JPH01226899A - 新規ペプチド - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は新規なペプチドに関する。さらに詳しくは、本
発明はω−ヌクレオ−α−アミノ酸とこれ以外のα−ア
ミノ酸とか交互に結合した新規ペプチドに関する。

従来の技術 核酸の二重螺旋モデルの基本は、アデニンとウラシル（
或いはチミン）並びにグアニンとシトシンとの間で形成
される水素結合にあり、それら塩基対はまた上・下相互
にスタッキング（ｓｔａｋｉｎｇ）することによって安
定化に寄与している。

これらの関係を維持しつつ結合しうるオリゴヌクレオチ
ド鎖を互いに“相捕的”であるというか、この関係は互
いに相手の鎖の塩基配列を分子認識する上で重要であり
、核酸の複製、転写など生化学的な意味のほか、各種疾
患の治療や特定配列遺伝子の診断への応用面で大きな可
能性を持ってい最近の知見によると、生体系において、
“アンチセンスＲＮＡ”と弥される低分子量ＲＮ　Ａが
特定遺伝子の発現を調節しているとされている［Ｇｒｅ
ｅｎら、　Ａｎｎ、　Ｒｅｖ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、、　
　５５　、　５６９（１９８６）ｉ。このＲＮＡは相補
的関係によってＤＮＡやＲＮＡを認識し、これと結合す
ることによって翻訳、転写などを抑制する。もしアンチ
センスＤＮＡ配列を持つプラスミドなとを用いて動・植
物の細胞を形質転換できれば、これと相補的配列のセン
スＤＮＡあるいはＲＮＡを持つ外来病原体（ウィルス、
微生物）に対して恒久的な耐性を獲得することができる
と考えられている。植物においてこの考えを適用したも
のとして例えば、［ルブリゾル・ジェネティクス・イン
コーホレイテッド、特開昭６２−２８５７９０号］が挙
げられるが、一般に異質遺伝子によって高等生物を形質
転換するには多くの困難が潜んでいる。またこれらの形
質は生体の生命サイクルの途上で排除され易いことが知
られている。もし安定な形質転換に成功しても常にアン
チセンスＲＮ　Ａを生産し続けることによる生体の不均
衡による悪影響は無視できない。

そこで最も安全な方法として、適宜アンチセンスなオリ
ゴもしくはポリヌクレオチドを必要に応して生体に投与
するのが良いと思われる。

ところで、通常の核酸においてヌクレオチド間ホスホジ
エステル結合は負に荷電しており、これらが規則正しく
配列することによる多大な負電荷は、生体におけるポリ
ヌクレオチドの移動を阻げており、薬剤への応用を困難
にしている。それに加えてホスホジエステル結合は細胞
内各所に存在するヌクレアーゼ類によって容易に分解さ
れる。

これら諸問題を解決するために、ポリヌクレオチド類縁
体をバックボーンとして採用する試みが数多くなされて
きた。そのなかでも最らよく研究されているのは、メチ
ルホスホン酸ジエステル結合をバックボーンとするもの
である［０ｇ１ｌｖｉｅら。

Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　Ｌｅｔｔｅｒｓ、２１．４１
４９（１９８０）：Ｔｓ　’ｏら、Ｂｉｏｃｈｅｍ、、
１８．５１３４（１９７９）；Ｔｓ　’ｏら、　　Ｐｒ
ｏｃ、　　Ｎａｔｌ、　　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　　Ｕ
ＳＡ、　　７８゜１５３７（１９８１）：Ｔｓ’ｏら、
　Ｊ、　Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅａ＋、。

２２５、　９６５９（１９８０）；　Ａｇａｒｗａｌ　
ら、　Ｎｕｌｌ。

Ａｃ１ｄ、　Ｒｅｓ、、　　６．　３００９（１９７９
）：　Ｅｎｇｅｌｓら、特開昭６０−７２８９９号］。

これらのヌクレオチドアナログは全く荷電していないの
で、細胞内への透過が容易である上に、ヌクレアーゼに
対し高い抵抗性を持っている。最近ではヒト免疫不全症
ウィルス（ＨＩＶ）ゲノムの一部に相捕的なオリゴヌク
レオチドのチオリン酸アナログが該ウィルスの複製を抑
制し、実質的に細胞毒性を示さないという報告しＭａｔ
ｓｕｋｕｒａら、Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ。

Ｓｃｉ、ＵＳＡ、８４，７７０６（１９８７）］もある
。

しかし、これらメチルホスホン酸あるいはチオリン酸の
ホスホジエステル結合は正常なホスホジエステル結合と
は異なり、キラルな燐原子が存在するため、ホモキラル
なオリゴマー合成に先立って原料モノヌクレオチドアナ
ログをキラルに合成してお（か、比較的低分子量の時点
で光学分割しておかねばならない。かくしてホモキラル
なホスホジエステルバックボーン調製には多大の労力か
要求される［Ｍｉｌｌｅｒら、　　Ｊ、　Ｂｉｏｌ、　
ＣｈｅＩｌｌ、、２５５　。

９６５９（１９８０）コ。

一方、アキラル（ａｃｈｉｒａｌ）なバックボーンから
成るポリマーは相補鎖との結合に際し、著しい効率の低
下をまねくので、このようなポリマーを医療目的で使用
した場合には有害な影響が予想され、診断用プローブと
して用いた場合には高いバックグラウンドならびに誤診
の原因となるので避けなければならない。

これらのポリマーに引続き、ントンンを含むカルバメー
ト結合によるオリゴマーがｐｏｌｙ（ＣＧ　）やｐｏｌ
ｙ（ｄＧ　ｅ）と強固に結合することが示され［５ｔｉ
ｒｃｋａｋら、　Ｊ、　Ｏｒｇ、　Ｃｈｅｍ、、　　５
２．　４２０２（１９８７）］、これとほぼ同時にチミ
ジンのカルバメート結合によるヘキサマーの合成か報告
された［Ｃｏｕ　ｌ　ら、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　　
Ｌｅｔｔｅｒｓ、　　２８　。

７４５（１９８７）］。しかし、カルバメート結合形成
時の中間体、活性炭酸エステルが極めて加水分解され易
いなどオリゴマー合成上困難が多く、実用化には結び付
かないと考えられる。

これとは別に、α−型グリコシド結合を持つＤＮＡオリ
ゴマーアナログがヌクレアーゼ類に耐性であるといわれ
ている［Ｍｏｒｖａｎら、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ。

Ｒｅｓ、、１５．４２４１（１９８７）］が、原料の調
達に煩雑な操作を要する点でこれまた非現実性を拭えな
い。

以上のポリヌクレオチドアナログによるバックボーン以
外にも数々のバックボーンが考案されている。初期の例
として、ポリビニル系化合物を挙げることができるが、
この場合は塩基部分の配列を自由に設定することができ
ず、その配列は統計的分布に従わざるをえない。更に分
子全体が水に難溶となる点でも不都合であった。その後
、バックボーンをポリエチレンイミン誘導体とし、側鎖
のホモセリンを介して核酸塩基を結合させるという改良
ら行われた［Ｈａｒａｄａら、　日米合同薬学大会要旨
集、ＬＯ３−Ｚ−０３，２１９頁（１９８７）］が、単
に水溶性への改善が見られただけであった。最近核酸塩
基の一定配列を実現するための方法として、ω−アミノ
脂肪酸あるいはω−アミノアルキルスルホン酸のアミド
、ヒドラジド結合をバックボーンとする方法が開示され
ている［Ｊａｍｅｓら、特表昭６２−５０２３３８号］
が、ポリマー自身極度に非イオン性であるために実用性
が疑わしい。

発明が解決しようとする課題 上記のように、アンチセンスなオリゴもしくはポリヌク
レオチドを医療目的、あるいは診断用プローブとして利
用する考えは既知であるものの、これまでにバックボー
ンとしての使用が予定されていたポリマーには実用上、
種々の課題が残されている。

課題を解決するための手段 本発明者らは、上記のような状況に鑑み、核酸塩基を配
列するためのバックボーンとなる新規なポリマーを開発
する目的で種々研究を重ねた結果、本発明を完成したも
のである。

すなわち、本発明は （１）　　Ｌ（またはＤ）−ω−ヌクレオ−α−アミノ
酸とω−ヌクレオ−α−アミノ酸以外のＬ（またはＤ）
−α−アミノ酸とが交互に結合したペプチド、 （２）一般式（＋） ［式中、Ｒ，は同一または異なるＬ（またはＤ）−ω−
ヌクレオ−α−アミノ酸の側鎖を、Ｒ１はω−ヌクレオ
−α−アミノ酸以外の同一または異なるＬ（またはＤ）
−α−アミノ酸の側鎖を表わし、Ｑおよびｎはそれぞれ
Ｏまたは１であり、ｍは１以上の整数である］で示され
るペプチド、および（３）構成ポリペプチド鎖の一ケ所
以上の部分が前項（２）のペプチドに相当するペプチド
鎖であるポリペプチドである。

本発明のペプチドを構成するα−アミノ酸のうち、Ｌ（
またはＤ）−ω−ヌクレオ−α−アミノ酸は、この名称
から明らかなように、ω位の炭素原子に核酸塩基を有す
るアミノ酸をいう。ここでいう核酸塩基とは、天然の核
酸を構成する塩基を色味し、たとえばアデニン、グアニ
ンあるいはヒポキサンチンなどのプリン塩基、もしくは
ウラシル。

チミンあるいはシトシンなどのピリミジン塩基があげら
れる。さらに、通常、塩基対を形成するに際してこれら
核酸塩基と同等に機能する核酸塩基類縁体（例、２−ア
ミノアデニン）も、本発明でいう核酸塩基の概念に含ま
れるものとする。この核酸塩基は、直鎖状または分岐状
の炭素数１〜５程度の炭化水素残基を介してα位の炭素
原子と結合する。この炭化水素残基は水酸基、アミノ基
、カルボキシル、アルコキシ基、チオール基あるいは酸
アミド基で置換されていてもよいが、通常は、単に１〜
５個のメチレン基を介して結合するものでよい。核酸塩
基はプリン塩基の場合はそのＮ１位をピリミジン塩基の
場合そのＮ９位を介して炭化水素残基に結合する。

Ｌ（またはＤ）−ω−ヌクレオ−α−アミノ酸は、次の
ような方法によって得られる。

ウラシルを核酸塩基として有するω−ヌクレオ−α−ア
ミノ酸としては、ウイラルデイン［Ｗｉｌｌａｒｄｉｎ
ｅ、　　１−ウラシル−Ｌ−アラニン。

Ｇｍｅｌｉｎ、　Ｚ、、　Ｐｈｙｓｉｏｌ、　Ｃｈｅｍ
、、３１６　、　　Ｉ　６４（＋９５９）］があげられ
る。ウウラシルィンはウレイドアラニンをホルミル酢酸
エチルで閉環することによっても得られ［５ｈｖａｃｈ
ｋｉｎら、　Ｚｈ、　０ｂｓｈ。

Ｋｈｉｍ、、３２．３４４８（１９６２）］、同様の方
法でシトルリン（ｃｙｔｏｒｕｌｌｉｎ）を原料として
ウイラルデインよりもメチレン基が１個多いアミノ酸が
得られる。また、オルニチンのアミノ基をウレイドとし
たのち、上記の方法を適用することによってメチレン基
を３個有するアミノ酸を製造することらできる。一方、
ウラシルに１〜ブロム−２，２−ノエトキシエタンを反
応させ、これを加水分解してアルデヒド体としたのち、
シアノヒドリン合成によってＤルーα−アミノ酸へと導
き［Ｌｉｄａｋら、　Ｋｈ、　Ｇｅｔｅｒｏ、　５ｏｅ
ｄ、　　５３０（１９７１）］、これを］Ｄ−ルーに分
割して用いることができる。

Ｄ、Ｌ一体は、α−アミノ基をアセチル化したのち、β
−ラクタマーゼで立体特異的に脱アシル化すると、Ｌ体
が得られるので、この方法でＤ一体。

Ｌ一体にそれぞれ分割できる。

チミンを有するω−ヌクレオ−α−アミノ酸はチミンを
用いて上記のＬｉｄａｋらの方法を適用することによっ
て得られる。

シトシンを有するω−ヌクレオ−α−アミノ酸は、上記
のような方法で得られたω−ウラシニルーα−アミノ酸
のウラシル環を４位のシリルオキシ体等を経由してシト
ンン環へ変換する方法［Ｙｏｒｂｒｕｇｇｅｎ、＾ｎｎ
、、　９８８（１９７５）ｌによって得られる。

一方、プリン塩基を有するアナログは上記Ｌｉｄａｋの
方法をプリン塩基に応用した例［Ｌｉｄａｋら、　Ｋｈ
、　Ｇｅｔｅｒｏ、　５ｏｅｄ、　　５２９（１９７０
）コやブチロラクトンから合成されるα−ペンジルオキ
ノ力ルポニルアミノーγ−ブロム酪酸−ｔ−ブチルエス
テルをプリン塩基と縮合させたのち、脱保護する方法［
Ｎｏｌ　ｌｅｔら、　Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ、　２５
　。

５９７１（１９６９）］を適用して得られるラセミ体を
光学分割することによって得られる。

グアニンを有するω−ヌクレオ−α−アミノ酸としては
、γ−（９−グアニル）−α−アミノ酪酸［Ｎｏ１ｌｅ
ｔら、　Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ、　２５　、５９７１
（１９６９）］を利用でき、さらにリジン、α、γ−ジ
アミノ酪酸、α、β−ジアミノプロピオン酸、オルニチ
ンなどを［５ｈｅａｌｙら、　Ｊ、　Ｍｅｄ、　Ｃｈｅ
ｉ＋、。

２７、　１４１６（１９８４）］方法で２−アミノ−４
，６−ジクロルピリミジンと反応させ、ピリミジン環の
５位をジアゾ化経由でアミノ化し、オルト蟻酸エチルで
閉環して得られるグアニン誘導体も利用できる。

アデニンを有するω−ヌクレオ−α−アミノ酸としては
、ルピニン酸（Ｌｕｐｉｎｉｃ　　ａｃｉｄ）［Ｍａｃ
ｌｅｏｄら、　Ｃｈｅｗ、　Ｃｏｍｍｕｎ、　　ｌ　９
．　８０９（１９７５）］、あるいは上記の５ｈｅａｌ
ｙらの方法を利用して得られる２−アミノアデニン誘導
体があげられる。

アデニン誘導体はそのＮ１−オキシド経由でグアニン誘
導体に変換でき［Ｕｅｄａら、　Ｃｈｅｍ、　Ｐｈａｒ
ｍ。

Ｂｕｌｌ、　２６．　２１２２’（１９７８）］、各種
α、ω−ジアミノカルボン酸と２−（エトキシメチレン
アミノ）マレオニトリルとの反応で得られるω−（５−
アミノ−４−シアノイミダゾール−１−イル）−α−ア
ミノ酸を経由して各種プリン誘導体に至る方法［Ｋａｍ
ａｌｊａｈら、　Ｊ、　Ｃｈｅｗ、　Ｓｏｃ、、　Ｐｅ
ｒｋｉｎ。

Ｔｒａｎｓ、、　　２７２８（１９８０）］も実用性が
高い。

一方、光学活性なα、ω−ジアミノカルボン酸を５−ア
ミノ−４，６−ジクロルピリミジンと反応させ、中間体
をオルト蟻酸エチルで閉環してα−アミノ−ω−（６−
クロル−９−プリニル）カルボン酸としたのち、アンモ
ノリシスして、ω−（９−アデニル）−α−アミノカル
ボン酸の光学活性体を得ることもできる［Ｐｏｒｉｔｅ
ｒｅら、　Ｋｈ、　Ｇｅｔｅｒｏ。

５ｏｅｄ、、　　　Ｉ　　６　９　０（１９８２）コ。

本発明のペプチドを構成するもう一方のα−アミノ酸は
、ω−ヌクレオ−α−アミノ酸以外のＬ（またはＤ）−
α−アミノ酸であって、ω−ヌクレオ−α−アミノ酸間
を連結する機能を有するものであれば特に限定されない
。以下、このα−アミノ酸を単に「連結アミノ酸」と略
称することがある。

一般には、動植物・微生物などの天然に存在するタンパ
ク質構成アミノ酸もしくはその光学異性体が好ましく用
いられる。さらに、天然に存在する種々の非タンパクア
ミノ酸や、各種の合成α−アミノ酸を用いることもでき
る。

上記の微生物か生産する特殊なアミノ酸としては、例え
ばアザセリン、６−ジアシー５−オキソ−Ｌ−ノルロイ
シン、アリイン、アリシン、Ｎ′−オキシリノン、Ｌ−
２−アミノ−４−クロル−４＝ベンテノン酸、アミクレ
ノマインン （ＡｍｉｃｌｅｎｏｌＩｌｙｃｉｎ）、各種不飽和α−
アミノ酸があげられる。

本発明のペプチドは、前述したようなＬ（またはＤ）−
ω−ヌクレオ−α−アミノ酸とω−ヌクレオ−α−アミ
ノ酸以外のＬ（またはＤ）−α−アミノ酸とを交互に結
合したペプチドである。

すなわち、本ペプチドにおいては核酸塩基の側鎖はジペ
プチド単位に出現するように構成され、この単位長さは
核酸のモノヌクレオチド単位の長さに相当する。従って
、本ペプチドの核酸塩基側鎖を、特定のＤＮＡあるいは
ＲＮＡの塩基配列と相補的であるように配列させること
によって、その核酸と塩基対を成すことができる。ここ
で、核酸との塩基対としては、Ａ−Ｔ、Ａ−Ｕ、Ｃ−Ｇ
を基本とするが、２−アミノアデニン（２Ｎ　Ｈｔ　Ａ
　）−Ｔや２−ＮＨ，Ａ−ＵはＡ−ＴやＡ−Ｕよりも強
固な結合を作るとされている［ＫｉｒｎｏｓらＮａｔｕ
ｒｅ、　２７０．３６９（１９７７）］ので、必要に応
じてこのような塩基対も選択できる。またヒポキサンチ
ンはＣ，ＡあるいはＴと結合できるので［０ｈｌｓｕｋ
ａら、　Ｊ、　Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅｍ、、　２６０　。

２６０５　　（１９８５）］、Ｇ、Ａ、Ｔの代用として
使用できる。

本ペプチドにおける塩基配列の順序および分子の長さは
、上記で説明したように、目的とするＤＮＡあるいはＲ
ＮＡに対応して定めればよい。鎖長は、一般式（１）に
おいてｍが５０までの範囲のペプチド鎖が実用に供する
のに便利である。

本発明のペプチドは、その核酸塩基の配列を標的とする
ＲＮＡあるいはＤＮＡと相補的であるように構成せしめ
る。たとえば、Ｂ型肝炎ウィルス（ＨＢＶ）、非Ａ非Ｂ
型肝炎ウィルス、ヒト免疫不全症ウィルス（ＨＩＶ）、
成人性白血病ウィルス（ＨＴＬＶ−１）、インフルエン
ザウィルス群、単純ヘルペスウィルス群、水痘・帯状庖
疹ウィルス、淋菌、マラリア原虫、アフリカ・トリバノ
ゾーマ原虫などの遺伝子の任意の一部分と相補的である
一般的（１）のペプチドを得、上記ウィルス遺伝子の発
現を抑制するために、すなわち抗ウィルス剤として利用
が可能である。さらに、具体的な例示をすると、Ｂ型肝
炎（ＨＢＶ）ゲノムのプラス鎖の５′末端近傍にある繰
り返し配列（ＤＲ−１）Ｔ　Ｔ　Ｔ　Ｔ　ＣＡ　ＣＣＴ
　ＣＴ　Ｇ　ＣＣＴ　　ｊ、：対応する本発明のペプチ
ドは、ＨＢＶの発現を抑制し、抗ＨＢ　Ｖ作用が期待で
きる。また、本発明のペプチドは鎌型赤血球症、ダウン
症候群、抗生物質耐性菌、肝炎などに対する診断薬（遺
伝子診断）としても使用可能である。

一方、本ペプチドにおける連結アミノ酸は、その基本的
機能はω−ヌクレオ−α−アミノ酸間を連結させること
であるが、一般式（【）でＲ８で表わされる側鎖の種類
によって、目的ペプチドに様々の化学的ならびに物理的
性質を付与できる。従って、本ペプチドを利用する目的
に応じて適宜に１種または２種以上を組合せて用いられ
る。

たとえばペプチドの鎖長が比較的短かい場合にはグリシ
ン（最も単純なペプチドを形成できる）、アラニン、バ
リン、ロイシン、イソロイシンなどが使用できる。一方
、鎖長が長くなると水溶性を増す必要があるため、セリ
ン、トレオニン、Ｎ″−オキシリジン、ホモセリンなど
側鎖に水酸基を有するものが適当である。ペプチド合成
後、蛍光標識したり、インターカーレータ−を結合させ
る場合にはシスティンやペニシラミンなどメルカプト基
を持つアミノ酸が有効である。芳香環や異項環を有する
トリプトファン、ヒスチジン、フェニルアラニン、チロ
シン、チロキシン、マラリア（Ｌａｔｈｙｒｉｎｅ）。

β−ピラゾール−１−イル−アラニンなどは核酸塩基対
とのスクッキングにより二本鎖の安定化に寄与できる。

側鎖に塩基性残基を結合しているリジン、δ−オキシリ
ジン、オルニチン、アルギニン。

α、γ−ノアミノ酪酸、長鎖α、ω−ジアミノカルボン
酸類、カナバニン（ｃａｎａｖａｎｉｎｅ）　、カナリ
ン（ｃａｎａｌｉｎｅ）は相手となる核酸の負電荷を打
ち消すことにより、二本鎖を安定にする効果を持つ。酸
性アミノ酸すなわち、アスパラギン酸、グルタミン酸、
γ−オキシグルタミン酸、γ−メチレングルタミン酸、
γ−メチルグルタミン酸などはペプチドに水溶性を付与
するほか、もしこれらのアミノ酸が規則正しく導入され
ておれば、カルボン酸の負電荷数がペプチドの鎖長を反
映することになるため、該ペプチドの精製や確認上有利
となる。

上記において、蛍光標識された本発明のペプチドはＤＮ
Ａプローブとして用いることができ、ポリペプチド形成
後（ポスト）に連結アミノ酸の側鎖に各種蛍光試薬を反
応させることによってポスト標識できる。蛍光剤として
は、ロダミン、フルオレッセイン、アクリジン、ダンシ
ル、クマリン誘導体が挙げられる。更にテトラメチルピ
ロリジン−１−オキシル誘導体などとしてスピンラベル
することもできる。

最近、ウサギβ−グロビンｍＲＮＡのアンチセンスオリ
ゴデオキシヌクレオチドにインター・ヌクレオチド燐酸
を介してアクリジン誘導体を連結したところ、これが強
力にウサギβ−グロビンの生合成を抑えることが報告さ
れており［ＣａｚｅｎａｖｅらＮｕｃｌ、　Ａｃ１ｄ、
　Ｒｅｓ、　４７１７（１９８７）］、これはイインタ
ーカーレータンの効果であるとされている。この方法で
は、オリゴヌクレオチド合成の際にインターカーレーシ
ヨンを結合させなければならないという不便さがある。

本発明のオリゴヌクレオペプチドでは連結アミノ酸とし
て特定部位に、上記にあげたような塩基性アミノ酸を組
込んでおけば、随時ポスト修飾できる。ここでインター
カーレータ−にラジカル生成能を随伴させておけば、特
定配列ＤＮＡ鎖切断用のヌクレアーゼとして機能させる
こともできるであろう。

連結アミノ酸の側鎖がアルキル化剤など架橋剤として機
能できる場合には、標的核酸とハイブリダイズしたのち
アルキル化によるクロスリンキンによって不可逆的結合
を達成できる［Ｂａｒｔｌｅｔｔ　ら。

Ｊ、　Ｍｏ１ｅｃ、　Ｂｉｏｌ、、ｌ　２２．　　ｌ　
４５（１９７８）］。

この原理は医療上、制癌剤や抗自己免疫剤として応用で
きる。

本発明のペプチドにおいて標識、活性基あるいは架橋剤
の導入はすべて核酸塩基部以外で行われており、ハイブ
リダイゼーションにおける水素結合やスクッキングに何
ら支障を与えないことは注目すべきことである。

基本的に連結アミノ酸はω−ヌクレオ−α−アミノ酸と
交互にＮ末端側からあるいはＣ末端側から一定の塩基配
列を構成して結合しているが、ペプチド全域に跨ってそ
うである必要はなく、塩基対形成による標的核酸との結
合を阻げない程度であればこの原則から逸脱していても
よい。例えば連結アミノ酸が長く連続して通常のペプチ
ド鎖を形成してもよい。このような通常のペプチド鎖は
数ケ所にわたってポリペプチドの中に存在してもよいが
、ペプチド鎖のＮ末端あるいはＣ末端のいずれか一方、
あるいは両方に存在してもよい。このようなペプチド鎖
が生理活性ペプチドと同一のアミノ酸組成を成している
場合には、このペプチドに対する市販の抗体を用いて酵
素免疫アッセイ（ＥＩＡ）の手法によりプローブ（オリ
ゴヌクレオペプチド）と核酸との結合を検出することが
可能である。また抗体さえ入手可能であれば、どのよう
なアミノ酸配列でもよく、本手法は極めて応用面が広い
。

本発明のペプチド分子全体として、各構成アミノ酸のα
位炭素に関するキラリティは統一されねばならないが、
一般にＤ型、Ｌ型共に容易に得られるので、不斉合成に
頼らざるをえない他のパブクボーンに比して有利である
。

本発明のペプチドはその末端アミノ基が保護されたペプ
チドを得て、これを保護基脱離反応に付すことによって
得られる。このアミノ基保護基としては、たとえばベン
ジルオキシカルボ゛ニル（Ｚ）。

第三ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）、９−フルオレ
ニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）、第三アミル
オキシカルボニル、イソボルニルオキシカルボニル、ア
ダマンチルオキシカルボニル、クロル−またはニトロ−
置換ベンジルオキシカルボニル、０−フェニルチオ、ジ
フェニルホスフィノチオイルなどが挙げられる。

本発明のペプチドは、その構成する部分α−アミノ酸ま
たは部分ペプチドとその残部を構成しうる化合物をペプ
チド合成手段により縮合させることにより行なう。該ペ
プチド合成手段は、任意の公知の方法に従えばよく、例
えばＭ、　Ｂｏｄａｎｓｋｙ及びＬ　Ａ、０ｎｄｅｔｔ
ｉ著、ペプチド・シンセシス（Ｐｅｒｔｉｄｅ　　５ｙ
ｎｔｈｅｓｉｓ）、　Ｉｎｔｅｒ　　５ｃｉｅｎｃｅ、
ＮｅｗＹｏｒｋ、　　１９６６年；　Ｆ、　Ｍ、　Ｆｉ
ｎｎ及びに、　Ｈｏｆｎ＋ａｎｎ著ザ・プロテインズ（
Ｔｈｅ　　Ｐｒｏｔｅｉｎｓ）、第２巻。

Ｉｔ、　Ｎｅｎｒａｔｈ、　Ｒ，Ｌ、旧　Ｉｔ編集、Ａ
ｃａｄｅｍｉｃ　ＰｒｅｓｓＩｎｃ、　Ｎｅｗ　　Ｙｏ
ｒｋ、　　１９７６年；泉屋信夫他著゛ペプチド合成”
丸善（株）１９７５年などに記載された方法、たとえば
アジド法、クロライド法、酸無水物法、混酸無水物法、
ＤＣＣ法、活性エステル法、ウッドワード試薬Ｋを用い
る方法、カルボジイミダゾール法、酸化還元法、ＤＣＣ
／ＨＯＮＢ法などが挙げられる。場合によっては、ＮＣ
Ａ法（Ｎ−カルボキシアンハイドライド；保護基を使用
せずにアミノ酸に対応する分子内環状カルボニル化合物
を使用する方法）を適用してもよい。

本縮合反応を行なう前に、それ自体公知の手段により原
料の縮合反応に関与しないカルボキシル基、アミノ基を
保護したり、また反応に関与するカルボキシル基、アミ
ノ基を活性化させてもよい。

さらに、原料の側鎖官能基も常法によって保護しておく
のが一般的である。原料のカルボキシル基は、たとえば
金属塩（例、ナトリウム、カリウム塩等）、ｔ−アルキ
ルアミン塩（例、トリエチルアミン。

Ｎ−メチルモルホリン等）あるいはエステル（例、メチ
ル、エチル、ベンジル、ｐ−ニトロベンジル、１−ブチ
ル、ｔ−アミル等のエステル）の形で保護することもで
きる。原料の側鎖アミノ基の保護基としては、たとえば
ベンジルオキシカルボニル基１第三ブトキシカルボニル
基、イソボルニルオキシカルボニル基等が、ヒスチジン
のイミノ基の保護基としては、たとえばベンジル、トン
ル、２．４−ジニトロフェニル、ｔ−ブチルオキシカル
ボニル、カルボベンゾキシ等があげられる。水酸基の保
護基としては、たとえばベンジル、ｔ−ブチル等のエー
テル等が例示される。グアニジノ基の保護基としては、
ニトロ基、４−メトキシ−２，６−シメチルベンゼンス
ルフオニル基、ペンタメチルベンゼンスルフォニルＬ　
２，４．６−ドリメトキシベンゼンスルフオニル基、４
−メトキシ−２，３，５，６−チトラメチルベンゼンス
ルフオニル基などが例示される。一方、ω−ヌクレオ−
α−アミノ酸の核酸塩基のうち、アデニン、シトノンあ
るいはグアニンのアミノ基は上記ベンジルオキシカルボ
ニルあるいは、Ｆ　ｍｏｃなどのペプチド化学で繁用さ
れる基で保護されてもよいＪｌｌａｔｋｉｎｓら、　Ｊ
、　Ａｍ。

Ｃｈｅｗ、Ｓｏｃ、、１０４．５７０２（１９Ｂ２）：
Ｈｅ１ｋｋｉｌａら、　Ａｃｔａ　Ｃｈｅｓ、　５ｃａ
ｎｄ、　　Ｂ　３７　。

２６３（１９８３）］Ｌ、核酸化学において繁用される
ベンゾイル、イソブチリルあるいはジメチルアミノメチ
レン基　［池原森男ら、　核酸有機化学。

化学同人コで保護されてもよい。

原料のカルボキシル基の活性化されたものとしては、た
とえば対応する酸無水物、アンド、活性エステル［アル
コール（例、ペンタクロロフェノール。

２．４．５−）リクロロフェノール、２．４−ノニトロ
フェノール、シアノメチルアルコール、ｐ−ニトロフェ
ノール、Ｎ−ハイドロキシ−５−ノルボルネン−２，３
−ジカルボキシイミド、Ｎ−ハイドロキシサクシシイミ
ド。Ｎ−ハイドロキシフタルイミド、Ｎ−ハイドロキシ
ベンズトリアゾール）とのエステル］などがあげられる
。原料のアミノ基の活性化されたものとして、たとえば
対応するリン酸アミドがあげられる。

本縮合反応は溶媒の存在下に行うことかできる。

溶媒としては、ペプチド縮合反応に使用しうろことが知
られているものから適宜選択されうる。たとえば無水ま
たは含水のジメチルホルムアミド。

ジメチルスルホキサイド、ピリジン、クロロホルム。

ジオキサン、ジクロルメタン、テトラハイドロフランあ
るいはこれらの適宜の混合物などがあげられる。

反応温度は、ペプチド結合形成反応に使用されうろこと
が知られている範囲から適宜選択され、通常約−２０°
Ｃ〜約３０℃の範囲から適宜選択される。また本発明ペ
プチドの前駆物質（保護ペプチド）は同相合成法によっ
ても容易に製造することができる。

このようにして得られた保護されたペプチドを保護基脱
離反応に付す。該反応は、使用する保護基の種類によっ
て異なるが、いずれにしてもペプチド結合に影響を与え
ず一工程で全保護基が除かれることが工業的にａ利であ
る。

脱離条件としては、例えば、パラジウム黒、パラジウム
炭素、白金等を触媒とする接触還元、トリフルオロ酢酸
、希塩酸、メタンスルホン酸による酸分解等であるが、
この他にも液体アンモニア中ナトリウムによる還元、あ
るいはトリフルオロメタンスルホン酸や、臭化水素酸の
氷酢酸溶液、弗化水素等による酸分解もあげられる。こ
れらの反応は一般に一２０℃から４０℃の適温で行われ
るが、酸分解においてはアニソール、フェノール、チオ
アニソールの如きカチオン補足剤の添加が有効であこの
様にして製造されたペプチドは反応終了後、ペプチドの
分離手段、たとえばイオン交換、ゲルろ過、順相あるい
は逆相シリカゲルクロマトグラフィー、向流分配、電気
泳動、再結晶などの組合わせが適用される。また精製に
関しては、必要に応じてペプチド鎖の末端に塩基性アミ
ノ酸あるいは酸性アミノ酸の連続領域を設けてイオン交
換的要素を誇張したり、連結アミノ酸として酸性アミノ
酸を均一的に使用することによって、ペプチド鎖の長を
反影させたイオン交換高速液体クロマトグラフィーの手
段で分離・精製を容易にすることも可能である。また連
結アミノ酸にセリンを均一的に使用した場合には、シク
ロデキストリンカラムのジオールカラムとしての性質を
利用してペプチド鎖の長さに応じた分離を行うことがで
きる。さらに、Ｈｉｓ−Ｈｉｓ配列によるキレート形成
能やシスティンのメルカプト基を利用して分離を容易に
ならしめる事も可能である。

本発明のペプチドは抗ウィルス剤、抗真菌剤として有用
であるのみならず、核酸の塩基配列のプローブとして有
利な性質を備えており、これらの各種用途に利用できる
。例えば、Ｄ型肝炎ウィルス遺伝子の塩基配列の一部に
対応する該ペプチドは慢性肝炎の治療薬として利用でき
、ヒト免疫不全症ウィルス遺伝子の一部に対応するもの
は抗エイズ剤としての使用可能性がある。またこれらの
病気の診断薬としても利用できる。さらに、核酸化学に
おける各種試薬としても有用である。

実施例 参考例１ α−アミノ−β−（６−アミノ−９−プリニル）プロピ
オン酸を熱水に溶かし、Ｃｕ　ＣＣ１３・Ｃｕ（０［Ｉ
）２・Ｈｔ　Ｏを加えて約１０分煮沸し、ろ液を放冷す
る。水冷上攪拌しながらＮ　ａＨＣＯ３と塩化ベンジル
オキシカルボニル（Ｚ　−ＣＩ）を加えたのち、２体を
沈澱として得ろ。沈澱をろ取し、冷水、エタノール、ア
セトン、次いでエーテルで洗い、水に＠濁し、６Ｎ−Ｈ
ＣＩを加え溶解したのち、Ｈ，Ｓを通す。析出するＣｕ
Ｓを除き、水冷下層アンモニア水で中和し、析出するＺ
一体を得る。

次いでこれをジオキサン−水（２：ｌ）に溶かし、［Ｍ
ｏｒｏｄｅｒら、　Ｈｏｐｐｅ−３ｅｙｌｅｒ　ｓ　　
Ｚ、　ｐｈｙｓｉｏｌ。

Ｃｈｅｗ、、３５７．Ｉ　６５１（１９７６）コの方法
に従って苛性ソーダと（Ｂｏｃ）、Ｏを加え反応さけ、
結晶状のα−Ｂｏｃ体を得る。

紫外吸収スペクトル（λ　　　）：　２６７ｎｍ（エタ
ｌａＸ ノール） 元素分析値：　Ｃｔ　＋　Ｈｔ　−Ｏａ　Ｎ　ａ　（分
子量４５６．４５として）計算値　Ｃ，５５，２５，Ｈ
，５，３０，Ｎ、１８．４１実測値　Ｃ，５５，７２，
Ｈ，５，１２，Ｎ、１７．９３参考例２ Ｌ−シトルリンをアルカリ溶液中でホルミル酢酸エチル
と反応させる［５ｈｖａｃｈｋｉｎら、　Ｚｈ、　０ｂ
ｓｈ。

Ｋｈ、１え、３４４８（１９６２）の方法に従うコとＬ
−α−アミノ−γ−（１−ウラシニル）酪酸が得られる
。　これを参考例１と同様にα−Ｂｏｃ化する。

元素分析値：Ｃ１ｓＨ＋５ＯａＮ３Ｃ分子量３１３．３
１として）計算値　Ｃ，４９，８３，Ｈ，６，１１，Ｎ
、１３．４１実験値　Ｃ，４９，５６，Ｈ，６，５３，
Ｎ、１３．０７参考例３ α、γ−ジアミノ酪酸をＩＮ　　ＮａＯＨ中で２−アミ
ノ−４，６−シクロルビリミジンと反応させ［Ｓ　ｈｅ
ａｌｙ　　ら、　Ｊ、　Ｍｅｄ、　Ｃｈｅｗ、、　　２
７．　　ｌ　４１６（１９８４）の方法に従う〕、Ｎγ
−（２−アミノ−６−クロル−４−ピリミジニル）アミ
ノ−α−アミノ酪酸を得る。次に酢酸緩衝液中０〜５°
Ｃで４−クロルベンゼン−ノアゾニウムクロリドを反応
させ、黄色沈澱としてジアソ体を得る。これを５０％エ
タノールに＠濁し、少量の酢酸と亜鉛末を加え窒素を通
気しながら煮沸する。不溶物をろ去し、ろ液を濃縮した
のら、エーテルで抽出する。

水層を中和し、放置すると２．５−ジアミノ体が晶出す
る。これをオルト蟻酸エチルに懸濁し、耐圧容器中１５
０℃に加熱し、溶媒留去後エタノールで再結晶すると目
的物が得られる。

ｍｐ＞３００℃（分解） 紫外吸収スペクトル（λ　　　）：　２５４．２７７ｎ
ｉ＋１ｌａｘ ０．１Ｎ−ＨＣＩ）；　　２５７．　２６９ｎｍ（０，
ＩＮ−Ｍａｉｌ）元素分析値：Ｃ５Ｈ１２０３Ｎａ（分
子量２５２．２３）計算値　Ｃ，４２，８５，１＋、４
．８０．　！！、３３．３２実験値　Ｃ，４２，６４，
１１，５，１４，Ｎ、３３．０７参考例４ ウイラルディンを参考例１と同様に処理してα−Ｂｏｃ
体とする。

紫外吸収スペクトル（λ　　　）：　２６５ｎｍ１８Ｘ Ｏ，ｌＮ−１１ＣＩ）＋　２６５ｎｍ（ｐＨ７）：２６
４ｒ＋ｍ（０，１Ｎ−ＮａＯＨ）元素分析値：Ｃ１ｔＨ
−＋０ｓＮ３（分子量２９９．２８として）計算値　Ｃ
，４８，１６，Ｈ，５，７３，Ｎ、１４．０４実験値　
Ｃ，４７，８３，Ｈ，５，９９，Ｎ、１３．７８参考例
５ ａ−Ｂｏｃ−ウイラルディンを［Ｖｏｒｂｒｕｇｇｅｎ
ら。

Ａｎｎ、９８８（１９７５）コの方法に準じてシトシン
誘導体とする。

紫外吸収スペクトル（λ　　　）＋　２８１ｎｍ１ａＸ （０，ＩＮ　−１（ＣＩ）：２７２．５ｒｖ（ｐＨ７）
；２７４ｎｍ（０，１Ｎ　−Ｎａ０Ｈ）元素分析値：Ｃ
，ｔＨ，、Ｏ，Ｎ、（分子量２９８．３０として）計算
値　Ｃ，４８，３１；　Ｈ，６，０８；　Ｎ、１８．７
８実験値　Ｃ，４７，０９：　ＩＩ、６．４１．　Ｎ、
１８．４５実施例ＩＬ−Ｓｅｔ−（Ｌ−ウイラルディン
）”Ｌ−５ｅｔ−（Ｌ−ウイラルディン）−Ｌ−９ｅｔ
−（Ｌ〜９−アデニル−アラニン）−Ｌ−３ｅｒ−（Ｌ
−ウイラルディン）−Ｌ−Ｓｅｔ−（Ｌ−９−アデニル
−アラニン）−Ｇｌｙの合成 Ｐａｍ樹脂に結合したＢｏｃ−グリシンをペプチド自動
合成機（＾ｐｐ１ｉｅｄ　　Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、　
Ｍｏｄｅｌ　４３０Ａ）に装着し、Ｂｏｃをトリフルオ
ロ酢酸で除去し、参考例１で得られたＬ−β−（６−Ｚ
アミノ−９−プリニル）−α−Ｂｏｃ−プロピオン酸を
常法に従って無水物としたものを反応させる。次に脱Ｂ
ｏｃ処理し、Ｂｚｌ−Ｂｏｃ−セリン無水物を縮合さ仕
、以下順次、所定の配列通り保護アミノ酸を連結する。

耐フツ化水素容器にペプチド樹脂を入れ、アニソールを
添加してフッ化水素を冷時加え、１時間放置し、フッ化
水素を減圧上除去する。

残留物を含ＤＭＦ−水に溶かし、活性炭束（武田薬品製
、白鷺）に吸着させ、水洗後、５０％ピリジン−水で溶
出する。溶出液から溶媒を留去し、Ｃｌ８−逆相シリカ
ゲルの高速液体クロマトグラフィー［溶媒・５％ＣＩ（
３ＯＮを含む０．１Ｍトリエチルアミン−酢酸溶液およ
び４０％ＣＨ３ＣＮを含む０．１Ｍトリエチルアミン−
酢酸溶液の直線濃度勾配法コで分離精製し、目的物を主
成分として得る。

上記で得たペプチドを気相シークエンサー（＾ｐｐｌｉ
ｅｄ　　Ｂｉｏｓｙｓｔｅ＠ｓ、　Ｍｏｄｅｌ　　４７
０　Ａ）にて分析し、各サイクルで得られるＰＴＨ−ア
ミノ酸を分取し、高速液体クロマトグラフィーにおいて
各分画のＰＴＨ−アミノ酸を分析した結果、Ｌ　−５ｅ
ｔ−Ｗｉｌ　−Ｌ　−５ｅｔ−Ｗｔｌ　−Ｌ　−Ｓｅｔ
　−Ａｌａ　−Ｌ−３ｅｒ−Ｗｉｌ−Ｌ−Ｓｅｒ−Ａｌ
ａ−Ｇｌｙの配列に一致した。

１Ｌ−ウイラルディン　ｍ１ｌｌ　１．−α−アミノ−
β−（６−アミノ−９−プリニル）プロピオン酸のＰＴ
Ｈ一体に一致。

発明の効果 本発明のペプチドにおける核酸塩基は、核酸の塩基と塩
基対の形成が可能であるように配列することによって、
抗ウィルス剤あるいは診断用のプローブあるいは核酸化
学における試薬として利用できる。

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. （１）Ｌ（またはＤ）−ω−ヌクレオ−α−アミノ酸と
   ω−ヌクレオ−α−アミノ酸以外のＬ（またはＤ）−α
   −アミノ酸とが交互に結合したペプチド。
2. （２）一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼ ［式中、Ｒ＿１は同一または異なるＬ（またはＤ）−ω
   −ヌクレオ−α−アミノ酸の側鎖を、Ｒ＿２はω−ヌク
   レオ−α−アミノ酸以外の同一または異なるＬ（または
   Ｄ）−α−アミノ酸の側鎖を表わし、ｌおよびｎはそれ
   ぞれ０または１であり、ｍは１以上の整数である］で示
   されるペプチド。
3. （３）構成ポリペプチド鎖の一ケ所以上の部分が請求項
   （２）のペプチドに相当するペプチド鎖であるポリペプ
   チド。