JPH01101819A - サフランの脱分化細胞の選抜・増殖方法 - Google Patents
サフランの脱分化細胞の選抜・増殖方法Info
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- JPH01101819A JPH01101819A JP25706787A JP25706787A JPH01101819A JP H01101819 A JPH01101819 A JP H01101819A JP 25706787 A JP25706787 A JP 25706787A JP 25706787 A JP25706787 A JP 25706787A JP H01101819 A JPH01101819 A JP H01101819A
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Landscapes
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は、サフランの脱分化細胞の選抜・増殖方法に関
する。
する。
サフランの脱分化細胞はサフラナール等の有用物質や赤
色色素等の有用色素を生産する可能性があるとされてい
るが、その脱分化細胞の全てが有用物質や有用色素を生
産するわけではない。例えば、赤色色素の生産はアラニ
ン添加培地を用い、特定の培養条件で培養した場合に、
選抜されて生き残ったサフランの脱分化細胞のみが行な
うことができるのである。
色色素等の有用色素を生産する可能性があるとされてい
るが、その脱分化細胞の全てが有用物質や有用色素を生
産するわけではない。例えば、赤色色素の生産はアラニ
ン添加培地を用い、特定の培養条件で培養した場合に、
選抜されて生き残ったサフランの脱分化細胞のみが行な
うことができるのである。
したがって、有用物質や有用色素を生産するサフランの
脱分化細胞がどのような条件で選抜されるかを知るには
、培地や培養条件を変えて細胞の増殖状況を種々検策す
る必要がある。
脱分化細胞がどのような条件で選抜されるかを知るには
、培地や培養条件を変えて細胞の増殖状況を種々検策す
る必要がある。
そして、従来においては、その検策はシャーレ内のＡｇ
ａ ｒ 等の固形培地上にサフランのカルス切片を植え
付け、カルスの増殖状況を観察することによって行なわ
れていた。
ａ ｒ 等の固形培地上にサフランのカルス切片を植え
付け、カルスの増殖状況を観察することによって行なわ
れていた。
植え付けることができず、したがって、一つのシャーレ
では９検体の細胞の検策しかできないため、培養操作を
何回も繰シ返さなければならなかった。
では９検体の細胞の検策しかできないため、培養操作を
何回も繰シ返さなければならなかった。
もとよシ、この増殖状況の検策には、細菌の培養では一
般的に行なわれているブレーティング培養法を採用する
と、−度に、数千乃至数万個の脱分化細胞の検策ができ
るばかりでなく、細胞の増殖によるコロニーの発生を観
察するだけでよいので、操作を簡便に行なうことができ
るという利点がある。
般的に行なわれているブレーティング培養法を採用する
と、−度に、数千乃至数万個の脱分化細胞の検策ができ
るばかりでなく、細胞の増殖によるコロニーの発生を観
察するだけでよいので、操作を簡便に行なうことができ
るという利点がある。
しかしながら、サフランの脱分化細胞は、非常にデリケ
、−トでショックに弱いためか、ブレーティング培養す
ると細胞が死滅してしまい、コロニーを発生せず、した
がって、その脱分化細胞の検束にはブレーティング培養
を採用することができないという問題があった。
、−トでショックに弱いためか、ブレーティング培養す
ると細胞が死滅してしまい、コロニーを発生せず、した
がって、その脱分化細胞の検束にはブレーティング培養
を採用することができないという問題があった。
本発明者等は、サフランの脱分化細胞の検束をブレーテ
ィング培養で行なう方法を提供せんと、種々研究の結果
、その脱分化細胞を一定の細胞密度以上でブレーティン
グ培養すると、所期の目的が達成されるとの知見に至り
、本発明の完成に至ったものである。
ィング培養で行なう方法を提供せんと、種々研究の結果
、その脱分化細胞を一定の細胞密度以上でブレーティン
グ培養すると、所期の目的が達成されるとの知見に至り
、本発明の完成に至ったものである。
本発明は、サフランの脱分化細胞の選抜−増殖方法に関
し、サフランの脱分化細胞を細胞密度２Ｘ１０個／ゴ以
上でブレーティング培養することを特徴とするものであ
る。
し、サフランの脱分化細胞を細胞密度２Ｘ１０個／ゴ以
上でブレーティング培養することを特徴とするものであ
る。
ここで脱分化細胞とは、植物体のように機能分化してい
ない形態の細胞のことをいう。また、グレーティング培
養とは、通常は細菌の培養に用いる方法であシ、細胞を
ゾル状の固型剤入り培地に分散させ、これをシャーレ等
の容器に分注し、培地を固型状にして細胞を培養するこ
とをいう。
ない形態の細胞のことをいう。また、グレーティング培
養とは、通常は細菌の培養に用いる方法であシ、細胞を
ゾル状の固型剤入り培地に分散させ、これをシャーレ等
の容器に分注し、培地を固型状にして細胞を培養するこ
とをいう。
本発明の実施に当って、まず、サフランの組織片を用意
する。この組織片はサフランの球根、茎、めしべ、おし
べ及び根等の組織を常法にしたがって滅菌した後、薄く
スライスすることにより得ることができる。
する。この組織片はサフランの球根、茎、めしべ、おし
べ及び根等の組織を常法にしたがって滅菌した後、薄く
スライスすることにより得ることができる。
次に、この組織片を培地に植え付けてカルス誘導を行な
い脱分化細胞を得る。培地としては植物ホルモンを添加
したＭＳ培地を用いるとよいＯ 次に、得られたサフランの脱分化細胞を細胞をする。プ
レイティング培養に当って、細胞密度が２×１０個／−
未満であると、後の試験例にも示すように、脱分化細胞
は増殖しないので注意を要する。尚、ここで２×１０
という数値は、表示単位からも明らかなとおシ脱分化細
胞の数のことである。
い脱分化細胞を得る。培地としては植物ホルモンを添加
したＭＳ培地を用いるとよいＯ 次に、得られたサフランの脱分化細胞を細胞をする。プ
レイティング培養に当って、細胞密度が２×１０個／−
未満であると、後の試験例にも示すように、脱分化細胞
は増殖しないので注意を要する。尚、ここで２×１０
という数値は、表示単位からも明らかなとおシ脱分化細
胞の数のことである。
培地の固型剤としてはアガロース・ジュランガム等を用
い、栄養分としては植物ホルモンを添は５．０〜６．０
が適当である。
い、栄養分としては植物ホルモンを添は５．０〜６．０
が適当である。
尚、光、は細胞の発育阻害因子であるので、培養に当っ
ては光の照射をしないことが望ましい。
ては光の照射をしないことが望ましい。
以上の条件でサフランの脱分化細胞を約１ケ月培養をす
ると、その培養条件に適さない脱分化細胞は淘汰され、
その培養条件に適した脱分化細胞のみが選抜され、増殖
し、培地上に直径的１ａＩの多数のコロニーが発生する
。
ると、その培養条件に適さない脱分化細胞は淘汰され、
その培養条件に適した脱分化細胞のみが選抜され、増殖
し、培地上に直径的１ａＩの多数のコロニーが発生する
。
実施例１゜
サフランの球根を滅菌（７０％エタノール水溶液に１分
間浸漬、２％次亜素酸水溶液に１５分間浸漬）後、切断
して厚さ２鰭、タテ・ヨコ５＋＋ｍの切片を得た。
間浸漬、２％次亜素酸水溶液に１５分間浸漬）後、切断
して厚さ２鰭、タテ・ヨコ５＋＋ｍの切片を得た。
また、これとは別に、ＭＳ基本組成からなる培地に、２
．４−Ｄを１ ｐｐｍ ％ゼアチンを０．５ｐｐｍ添加
した後、ＰＨを５．８に調整し、オートクレーブで滅菌
して固体培地（カルス誘導培地）を得た。
．４−Ｄを１ ｐｐｍ ％ゼアチンを０．５ｐｐｍ添加
した後、ＰＨを５．８に調整し、オートクレーブで滅菌
して固体培地（カルス誘導培地）を得た。
次に、この固体培地に上記サフランの切片を植え付け、
温度２５°Ｃにて３週間培養したところ、切片がカルス
化し、脱分化細胞を得た。そして、この脱分化細胞を液
体培地に移し、軽くマセレーション（９０ｒ、ｐ、ｍ回
転培養）してバラバラの細胞とした。
温度２５°Ｃにて３週間培養したところ、切片がカルス
化し、脱分化細胞を得た。そして、この脱分化細胞を液
体培地に移し、軽くマセレーション（９０ｒ、ｐ、ｍ回
転培養）してバラバラの細胞とした。
次に、この細胞をアガロース固化培地（栄養分は上記カ
ルス誘導培地と同じ）に細胞密度が２×１０個／ゴにな
るようブレーティングした後、２０℃の恒温器中で３０
日間培養したところ、培地上に多数のコロニーが発生し
た。
ルス誘導培地と同じ）に細胞密度が２×１０個／ゴにな
るようブレーティングした後、２０℃の恒温器中で３０
日間培養したところ、培地上に多数のコロニーが発生し
た。
実施例２
カルス誘導培地として、ＭＳ基本組成からなる培地に１
、ナフタレン酢酸を１９９ｍ％ベンジルアデニンを３
ｐｐｍを添加したものを用い、また、脱分化細胞のブレ
ーティングは細胞密度が３×１０個／ゴとしたほかは、
実施例１゜と同じ方法でカルスを培養したところ、実施
例１と同じ結果が得られた。
、ナフタレン酢酸を１９９ｍ％ベンジルアデニンを３
ｐｐｍを添加したものを用い、また、脱分化細胞のブレ
ーティングは細胞密度が３×１０個／ゴとしたほかは、
実施例１゜と同じ方法でカルスを培養したところ、実施
例１と同じ結果が得られた。
実施例３
カルス誘導培地として、ＭＳ基本組成からなる培地に、
２．４−Ｄを０．２ ｐｐｍ、ゼアチン０．１ ｐｐｍ
を添加したものを用い、また、脱分化細胞のブレーティ
ングは細胞密度が２×１０ 個／づとしたほかは、実施
例１．と同じ方法でカルスを培養したところ、実施例１
．と同じ結果が得られた。
２．４−Ｄを０．２ ｐｐｍ、ゼアチン０．１ ｐｐｍ
を添加したものを用い、また、脱分化細胞のブレーティ
ングは細胞密度が２×１０ 個／づとしたほかは、実施
例１．と同じ方法でカルスを培養したところ、実施例１
．と同じ結果が得られた。
以下、本発明の試験例を示す。
細胞密度が表−１に示すようになるようにサフランの脱
分化細胞をブレーティングした５種類のサンプルについ
て、実施例１．と同じ方法でカルスを培養した。
分化細胞をブレーティングした５種類のサンプルについ
て、実施例１．と同じ方法でカルスを培養した。
そして、培養をはじめて１ケ月後と２ケ月後の培地上の
カルスのコロニーの状態を観察したところ、表−１の結
果が得られた。
カルスのコロニーの状態を観察したところ、表−１の結
果が得られた。
表−１
尚、表中の記号
一二全くコロニー化に至らず
（細胞は生長しない）
±：コロニー化に至らず
（細胞は若干生長する）
＋：まばらにコロニー化する０
−Ｈ−：シャーレー面にコロニーができる０
−）＋＋：シャーレー面にコロニーができ、コロニーの
生長が早い。
生長が早い。
ことを示す。
このように、細胞密度２Ｘ１０個／−以上でサフランの
脱分化細胞をブレーティング培養すると、その培養条件
に適った細胞のみが選抜され、増殖してコロニーを形成
する。
脱分化細胞をブレーティング培養すると、その培養条件
に適った細胞のみが選抜され、増殖してコロニーを形成
する。
上記密度以上で培養すると脱分化細胞が生長するのは細
胞同士が何らかの生長促進物質を出し合うからではない
かと推察される。
胞同士が何らかの生長促進物質を出し合うからではない
かと推察される。
以上のように本発明によれば、ブレーティングという簡
便な操作により、サフランの脱分化細胞を特定の培養条
件に適ったもののみ選抜し、かつ増殖を行なうことがで
きる。
便な操作により、サフランの脱分化細胞を特定の培養条
件に適ったもののみ選抜し、かつ増殖を行なうことがで
きる。
したがって、例えばサフラナール等の有用物質を生産す
る脱分化細胞や赤色色素等の色素を生産する脱分化細胞
等の特定の細胞の培養条件を簡便に知ることができ、植
物組織の培養技術の発展に寄与することができる。
る脱分化細胞や赤色色素等の色素を生産する脱分化細胞
等の特定の細胞の培養条件を簡便に知ることができ、植
物組織の培養技術の発展に寄与することができる。
Claims (1)
- サフランの脱分化細胞を２×１０＾６個／ｍｌ以上でプ
レーティング培養することを特徴とするサフランの脱分
化細胞の選抜・増殖方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP25706787A JPH01101819A (ja) | 1987-10-14 | 1987-10-14 | サフランの脱分化細胞の選抜・増殖方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP25706787A JPH01101819A (ja) | 1987-10-14 | 1987-10-14 | サフランの脱分化細胞の選抜・増殖方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH01101819A true JPH01101819A (ja) | 1989-04-19 |
Family
ID=17301283
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP25706787A Pending JPH01101819A (ja) | 1987-10-14 | 1987-10-14 | サフランの脱分化細胞の選抜・増殖方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH01101819A (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2006334974A (ja) * | 2005-06-03 | 2006-12-14 | Sodick Plastech Co Ltd | 液状樹脂成形機の射出装置 |
| CN103782790A (zh) * | 2014-03-04 | 2014-05-14 | 湖州市中心医院 | 一种西红花花芽孵育方法 |
| CN109042334A (zh) * | 2018-09-21 | 2018-12-21 | 杨晓峰 | 一种朱顶红脱毒组织培养和快速繁殖方法 |
-
1987
- 1987-10-14 JP JP25706787A patent/JPH01101819A/ja active Pending
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2006334974A (ja) * | 2005-06-03 | 2006-12-14 | Sodick Plastech Co Ltd | 液状樹脂成形機の射出装置 |
| CN103782790A (zh) * | 2014-03-04 | 2014-05-14 | 湖州市中心医院 | 一种西红花花芽孵育方法 |
| CN103782790B (zh) * | 2014-03-04 | 2015-06-03 | 湖州市中心医院 | 一种西红花花芽孵育方法 |
| CN109042334A (zh) * | 2018-09-21 | 2018-12-21 | 杨晓峰 | 一种朱顶红脱毒组织培养和快速繁殖方法 |
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