JPH01141583A - 細胞処理チャンバ - Google Patents
細胞処理チャンバInfo
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- JPH01141583A JPH01141583A JP30047787A JP30047787A JPH01141583A JP H01141583 A JPH01141583 A JP H01141583A JP 30047787 A JP30047787 A JP 30047787A JP 30047787 A JP30047787 A JP 30047787A JP H01141583 A JPH01141583 A JP H01141583A
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Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M35/00—Means for application of stress for stimulating the growth of microorganisms or the generation of fermentation or metabolic products; Means for electroporation or cell fusion
- C12M35/04—Mechanical means, e.g. sonic waves, stretching forces, pressure or shear stimuli
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
（産業上の利用分野）
本発明は細胞とおしを融合させたり、細胞に遺伝子を導
入させる細胞処理チャンバに関する。
入させる細胞処理チャンバに関する。
（従来の技術）
細胞どおしを融合させたり、細胞に遺伝子を導入させる
方法として、ポリエチレングリコールなどを使用して細
胞表面を活性化させる化学処理法や、細胞に電気パルス
を印加する電気処理法がある。
方法として、ポリエチレングリコールなどを使用して細
胞表面を活性化させる化学処理法や、細胞に電気パルス
を印加する電気処理法がある。
化学処理法は再現性に乏しく、また、融合や遺伝子導入
の効率が低い。
の効率が低い。
電気処理法のチャンバでは、対向電極の間に細胞懸濁液
を入れて電気刺激を与える。細胞融合の場合は、細胞懸
濁液には融合させようとする細胞を懸濁させておき、ま
ず電極間に交流電圧を印加して細胞を電気的に泳動させ
て接触させ、その後電極間に高電圧直流パルスを印加す
ることによって細胞に電気刺激を与えて細胞に一過的膜
破壊を起こさせ、融合させる。遺伝子導入の場合は、ｉ
１胞懸濁液には細胞とＤＮＡを懸濁させておき、電極間
に高電圧直流パルスを印加して細胞に電気刺激を与え、
細胞に一過的膜破壊を起こさせてＤＮＡを細胞に導入さ
せる。
を入れて電気刺激を与える。細胞融合の場合は、細胞懸
濁液には融合させようとする細胞を懸濁させておき、ま
ず電極間に交流電圧を印加して細胞を電気的に泳動させ
て接触させ、その後電極間に高電圧直流パルスを印加す
ることによって細胞に電気刺激を与えて細胞に一過的膜
破壊を起こさせ、融合させる。遺伝子導入の場合は、ｉ
１胞懸濁液には細胞とＤＮＡを懸濁させておき、電極間
に高電圧直流パルスを印加して細胞に電気刺激を与え、
細胞に一過的膜破壊を起こさせてＤＮＡを細胞に導入さ
せる。
しかし；例えば海水のように塩濃度の高い溶媒中に細胞
が懸濁している場合には、細胞懸濁液の電気抵抗が低す
ぎて細胞懸濁液に所定の電圧を印加することができない
、そのため、細胞懸濁液を薄めて電気抵抗値を高くした
後、電圧を印加して細胞融合などを行なっている。
が懸濁している場合には、細胞懸濁液の電気抵抗が低す
ぎて細胞懸濁液に所定の電圧を印加することができない
、そのため、細胞懸濁液を薄めて電気抵抗値を高くした
後、電圧を印加して細胞融合などを行なっている。
（発明が解決しようとする問題点）
細胞によっては細胞懸濁液の成分を変えると死んでしま
うものがある１例えば海苔や海草などの細胞は海水濃度
を変えると死んでしまう。このように、電気抵抗の低い
細胞懸濁液でなければ生存できないような細胞について
は、融合や遺伝子導入を行なうことは困難であった。
うものがある１例えば海苔や海草などの細胞は海水濃度
を変えると死んでしまう。このように、電気抵抗の低い
細胞懸濁液でなければ生存できないような細胞について
は、融合や遺伝子導入を行なうことは困難であった。
本発明は細胞の生存性を損なうことなく、ｍ胞融合や遺
伝子導入を行なうことのできる装置を提供することを目
的とするものである。
伝子導入を行なうことのできる装置を提供することを目
的とするものである。
（問題点を解決するための手段）
本発明では、細胞ＷＡ濁液を収容する。チャンバ本体内
に超音波振動子を設けた。
に超音波振動子を設けた。
（作用）
遠心力により細胞とおしを接触させながら超音波振動を
加えることにより、細胞とおしの接触面に一過的膜破壊
が生じ、細胞融合が行なわれる。
加えることにより、細胞とおしの接触面に一過的膜破壊
が生じ、細胞融合が行なわれる。
また、細胞に超音波振動を与えて細胞に一過的膜破壊を
起させると、遺伝子が導入される。
起させると、遺伝子が導入される。
（実施例）
第１図は一実施例を表わす。
２はチャンバ本体であり、先端が半球状になった円筒形
をしている。チャンバ本体２は遠心分離機の容器４に収
容され、遠心分離機にかけられて回転させられることに
よって矢印方向に遠心力Ｇが作用する。
をしている。チャンバ本体２は遠心分離機の容器４に収
容され、遠心分離機にかけられて回転させられることに
よって矢印方向に遠心力Ｇが作用する。
チャンバ本体２内では遠心力Ｇが作用する方向の先端側
に超音波振動子６が１けられており、超音波振動子６の
基端部側の面は遠心力作用方向に直交する平面となって
いる。
に超音波振動子６が１けられており、超音波振動子６の
基端部側の面は遠心力作用方向に直交する平面となって
いる。
超音波振動子６の平面と対向してメツシュ８が設けられ
ている。したがって、メツシュ８も遠心力作用方向に直
交している。メツシュ８はセラミックスやプラスチック
スにより構成されており、細胞よりも小さい径の小孔が
あけられている。小孔の直径は動物細胞を扱う場合には
２〜３μｍ程度が適当であり、植物細胞を扱う場合には
２０〜３０μｍが適当である。
ている。したがって、メツシュ８も遠心力作用方向に直
交している。メツシュ８はセラミックスやプラスチック
スにより構成されており、細胞よりも小さい径の小孔が
あけられている。小孔の直径は動物細胞を扱う場合には
２〜３μｍ程度が適当であり、植物細胞を扱う場合には
２０〜３０μｍが適当である。
１０は細胞懸濁液である。細胞懸濁液１０には細胞が懸
濁し、遺伝子導入の際には細胞と遺伝子が懸濁したもの
が使用される。
濁し、遺伝子導入の際には細胞と遺伝子が懸濁したもの
が使用される。
１２はチャンバ本体２の蓋、１４は超音波振動子６に駆
動電圧を印加するリード線である。
動電圧を印加するリード線である。
チャンバ本体２は遠心分離機容器４に収容されて第２図
に示されるように遠心分離機に装着される。第２図で、
１６はモータ及び回転制御部を含む回転機であり、１８
はその回転シャフトである。
に示されるように遠心分離機に装着される。第２図で、
１６はモータ及び回転制御部を含む回転機であり、１８
はその回転シャフトである。
回転シャツ１−１８には容器４を介してチャンバ本体２
が装着される。回転シャフト１８にはまた、超音波振動
子６の駆動電圧を供給するためにスリップリング２０が
設けられており、チャンバ本体２が装着されている回転
部分にはリード線１４につながる接触端子が設けられ、
その接触端子がスリップリング２０と接触することによ
って超音波発生回路２２からの駆動電圧が超音波振動子
６へ供給される。
が装着される。回転シャフト１８にはまた、超音波振動
子６の駆動電圧を供給するためにスリップリング２０が
設けられており、チャンバ本体２が装着されている回転
部分にはリード線１４につながる接触端子が設けられ、
その接触端子がスリップリング２０と接触することによ
って超音波発生回路２２からの駆動電圧が超音波振動子
６へ供給される。
スリップリング２０とそれに接触する端子に代えて、電
磁カップリングにより駆動電圧を供給するようにしても
よい。
磁カップリングにより駆動電圧を供給するようにしても
よい。
次に、本実施例を用いて細胞融合を行なう場合について
説明する。
説明する。
Ａ、Ｂの２種の細胞を融合させる場合について説明する
と、最初ＡＩ胞を含む細胞懸濁液をチャンバ本体２に入
れ、遠心分離機に装着して回転させる。第３図に示され
るように、遠心力ＧによりＡｊｆｌ胞１１ａはメツシュ
８に押しつけられ、−様に付着する。
と、最初ＡＩ胞を含む細胞懸濁液をチャンバ本体２に入
れ、遠心分離機に装着して回転させる。第３図に示され
るように、遠心力ＧによりＡｊｆｌ胞１１ａはメツシュ
８に押しつけられ、−様に付着する。
次に、遠心分離機を止め、チャンバ本体２にＢ細胞１１
ｂを含む細胞懸濁液を追加し、遠心分離機を回転させる
。Ｂ細胞ｉｔｂはＡＪ＋ｌｌｌ胞１．１ ａの上に積み
重なるように積層される。
ｂを含む細胞懸濁液を追加し、遠心分離機を回転させる
。Ｂ細胞ｉｔｂはＡＪ＋ｌｌｌ胞１．１ ａの上に積み
重なるように積層される。
遠心分離機を回転させた状態で超音波振動子６を発振さ
せる。超音波振動はメツシュ８を通して細胞１１ａ、ｌ
ｌｂに加わり、回転による遠心力Ｇと超音波振動により
細胞１１ａとｌｌｂの接触面に一過的膜破壊が生じ、細
胞どおしが融合する。
せる。超音波振動はメツシュ８を通して細胞１１ａ、ｌ
ｌｂに加わり、回転による遠心力Ｇと超音波振動により
細胞１１ａとｌｌｂの接触面に一過的膜破壊が生じ、細
胞どおしが融合する。
細胞に遺伝子を導入する場合は、メツシュ８を取り除い
た状態のチャンバを使用し、遠心力は作用させない。
た状態のチャンバを使用し、遠心力は作用させない。
Ｄ Ｎ Ａと細胞を懸濁させた細胞懸濁液をチャンバ本
体２内に入れ、超音波振動子６を発振させて細胞に超音
波振動を加える。細胞は超音波振動により一過的膜破壊
を生じ、ＤＮＡが細胞内に導入される。
体２内に入れ、超音波振動子６を発振させて細胞に超音
波振動を加える。細胞は超音波振動により一過的膜破壊
を生じ、ＤＮＡが細胞内に導入される。
細胞懸濁液ｌＯにポリエチレングリコールを加えておい
てもよい。ポリエチレングリコールは細胞の表面を活性
化し、ａＩ胞融合や遺伝子導入を促進することが知られ
ている。
てもよい。ポリエチレングリコールは細胞の表面を活性
化し、ａＩ胞融合や遺伝子導入を促進することが知られ
ている。
（発明の効果）
本発明では超音波振動により細胞に一過的膜破壊を生じ
させて細胞融合や遺伝子導入を行なうようにしたので、
例えば電気抵抗の低い細胞ｌ！ｌｉ濁液でなければ生存
できないような細胞では電気パルスを印加して細胞融合
や遺伝子導入を行なわせることはできないが、超音波振
動によれば細胞懸濁液の電気抵抗の低い場合でも細胞融
合や遺伝子導入を行なわせることが可能になる。
させて細胞融合や遺伝子導入を行なうようにしたので、
例えば電気抵抗の低い細胞ｌ！ｌｉ濁液でなければ生存
できないような細胞では電気パルスを印加して細胞融合
や遺伝子導入を行なわせることはできないが、超音波振
動によれば細胞懸濁液の電気抵抗の低い場合でも細胞融
合や遺伝子導入を行なわせることが可能になる。
また、超音波振動による刺激の方が電気パルスによる刺
激より細胞の生存性が高くなる。
激より細胞の生存性が高くなる。
第１図は一実施例を示す断面図、第２図は遠心分離機を
示す構成図、ｆｆ１３図は一実施例による細胞融合を説
明する部分断面図である。 ２・・・・・・チャンバ本体。 ６・・・・・・超音波振動子、 ｌＯ・・・・・・細胞懸濁液。 特許出願人 株式株式島津製作所
示す構成図、ｆｆ１３図は一実施例による細胞融合を説
明する部分断面図である。 ２・・・・・・チャンバ本体。 ６・・・・・・超音波振動子、 ｌＯ・・・・・・細胞懸濁液。 特許出願人 株式株式島津製作所
Claims (3)
- （１）細胞懸濁液を収容するチャンバ本体内に超音波振
動子を備えた細胞処理チャンバ。 - （２）チャンバ本体は遠心分離機に装着できる形状をし
ており、超音波振動子は遠心力が作用する方向の先端側
に設けられて細胞融合に使用される特許請求の範囲第１
項に記載の細胞処理チャンバ。 - （３）チャンバ本体内には超音波振動子に対向し、遠心
力が作用する方向に直交して、細胞より小さい孔をもつ
メッシュがさらに設けられている特許請求の範囲第２項
に記載の細胞処理チャンバ。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP30047787A JPH01141583A (ja) | 1987-11-27 | 1987-11-27 | 細胞処理チャンバ |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP30047787A JPH01141583A (ja) | 1987-11-27 | 1987-11-27 | 細胞処理チャンバ |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH01141583A true JPH01141583A (ja) | 1989-06-02 |
Family
ID=17885268
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP30047787A Pending JPH01141583A (ja) | 1987-11-27 | 1987-11-27 | 細胞処理チャンバ |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH01141583A (ja) |
Cited By (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2007524396A (ja) * | 2003-06-25 | 2007-08-30 | サイトリ セラピューティクス インコーポレイテッド | 組織から再生細胞を分離して濃縮するためのシステム及び方法 |
| JP2011522222A (ja) * | 2008-04-25 | 2011-07-28 | キアゲン ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング | 生物材料を破砕するための方法及び装置 |
| US8105580B2 (en) | 2001-12-07 | 2012-01-31 | Cytori Therapeutics, Inc. | Methods of using adipose derived stem cells to promote wound healing |
| US8119121B2 (en) | 2001-12-07 | 2012-02-21 | Cytori Therapeutics, Inc. | Autologous adipose tissue implant with concentrated stem cells |
| US8883499B2 (en) | 2001-12-07 | 2014-11-11 | Cytori Therapeutics, Inc. | Systems and methods for isolating and using clinically safe adipose derived regenerative cells |
| US9463203B2 (en) | 2001-12-07 | 2016-10-11 | Cytori Therapeutics, Inc. | Methods of using regenerative cells in the treatment of cartilage defects |
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| US9486484B2 (en) | 2008-08-19 | 2016-11-08 | Cytori Therapeutics, Inc. | Methods of using adipose tissue-derived cells in the treatment of the lymphatic system and malignant disease |
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| KR102183708B1 (ko) * | 2019-05-22 | 2020-11-26 | 박준한 | 줄기세포 추출용 키트 및 이를 포함하는 원심분리기 |
-
1987
- 1987-11-27 JP JP30047787A patent/JPH01141583A/ja active Pending
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| US9492483B2 (en) | 2001-12-07 | 2016-11-15 | Cytori Therapeutics, Inc. | Methods of using regenerative cells to treat a burn |
| US9849149B2 (en) | 2001-12-07 | 2017-12-26 | Cytori Therapeutics, Inc. | Methods of using regenerative cells in the treatment of erectile dysfunction |
| US9597395B2 (en) | 2001-12-07 | 2017-03-21 | Cytori Therapeutics, Inc. | Methods of using adipose tissue-derived cells in the treatment of cardiovascular conditions |
| US9511094B2 (en) | 2001-12-07 | 2016-12-06 | Cytori Therapeutics, Inc. | Methods of using regenerative cells in the treatment of stroke and related diseases and disorders |
| JP2007524396A (ja) * | 2003-06-25 | 2007-08-30 | サイトリ セラピューティクス インコーポレイテッド | 組織から再生細胞を分離して濃縮するためのシステム及び方法 |
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