JPH01137929A - 改良された排卵処置法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野］ 本発明は動物、特に雌性動物の生殖機能の調節法、およ
びこの方法に用いる獣医材用組成物に関する。

（従来の技術） 先行技術においては雌性動物の生殖機能を種々の方法で
調節することが知られている。人工および天然の物質、
たとえばプロスタグランジン、妊馬血清性腺刺激ボルモ
ン、メラトニン類などが動物における生殖調節用として
提示されている。しかしこれらの処置法は雌性動物にお
いて排卵を誘発または増加させるのには限られた価値し
かないことが分かった。

先行技術において知られている一処置法には、ブタ卵胞
刺激ホルモン（Ｐ−ＦＣＨ）を含有する調整品で動物を
処理することが含まれる。このような処置法は有効であ
ることが分かったが、比較的高い用量を用いる必要があ
り、従って費用がかかり、過剰刺激のため卵巣の損傷、
全身性水腫およびゆ着を含む合併症をもたらし、その後
の妊娠に障害を与える可能性があることが認められた。

さらに、その後産生される胚の質に難点が見られ、高い
側合の非生存胚が一般的であることが認められた。

（発明が解決使用とする課題） 従って本発明の目的は先行技術に関連する難点のうち１
もしくは２以上を克服するか、または少なくとも軽減す
ることである。

（課題を解決するだめの手段） 従って本発明の第１の観点によれば、動物にヒツジ卵胞
刺激ホルモン（後記に定めたもの）を投与することを含
み、その際動物がウシ科の動物である場合は該ホルモン
を動物の大きさに応じて約２０〜６０ｕの総量で、１日
のうちに少なくとも３回の実質的に等用量において、少
なくとも３回の規則的間隔で投与し； 動物がヒツジまたはヤギ科の動物である場合は該ホルモ
ンを約２０〜４０ｕの量で１回に投与することよりなる
、雌性動物における排卵期間中に産生される卵子の数を
増加させる方法が提供される。

ヒツジ卵胞刺激ホルモン（ｏＦＳＨ）の量はｏ　ＦＳＨ
の単位力価“′Ｕ゛°として測定される。これは米国国
立衛生研究所（ＮＩＨ）、下垂体ホルモンおよび抗血清
センター技術レポートＮｏ、　１１５６により確立され
た基準である。

処置される動物がヒツジまたはヤギである場合は、ｏＦ
ＳＨを約２０〜３０ｕの量で１回に投与することが好ま
しい。

意外にも、１日に１回量のｏＦＳＨという簡単な形の投
与によってヒツジおよびヤギに卓越した過剰排卵（ｓｕ
ｐｅｒｏｖｕｌａｔｉｏｎ）水準をもたらすことが見出
された。１回量の投与における利用者にとっての簡潔さ
は過大評価ではないので、これは先行技術に比べて実質
的な改良である。これは意外な結果であり、他の形の卵
胞刺激ホルモン、たとえばＰ−ＦＳＨを用いて同様に行
うことはできない。

前記のように、処置すべき動物がウシである場合、ｏ　
ＦＳＨは１日のうちに３回の等用量で、実質的に等しい
間隔で投与することができる。この投与方式は１回投与
法はど好都合ではないが、なお先行技術に比べて実質的
な改良をもたらす。

前記のように、ウシに関する用量は動物の大きさに応じ
て異なるであろう。総１日量は約０．０６〜０．２４ｕ
　／ｋｇ　（生体重）、より好ましくは約０．０９〜０
．１５ｕ／ｋｇ（生体重）である。従って１日に３回、
等用量を投与する場合、各用量は約０．０２〜０．０８
ｕ／ｋｇ（生体重）であろう。

ここで説明および特許請求の範囲において用いる“ヒツ
ジ卵胞刺激ホルモン″′という語は天然または合成のヒ
ツジ卵胞刺激ホルモン、その誘導体またはその生物学的
前駆物質（ｂｉｏｐｒｅｃｕｒｓｏｒ）を意味する。

ここで説明および特許請求の範囲において用いる゛生物
学的前駆物質′”という語は、動物においてヒツジ卵胞
刺激ホルモン様活性を示すいかなる化合物をも意味する
。

性的に未熟な動物から単離された卵胞刺激ホルモンが好
ましい。

雌性動物の処置法は適切ないかなる様式のものであって
もよい。処置が経口、注射、埋込みなどであってもよい
。従ってヒツジ卵胞刺激ホルモンを単位用量刑形で供給
することができる。経口層剤形、注射用側形、または埋
込み用剤形を使用することができる。卵胞刺激ホルモン
は凍結乾燥された形態であってもよい。

卵胞刺激ホルモンは天然または合成による供給源から得
ることができ、これはポリペプチドである卵胞刺激ホル
モンをコードする遺伝子のクローニング、ならびに原核
生物および真核生物におけるその発現が含まれ、あるい
はその産物も使用できる。卵胞刺激ホルモンはヒツジの
下垂体から抽出できる。子羊の下垂体が好ましい。子羊
の下垂体から分離されたヒツジ卵胞刺激ホルモンは以外
にも他の形のものより有効であることが見出された。

意外にもヒツジ卵胞刺激ホルモンは］”ＦＳＨによる処
置を含む他の処置に比べて改良された卵子収率を与える
ことが認められた。約５０％以上の収率増加が得られる
。さらに、ヒツジ卵胞刺激ホルモンにより誘導された卵
子から生じた胚は先行技術による処置に比べて改良され
た質のものであ、す、処置動物の卵巣に対する驚異的に
減少することも認められた。こうして生じた胚は高い生
存率を特色とする。

ヒツジ卵胞刺激ホルモンの使用量は処置される動物種お
よび達成すべき生殖機能に応じて異なるであろう。

用量の選択も卵胞刺激ホルモンの供給源に依存する。前
記の用量範囲は天然源から分離されたＦＳＨに関するも
のであり、これには動物から採取された下垂体から分離
されたものも含まれる。

この種のパ天然゛ＦＳＨには高水準の不純物が含まれる
可能性がある。たとえば合成経路により生成した、より
高純度のＦＳＨは低い用量で投与することができる。

１回量を筋肉内注射によって投与することができる。青
春前期動物は低用量で約１〜５日間にわたって処置する
ことができる。

好ましい形態においては、上記の排卵増加法には動物を
有効量の同期化剤（ｓｙｎｃｈｒｏｎｉｚｉｎｇ　ａｇ
ｅｎｔ）で処置する予備工程が含まれていてもよい。同
期化剤はそれ自体既知の如何なる薬剤から選ばれてもよ
い。この薬剤はプロゲスクゲン、プロスタグランジン、
プロスタグランジン同族体などである。

商品名″クロノゲスト（Ｃｈｒｏｎｏｇｅｓ　ｔ）　”
　（オーストラリア、インターベットから入手できる）
および１１　　レプロマップ（Ｒｅｐｒｏｍａｐ）”（
アップジョンｐｔｙ。

社から入手できる）、膣内スポンジ、で販売されている
同期化剤がヒツジおよびヤギに適していることが認めら
れた。商品名“ニストルメート（Ｅｓ　ｔｒｕｍａ　ｔ
ｅ）”（Ｉ　ＣＩオーストラリア社から入手できる）で
販売されている同期化剤はウシに適していることが認め
られた。

同期化剤などによる予備処置は反すう動物卵胞刺激ホル
モンによる処置の開始前の予め選ばれた間隔を置いて行
うことができる。同期化剤による処置はＦＳＨ処置の約
８〜１５日前に行うことができる。

好ましくは約２５０μｇから約１００　ｍｇＯｊ同期化
剤をヒツジ卵胞刺激ホルモン処置開始の約８〜１５日前
に、青春前期動物に投与する。同期化剤による処置は、
必要に応じ適切な間隔で反復することができる。

好ましくは、注射用同期化剤、たとえば“エストルメー
ビによるウシの処置に際しては、約５００〜１０００μ
ｇの同期化剤を使用する。

好ましくは、膣内スポンジ型の同期化剤、たとえばレプ
ロマップまたはクロノゲストによるヒツジおよびヤギの
処置に際しては、約２５〜７５ｍｇの同期化剤が用いら
れる。

より好ましい形態においては、排卵増加法にはヒツジＦ
ＳＨ処置の途中または後に有効量の黄体形成剤（Ｉｕｔ
ｅｉｎｉｚｉｎｇ　ａｇｅｎｔ）で動物を処置する付加
工程が含まれていてもよい。黄体形成剤はプロスタグラ
ンジンまたはプロスタグランジン同族体であってもよい
。黄体形成剤は前記の同期化剤と同一であっても、異な
ってもよい。

好ましい黄体形成剤はプロスタグランジンまたはプロス
タグランジン同族体であり、反すう動物卵胞刺激ホルモ
ン処置の開始の約１〜３日後に約２５０〜約１０００μ
ｇの量で投与される。

他の好ましい形態においては排卵を誘発または増加させ
る前記方法には、動物に有効量の性腺刺激ホルモンまた
はその誘導体を投与する工程が含まれていてもよい。

若干の試みにおいて２０％程度の若干の動物が、施され
たヒツジＦＣＨ処置に応答しないことが認められた。今
回、比較的少量の性腺刺激ホルモンまたはその誘導体を
用いる付加処置によって、応答しない動物の数が実質的
に減少することが見出された。

妊馬血清性腺刺激ホルモン（ＰＭＳＧ）を使用しうる。

オーストラリア暫定特許出願Ｐ　Ｈ８４８２／８６号明
細書に記載された種類の妊馬血清性腺刺激ホルモンが適
切であやことが認められた（同明細書全体をここに参考
として引用する）。より好ましくはそこに記載された上
記物質から誘導されたモノクローナル抗体が使用される
。ＰＭＳＧはウマ絨毛性性腺刺激ホルモン（ｅＣＧ）と
も呼ばれる。

性腺刺激ホルモンまたはそれらの誘導体は約１００〜１
０００ｉ、ｕ、、好ましくは５００ｉ、ｕ、の量で投与
できる。

性腺刺激ホルモン処置はヒツジＦＳＨ処置の途中または
前のいかなる時点においても行うことができる。好まし
くは性腺刺激ホルモン処置はヒツジＦＳＨ処置の第１日
日に行われる。

本発明の他の観点においては、凍結乾燥された形のヒツ
ジ卵胞刺激ホルモンを有効量含有する獣医科用組成物が
提供される。獣医科用組成物はさらに獣医学的に受容で
きるキャリヤーまたは賦形剤を含有してもよい。キャリ
ヤーまたは賦形剤は卵胞刺激ホルモンまたは誘導体に対
する溶剤であってもよい。水性溶剤を使用することがで
きる。

生理的に受容できる食塩緩衝化溶剤が使用される。

獣医科用組成物は注射用剤形としても提供できる。

本発明のこの観点の好ましい形態においては、獣医科用
組成物はさらに有効量の性腺刺激ホルモンまたは性腺刺
激ホルモン同族体を含有することができる。

好ましい形態においては、本発明は適切な容器内に凍結
乾燥状態のヒツジ卵胞刺激ホルモン供給材料を含む部品
からなるキットを提供する。

部品のキットはさらに適切な容器内の同期化剤の供給材
料を含むことができる。ヒツジ卵胞刺激ホルモン、性腺
刺激ホルモン、および存在する場合には同期化剤は注射
用剤形で供給されてもよい。

本発明を以下の例に基づいてより詳細に述べる。

ただし以下の記述は説明のためのものにすぎず、以上の
本発明の一般性をいかなる形でも限定するものと解すべ
きではない。

例　　１ ヒツジ卵胞刺激ホルモン（ｏＦＳＨ）は下記の方法で調
製された。

凍結した金子ヒツジ下垂体を摩砕し、蒸留水（ｐＨ’５
．５）で−夜抽出した。得られたＦＳＨに富む抽出液を
１．８０Ｍ硫酸アンモニウム（ｐＨ４，０）で連続的に
分画して不活性蛋白質を除去し、ＦＳＨを３．０Ｍ硫酸
アンモニウム（ｐＨ４，０）で沈殿させた。

ＦＳＨ沈殿をＮａＯＨで中和し、蒸留水に対して透析し
、凍結乾燥した。この工程はすべて５°Ｃの低温室内で
行われた。

例２ ヒツジ卵胞刺激ホルモン（ｏＦＳＨ）を用いてヒツジに
対し現場試験を行った。ｏＦＳＨの用量は下垂体調製材
料のｍｇでまず測定された。ｏＦＳＨのｍｇが明記され
ている実験すべてにおいて、１ｍｇのｏＦＳＨはＮＩＨ
基準に基づき２単位のｏＦＳＨに相当する。ヒツジを下
記の処置方式により処置した。

ＦＳＨについてのヒ・ンジの処置　１ ４日間（午前、午後）にわたって４：３：２：１の比率
で減少する量の８回の注射。

たとえば ８ｍをｐ　のとお　＝１１日目−午前１．６−午後１．
６ ２日目　−午前１．２ 一午後１．２ ３日目　−午前０．８ 一午後０．８ ４日目　−午前０．４ 一午後０．４ 処１計貞 １白目−レプロマツプスポンジ挿入（膣内スポンジ、メ
トロキシプロゲステロンアセ テート６０ｍｇ） １０日日日ＦＳＨ注射１日目、午前／午後１１日目−Ｆ
ＳＨ注射２日目、午前／午後１２日目−スポンジ取出し
、ＦＳＨ注射注射３日缶前／午後 １３日日日ＦＳＨ注射４日目、午前／午後３回の野外試
験の結果、および市販のＰ−ＦＳＨ（メルボルン、エセ
ックス／へりオツドから入手できる）を用いて処置され
た雌ヒツジとの比較を第１．２および３表に示す。

総用量　処置　　　処置後の　排卵量＊ｍ　ｌｌヒツジ
　　　　　　・・ｊ−〜ヒツジ　　８　　　８　　　　
７　　４．２５１−１９ＦＳ１１　　　４　　　７　　
　　７　　１．６　１−３２　　　８　　　　６　　１
．２１−２市販品　　８　　　７　　　　７　　２．４
ｌ−５Ｐ−ＦＳＨ４６５１，２１−２ ＊　排卵中のもの 男ユ」Ｌ□表 総用量　処置　　　処置後　　排卵量＊ｍ　　ヒツジ　
のＶｌ ヒツジ　　８　　　８　　　　６　　５．８３１−１４
ＦＳＨ４９９１，３３１−２ ２９９１，６７１−３ ０８８１，２５１−２ Ｐ−ＦＳＨ８８７３，７１１−１１ ４８８１，３８１−２ ０８８１，２５１−２ ＊　排卵中のもの 用量　　処置　　処置後　　　排卵量＊今ｌｌｌ１ｌ　
　　のユ卵−］ｆ［」１皿ヒツジ　１２＋　　　１２　
　１１　　　１０．２　２−２３ＦＳＩ＋ 本　排卵中のもの ＋　この野外試験においてはＦＳＨをスポンジ挿入後１
０日日から開始して３日間、午前、午後に投与した。

ｏＦｓＨ注射（ｍｇ）は３，３，２，２．１．１であっ
た。

Ｐ−ＦＳＨ注射量（ｍｇ）は４，４，３，３，２゜２で
あった。

例３ ヒツジにおいてｏＦＳＨを用いると、Ｐ−ＦＳＨと比べ
て優れた結果が得られた。しかし、２０％までのヒツジ
がｏ　Ｆ　Ｓ　ＨまたはＰ−ＦＳＨを用いた場合排卵し
なかった。この問題はＦ　Ｓ　Ｈ処置と合わせて少量の
ＰＭＳＧを用いることにより解決され、１００％に及ぶ
ヒツジが排卵した。ＰＭＳＧは好ましくはオーストラリ
ア暫定特許出願ＰＨ８４８２／　８６号明細書に記載の
もの、またはこれより若干劣るが市販品フォリゴン（Ｆ
ｏｌ　Ｉｉｇｏｎ）　（メルボルン、インターベット）
であった。ｏＦＳＨはＰＭＳＧと併用した場合、Ｐ−Ｆ
ＳＨよりはるかに優れていることが証明された。

ｏＦＳＨおよびＰＭＳＧを用いてヒツジにつき野外試験
を行った。

以下の処置方式でヒツジを処置した。

ｏＦＳＨにつし）てのヒ゛ンジの処置Ｌ−３日間（午前
、午後）にわたって３：２：１の比率で減少する量の注
射。

１２ｍｇを以下のとおり：１１日目−午前　３−　午後
　３ ２日目　−午前　２ −　午後　２ ３日目　−午前　１ −　午後　１ 処１計１− １日日−クロノゲストスポンジ挿入（３０ｍｇ）（膣内
スポンジ、フルゲストンアセテート３０ｍｇ）１０日日
日５００ｉ、ｕ、のＰＭＳＧ、、ＦＳＨ注射注射１日缶
前／午後 １１日日日ＦＳＨ注射２日目、午前／午後１２日目−ス
ポンジ取出し、ＦＳＨ注射３日目日日前／午後 １３日回目−視鏡人工受精ＰＭ １９／２０日目−胚のフラッシング 総用量　　処置　　　処置後　　排卵量＊ヒツジＦＳＨ
１２１６１６１５，１２−３２５００ｉ、ｕ、、ＰＭＳ
Ｇ Ｐ−ＦＳＨ１２２５２０９，０１−２５５００ｉ、ｕ、
ＰＭＳＧ ヒツジＦＳＨ１２１１１１１３，６６−１９５００ｉ、
ｕ、ＰＭＳＧ 旦Ω玉ザウスダウン 雛尖ゼと’；−−−−− ヒツジＦＳＩ＋　　１２　１１　　　１１　　１０．２
　４−２１５００ｉ、ｕ、ＰＭＳＧ ＊　排卵中のもの 云”　４についての戸− １、新鮮精液を用いた妊娠率：ｏＦＳＨを用いた場合９
５％。

２、ｏＦＳＨを用いた例すべてにおいて卵巣の解剖所見
は変化がなかった。これに対しＰ−ＦＳＨを用いた場合
、卵巣は変化し、解剖所見は正常でなかった。

３、Ｐ−ＦＳＨを用いた場合、少量のＰＭＳＧを用いて
もなお２０％の雌羊が排卵しなかった。

ｏＦＳＨを用いた場合、メリノ種または英国種に関係な
く１００％が排卵した。

４、メリノ種については５０％以上の卵巣をｏＳＦＩ］
により処置した。

５、異なる品種は異なる反応を示す。Ｐ　−Ｆ　Ｓ　Ｈ
を用いた場合、特に英国種において反応がきわめて乏し
いことが認められた。

第−」し−表 総用量　処置　処置後　　　排卵量＊ ｍ　　　　　　　の　　　　　　゛酷劇−」１創し□ヒ
ツジＦＳＨ１２１０１０１３，６６−１９５００ｉ、ｕ
。

ＰＭＳＧ　　　　１５＋　　　８　　　８　　　１５．
０　５−２３６０　ｋザウスダウンルヒッジ ヒツジＦＳＨ１２１１１１１０，２４−２１５００ｉ、
ｕ。

ＰＭＳＧ　　　　１５　　１２　　１２　　　１１．４
　６−２０＊　排卵中のもの ＋　　　ｏＦＳＨの注射量は３．　３．２．５，２．５
，２．　２□−ヱあ」犬−□□−−□−−□−−−□−
−□−試験５についての所見 １、ｏＦＳＨの用量を増加するとメリノ種および英国種
の双方のヒツジの排卵量がわずかに改良された。

２、卵巣の解剖所見はなお良好であった。

例４ ｏＦＳＨを用いてヤギにつき野外試験を行った。

下記の処置方式によりヤギを処置した。

ｏＦＳＨについてのヤギ処置　？− ３日間（午前／午後）にわたって３：２：１の比率で減
少する量の注射。

１２ｍｇを以下のとおり：１１日目−午前　３−　午後
　３ ２日目　−午前　２ −　午後　２ ３日目　−午前　１ −　午後　１ 処１計再 １日日−クロノゲストスポンジ挿入（４０ｍｇ　）１６
日日日６ａ群ｎ　ＰＭＳＧなし ６ｂ群：　４００　ｉ、ｕ、　Ｐ　Ｍ　Ｓ　ＧＦＳＨ注
射１注射１午目／午後 １７日日日ＦＳＨ注射２日目、午前／午後１８日目−ス
ポンジ取出し、ＦＳＨ注躬３日目日日前／午後 ２０日回目−視鏡による人工受精または自然交配２６日
日日胚のフラッシング 総用量　処置　　　処置後　排卵量＊ ヒツジＦＳＨ１２２１１４１２，７１−３３食塩 （対照）　　　０　　１Ｂ１４　　２．０．１−３ヒツ
ジＦＳＨ１２９９１０，２４−２０４００４、ｕ、ＰＭ
ＳＧ 本排卵中のもの 同様な体重および年令のヤギにおいて１５ｍｇのＰ−Ｆ
ＳＨおよび４００ｉ、ｕ、のＰＭＳＧを用いた場合、他
の研究者によって３〜８の排卵が得られたにすぎない。

試Ｍ６ａおよび６ｂについての戸 １、ＰＭＳＧｌｏＦＳＨの使用によりヤギにつき１００
％の排卵率が得られた。

２、卵巣の解剖所見は変化なし−Ｐ　−Ｆ　Ｓ　Ｈを用
いた場合は著しい問題がある。

３、新鮮な精液をｏＦＳＨと共に用いた場合、９５％の
受精。

例５ ｏＦＳＨを用いて野外試験を行った。ウシを４日間（午
前、午後）にわたって４：３：２：１の比率で減少する
量の８回のｏＦＳＨ注射により処置した。

処１社再 ５００μｇのプロスタグランジン同族体（ニストルメー
ト、ＩＣＩ）を１１日間隔で２回、筋肉内注射すること
により、発情周期を同期化した。後続周期の８〜１０日
目に日日間のＦ　Ｓ　Ｈ処置を行い（１日２回の皮下注
射、０９００および１６００時）、全用量のＦＳＨを４
：３：２：１の減少する比率で４日間にわたって投与し
た。ＦＳＨ注射３日目日日に再びプロスタグランジン同
族体を注射した。

発情の４〜６日後にハルピッレート麻酔下の腹腔鏡検査
により、または胚の非外科的フラッシングにより、排卵
量を評価した。

３才の未経産ヘレフォード　ウシにつきｏＦＳＨおよび
Ｐ　−Ｆ　Ｓ　Ｈにより過剰排卵を誘発して行ね起失厨
方メ 総用量　処置　処置後　　　排卵量 ｍ　　　ウシ　の　　−一一乎Ｊ−範訓−ヒツジＦＳＩ
Ｉ　　　Ｏ６６１，０１−１１０６６２，３］−４ ３０７７１３，７１Ｏ−１９ Ｐ−ＦＳＩ（０６６１，０１４ １０６６１，２１−２ １）　３０ｍｇのｏＦＳＨに対し卓越した過剰排卵。

２）ｏＦＳＨを用いた場合、卵巣過剰刺激を伴うことな
くきわめて均一な排卵反応が得られた。

しかしＰ−Ｆ　Ｓ　Ｈを用いた場合、両者とも問題があ
った。

青春前記動物における本発明による排卵誘発法を説明す
るために野外試験を行った。

処ｌ旦上りニル ａ）１１日間隔で２回のニストルメール注射。

ｂ）発情の８日後にｏＦＳＨ注射を開始（１日２回、４
日間） ｃ）ｏＦＳＨ処置、３日目の朝にニストルメート再投与
。

ｄ）発情の７日後に腹腔鏡により排卵を検査、または非
外科的フラッシングにより受精胚を検査。

拭肢主 １０か月令の青春前期雌ウシに対しｏＦＳＨ力価に総用
量　処置　処置後　　　排卵量 ｏＦＳＨ８ｍｇ　　　８　　　８　　　　６．９　１−
１４若いウシについての同様な結果は他の研究者により
Ｐ−ＦＳＨをもちいて達成されていない。

例６ 仕即ｌ■ 徐放性組成物を用いて試験を行った。

凍結卵から得たホスファチジルコリン（Ｌ−一レシチン
）（水中１０％Ｗ　／　Ｖ　）　、およびコレステロー
ル（１％ｗ　／　ｖ　）を試験管に入れ、均質な混合物
が達成されるまで混合物を音波処理した（１時間４０分
）。次いでこの混合物のアリコートを、粗製ＦＳＨおよ
び緩衝塩（リン酸塩緩衝化食塩液）の凍結調製物に投与
前に配合した。

徐放製組成物２瀬を凍結乾燥ｏ　Ｆ　Ｓ　Ｈ−緩衝塩混
合物に使用直前に添加した。

例７ ヒツジおよびヤギについて、例６に記載した徐放性組成
物を含めて、ｏＦＳＨを含有する獣医材用組成物を用い
て野外試験を行った。ヒツジおよびヤギは以下の処置方
式により処置された。

ヒツジ 処置プロトコール １日日−クロノゲストスポンジ挿入しく３０ｍｇ）　（
膣内スポンジ、フルゲストンアセテート３０ｍｇ） ２日日−５００ｉ、ｕ、　Ｐ　Ｍ　Ｓ　Ｇ、、ｏ　Ｆ　
Ｓ　Ｈン主射１日日１２日目〜スポンジ取出し １３日日日新鮮な精液による内視鏡人工受精ＰＭ１９／
２０日目−胚のフラッシング ｏ　Ｆ　Ｓ　Ｈ合計１．２　ｍｇを用いて行われた処置
ののち、下記の各処置を行った。

、、Ｌ］：（ヒツジ） スポンジ取出しの４８時間前に行ったｏＦＳＨの筋肉内
注射１回 □乙可ユＣツｙ長り□ スポンジ取出しの４８時間前に行った“ｏ　ＦＳＨおよ
び徐放性ヒヒクル゛の筋肉内注射１回主皿（且又グＹ スポンジ取出しの４８時間前に開始して、３日間（午前
／午後）にわたり３：２：１の比率で減少する量の注射
。

１２ｍｇ（１日日−３，３；２日日−２，２；３日日−
１，１）。

光モ 処置１旦上且二五 １日日−クロノゲストスポンジ挿入（４０■）（膣内ス
ポンジ、フルゲストンアセテート４０■） ２日日−４００ｉ、ｕ、　Ｐ　Ｍ　Ｓ　Ｇ、ｏＦＳＨ注
射１注射１日日１８スポンジ取出し ２０日日日内視鏡人工受精または自然交配２６日日日胚
のフラッシング ■」上玉Ｌ スポンジ挿入の４８時間前に行ったｏＦＳＨの筋肉内注
射１回 新来 上皿−見ス之ｌ■、カムバック址竺ズク双体生体重−５
０ｋｇ 採取された受精胚の和−月、５（範囲５−１７）」−丸
又乏■■工左婆万ｌ久互ざ又り酸体生体重−５０ｋｇ 採取された受精胚の和−１０，７（範囲６−１６）」−
ヒツジ８豆、カムバ、・りａヒツジ゛唇生体重−５０ｋ
ｇ 採取された受精胚の和−１３，６（範囲６−１９）↓群
−ヤギ８■、アンゴラ１−ｔ−臼え化生体重−３５ｋｇ 採取された受精胚の和−１０，１（範囲８−１６）これ
らの試験における結果は他の試験の場合よりわずかに低
かった。これは、これらの試験がヒツジおよびヤギにお
いて排卵を誘発するのが通常は困難な真冬に行われたこ
とによると思われる。

他の試験は自然受精時期に行われた。

例８ ｏＦＳＨを含む獣医材用組成物を用いてウシにつき野外
試験を行った。ウシは以下の処置方式により処理された
。

（ａ）　１１日間隔で２回のＰＧ（ニストルメート）注
射。

（ｂ）最後のニストルメート注射の１０日後にＦ　Ｓ　
Ｈ注射を開始。

”　ｏ　Ｆ　Ｓ　Ｈ−合計８＋ｎｇを用いて行われた処
置ののち下記の処置を行った。

上皿 ′“１日目“（２回目のニストルメート注射の１０日後
に当たる）に開始して４日間にわたり４：３：２：１（
午前／午後）の比率で低下する８回の注射。

」 “２日日′′の午前９時、午後１時および午後５時（す
なわち８時間にわたる）にｏＦＳＨ２，７■の等量の筋
肉内注射３回（合計８ｍｇ）。

主群 ２日目の午前９時にｏＦＳＨ８ｍｇの筋肉内注射１回。

」 対照群、１．２．３．４日目の午前／午後に食塩液を投
与。

すべてのウシに“３日目の午前９時“にＰＥ（ニストル
メート２ｍＬ筋肉内）の３回目の注射を行った。

航来 土庄エ ウシ６頭 生体重−２５８ｋｇ 排卵率の和−１４，３±２．４（範囲８−２４）ウシ５
頭 生体重−２７８ｋｇ 排卵率の和−１１，０±２．１（範囲６−１５）立罫士 ウシ６頭 生体重−２８９ｋｇ 排卵率の和−３，８±１．８（範囲１−１２）Ｌ罫ユ ウシ６頭 生体重−２８２ｋｇ 排卵率の和−１，００±００（範囲１−１）ｏＦＳＨで
処置した雌ウシのいずれにも過剰刺激の徴候は見られな
かった。

例９ ヒツジにおいて、生理食塩液に溶解した。ＦＳＨ２５ｕ
の筋肉内注射１回という簡単な標準的手法によりさらに
試験を行った。

処１プ旦上且二ｙ １日日−クロノゲストスポンジ挿入（３０ｍｇ）（膣内
スポンジ、フルゲストンアセテート３０ｍｇ）２日日−
５００ｉ、ｕ、　　Ｐ　Ｍ　Ｓ　Ｇ　、および２５ｕの
ｏＦＳＨの筋肉内１回注射。

１２日回目−ポンジ取出し １３日回目−鮮精液もしくは凍結精液による内視鏡人工
受精、および／または自然文配 置９／２０日目−胚のフラッシング Ｌ丈込■旦又ソ 場　　所：ビクトリア州ハミルトン 年　令＝３オ 一般状態：良好な状態、体重５０ｋｇ 試験方試験部置した雌ヒツジは２０頭の未処置ヒツジの
群のなかで放牧され、食草量 （ｐａｓｔｕｒｅ）が向上した。

第□１更−表 ０ＦＳＩ（０ＦＳＨ０ＦＳＨ ｔ　ヒツジ　ＩＤ　　　ハツチ１９１１　ヒツジ　ＩＤ
　　バッチ１９　　　　ヒツジ　ＩＤ　　バッチ１９平
均　　　　　　　１７．５ 場　　所：ビクトリア州ハミルトン 年　令：４オ 一般状態二重い状態、体重６０ｋｇ 試験方式：処置した雌ヒツジは１０頭の未処置ヒツジの
群の中で放牧され、食草量が向上 した。

第□」Ｌ−表 ＯＦ　Ｓ　ＨＯＦ　Ｓ　１１　　　　　　　　　　０　
Ｆ　Ｓ　ＨＪ　ヒツジ　ＩＤ　　　ハツチ１９　　ＩＩ
　　ヒツジ　１０　　バッチ１９　　　　ヒツジ　ＩＤ
　　へ′ツチ１９平均　　　　　　　１３．８ 場　　所：ビクトリア州ハミル１ヘン 年　　　令ニ 一般状態：良好な状態　体重５０ｋｇ 試験方試験部置した雌ヒツジは４０頭の未処置ヒツジの
群の中で放牧され、食草量が向上 した。

男□□じ一一表 ０ＦＳＨ０ＦＳＨｏＦＳＨ １ｌｌヒツジ　１０　　　バ・２チ１２　　Ｉｔ　　ヒ
ツジ　ＩＤ　　ハツチ１２　　　　ヒツジ　ＩＤ　　ハ
ツチ１２平均　　　　　　１５．０ 場　　所：ビクトリア州ハミルトン 年　令：２〜３オ 一般状態：良好な状態、体重４５〜５０ｋｇ試験方式：
処置した雌ヒツジは１５頭の未処置ヒツジの群の中で放
牧され、食草量が向上 した。

男−１釘−表 ０ＦＳＨ０ＦＳＨＯＦＳ 鋒　ヒツジ　１０　　　バッチ２１　　　ヒツジ　ＩＤ
　ハツチ２１　　　　ヒツジ　ＩＤ　　ハツチ２１Ｍ０
０２　　　　　　　１８　　　　ＭＯ０３１９ＭＯ０４
１９Ｍ００５　　　　　　　１８　　　　ＭＯ０６１７
ＭＯ０７１５Ｍ０Ｏ８１９１’１００９　　　　　　１
３　　　　　ＭＯＩＯ１３Ｍ０Ｌ１　　　　　　　１１
　　　　ＭＯ１２２０ＭＯ１３１５Ｍ０１４　　　　　
　　　９　　　　ＭＯ１５１１ＭＯ１６１３±均　　　
　　　１５．３ ＳＤ　　　　　　　　　　　　　　　　　３．５カムハ
・・りｄヒツジ 場　　所：ビクトリア州ハミルトン 年　令＝３オ 一般状態：良好な状態、体重５０ｋｇ 試験方式：ｏＦＳＨ処置した雌ヒツジは３０頭の未処置
ヒツジの群の中で放牧され、食草 量が向上した。

第□■−表 ０ＦＳＨ０ＰＳＨ０ＰＳＨ １ヒツジ　ＩＤ　　バッジ１９　　　ＩＩ　　ヒツジ　
１０　　バラン１９　　　ＩＩ　　ヒツジ　ＩＤ　　バ
ッジ１９平均　　　　　　１３．７ 場　　所：ビクトリア州ハミルトン 年　　令ニ 一般状態二重い状態、体重４５ｋｇ 試験方弐：処置した雌ヒツジは１０頭の未処置ヒツジの
群の中で放牧され、食草量の向上 を示した。雌ヒツジはすべて４か月前 に処置された。

第一■−表 ＯＦ　Ｓ　ＨＯＦ　Ｓ　ＨＯＦ　Ｓ　Ｈル　ヒツジ　Ｉ
Ｄ　　バッチ１９　　　ＩＩ　　ヒツジ　ＩＤ　　　ハ
ツチ１９　　　ヒツジ　ＩＤ　　　バッジ１９平均　　
　　　　　１３．６ ＳＤ　　　　　　　　　　　　　　　　　６．フルし良
（）Ｌ：１良（」りΣ４ゑろ 場　　所：ビクトリア州ハミルトン 年　　　令ニ 一般状態二重い状態、体重６０ｋｇ 試験方試験部置した雌ヒツジは１０頭のヒツジの群の中
で放牧され、食草景が向上した。

第−刊一表 ０ＦＳＩＩ　　　　　　　　　　０ＦＳＨ平均　　　　
　　　１０．０ ＳＤ　　　　　　　　　　　　Ｉ、４ 例１０ ヤギにおいて、生理食塩液に熔解した。ＦｓＨ２５ｕの
筋肉内注射１回という簡単な標準的手法によりさらに試
験を行った。

処置プロトコール １日日−クロノゲストスポンジ挿入（４０ｍｇ）（膣内
スポンジ、フルゲストンアセテ−）４０ｍｇ） １６８目−４００ｉ、ｕ、　、Ｐ　Ｍ　Ｓ　Ｇ、および
ｏＦＳＨ２５ｕ、の筋肉内注射１回。

１８日回目−ポンジ取出し ２０日日日新鮮な精液もしくは凍結精液の内視鏡人工受
精、および／または自然交配 ２６日日日胚のブラッシング アンゴーヤギ 場　　所：ビクＩ・リア州ハミルトン 年　令：４〜７オ 一般状態：かなり良好な状態、体重４０ｋｇ試験方式：
処置した雌ヤギを１５０頭の未処置雌ヤギの群の中で放
牧し、食草量が向上し た。

第一１Ｌ−表 ０ＦＳＨ０ＦＳＨ０ＦＳＨ ヤキＩＤ　　　バッチ２１　　　ヤギＩＤ　　バッチ２
１　　）　ヤギＩＤ　　バッチ２１００６　　　　　２
０　　　　００８　　　　’１６　　　　００９　　　
　　９平均　　　　　１０．２ 場　　所：ビクトリア州ハミルトン／ゲーロング年　令
：３〜８オ 一般状態：かなり良好ないし良好な状態、体重３５〜５
０ｋｇ 試験方式：処置した雌ヤギは２００頭の未処置雌ヤギの
群の中で放牧され、食草量が向上 した。少数群の雌ヤギが過剰排卵し、 １年間にわたって食草状態が変化した。

個々の結果は記録しなかった。

第上主表 群　　　雌ヤギ　　各群がらの　　　胚／雌ヤギＮｏ、
　　　　　　　　　　二〇金　　　　　　・・エ　−１
　　　　４　　　　　５１　　　　　　１２．８２　　
　　５　　　　　３６　　　　　　７．２３　　　　１
０　　　　１０４　　　　　　１０．４４　　　　１０
　　　　１６２　　　　　　１６．２５　　　　１０　
　　　　９９　　　　　　９．９６　　　　６　　　　
　６８　　　　　　１Ｌ、３７　　　．５　　　　　９
１　　　　　　１８．２８　　　　７　　　　　６６　
　　　　　９．４９　　　　７　　　　　７８　　　　
　　１１．１１０　　　　６　　　　　９６　　　　　
　１６、ＯＩＩ　　　　　６　　　　　７９　　　　　
　１３．１総数　　　７６　　　　９３０ 平均　　　　　　　　　１２．２　　　　　１２．３Ｓ
Ｄ　　　　　　　　　　　　　　　　　　３．３卯−」
災−表 ウシにおいて推ヌま奥Ａ層】坊いけ危賢…倶旧用等量ず
つ３回、８　５０　４５　４０　３５　３０　２５　２
０時間にわたって午 前９時、午後１時 および午後５時に 膜力。

例１１ ｌ２ ウシにおいて、生理食塩液に溶解した。ＦＳＨ等量を１
日間にわたって午前９時、午後１時および午後５時の３
回投与という簡単な標準的手法によりさらに試験を行っ
た。ｏＦＳＨの用量はウシの生体重に従って調整された
（第１９表参照）売１し４匹」二い１火 （ａ）　１０〜１２日の間隔を置いてプロスタグランジ
ン、ニストルメートの注射２回。

（ｂ）最後のニストルメート注射の８〜１０日後にｏＦ
ＳＨの注射を開始。ウシの生体重に従った総用量を午前
９時、午後１時および午後５時に３等分して深部筋肉内
注射により注射。

（ｃ）ｏＦＳＨ注射の３日後、午前９時にエストルメー
１へ１回を投与。

（ｄ）雌ウシをｏＦＳＨ処置の５〜６日後に人工受精お
よび／または自然交配。

（ｅ）交配の８日後に、処置した雌ウシを群から離し、
胚をフラッシング剤によりそれらの子宮からフラッジし
た。

プロスタグランジンＦ２、プロスタグランジンＦ２同族
体、または満足できることが認められた他のいずれかの
手段により、発情サイクルの同期化を達成すべきである
。

ｏＦＳＨによるウシの処置は発情の８〜１０日後に開始
すべきである。

ジャージー−ヘレフォード六配　ウシ 場　　所：ニューサウスウェールズ（ＮＳＷ）州アーミ
ンデール 年　令：３オ 一般状態：体重２５０　ｋｇ 試験方式：処置した雌ウシは１５頭の未処置雌ウシの群
の中で放牧され、食草量が向上し た。

ｏＦＳＨの用量は雌つシ当たり２５ｕであった。

第−毅一表 ｏＦＳＨｏＦＳＨｏＦＳＨ ｌ　ウシＩＤ　　ハツチ９　　ｌｌ　ウシＩＤ　　ハツ
チ９　　　　ウシＩＤ　　　ハツチ９平均　　　　　　
１２．８ ヘレフォード　ウシ 場　　所：ＮＳＷ州アーミンデール 年　令：２オ 一般状態：良好、体重２５０　ｋｇ 試験方式：処置した雌ウシは３０頭の未処置雌ウシの群
の中で放牧され、食草量が向上し た。

ｏＦＳＨの用量は雌つシ当たり２５ｕであった。

第□■−表 ｏＦＳＨｏＦＳＨｏＦＳＨ ウシＩＤ　　　　ハツチ１９　　　　ウシＩＤ　　　ハ
ツチ１９　　　ウシＩＤ　　　ハツチ１９平均　　　　
　　　１１．９ 公」≦７ｆ二」」１χ乞 場　　所：ＮＳＷ州アーミンデール 年　令＝２オ 一般状態：きわめて良好、体重３５０　ｋｇ試験方式：
処置した雌ウシは２０頭の未処置雌ウシの群の申出放牧
され、食草量が向上し た。

第一フ影−表 ｏＦＳ）Ｉ　　　　　　ｏＦＳＨｏＦｓＨ声１文之工す
□へヱナｌウシ１０　　　ハツチ２４　　　　ＩＩ　　
ウシＩＤ　　　　ハツチ２４平均　　　　　　１１．３ ＳＤ　　　　　　　　　　　　　３．６タ！ｊ受ワ≧シ
リ【グ之 場　　所：ビクトリア州ハミルトン 年　令＝４〜５オ 一般状態：体重５００〜６００　ｋｇ 試験方式：処置した雌ウシは５０頭の未処置雌ウシの群
の中で放牧され、食草量が向上し た。

ｏ　ＦＳＨの用量は雌つシ当たり５０ｕであった。

■＝符□表 ｏ　Ｆ　Ｓ　Ｈｏ　Ｆ　Ｓ　Ｉｆ　　　　　　ｏ　Ｆ　
Ｓ　ＩｆタクシＤ　　　へフチ　　　　ｎ　ウシＩＤ　
　　　バッチ　　ｎ　ウシＩＤ　　ハツチ：３ＬＬ　　
　’１６　　　Ｅｌｅａｎｏｒ　　２１　　Ｂｌａｚｅ
ｙ　　１２平均　　　１３．３ シンメン　−ル　ウシ 場　　所：ビクトリア州ハミルトン 年　令＝４〜５オ 一般状態：きわめて肥満、体重５５０〜６５０　ｋｇ試
験方式：処置した雌ウシは群として放牧され、食草量が
向上した。

ｏＦＳＨの用量は雌つシ当たり５０ｕであった。

第一ムー裁− ｏＦｓＨｏＦＳＨｏＦＳ ｕ２ｆｌ■−一■’ｙ９ニー□−ウシＩＤ　　　　）Ｋ
ツチ　　　　貞　クシＩＤ　　　　ハツチ００４　　　
８　　　００５　　　１四□−□−−−−−−−−□平
均　　　９．２ 鉗−□−□ＬＬ−−□−−−−−−−−−−−−最後に
、ここに記載した本発明の精神から逸脱することなく他
の各種の修正および／または変更をなしうることを理解
すべきである。

（外４名）

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １　動物にヒツジ卵胞刺激ホルモンを投与することを含
   み、その際動物がウシ科の動物である場合は該ホルモン
   を動物の大きさに応じて約２０〜６０ｕの総量で、１日
   のうちに少なくとも３回の実質的に等用量において、少
   なくとも３回の規則的間隔で投与し； 動物がヒツジまたはヤギ科の動物である場合は該ホルモ
   ンを約２０〜４０ｕの量で１回に投与することよりなる
   、雌性動物における排卵期間中に産生される卵子の数を
   増加させる方法。 ２　ヒツジ卵胞刺激ホルモンが、ヒツジ卵胞刺激ホルモ
   ンをコードする遺伝子またその断面をクローニングし、
   そして原核生物または真核生物において発現させること
   により製造された合成卵胞刺激ホルモン、それらの誘導
   体、また生物学的前駆物質をも含む、請求項第１項に記
   載の方法。 ３　動物がヒツジまたはヤギであり、ヒツジ卵胞刺激ホ
   ルモンが約２０〜３０ｕの量で１回量として投与される
   、請求項第２項に記載の方法。 ４　動物がウシであり、ヒツジ卵胞刺激ホルモンが１日
   のうちに３回、実質的に等量で、合計約０．０６〜０．
   ２４ｕ／ｋｇ（生体重）投与される、請求項第２項に記
   載の方法。 ５　総用量が１日に約０．０９〜０．１５ｕ／ｋｇ（生
   体重）である、請求項第４項に記載の方法。 ６　さらに、反すう動物卵胞刺激ホルモン処置の前に、
   動物に有効量の同期化剤をあらかじめ選ばれた間隔を置
   いて投与する予備工程を含む、請求項第１項に記載の方
   法。 ７　約２５０μｇから約１００ｍｇの同期化剤が、動物
   に反すう動物卵胞刺激ホルモン処置開始の約８〜１５日
   前に投与される、請求項第６項に記載の方法。 ８　さらに、反すう動物卵胞刺激ホルモン処置の前、途
   中または後に、動物に有効量の黄体形成剤を投与する工
   程を含む、請求項第１項に記載の９　黄体形成剤がプロ
   スタグランジンまたはプロスタグランジン同族体であり
   、反すう動物卵胞刺激ホルモン処置開始の約１〜３日後
   に約２５０〜約１０００μｇの量で投与される、請求項
   第２項に記載の方法。 １０　さらに、反すう動物卵胞刺激ホルモン処置の途中
   または前に、動物に有効量の性腺刺激ホルモンまたはそ
   れらの誘導体を投与する工程を含む、請求項第９項に記
   載の方法。 １１　性腺刺激ホルモンが妊馬血清性腺刺激ホルモンで
   あり、反すう動物卵胞刺激ホルモン処置の１日目に約１
   ００〜１０００ｉ．ｕ．の性腺刺激ホルモンが動物に投
   与される、請求項第１０項に記載の方法。 １２　有効量のヒツジ卵胞刺激ホルモンおよび有効量の
   獣医学的に受容できる、それらに対するキャリヤーまた
   は賦形剤を含む、請求項第１項に記載の方法に用いられ
   る獣医科用組成物。 １３　獣医科用組成物が注射用剤形であり、凍結乾燥状
   態の有効量のヒツジ卵胞刺激ホルモンおよび項第１２項
   に記載の獣医科用組成物。 １４　適切な容器内の凍結乾燥状態の卵胞刺激ホルモン
   供給源；および適切な容器内のそれに対する水性溶剤供
   給源を含む部品からなる、請求項第１項に記載の方法に
   用いるキット。 １５　さらに、適切な容器内の同期化剤供給源を含む、
   請求項第１４項に記載の部品からなるキット。 １６　さらに、適切な容器内の黄体形成剤供給源を含む
   、請求項第１５項に記載の部品からなるキット。 １７　さらに、適切な容器内の性腺刺激ホルモンまたは
   それらの誘導体の供給源を含む、請求項第１６項に記載
   の部品からなるキット。