JPH01197658A - 逐次的分析反応の実施用の分析試薬混合装置及び逐次的分析反応の実施方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 発明の背景 本発明は、液体試験試料中の測定可能な物質を検出する
分析反応に関する。本発明は、特に、測定をするために
、インキュベーション及び混合時間のような種々の作業
工程を必要とする、被分析物及び分析試薬の反応が関与
する液体試験試料中の被分析物の測定に関する。

液体試験試料中の被分析物の量を測定する必要から種々
の分析操作が開発されてきた。殊に、例えば、種々の障
害及び病気のため、治療薬で治療されている患者からの
生物学的流体中の治療薬濃度を監視するために種々の臨
床分析法が開発された。この種の臨床分析法は、殊に、
特定の薬剤に関して中毒濃度と治療濃度との間にかなり
の重なりがある場合に、中毒、すなわち治療反応の不適
切さを評価し、適切な反応が達成されるまで投与量を調
節できるようにするために使用されるのが典型的である
。

しかしながら、このような分析操作及び臨床分析法は、
しばしば複雑で高価な機器を必要とし、かつその実施に
訓練された熟練技術者を必要とする。さらに、このよう
な分析法がこのような複雑な機器を必ずしも必要としな
い場合でも、このような分析法及び操作はしばしば逐次
反応の実施を必要とする。分析法が逐次的であるため、
時間を浪費し、連続する多くの手作業工程、例えばピペ
ットでの採取、インキュベーション期間、分離工程など
を必要とし、時間がかかり、また、不正確な結果を生じ
うる、許容しえない誤差を生じる。

したがって、本発明は、作業工程を少ししか必要としな
い逐次的分析反応を実施する便利な方法及び装置を提供
することを目的とする。

本発明の別の目的は、容易に操作しろる、安価な、逐次
的分析反応の実施装置を提供することである。

さらに、本発明の目的は、液体試験試料からの被分析物
の精密な測定のため、逐次的分析反応を実施する方法及
び装置を提供することである。

発明の概要 本発明は、逐次的分析反応、例えば免疫分析を実施し、
これにより生じた検出可能なシグナルを測定し、液体試
験試料中に存在する被分析物の量に相関させる分析試薬
混合装置を提供するものである。典型的には、このよう
な分析反応は、液体試験試料と逐次的に結合する分析試
薬を含み、このような測定を行うために多数のインキュ
ベーション、ピペットでの採取及び混合工程を必要とす
る。例えば、２種の分析試薬が関与する場合、しばしば
、一方の試薬を液体試験試料と混合し、インキュベーシ
ョンし、次いでこれに他方の試薬を加え、続いてさらに
混合及びインキュベーション工程を行うことが必要であ
る。

本発明によれば、分析試薬の混合装置は、このような混
合及びインキュベーション工程を自動的に行い、このよ
うな分析反応を実施する、簡単で便利で、時間的に効率
のよい方法を提供する。殊に、分析試薬の混合装置は、
第一及び第二分析試薬を入れた第一及び第二開放容器及
び該容器と液密に嵌合する蓋部材から成る分析試薬アセ
ンブリと該分析試薬アセンブリを回転させる手段とを含
む。蓋部材は、第一容器と第二容器との間に開放液体通
路を提供する手段、例えば共通の室又はチャンネルを含
み、第一容器と第二容器との間で第一及び第二分析試薬
の移動及び混合を促進する。

分析試薬アセンブリを回転させる手段は、分析試薬アセ
ンブリを、好ましくは時計回りとその反対方向に交互に
回転させることができ、分析試薬を操作して、分析試薬
アセンブリの回転程度に応じて、分析試薬をそれぞれの
容器に別々に保持して混合するか、又は開放液体通路を
提供する手段を通って、容器の間を移動し、混合する。

特に、分析試薬のこのような操作は、試薬容器の縦軸に
よって規定される平面内で、該平面と交差する点によっ
て規定される回転軸を中心に分析試薬アセンブリを回転
させる結果である。例えば、分析試薬をそれぞれの容器
に別々に保持して混合することが望ましい場合には、分
析試薬アセンブリは、分析試薬が蓋部材を介して容器間
に流動しないように、垂直に対して約９０°未満、回転
軸を中心に回転させる。また、分析試薬を相互に混合す
ることが望ましい場合には、分析試薬アセンブリを回転
軸を中心に垂直に対して約９０’より大きく回転させる
か、又はより好ましくは、回転軸を中心に１回転又は数
回転（３６０°）回転させ、これによって分析試薬を蓋
部材を介して流動させ、容器間で相互に混合させる。

本発明によれば、蓋部材は、試薬容器の間に分析試薬を
移動させ、混合する手段を有し、これにより、そうでな
ければ分析試薬の移動及び混合に必要な、煩雑な手作業
によるピペット採取工程を不要にするものである。した
がって、分析試薬の操作とは、それぞれの容器内に別々
に分析試薬を保持して混合し、所望の場合には、分析試
薬を開放通路を提供する手段を介して流動させる分析試
薬アセンブリの任意の運動を含む。

分析試薬混合装置は、さらに、このような回転運動の数
、方向及び時間、例えば静止インキュベージジン状態の
期間を調節するようにプログラムされた時限手段、例え
ばマイクロプロセッサあるいはコンピュータを含む。分
析試薬アセンブリ、分析試薬アセンブリの回転手段及び
時限手段は、分析反応を実施、することのできるハウジ
ング内に収納されているのが好ましい。

本発明の方法を実施する際には、液体試験試料を第一分
析試薬に添加することによって第一容器中で第一液体反
応混合物を形成し、蓋部材を液密に容器に嵌合させて本
発明の分析試薬アセンブリを準備する。次に、アセンブ
リを所定時間、回転させるか又は操作して、第一液体反
応混合物を第一容器内で、他方のものとは別々に保持し
て混合し、次いでアセンブリを所定時間、回転させるか
又は操作して、第一液体反応混合物及び第二分析試薬を
開放液体通路を提供する手段を介して蓋部材を通過させ
、これによって容器間で相互に混合してその第二液体反
応混合物を形成する。所定時間後、第二液体反応混合物
又はこれから採取したアリコートによって与えられる検
出可能なシグナルを測定し、液体試験試料に存在する被
分析物の量に相関させる。

好ましい実施態様の説明 分析試薬アセンブリ 第１図及び第２図において、本発明の分析試薬アセンブ
リ１０は、蓋部材１１、その上端で開放されており、第
一及び第二分析試薬（図示せず）を入れた第一容器１２
及び第二容器１３、容器コンテナ１４及び容器コンテナ
トレー１５を含み、これらを第３図に示したように組み
立てることができる。容器１２及び１３には、ねじ付き
キヤ・ンブ部材を受理するためにその上端にねじが付け
られていて、分析試薬アセンブリ１０を組み立てる（そ
の時点でキャップ部材は取り除かれる）前に収容されて
いる分析試薬がこぼれないようになっているのが好まし
い。

第３図において、容器コンテナ１４は容器１２及び１３
の寸法より僅かに大きい寸法を有し、容器１２及び１３
を受理する第一及び第二の穴１６及び１７を含む、容器
コンテナ１４は、その内径がコンテナ１４の寸法より僅
かに大きいトレー１５に嵌合し、受容される。トレー１
５は、容器コンテナ１４の底部２０に穴１９に適合する
栓１８を含む（第４図）。したがって、容器コンテナ１
４は、穴１．９に挿入される栓１８を用いてのみトレー
１５によって適切に受理されうるので、容器コンテナ１
４中の容器１２及び１３の配列及びしたがって、そこに
入れられた各分析試薬を確保する。

アセンブリ１０の蓋部材１１は、第一及び第二の肩付き
開口２２及び２３を有する底部２１及びドーム形外壁２
５によって規定される開放室２４を含む、ワッシャ２６
及び２７は、開口２２及び２３の肩部２８及び２９に設
置され、それぞれ容器１４及び１５の開放上端上に嵌合
される。開口２２及び２３は、開放室２４に開口し、開
放室２４を介して相互に直接連通していて、嵌合したと
きに第一及び第二容器１２及び１３の間に液体を流動さ
せる手段を提供する。以下に詳述するように、第一及び
第二開放容器１２及び１３中に入れられた分析試薬は、
アセンブリ１０をアセンブリ１０の回転手段によって充
分に回転させるときにのみ、開放室２４を通過する。

蓋部材１１は、さらに、底部２１の反対側の端部に位置
する第一及び第ニスロット３０及び３１（第５図）を含
む。スロット３０及び３１は、第一及び第二容器１２及
び１３上に蓋部材１１を液密に着脱可能に固定するため
に、トレー１５のそれぞれ第一及び第二突出部３２及び
３３とぴったり嵌合しうる。特に（第６図）、第一突出
部３２は、その外表面に圧力が印加されたときにばね状
横運動を生じるように、トレー１５の側壁３５の上端に
位置する凹状肩部３４にその下部で取りつけられている
。同様に、第二突出部３３は、トレー１５の側壁３６の
上端にその下部で取りつけられ、そこに横運動が全（な
いかあるいはほとんどないように固定されている。突出
部３２及び３３は、それらの上端にフランジ３７及び３
８を含み、蓋部材１１のスロット３０及び３１より僅か
に小さく、したがって該スロットに挿入することができ
る寸法を有する。スロット３０と３１との間の距離は、
トレー１５の突出部３２と３３との間の距離より僅かに
大きいものと理解すべきである。

したがって、容器１２及び１３上に蓋部材１１を固定す
るために、突出部３３はまずスロット３１と一線に配列
され、次いで、フランジ３８はスロット３１を介して挿
入され、これによってフランジ３８の底部表面３９は蓋
部材１１の底部２１の上部表面４０に対抗して静止され
ている。突出部３２をスロット３０と一線に配列するた
め、突出部３２の外表面に圧力が、例えば手で印加され
、突出部３２のフランジ３７がスロット３０と一線に配
列されるまで、内側に移動され、次いでそこに挿入され
る。突出部３２の外表面上に与えられた圧力が解除され
ると、突出部３２は外側に移動してスロット３０に対し
て一線でない配列に戻り、これにより突出部３２の外表
面はスロット３０の遠位内表面４１を押して外向き圧力
を与え、フランジ３７の底表面４４は底部２１の上部表
面４５に対抗して静止している。スロット３０の遠位内
表面４１に対して突出部３２の外表面によって与えられ
た圧力は、蓋部材１１の横運動を生じ、これにより同様
の圧力は、スロット３１の近位内表面４６によって突出
部３３の内表面に対して与えられるものと理解すべきで
ある。したがって、蓋部材１１が液密に容器１２及び１
３上に固定される。同様に、蓋部材１１を除去する必要
がある場合には、突出部３２の外表面に圧力を与え、こ
れによって与えられていた圧力を解除し、スロット３０
と突出部３２を一線に配列させ、前記のようにそこを通
って引っ張る。

分析試薬アセンブリ１０については既に説明したが、本
発明の教示から逸脱することなく変更をすることができ
るものと理解すべきである。例えば、容器１２及び１３
の一方又は両方を一体成分として成形して容器コンテナ
１４とすることができる。また、容器１４を使用するこ
となく、容器１２及び１３を受理するようにトレー１５
を適合させることができ、これにより蓋部材１１をトレ
ー１５の突出部３２及び３３に固定して、前記のように
その間に容器１２及び１３が設置されるようにする。さ
らに、容器１２及び１３の形及び寸法並びに容器コンテ
ナ１４中の穴１６及び１７の往復形及び寸法は、変動す
ることができ、示した形及び寸法に必、ずしも限定され
ない。さらに、トレー１５は、多数の液体試験試料を含
む分析反応を同時に実施するために、以下にさらに詳細
に記載するように、分析試薬アセンブリ１０（第７図）
を１個より多く適合させることができる。また、特定の
分析反応を実施するために２個より多くの分析試薬を必
要とする場合、分析試薬アセンブリ１０は付加的試薬容
器に適合するように変形させることができ、これにより
その蓋部材１１は、このような付加的試薬容器及び前記
のような容器１２及び１３と嵌合し、これらの間に開放
通路を提供する。

回転手段 本発明により、容器１２及び１３中に入れられた分析試
薬の操作は、分析試薬アセンブリ１０の回転手段を用い
て達成され、これにより分析試薬アセンブリ１０の垂直
に対する回転の程度に応じて、分析試薬を溶層１２及び
１３中に別々に保持し、混合し、あるいは蓋部材１１の
開放室２４を介して容器１２及び１３の間で移動し、混
合することができる。特に、分析試薬アセンブリ１０の
回転手段は、該アセンブリ１０を容器１２及び１３の縦
軸によって規定される平面内で、該平面と交差する点に
よって規定される回転軸を中心に回転させる。したがっ
て、各容器１２及び１３内に分析試薬を保持し、その早
期の混合を防止するために、アセンブリ１０を垂直に対
して約９０゜より少ない角度、好ましくは垂直に対して
約６０゜で回転軸を中心に回転させる。また、第−又は
第二分析試薬を開放室２４を通って容器１２又は１３の
一方又は他方に流し、これによりその混合物を生成する
ことが望ましい場合には、アセンブリ１０は、垂直に対
して約９０″より大きく、好ましくは約１８０＠より大
きく、より好ましくは垂直に対して３６０°回転させる
。

前記のように分析試薬を別々に保持し、混合することが
望ましい場合には、分析試薬アセンブリ１０を時計回り
とその反対方向に交互に回転させて、これにより各方向
で垂直に対して約９０°未満で分析試薬アセンブリを振
動させるのが好ましい、同様に、前、記のように分析試
薬を移動させ、混合することが望ましい場合には、分析
試薬アセンブリ１０を各方向に垂直に対して約９０″を
超えて、好ましくは各方向に１以上の所定の回数の回転
、すなわち３６０＠で回転させる。

前記のように分析試薬及び液体試験試料の所望の操作の
達成に関して、分析試薬アセンブリの回転程度は、もち
ろんその容量並びに容器１２及び１３の内径又は液体容
量に左右される。したがって、分析試薬アセンブリ１０
の回転の相対的程度は、本明細書に記載する回転角度に
限定されるものではなく、本発明の教示から逸脱するこ
となく前記考慮事項を知った当業者が容易に決定するこ
とができる。

本発明によれば、分析試薬アセンブリ１０の回転手段は
、駆動機構、例えば前記のような回転運動を行いうるス
テッピングモータ及び駆動軸を含む。特に、このような
駆動機構（図示せず）は、トレー１５の近位側壁４９に
設置された軸部材に例えば駆動機構の駆動軸を介して結
合されている（第６図）、軸部材４８の軸は、容器１２
及び１３の縦軸によって規定された平面と交差して分析
試薬アセンブリ１０が回転される前記回転軸を提供する
。軸部材４８によって提供される回転軸は、図示したよ
うにトレー１５上の軸部材４８の位置に限定されないも
のと理解すべきである。特に、平面の交差点、すなわち
、回転軸は容器１２及び１３の縦軸によって規定された
平面に沿った任意の点であってよいが、もちろん、分析
試薬アセンブリ１０の所望の回転は、それにもかかわら
ず前記のように容器１２及び１３の間で分析試薬の混合
及び移動を起こすことができる。

時限手段（図示せず）、例えばプログラムされたコンピ
ータ、マイクロプロセッサ等によって、駆動機構を所定
速度で、好ましくは約１　Ｏｒ、ｐ、ｍ。

〜約４５　ｒ、ｐ、ｍ、、より好ましくは約１５ｒ、ｐ
、ｍ、〜約３　Ｏｒ、ｐ、ｎ、で駆動し、駆動機構の操
作の方向及び時期を制御するために、アセンブリ１０の
回転運動を制御することができる。当業者には理解され
るように、このような所定の速度は、本明細書に記載し
たように限定されるものではなく、実施する特定の分析
反応の必要条件に左右される。駆動モータは、所定の位
置で逆転及び停止することができ、駆動モータ又は駆動
軸の回転位置決定を検出するため公知のセンサ（図示せ
ず）によって監視することができる。センサは、駆動機
構のホーム位置、すなわち第３図に示すようにアセンブ
リｌＯの直立位置及びホーム位置に対するアセンブリの
回転程度の決定の目的及び操作サイクルの間に回転位置
の誤配列が起こったか否かを測定するため、時限手段の
制御回路に情報を与える。したがって、実施する特定の
分析反応に応じて、駆動機構及び時限手段は、所定の時
間にわたってアセンブリ１０の回転運動の必要な数及び
方向並びに分析試薬をインキュベーションするために１
個以上の静止位置のアセンブリ１０が望ましい場合の非
運動期間を与えることができる。

第７図において、本発明の分析試薬混合装置５０は、分
析試薬アセンブリ１０、駆動機構及び時限手段を保護ハ
ウジング５１内に収納して含むのが好ましい。特に、駆
動機構及び時限手段は、ハウジング５１の本体部分５２
内に設置され、分析試薬アセンブリ１０は接近蓋５４の
下方でハウジン５１の接近部５３内に設置されている。

接近蓋５４は透明であってよく、装置５０の作動の間、
自動的に固定されるように電気機械的に制御できるのが
好ましい。多数の液体試験試料について独立して分析反
応を同時に行うために、トレー１５を図示したように変
更しうることを理解すべきである０例えば、４種の液体
試験試料について同時に分析反応を行うことが望ましい
場合には、分析試薬アセンブリｌＯは、４組の突出部３
２及び３３．４個の蓋部材１１．４組の容器１２及び１
３並びに４個の容器ホールダ１４を上記のように組み立
てて有するトレー１５を含む。トレー１５は、さらに、
トレー１５の遠位側壁５６上に設置され、ハウジング５
１の側壁５８の内表面５７に回転可能に設置されている
トレー６の近位側壁４９（第６図）上に設置された軸部
材４８の回転軸と同じ軸上に位置する第二の軸部材５５
を有する。

ハウジング５１は、さらに、分析試薬混合装置５０の動
作を制御・監視するため、例えばスイッチ及び表示灯を
取りつけるために使用しうる制御パネル５９を含んでい
てよい。

方法 本発明の分析試薬混合装置５０は、液体試験試料中の被
分析物と分析試薬との間の逐次的分析反応、特に免疫分
析を実施し、これによって生じた検出可能なシグナルを
測定し、液体試験試料中に存在する被分析物の量に相関
させるのに有用である。特に、液体試験試料を前記のよ
うな分析試薬アセンブリ１０の第一容器１２に加えると
、本発明の分析試薬混合装置５０は、前記のような所望
の混合及びインキュベーション工程を行う。したがって
、液体試験試料を加え、前記のように蓋部材１１を固定
すると、その後の付加的工程は、公知の方法による第二
液体反応混合物によって生じた検出可能なシグナルの測
定だけである。このような測定は、容器中に残っている
反応混合物を用いて行うか又は混合物の全部若しくは少
なくとも一部を取り出し、試薬アセンブリの外で測定を
行うことによって行われる。一定の順序及びタイミング
を含めて回転及びインキュベーションの期間を変更して
、例えば種々の混合及びインキュベーション工程の特定
の順序及び／又はタイミングを必要とする所望の分析反
応を行うようにすることができる。

本発明の好ましい実施態様によれば、本発明の分析試薬
混合装置は、被分析物、検出可能な化学的基で標識され
た抗−被分析物抗体試薬を含む標識試薬及び固定化され
た形態の被分析物又はその結合アナローグの間の結合を
含む逐次的免疫分析を実施するのに特に有用である。こ
のような分析法により、液体試験試料から被分析物に結
合した標識抗体試薬又は固定化された形態の被分析物に
結合した標識抗体試薬の量を測定し、試験試料中に存在
する被分析物の量に相関させる。

抗体試薬の抗体成分は、完全抗体、例えば公知の免疫グ
ロブリンの類及び小分類、例えばＩｇＧ。

ＩｇＭ等、又はそれぞれＦａｂ及びＦ　ａｂ’並びにＦ
（ａｂ’）ｚとして従来公知のＩｇＧの１価及び２価の
抗体フラグメントであってよい。抗体は、一般に２価の
抗体フラグメント（Ｆ　（ａｂ’）ｚ）又はさらに好ま
しくは１価の抗体フラグメント（Ｆａｂ及びＦａｂ’）
であるのが好ましい、２価及び１価のＩｇＧ抗体フラグ
メントは、ペプシン又はパパインを用いる標準蛋白質分
解消化法を使用して公知方法により得ることができる。

標識試薬の検出可能な化学的基は、検出可能な物理的又
は化学的性質を有する任意の物質であってよい。このよ
うな物質は、免疫分析の分野で良く開発されてきており
、このような方法に有用な標識は、−ａに本発明に適用
することができる。

例えば、検出可能な物理的性質を有するこの種の化学的
基は、検出可能なシグナル、例えば蛍光物質、燐光分子
、発色団、放射性同位元素、スピンラベル又は電気的活
性基を提供するため別の化学薬品又は物質との化学反応
又は相互作用を必要としない、それ自体の物理的性質に
基づいて検出される基である。検出可能な化学的性質を
有する化学的基は、検出可能なシグナルを生じる、その
検出成分との化学的反応性又は相互作用に基づいて検出
される基である。検出可能な化学的性質を有するこの種
の化学的基は、このような検出成分と相互作用する前は
検出可能な生成物を生じないか又は検出可能なシグナル
を提供せず、酵素活性を有するもの、例えば酵素、酵素
基質、補酵素、酵素抑制因子及び活性化因子、化学発光
種、化学的触媒、金属触媒、酵素チャンネリング成分、
発蛍光団消光剤又はエネルギー移動対及び特異的に結合
しうるリガンド、例えばビオチン又はハプテンを包含す
る。

固定化された形態の被分析物又はその結合アナローグは
、公知方法により固体支持体、例えば不溶性粒子に固定
化された被分析物又はその結合アナローグを含む分離可
能、好ましくは濾過可能な種である。有用な不溶性粒子
は、一般には、ビード又は微小球の形であるが、前記の
ような液体試験試料からの被分析物に結合した任意の標
識試薬から分離されう、る他の構造を使用することがで
きる。

本発明の分析試薬混合装置５０を使用するこの種の免疫
分析を実施する際には、第一の開放容器１２には、標識
試薬を入れ、第二の開放容器１３には、液状又は乾燥状
態、例えは凍結乾燥した状態で固定化された形態の被分
析物を入れる。第一開放容器１２内で、静止した、実質
的に直立した位置で液体試験試料を加えることによって
第一液体免疫分析反応混合物を形成し、次いで、蓋部材
１１を前記のような第一及び第二開放容器１２及び１３
と嵌合させる。次に、第一容器１２中で被分析物及び標
識試薬を、他方のものとは別々に保持して混合するため
に、分析試薬アセンブリ１０を、好ましくは時計回りと
それとは反対方向に交互に、約５秒〜約３００秒、好ま
しくは約３０秒〜約１８０秒間回転させ、次いで、静止
した、実質的に直立した位置で約５秒〜約６００秒、好
ましくは約１８０秒〜約４２０秒間インキユベーシゴン
する。次に、アセンブリ１０を、好ましくは時計回りと
それとは反対方向に交互に、約５秒〜約６００秒、好ま
しくは約１８０秒〜約４２０秒間回転させ、これによっ
て第一反応混合物を蓋部材１１の開放室２４を通過させ
、その第二液体反応混合物を形成するため固定化された
形態の被分析物を含む第二容器１２中に流れる。次に、
その後、アセンブリ１０を回転運動させると、第二反応
混合物を第一及び第二容器１２及び１３の間で開放室２
４を介して混合する。

第一及び第二反応混合物を回転させ、インキュベージジ
ンする時間は、使用する特定の分析試薬の性質及び／又
は分析条件、例えば、免疫分析に使用する特定の抗体及
び被分析物の結合速度に応じて変動し、したがって、上
記の時間に限定されるものではない。例えば、前記のよ
うな免疫分析を実施する場合に、当業者には明らかなと
おり、被分析物及び標識試薬、すなわち、第一液体反応
混合物を、存在する被分析物の実質的に全部を該標識試
薬に結合させるために充分な時間の間混合し、インキュ
ベージジンする。同様に、第一液体反応混合物及び固定
化された形態の被分析物、すなわち、標識試薬に結合し
た被分析物、遊離あるいは未結合の標識試薬及び固定化
された形態の被分析物を含む第二液体反応混合物を、固
定化された形態の被分析物に実質的に全部の遊離標識試
薬を結合させるのに充分な時間混合してそれぞれその分
離可能な遊離種及び結合種を生成させる。

前記のように所望の時間の間アセンブリ１０を回転させ
たら、その回転を実質的に直立した位置で停止させる。

次いで、蓋部材１１を外し、少なくとも一部の第二液体
反応混合物を採取し、標識試薬の遊離種又は結合種から
の検出可能なシグナルを測定し、公知方法により液体試
験試料中に存在する被分析物の量に相関させる。例えば
、固定化された形態の被分析物の粒子の密度が第二液体
反応混合物の液体部分の密度より実質的に大きい場合に
は、固定化された形態の被分析物は、混合物から析出し
、標識試薬の結合種を含む上澄液を生じる。また、第二
液体反応混合物又はその少なくとも一部を採取し、遠心
分離して、標識試薬の結合種を含む上澄液を得る。

標識試薬の結合種を、中空の円筒形チューブ部材６１及
び該チューブ部材６１の近位開口に固定されたゴム製ピ
ストン又はプラグ部材６２を有する濾過装置（第８図及
び第９図）を使用して標識試薬の遊離種から分離する。

プラグ部材６２は、挿入したときに液密なシールが創成
されるように、チューブ部材６１の内径より僅かに大き
い外径を有する本体６３及びその近位端部に環状の、半
径方向に延びるリップ又はフランジ６４を有する。

フランジ６４の外径は、挿入されたときに液密なシール
を生じるように、第二反応混合物を含む容器１３の内径
より僅かに大きい。プラグ部材６２は、プラグ部材６２
の近位端部及び遠位端部に開口する軸方向の六６５を有
し、この穴に軸方向の穴６７の内径より僅かに大きい外
径を有する長い、円筒形の多孔性フィルタ部材６６が圧
入されている。多孔性フィルタ部材６６は、固定化され
た形態の被分析物に対しては実質的に不浸透性で、第二
反応混合物の液体部分及び結合種に対しては透過性であ
る。フィルタ部材６６は、例えば合成樹脂、例えばポリ
エチレン、ポリプロピレン又はポリビニリデンから製造
され、複数の連続空隙を規定する通路又はこれを通る全
方向の連通孔を有する非繊維質多孔性材料を含むのが好
ましい。

特に、結合種及び遊離種は、濾過装置を使用して、第二
液体反応混合物６７（第８図）を含む開放容器１３中に
その近位端部で挿入し、フィルタ部材６６を第二反応混
合物６７を経て容器１３の下部に（第９図）通過させる
ことによって相互に分離される。したがって、固定化さ
れた警戒の被分析物６日に結合した遊離種は、容器１３
の下部とフィルタ部材６６の近位端部との間で捕捉され
、標識試薬の結合種及び第二液体反応混合物の液体部分
を含む濾液６９は、チューブ部材６１内に入れられる。

濾液６９又はその少なくとも一部を、例えばピペットを
用いて採取し、結合種の標識試薬の検出可能な化学的基
によって提供される検出可能なシグナルを測定し、液体
試験試料中に存在する被分析物の量に相関させる。

分析試薬アセンブリ１０の回転運動の最終的方向に応じ
て、第二液体反応混合物は、最終的に第一容器１２又は
第二容器１３のいずれかに含まれる。したがって、分析
試薬アセンブリ１ｏを最終的に回転させ、これによって
第二液体反応混合物が最終的になお第一容器１２に含ま
れ、そこから取り出される場合には、前記のように挿入
したときに液密なシールを生じるように、フランジ６４
の外径を同様に第一容器１２の内径より大きくする。

結合種の検出可能な化学的基は、使用した特定の検出可
能な化学的基に依存して公知の方法により検出し、測定
することができる。本発明の方法を実施する際には、標
識試薬の検出可能な化学的基は、酵素であり、例えば酵
素分解可能な基で誘導体化された色原体を含む酵素基質
指示薬化合物をその検出のため使用するのが好ましい。

このような酵素分解可能な基は標識試薬の酵素によって
分解されて、検出可能な色原体生成物を生成し、これを
、例えば反射光度計を用いて測定し、液体試験試料中に
存在する被分析物の量に相関させることができる。

一般に、この種の酵素−基質化合物を濾液に加え、これ
により標識試薬の存在で、その酵素が色原体酵素基質化
合物と相互作用して濾液の色の変化として検出可能なシ
グナルを生じることができる。また、濾過装置のフィル
タ部材６１に可溶性の形の酵素基質指示薬化合物を混入
し、これにより前記のように第二液体反応混合物中に濾
過装置を挿入すると、酵素基質指示薬化合物が溶解し、
濾液６９中に存在する任意の結合種と相互作用して検出
可能なシグナルを生じる。

酵素基質指示薬化合物又は検出可能な化学的性質を有す
る特定の化学基に対する他の任意の検出成分を支持体マ
トリックス、例えば吸湿性材料中に公知の方法により混
入するのが好ましい。したがって、濾過装置のチューブ
部材６１から既知量の濾液６９を採取し、このような支
持体マトリックスに施すことにより、濾液６９中に存在
する標識試薬の酵素は酵素基質指示薬化合物と相互作用
して前記のように検出可能なシグナルを生じる。

検出可能なシグナルは、肉眼で観察し、及び／又は公知
の適切な機器、例えば反射光度計を用゛いて測定するこ
とができる。

試験キット及び装置 本発明は、さらに、前記の本発明の分析試薬アセンブリ
を用いて所望の逐次的分析反応を実施するのに必要なす
べての必須要素を含む試験キットを提供するものである
。この試験キットは、工業的に包装された形で存在し、
通常、特定の分析反応方法を実施するための指示書を含
む。

試験キットは、前記の第一及び第二開放容器１２及び１
３中に必要な分析試薬を入れた分析試薬アセンブリ１０
を含む、試験キットは、そこに含まれる所望の分析試薬
を用いて複数の液体試験試料に関して所望の分析反応を
実施するため複数の分析試薬アセンブリ１０を含むのが
好ましい。

１個以上の分析試薬アセンブリ１０を受理するのに適合
したハウジング５１中に収納してアセンブリ１０の回転
手段及び時限手段を含む分析試薬混合物装置５０を、１
個以上の分析試薬アセンブリ１０とは別々に又はそれら
と−緒に包装することができる。容器１２及び１３を含
む分析試薬アセンブリ１０を安価な材料から作製して目
的とした用途に使用した後に捨てることができるように
するのが好ましい。

さらに好ましくは、分析試薬アセンブリ１０を免疫分析
を実施するのに特に適合するものとし、標識試薬、好ま
しくは１価のＦａｂ”抗体フラグメントに結合した酵素
を第一試薬容器１２に入れ、不溶性粒子に結合した測定
すべき被分析物又はその結合アナローグを第二試薬容器
１３に入れる。

このような免疫分析の実施用の試験キットも、指示薬手
段、例えば標識試薬に対する指示薬、好ましくは酵素分
解可能な基で誘導体化された色原体を混入した吸湿性試
薬パッドを含む試験ストリップ及び前記のような濾過装
置を含むのが好ましい。

分析試薬アセンブリ１０を、こぼれないように第一及び
第二容器１２及び１３と嵌合する、好ましくはねし締結
され、容易に除去しうるキャップ部材（図示せず）と共
に包装する。さらに、試験キットの使用者が間違った容
器に液体試験試料を加えるのを防止し、正しい試薬容器
に液体試験試料を添加した後に容易に除去しうる保護機
構を提供するため離脱シール又は被膜によって試薬容器
の一方、一般には、第二試薬容器１３を覆うか又は保護
することができる。

次に、本発明を下記の実施例によって説明するが、本発
明はこれに限定されるものではない。

実施例１ ジゴキシンの逐次的免疫分析の自動的実施ジゴキシンの
測定用の逐次的免疫分析を、プログラムされたエプソン
（Ｅｐｓｏｎ）　ＨＸ　　４０型コンピユータ〔アメリ
カ合衆国カリフォルニア用トランスのエプソン（Ｅｐｓ
ｏｎ）　）によって制御されるステッピングモータに結
合された分析試薬アセンブリ１０及び下記の試薬を含む
分析試薬混合装置５０を使用して自動的に実施した。

（ａ）　　　　ジギ　キシ゛ニン　　１固定化された形
態のジギトキシゲニン（ジゴキシン結合アナローグ）を
、１９８６年１２月９日に出願された、発明の名称「免
疫分析に使用する実質的に安定な固定化ハブテン試薬」
と称する米国特許出願第９３９９０２号明細書に記載さ
れている方法により製造した。このような方法によれば
、無水ピリジン中のジギトキシゲニンを４−ジメチルア
ミノピリジン及びｐ−ニトロフェニルクロロホルメート
で処理し、得られた３−ジギトキシゲニニルーｐ−二ト
ロフェニルカーボネートを次に、無水ピリジン中で６−
アミノカプロン酸及びトリエチルアミンを使用してカル
ボキシ官能性とし、３−０−　（５−カルボキシペンク
ン−１−カルバモイル）ジギトキシゲニンを得た。無水
Ｎ。

Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中のカルボキシ官
能性化ジギトキシゲニンを、次にトリエチルアミン、Ｎ
−ヒドロキシサクシンイミド及びＮ。

Ｎ−ジシクロへキシルカルボジイミドで処理して３−０
−　（５−カルボキシペンタン−１−カルバモイル）ジ
ギトキシゲニン（活性化ジギトキシゲニン）を得た。

まず、ＤＭＦ　１０−中のアミノエチルバイオ−ゲル（
Ａｎ＋１ｎｏｅｔｈｙｌ　ＢＩＯ−ＧＥＬ）　（登録商
標）Ｐ−２樹脂（アメリカ合衆国カリフォルニア州すッ
チモンドのバイオ−ラッド・ラボラトリイーズ（Ｂｉｏ
−Ｒａｄ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）社製、ロット番
号Ｎ１１２８９４５　；乾燥樹脂１ｇ当たりのアミン官
能基１．３９ミリ当量）２ｇの懸濁液を形成し、これを
室温で４８時間インキュベーションすることによってア
ミノエチル誘導体化ポリアクリルアミドゲル粒子の外部
アミン基に共有結合した活性化ジギトキシゲニンを含む
固定化試薬を製造した。ＤＭＦ溶液中のアミノエチル誘
導体化バイオ−ゲル（登録商標）Ｐ−２樹脂からの上澄
液０．０１ｍを除去し、活性化ジギトキシゲニン０．０
１−で置換して樹脂の乾燥重量１ｇ当たり活性化ジギド
キシゲニン０．０５マイクロモルを含む反応溶液を形成
し、回転ミキサー（転倒攪拌）で室温で４８時間穏和に
混合し、緩衝液及び水で洗浄し、次いで凍結乾燥した。

Ｃｂ）ｊｆＬＩＬ跋１ １個のβ−Ｄ−ガラクトシダーゼ酵素成分に結合した１
個の１１価の抗−ジゴキシン抗体フラグメン）　（Ｆａ
ｂ’）を含む酵素−抗体接合体製剤（５０ＩＩＩＭリン
酸ナトリウム中０．３ｎＭ、塩化ナトリウム５０＋ｓＭ
、塩化マグネシウム１ｍＭ、ウシ血清アルブミン１００
μｇ／−及びナトリウムアジド０．０２％、ｐＨ７，４
）を標識試薬として使用した。１価の抗体フラグメント
は、ジゴキシンに対して特異的なモノクロナール抗体〔
例えばポーター（Ｐｏｒｔｅｒ）著、Ｂｉｏｃｈｅｍ、
　Ｊ、、　７３巻１１９頁（１９５９）及びニソノフ（
Ｎｉｓｏｎｏｆｆ）著、Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｍｅｄ、　Ｒ
ｅｓ、。

１０巻１３２頁（１９６４）参照〕から誘導され、β−
Ｄ−ガラクトシダーゼ〔例えば、石用著、Ｊ。

Ｂｉｏｃｈｅｍ、　９６巻６５９頁（１９８４）；加藤
ら著、Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、、１１６巻１５５４頁（
１９７６年６月）；及び古式ら著、Ｅｕｒｏ、　Ｊ、　
Ｂｉｏｃｈｅｍ、。

１０１巻３９５頁（１９７７）参照〕で標識したもので
あ°る。１価の抗体フラグメント−β−Ｄ−ガラクトシ
ダーゼ接合体をポリアクリルアミドゲルで電気泳動によ
り精製して（ポリアクリルアミドゲル電気泳動）、１９
８６年１２月９日に出願された、発明の名称「実質的に
純粋な酵素−抗体モノ接合体製剤」と称する米国特許出
願第９３９６４０号明細書に記載されているように、１
個のＦａｂ″成分及び１個のβ−Ｄ−ガラクトシダーゼ
成分を含む、実質的に純粋な接合体製剤を生成した。こ
のような方法により、５％Ｔ、２％Ｃゲル溶液（４０％
Ｔ、２％Ｃアクリルアミド）及び８％Ｔ、２％Ｃゲル溶
液（４０％Ｔ、２％Ｃアクリルアミド及び蔗糖）を逐次
的に注入して直線的に増加する濃度勾配を生じることに
よって垂直スラブポリアクリルアミドゲル勾配を作製し
た。β−Ｄ−ガラクトシダーゼ成分を抗体成分と反応さ
せて、別々に泳動しうる種として遊離β−Ｄ−ガラクト
シダーゼ成分及び１個以上の抗体成分に結合した１個以
上のβ−Ｄ−ガラクトシダーゼ成分を含む接合体を含む
反応混合物を得た。反応混合物をゲル勾配に適用し、こ
れにより接合体及び遊離β−Ｄ−ガラクトシダーゼ成分
を相互に明瞭な濃度帯域に分離し、この免疫分析に使用
した接合体を各濃度帯域から単離した。

（ｃ）色　　、　′六′・人 １９８６年１２月９日に出願された、発明の名称ｒ色原
体アクリジノン酵素基質」と称する米国特許出願第９３
９８５５号明細書に記載されている方法により色原体指
示薬化合物を製造した。このような方法により、７−ヒ
ドロキシ−１，３−ジクロロ−９，９−ジメチル−９Ｈ
−アクリジン−２−オン中間体から誘導された７−ヒド
ロキシ−９，９−ジメチル−９Ｈ−アクリジン−２−オ
ン色原体を酢酸エチル／キノリン中でアセトブロモガラ
クトース及び酸化銀と反応させて７−（テトラ−Ｏ−ア
セチル−β−Ｄ−ガラクトピラノシルオキシ）−９，９
−ジメチル−９Ｈ−アクリジノンを製造し、これをメタ
ノール中でナトリウムメトキシドを用いて加水分解して
、この実施例に使用する所望の７−β−Ｄ−ガラクトピ
ラノシルオキシ−９，９−ジメチル−９Ｈ−アクリジン
−２−オン指示薬化合物を得た。

公捉方法 分析を実施するに当たり、酵素−抗体接合体製剤（７５
０μりをガラスバイアル１２（直径１５Ｉｎｆｆｉ×高
さ２８ｍｍ）に入れ、固定化ジギトキシゲニン試薬（３
０■）をプラスチックバイアル１３（外径１２ｍｍ及び
内径８．５　ｒｒｍ　Ｘ高さ３７ｍｍ）中に入れた。ガ
ラスバイアル１２及びプラスチックバイアル１３を容器
ホールダ１４の穴１６及び１７中にそれぞれ入れ、標識
試薬を含むガラスバイアル１２にジゴキシンを含むヒト
血清試験試料３０μｌを加えることによって第一液体反
応混合物を形成した。容器ホールダ１４を容器ホーシダ
トレー１５中に入れることによって分析試薬アセンプＩ
Ｊ　１０を組み立て、これに前記のように蓋部材１１を
固定した。容器ホールダトレー１５の軸部材４８を、分
析試薬アセンブリ１０及びバイアル１２及び１３が静止
直立位置にあるようにステッピングモータに結合した。

駆動モータは、プログラムされたコンピュータの制御下
に、分析試薬アセンブリｌＯを垂直に対して５７°回転
させる（時計回り及びその反対方向に交互に３　Ｏｒ、
ｐ、ｔｓ、　）ことによりガラスバイアル１２中で試験
試料及び標識試薬を混合した。１分後、分析試薬アセン
ブリ１０の回転運動を停止させ、分析試薬アセンブリ１
０を静止直立位置で５分間インキュベーションした。混
合及びインキュベージジン期間中に、標識試薬に結合し
たジゴキシンを含む標識試薬の結合種が形成された。５
分後、試験試料及び標識試薬を含むガラスバイアル１２
中の第一液体反応混合物を、分析試薬アセンブリ１０を
（時計回り及びその反対方向に交互に）各方向に５回転
ずつ、４分間回転させることによってプラスチックバイ
アルエ３中の固定化試薬と混合した。このように交互に
回転運動を行うことによって、ガラスバイアル１２中の
第一液体反応混合物を蓋部材１１の開放室２４を通って
固定化試薬を含むプラスチックバイアル１３中に移動さ
せて第二液体反応混合物を形成することができる。した
がって、逐次的に交互に回転運動を行うことによってガ
ラスバイアル１２とプラスチックバイアル１３０間で開
放室２４を介して第二反応混合物を混合し、遊離又は未
結合の標識試薬、すなわちジゴキシンに結合していない
標識試薬を固定化試薬によって結合させ、固定化した。

４分後、最後に時計回りと反対方向に回転させた後に分
析試薬アセンブリ１０の交互の回転運動を停止させ、こ
れにより第二液体反応混合物をプラスチックバイアル１
３中に移動させ、最終的にそこに保持した。

蓋部材１１を除去し、前記のような濾過装置〔２５μｍ
の多孔性プラスチックフィルタ部材６６、フランジ６４
の外径９．４　ｍｍ、アメリカ合衆国ジョーシア用フェ
アバーンのポレックス・テクノロジイース（Ｐｏｒｅｘ
　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）　）をプラスチックバイ
アル１３中に挿入し、第二液体反応混合物を通ってプラ
スチックバイアル１３の下端まで通し、濾過装置のチュ
ーブ部材６１中に標識試薬の結合種を含む濾液を形成さ
せた。濾過部材６６に対して不浸透性の固定化試薬に結
合した標識試薬は、濾過部材６６とプラスチックバイア
ル１３の下端との間に保持された。既知量（３０μ２）
の濾液をピペットで採取し、基質を混入した試薬ストリ
ップ、に施した。

濾液からの接合体標識試薬、すなわち、結合種のβ−Ｄ
−ガラクトシダーゼ活性を測定するために、β−Ｄ−ガ
ラクトシダーゼ及びアクリジノン−β−Ｄ−ガラクトピ
ラノシドの相互作用から生じる色の形成割合を、試薬パ
ッドに試料を施した後約６０〜８０秒間６３０ｎｍで測
定した。ＨＰ−８５コンピータ〔アメリカ合衆国カリフ
ォルニア用ポロアルドのヒエ−レット−パラカード・カ
ンパニイー　（Ｈｅｗｌｅｔｔ−Ｐａｃｋａｒｄ　Ｃｏ
ｍｐａｎｙ）　）に多重ボートインターフェイスを介し
て付設されたセラライザー（Ｓｅｒａｔｙｚｅｒ）　（
登録商標）反射光度針〔アメリカ合衆国インジアナ州ニ
ルカートのマイルス・インコーボレッテッド（Ｍｉｌｅ
ｓ　Ｉｎｃ、）　］で反応性を測定した（第１表）。

第１表に示したデータに基づいて得られた、ジゴキシン
に対する用量応答性を第１０図に示す。

第１表 ジゴキシン゛　　ｎ　ｄ　　　反嵐注Ｘ土豆Ｌ０　　　
　　　　　　　１．９０ ０、６　　　　　　　　　２．７６ １．２　　　　　　　　　３，６１ ２、４　　　　　　　　　５．１８ ３、６　　　　　　　　　６．６７ ５、　Ｏ７，７６ ゛本発明の精神及び範囲を逸脱することなく、前記のよ
うに本発明の多く変化及び変形が可能であり、したがっ
て、特許請求の範囲に示したちの以外には制限されない
ことは明らかである。

【図面の簡単な説明】

第１図は分析試薬アセンブリの分解正面図、第２図は第
１図の分析試薬アセンブリの２−２線に沿った分解側面
図、第３図は第１図の分析試薬アセンブリの部分断面正
面図、第４図は第１図の分析試薬アセンブリの４−４線
に沿った底面図、第５図は第１図の分析試薬アセンブリ
の５−５線に沿った平面図、第６図は１個以上の分析試
薬アセンブリを保持するトレーの近位末端の部分斜視図
、第７図はハウジング内に収納した分析試薬混合装置の
斜視図、第８図は本発明の好ましい実施態様による第二
反応、混合物の一部を除去するため、分析試薬アセンブ
リの開放容器中に部分的に挿入された濾過装置の部分断
面側面図、第９図は開放容器中にさらに挿入した第８図
の濾過装置の部分断面側面図、第１０図は本発明の分析
試薬混合装置を使用して実施した逐次的免疫分析におい
て生じたジゴキシンに対する用量応答性を示すグラフで
ある。 ＦＩＧ、ｌ　　　　　　　　　　ＦＩＧ、２ＦＩＧ、３ ＦＩＧ、　４　　　　　　　　　　　　ＦＩＧ、　５Ｆ
ＩＧ、　８　　　　　　　　　　　ＦＩＧ、　９ＦＩＧ
、７

Claims (22)

【特許請求の範囲】
1. （１）（ａ）第一及び第二分析試薬を入れた第一及び第
   二開放容器及び該容器と嵌合し、前記の第一容器と第二
   容器との間に開放液体通路を提供する手段を有する蓋部
   材から成る分析試薬アセンブリ及び （ｂ）該アセンブリを回転させ、これによって、少なく
   とも一方の容器に加えられた液体を（ｉ）前記容器中の
   試薬と、他方のものとは別々に保持して混合するか又は
   （ｉｉ）開放液体通路を提供する前記手段を介して前記
   容器の間で移動させ、混合する手段 を含む逐次的分析反応の実施用の分析試薬混合装置。
2. （２）回転手段が前記容器の縦軸によって規定される平
   面内で前記アセンブリを回転させる請求項１記載の装置
   。
3. （３）回転手段が前記アセンブリを時計回りとその反対
   方向に交互に、垂直に対して９０゜未満回転させること
   ができ、これにより前記液体を前記容器内の試薬と、他
   方のものとは別々に保持して混合する請求項２記載の装
   置。
4. （４）回転手段が前記アセンブリを時計回りとその反対
   方向に交互に、垂直に対して約９０゜より大きく回転さ
   せることができ、これにより前記液体を開放液体通路を
   提供する前記手段を介して前記容器の間で移動させ、混
   合する請求項２記載の装置。
5. （５）前記アセンブリの回転手段が前記アセンブリを垂
   直に対して３６０゜回転させる請求項４記載の装置。
6. （６）前記アセンブリの回転手段が前記アセンブリを時
   計回りとその反対方向に交互に所定の回転数で回転させ
   る請求項５記載の装置。
7. （７）前記蓋部材が前記容器上に液密に締結されるもの
   である請求項１記載の装置。
8. （８）前記第一及び第二分析試薬が第一及び第二免疫分
   析試薬である請求項１記載の装置。
9. （９）前記第一免疫分析試薬が検出可能な化学的基で標
   識された特異結合対の一方の成分を含む標識試薬であり
   、前記第二免疫分析試薬が前記特異結合対の他方の固定
   化された形態の成分を含むものである請求項８記載の装
   置。
10. （１０）前記の固定化された形態の前記特異結合対成分
    が固定化された形態の前記被分析物又はその結合アナロ
    ーグであり、前記の標識試薬が検出可能な化学的基で標
    識された抗−被分析物抗体試薬である請求項９記載の装
    置。
11. （１１）前記被分析物又はその結合アナローグが水中に
    懸濁可能な粒子に固定化されている請求項１０記載の装
    置。
12. （１２）所定時間の間、前記アセンブリの回転運動を制
    御する時限手段をさらに含む請求項１記載の装置。
13. （１３）前記の回転手段及び時限手段が協同作用して順
    次、（ｉ）前記アセンブリを所定時間の間、時計回りと
    その反対方向に交互に、垂直に対して約９０゜未満回転
    させ、（ｉｉ）前記アセンブリを所定時間の間、実質的
    に直立した静止位置に保持し、（ｉｉｉ）前記アセンブ
    リを所定時間の間、時計回りとその反対方向に交互に、
    垂直に対して約９０゜より大きく回転させる請求項１２
    記載の装置。
14. （１４）液体試験試料中の被分析物と分析試薬との間の
    逐次的分析反応を行い、それによって生じた検出可能な
    シグナルを測定し、液体試験試料中に存在する被分析物
    の量に相関させるため、（ａ）第一及び第二分析試薬を
    入れた第一及び第二開放反応容器を準備し、 （ｂ）前記の第一分析試薬に前記の液体試験試料を加え
    ることにより前記の第一容器中で第一液体反応混合物を
    形成させ、 （ｃ）前記の容器に、前記の第一容器と第二容器の間に
    開放液体通路を提供する手段を有する蓋部材を嵌合させ
    て、分析試薬アセンブリを作り、（ｄ）所定時間の間、
    前記アセンブリを回転させて、前記の第一液体反応混合
    物を前記の第一容器中に、他方のものとは別々に保持し
    て混合し、前記の第二分析試薬を前記の第二容器中に保
    持し、（ｅ）所定時間の間、前記アセンブリを回転させ
    て、前記の第一反応混合物を前記の開放液体通路を提供
    する手段を介して前記の蓋部材を通って移動させ、前記
    の第一液体反応混合物及び前記第二分析試薬を含む第二
    液体反応混合物を形成させ、（ｆ）前記の第二液体反応
    混合物の少なくとも一部を取り出し、生じた検出可能な
    シグナルを測定する 工程から成る逐次的分析反応の実施方法。
15. （１５）前記容器の縦軸によって規定される平面内で前
    記アセンブリを回転させる請求項１４記載の方法。
16. （１６）前記アセンブリを時計回りとその反対方向に交
    互に、垂直に対して９０゜未満回転させ、これにより前
    記の第一液体反応混合物を前記の第一容器内で、他方の
    ものとは別々に保持して混合する請求項１５記載の方法
    。
17. （１７）前記アセンブリを時計回りとその反対方向に交
    互に、垂直に対して約９０゜より大きく回転させ、これ
    により前記の第一液体反応混合物を前記蓋部材を通過さ
    せて前記の第二液体反応混合物を形成させる請求項１５
    記載の方法。
18. （１８）前記アセンブリを垂直に対して３６０゜回転さ
    せる請求項１７記載の方法。
19. （１９）前記アセンブリを時計回りとその反対方向に交
    互に所定の回転数で回転させる請求項１８記載の方法。
20. （２０）固定化された形態の被分析物又はそのアナロー
    グに結合していない標識抗体試薬の量を測定し、試験試
    料中に存在する被分析物の量に相関させることにより、
    被分析物、検出可能な化学的基で標識された抗−被分析
    物抗体試薬及び固定化された形態の被分析物又はその結
    合アナローグの結合を含む、液体試験試料中の被分析物
    を測定する逐次的免疫分析を実施する方法において、（
    ａ）第一及び第二開放容器を準備し、前記の標識抗体試
    薬を前記第一容器に入れ、前記の固定化された形態の前
    記被分析物又はその結合アナローグを前記の第二容器に
    入れ、 （ｂ）前記の第一容器中で前記の標識抗体試薬に前記の
    液体試験試料を加えることによって第一液体免疫分析反
    応混合物を形成させ、 （ｃ）前記の容器に、前記の第一容器と第二容器との間
    に開放液体通路を提供する手段を有する蓋部材を嵌合さ
    せて、免疫分析試薬アセンブリを作り、 （ｄ）所定時間の間、時計回りとその反対方向に交互に
    、前記容器の縦軸で規定される平面内で垂直に対して約
    ９０゜未満前記アセンブリを回転させ、これにより前記
    の第一液体反応混合物を前記の第一容器内に、他方のも
    のとは別々に保持して混合し、前記の固定化被分析物又
    はその結合アナローグを前記の第二容器内に保持し、 （ｅ）所定時間の間、時計回りとその反対方向に交互に
    、所定の完全回転数で前記平面内で前記アセンブリを回
    転させ、これによって前記の第一液体免疫分析反応混合
    物を開放通路を提供する前記手段を介して前記蓋部材を
    通過させて、前記の第一液体免疫分析反応混合物及び固
    定化された形態の前記被分析物又はそのアナローグを含
    む第二液体免疫分析反応混合物を形成させ、 （ｆ）固定化された形態の被分析物又はそのアナローグ
    に結合しなかった標識抗体を含む前記の第二液体免疫分
    析反応混合物の少なくとも一部を取り出し、それから生
    じる検出可能なシグナルを測定する 工程を含む逐次的免疫分析の実施方法。
21. （２１）前記の固定化された形態の被分析物又はそのア
    ナローグが濾取可能な粒子を含み、工程（ｆ）が前記の
    第二液体免疫分析反応混合物をフィルタ手段に通して、
    前記の濾取可能な粒子と会合した標識抗体を溶液中に残
    留して濾液を形成する標識試薬とを分離し、生じた濾液
    の一部を採取し、それによって生じる検出可能なシグナ
    ルを測定する請求項２０項記載の方法。
22. （２２）前記の被分析物又はその結合アナローグを水中
    に懸濁しうる粒子に固定化する請求項２１記載の方法。