JPH01221321A

JPH01221321A - 脂質過酸化抑制剤

Info

Publication number: JPH01221321A
Application number: JP63044696A
Authority: JP
Inventors: Toshiji Horie; 利治堀江; Shoji Awazu; 荘司粟津; Koji Moriguchi; 徹守口; Naoyuki Takasugi; 高杉　直之
Original assignee: Wakunaga Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Wakunaga Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1988-02-26
Filing date: 1988-02-26
Publication date: 1989-09-04

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】［発明の背景］技術分野本発明は、ニンニク抽出物を有効成分とする脂質過酸化
抑制剤に関する。

ニンニクは、中国、朝鮮、日本その他各国で栽培されて
いる多年生草木で、一般に強栢強壮薬として知られてお
り、古くから健胃、発汗、利尿、去痰、整腸、殺菌およ
び駆虫剤としても用いられている。

また、近年においてはニンニク成分に関する研究も盛ん
に進められ、作用の解明も分子レベルで研究されるよう
になり、これまでに、血中コレステロール低下作用（Ａ
、八、Ｑｕｒｅｓｈｉ、　ｅＬ　ａｌ；　Ｌｉｐｉｄｓ
。

艮（５）、３４３−３４８（１９８３））、血糖低下作
用、血圧降下作用、抗リウマチ作用、酵素阻害作用、制
癌作用、繊維素溶解活性増強作用（Ｖ、Ｓ、Ｋａｍａｎ
ｎａ。

Ｎ、Ｃｈａｎｄｒａｓｅｋｈａｒａ；　Ｊ、Ｓｃｉ、Ｉ
ｎｄ、Ｒｅｓ、　４２，３５３−３５７（１９８３））
及び血小板凝集抑制作用〔有賀豊彦、大柴進；医学のあ
ゆみ９月８（１２）、８５９−８８２（１９８１））等
が見出されている。

一方、近年、脳、心、血管、肺、皮膚、眼、及び赤血球
などの諸臓器の生理的機能や病変の一部に過酸化脂質が
関与することが報告されている〔八木国夫、五藤雄一部
；１過酸化脂質と疾思、医学書院（１９８１）］。

一般に、過酸化脂質の生成は生体内の酵素系や大気中の
紫外線によって誘発されるラジカル反応によって引き起
こされ、生じた過酸化脂質は細胞膜や細胞内オルガネラ
の膜を変化させる。この結果、諸臓器組織や赤血球の機
能低下（後記実験例参照）や壊死が起こり、血栓症、動
脈硬化症、肝疾患、肺浮腫、皮膚疾患、眼疾患、老化等
、種々の症状として現われてくると考えられている。

従って、過酸化脂質の生成を抑制する薬物は上記疾患の
予防及び治療剤として、臨床上強く望まれているところ
である。

［発明の概要］１旦本発明は新規な脂質過酸化抑制剤の提供を目的とし、ニ
ンニク抽出物がこの作用を有するという当業者にとって
も思わぬ発見に基づくものである。

従って、本発明による脂質過酸化抑制剤はニンニクより
炭素数１〜３の含水または非含水の低級アルコールによ
り抽出されたニンニク抽出物を有効成分とすること、を
特徴とするものである。

芳１ニンニク抽出物にこのような脂質過酸化抑制作用があっ
たということは思いがけなかったというべく、そして本
発明による脂質過酸化抑制剤は血栓症、動脈硬化症、肝
疾患、肺浮腫、皮膚疾患、眼疾患、老化の予防及び治療
剤として有意義な貢献をなすものである。

［発明の詳細な説明１ニンニク本発明でいうニンニクとは、ゆり科（Ｌｉｌｉａｃｅａ
ｅ）アリウム（Ａｌｌｉｕｍ）属に属するアリウム・サ
ティパム・リンネ（Ａｌｌｉｕｍ　ｓａｔｉｖｕｍ　Ｌ
、）を指し、例えばオオニンニク（Ａｌｌｉｕｍ　ｓａ
ｔｉｖｕｍ　Ｌ、　ｆｏｒｍａｐｅｋｉｎｅｓｅ　Ｍａ
ｋｉｎｏ）がこれにあたる。

目的抽出物を取得するための材料となる部分は、とりわ
け鱗茎部、（内部に分裂してできた通常５〜２０個の割
球状形の小鱗茎が入っている）が好ましく、これを乾燥
するか、またはそのままの状態で抽出に供することがで
きる。

また、これらの植物を常法により組織培養に付して、そ
の培養物を用いることもできる。

ニンニク（物の取木ニンニク抽出物の取得は、基本的には植物生薬の抽出に
慣用される任意の手段により行なうことができ、抽出対
象はニンニク植物体の任意の部分でありうるが、その鱗
茎部が最も好ましい。

抽出は含水または非含水の低級アルコールにより行なわ
れ、抽剤として使用すべき低級アルコールは炭素数１〜
３のもの（通常は１価アルコール）であり、特に好まし
いのはエタノールである。

抽出は加温下でも常温下でも行なうことができるが、常
温下では抽出時間が長く、数時間から数日程度が必要で
あることが普通である。好ましくは、４０℃以下で１０
時間から２０時間抽出に付すのがよい。また抽出効率を
上げるため、対象植物体は破砕したものであることが好
ましいのは言うまでもない。

脂質過酸化抑制　用本発明でいう脂質過酸化抑制作用は、生体内で誘発され
たラジカル反応を抑制し、過酸化脂質の生成を低下させ
るものであり、血栓症、動脈硬化症、肝疾患、肺浮腫、
皮膚疾患、眼疾患、老化の予防及び治療分野に及ぶもの
である。

脂質過酸化抑制屓本発明の脂質過酸化抑制剤はニンニク抽出物それ自体、
または適宜製剤上の賦形剤、結合剤、希釈剤と混合して
成るものであり、粉末、顆粒、錠剤、カプセル剤、軟膏
剤、眼軟膏剤、シロップ剤、注射剤などの形態で経口的
または非経口的に投与することができる。必要に応じて
他の薬剤を調合させてもよい。投与量は、年齢、体重、
症状により適宜増減するが、経口的には通常成人、１日
、抽出物（濃縮、乾燥しペースト状としたもの）として
１００ｍｇ〜１０ｇ程度であり、さらに好ましくは５０
０ｍｇ〜５ｇ程度である。本発明による好ましい具体例
は、上記１日当りの投与量を１回ないし数回に分けて服
用させるための単位投与形態のものである。

なお、本発明におけるニンニク抽出物の毒性は、例えば
ニンニクの希エタノール抽出液（エキス分１４．５％、
アルコール数１．１８）のＬＤ５ｏ値が、経口、腹腔、
及び皮下のいずれの投与経路においても３Ｑｍｌ／Ｋｇ
以上であること（Ｊ、Ｔｏｘｉｃｏｌ、Ｓｃｉ、、　９
．５７（１９８４））、また、ニンニクが食品として常
用されていることなどにより、一般に低毒性である。

［実験例１１、ニンニク抽出物の取得適当な大きさに破砕したニンニクの鱗茎部２００ｇに２
０％エタノール４００　ｍ　ｌを加えて４℃で１５時間
抽出を行なった。このニンニク抽出液を４０℃以下で減
圧濃縮した後、凍結乾燥してニンニク抽出物（以下ＧＥ
と略す）を得た。

（収量　３０　　ｍｇ）。

２、脂質過酸化抑制作用（１）ラット肝ミクロゾームにおける脂質Ｉ腹■抑制効
果（イ）肝ミクロゾーム懸濁液の調製あらかじめフエノパルビタールを投与して（１００ｍｇ
／Ｋｇ／日、三日間）酵素誘導を行なったＷｉｓｔｅｒ
系雄性ラット（１６０〜２５０ｇ）に、エーテル麻酔下
でヘパリン（２００ｕｎｉｔｓ／ａｎｉｚａｌ）を投与
した後、水冷生理食塩水を用いて門脈より潅流膜面し、
肝臓を摘出した。等張ＫＣＩ溶液で２５％ホモジネート
を調製した後、８４００ｒｐｍ、４℃で２０分間遠心分
離し、上清をさらに３００００ｒｐｍ、４℃で６０分間
遠心分渾仁してミクロゾーム画分を沈澱させた。

この沈渣を０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，４）にタン
パク濃度ｌ　ｍ８／ｍｌになるように懸濁して、試験用
肝ミクロゾーム懸濁液とした。

（ロ）ＧＥの評価（イ）で得られたミクロゾーム懸濁液に、０．１Ｍリン
酸緩衝液（ｐＨ７，４）にて各濃度に調製したＧＥ溶液
を加え（ミクロゾーム濃度：２ｍｇ／ｍ！、ニンニク抽
出物濃度：５，１０，２０．４０　ｍｇ／ｍｌ）、３７
℃で５分間ブレインキュベーションした後、アスコルビ
ン酸、Ｆｅ２＋を加え（アスコルビン酸濃度：０．１ｍ
Ｍ、　Ｆｅ”＋濃度：５μＭ）、８７℃で３時間インキ
ュベーションした。

また、コントロールとして、ＧＥ溶液の代りに０．１Ｍ
リン酸緩衝液を加え、同様に操作した。

（ハ）膜機能の測定 ■ＴＢＡ（チオバルビッール酸）反応物質の定量（ロ）
で得られた反応液０．５　ｍｌにＴｌ３Ａ試薬（１５％
トリクロロ酢酸、　０．３７５％チオバルビッール酸。

０．２５Ｎ　ＨＣＩ＞　４　ｍｌを加え、沸騰水浴中で
１５分間加熱した。流水で冷却した後、３０００ｒｐｍ
で１０分間遠心分離し、上清を分取して５３５１ｍの吸
光度を測定した。スタンダードとしては１，１，３．３
−テトラエトキシプロパンを用いた。

結果を第１図に示す。

ＧＥ共存下では、脂質過酸化に伴うチオバルビッール酸
反応物質の生成は濃度依存的に抑制されていた。

■蛍光物質の定量（ロ）で得られた反応液をセファデックスＧ−２５カラ
ムクロマトグラフイーにかけてミクロゾーム画分を分離
した後、タンパク濃度を０．２　ｍｇ／ｍｌに調製し、
蛍光分光光度計（（株）日立製作新製６５０−１０型）
を用いて励起波長３６０ｎｍ、蛍光波長４６０ｎｍ（？
ｔ２光側にカット・オフ・フィルター（４３０ｎｍ）を
使用）で、蛍光物質を測定した。

結果を第２図に示す。

ＧＩＥ共存下では、脂質過酸化に伴う蛍光物質の生成は
濃度依存的に抑制されていた。

■　Ｄ　Ｐ　Ｉ−１による蛍光標識とアニソトロピーの
測定 ■で用いた試ｐ２．５ｍｌにＤ　Ｐ　ｆ（（１，６−ｄ
ｉｐｈｅｎｙｌ−１，３，５−ｈｅｘａｔｒｉｅｎｅ）
溶液［５μＭ　ＤＰＩ、　１　＋＋＋Ｍ　ＥＤＴＡ（リ
ン酸緩衝液中）］４．５　ｍｌを加え、２５℃で１時間
インキュベーションして、ミクロゾーム膜をＤＰＩで標
識した。

測定は、２５℃、０．１　ｍｇタンパク／＋＋＋ｌで偏
光板を用いて、垂直に偏光した光で励起し、垂直（Ｉｏ
−ｏ）と水平（ＩＯ−９０）に偏光した蛍光をカット・
オフ・フィルター（４３０ｎｍ）を通して、それぞれ測
定した。蛍光アニソトロピー（ｒ５）は次式より求めら
れる。

ｒ５：（Ｉｏ−ｏ−ＧＩｏ−９ｏ）／　（１０−０”２
ＧＩＯ−９０）ここで、Ｇは回折格子補正因子であり、
垂直成分と水平成分の検出器の感度の割合で、水平に偏
光した光で励起した時の水平成分（１９０−９０）と垂
直成分（１９０−０）の割合（Ｇ”１９０−０／ｌ９Ｏ
−９０）で表される。

測定波長は励起波長３６０ｎｍ、蛍光波長４６０１ｍを
使用した。

結果を第３図に示す。

ＧＥ共存下では、蛍光アニソトロピーの値は濃依存的に
増加し、脂質過酸化による膜流動性の低下は抑制されて
いた。

尚、図１．２，３中のＣはミクロゾームのみをインキュ
ベーションした時の測定値であり、Ｏはミクロゾームの
みを直接測定した時の値である。

ラットの脱繊維素面にＰＢＳ（リン酸緩衝生理食塩水、
　ｐＨ７，４）を加え、４℃、１０分間遠心分離し、成
熟赤血球画分を分取した。これをＩ）　Ｂ　Ｓで３回洗
浄した後、ＰＢＳを用いて赤血球浮遊液（１１，１％）
を調製した。

（ロ）ＧＥ（７と１貫（イ）で調製した赤血球浮遊液にＰＢＳにて各濃度に調
製したＧＥ溶液を加え（赤血球濃度：１０．０％。

ａＶ濃度：３０，１５０，３００．４ｚｇ／ｍｌ）、３
７℃で、３０分間ブレインキュベーションした後、アス
コルビン酸、Ｆｅ２＋を加え（アスコルビン酸濃度：０
．１ｍＭ。

Ｆｅ２＋濃度＝５μＭ）、８７℃で８時間インキュベー
ションした。

またコントロールとして、ＧＥの代りにＰＢＳを加え、
同様に操作した。

（ロ）赤道Ｌｕ１ｌ失乳定 ■赤血球変形能（イ）で得られた反応液７．０　ｍｌを生理食塩水で３
回洗浄（５００ｇ、　５分、４℃）し、生理食塩水で１
０％赤血球浮遊液を調製した。得られた浮遊液を３７℃
で１５分間インキュベーションし、葛谷らの方法〔現代
の診療、印（４）、　１５１（１９７８））に従い、ス
クリーン・フィルトレージョン・プレッシャー装置を用
いて赤血球変形能を測定した。

結果を第４図に示す。

コントロールでは、脂質過酸化により赤血球変形能が著
しく低下したが、ＧＥ共存下では、濃度依存的に有意な
変形能低下抑制が認められた。

■赤面球内ＡＴＰ濃度、赤血球内２．３−ＤＰＧ濃度（イ）で得られた反応液１．０１に０．６８　ＨＣｌ０
４２ｍ１を加え除タンパクし、遠心して得た上清につい
て、赤血球内ＡＴＰ濃度（ＡＴＰ測定キット（べ一リン
ガー・マンハイム山之内（株）製）を使用〕及び赤血球
内２．３−ＤＰＧ濃度（２，３−Ｄ　Ｐ　Ｇ測定キット
（ベーリンガー・マンハイム山之内（株）製）を使用〕
を測定した。

結果を第５図及び第６図に示す。

ＧＥ共存下では、脂質過酸化による赤血球内のＡＴＰ含
量及び２．３−ＤＰＧ濃度の低下は、濃度依存的に抑制
されていた。

尚、図４．５．６中の”スタート”はアスコルビン酸、
Ｆｅ２＋を添加する直前の値である。

【図面の簡単な説明】

第１図はＧＥ共存、非共存（コントロール）下でのチオ
バルビッール酸反応物質（各々、ＴＢＡ−ＲＳ−Ｇ。ＴＢＡ−ＲＳ−Ｃと略す）を定量し、その比（ＴＢＡ−
ＲＳ−Ｇ／ＴＢＡ−ＲＳ−Ｃ）をプロットしたものであ
る。第２図はＧＥ共存、非共存（コントロール）下での肝ミ
クロゾーム膜中の蛍光強度（各々、ＦＱ＊　ＦＣと略す
）を測定し、（ＦＣ”ＦＯ）／ＦＣをプロットしたもの
である。第３図はＧＥ共存、非共存（コントロール）下でのミク
ロゾーム膜のアニソトロピーを測定したものである。第４図はＧＥ共存、非共存（コントロール）下での赤血
球のミリボアメンブランフィルタ−通過時の圧力を測定
したものである。第５図はＧＥ共存、非共存（コントロール）下での赤血
球内ＡＴＰ濃度を測定したものである。第６図はＧＥ共存、非共存（コントロール）下での赤血
球内２．３−ＤＰＧｆｉ度を測定したものである。

Claims

【特許請求の範囲】

ニンニクより炭素数１〜３の含水または非含水の低級ア
ルコールにより抽出されたニンニク抽出物を有効成分と
する脂質過酸化抑制剤。