JPH01123151A - 免疫分析方法 - Google Patents
免疫分析方法Info
- Publication number
- JPH01123151A JPH01123151A JP28157887A JP28157887A JPH01123151A JP H01123151 A JPH01123151 A JP H01123151A JP 28157887 A JP28157887 A JP 28157887A JP 28157887 A JP28157887 A JP 28157887A JP H01123151 A JPH01123151 A JP H01123151A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- guinea pig
- substance
- igg
- complement
- serum
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 title claims description 17
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims abstract description 38
- 241000700199 Cavia porcellus Species 0.000 claims abstract description 29
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 claims abstract description 26
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 24
- 239000003094 microcapsule Substances 0.000 claims abstract description 19
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims abstract description 17
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 12
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 7
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 7
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims abstract description 5
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 claims abstract description 5
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims abstract description 4
- 210000003705 ribosome Anatomy 0.000 claims description 11
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 6
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 6
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 6
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 4
- 239000012491 analyte Substances 0.000 claims 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims 1
- 229940027941 immunoglobulin g Drugs 0.000 abstract description 12
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 abstract description 3
- 230000004913 activation Effects 0.000 abstract 1
- 102000013529 alpha-Fetoproteins Human genes 0.000 description 10
- 108010026331 alpha-Fetoproteins Proteins 0.000 description 10
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 4
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 4
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 3
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 3
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- BZTDTCNHAFUJOG-UHFFFAOYSA-N 6-carboxyfluorescein Chemical compound C12=CC=C(O)C=C2OC2=CC(O)=CC=C2C11OC(=O)C2=CC=C(C(=O)O)C=C21 BZTDTCNHAFUJOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 2
- 239000007975 buffered saline Substances 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- 230000024203 complement activation Effects 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 2
- 101100139907 Arabidopsis thaliana RAR1 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 101100028790 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) PBS2 gene Proteins 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 230000004520 agglutination Effects 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 239000012299 nitrogen atmosphere Substances 0.000 description 1
- 230000002572 peristaltic effect Effects 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 235000004252 protein component Nutrition 0.000 description 1
- 238000005185 salting out Methods 0.000 description 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
［発明の目的］
（産業上の利用分野）
本発明は血清などの生体試料中の特定物質を抗原−抗体
反応を利用して定量分析するための免疫分析用方法に関
し、特に医療分野における病気の診断に利用される免疫
分析方法に関する。
反応を利用して定量分析するための免疫分析用方法に関
し、特に医療分野における病気の診断に利用される免疫
分析方法に関する。
（従来の技術）
近年、医療分野においては病気の診断を行うに際し、血
清等の生体試料中の物質（例えば、癌マーカー）を迅速
に定量することが極めて重要な課題となっている。従来
、免疫分析法としては、ＲＩＡ（ラジオイノムアッセイ
）、ＥＩＡ（エンザイムイムノアッセイ）、ラデツクス
凝集法などがあったが、迅速性、簡便性、感度の全てを
満足するものはなかった。
清等の生体試料中の物質（例えば、癌マーカー）を迅速
に定量することが極めて重要な課題となっている。従来
、免疫分析法としては、ＲＩＡ（ラジオイノムアッセイ
）、ＥＩＡ（エンザイムイムノアッセイ）、ラデツクス
凝集法などがあったが、迅速性、簡便性、感度の全てを
満足するものはなかった。
かかる事情に鑑み、本出願人はリボソームなどのマイク
ロカプセルを用いて迅速かつ、感度よく測定する免疫分
析方法：ＭＣＩＡ（マイクロカプセルイムノアッセイ）
を先に発明した。それは測定対象物質に対する抗体又は
抗原を結合すると同時に検出可能な物質を内部に封入し
たマイクロカプセルを用い、抗原−抗体反応により、活
性化された補体が膜を溶解し、内部から溶出してきた物
質を検出することによって測定対象物質を定量するもの
である。
ロカプセルを用いて迅速かつ、感度よく測定する免疫分
析方法：ＭＣＩＡ（マイクロカプセルイムノアッセイ）
を先に発明した。それは測定対象物質に対する抗体又は
抗原を結合すると同時に検出可能な物質を内部に封入し
たマイクロカプセルを用い、抗原−抗体反応により、活
性化された補体が膜を溶解し、内部から溶出してきた物
質を検出することによって測定対象物質を定量するもの
である。
（発明が解決しようとする問題点）
本発明者らは免疫分析方法に用いられる補体試薬として
、補体活性の高いモルモット血清をそのまま使用してい
たが、モルモット血清中には異好抗体くマイクロカプセ
ルに結合した抗体又は抗原に対する抗体）が含まれてい
る場合があり、上記抗体が存在すると測定対象物質がな
くとも抗原−抗体反応が起こり、補体が活性化され、マ
イクロカプセルを溶解してしまうという問題が生じた。
、補体活性の高いモルモット血清をそのまま使用してい
たが、モルモット血清中には異好抗体くマイクロカプセ
ルに結合した抗体又は抗原に対する抗体）が含まれてい
る場合があり、上記抗体が存在すると測定対象物質がな
くとも抗原−抗体反応が起こり、補体が活性化され、マ
イクロカプセルを溶解してしまうという問題が生じた。
一方、第２の問題点として、モルモット血清中にはヒト
のイムノグロブリンに対する抗体が含まれている場合が
ある。ヒトのイムノグロブリンがマイクロカプセルに結
合した抗体、又は、抗原に対する抗体が存在した場合、
上記抗体の存在により補体が活性化される場合のみでな
く抗体自身が補体を活性化しない抗体（例えばＩｑＧ、
ＩｑＡ）である場合であってもマイクロカプセル中に上
記抗体に対する抗原が含まれる場合、抗原抗体複合物（
Ａａ−ｂ）が形成され、補体が活性化されマイクロカプ
セルを溶解してしまうという問題が生ずる。
のイムノグロブリンに対する抗体が含まれている場合が
ある。ヒトのイムノグロブリンがマイクロカプセルに結
合した抗体、又は、抗原に対する抗体が存在した場合、
上記抗体の存在により補体が活性化される場合のみでな
く抗体自身が補体を活性化しない抗体（例えばＩｑＧ、
ＩｑＡ）である場合であってもマイクロカプセル中に上
記抗体に対する抗原が含まれる場合、抗原抗体複合物（
Ａａ−ｂ）が形成され、補体が活性化されマイクロカプ
セルを溶解してしまうという問題が生ずる。
これらの現象が起こると、測定対象物質が全く存在しな
くとも“存在するパという誤った結果を与えることによ
り、重大な診断誤差を招くことになる。
くとも“存在するパという誤った結果を与えることによ
り、重大な診断誤差を招くことになる。
本発明は、診断誤差の生じない免疫分析方法を提供する
ことを目的とするものである。
ことを目的とするものである。
し発明の構成］
（問題点を解決するための手段）
前述の問題点を解決するために本発明は、測定対象物質
に対する抗原、又は、抗体を結合すると同時に内部に検
出可能な物質を封入したマイクロカプセルを用い、抗原
−抗体反応により活性化された補体試薬が膜を溶解し、
内部から溶出してきた物質を検出することによって測定
対象物質を定量するための免疫分析方法において、前記
補体試薬として動物血清からＩＣＩＧを除去したものを
用いるものである。
に対する抗原、又は、抗体を結合すると同時に内部に検
出可能な物質を封入したマイクロカプセルを用い、抗原
−抗体反応により活性化された補体試薬が膜を溶解し、
内部から溶出してきた物質を検出することによって測定
対象物質を定量するための免疫分析方法において、前記
補体試薬として動物血清からＩＣＩＧを除去したものを
用いるものである。
（作 用）
前述のようにモルモット血清中からイムノグロブリンの
主成分であるＩｇＧ（イムノグロブリンＧ）を除去した
ものをマイクカプセル中の補体試薬として使うことによ
り抗原−抗体反応による補体の活性化を防ぎ、マイクロ
カプセルが非特異的に溶解するのを大幅に軽減すること
ができる。
主成分であるＩｇＧ（イムノグロブリンＧ）を除去した
ものをマイクカプセル中の補体試薬として使うことによ
り抗原−抗体反応による補体の活性化を防ぎ、マイクロ
カプセルが非特異的に溶解するのを大幅に軽減すること
ができる。
そして、このことにより測定対象物質の定量的分析が可
能となる。
能となる。
（実施例）
以下本発明を具体的な例を用いてより詳細に述べる。
本発明はモルモット血清から抗体の主成分であるＩＱＧ
（イムノグロブリンＧ）を除去したものをマイクロカプ
セル中の補体試薬として用いることにした。モルモット
血清中からＩｇＧを除去する方法は公知として多く知ら
れているが、本発明ではＩＣＩＧと特異的に結合するプ
ロティンＡをコーティングした粒子によるアフィニティ
ークロマトグラフィーを用いる。ただし、本発明におけ
るモルモットＩｇＧを除去する方法は上記方法に限るわ
けではない。上述の他の公知のＩＣＩＧを除去する例と
しては、例えば抗モルモットＩｇＧ抗体を利用したアフ
ィニティークロマトグラフィーや、硫安等による塩析等
がある。
（イムノグロブリンＧ）を除去したものをマイクロカプ
セル中の補体試薬として用いることにした。モルモット
血清中からＩｇＧを除去する方法は公知として多く知ら
れているが、本発明ではＩＣＩＧと特異的に結合するプ
ロティンＡをコーティングした粒子によるアフィニティ
ークロマトグラフィーを用いる。ただし、本発明におけ
るモルモットＩｇＧを除去する方法は上記方法に限るわ
けではない。上述の他の公知のＩＣＩＧを除去する例と
しては、例えば抗モルモットＩｇＧ抗体を利用したアフ
ィニティークロマトグラフィーや、硫安等による塩析等
がある。
しかるに本発明で言っている補体試薬とは元来１０種類
以上のタンパク質成分よりなる。従ってモルモット血清
中からＩ（ＪＧを除く手段としては個々の補体成分を除
去、又は、失活させない限りどのような方法でも用いる
ことができる。しかしながら、本発明者等の検討の結果
、プロティンＡ法がそのうち最も望ましい方法であった
。
以上のタンパク質成分よりなる。従ってモルモット血清
中からＩ（ＪＧを除く手段としては個々の補体成分を除
去、又は、失活させない限りどのような方法でも用いる
ことができる。しかしながら、本発明者等の検討の結果
、プロティンＡ法がそのうち最も望ましい方法であった
。
尚、本発明の動物血清は特に下位概念としてモルモット
の血清を用いたが、これは補体活性が他のものと比較し
て高いことになる。
の血清を用いたが、これは補体活性が他のものと比較し
て高いことになる。
〈実施例１〉
ヒト血清中のＡＦＰ （アルファフェトプロティン）の
測定を例にとり、説明する。
測定を例にとり、説明する。
先ず、抗ヒトＡＦＰ抗体結合リボソームを調製した。調
製法は、先ず、フラスコ内に１０ｍＨコレステロール（
クロロフォルムで溶解した）１００μ、ｊ、５ｍ）ｌレ
シチ（クロロフォルムで溶解した）２００μｆ、１００
ｍ）ｆシセチルホスフエイト（クロロフォルムで溶解し
た＞５０μｍ５０ｍＨＰＤＰ−ＰＥ （マルチン等の方
法で調製したもの）１００μｌとエタノール１ｍｌとを
混合し、ロータリーエバポレータにて溶媒を完全に除去
することによってフラスコ内面に脂質膜を作成した。カ
ルボキシフルオレッセイン水溶Ｆｉ １．Ｏｍｆを加え
、５０℃に加温し、その後３００００Ｘ ｇテ３０分間
遠心分離を行い、上澄を捨てた後、沈渣に生理食塩液を
加え再び遠心分離した。この操作をカルボキシフルオレ
ッセインが遠心上澄になくなるまで行い、最後に生理食
塩液５００μ矛を加え、リボソーム懸濁液とした。該リ
ボソーム懸濁液に抗ヒト−α−フェトプロティンヤギ抗
体Ｆ（ａｂ）’２（２００μｑ）をジチオスレイトール
（ＤＴＴ＞によって処理したものと反応せしめ、リボソ
ームに抗体を結合させた。その後３００００Ｘ Ｑ 、
３０分間遠心分離を行い、上澄を捨て抗体結合リボソ
ーム沈澱を生理食塩液で懸濁し、再び３００００Ｘ Ｑ
。
製法は、先ず、フラスコ内に１０ｍＨコレステロール（
クロロフォルムで溶解した）１００μ、ｊ、５ｍ）ｌレ
シチ（クロロフォルムで溶解した）２００μｆ、１００
ｍ）ｆシセチルホスフエイト（クロロフォルムで溶解し
た＞５０μｍ５０ｍＨＰＤＰ−ＰＥ （マルチン等の方
法で調製したもの）１００μｌとエタノール１ｍｌとを
混合し、ロータリーエバポレータにて溶媒を完全に除去
することによってフラスコ内面に脂質膜を作成した。カ
ルボキシフルオレッセイン水溶Ｆｉ １．Ｏｍｆを加え
、５０℃に加温し、その後３００００Ｘ ｇテ３０分間
遠心分離を行い、上澄を捨てた後、沈渣に生理食塩液を
加え再び遠心分離した。この操作をカルボキシフルオレ
ッセインが遠心上澄になくなるまで行い、最後に生理食
塩液５００μ矛を加え、リボソーム懸濁液とした。該リ
ボソーム懸濁液に抗ヒト−α−フェトプロティンヤギ抗
体Ｆ（ａｂ）’２（２００μｑ）をジチオスレイトール
（ＤＴＴ＞によって処理したものと反応せしめ、リボソ
ームに抗体を結合させた。その後３００００Ｘ Ｑ 、
３０分間遠心分離を行い、上澄を捨て抗体結合リボソ
ーム沈澱を生理食塩液で懸濁し、再び３００００Ｘ Ｑ
。
３０分間遠心分離を行い、上澄を捨てた。この操作を更
に２回繰り返し、生理食塩液にて抗体結合リボソーム懸
濁液（２００％Ｖ／Ｖ）とした。尚、これらの操作は全
て窒素雰囲気のものとして行った。
に２回繰り返し、生理食塩液にて抗体結合リボソーム懸
濁液（２００％Ｖ／Ｖ）とした。尚、これらの操作は全
て窒素雰囲気のものとして行った。
次にモルモット血清からＩｑＧを除去する操作を行った
。実施例１では先の無処理モルモット血清とＩＣＩＧ除
去モルモット血清を補体試薬として含有するリボソーム
でＡＦＰを定量分析した。
。実施例１では先の無処理モルモット血清とＩＣＩＧ除
去モルモット血清を補体試薬として含有するリボソーム
でＡＦＰを定量分析した。
材料、試薬としては以下のものを用いた。
Ｐ Ａ Ｃ： Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａ−Ｃｅｌｌ
ｕｌｏｆｔｎｅ生化学工業、５ｍ１ ＣＢ ： １００ｍ）ｌ Ｃ１ｔｒａｔｅ Ｂｕｆｆｅ
ｒ。
ｕｌｏｆｔｎｅ生化学工業、５ｍ１ ＣＢ ： １００ｍ）ｌ Ｃ１ｔｒａｔｅ Ｂｕｆｆｅ
ｒ。
ｐ ト１４．Ｏ
Ｔ ３ ３ ： １ ＱｍＨ丁ｒｉｓ Ｂｕｆ
ｆｅｒｅｄ Ｓａｌｉｎｅ（３ＭＮａＣｊ！ ）、ｐ
Ｈ９，。
ｆｅｒｅｄ Ｓａｌｉｎｅ（３ＭＮａＣｊ！ ）、ｐ
Ｈ９，。
Ｇ Ｐ Ｓ ： Ｇｕｉｎｅａ ｐｉｇ Ｓｅｒｕｍ。
デンカ生餌、ＴＢＳで溶解
Ｐ Ｂ Ｓ ２ ＋ ： １ ＱｍＨＰｈｏｓｐｈａｔ
ｅ ＢｕｆｆｅｒｅｄＳａｌｉｎｅ、 ｐｔ−１７，４
゜ ０．５ｍＨＭｇ２＋、 ０．１５ｍＨＣａ２＋器具、
装置としては以下ものを用いた。
ｅ ＢｕｆｆｅｒｅｄＳａｌｉｎｅ、 ｐｔ−１７，４
゜ ０．５ｍＨＭｇ２＋、 ０．１５ｍＨＣａ２＋器具、
装置としては以下ものを用いた。
カラム（１Ｏｍｆ容）、恒温槽（１０℃）、ペリスタポ
ンプ、フラクションコレクター、分光光度計数に方法を
述べる。
ンプ、フラクションコレクター、分光光度計数に方法を
述べる。
Ｆｌｏｗ Ｒａｔｅ（流動速度） ： ０．２５ｍ１
／ｍｉｎで恒温槽（１０℃）中で、カラムの中の５ｍｌ
のＰＡＣを２５ｍ１ＴＢＳで洗浄し、次に、１．５１１
１１（７）ＧＰＳヲ１加し、その次に、２５ｍ１ＴＢＳ
で溶出した。該溶出液を２ｍｌずつ分画し、Ａ２８０測
定を行った。
／ｍｉｎで恒温槽（１０℃）中で、カラムの中の５ｍｌ
のＰＡＣを２５ｍ１ＴＢＳで洗浄し、次に、１．５１１
１１（７）ＧＰＳヲ１加し、その次に、２５ｍ１ＴＢＳ
で溶出した。該溶出液を２ｍｌずつ分画し、Ａ２８０測
定を行った。
・・・・・・Ａ
へのピークを集め、ＩＣＩＧ除去モルモット血清とした
。これらを用いて実際にＡＦＰの測定を行った。
。これらを用いて実際にＡＦＰの測定を行った。
抗ＡＦＰ抗体結合リボソーム懸濁液１０ｍ１にＡＦＰ
０．１．１０． １００．１０００ｎ（１／ｍｌを含
有するヒト血清を加え、１０分間、３７℃中で反応させ
た。これに抗ＡＦＰ抗体（ウサギ）と補体（モルモット
血清）２５μｍずつを加え、３７℃。
０．１．１０． １００．１０００ｎ（１／ｍｌを含
有するヒト血清を加え、１０分間、３７℃中で反応させ
た。これに抗ＡＦＰ抗体（ウサギ）と補体（モルモット
血清）２５μｍずつを加え、３７℃。
３０分間保った。その後、蛍光強度（励起波長：４９０
１ｍ、測定波長：５３０ｎｍ）を測定し、リボソームの
溶解率（％）を求めた。
１ｍ、測定波長：５３０ｎｍ）を測定し、リボソームの
溶解率（％）を求めた。
第１図に補体試薬として無処理モルモット血清（ａ＞と
、ＩＧ除去モルモット血清（ｂ）をそれぞれ用いた時の
ＡＦＰ検但線を示した。（ａ）ではＡＦＰが存在しなく
とも２０％位、リボソームが溶解しているが、（ｂ）で
は５％位に下がり、ＡＦＰの測定が可能となった。
、ＩＧ除去モルモット血清（ｂ）をそれぞれ用いた時の
ＡＦＰ検但線を示した。（ａ）ではＡＦＰが存在しなく
とも２０％位、リボソームが溶解しているが、（ｂ）で
は５％位に下がり、ＡＦＰの測定が可能となった。
〈実施例２〉
実施例２では１１種の検体で上述のモルモット血清（ａ
）とＩＱＧ除去モルモット血清（ｂ）を用いたときのリ
ボソームの非特異溶解を示した。
）とＩＱＧ除去モルモット血清（ｂ）を用いたときのリ
ボソームの非特異溶解を示した。
第２図に示す通りリボソームは第１図のときと比較し、
結合抗体の種類を変えているので、全体的に無処理のモ
ルモット血清（ａ）の補体のみによる非特異的溶解が抑
えられているか、それでもモルモット血清（ａ）をその
まま使用すると検体によっては５乃至２０％のバラツキ
があるに対し、ＩＧＧ除去モルモット血清（ｂ）を用い
ると非特異的溶解が抑えられバラ、ツキがなくなってい
る。
結合抗体の種類を変えているので、全体的に無処理のモ
ルモット血清（ａ）の補体のみによる非特異的溶解が抑
えられているか、それでもモルモット血清（ａ）をその
まま使用すると検体によっては５乃至２０％のバラツキ
があるに対し、ＩＧＧ除去モルモット血清（ｂ）を用い
ると非特異的溶解が抑えられバラ、ツキがなくなってい
る。
［発明の効果］
以上のように従来モルモット血清をそのままリボソーム
のようなマイクロカプセルに含有さぜだ補体試薬に比べ
、ＩｇＧを除去したＩＣＩＧ除去モルモット血清をマイ
クロカプセルに含有させた補体試薬の方が非特異的なカ
プセルの溶解を遥かに軽減することができ、測定対象物
質の定量的な分析が可能となり、診断誤差の生じない免
疫分析方法を提供することができる。
のようなマイクロカプセルに含有さぜだ補体試薬に比べ
、ＩｇＧを除去したＩＣＩＧ除去モルモット血清をマイ
クロカプセルに含有させた補体試薬の方が非特異的なカ
プセルの溶解を遥かに軽減することができ、測定対象物
質の定量的な分析が可能となり、診断誤差の生じない免
疫分析方法を提供することができる。
第１図はＡＦＰ検伍線を表したものであり、第２図は１
１種の検体に対するリボソームの溶解率を表したもので
ある。 ９＋８葛畢ｐ−斌（ ９価思楢ｒ−＜４ｊ、： に ８ ８ ８ ８８
１種の検体に対するリボソームの溶解率を表したもので
ある。 ９＋８葛畢ｐ−斌（ ９価思楢ｒ−＜４ｊ、： に ８ ８ ８ ８８
Claims (7)
- （１）測定対象物質に対する抗原又は抗体を結合すると
同時に内部に検出可能な物質を封入したマイクロカプセ
ルを用い、抗原−抗体反応により活性化された補体試薬
が膜を溶解し、内部から溶出してきた物質を検出するこ
とによって測定対象物質を定量するための免疫分析方法
において、前記補体試薬として動物血清からＩｇＧを除
去したものを用いることを特徴とする免疫分析方法。 - （２）上記補体試薬としてモルモツト血清からＩｇＧを
除去したものを用いることを特徴とする特許請求の範囲
第１項に記載の免疫分析方法。 - （３）上記動物血清からＩｇＧを除去するのに、プロテ
インＡを用いることを特徴とする特許請求の範囲第１項
に記載の免疫分析方法。 - （４）上記プロテインＡを粒子にコーティングしたもの
をカラムに詰めたアフィニティーフロマトグラフィーを
使用することを特徴とする特許請求の範囲第１項又は第
３項に記載の免疫分析方法。 - （５）上記モルモツト血清からＩｇＧを除去するのに抗
モルモットＩｇＧ抗体を粒子のまわりにコーティングし
たものをカラムに詰めたアフィニティーフロマトグラフ
ィーを使用することを特徴とする特許請求の範囲第１項
又は第２項に記載の免疫分析方法。 - （６）上記モルモツト血清からＩｇＧを除去するのに塩
折法を利用することを特徴とする特許請求の範囲対１項
又は第２項記載の免疫分析方法。 - （７）上記マイクロカプセルとしてリボソームを使用す
ることを特徴とする特許請求の範囲第１項に記載の免疫
分析方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP62281578A JPH06103308B2 (ja) | 1987-11-06 | 1987-11-06 | 免疫分析方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP62281578A JPH06103308B2 (ja) | 1987-11-06 | 1987-11-06 | 免疫分析方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH01123151A true JPH01123151A (ja) | 1989-05-16 |
| JPH06103308B2 JPH06103308B2 (ja) | 1994-12-14 |
Family
ID=17641120
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP62281578A Expired - Lifetime JPH06103308B2 (ja) | 1987-11-06 | 1987-11-06 | 免疫分析方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH06103308B2 (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2004019009A1 (en) * | 2002-08-23 | 2004-03-04 | Royal Women's Hospital | Depletion of plasma proteins |
| KR100435990B1 (ko) * | 2002-06-14 | 2004-06-12 | 현대자동차주식회사 | 자동차용 에어벤트 노브 고정장치 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS61250559A (ja) * | 1985-04-30 | 1986-11-07 | Toshiba Corp | 免疫分析方法 |
-
1987
- 1987-11-06 JP JP62281578A patent/JPH06103308B2/ja not_active Expired - Lifetime
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS61250559A (ja) * | 1985-04-30 | 1986-11-07 | Toshiba Corp | 免疫分析方法 |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR100435990B1 (ko) * | 2002-06-14 | 2004-06-12 | 현대자동차주식회사 | 자동차용 에어벤트 노브 고정장치 |
| WO2004019009A1 (en) * | 2002-08-23 | 2004-03-04 | Royal Women's Hospital | Depletion of plasma proteins |
| US9417218B2 (en) | 2002-08-23 | 2016-08-16 | Therapeuticsmd, Inc. | Depletion of plasma proteins |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH06103308B2 (ja) | 1994-12-14 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Hempen et al. | Labeling strategies for bioassays | |
| US4279617A (en) | Iummunoassay involving agglutination | |
| Aherne | Immunoassays in the analysis of water | |
| EP0267317B1 (en) | Method for the detection of proteins and viruses | |
| US4338094A (en) | Macroencapsulated immunosorbent assay technique | |
| US7455980B2 (en) | Method for characterizing autoimmune disorders | |
| JPS5915860A (ja) | 抗体、抗原または抗体：抗原複合体の分析法 | |
| WO2008007359A2 (en) | Rapid diagnostic devices based on molecular imprinted polymers | |
| JP3908272B2 (ja) | リガンドの検出のための固相アッセイ | |
| WO1996004558A1 (fr) | Systeme de mesure fonctionnant avec du sang entier | |
| JPWO2002073203A1 (ja) | 全血測定法 | |
| JP4653574B2 (ja) | ヘモグロビンＡ１ｃの測定方法 | |
| Lombardelli et al. | Evaluation of secreted cytokines by multiplex bead-based assay (X MAP Technology, Luminex) | |
| KR20160120675A (ko) | 래피드 정량 진단 키트 | |
| JPS637348B2 (ja) | ||
| JPH01123151A (ja) | 免疫分析方法 | |
| JPH09500962A (ja) | 試験装置 | |
| JPS6247555A (ja) | シンチレ−シヨン近接定量法 | |
| JPS6281567A (ja) | 粒子凝集反応を用いる定量方法 | |
| O'Connell et al. | Assessment of an automated solid phase competitive fluoroimmunoassay for benzoylecgonine in untreated urine | |
| EP0260079A1 (en) | Method of assay | |
| JPS61110059A (ja) | 免疫学的分析方法 | |
| JPS6281566A (ja) | 微粒子の螢光強度測定による定量方法 | |
| JPS6336151A (ja) | 微粒子の螢光強度測定による定量方法 | |
| JPS63191960A (ja) | リガンドのアッセイ法 |