活性化され
たリンパ系細胞が標的細胞を殺すことを可能とする。

下記する実施例５においては、標的細胞は、抗Ｔ１１３
と標的細胞に対して特異的な抗腫瘍抗体のヘテロダイマ
ー抗体複合体で被覆された。これらの被覆された標的細
胞が活性化されたＴ１１発現細胞と混合されると、標的
細胞とＴｌ１発現細胞は細胞間に橋を形成したヘテロダ
イマー抗体複合体により密接な細胞間接触において相互
に結合させられた。抗体橋から生じた密接な細胞−細胞
接触は活性化されたＴｌ１発現細胞が標的細胞を殺すこ
とを可能とした。

生体内処理の方法 本発明に従えば、二官能性抗体構造体は、タンパク質担
体として加えられた正常なヒトアルブミンと共に正常な
生理的食塩水中の静脈内注入として患者に与えることが
できる。

投与される二官能性抗体構造体の量は、年齢、体重及び
負っている腫瘍と共に変わるが、−船釣には０．１−１
０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲にある。

静脈内ＩＬ−２は生体内でキラー細胞を活性化すること
が示され［ニス・ニー・ローゼンバーグ（Ｓ、　Ａ、　
Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ）等、ジャーナル・オブ・エクスベ
リメンタル・メディシン・（Ｊ、　Ｅｘｐ、　Ｍｅｄ、
）第１６１巻、１１６９−１１８８　（１９８５）］そ
してこの方法は活性化された細胞溶解性リンパ球を得る
のに使用することができる。リンパ球の生体内活性化は
、“′リンパ球の活性化″という見出＝４４− しの節に記載した試薬についてＩＬ−２について述べた
如くしても進行するであろう。

リンパ球の生体外活性化については、リンパ球は前記の
如き患者由来のものでありそして前記の如くして活性化
される。活性化されたリンパ球は次いで５０ｍ１２７時
間の容量中１０８個の細胞／時間の速度の如き適当な速
度で連続的静脈内注入により身体に戻される。

上記の生体内方法に従って処理することができる医学的
状態の例としては、例えば、肺、胸、結腸、前立腺、腎
臓及びリンパ器官の癌を包含する悪性腫瘍：全身性エリ
テマトーデス、リコーマトイド関節炎及び多発性硬化症
の如き自己免疫疾患；腎移植拒絶、心臓移植拒絶、肝臓
移植拒絶、肝移植拒絶及び骨髄移植拒絶の如き移植片拒
絶；移植片対宿主疾患、ＣＭＶ感染症、ＨＴ　Ｌ　Ｖ感
染症、エイズ等の如きウィルス感染症；ランプル鞭毛虫
症（ｇｉａｒｄｉａｓｉｓ）、アメーバ症（ａｍｏｅｂ
ｊａｓｊｓ）、シストソミアシス（ｓｈｉｓｔｏｓｏｍ
ｉａｓｉｓ）等の如き寄生虫感染症が包含される。

基ＭＷ円スｌ［［）Ｌ丙 本発明の方法は試験管内で行うこともできる。

試験管内方法に従って処理することができる医学的状態
の例としては、自己由来の（ａｕＬｏｌｏｇｏｕｓ）又
は同種異型の（３１１０ｇｅｎｅｉｃ）骨髄移植が包含
される。

試験管内処理は下記の如くして行うことかできる。

前記の如くして（Ｉ　Ｌ−２、及び／又は抗Ｔ１１□、
抗Ｔ３、抗２　ＨＩにより）数日間活性化された患者か
らＰＢＬを回収した。標的とされるべき細胞、例えは腫
瘍細胞を含む骨髄をＥ／Ｔ　（エフェクター細胞／標的
細胞）比２０：１乃至ｌ：１の活性化された細胞及び適
当な二官能性抗体構造体と４乃至１８時間混合する。こ
の時間の後、骨髄細胞を血清を含む培地で洗浄しそして
公知の方法に従って静脈内注入により患者に戻す。

四隼泄 本発明を限定することを意味するものではない特定の実
施例により更に説明する。

特記しない限りすべての百分率、割合等は重量による。

実施例に述べらまたモノクロナール抗体抗体抗Ｔ１１２
、抗Ｔ１１３、Ｊ５及び抗Ｂ４を生産するハイブリドー
マ細胞系統を引用文献に記載の如くして製造した。

抗Ｔｌｌ□及び抗Ｔ１１３は成熟Ｔ細胞の表面に見出だ
されるＴ１．１分子の異なるエピトープに結合するモノ
クロナール抗体である［モイエル　ニス・シー・等、叩
、第３６巻、８９７−９０６（１９８４）］。

Ｊ５は普通急性リンパ芽球白血病抗ｗ、（Ｃｏｍｍｏｎ
Ａｃｕｔｅ　Ｌｙｍｐｈｏｂｌａｓｔｉｃ　Ｌｅｕｋｅ
ｍｉａ　Ａｎｔｉｇｅｎ）　（ＣＡＬＬＡ）に対して特
異的な不スミＩｇＧ２ａ　　である［リッツ　ジェー等
、オ・イチ九二、第２８３巻、５８３−５８５　（１９
８０）］。

抗Ｂ４はＢ細胞及びＢ細胞起源の悪性腫瘍に見出たされ
るＢ４抗原に対して特異的なネスミＩｇＧ１である［ナ
ドラー　エル・エム等、ジャーナ巻、２４４−２５０　
（］　９８３）］　。

これらの抗体を生産するハイブリドーマ細胞系統はＢ　
ａ　ｌ　ｂ　／　Ｃマウスにおける腹水腫瘍として増殖
させた。別法として、Ｊ５及び抗Ｂ４は、フロリダ州、
ヒアリーチのカルチャー・イムノロジー（ＣｕＨｕｒｅ
　Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ）から商業的に得ることができ
る。抗Ｔ１１２及び抗Ｔ１１３抗体は、マサチューセッ
ツ州、ケンブリッジのイムノケン・インコーホレーテッ
ド（１ｍｍｕｎｏＧｅｎ　Ｉｎｃ）から商業的に得るこ
とができる。

実施例↓ 抗体の精製 すべての精製工程は４°Ｃで行った。Ｊ５抗体は、プロ
ティンＡ−セファロース　ＣＬ−４Ｂ（ｐｒｏｔｓｉｎ
　Ａ−５ｅｐｈａｒｏｓｅ　ＣＬ−４Ｂ）のカラム［ミ
ズリー州、セン］・ルイスのシグマ・ケミカル・カンパ
ニー（Ｓｉｇｍａ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏ）］による
アアフィニティークロマトゲグラフィを使用する慣用の
方法［ゴールトマソハー等、ジャーナル・オブ・イムノ
ロオニ、第１３６巻、３２０−３２５　（１９８５）；
ラン２０３５−１２０４１　　（１９８５）］　を使用
して腹水液から精製した。カラムにより結合された抗体
をＮａＣｌ　（０，１，５Ｍ）を含有する０、１Ｍ酢酸
で溶離した。ｌ／ｌ　Ｏ容量の　］、０ＭＮａＨＣＯ３
の添加により抗体含有画分を直ちに中和し、次いで、グ
リシン（５０ｍＭ）及びＮａＮ５（０゜４ｍＭ）を含有
する１、０ｍＭリン酸すトリウム緩衝液、ｐＨ６，０中
で平衡化されたＣＭ−セルロースのカラム［ニコージャ
ーシー州、クリ７トンのホワットマン・ケミカル・セバ
レーションズ（ＷｈａＬｍａｎ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　５
ｅｐａｒａＴｉｏｎｓ）のＣＭ５２］でのイオン−交換
クロマジグラフイーにより更に精製するために、この同
し緩衝液に対して透析した。

カラム（タンパク質１２０ｍｇについて３０ｍＱの床容
量）をＮａＣｌの線形勾配（Ｏ］ＯＯｍＭ）で展開しそ
してＪ５か単一ピークとして溶離した。精製した抗体を
ＮａＣｌ　　（１４５ｍＭ）を含有する］０ｍＭリン酸
カリウム緩衝液、ｐ　Ｈ７２に対して最後に透析し、次
いでろ過［マサチューセッツ州、ベツドフォードのミリ
ポアー・コーポレーシａ　（Ｍｒｌｌｒｐｏｒｅ　Ｃｏ
ｕｐ）の０．２２ｐｍ、　　ミレックスーＧＶ膜（Ｍ　
ｉ　ｌ　Ｉｅｘ−Ｇ　Ｖ　ｍｅｍｂｒａｎｅ）又は、ニ
ューハンプシャイア−州、キーヌのシュライヘル・アン
ド・シュエル（Ｓｃｈｌｅｉｃｈｅｒ　＆　５ｈｕｅｌ
ｌ）の０、’ｌｐｍ、ユニフロ膜（Ｕｎｉｆｌｏ　ｍｅ
ｍｂｒａｎｅ）］により無菌化し、そして−７０°Ｃで
約５ｍｇ／ｍ１２の濃度で保存した。

抗Ｔｌｌ□は、この抗体の精製の第２工程で使用したＣ
Ｍ−セルロースカラムが、グリシン（５０ｍＭ）及びＮ
　ａ　Ｎ５（０，４ｍＭ）を含有する１０ｍＭリン酸ナ
トリウム緩衝液、ｐＨ１，Ｏ中でＯ−３００ｍ０−３Ｏ
０の線形勾配で展開されたことを除いては、同様な方法
により精製された。

抗Ｂ４は、４°Ｃで３つの工程で精製しＩ−８第１Ｉこ
、ＮａＣＩ　　（１４５ｍＭ）を含有する２容量の１０
ｍＭリン酸カリウム緩衝液、ｐＨ７，２で腹水液を希釈
し、次いで固体（ＮＨ４）２５０４を連続的に撹拌され
た溶液に少しずつ４５分にわたって加えた。懸濁液を１
時間撹拌した。沈澱したタンパク質を遠心分離により回
収し次いでＮａＣＩ（３，０Ｍ）を含有する０、ＩＭＦ
リス・ＭＣＩ緩衝液、ｐＨ８，９に溶解しく腹水液５０
ｍ（２からのタンパク質に対して５０ｍ（２中に）、そ
してｐＨ８，９の緩衝液１００容量に対して８時間透析
した。透析した溶液を、ｐＨ８，９緩衝液中で平衡化さ
れているプロティンＡ−セファロースＣＬ−４Ｂのアフ
ィニティーカラムに加え、次いでカラムを溶離液の吸光
度がゼロ近くになるまでｐＨ８，９緩衝液で洗浄した。

次いで、酢酸ナトリウム（５０ｍＭ）及びＮａＣＩ　（
１５０ｍＭ）を含有する５０ｍＭのリン酸ナトリウム緩
衝液、ｐＨ６，０によりカラムから抗Ｂ４抗体を溶離し
た。ＮａＣｌ　　（１４５ｍＭ）を含有する１０ｍＭリ
ン酸カリウム緩衝液、ｐＨ７，２中で平衡化されている
セファロースＳ−３００のカラム［ニューシャーシー州
、ビス力タウエイのファーマシア・ファイン・ケミカル
ス（Ｐ　ｈａｒｍａｃｌａ　Ｆ　ｉｎｅ　Ｃｈｅｍｉｃ
ａｌｓ）］　を通してのゲルろ過により抗体含有両分を
最終精製のために濃縮した。精製した抗体を無菌化しそ
して］５（上述）に記載の如くして保存しＩこ。

抗Ｔ　ｌ　ｌ　、は、硫酸アンモニウム沈澱及び、抗体
をＮａＣＩ　　（０，１５Ｍ）を含有する０、１Ｍ酢酸
によりタンパク質入−セファロースＣＬ−４Ｂ７５）ら
溶離させ、両分を１　、０　Ｍ　　Ｎ　ａ　ＨＣＯ。

を含有する管（１／１０両分用量）に直接採集すること
を除いては、抗Ｂ４の場合と同じ方法を使用するプロテ
ィンＡ−セファロースＣＬ−４Ｂによるアフィニティー
クロマトグラフィーによって精製した。抗体含有画分を
一緒にしそしてＮａＣ１（０，５８Ｍ）を含有する４０
ｍＭリン酸カリウム緩衝液、ｐＨ７，２に対して徹底的
に透析した。

精製した抗体をろ過により無菌化しそして−７０００で
約５ｍｇ／ｍＱの濃度で保存した。

実施例２ ＥＤＴＡ（１ｍＭ）及びＮａＣｌ　（ｌｏｏｍＭ）を含
有する６０ｍＭトリエタノールアミン・ＭＣＩ緩衝液、
ｐＨ８，０中のＪ５抗体（２ｍｇ／ｍｆｆ）を脱ガスし
、次いで窒素雰囲気下に０°Ｃで９０分間２−イミノチ
オラン（０−１３ｍＭ）で処理した。２−イミノチオラ
ン［ミズリー州、セントルイスのシグマ・ケミカル・カ
ンパニー）のストック溶液はランバート等、バイオケミ
ストリー、第１７巻、５４０６−５４１６　（１９７８
）による記載の如くして調製した。ＮａＣ］　　（５０
ｍＭ）及びＥＤＴＡ（１ｍＭ）を含有する５ｍＭビスト
リスアセテート緩衝液（ｂｉｓｔｒｉｓ、ａｃｅｔａｔ
ｅ　ｂｕｆｆｅｒ）、ｐＨｓ、８と平衡化されたセファ
デックスＧ−２５（超微細）のカラムを通す４°Ｃでの
ゲルろ過により反応を終了させた。このようにしてＪ５
抗体に導入されたスルフヒドリル基はエルマン（Ｅｌｌ
ｅｍ、　Ｂｉｏｐｈｙｓ）、第２８巻、７０−７７（１
９５９）、により分光光度法により定量し二１５の分子
光たり約０．７個のスルフヒドリル基がここに述べた方
法により導入された。

抗Ｂ４抗体は、０°Ｃでの９０分のインキュベーション
に使用した２−イミノチオラン濃度が０゜２６ｍＭであ
ることを除いては、Ｊ５抗体の場合と全く同じ方法によ
り変性された。

各々について同じ方法を使用して、抗体、抗Ｔ１１□及
び抗Ｔ１１３にマレイミド基を導入した。

ＥＤＴＡ（ＩｍＭ）を含有する］００ｍＭリン酸す］・
リウム緩衝液、ｐＨ７，０中の抗体（］、　］使ｇ／ｒ
ｎＱ）を、スクシンイミジル−４−（Ｎ−マレイミドメ
チル）シクロヘキサン−１−カルホキシレー］・（イリ
ノイ州、ロックフォードのピアース・ケミツノル・カン
パニー）と共に、３０°Ｃで３０分間、分子光たり１．
０個のマレイミド基の導入が起こる各抗体についての試
薬濃度：抗Ｔｌｌ□については２０μＭ及び抗Ｔ１１３
については１０μＭを使用してインキュベーションした
。試薬は、乾燥ジオキサン中の調製したはかりの１０ｍ
Ｍストック溶液から加えた。ｐＨ７，０緩衝液と平衡化
されたセファデックスＧ−２５（超微細）のカラムを通
ず４°Ｃでのゲルろ過により反応を終了させた。マレイ
ミド基の導入レベルは、ランバート等、ジャーナノトオ
ブ・バイオロジカル・ケミスと悲二、第２６０巻、］　
２０３５−１２０４１（１９８５）に記載の如き放射標
識システィンを使用するアッセイにより測定した。

ＮａＣ１（５０ｍＭ）及びＥＤＴＡ（１ｍＭ）を含有す
る５ｍＭヒストリス・アセテ−］・緩衝液、ｐＨ５，８
中の導入されたスルフヒドリル基を含有するＪ５又は抗
Ｂ４　（０−５１，０ｍｇ／ｍ４）を、ＥＤＴＡ（１ｍ
Ｍ）を含有する１００ｍＭリン酸すトリウム緩衝液、ｐ
Ｈ７，０中の導入されたマレイミド基を含有する当量（
ｅｑｕａｌ　ｗｅｉｇｈｔ）の抗体（０，５−１，０ｍ
ｇ／ｍｆｆの抗Ｔｌ１２又は抗Ｔ１１３）と混合した。

混合物のｐ　Ｈを０．５Ｍトリエタノールアミン・ＨＣ
］、ｐＨ８，Ｑの添加により７．０に調節し、次いで混
合物を　Ｃで１６時間窒素下にインキュベーションした
　４．（いで２−メルカプトエタノールを最小濃度２．
５μＭとなるように加えて、残りのマレイミド基をブロ
ックし、そして４°Ｃで３０分のインキュベーションの
後、ヨードアセタミド（２ｍＭ）を加えそして、すべて
の遊離スルフヒドリル基をブロックするために更に６０
分間インキュベーションを続けた。

実施例３ ヘテロダイマー抗体複合体の精製 複合反応混合物を、ＮａＣ１（３Ｍ）を含有する１　０
　ｍ　Ｍ　ＨＥ　Ｐ　Ｅ　Ｓ　／　Ｎ　ａ　ＯＩ−１緩
衝液、ｐＨ７，６中で平衡化されているバイオゲル（Ｂ
ｉｏ−Ｇｅｌ）Ａ−１，５ｍ（微細）［カリフォルニア
州、リッヂモンドのバイオ−ラド（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）］
のカラム（１０ｍｄ試料容量について９５ｃｍＸ２．６
ｃｍ）を通ずゲルろ過に付した。これらの条件下に、抗
体−抗体タイマー（Ｍｒ　　３２０，０００）は高Ｍｒ
　　の凝集体から及び千ツマー１ｇＧ抗体（Ｍｒ　　１
６０，０００）から完全に溶解さ、ｌ。

カラムから溶離する画分からの試料を、アクリルアミド
（５−１０％Ｗ　／　Ｖ　）でキャストされたゲルスラ
ブ（１４５ｍｍＸ９０ｍｍＸ０．７５ｍｍ）におけるポ
リアクリルアミド／ドデシルサルフェートゲル電気泳動
により分析した。ゲルは、レムリ（Ｌａｅｍｍｌｉ）等
、ネイチャー、第２２７巻、６８０−６８５　（１９７
０）；ランバート等、区ヱニナル・オブ・バイオロジカ
ル・ケミス）・リー、第２６０巻、１２０３５−１２０
４１　（＋９８５）の方法を使用する非還元条件下に試
験された。精製された抗体−抗体ヘテロダイマーを含有
する画分をプールし、ＣＸ−３０浸漬性膜（ｉｍｍｅｒ
ｓｉｂｌｅｍｅｍｂｒａｎｅ）　［マサチューセッツ刀
仏ベツド７オードのミリポア・コーポレーション（Ｍｉ
ｌｌｉｐｏｒｅＣｏｒｐ）］　を使用して約０．５ｍｇ
／ｍ（２に濃縮しそして最後にＮａＣｌ　　（１４５ｍ
Ｍ）を含有する１０ｍＭリン酸カリウム緩衝液。ｐＨ７
，２中に透析した。試料を一７０°Ｃで冷凍保存した。

実施例４ Ｊ５−抗Ｔ１１３及びＪ５−抗Ｔｌ　１２複合体がＣＡ
ＬＬＡ発現細胞及びＴｌｌ□／Ｔ１１３発現細胞に結合
する能力を評価した。使用した細胞系統は、メリーラン
ド州、ロックビレのアメリカン・タイプ・カルチャー・
コレクションから入手可能でありそしてＡＴＣＣ番号Ｃ
ＲＬ　　１４３２を有する、ナマルワ（Ｎａｍａｌｗａ
）　、ＣＡ　Ｌ　Ｌ　Ａ　＋、Ｂ４＋、Ｔｌ１−バーキ
ットリンパ腫系統（Ｂｕｒｋｉｔｔｌｙｍｐｈｏｍａ　
１ｉｎｅ）　［インターナショナル・ジャーナル・オブ
・カンサー（Ｉｎｔ、　Ｊ、　Ｃａｎｃｅｒ）、第１２
巻、３９６−４０８　（１９７３）］及びＲＥＸ。

Ｔｌ　１３及びＴＩ　Ｉ２陽性細胞系統の例としてのＴ
１１”　ＣＡＬＬＡ＋／−成人型Ｔ細胞白血病細胞系統
であった。しかしながら、いかなるこのような細胞系統
又は健康なヒト供血者からの活性化された末梢血リンパ
球もＲＥＸの代わりに使用することができる。

複合体又は当量の変性されていない抗体（即ち、Ｉ５、
抗Ｂ４、抗Ｔｌ　１２又は抗Ｔ１１３）を氷上で５０μ
Ｑの容量中のｌＸｌ０’個の細胞とインキュベーション
し、１％ウシ血清アルブミンを含有するハンクスの平衡
塩類溶液（Ｈａｎｋｓ　Ｂａ１ａｎｃｅｄ　５ａｌｔＳ
ｏｌｕｔｉｏｎ）　（ＨＢ　Ｓ　Ｓ　）　ｌ　ｍ（ｌで
２回洗浄した。

次いで、細胞を氷上で２５μρの容量中のＩ：２５希釈
率のヤギ抗マウスｌ　ｇ７Ｄオレセインイソチオシアネ
ート（ＣＡＭＧ−Ｆ　Ｉ　ＴＣ）とインキュベーション
し、最後に、細胞を蛍光活性化細胞ソータ＝（エピック
ス■）で蛍光について分析した。

図は１５、抗Ｔは□、抗Ｔ　１１　ａ及び複合体Ｊ５−
抗Ｔｌｌ□及びＩ５−抗Ｔｌ　１３について得られたパ
ターンを示す。

更に特定的には、図はナマルヮ細胞（ａ乃至りの群）又
はＲＥＸｉ胞（ｉ乃至ｐの群）を抗体なしくａ、ｉ）、
Ｊ　５　（ｂ、Ｄ　、抗Ｔ１２ｚ（ｃ、ｋ）、抗Ｔｌ１
ｓ（ｄ、］）、抗Ｔ３　（ｅ、ｍ）、Ｉ５−抗Ｔｌ１ｚ
（ｆ、ｒ＋）、Ｉ５−抗Ｔ１１ｓＣｇ、ｏ）又はＩ５−
抗Ｔ３　（ｈ、ｐ）とインキュベーションした際のヘテ
ロダイマー複合体のＦＡＣ５分析を示す。

ヘテロダイマー抗体中の各抗体成分は遊離抗体と同じ結
合活性及び特異性を持っていることは図から明らかであ
る。

＝５９一 実施例５ 問題の抗原を発現している細胞を結合する能力に加えて
、抗Ｔｌ１２／抗Ｔ１１．複合体は機能的特性を有する
ことが示されなければならない、即ち、適当な環境下に
Ｔｌ　ｌ＋ＰＢＬを活性化しなければならない。抗Ｔｌ
ｌ□及び抗Ｔ１１３抗体の組み合わせはＰＢＬを活性化
して増殖させることは知られている［モイエル　ニス・
シー等、＋　／Ｌ、第３６巻、８９７−９０６　（１９
８４）］。故に、本発明の複合体の機能的統合性（ｆｕ
ｎｃｔｉｏｎａｌ　ｉｎｔｅｇｒｉｍｙ）は、Ｉ５−抗
Ｔ　１１　ｓ及び抗Ｔ　ｌ　ｌ　２の存在下に又はＩ５
−抗Ｔ　ｌ　ｌ　２及び抗Ｔ１１３の存在下にＰＢＬを
インキュベーションしそして３Ｈ−チミジンの取り込み
によりヒツジ赤血球ロゼツトＰＢ　Ｌ　（ｓｈｅｅｐ　
ｅｒｙｔｈｒｏｃｙｔｅ−ｒｏｓｅｔｔｅｄ　ＰＢＬ）
の増殖を測定することにより評価された。特に、５Ｘ１
０’個のＰＢＬを下記の表１に示された如き指示された
試薬の存在下に平坦な底部のマイクロタイター−６〇− プレート中で７２時間インキュベーションしそして最後
の１８時間ｌμＣ１のチミジンでパルスしｌこ。

得られた結果も又表１に示す。

虹 Ｉ５と抗Ｔｌ１２又は抗Ｔｌ１３のヘテロダイマー複合
体によ０．る、ヒ、、トＰＢＬの活性、化９１８．．。

試験管内添加　　　　　　　　ＣＰＭ土Ｓ、Ｄ、’３６
５±２２ Ｃｏｎ　Ａ２．２．５μｇ／ｃｃ　　　　　　４２．４
０８±２２６２抗Ｔ１１２　　　　　　　　　　　７３
０±１７７抗Ｔ１１３２，２５４±１１０３ Ｉ５−抗Ｔｌ１ｚ　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　６５０±３９０Ｊ５−抗Ｔ１１２＋抗Ｔｌ１
３　　　　　　　　　３８，３５９±３９０Ｊ５−抗Ｔ
１１．　　　　　　　　　　　　　　　　　　　４０８
±１０２Ｊ５〜抗Ｔ１１３＋抗Ｔ１１２３０，６４１±
２，５８２Ｊ５＋抗Ｔ１１２＋抗Ｔｉｔ、　　　　　　
　　　　　２５．１２５±５４５１計数／分士標準偏差 ”Ｃｏｎ　Ａ−コンカナバリンＡ ＋５−抗Ｔｌｌ。及び抗Ｔ１１３複合体はそれぞれ機能
的なＴｅｌ□及びＴｉＩ４抗体を含有することは上の表
１の結果から明らかである。その理由は、それらはその
適当な遊離抗体の存在下にＰＢＬを活性化させることが
できるからである。

実施例６ 閾邂 ＥＢＶ−形質転換ヒｌ−Ｂ細胞系統に対して特異的であ
るヒｌ−ＣＴ　Ｌクローンの代表的例である、クローン
ＴＢＩ−６［チカオ・モリモト博士（Ｄｒ　。

ｃｈｉｋａｏ　　Ｍｏｒｉｍｏｔ、ｏ）から受は取った
）］を、この実施例のエフェクター細胞溶解性細胞とし
て使用しｊこ。

ＣＴ　Ｌクローンは、普通はこのクローンが溶解しない
ＣＡ　Ｌ　Ｉ−Ａ＋肺腫瘍Ｌ１門ヱ、ＡＴＴＣ番号ＣＲ
Ｌ　１４３２、インターナショナル・ジャーナ迭、！オ
□ダ−・−久４斐二、第１２巻、３９６−４０８（１９
７３）と共に、又は、アメリカン・タイプ・カルチャー
・コレクション・から入手可能なＣＡ　ＬＬＡ−腫瘍○
ＶＣＡＲ，ＡＴＴＣ番号ＨＴＢ］６１、表２ザー・り太
二＋（Ｃａ匣」朋）、第４４巻、５２８６−５２９０　
（１９８４）、の存在下に、１０μｇ／ｍＱ、の最終濃
度の＋５−抗Ｔ１１３又は＋５−抗Ｔｌｌ□又は下記の
表２に示された如き他の試薬の存在下に４時間インキュ
ベーションされ、ｌＸ１０３個のエフェクター細胞溶解
性細胞（ＴＢＩ−６）又は０．５ＸＩ０５個のＴ細胞及
び５Ｘ１０３個の６１Ｃｒ標識ナマルワ標的を１０％Ｆ
Ｃ３及び１００　ｐ　ｇ／ｍｌスｔ−レブトマイシン及
び１００Ｕ／ｍｆｆペニシリンを持ったＲＰＭ１１６４
０から成る培地中で２００ｕ１２の最終容量でＶ底部プ
レート中でインキュベーションした。

４時間の後、上澄液を回収しそして特異的溶解の百分率
を標準方法に従って計算した［シリチアノアール・エフ
・等、ネイチャっ、第３１７巻、４２８−４２９　（１
９８５）］。

結果を表２に示す。

灯 抗Ｔ１１２又は抗Ｔ１１３と＋５のへテロタイマー複合
体はヒトＣＴ　ＬクローンにょるＣ　Ａ　Ｉ−Ｉ−Ａ　
＋標的の溶解を指向する ％特異的放出 Ｎ１１ｙ　　　　　　　　　試験管内添加　（Ｓｐｅｃ
ｉｆｉｃ　Ｒｅ１ｅａｓｅ）別」　囚 ＣＭ−ＥＢＶ　　　　　　　　　　　　　　　　　７７
　　８０ナマルワ（ｔＪａｍａｌｗａ）−１０ ｊ５−抗Ｔｌ１３６　　　８ ＋５−抗Ｔ１１３＋抗Ｔｌ１２３６　　４１Ｊ５−抗Ｔ
ｌ１２１　　　１ 、＋５−抗Ｔｌｌ□十抗Ｔｅ１３２８　　３３Ｊ５＋抗
Ｔｌｌ□十抗ＴＩ］３１８　　１６０ＶＣＡｌ’ｌ’　
　　　　　　　　　　　　　　　　　］＋９　１２Ｊ５
−抗Ｔｌ１２＋抗Ｔｌ１３２２　　１８Ｊ５−抗Ｔ１１
３＋抗Ｔ１．Ｉ□　　　２３２３Ｊ５＋抗ＴｌＩ２＋抗
Ｔ１１．、　　　２７　　２１相互的抗Ｔ１１２抗体（
ｒｅｃｉｐｒｏｃａｌ　ａｎｔｉ−Ｔｅｌ＝６４− ａｎｔｉｂｏｄｙ）　（即ち、それぞれ抗Ｔ　Ｉ　Ｉ　
２及び抗Ｔ１１３）の存在下に、＋５−抗Ｔ１１３及び
＋５−抗Ｔ１．ｌ□複合体はＴＢＩ−５をＣＡ、　Ｌ　
Ｌ　Ａ十肺瘍ナマルワを溶解するように指向させること
ができるか、ＣＡＬＬＡ−腫瘍、０ＶＣＡＲを溶解させ
ない。

本発明をその特定の態様について詳細に説明してきたが
、本発明の精神及び範囲から逸脱することなく、種々の
変更及び修正がなされ得ることは、当業者には明らかで
あろう。

本発明の主なる特徴及び態様は以下のとおりである。

１、抗リンパ球抗体成分（ｂ）に結合した体操的細胞抗
体成分（ａ）を含んで成り、該抗リンパ球抗体成分は活
性化されたリンパ球に対して特異的であることを特徴と
する、二官能性へテロタイマー抗体複合体。

２、前記抗リンパ球抗体成分（ｂ）が抗Ｔ１１３抗体で
ある上記１に記載の二官能性ヘテロダイマー抗体複合体
。

３、前記抗リンパ球抗体成分（ｂ）が抗Ｔ１１２抗体で
ある上記ｌに記載の二官能性ヘテロダイマー抗体複合体
。

４、前記抗原的細胞抗体成分（ａ）が、抗腫瘍細胞抗体
、ウィルス感染細胞に対する抗体、寄生虫感染細胞に対
する抗体、自己免疫細胞に対する抗体、移植片拒絶を引
き起こす活性化された細胞に対する抗体及び移植片対宿
主疾患を引き起こす活性化された細胞に対する抗体から
成る群より選ばれるｌ員である上記ｌに記載の二官能性
ヘテロダイマー抗体複合体。

５、前記抗原的細胞抗体成分（ａ）が、抗腫瘍細胞抗体
、ウィルス感染細胞に対する抗体、寄生虫感染細胞に対
する抗体、自己免疫細胞の抗体、移植片拒絶を引き起こ
す活性化された細胞に対する抗体及び移植片対宿主疾患
を引き起こす活性化された細胞に対する抗体から成る群
より選ばれるｌ員である上記２に記載の二官能性ヘテロ
ダイマー抗体複合体。

６、ヘテロダイマー抗体複合体の前記抗体成分（ａ）及
び（ｂ）が架橋した相補的反応性基により結合している
上記ｌに記載の二官能性ヘテロダイマー抗体複合体。

７、（ａ）標的細胞表面分子に結合することができる抗
体以外の分子成分と（ｂ）活性化されたリンパ球に対し
て特異的な抗リンパ球抗体成分を含んで成ることを特徴
とする二官能性抗体／細胞表面結合性分子複合体。

８、前記抗リンパ球抗体成分（ｂ）が抗Ｔ１１３抗体で
ある上記７に記載の二官能性抗体／細胞表面結合性分子
複合体。

９、前記抗リンパ球抗体成分（ｂ）が抗’ｒｌｌ。

抗体である上記７に記載の二官能性抗体／細胞表面結合
性分子複合体。

１０、前記分子成分（ａ）が、腫瘍細胞表面分子、ウィ
ルス感染細胞表面分子、宿主感染細胞表面分子、自己免
疫細胞表面分子、移植片拒絶を引き起こす活性化された
細胞の表面分子及び移植片対宿主疾患を引き起こす活性
化された細胞の表面分子から成る群より選ばれる１員に
結合することができる、上記７に記載の二官能性抗体／
細胞表面結合性分子複合体。

１１、前記分子成分（ａ）が、腫瘍細胞表面分子、ウィ
ルス感染細胞表面分子、宿主感染細胞表面分子、自己免
疫細胞表面分子、移植片拒絶を引き起こす活性化された
細胞の表面分子及び移植片対宿主疾患を引き起こす活性
化された細胞の表面分子から成る群より選ばれる１員に
結合することができる、上記８に記載の二官能性抗体／
細胞表面結合性分子複合体。

１２、複合体の前記成分（ａ）及び（ｂ）は架橋した相
補的反応性基により結合している上記７に記載の二官能
性抗体／細胞表面結合性分子複合体。

１３、前記分子成分（ａ）が、ホルモン、リンホカイン
及びコロニー形成刺激因子から成る群より選ばれるｌ員
である上記７又は８に記載の二官能性抗体／細胞表面結
合性分子複合体。

１４、抗標的細胞結合部位成分（ａ）と、活性化された
リンパ球に対して特異的な抗リンパ球結合部位成分（ｂ
）を含んで成ることを特徴とする、二官能性ハイブリッ
ド抗体。

１５、前記抗リンパ球結合部位（ｂ）が７１１３に対し
て特異的である上記１４に記載の二官能性ハイブリッド
抗体。

１６、前記抗リンパ球結合部位（ｂ）がＴｌｌ□に対し
て特異的である上記１４に記載の二官能性ハイブリッド
抗体。

１７、前記抗原的細胞結合部位（ａ）が、ｍ瘍細胞、ウ
ィルス感染細胞、宿主感染細胞、自己免疫細胞、移植片
拒絶を引き起こす活性化された細胞及び移植片対宿主疾
患を引き起こす活性化された細胞から成る群より選ばれ
るｌ員に対して特異的である、上記１４に記載の二官能
性ハイブリッド抗体。

１８、前記抗原的細胞結合部位（ａ）が、腫瘍細胞、ウ
ィルス感染細胞、宿主感染細胞、自己免疫細胞、移植片
拒絶を引き起こす活性化された細胞及び移植片対宿主疾
患を引き起こす活性化された細胞から成る群より選ばれ
る１員に対して特異的である、上記１５に記載の二官能
性ハイブリッド抗体。

１９、活性化されたリンパ球に対して特異的な抗リンパ
球抗体成分（ｂ）に結合した抗原的細胞抗体成分（ａ）
を含んで成る二官能性ヘテロダイマー抗体複合体を使用
して標的細胞集団を選択的に破壊する方法であって、 （１）標的細胞に前記成分（ａ）を介して前記二官能性
ヘテロダイマー抗体複合体を結合させ、（２）りンバ球
を活性化させ、そして （３）前記二官能性ヘテロダイマー抗体複合体の成分（
１））に前記活性化されたリンパ球を結合させることを
含み、 前記工程（１）、（２）及び（３）は、工程（２）が常
に工程（３）と同時に又は工程（３）の前に行なわれる
という条件下に、同時に又は任意の順序で行うことかで
きることを特徴とする方法。

２０、試験管内で標的細胞を破壊することを含んで成る
上記１９に記載の方法。

２１、生体内で標的細胞を破壊することを含んで成る上
記１９に記載の方法。

２２、生体内又は生体外でリンパ球を活性化させること
を含んで成る上記２１に記載の方法。

２３、抗体、マイトジェン、抗原及びリンホカインから
成る群より選ばれるｌ員により前記リンパ球を活性化さ
せることを含んで成る上記１９乃至２２のいずれかに記
載の方法。

２４．１種又は１種より多くの抗体により前記リンパ球
を活性化させることを含んで成る上記２３に記載の方法
。

２５、抗Ｔｌｌ。、抗Ｔ３及び抗２　ＨＩから成る群よ
り選ばれる１種又は１種より多くの抗体により前記リン
パ球を活性化させることを含んで成る上記２４に記載の
方法。

２６、抗Ｔｌｌ□及び抗Ｔ１１３抗体の混合物により前
記リンパ球を活性化させることを含んで成る上記２２に
記載の方法。

２７、前記二官能性ヘテロダイマー抗体複合体の前記抗
リンパ球抗体成分（ｂ）が抗Ｔ１１．抗体でありそして
、この方法が抗Ｔｌ　１２により生体内又は生体外で前
記リンパ球を活性化させることを含んで成る、上記２２
に記載の方法。

２８、前記二官能性へテロタイマー抗体複合体の前記抗
リンパ球抗体成分（ｂ）か抗Ｔｌｌ□成分である上記１
９に記載の方法。

２９、前記二官能性ヘテロダイマー抗体複合体の前記抗
原的細胞成分（ａ）が、抗腫瘍細胞抗体、ウィルス感染
細胞に対する抗体、寄生虫感染細胞に対する抗体、自己
免疫細胞に対する抗体、移植片拒絶を引き起こす活性化
された細胞に対する抗体及び移植片対宿主疾患を引き起
こす活性化された細胞に対する抗体から成る群より選ば
れる１員である上記１９．２０．２１２２．２６．２７
又は２８のいずれかに記載の方法。

３０、前記二官能性ヘテロダイマー抗体複合体の前記抗
体成分（ａ）及び（ｂ）が、架橋した相補的反応性基に
より結合している、上記１９乃至２２のいずれかに記載
の方法。

３１、標的細胞表面分子に結合することかできる抗体以
外の分子成分（ａ）と、活性化されたす＝７２− ンバ球に対して特異的な抗リンパ球抗体成分（ｂ）を含
んで成る二官能性抗体／細胞表面結合性分子複合体を使
用して標的細胞集団を選択的に破壊する方法であって、 （１）標的細胞に前記成分（ａ）を介して前記二官能性
抗体／細胞表面結合性分子複合体を結合させ、 （２）リンパ球を活性化させ、そして （３）前記二官能性抗体／細胞表面結合性分子複合体の
成分（ｂ）に前記活性化されたリンパ球を結合させるこ
とを含み、 前記工程（１）、（２）及び（３）は、工程（２）が常
に工程（３）と同時に又は工程（３）の前に行なわれる
という条件下に、同時に又は任意の順序で行うことがで
きることを特徴とする方法。

３２、試験管内で標的細胞を破壊することを含んで成る
上記３１に記載の方法。

３３、生体内で標的細胞を破壊することを含んで成る」
二記３１に記載の方法。

３４、生体内又は生体外でリンパ球を活性化させること
を含んで成る上記３３に記載の方法。

３５．抗体、マイトジェン、抗原及びリンホカインから
成る群より選ばれるｌ員により前記リンパ球を活性化さ
せることを含んで成る上記３１乃至３４のいずれかに記
載の方法。

３６．１種又は１種より多くの抗体により前記リンパ球
を活性化させることを含んで成る上記３５に記載の方法
。

３７、抗Ｔ１１２、抗Ｔ３及び抗２ＨＩから成る群より
選ばれる１種又は１種より多くの抗体により前記リンパ
球を活性化させることを含んで成る上記３６に記載の方
法。

３８、抗Ｔｌ１２及び抗Ｔ１１３抗体の混合物により前
記リンパ球を活性化させることを含んで成る上記３４に
記載の方法。

３９、前記二官能性抗体／細胞表面結合性分子複合体の
前記抗リンパ球抗体成分（ｂ）が抗Ｔｌ１３抗体であり
そして、この方法が抗Ｔｌ１２により生体内又は生体外
で前記リンパ球を活性化させることを含んで成る、上記
３４に記載の方法。

４０前記二官能性抗体／細胞表面結合性分子複合体の前
記抗リンパ球抗体成分（ｂ）が抗Ｔ　１１２抗体である
上記３１に記載の方法。

４１、前記二官能性抗体／細胞表面結合性分子複合体の
前記分子成分（ａ）が、腫瘍細胞表面分子、ウィルス感
染細胞表面分子、宿主感染細胞表面分子、自己免疫細胞
表面分子、移植片拒絶を引き起こす活性化された細胞の
表面分子及び移植片対宿主疾患を引き起こす活性化され
た細胞の表面分子から成る群より選ばれる１員に結合す
ることができる、上記３１，３２．３３．３４．３８．
３９、又は４０に記載の方法。

４２、前記二官能性抗体／細胞表面結合性分子複合体の
前記分子成分（ａ）がホルモン、リンホカイン及びコロ
ニー形成刺激因子から成る群より選ばれる１員である上
記３１に記載の方法。

４３、前記二官能性抗体／細胞表面結合性分子複合体の
前記成分（ａ）及び（ｂ）が、架橋した相補的反応性基
により結合している、上記３１乃至３４のいずれかに記
載の方法。

４４、（ａ）抗標的細胞結合部位成分と（ｂ）活性化さ
れたリンパ球に対して特異的な抗リンパ球結合部位成分
を含んで成る二官能性ハイブリッド抗体を使用して標的
細胞集団を選択的に破壊する方法であって、 （１）標的細胞に前記成分（ａ）を介して前記二官能性
ハイブリッド抗体を結合させ、（２）リンパ球を活性化
させ、そして （３）前記二官能性ハイブリッド抗体の成分（ｂ）に前
記活性化されたリンパ球を結合させることを含み、 前記工程（１）、（２）及び（３）は、工程（２）が常
に工程（３）と同時に又は工程（３）の前に行なわれる
という条件下に、同時に又は任意の順序で行うことがで
きることを特徴とする方法。

４５、試験管内で標的細胞を破壊することを含んで成る
上記４４に記載の方法。

４６、生体内で標的細胞を破壊することを含んで成る上
記４４に記載の方法。

４７、生体内又は生体外でリンパ球を活性化さ一７６＝ せることを含んで成る上記４６に記載の方法。

４８、抗体、マイトジェン、抗原及びリンホカインから
成る群より選ばれる１員により前記リンパ球を活性化さ
せることを含んで成る上記４５乃至４７のいずれかに記
載の方法。

４９．１種又は１種より多くの抗体により前記リンパ球
を活性化させることを含んで成る上記４８に記載の方法
。

５０、抗Ｔｌｌ□、抗Ｔ３及び抗２ＨＴから成る群より
選ばれる１種又は１種より多くの抗体により前記リンパ
球を活性化させることを含んで成る上記４９に記載の方
法。

５１、（１）Ｔｌ１３に対して特異的な結合部位と（ｉ
ｉ）抗Ｔ　ｌ　ｌ　２抗体の混合物により前記リンパ球
を活性化させることを含んで成る上記４７に記載の方法
。

５２、前記二官能性ハイブリッド抗体の前記成分（ｂ）
がＴｌ　１３に対して特異的な結合部位でありそして、
この方法が抗Ｔｌｌ□抗体により生体内又は生体外で前
記リンパ球を活性化させることを含んで成る、」二記４
７に記載の方法。

５３．前記二官能性ハイブリッド抗体の前記成分（１）
）かＴＲＩ□に対して特異的な結合部位である上記４４
に記載の方法。

５４、前記二官能性ハイブリッド抗体の前記体操的細胞
結合部位成分（ａ）か、腫瘍細胞、ウィルス感染細胞、
寄生虫感染細胞、自己免疫細胞、移植片拒絶を引き起こ
す活性化された細胞及び移植片対宿主疾患を引き起こす
活性化された細胞から成る群より選ばれる１員に対して
特異的である、上記４４．４５．４６．４７．５１．５
２又は５３のいずれかに記載の方法。

【図面の簡単な説明】

添付図面は、ＣＡ　Ｌ　Ｌ　Ａ発現細胞及びＴｌ　１２
／　Ｔ　］　ｌ　ｓ発現細胞に対するＪ５、抗Ｔｌｌ□
、抗Ｔ１１３、及び複合体Ｊ５−抗Ｔｌ１２及びＪ５−
抗Ｔ１１３の結合を示す蛍光−活性化細胞ソータ−（Ｆ
ＡＣ３）パターンを示す図である。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、抗リンパ球抗体成分（ｂ）に結合した抗標的細胞抗
   体成分（ｂ）を含んで成り、該抗リンパ球抗体成分は活
   性化されたリンパ球に対して特異的であることを特徴と
   する、二官能性ヘテロダイマー抗体複合体。 ２、（ａ）標的細胞表面分子に結合することができる抗
   体以外の分子成分と（ｂ）活性化されたリンパ球に対し
   て特異的な抗リンパ球抗体成分を含んで成ることを特徴
   とする二官能性抗体／細胞表面結合性分子複合体。 ３、抗標的細胞結合部位成分（ａ）と、活性化されたリ
   ンパ球に対して特異的な抗リンパ球結合部位成分（ｂ）
   を含んで成ることを特徴とする、二官能性ハイブリッド
   抗体。 ４、活性化されたリンパ球に対して特異的な抗リンパ球
   抗体成分（ｂ）に結合した抗標的細胞抗体成分（ａ）を
   含んで成る二官能性ヘテロダイマー抗体複合体を使用し
   て標的細胞集団を選択的に破壊する方法であって、 （１）標的細胞に前記成分（ａ）を介して前記二官能性
   ヘテロダイマー抗体複合体を結合させ、（２）リンパ球
   を活性化させ、そして （３）前記二官能性ヘテロダイマー抗体複合体の成分（
   ｂ）に前記活性化されたリンパ球を結合させることを含
   み、 前記工程（１）、（２）及び（３）は、工程（２）が常
   に工程（３）と同時に又は工程（３）の前に行なわれる
   という条件下に、同時に又は任意の順序で行うことがで
   きることを特徴とする方法。 ５、標的細胞表面分子に結合することができる抗体以外
   の分子成分（ａ）と、活性化されたリンパ球に対して特
   異的な抗リンパ球抗体成分（ｂ）を含んで成る二官能性
   抗体／細胞表面結合性分子複合体を使用して標的細胞集
   団を選択的に破壊する方法であって、 （１）標的細胞に前記成分（ａ）を介して前記二官能性
   抗体／細胞表面結合性分子複合体を結合させ、 （２）リンパ球を活性化させ、そして （３）前記二官能性抗体／細胞表面結合性分子複合体の
   の成分（ｂ）に前記活性化されたリンパ球を結合させる
   ことを含み、 前記工程（１）、（２）及び（３）は、工程（２）が常
   に工程（３）と同時に又は工程（３）の前に行なわれる
   という条件下に、同時に又は任意の順序で行うことがで
   きることを特徴とする方法。 ６、（ａ）抗標的細胞結合部位成分と（ｂ）活性化され
   たリンパ球に対して特異的な抗リンパ球結合部位成分を
   含んで成る二官能性ハイブリッド抗体を使用して標的細
   胞集団を選択的に破壊する方法であって、 （１）標的細胞に前記成分（ａ）を介して前記二官能性
   ハイブリッド抗体を結合させ、 （２）リンパ球を活性化させ、そして （３）前記二官能性ハイブリッド抗体の成分（ｂ）に前
   記活性化されたリンパ球を結合させることを含み、 前記工程（１）、（２）及び（３）は、工程（２）が常
   に工程（３）と同時に又は工程（３）の前に行なわれる
   という条件下に、同時に又は任意の順序で行うことがで
   きることを特徴とする方法。