JPH01240180A - 遠心型細胞融合装置 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は電気パルスによって細胞どおしを融合させる細
胞融合装置に関し、特に遠心力によって細胞どおしを接
触させた状態で電気パルスを印加して細胞を融合させる
遠心型細胞融合装置に関するものである。

（従来の技術） 細胞融合チャンバで１よ、一対の電極の間に細胞を懸濁
した細胞懸濁液を入れ、その一対の電極に交流電圧を印
加して細胞を電気的に泳動させて接触させ、その一対の
電極から高電圧の直流パルスを印加することによって細
胞に電気刺激を与え、融合させている。

また、遠心力によって細胞を電極上に押しつけて細胞ど
おしを接触させたうえで直流パルスを印加して融合させ
る遠心型細胞融合チャンバも提案されている。しかし、
遠心型細胞融合チャンバは細長い筒状をしており、その
まま培養器に移して培養することはできない。

そこで、融合した細胞を培養するためには、ディツシュ
と称される培養容器に培地（液体−）を入れ、これに融
合処理を行なった細胞を置換し、培養器に収容する。

（発明が解決しようとする課Ｍ） 植物細胞の場合は細胞壁を取り除いてプロトプラストの
状態にして細胞融合が行なわれる。そのようなプロトプ
ラスト化された細胞や、融合直後の細胞は破損しやすく
、培地への置換時にピペット操作により細胞が損傷する
虞れがある・また、置換する手間かががる・ 本発明は融合細胞を置換する手間を省き、また置換時の
ピペット操作による融合細胞への損傷を防ぐことのでき
る細胞融合装置を提供することを目的とするものである
。

（ｆ１題を解決するための手段） 実施例を表わす第１図を参照して説明すると、本発明の
細胞融合装置は、培養器に入れることのできるディツシ
ュ４を上向きにしてディツシュ４の中心を回転中心と一
致させた状態で装着できる遠心機１，２，３．５と、遠
心機に装着されたディツシュ４内に設けられ、中心が回
転中心と一致してディツシュ４とともに回転する同心円
状の対向な極８，９と、遠心機の作動中に対向電極８，
９間に融合電圧を印加することのできる電源供給手段１
２．１４とを備えている。

（作用） 遠心機に装着されたディツシュ４には液体培地に細胞を
懸濁させた細胞懸濁液１０を入れる。ディツシュ４内に
対向電極８，９を装着し、遠心機１゜２．３．５を作動
させて細胞を外側の電極９に押しつけて細胞どおしを接
触させながら融合用に直流高電圧パルスを印加する。

細胞は遠心力により接触しているので、交流電圧による
電気泳動により接触させる必要がなく。

そのため塩濃度が高くて抵抗値の低い培地であっても直
流高電圧パルスなら印加することができる。

（実施例） 第１図は一実施例を示す縦断面図、第２図は同実施例の
、ｉ！極と接触ブラシとを示す上面図である。

１は遠心機を構成するモータであり、その回転軸２には
受台３が固定されている。受台３の上面にはディツシュ
４を上向きにして、ディツシュの中心が回転中心と一致
するように取りつける凹部が形成されており、受台３の
側面には差押え５がねじ止めされるネジが設けられてい
る。

６は樹脂製の蓋であり、その内面にはゴムシート７が取
りつけられてディツシュ４の上部開口を密閉することが
できるようになっている。

Ｍ６には円柱状の中電極８と、中電極８と同心円状の円
筒形の外電極９が取りつけられており。

これらの電極８，９の円の中心と遠心機の回転中心とが
一致するように設定されている。

ディツシュ４を受台３の四部に載せ、蓋６を被せて差押
え５を受台３のネジにねじ込むことにより、蓋６のゴム
シート７がディツシュ４を密閉して回転中に細胞懸濁液
１０が飛び出さないようにするとともに、中電極８と外
電極９をディツシュ４の底面に押しつける。

中ｆｆ１Ｖ７Ａ８には中心軸上で端子１１が接触してお
り、端子１１の上端には集電子Ｉ２がバネ１８により当
接させられる。１３は集電子１２と電源装置（図示略）
とを接続するリード線である。

外電極９の外周面には接触ブラシ１４がバネ１９により
接触させられる。１５は接触ブラシ１４と電源装置とを
接続するリード線である。集電子１２と接触ブラシ１４
によって電極８，９が回転中にも電源装置から融合電圧
を印加することができる。

１６は遠心機のボディ、１７は安全カバーである。

次に１本実施例の動作について説明する。

ディツシュ４を受台３に置き、ディツシュ４に紺胞悲濁
液１０を入れる。細胞懸濁液１ｏとしては、液体培地に
細胞を懸濁したものを用いる。蓋６をディツシュ４に被
せ、差押え５を受台３にねじ止めする。蓋６には中ｆｆ
ｉ極８と外電極９が取りつけられているので、これによ
り第１図のようにディツシュ４に電極８，９が装着され
、？ｌ！ｔ４ｉ８゜９の間に細胞ｌ！Ｉ濁液ｌＯが入っ
た状態となる。

端子１１に集電子１２を当接させ、外電極９に接触ブラ
シ１４．１４を接触させ、安全カバー１７を降して遠心
機を作動させる。

ディツシュ４内では細胞が外電極９に押しつけられて細
胞どおしが接触する。遠心機を作動させた状態で電極８
，９間に直流高電圧パルスを印加する。細胞懸濁液１０
の培地は塩濃度が高く抵抗値が低いが、交流電圧を印加
しないので熱対流が発生せず、パルス電圧のみであるの
でそれほど大きな電源装置を必要としない。

実施例では融合させようとする細胞をともに細胞懸濁液
１０中に）び濁させた状態で遠心機を作動させているが
、蓋６に孔をあけ、遠心機が作動中にもその孔から細胞
を注入することができるようにしてもよい。その場合、
細胞懸濁液１０に一方の細胞Ａを憑濁させた状態で遠心
機を作動させて細胞Ａを外電極９に押しつけ、遠心機を
作動させた状態で他方の細胞Ｂを注入して細胞Ａの層の
上に細胞Ｂの層を形成させる。さらに１ＭＡ胞Ａを注入
して細胞Ｂの層の上に細胞Ａの層を形成させる。

このように細胞Ａの層と細胞Ｂの層を交互に繰り返して
積層させることにより、異種細胞が融合したヘテロカリ
オンを効率よく形成することができるようになる。

（発明の効果） 本発明では培養に用いるディツシュを遠心機に取りつけ
、そのディツシュ内に対向電極を装着し。

対向電極間に入れられた細胞懸濁液に遠心力をかけて細
胞どおしを接触させた状態で融合に必要なパルス電圧を
印加するようにしたので、培地に細胞をｐ濁させて細胞
融合を起こさせることができ、融合処理後はディツシュ
に融合細胞が入ったままの状態で培養器へ置き、培養す
ることができる。

このように融合細胞を置換する工程がなくなるので、融
合細胞に損傷を与えることがなく、シかも置換の手間も
省くことができる。

【図面の簡単な説明】

第１図は一実施例を示す縦断面図、第２図は同実施例に
おける電極と接触ブラシを示す上面図である。 ｌ・・・・・・モータ、　２・・・・・・回転軸、３・
・・・・・受台、　　４・・・・・・ディツシュ、５・
・・・・・差押え、　　８・・・・・・中電極、９・・
・・・外電極、　　１０・・・・・・細胞懸濁液、１１
・・・・・・端子、　　１２・・・・・・集電子、１４
・・・・・・接触ブラシ。 特許出願人　株式会社島津製作所 代理人　−ＦＩ−狸十　野口繁雄

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. （１）培養器に入れることのできるデイッシユを上向き
   にしてディッシュの中心を回転中心と一致させた状態で
   装着できる遠心機と、遠心機に装着されたディッシュ内
   に設けられ、中心が回転中心と一致してディッシュとと
   もに回転する同心円状の対向電極と、遠心機の作動中に
   前記対向電極間に融合電圧を印加することのできる電源
   供給手段とを備えた遠心型細胞融合装置。