JPH01191676A - 細胞融合用チヤンバ - Google Patents
細胞融合用チヤンバInfo
- Publication number
- JPH01191676A JPH01191676A JP63012527A JP1252788A JPH01191676A JP H01191676 A JPH01191676 A JP H01191676A JP 63012527 A JP63012527 A JP 63012527A JP 1252788 A JP1252788 A JP 1252788A JP H01191676 A JPH01191676 A JP H01191676A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- plate
- hole
- cells
- chamber
- cell fusion
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 230000007910 cell fusion Effects 0.000 title claims abstract description 13
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 19
- 238000000034 method Methods 0.000 description 9
- 238000005530 etching Methods 0.000 description 5
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 4
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 3
- KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N Fluorane Chemical compound F KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OAKJQQAXSVQMHS-UHFFFAOYSA-N Hydrazine Chemical compound NN OAKJQQAXSVQMHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 230000005684 electric field Effects 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 229920002120 photoresistant polymer Polymers 0.000 description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 239000004065 semiconductor Substances 0.000 description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 229910021419 crystalline silicon Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 238000001459 lithography Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 229910021421 monocrystalline silicon Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000000059 patterning Methods 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 238000007740 vapor deposition Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M35/00—Means for application of stress for stimulating the growth of microorganisms or the generation of fermentation or metabolic products; Means for electroporation or cell fusion
- C12M35/02—Electrical or electromagnetic means, e.g. for electroporation or for cell fusion
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Sustainable Development (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Electromagnetism (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
- Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明はバイオテクノロジーに係わり、特に。
細胞融合用の容器に関する。
細胞融合用チャンバとしては、精密工学会講演論文集(
昭62年度春)のP845〜846に記載されているよ
うに、半導体のパターニング、エツチングをくりかえし
て形成されたものが知られている。
昭62年度春)のP845〜846に記載されているよ
うに、半導体のパターニング、エツチングをくりかえし
て形成されたものが知られている。
上記従来技術では、チャンバの中で細胞対の融合を行う
ために、ポリエチレングリコール(PEG)を施す方法
を用いているが、この方法では、細胞膜のダメージが大
きく破損し易いなどの問題点がある。その他、電気的に
融合させる方法があるが、チャンバの側壁に電極を精度
よく配置することが困難であった。また、電気融合を行
う場合には、二つの細胞を完全に接触した状態に保ち、
二つの細胞を貫く方向に最強の電界が加わるように電極
を配置する必要があった。
ために、ポリエチレングリコール(PEG)を施す方法
を用いているが、この方法では、細胞膜のダメージが大
きく破損し易いなどの問題点がある。その他、電気的に
融合させる方法があるが、チャンバの側壁に電極を精度
よく配置することが困難であった。また、電気融合を行
う場合には、二つの細胞を完全に接触した状態に保ち、
二つの細胞を貫く方向に最強の電界が加わるように電極
を配置する必要があった。
本発明の目的は、チャンバ内に供給された二つの細胞を
完全に接触した状態で最適な電気融合処理を容易に行な
える装置を提供することにある。
完全に接触した状態で最適な電気融合処理を容易に行な
える装置を提供することにある。
上記目的は、リソグラフィ・エツチングによって貫通孔
を有する上部プレートと、細胞を保持するための細胞の
直径より小さな開口を有する下部プレートをそれぞれ別
個に形成し、両プレートの間に平面的な電極を配置して
張合せることによって達成される。
を有する上部プレートと、細胞を保持するための細胞の
直径より小さな開口を有する下部プレートをそれぞれ別
個に形成し、両プレートの間に平面的な電極を配置して
張合せることによって達成される。
上部プレートは、細胞が浮遊した流体を下部プレートの
所定の位置に誘導するための流路の役割を果たし、下部
プレート上の開口部は、異種細胞を互いに接触した状態
に保持する。上下のプレート間に形成された二つの電極
間に電圧を印加することにより細胞を融合する。
所定の位置に誘導するための流路の役割を果たし、下部
プレート上の開口部は、異種細胞を互いに接触した状態
に保持する。上下のプレート間に形成された二つの電極
間に電圧を印加することにより細胞を融合する。
本発明の実施例を以下に述べる。第1図は、発明の対象
となる細胞融合チャンバの構造を説明するための烏撤図
である。すなわち、上部プレート2には、貫通する孔7
がマトリクス状に形成されており、下部プレート3には
、上部プレートの孔7の位置に対応して、微細なスリッ
トを有する凹部6が形成されている。また、その面上に
、凹部をはさむ形で電極4a、4b、・・・が形成され
ている。上部プレート2と下部プレート3は、孔7の中
心と凹部6の中心の位置関係が一致するように接合され
、多数のチャンバが形成された細胞融合用チャンバプレ
ートとして実用に供される。
となる細胞融合チャンバの構造を説明するための烏撤図
である。すなわち、上部プレート2には、貫通する孔7
がマトリクス状に形成されており、下部プレート3には
、上部プレートの孔7の位置に対応して、微細なスリッ
トを有する凹部6が形成されている。また、その面上に
、凹部をはさむ形で電極4a、4b、・・・が形成され
ている。上部プレート2と下部プレート3は、孔7の中
心と凹部6の中心の位置関係が一致するように接合され
、多数のチャンバが形成された細胞融合用チャンバプレ
ートとして実用に供される。
第2図は、チャンバ形状の詳細を示す。第2(a)図は
、該チャンバの上面図であり、第2(b)図、(c)図
はそれぞれ、(a)図の断面ΩQ、およびmmを示す。
、該チャンバの上面図であり、第2(b)図、(c)図
はそれぞれ、(a)図の断面ΩQ、およびmmを示す。
該チャンバはショ糖液などの液中にて使用されるが、細
胞1は(b)図に示すように穴7から流体にのせて供給
され、下部からの吸引によって、凹部6に保持される。
胞1は(b)図に示すように穴7から流体にのせて供給
され、下部からの吸引によって、凹部6に保持される。
二つの細胞が並んだ状態で、電極4a、4b間に電圧を
印加することにより、二つの細胞の融合が行われろ。
印加することにより、二つの細胞の融合が行われろ。
次に、上記チャンパリ形成方法について説明する。第3
図は、プレート3を形成する一手法について断面図を用
いて示したものである。始めに、(100)を面方位と
するSi単結晶プレート3′に酸化膜9を形成する(第
3図(a))、次いで、一方の面にレジスト10を塗布
する(第3図(b))。
図は、プレート3を形成する一手法について断面図を用
いて示したものである。始めに、(100)を面方位と
するSi単結晶プレート3′に酸化膜9を形成する(第
3図(a))、次いで、一方の面にレジスト10を塗布
する(第3図(b))。
その後、露光装置を用いた露光および現僅によってホト
レジスト10に開ロバターン11を形成する(第3図(
C))。次に、ホトレジスト10をマスクとしてフッ化
水素酸等で酸化膜9をエツチングして、酸化膜9に開ロ
バターン12を形成し。
レジスト10に開ロバターン11を形成する(第3図(
C))。次に、ホトレジスト10をマスクとしてフッ化
水素酸等で酸化膜9をエツチングして、酸化膜9に開ロ
バターン12を形成し。
レジストを除去する(第3図(d))。さらに、酸化膜
9をマスクとしてKOH等のアルカリ水溶液、又はヒド
ラジン等のアミン系水溶液を用いて所定の時間異方性エ
ツチングを行うことにより、プレート3′の表面と約5
4.7°の角度を有する(111)系の面から成る側壁
13が形成される(第3図(e))。この状態で酸化膜
を除去し、再度全面に酸化膜を形成する(第3図(f)
)。
9をマスクとしてKOH等のアルカリ水溶液、又はヒド
ラジン等のアミン系水溶液を用いて所定の時間異方性エ
ツチングを行うことにより、プレート3′の表面と約5
4.7°の角度を有する(111)系の面から成る側壁
13が形成される(第3図(e))。この状態で酸化膜
を除去し、再度全面に酸化膜を形成する(第3図(f)
)。
次に、同様の手順によって下側の面からSiの部分を上
部のV溝に達するまで適当な時間エツチングし、凹部8
を形成する(第3図(g))。次いで、全面の酸化膜を
除去することによって、スリット5が形成されたチャン
バを得ることができる。
部のV溝に達するまで適当な時間エツチングし、凹部8
を形成する(第3図(g))。次いで、全面の酸化膜を
除去することによって、スリット5が形成されたチャン
バを得ることができる。
使用にあたっては、全面に酸化膜を再度形成する6次に
、第4図を用いて、第2図で示した電極4a、4bの形
成手法について説明する。まず、予めエツチング等でス
トライプ状に開口せしめた金属薄板14を、既に凹部を
形成したプレートに位置合せする(第4図(a))。次
いで、この薄板14をマスクとして、AQ、又はCr、
Auなどの金属を蒸着によって付着させて電極を形成す
る。この場合、マスクとして、金属薄板を用いたが、第
3図で示したプロセスを用いて、レジストによって代用
することも可能である。
、第4図を用いて、第2図で示した電極4a、4bの形
成手法について説明する。まず、予めエツチング等でス
トライプ状に開口せしめた金属薄板14を、既に凹部を
形成したプレートに位置合せする(第4図(a))。次
いで、この薄板14をマスクとして、AQ、又はCr、
Auなどの金属を蒸着によって付着させて電極を形成す
る。この場合、マスクとして、金属薄板を用いたが、第
3図で示したプロセスを用いて、レジストによって代用
することも可能である。
第2図でのプレート2の製法は、第3図で示した(c)
〜(f)のプロセスを省略し、片面から酸化膜の開ロバ
ターンを形成し、エツチングによってもう一方の面に達
するまでSi加工すればよU)。
〜(f)のプロセスを省略し、片面から酸化膜の開ロバ
ターンを形成し、エツチングによってもう一方の面に達
するまでSi加工すればよU)。
加工されたプレート2と3は適当な位置合せおよび接着
が行われ、本発明における細胞融合用チャンバプレート
として実用に供する。
が行われ、本発明における細胞融合用チャンバプレート
として実用に供する。
上記実施例では、上下のプレート材料として昨結晶Si
を用いたが他の材料で代用することもできる。また、上
記実施例では下部プレートに電極を形成した後に上部プ
レートと積層・接合したが、上部プレートに電極形成を
行って積層・接合しても同様の効果が得られる。
を用いたが他の材料で代用することもできる。また、上
記実施例では下部プレートに電極を形成した後に上部プ
レートと積層・接合したが、上部プレートに電極形成を
行って積層・接合しても同様の効果が得られる。
以上の説明から明らかなように、この発明に係る細胞融
合用チャンバにおいては、単結晶Siを異方性エツチン
グすることによって、チャンバ側壁部および細胞保持用
凹部を高精度で加工できる。
合用チャンバにおいては、単結晶Siを異方性エツチン
グすることによって、チャンバ側壁部および細胞保持用
凹部を高精度で加工できる。
また、チャンバの側壁部と細胞保持用凹部を別々に作る
ことによって、電極を平面的に形成することができ、高
精度の電極形状を達成できる。この結果、いずれのチャ
ンバにおいても二つの細胞を接触させた状態で、強い電
界が2細胞を貫く位置に保持することができ、融合を行
う上で好適な条件を与えることが可能となる。
ことによって、電極を平面的に形成することができ、高
精度の電極形状を達成できる。この結果、いずれのチャ
ンバにおいても二つの細胞を接触させた状態で、強い電
界が2細胞を貫く位置に保持することができ、融合を行
う上で好適な条件を与えることが可能となる。
第1図は本発明のチャンバの構成を説明するための透視
図、第2図は、本発明のチャンバ形状および、融合時の
細胞と電極の位置関係を示す平面図および縦断面、側断
面図、第3図はチャンバを構成する下部プレートの製造
工程を示す縦断面図、第4図は下部プレートに電極を形
成する工程を示す縦断面図である。 1・・・細胞、2・・・チャンバの側壁を構成する上部
プレート、3・・・チャンバの細胞保持部を構成する下
部プレート、4・・・電極。 代理人 # J’l! f’ /J゛J l l 、
M’D; 、’、>、、゛、−1・ 番 ) 2 第 Z 図 (久う ″1 岬
図、第2図は、本発明のチャンバ形状および、融合時の
細胞と電極の位置関係を示す平面図および縦断面、側断
面図、第3図はチャンバを構成する下部プレートの製造
工程を示す縦断面図、第4図は下部プレートに電極を形
成する工程を示す縦断面図である。 1・・・細胞、2・・・チャンバの側壁を構成する上部
プレート、3・・・チャンバの細胞保持部を構成する下
部プレート、4・・・電極。 代理人 # J’l! f’ /J゛J l l 、
M’D; 、’、>、、゛、−1・ 番 ) 2 第 Z 図 (久う ″1 岬
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 1、一対の細胞を流体的に吸引して保持する、細胞の径
より小さなスリットを複数個有し、該スリットの近傍に
、該スリットをはさむ配置で電極を形成した第1のプレ
ートと、該プレート上の該スリットと対応する位置に貫
通する孔を形成した第2のプレートとを接合した構造で
あることを特徴とする細胞融合用チャンバ。 2、第1項記載の細胞融合用チャンバにおいて、該スリ
ット部に、二つの細胞を受容するためのV溝を形成した
ことを特徴とする細胞融合用チャンバ。 3、第2項記載の細胞融合用チャンバにおいて、電極を
含む平面によつて、V溝部に吸引・保持された細胞が切
断されるような寸法形状にV溝が設けられていることを
特徴とする細胞融合用チャンバ。 4、第1項記載の細胞融合用チャンバにおいて、第1お
よび第2のプレートの少なくとも一方がSi又はその酸
化物で形成されていることを特徴とする細胞融合用チャ
ンバ。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP63012527A JP2624737B2 (ja) | 1988-01-25 | 1988-01-25 | 細胞融合用チヤンバ |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP63012527A JP2624737B2 (ja) | 1988-01-25 | 1988-01-25 | 細胞融合用チヤンバ |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPH01191676A true JPH01191676A (ja) | 1989-08-01 |
JP2624737B2 JP2624737B2 (ja) | 1997-06-25 |
Family
ID=11807802
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP63012527A Expired - Lifetime JP2624737B2 (ja) | 1988-01-25 | 1988-01-25 | 細胞融合用チヤンバ |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP2624737B2 (ja) |
Cited By (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
FR2659347A1 (fr) * | 1990-03-12 | 1991-09-13 | Agronomique Inst Nat Rech | Dispositif de culture de cellules assurant leur immobilisation. |
WO1993002178A1 (en) * | 1991-07-22 | 1993-02-04 | Schmukler Robert E | Apparatus and methods for electroporation and electrofusion |
JP2010011824A (ja) * | 2008-07-07 | 2010-01-21 | Tosoh Corp | 細胞融合容器、細胞融合装置及びこれらを用いた細胞融合方法 |
KR101015978B1 (ko) * | 2008-04-18 | 2011-02-25 | 대한민국 | 수정란 융합접시 |
JP2021029203A (ja) * | 2019-08-28 | 2021-03-01 | 株式会社日立製作所 | 細胞製造装置 |
-
1988
- 1988-01-25 JP JP63012527A patent/JP2624737B2/ja not_active Expired - Lifetime
Cited By (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
FR2659347A1 (fr) * | 1990-03-12 | 1991-09-13 | Agronomique Inst Nat Rech | Dispositif de culture de cellules assurant leur immobilisation. |
WO1993002178A1 (en) * | 1991-07-22 | 1993-02-04 | Schmukler Robert E | Apparatus and methods for electroporation and electrofusion |
KR101015978B1 (ko) * | 2008-04-18 | 2011-02-25 | 대한민국 | 수정란 융합접시 |
JP2010011824A (ja) * | 2008-07-07 | 2010-01-21 | Tosoh Corp | 細胞融合容器、細胞融合装置及びこれらを用いた細胞融合方法 |
JP2021029203A (ja) * | 2019-08-28 | 2021-03-01 | 株式会社日立製作所 | 細胞製造装置 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP2624737B2 (ja) | 1997-06-25 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP2662215B2 (ja) | 細胞保持装置 | |
DE69032583T2 (de) | Miniaturdruckwandler hoher Empfindlichkeit mit gespannter Membran | |
DE19826317B4 (de) | Verfahren zum Herstellen eines Halbleitersubstrats, Halbleiterdrucksensor und sein Herstellungsverfahren | |
EP0683048A2 (en) | Lithographically defined ejection units | |
US20070039920A1 (en) | Method of fabricating nanochannels and nanochannels thus fabricated | |
DE102004052952A1 (de) | Ausrichtungsverfahren zur Herstellung eines integrierten Ultraschalltransducerfeldes | |
DE102017204006B3 (de) | MEMS-Schallwandler, MEMS-Mikrophon und Verfahren zum Bereitstellen eines MEMS-Schallwandlers | |
JP4677832B2 (ja) | 細胞融合用微小流路基板及びそれを用いた細胞融合用微小流路構造体並びに細胞融合方法 | |
US11618022B2 (en) | Microfluidic acoustic separation devices | |
CN106104271A (zh) | 具有锥形珠陷获腔的微流体芯片及其制造 | |
US5716533A (en) | Method of fabricating ink jet printheads | |
US7104406B2 (en) | Micro-filter for filtering blood cells | |
JPH01191676A (ja) | 細胞融合用チヤンバ | |
WO1989003541A1 (en) | In-depth electrode light valve array devices and improved fabrication method therefor | |
US6183070B1 (en) | Ink jet recording head and process of manufacturing the ink jet recording head | |
US5942137A (en) | Method and apparatus for laser scribing grooves on hard crystals | |
JPH02100224A (ja) | 静電式リレー | |
JP2619387B2 (ja) | 細胞融合方法 | |
US6897083B2 (en) | Micro-electromechanical actuator and methods of use and fabrication | |
WO2021151884A1 (de) | Mems mit hohem aspektverhältnis | |
US8008063B2 (en) | Individual-cell electroporation using area-focused electric fields | |
JP4830545B2 (ja) | 細胞電気生理センサの製造方法 | |
JPH0292275A (ja) | 細胞対の形成方法およびその装置 | |
US20020079490A1 (en) | Structure, method of manufacturing the structure, and DNA separation device using the structure | |
JP4347433B2 (ja) | マイクロ多極電極の製造方法 |