JP7842460B2 - 取り扱い性に優れたソホロリピッド含有組成物 - Google Patents
取り扱い性に優れたソホロリピッド含有組成物Info
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Description
本発明は、取り扱い性に優れたソホロリピッド含有組成物、及びその製造方法に関する。
生物由来の界面活性剤であるバイオサーファクタント（以下、ＢＳともいう。）は、生分解性及び安全性が高いことが知られている。糖脂質型ＢＳの一種であるソホロリピッド（以下、ＳＬともいう。）は、酵母の発酵から得られる発酵産物である。当該ＳＬは、例えば、グルコースなどの糖類と植物油脂などの炭素源を含む液体培地に酵母を接種し、穏和な温度、圧力条件下で通気しながら攪拌するだけで容易に生産することができる。また、ＳＬは、他のＢＳに比べ、生産性が高いため（例えば、100 g／L程度）、工業的生産に適していると考えられている。
しかし、発酵産物を工業的に大量に製造するためには、培養終了により得られる培養物から、目的産物を効率よく回収することが一つの課題となる。ＳＬは、培養条件によっては、培養液中に可溶化した状態で生成する。この場合、培養液からＳＬを、有機溶媒等を用いて抽出したり、またカラムクロマトグラフィー等を用いて単離するなどの処理が必要であり（例えば、非特許文献１及び２、特許文献１等参照）、環境や作業者への負荷が生じる。また、培養条件によっては、ＳＬは低温で固化してしまう。固化したＳＬを培養タンクから抜き出すことは難しく、温水を投入したり、また培養タンクを加熱する等の処理が必要になる。このため、製造に要するエネルギーが増すとともに、作業工程が増えて作業者の負荷も増大する。
ＳＬの製造方法は、従来より、多数知られている。例えば、特許文献２には、カンジダ属酵母を用いてＳＬを高収量・高収率で取得するために、培地に疎水性基質として脂質（植物油）に脂肪酸を混合して用いることが提案されている。また、特許文献３には、強い抗菌性及び防カビ活性を有するラクトン型ＳＬを高生産する培養方法において、培地への酸素の供給量を制御することで、生成するジアセチルラクトン型のモル比率が向上すること、当該ジアセチルラクトン型のモル比率を８０％以上にすることで、ＳＬを取り扱い容易な固体として簡便に取得できることが記載されている。
D. G. Cooper and D. A. Paddock, Appl. Environ. Microbiol., 47, 173-176 (1984)
R. D. Ashby, D. K. Y. Solaiman and T. A. Foglia, Biotechnol. Lett., 30, 1093-1100, 2008
本発明は、ＳＬを含有する組成物（以下、「ＳＬ含有組成物」と称する）の取り扱い性を改善するための技術を提供することを目的とする。具体的には、取り扱い性に優れたＳＬ含有組成物、及びその製造方法を提供することを目的とする。なお、ここでいう取り扱い性には、沈降性及び／又は流動性が含まれる。具体的には、本発明は、沈降性を有し、培養終了時に、培養物中で沈降することで、培養物から容易に分離ないし回収することが可能なＳＬ含有組成物、及びその製造方法を提供することを目的とする。また、本発明は、低温（－５℃）で固化せず、流動性を備えたＳＬ含有組成物、及びその製造方法を提供することを目的とする。
本発明者らは、前記課題を解決すべく鋭意検討を重ねたところ、ＳＬ産生酵母を、植物油と脂肪酸を特定の割合で含む培地で培養することで得られるＳＬ含有組成物が、良好な沈降性を有することを見出し、当該ＳＬ含有組成物は、ラクトン型ＳＬ、及びオレイン酸－ジアセチルラクトン型ＳＬを所定の割合で含有していることを確認した。さらに、当該ＳＬ含有組成物は、水分含有量を３５～７０質量％に調整した場合に、－５℃の温度条件で固化せず、低温条件下で流動性を備えていることを確認した。
本発明は、こうした知見に基づいて、さらに研究を重ねることで完成に至ったものであり、下記の実施態様を有する。
本発明は、こうした知見に基づいて、さらに研究を重ねることで完成に至ったものであり、下記の実施態様を有する。
（Ｉ）ソホロリピッド（ＳＬ）含有組成物
（Ｉ－１）下記の特性を有することを特徴とするＳＬ含有組成物：
（Ａ）ラクトン型ＳＬの含有量：ＳＬ総量１００質量％あたり、４５～８１質量％、
（Ｂ）オレイン酸－ジアセチルラクトン型ＳＬの含有量：ラクトン型ＳＬ総量１００質量％あたり、９５質量％以下。
（Ｉ－２）下記の特性を有する、（Ｉ－１）に記載するＳＬ含有組成物：
（Ｃ）ヘキサン抽出物の含有量：乾燥重量換算で６質量％以下。
（Ｉ－３）下記の特性を有する、（Ｉ－１）または（Ｉ－２）に記載するＳＬ含有組成物：
（Ｄ）水分量：５５質量％以下。
（Ｉ－４）さらに下記（Ｅ）及び（Ｆ）の少なくとも１つの特性を有することを特徴とする、（Ｉ－１）～（Ｉ－３）のいずれかに記載するＳＬ含有組成物：
（Ｅ）酸型ＳＬの含有量：ＳＬ総量１００質量％あたり、１０～５０質量％、
（Ｆ）二量体型ＳＬの含有量：ＳＬ総量１００質量％あたり、０．１～４０質量％。
（Ｉ－５）水分量を５０質量％に調整し、－５℃条件下で７２時間静置させた後の品温－５℃のＳＬ含有組成物の粘度が１４９０ｍＰａ・ｓ以上（ＴＶＢ－１０Ｍ形粘度計、測定時間１分間）である、（Ｉ－１）～（Ｉ－４）のいずれかに記載するＳＬ含有組成物。
（Ｉ－１）下記の特性を有することを特徴とするＳＬ含有組成物：
（Ａ）ラクトン型ＳＬの含有量：ＳＬ総量１００質量％あたり、４５～８１質量％、
（Ｂ）オレイン酸－ジアセチルラクトン型ＳＬの含有量：ラクトン型ＳＬ総量１００質量％あたり、９５質量％以下。
（Ｉ－２）下記の特性を有する、（Ｉ－１）に記載するＳＬ含有組成物：
（Ｃ）ヘキサン抽出物の含有量：乾燥重量換算で６質量％以下。
（Ｉ－３）下記の特性を有する、（Ｉ－１）または（Ｉ－２）に記載するＳＬ含有組成物：
（Ｄ）水分量：５５質量％以下。
（Ｉ－４）さらに下記（Ｅ）及び（Ｆ）の少なくとも１つの特性を有することを特徴とする、（Ｉ－１）～（Ｉ－３）のいずれかに記載するＳＬ含有組成物：
（Ｅ）酸型ＳＬの含有量：ＳＬ総量１００質量％あたり、１０～５０質量％、
（Ｆ）二量体型ＳＬの含有量：ＳＬ総量１００質量％あたり、０．１～４０質量％。
（Ｉ－５）水分量を５０質量％に調整し、－５℃条件下で７２時間静置させた後の品温－５℃のＳＬ含有組成物の粘度が１４９０ｍＰａ・ｓ以上（ＴＶＢ－１０Ｍ形粘度計、測定時間１分間）である、（Ｉ－１）～（Ｉ－４）のいずれかに記載するＳＬ含有組成物。
（Ｉ－６）下記の特性を有する、（Ｉ－１）～（Ｉ－５）のいずれかに記載するＳＬ含有組成物：
（Ａ）ラクトン型ＳＬの含有量：ＳＬ総量１００質量％あたり、５８～８１質量％。
（Ｉ－７）下記の特性を有する、（Ｉ－６）に記載するＳＬ含有組成物：
（Ｄ）水分量：４５質量％以下。
（Ｉ－８）さらに下記（Ｅ）及び（Ｆ）の少なくとも１つの特性を有することを特徴とする、（Ｉ－６）または（Ｉ－７）に記載するＳＬ含有組成物：
（Ｅ）酸型ＳＬの含有量：ＳＬ総量１００質量％あたり、１５～２５質量％、
（Ｆ）二量体型ＳＬの含有量：ＳＬ総量１００質量％あたり、５～２５質量％。
（Ｉ－９）水分量を５０質量％に調整し、－５℃条件下で７２時間静置させた後の品温－５℃のＳＬ含有組成物の粘度が８１８０ｍＰａ・ｓ以上（ＴＶＢ－１０Ｍ形粘度計、測定時間１分間）である、（Ｉ－６）～（Ｉ－８）のいずれかに記載するＳＬ含有組成物。
（Ａ）ラクトン型ＳＬの含有量：ＳＬ総量１００質量％あたり、５８～８１質量％。
（Ｉ－７）下記の特性を有する、（Ｉ－６）に記載するＳＬ含有組成物：
（Ｄ）水分量：４５質量％以下。
（Ｉ－８）さらに下記（Ｅ）及び（Ｆ）の少なくとも１つの特性を有することを特徴とする、（Ｉ－６）または（Ｉ－７）に記載するＳＬ含有組成物：
（Ｅ）酸型ＳＬの含有量：ＳＬ総量１００質量％あたり、１５～２５質量％、
（Ｆ）二量体型ＳＬの含有量：ＳＬ総量１００質量％あたり、５～２５質量％。
（Ｉ－９）水分量を５０質量％に調整し、－５℃条件下で７２時間静置させた後の品温－５℃のＳＬ含有組成物の粘度が８１８０ｍＰａ・ｓ以上（ＴＶＢ－１０Ｍ形粘度計、測定時間１分間）である、（Ｉ－６）～（Ｉ－８）のいずれかに記載するＳＬ含有組成物。
（ＩＩ）ＳＬ含有組成物の製造方法１
（ＩＩ－１）下記（Ａ）～（Ｂ）または（Ａ）～（Ｃ）の特性を有するＳＬ含有組成物の製造方法であって、
（Ａ）ラクトン型ＳＬの含有量：ＳＬ総量１００質量％あたり、４５～８１質量％、
（Ｂ）オレイン酸－ジアセチルラクトン型ＳＬの含有量：ラクトン型ＳＬ総量１００質量％あたり、９５質量％以下、
（Ｃ）ヘキサン抽出物の含有量：乾燥重量換算で６質量％以下；
当該製造方法は、ＳＬ産生酵母を疎水性基質及び親水性基質を含む培地中で培養する工程を有し、
前記疎水性基質は、脂肪酸だけであるか、または脂肪酸と融点３０℃以下の植物油を含有するものであり、
培地中に含まれる前記脂肪酸の総量または融点３０℃以下の植物油を含有する場合は脂肪酸と当該植物油の総量１００質量％中の遊離脂肪酸の割合は２０質量％以上、好ましくは３０質量％以上であることを特徴とする、
前記ＳＬ含有組成物の製造方法。
（ＩＩ－２）培養初期の培養物のｐＨが４～５である、（ＩＩ－１）に記載する製造方法。
（ＩＩ－３）培養期間中に培養物のｐＨを制御しないことを特徴とする、（ＩＩ－２）に記載する製造方法。
（ＩＩ－４）培養期間中の通気撹拌培養条件を、培養物への酸素供給量が、見掛けの酸素移動容量係数（kLa）に換算して１４５（l/hr）以上、好ましくは２００（l/hr）以上、より好ましくは５００（l/hr）以上、制限さればないものの１２００（l/hr）以下に設定する、（ＩＩ－１）～（ＩＩ－３）のいずれかに記載する製造方法。
（ＩＩ－５）前記ＳＬ含有組成物が、さらに下記（Ｅ）及び（Ｆ）の少なくとも１つの特性を有するものである、（ＩＩ－１）～（ＩＩ－４）のいずれかに記載する製造方法：
（Ｅ）酸型ＳＬの含有量：ＳＬ総量１００質量％あたり、１０～５０質量％、
（Ｆ）二量体型ＳＬの含有量：ＳＬ総量１００質量％あたり、０．１～４０質量％。
（ＩＩ－６）前記ＳＬ含有組成物が、水分量を５０質量％に調整し、－５℃条件下で７２時間静置させた後の品温－５℃の粘度が１４９０ｍＰａ・ｓ以上（ＴＶＢ－１０Ｍ形粘度計、測定時間１分間）であるものである、（ＩＩ－１）～（ＩＩ－５）のいずれかに記載する製造方法。
（ＩＩ－１）下記（Ａ）～（Ｂ）または（Ａ）～（Ｃ）の特性を有するＳＬ含有組成物の製造方法であって、
（Ａ）ラクトン型ＳＬの含有量：ＳＬ総量１００質量％あたり、４５～８１質量％、
（Ｂ）オレイン酸－ジアセチルラクトン型ＳＬの含有量：ラクトン型ＳＬ総量１００質量％あたり、９５質量％以下、
（Ｃ）ヘキサン抽出物の含有量：乾燥重量換算で６質量％以下；
当該製造方法は、ＳＬ産生酵母を疎水性基質及び親水性基質を含む培地中で培養する工程を有し、
前記疎水性基質は、脂肪酸だけであるか、または脂肪酸と融点３０℃以下の植物油を含有するものであり、
培地中に含まれる前記脂肪酸の総量または融点３０℃以下の植物油を含有する場合は脂肪酸と当該植物油の総量１００質量％中の遊離脂肪酸の割合は２０質量％以上、好ましくは３０質量％以上であることを特徴とする、
前記ＳＬ含有組成物の製造方法。
（ＩＩ－２）培養初期の培養物のｐＨが４～５である、（ＩＩ－１）に記載する製造方法。
（ＩＩ－３）培養期間中に培養物のｐＨを制御しないことを特徴とする、（ＩＩ－２）に記載する製造方法。
（ＩＩ－４）培養期間中の通気撹拌培養条件を、培養物への酸素供給量が、見掛けの酸素移動容量係数（kLa）に換算して１４５（l/hr）以上、好ましくは２００（l/hr）以上、より好ましくは５００（l/hr）以上、制限さればないものの１２００（l/hr）以下に設定する、（ＩＩ－１）～（ＩＩ－３）のいずれかに記載する製造方法。
（ＩＩ－５）前記ＳＬ含有組成物が、さらに下記（Ｅ）及び（Ｆ）の少なくとも１つの特性を有するものである、（ＩＩ－１）～（ＩＩ－４）のいずれかに記載する製造方法：
（Ｅ）酸型ＳＬの含有量：ＳＬ総量１００質量％あたり、１０～５０質量％、
（Ｆ）二量体型ＳＬの含有量：ＳＬ総量１００質量％あたり、０．１～４０質量％。
（ＩＩ－６）前記ＳＬ含有組成物が、水分量を５０質量％に調整し、－５℃条件下で７２時間静置させた後の品温－５℃の粘度が１４９０ｍＰａ・ｓ以上（ＴＶＢ－１０Ｍ形粘度計、測定時間１分間）であるものである、（ＩＩ－１）～（ＩＩ－５）のいずれかに記載する製造方法。
（ＩＩＩ）ＳＬ含有組成物の製造方法２
（ＩＩＩ－１）下記（Ａ）～（Ｂ）または（Ａ）～（Ｃ）の特性を有するＳＬ含有組成物の製造方法であって、
（Ａ）ラクトン型ＳＬの含有量：ＳＬ総量１００質量％あたり、４５～８１質量％、好ましくは５５～８１質量％、
（Ｂ）オレイン酸－ジアセチルラクトン型ＳＬの含有量：ラクトン型ＳＬ総量１００質量％あたり、９５質量％以下、
（Ｃ）ヘキサン抽出物の含有量：乾燥重量換算で６質量％以下；
当該製造方法は、ＳＬ産生酵母を疎水性基質及び親水性基質を含む培地中で培養する工程を有し、
前記疎水性基質は融点３０℃以下の植物油だけであり、
培養中の培養物のｐＨを４．５～５に調整することを特徴とする、
前記ＳＬ含有組成物の製造方法。
（ＩＩＩ－２）培養期間中の通気撹拌培養条件を、培養物への酸素供給量が、見掛けの酸素移動容量係数（kLa）に換算して２００（l/hr）以上、制限されないものの１２００（l/hr）以下に設定する、（ＩＩＩ－１）に記載する製造方法。
（ＩＩＩ－３）前記ＳＬ含有組成物が、さらに下記（Ｅ）及び（Ｆ）の少なくとも１つの特性を有するものである、（ＩＩＩ－１）または（ＩＩＩ－２）に記載する製造方法：（Ｅ）酸型ＳＬの含有量：ＳＬ総量１００質量％あたり、１０～５０質量％、好ましくは１５～３０質量％、
（Ｆ）二量体型ＳＬの含有量：ＳＬ総量１００質量％あたり、０．１～４０質量％、好ましくは１～３０質量％。
（ＩＩＩ－４）前記ＳＬ含有組成物が、水分量を５０質量％に調整し、－５℃条件下で７２時間静置させた後の品温－５℃の粘度が１４９０ｍＰａ・ｓ以上、好ましくは８０００ｍＰａ・ｓ以上（ＴＶＢ－１０Ｍ形粘度計、測定時間１分間）である、（ＩＩＩ－１）～（ＩＩＩ－３）のいずれかに記載する製造方法。
（ＩＩＩ－１）下記（Ａ）～（Ｂ）または（Ａ）～（Ｃ）の特性を有するＳＬ含有組成物の製造方法であって、
（Ａ）ラクトン型ＳＬの含有量：ＳＬ総量１００質量％あたり、４５～８１質量％、好ましくは５５～８１質量％、
（Ｂ）オレイン酸－ジアセチルラクトン型ＳＬの含有量：ラクトン型ＳＬ総量１００質量％あたり、９５質量％以下、
（Ｃ）ヘキサン抽出物の含有量：乾燥重量換算で６質量％以下；
当該製造方法は、ＳＬ産生酵母を疎水性基質及び親水性基質を含む培地中で培養する工程を有し、
前記疎水性基質は融点３０℃以下の植物油だけであり、
培養中の培養物のｐＨを４．５～５に調整することを特徴とする、
前記ＳＬ含有組成物の製造方法。
（ＩＩＩ－２）培養期間中の通気撹拌培養条件を、培養物への酸素供給量が、見掛けの酸素移動容量係数（kLa）に換算して２００（l/hr）以上、制限されないものの１２００（l/hr）以下に設定する、（ＩＩＩ－１）に記載する製造方法。
（ＩＩＩ－３）前記ＳＬ含有組成物が、さらに下記（Ｅ）及び（Ｆ）の少なくとも１つの特性を有するものである、（ＩＩＩ－１）または（ＩＩＩ－２）に記載する製造方法：（Ｅ）酸型ＳＬの含有量：ＳＬ総量１００質量％あたり、１０～５０質量％、好ましくは１５～３０質量％、
（Ｆ）二量体型ＳＬの含有量：ＳＬ総量１００質量％あたり、０．１～４０質量％、好ましくは１～３０質量％。
（ＩＩＩ－４）前記ＳＬ含有組成物が、水分量を５０質量％に調整し、－５℃条件下で７２時間静置させた後の品温－５℃の粘度が１４９０ｍＰａ・ｓ以上、好ましくは８０００ｍＰａ・ｓ以上（ＴＶＢ－１０Ｍ形粘度計、測定時間１分間）である、（ＩＩＩ－１）～（ＩＩＩ－３）のいずれかに記載する製造方法。
（ＩＶ）ＳＬ含有組成物の製造方法３
（ＩＶ－１）下記（Ａ）～（Ｂ）または（Ａ）～（Ｃ）の特性を有するＳＬ含有組成物の製造方法であって、
（Ａ）ラクトン型ＳＬの含有量：ＳＬ総量１００質量％あたり、４５～８１質量％、好ましくは５０～８０質量％、
（Ｂ）オレイン酸－ジアセチルラクトン型ＳＬの含有量：ラクトン型ＳＬ総量１００質量％あたり、９５質量％以下、
（Ｃ）ヘキサン抽出物の含有量：乾燥重量換算で６質量％以下；
前記製造方法は、ＳＬ産生酵母を疎水性基質及び親水性基質を含む培地中で培養する工程を有し、
前記疎水性基質は、融点３０℃以下の植物油だけであるか、または融点３０℃以下の植物油と脂肪酸を含有するものであり、
培地中に含まれる前記融点３０℃以下の植物油の総量または脂肪酸を含む場合は融点３０℃以下の植物油と脂肪酸の総量１００質量％中の遊離脂肪酸の割合は０～２０質量％未満であり、
培養期間中の通気撹拌培養条件を、培養物への酸素供給量が、見掛けの酸素移動容量係数（kLa）に換算して１４５（l/hr）以下になるように設定することを特徴とする、ＳＬ含有組成物の製造方法。
（ＩＶ－２）培養初期の培養物のｐＨが４～５である、（ＩＶ－１）に記載する製造方法。
（ＩＶ－３）培養期間中に培養物のｐＨを制御しないことを特徴とする、（ＩＶ－２）に記載する製造方法。
（ＩＶ－４）前記ＳＬ含有組成物が、さらに下記（Ｅ）及び（Ｆ）の少なくとも１つの特性を有するものである、（ＩＶ－１）～（ＩＶ－３）のいずれかに記載する製造方法：（Ｅ）酸型ＳＬの含有量：ＳＬ総量１００質量％あたり、１０～５０質量％、好ましくは１０～２０質量％、
（Ｆ）二量体型ＳＬの含有量：ＳＬ総量１００質量％あたり、０．１～４０質量％、好ましくは５～３０質量％。
（ＩＶ－５）前記ＳＬ含有組成物が、水分量を５０質量％に調整し、－５℃条件下で７２時間静置させた後の品温－５℃の粘度が１４９０ｍＰａ・ｓ以上、好ましくは３０００ｍＰａ・ｓ以上（ＴＶＢ－１０Ｍ形粘度計測定時間１分間）である、（ＩＶ－１）～（ＩＶ－４）のいずれかに記載する製造方法。
（ＩＶ－１）下記（Ａ）～（Ｂ）または（Ａ）～（Ｃ）の特性を有するＳＬ含有組成物の製造方法であって、
（Ａ）ラクトン型ＳＬの含有量：ＳＬ総量１００質量％あたり、４５～８１質量％、好ましくは５０～８０質量％、
（Ｂ）オレイン酸－ジアセチルラクトン型ＳＬの含有量：ラクトン型ＳＬ総量１００質量％あたり、９５質量％以下、
（Ｃ）ヘキサン抽出物の含有量：乾燥重量換算で６質量％以下；
前記製造方法は、ＳＬ産生酵母を疎水性基質及び親水性基質を含む培地中で培養する工程を有し、
前記疎水性基質は、融点３０℃以下の植物油だけであるか、または融点３０℃以下の植物油と脂肪酸を含有するものであり、
培地中に含まれる前記融点３０℃以下の植物油の総量または脂肪酸を含む場合は融点３０℃以下の植物油と脂肪酸の総量１００質量％中の遊離脂肪酸の割合は０～２０質量％未満であり、
培養期間中の通気撹拌培養条件を、培養物への酸素供給量が、見掛けの酸素移動容量係数（kLa）に換算して１４５（l/hr）以下になるように設定することを特徴とする、ＳＬ含有組成物の製造方法。
（ＩＶ－２）培養初期の培養物のｐＨが４～５である、（ＩＶ－１）に記載する製造方法。
（ＩＶ－３）培養期間中に培養物のｐＨを制御しないことを特徴とする、（ＩＶ－２）に記載する製造方法。
（ＩＶ－４）前記ＳＬ含有組成物が、さらに下記（Ｅ）及び（Ｆ）の少なくとも１つの特性を有するものである、（ＩＶ－１）～（ＩＶ－３）のいずれかに記載する製造方法：（Ｅ）酸型ＳＬの含有量：ＳＬ総量１００質量％あたり、１０～５０質量％、好ましくは１０～２０質量％、
（Ｆ）二量体型ＳＬの含有量：ＳＬ総量１００質量％あたり、０．１～４０質量％、好ましくは５～３０質量％。
（ＩＶ－５）前記ＳＬ含有組成物が、水分量を５０質量％に調整し、－５℃条件下で７２時間静置させた後の品温－５℃の粘度が１４９０ｍＰａ・ｓ以上、好ましくは３０００ｍＰａ・ｓ以上（ＴＶＢ－１０Ｍ形粘度計測定時間１分間）である、（ＩＶ－１）～（ＩＶ－４）のいずれかに記載する製造方法。
本発明によれば、良好な沈降性を有し、取り扱いがよいＳＬ含有組成物を製造し、提供することができる。また、本発明によれば、－５℃の低温条件においた場合でも固化せず、良好な流動性を備えているＳＬ含有組成物を製造し、提供することができる。
（Ｉ）ソホロリピッド（ＳＬ）含有組成物
（１）ソホロリピッド（ＳＬ）
ソホロリピッド（ＳＬ）とは、ソホロース又はヒドロキシ基が一部アセチル化またはエステル化したソホロースと、ヒドロキシ脂肪酸とからなる糖脂質である。なお、ソホロースとは、β１→２結合した２分子のブドウ糖からなる糖である。ヒドロキシ脂肪酸とは、ヒドロキシ基を有する脂肪酸である。また、ＳＬは、ヒドロキシ脂肪酸のカルボキシ基が遊離した酸型と、分子内のソホロースが結合したラクトン型とに大別される。ある種の酵母（ＳＬ産生酵母）の発酵によって得られるＳＬは、通常、下記一般式（１）で示される酸型ＳＬと一般式（２）で示されるラクトン型ＳＬの混合物であり、脂肪酸鎖長（Ｒ２）が異なるもの、ソホロースの６’（Ｒ３）及び６”位（Ｒ４）がアセチル化あるいはプロトン化したものや、ソホロースの３’、 ４’、 ２”、 ３” 及び４”位（Ｒ５）の１箇所がエステル化したものなど、３０種以上の構造同族体の集合体として得られる。
（１）ソホロリピッド（ＳＬ）
ソホロリピッド（ＳＬ）とは、ソホロース又はヒドロキシ基が一部アセチル化またはエステル化したソホロースと、ヒドロキシ脂肪酸とからなる糖脂質である。なお、ソホロースとは、β１→２結合した２分子のブドウ糖からなる糖である。ヒドロキシ脂肪酸とは、ヒドロキシ基を有する脂肪酸である。また、ＳＬは、ヒドロキシ脂肪酸のカルボキシ基が遊離した酸型と、分子内のソホロースが結合したラクトン型とに大別される。ある種の酵母（ＳＬ産生酵母）の発酵によって得られるＳＬは、通常、下記一般式（１）で示される酸型ＳＬと一般式（２）で示されるラクトン型ＳＬの混合物であり、脂肪酸鎖長（Ｒ２）が異なるもの、ソホロースの６’（Ｒ３）及び６”位（Ｒ４）がアセチル化あるいはプロトン化したものや、ソホロースの３’、 ４’、 ２”、 ３” 及び４”位（Ｒ５）の１箇所がエステル化したものなど、３０種以上の構造同族体の集合体として得られる。
［酸型ＳＬ］
〔式（１）中、Ｒ１は水素原子またはメチル基を示す；
Ｒ３及びＲ４は、同一または異なって、水素原子またはアセチル基を示す；
Ｒ５は、すべてが水素原子であるか、または、５つのＲ５のうち、１つはヒドロキシ基を有することのある飽和脂肪酸残基またはヒドロキシ基を有することのある不飽和脂肪酸残基であり、残りは水素原子である；
Ｒ２は、飽和脂肪族炭化水素鎖、又は二重結合を少なくとも１つ有する不飽和脂肪族炭化水素鎖であり、一以上の置換基を有していてもよい；
Ｒ６はヒドロキシ基を示す。〕。
Ｒ３及びＲ４は、同一または異なって、水素原子またはアセチル基を示す；
Ｒ５は、すべてが水素原子であるか、または、５つのＲ５のうち、１つはヒドロキシ基を有することのある飽和脂肪酸残基またはヒドロキシ基を有することのある不飽和脂肪酸残基であり、残りは水素原子である；
Ｒ２は、飽和脂肪族炭化水素鎖、又は二重結合を少なくとも１つ有する不飽和脂肪族炭化水素鎖であり、一以上の置換基を有していてもよい；
Ｒ６はヒドロキシ基を示す。〕。
本明細書では、上記式（１）においてＲ５のすべてが水素原子である酸型ＳＬを「酸型ＳＬａ」と、それ以外の酸型ＳＬを「酸型ＳＬｂ」と称する。両者を特に区別することなく総称する場合は「酸型ＳＬ」と記載する。なお、当該酸型ＳＬは単量体であり、後述する二量体型ＳＬに対して「単量体の酸型ＳＬ」と称する場合がある。
［ラクトン型ＳＬ］
〔式（２）中、Ｒ１～Ｒ４は、式（１）で規定する定義と同じである。〕。
本明細書では、上記式（２）においてＲ３及びＲ４がいずれもアセチル基であるラクトン型ＳＬを、「ジアセチルラクトン型ＳＬ」と称する。アセチル基の有無を特に区別することなく総称する場合は「ラクトン型ＳＬ」と記載する。当該ラクトン型ＳＬは単量体であり、後述する二量体型ＳＬに対して「単量体のラクトン型ＳＬ」と称する場合がある。
またＳＬ産生酵母の発酵によって得られるＳＬには、前記式（１）で示される酸型ＳＬのうち、１つのＲ５がヒドロキシ基を有することのある飽和脂肪酸残基またはヒドロキシ基を有することのある不飽和脂肪酸残基である酸型ＳＬのＣ－１位のＲ６が、下式（３）で示される酸型ＳＬのＲ７のいずれか１つと合一して単結合を形成してなる二量体が含まれていてもよい。
［二量体型ＳＬ］
〔式（３）中、Ｒ１’は水素原子またはメチル基を示す；
Ｒ３’及びＲ４’は、同一または異なって、水素原子またはアセチル基を示す；
Ｒ２’は、飽和脂肪族炭化水素鎖、又は二重結合を少なくとも１つ有する不飽和脂肪族炭化水素鎖であり、一以上の置換基を有していてもよい；
Ｒ７のうち一つは、式（１）で示す酸型ＳＬのＲ６と合一して単結合を形成しており、残りはすべて水素原子である。〕
Ｒ３’及びＲ４’は、同一または異なって、水素原子またはアセチル基を示す；
Ｒ２’は、飽和脂肪族炭化水素鎖、又は二重結合を少なくとも１つ有する不飽和脂肪族炭化水素鎖であり、一以上の置換基を有していてもよい；
Ｒ７のうち一つは、式（１）で示す酸型ＳＬのＲ６と合一して単結合を形成しており、残りはすべて水素原子である。〕
前記一般式（１）～（３）において、Ｒ２またはＲ２’で示す飽和または不飽和脂肪族炭化水素鎖の炭素数は、制限されないが、通常９～２０、好ましくは９～１８、より好ましくは１１～１６、特に好ましくは１４～１６を例示することができる。飽和脂肪族炭化水素鎖としては直鎖または分岐鎖のアルキレン基を挙げることができる。好ましくは直鎖のアルキレン基である。不飽和脂肪族炭化水素鎖としては１～３の二重結合を有するアルケニレン基を挙げることができる。好ましくは１～２の二重結合を有するアルケニレン基であり、より好ましくは１の二重結合を有するアルケニレン基である。Ｒ２またはＲ２’で示す飽和または不飽和脂肪族炭化水素鎖の置換基は、特に限定されないが、例えば、ハロゲン原子、水酸基、低級（Ｃ１～６）アルキル基、ハロ低級（Ｃ１～６）アルキル基、ヒドロキシ低級（Ｃ１～６）アルキル基、ハロ低級（Ｃ１～６）アルコキシ基等が挙げられる。ここでハロゲン原子またはアルキル基やアルコキシ基に結合するハロゲン原子としては、フッ素原子、塩素原子、臭素原子及びヨウ素原子が挙げられる。
前記一般式（１）において、Ｒ５で示す飽和脂肪酸残基としては、炭素数１２～２０の直鎖脂肪酸残基（ラウリン酸残基、ミリスチン酸残基、ペンタデシル酸残基、パルミチン酸残基、マルガリン酸残基、ステアリン酸残基、アラキジン残基）を挙げることができる。好ましくは炭素数１４～２０、より好ましくは炭素数１６～２０、さらに好ましくは炭素数１６～１８の直鎖脂肪酸残基であり、特に好ましくは炭素数１６のパルミチン酸残基及び炭素数１８のステアリン酸残基である。また不飽和脂肪酸残基としては、二重結合を１～３つ有する炭素数１２～２０の直鎖脂肪酸残基を挙げることができる。二重結合の数として、好ましくは１～２であり、より好ましくは１である。また炭素数として好ましくは１６～２０であり、より好ましくは１６～１８、特に好ましくは１８である。好適な不飽和脂肪酸残基としては、二重結合を１つ有する炭素数１６のパルミトレイン酸残基；二重結合を１つ有する炭素数１８のオレイン酸残基またはバクセン酸残基（好ましくはオレイン酸残基）；二重結合を２つ有する炭素数１８のリノール酸残基；二重結合を３つ有する炭素数１８の（9,12,15）リノレン酸残基、（6,9,12）リノレン酸残基、及びエレオステアリン酸残基；二重結合を２つ有する炭素数２０の（9,12,15）リノレン酸残基、（6,9,12）リノレン酸残基、及びエレオステアリン酸残基を挙げることができる。より好ましくは二重結合を１つ有する炭素数１６のパルミトレイン酸残基、及び二重結合を１つ有する炭素数１８のオレイン酸残基であり、特に好ましくは二重結合を１つ有する炭素数１８のオレイン酸残基である。
これらの脂肪酸残基は、ヒドロキシ基を有していてもよいし、有していなくてもよい。ヒドロキシ基を有する場合、ヒドロキシ基の数としては１～２、好ましくは１を挙げることができる。また脂肪酸残基上のヒドロキシ基の位置としては、ω位またはω－１位を挙げることができる。酸型ＳＬ（１）において、Ｒ５がヒドロキシ基を有することのある飽和脂肪酸残基またはヒドロキシ基を有することのある不飽和脂肪酸残基である場合の－ＯＲ５の位置は、ソホロース環の３’位、４’位、２"位、３"位、及び４"位のいずれであってもよい。つまり、酸型ＳＬ（１）には、これらのいずれか１つの位置に、上記脂肪酸残基であるＲ５を有する－ＯＲ５基が結合してなるＳＬ化合物が含まれる。
前記一般式（２）において、Ｒ３及びＲ４がいずれもアセチル基であるジアセチルラクトン型ＳＬの中には、Ｒ１がメチル基、Ｒ２が１つの二重結合を有する炭素数１５のアルケニレン基であるＳＬ化合物が含まれる。当該ＳＬ化合物の中でも、特に、Ｒ２が、Ｒ１に結合した炭素原子を１位とした場合、８位と９位に二重結合を有する炭素数１５のアルケニレン基である化合物が好ましく、本発明ではこれを「オレイン酸－ジアセチルラクトン型ＳＬ」と称する。
前記ＳＬ産生酵母としては、キャンディダ・ボンビコーラ（Candida bombicola）を好適に挙げることができる。なお、キャンディダ属は、現在スタメレラ（Starmerella）属という名称に変更されている。当該酵母は、ＳＬを著量生産することが知られている公知のＳＬ産生酵母である〔Canadian Journal of Chemistry, 39,846(1961)（注：当該文献に記載されているトルロプシス属は、キャンディダ属に該当するが、上記するように、現在スタメレラ（Starmerella）属に分類されている。）、Applied and Environmental Microbiology, 47,173(1984)など］。なお、キャンディダ（スタメレラ）・ボンビコーラは生物資源バンクであるＡＴＣＣ(American Type Culture Collection)に登録されており、そこから入手することができる（Candida bombicola ATCC22214など）。また、ＳＬを産生することが知られているキャンディダ属（スタメレラ属）に属する他のＳＬ産生酵母も使用することができる。かかるＳＬ産生酵母として、例えばキャンディダ・マグノリエ（Candida magnoliae）、キャンディダ・グロペンギッセリ（Candida gropengisseri）、及びキャンディダ・アピコーラ（Candida apicola）、キャンディダ・ペトロフィラム（Candida petrophilum）、キャンディダ・ボゴリエンシス（Candida bogoriensis）、キャンディダ・バチスタエ（Candida batistae）を挙げることができる。
（２）ＳＬ含有組成物
本発明が対象とするＳＬ含有組成物は、前述するＳＬのうち、少なくとも酸型ＳＬ及びラクトン型ＳＬを含有するものである。好ましくは、ラクトン型ＳＬ及びオレイン酸－ジアセチルラクトン型ＳＬを一定の割合で含有するものであり、さらに好ましくは酸型ＳＬ及び二量体型ＳＬを一定の割合で含有するものである。また本発明が対象とするＳＬ含有組成物には、一定の割合で水を含有する含水物が含まれる。
本発明が対象とするＳＬ含有組成物は、前述するＳＬのうち、少なくとも酸型ＳＬ及びラクトン型ＳＬを含有するものである。好ましくは、ラクトン型ＳＬ及びオレイン酸－ジアセチルラクトン型ＳＬを一定の割合で含有するものであり、さらに好ましくは酸型ＳＬ及び二量体型ＳＬを一定の割合で含有するものである。また本発明が対象とするＳＬ含有組成物には、一定の割合で水を含有する含水物が含まれる。
具体的には、本発明のＳＬ含有組成物には、下記（Ａ）及び（Ｂ）、並びに（Ａ）～（Ｃ）の特性を有する組成物が含まれる：
（Ａ）ラクトン型ＳＬの含有量：ＳＬ総量１００質量％あたり、４５～８１質量％、
（Ｂ）オレイン酸－ジアセチルラクトン型ＳＬの含有量：ラクトン型ＳＬ総量１００質量％あたり、９５質量％以下、
（Ｃ）ヘキサン抽出物の含有量：乾燥重量換算で６質量％以下。
（Ａ）ラクトン型ＳＬの含有量：ＳＬ総量１００質量％あたり、４５～８１質量％、
（Ｂ）オレイン酸－ジアセチルラクトン型ＳＬの含有量：ラクトン型ＳＬ総量１００質量％あたり、９５質量％以下、
（Ｃ）ヘキサン抽出物の含有量：乾燥重量換算で６質量％以下。
前記ラクトン型ＳＬの含有量として、制限されないものの、ＳＬ総量１００質量％あたり、好ましくは４５～７８質量％、より好ましくは５０～７８質量％を例示することができる。
また前記オレイン酸－ジアセチルラクトン型ＳＬの含有量の下限値としては、制限されないものの、ラクトン型ＳＬ総量１００質量％あたり１０質量％を挙げることができる。当該含有量の範囲として、好ましくは４０～９５質量％、より好ましくは５５～９５質量％を例示することができる。
ヘキサン抽出物の含有量として、制限されないものの、乾燥重量換算で６質量％以下を挙げることができる。好ましくは０～５質量％、より好ましくは０～２．２質量％を例示することができる。ＳＬ含有組成物中のヘキサン抽出物の含有量は、室温（２０±５℃）条件で、ｎ－ヘキサンを用いてＳＬ含有組成物から抽出して得られるものの乾燥物の重量から求めることができる。その詳細は後述する実施例の欄に記載する。
本発明のＳＬ含有組成物には、また下記の特性を有する組成物が含まれる：
（Ｄ）水分量：５５質量％以下。
本発明のＳＬ含有組成物は、水を含まない乾燥物であってもよいし、また水を含有する含水物であってもよい。好ましくは水を５２質量％以下の割合で含有する含水物である。水分量の下限値としては、制限されないものの、３０質量％を挙げることができる。好ましくは３５質量％以上、より好ましくは４０質量％以上である。ＳＬ含有組成物（含水物）に含まれる水分量として好ましくは３５～５５質量％、より好ましくは４０～５５質量％である。ＳＬ含有組成物中の水分量は、ＳＬ含有組成物を１０５℃の条件下で３時間乾燥処理した前後の重量差から算出することができる。その詳細は後述する実施例の欄に記載する。
（Ｄ）水分量：５５質量％以下。
本発明のＳＬ含有組成物は、水を含まない乾燥物であってもよいし、また水を含有する含水物であってもよい。好ましくは水を５２質量％以下の割合で含有する含水物である。水分量の下限値としては、制限されないものの、３０質量％を挙げることができる。好ましくは３５質量％以上、より好ましくは４０質量％以上である。ＳＬ含有組成物（含水物）に含まれる水分量として好ましくは３５～５５質量％、より好ましくは４０～５５質量％である。ＳＬ含有組成物中の水分量は、ＳＬ含有組成物を１０５℃の条件下で３時間乾燥処理した前後の重量差から算出することができる。その詳細は後述する実施例の欄に記載する。
本発明のＳＬ含有組成物には、前述する（Ａ）～（Ｂ）の特性、（Ａ）～（Ｃ）の特性、または（Ａ）～（Ｄ）の特性に加えて、さらに下記の特性を有する組成物が含まれる：（Ｅ）酸型ＳＬの含有量：ＳＬ総量１００質量％あたり、１０～５０質量％、
（Ｆ）二量体型ＳＬの含有量：ＳＬ総量１００質量％あたり、０．１～４０質量％。
（Ｆ）二量体型ＳＬの含有量：ＳＬ総量１００質量％あたり、０．１～４０質量％。
前記酸型ＳＬの含有量として、制限されないものの、ＳＬ総量１００質量％あたり、好ましくは１３～５０質量％、より好ましくは１５～４６質量％を例示することができる。 また前記二量体型ＳＬの含有量としては、制限されないものの、ＳＬ総量１００質量％あたり、好ましくは０．５～３０質量％、より好ましくは１～３０質量％を例示することができる。
前述する（Ａ）、（Ｂ）、（Ｅ）、及び（Ｆ）は、対象とするＳＬ含有組成物を、乾燥残分が約１％になるようにエタノール（99.5v%）を用いて希釈調製し、調製したエタノール希釈物を下記表１に記載する条件の高速液体クロマトグラフィー（HPLC）に供し、得られる各ＳＬのピーク面積から算出することができる。なお、乾燥残分の求め方は後述する実施例の欄に記載する。
表１に記載する条件のＨＰＬＣにおいて、単量体の酸型ＳＬは、保持時間１０～２３分（酸型ＳＬａ）及び４５～５８分（酸型ＳＬｂ）の領域に溶出する。単量体のラクトン型ＳＬ（ジアセチルラクトン型ＳＬを含む。以下、同じ。）は、保持時間２３～４０分の領域に溶出する。この領域の特に２８～３３分の領域に現れるピークのうち、最もピーク強度の高いピークは、オレイン酸－ジアセチルラクトン型ＳＬに由来するピークである。二量体型ＳＬは保持時間５８～７０分の領域に溶出する。
ＳＬ含有組成物に含まれる酸型ＳＬ（酸型ＳＬａ、酸型ＳＬｂ）、ラクトン型ＳＬ、及び二量体型ＳＬの質量比は、前記ＨＰＣＬ分析で得られる各ピーク面積の比から算出することがきる。具体的には、各ＳＬ（酸型ＳＬ、ラクトン型ＳＬ、二量体型ＳＬ）のピーク面積の総和１００をＳＬ総量１００質量％とし、それに対する各ＳＬのピーク面積比を算出することで、各ＳＬの質量％を求めることができる。
また、ラクトン型ＳＬ総量１００質量％におけるオレイン酸－ジアセチルラクトン型ＳＬの割合も、前記ＨＰＣＬ分析で得られるピーク面積比から算出することもできる。
本発明のＳＬ含有組成物には、その水分量を５０質量％に調整し、－５℃条件下で７２時間静置させた後の品温－５℃のＳＬ含有組成物の粘度が１４９０ｍＰａ・ｓ以上である組成物が含まれる。制限されないものの、好ましい粘度として２０００ｍＰａ・ｓ以上、より好ましい粘度として２５００ｍＰａ・ｓ以上を挙げることができる。当該粘度の上限は、本発明の効果を有する限り、制限されないものの、例えば２２１３００ｍＰａ・ｓ以下、好ましくは２１０００ｍＰａ・ｓ以下を例示することができる。
なお、当該粘度は、ＴＶＢ－１０Ｍ形粘度計、測定時間１分間の条件で測定することができる。粘度計のローターＮｏ．と撹拌回転速度は、測定試料の粘度に応じて下記のものを採用することができる：
本発明のＳＬ含有組成物は、前述するように所定量のＳＬを含有する。本発明のＳＬ含有組成物は、その製造方法などを特に制限するものではなく、後述するＳＬ産生酵母を培養することで製造されるものも含まれるが、少なくともこれを蒸留水で水分含量が約９１．７質量％になるように調整し、またｐＨを酸性（ｐＨ２．５～３．０）に調整した場合に、中に含まれるＳＬが不溶化して沈降する特性を有することを特徴とする。当該ＳＬ含有組成物の特性を、本発明では「沈降性」という。
ＳＬ含有組成物について、沈降性の評価方法の詳細は、実施例の欄（［物性評価方法］「（２－２）蒸留水中でのＳＬ含有組成物の沈降性」）に記載するが、簡単に説明すると以下の通りである。
乾燥残分を５０％に調整したＳＬ含有組成物（品温２０℃）５ｇに対して蒸留水（品温２０℃）を２５ｇ添加して希釈する（水分量：約９１．７質量％）。希釈物のｐＨが２．５～３．０の範囲でない場合は、ｐＨ調整剤（例えば、塩酸や硫酸等の酸、水酸化ナトリウムや水酸化カリウム等のアルカリ剤）を用いてｐＨを２．５～３．０に調整する。この希釈物を１０秒間撹拌混合した後、２０℃条件下で５分間静置させ、その後、目視で沈降物の有無を確認する。明らかな沈降物（または明らかな分離）が認められる場合に「沈降性あり」と、そうでない場合を「沈降性なし」と判断する。
乾燥残分を５０％に調整したＳＬ含有組成物（品温２０℃）５ｇに対して蒸留水（品温２０℃）を２５ｇ添加して希釈する（水分量：約９１．７質量％）。希釈物のｐＨが２．５～３．０の範囲でない場合は、ｐＨ調整剤（例えば、塩酸や硫酸等の酸、水酸化ナトリウムや水酸化カリウム等のアルカリ剤）を用いてｐＨを２．５～３．０に調整する。この希釈物を１０秒間撹拌混合した後、２０℃条件下で５分間静置させ、その後、目視で沈降物の有無を確認する。明らかな沈降物（または明らかな分離）が認められる場合に「沈降性あり」と、そうでない場合を「沈降性なし」と判断する。
つまり、ＳＬ含有組成物について「沈降性を有する」とは、それを水分量が約９１．７質量％の酸性希釈物（ｐＨ２．５～３．０）に調整した場合にＳＬが不溶化して沈降するような状態でＳＬを含有していることを意味する。当該沈降性を有するＳＬ含有組成物は、蒸留水で希釈する及び／又はｐＨを酸性に調整するなどの簡便な方法により、ＳＬを不溶化し沈降させて回収することができるという点で、取り扱いやすいＳＬ含有組成物ということができる。
なお、後述する実施例（製造例１～４の物性評価結果）に示すように、前記評価方法で「沈降性を有する」と評価されるＳＬ含有組成物は、培養物中でも同様に良好な沈降性を有することが認められる。つまり、前記の評価方法で「沈降性を有する」と評価されるＳＬ含有組成物と同様の組成（ＳＬ総量、ＳＬ組成（％）、ラクトン型ＳＬ中に含まれるオレイン酸－ジアセチルラクトン型ＳＬの割合（％）、又は／及びヘキサン抽出物含量）を有するＳＬ含有組成物をＳＬ産生酵母の培養により製造した場合、当該ＳＬ含有組成物は培養物中で良好な沈降性を有すると考えられる。
本発明のＳＬ含有組成物は、また低温流動性を有することを特徴とする。
ＳＬ含有組成物について、低温流動性の評価方法の詳細は、実施例の欄に記載するが、簡単に説明すると以下の通りである。
ＳＬ含有組成物を蓋付き容器に入れて－５℃の暗所条件下に３日間（７２時間）静置した後、容器を倒置し、３０秒間、内容物の流動性を目視で確認する。測定対象のＳＬ含有組成物の水分量が５０質量％でない場合は、蒸留水を用いて水分量が５０質量％になるように調整する。目視の結果、内容物に流動性が認められる場合に「低温流動性あり」と、そうでない場合を「低温流動性なし」と判断する。
ＳＬ含有組成物について、低温流動性の評価方法の詳細は、実施例の欄に記載するが、簡単に説明すると以下の通りである。
ＳＬ含有組成物を蓋付き容器に入れて－５℃の暗所条件下に３日間（７２時間）静置した後、容器を倒置し、３０秒間、内容物の流動性を目視で確認する。測定対象のＳＬ含有組成物の水分量が５０質量％でない場合は、蒸留水を用いて水分量が５０質量％になるように調整する。目視の結果、内容物に流動性が認められる場合に「低温流動性あり」と、そうでない場合を「低温流動性なし」と判断する。
当該低温流動性を有するＳＬ含有組成物は、低温で固化して流動性がないＳＬ含有組成物と比較して作業の手間がかからず、取り扱いやすいＳＬ含有組成物ということができる。
（ＩＩ）ＳＬ含有組成物の製造方法
本発明のＳＬ含有組成物は、前述する組成及び特性を有するものであればよく、その製造方法は特に制限されるものではない。拘束されることはないが、一例を挙げると、疎水性基質及び親水性基質を含む、水性の液体培地を用いて、ＳＬ産生酵母を所定の条件で培養することで製造することができる。但し、この場合、本発明が対象とするＳＬ含有組成物には、培養によって得られる培養物そのもの（以下、これを「ＳＬ含有培養物」とも称する）は含まれない。
本発明のＳＬ含有組成物は、前述する組成及び特性を有するものであればよく、その製造方法は特に制限されるものではない。拘束されることはないが、一例を挙げると、疎水性基質及び親水性基質を含む、水性の液体培地を用いて、ＳＬ産生酵母を所定の条件で培養することで製造することができる。但し、この場合、本発明が対象とするＳＬ含有組成物には、培養によって得られる培養物そのもの（以下、これを「ＳＬ含有培養物」とも称する）は含まれない。
ここで疎水性基質は培地溶媒として用いる水に対する親和性が低いものであり、制限されないものの、その種類には、好ましくは脂肪酸、及び脂肪酸を構成成分とする植物油が含まれる。脂肪酸としては、炭素数６～１８の飽和又は不飽和脂肪酸を挙げることができる。これらは１種単独で使用しても、また２種以上を組み合わせて使用することもできる。好ましくは炭素数１２～１８の飽和又は不飽和脂肪酸から選択される少なくとも１種の脂肪酸であり、より好ましくは炭素数１６の飽和脂肪酸（パルミチン酸）、及び炭素数１８の飽和又は不飽和脂肪酸（ステアリン酸、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸）から選択される少なくとも１種の脂肪酸である。植物油には、制限されないもの、好ましくはトリグリセリドの構成脂肪酸として炭素数１２～１８の飽和又は不飽和脂肪酸を含有するものが含まれる。かかる植物油としては、大豆油、菜種油、綿実油、ヒマワリ油（ハイリノール、ハイオレイック）、カポック油、胡麻油、コーン油、コメ油、落花生油、ベニバナ油（サフラワー油）（ハイリノール、ハイオレイック）、オリーブ油、アマニ油、キリ油、ヒマシ油、パーム核油、パームオレイン、パームステアリン、及びヤシ油などを挙げることができる。これらはいずれも融点が３０℃以下の植物油である。これらは１種単独で使用しても、また２種以上を組み合わせて使用することもできる。
また、親水性基質は培地溶媒として用いる水に対する親和性が高いものであり、制限されないものの、好ましくは、ＳＬ産生酵母の生育に必要な糖類、及び窒素源を挙げることができる。糖類には、グルコース、フルクトース、及びガラクトース等の単糖類；スクロース、マルトースなどの二糖類等が含まれる。好ましくはグルコース等の単糖類である。窒素源の種類には、酵母エキス、ペプトン、及び尿素等が含まれる。
培地には、本発明の効果を妨げないことを限度として、前述する疎水性基質と親水性基質の他、ＳＬ産生酵母の生育に有用な無機塩（例えば、リン酸塩、マグネシウム塩、ナトリウム塩等）、有機酸（例えば、乳酸、酢酸、クエン酸、プロピオン酸等）、及びビタミン類等を、任意に配合することもできる。
ＳＬ産生酵母を用いたＳＬ含有組成物の製造方法としては、制限されないものの、好ましくは下記に説明する３通りの方法（製造方法１～３）を挙げることができる。
（１）製造方法１
製造方法１は、培地に配合する疎水性基質として、少なくとも脂肪酸、または脂肪酸と融点３０℃以下の植物油を使用し、培地中の脂肪酸の総量または融点３０℃以下の植物油を含む場合は脂肪酸と当該植物油との総量（これらを総じて「脂肪酸及び植物油の総量」と称する）を１００質量％とした場合、遊離脂肪酸の割合が２０質量％以上である培地を用いてＳＬ産生酵母を培養する工程を含む。
製造方法１は、培地に配合する疎水性基質として、少なくとも脂肪酸、または脂肪酸と融点３０℃以下の植物油を使用し、培地中の脂肪酸の総量または融点３０℃以下の植物油を含む場合は脂肪酸と当該植物油との総量（これらを総じて「脂肪酸及び植物油の総量」と称する）を１００質量％とした場合、遊離脂肪酸の割合が２０質量％以上である培地を用いてＳＬ産生酵母を培養する工程を含む。
培地中の脂肪酸及び植物油の総量１００質量％に対する遊離脂肪酸の割合は、制限されないものの、好ましくは３０質量％以上を挙げることができる。その上限値は１００質量％である（但し、これは疎水性基質として植物油を使用せず、脂肪酸だけである場合）。
当該製造方法において、培養物のｐＨは、培養初期のｐＨが４～５の範囲である以外、培養期間中は特に制御しないことが好ましい。この場合、培養期間中、培養物のｐＨは徐々に低下し、制限されないものの、培養終期には、通常ｐＨ３程度になる。
また、当該製造方法において、ＳＬ産生酵母の培養は通気撹拌培養法によって行われることが好ましい。通気撹拌培養条件は、培地への酸素供給量が、見掛けの酸素移動容量係数（ｋＬａ）に換算して１４５（l/hr）以上となるような条件を挙げることができる。見掛けの酸素移動容量係数として、好ましくは２００（l/hr）以上、より好ましくは５００（l/hr）以上である。その上限値は、制限されないものの１２００（l/hr）以下である。培養物への酸素供給量の設定方法の詳細は、実施例の欄に記載する（下記の製造方法２及び３においても同じ。）。
上記の条件で、２０～４５℃、好ましくは２５～３５℃で、４～１４日間、好ましくは５～７日間程度培養することで、ＳＬを含有する培養物（ＳＬ含有培養物）を取得することができる。本発明の効果を有する所望のＳＬ含有組成物は、当該ＳＬ含有培養物を後述する方法で処理することで、調製取得することができる。
（２）製造方法２
製造方法２は、培地に配合する疎水性基質として、融点３０℃以下の植物油を使用し、培養期間中、培養物のｐＨを４．５～５に調整しながらＳＬ産生酵母を培養する工程を含む。
製造方法２は、培地に配合する疎水性基質として、融点３０℃以下の植物油を使用し、培養期間中、培養物のｐＨを４．５～５に調整しながらＳＬ産生酵母を培養する工程を含む。
培養期間中の培養物のｐＨ調整は、制限されないものの、培養物のｐＨをモニターしながら、適宜、ｐＨ調整剤（例えば、水酸化ナトリウムや水酸化カリウムなど）を添加することで行うことができる。
当該製造方法において、ＳＬ産生酵母の培養は通気撹拌培養法によって行われることが好ましい。通気撹拌培養条件は、培地への酸素供給量が、見掛けの酸素移動容量係数（ｋＬａ）に換算して１６０（l/hr）より高い条件を挙げることができる。見掛けの酸素移動容量係数として、好ましくは２００（l/hr）以上、より好ましくは５００（l/hr）以上である。その上限値は、制限されないものの１２００（l/hr）以下である。 上記の条件で、２０～４５℃、好ましくは２５～３５℃で、４～１４日間、好ましくは５～７日間程度培養することで、ＳＬを含有する培養物（ＳＬ含有培養物）を取得することができる。本発明の効果を有する所望のＳＬ含有組成物は、当該ＳＬ含有培養物を後述する方法で処理することで、調製取得することができる。
（３）製造方法３
製造方法３は、培地に配合する疎水性基質として、融点３０℃以下の植物油、または脂肪酸と融点３０℃以下の植物油を使用し、培地中の融点３０℃以下の植物油の総量、または脂肪酸を含む場合は融点３０℃以下の植物油と脂肪酸の総量（これらを総じて「脂肪酸及び植物油の総量」と称する）を１００質量％とした場合、遊離脂肪酸の割合が０から２０質量％未満である培地を用いて、通気撹拌培養条件を、培地への酸素供給量が見掛けの酸素移動容量係数（ｋＬａ）に換算して１４５（l/hr）以下になるように設定してＳＬ産生酵母を培養する工程を含む。
製造方法３は、培地に配合する疎水性基質として、融点３０℃以下の植物油、または脂肪酸と融点３０℃以下の植物油を使用し、培地中の融点３０℃以下の植物油の総量、または脂肪酸を含む場合は融点３０℃以下の植物油と脂肪酸の総量（これらを総じて「脂肪酸及び植物油の総量」と称する）を１００質量％とした場合、遊離脂肪酸の割合が０から２０質量％未満である培地を用いて、通気撹拌培養条件を、培地への酸素供給量が見掛けの酸素移動容量係数（ｋＬａ）に換算して１４５（l/hr）以下になるように設定してＳＬ産生酵母を培養する工程を含む。
前記酸素移動容量係数の下限値としては、制限されないものの、７５（l/hr）を挙げることができる。好ましくは、通気撹拌培養条件を、培地への酸素供給量が見掛けの酸素移動容量係数（ｋＬａ）に換算して１００～１４５（l/hr）、より好ましくは１２０～１４５（l/hr）となるような条件に設定して培養することが好ましい。
当該製造方法において、培養物のｐＨは、培養初期のｐＨが４～５の範囲である以外、培養期間中は特に制御しないことが好ましい。この場合、培養期間中、培養物のｐＨは徐々に低下し、制限されないものの、培養終期には、通常ｐＨ３程度になる。
当該製造方法において、培養物のｐＨは、培養初期のｐＨが４～５の範囲である以外、培養期間中は特に制御しないことが好ましい。この場合、培養期間中、培養物のｐＨは徐々に低下し、制限されないものの、培養終期には、通常ｐＨ３程度になる。
上記の条件で、２０～４５℃、好ましくは２５～３５℃で、４～１４日間、好ましくは５～１２日間程度培養することで、ＳＬを含有する培養物（ＳＬ含有培養物）を取得することができる。本発明の効果を有する所望のＳＬ含有組成物は、当該ＳＬ含有培養物を後述する方法で処理することで、調製取得することができる。
（ＳＬ含有培養物の処理、及びＳＬ含有組成物の回収取得方法）
前記の方法で製造されたＳＬ含有培養物には、産生されたＳＬのほか、ＳＬ産生酵母（菌体）、未資化の疎水性基質や親水性基質等の培地成分が含まれている。このため、菌体や培地成分を除去して、ＳＬを比較的高い割合で含むＳＬ含有組成物を調製することが好ましい。本発明のＳＬ含有組成物は、好ましくはＳＬ含有培養物から菌体や培地成分を除去して調製されるＳＬ含有組成物である。ＳＬ含有培養物から、菌体や培地成分を除去して、本発明のＳＬ含有組成物を回収する方法は、本発明の効果を妨げないことを限度として、公知の方法を組み合わせて実施することができる。
前記の方法で製造されたＳＬ含有培養物には、産生されたＳＬのほか、ＳＬ産生酵母（菌体）、未資化の疎水性基質や親水性基質等の培地成分が含まれている。このため、菌体や培地成分を除去して、ＳＬを比較的高い割合で含むＳＬ含有組成物を調製することが好ましい。本発明のＳＬ含有組成物は、好ましくはＳＬ含有培養物から菌体や培地成分を除去して調製されるＳＬ含有組成物である。ＳＬ含有培養物から、菌体や培地成分を除去して、本発明のＳＬ含有組成物を回収する方法は、本発明の効果を妨げないことを限度として、公知の方法を組み合わせて実施することができる。
具体的には、後述する製造例１に記載するように、ＳＬ含有培養物（酸性）を室温で静置すると、下から順に、主としてＳＬを含有する褐色の液状物層、主として菌体を含有する乳白色の固形物層、及び、主として培地中の夾雑物を含有する上澄み層の三層に分離する。なお、ＳＬ含有培養物（酸性）を加熱殺菌処理後に室温で静置した場合も同様に三層に分離する。上澄み層を除去した後、上澄み層と同量の水を加えて、そのｐＨを、水酸化ナトリウム水溶液でｐＨ６～７程度に調整してＳＬを可溶化する。次いで、これを遠心分離して回収した上清に、次いで硫酸水溶液などを添加してｐＨ２～３程度に調整してＳＬを不溶化する。これを静置後、デカンテーションすることで、約４０～５５％程度の水を含有する含水物としてＳＬ含有組成物を取得することができる。その詳細は、後述する製造例１にて説明する。なお、当該方法は、ＳＬ含有培養物に含まれるＳＬを高収率で回収する方法として例えば特開２００３－９８９６号公報（特許文献４）などに記載されている方法である。
このようにして調製されるＳＬ含有組成物は、制限されないが、ＳＬ（酸型ＳＬ、ラクトン型ＳＬ、二量体型ＳＬ）を前述する割合で含有するものであり、実質的にこうしたＳＬからなるものが含まれる。またＳＬに加えて、ヘキサン抽出物の含有量が６質量％以下になるような割合で脂肪酸を含有するものであってもよい。当該ＳＬ含有組成物には、実質的にＳＬと脂肪酸からなるものが含まれる。なお、ヘキサン抽出物の含有量の算出方法は、下記の実施例において詳述する。
当該脂肪酸としては、本発明のＳＬ含有組成物の特徴である沈降性及び／又は低温流動性を損なわないものであればよく、特に制限されない。後述する実験例１から、炭素数６～８または１８の飽和脂肪酸（ヘキサン酸、オクタン酸、ステアリン酸）、及び炭素数１８の不飽和脂肪酸（オレイン酸、リノール酸、リノレン酸）などが含まれる。
以上、本明細書において、「含む」及び「含有する」の用語には、「からなる」及び「から実質的になる」という意味が含まれる。
以下、本発明の構成及び効果について、その理解を助けるために、製造例及び実験例を用いて本発明を説明する。但し、本発明はこれらの製造例及び実験例によって何ら制限を受けるものではない。以下の実験は、特に言及しない限り、室温（２０±５℃）、及び大気圧条件下で実施した。なお、特に言及しない限り、以下に記載する「％」は「質量％」、「部」は「質量部」を意味する。
後述する製造例及び実験例で使用した原料と、各種の測定及び評価方法は以下の通りである。また原料として使用した植物油の物性（ヨウ素価、融点・凝固点）及びその主成分であるトリグリセリドの構成脂肪酸組成（wt％）、並びに原料として使用した脂肪酸の脂肪酸組成を表２に記載する。
［原料］
パームオレイン：商品名 NBD Palm Olein IV 56（入手先：Unitata Berhad） サフラワー油（ハイリノール）：商品名 サフラワーサラダ油（入手先：サミット精油株式会社）
大豆油：商品名 大豆白絞油（入手先：サミット精油株式会社）
菜種油（白絞油）：商品名 菜種白絞油（入手先：サミット精油株式会社）
ひまわり油（ハイオレイック）：商品名 ハイオレイックひまわり油（入手先：サミット精油株式会社）
サフラワー油（ハイオレイック）：商品名 ハイオレイックサフラワー油（入手先：サミット精油株式会社）
脂肪酸（HE1885）：商品名 Nouracid HE 1885（パルミチン酸21wt%以上、オレイン酸64wt％以上含有）（入手先：Oleon）
脂肪酸（NAA-34）：商品名 NAA-34（パルミチン酸21wt%以上、オレイン酸58wt％以上含有）（入手先：日油株式会社）
グルコース：商品名 日食含水結晶ブドウ糖（入手先：日本食品化工株式会社）
無機酸塩：KH2PO3、MgSO4、NaCl（配合比［質量比］10：5：1）
酵母エキス：商品名 ミーストパウダーＮ（入手先：アサヒフードアンドヘルスケア株式会社）
ペプトン：商品名 Peptone from Glycine max（入手先：SIGMA-ALDRICH）
パームオレイン：商品名 NBD Palm Olein IV 56（入手先：Unitata Berhad） サフラワー油（ハイリノール）：商品名 サフラワーサラダ油（入手先：サミット精油株式会社）
大豆油：商品名 大豆白絞油（入手先：サミット精油株式会社）
菜種油（白絞油）：商品名 菜種白絞油（入手先：サミット精油株式会社）
ひまわり油（ハイオレイック）：商品名 ハイオレイックひまわり油（入手先：サミット精油株式会社）
サフラワー油（ハイオレイック）：商品名 ハイオレイックサフラワー油（入手先：サミット精油株式会社）
脂肪酸（HE1885）：商品名 Nouracid HE 1885（パルミチン酸21wt%以上、オレイン酸64wt％以上含有）（入手先：Oleon）
脂肪酸（NAA-34）：商品名 NAA-34（パルミチン酸21wt%以上、オレイン酸58wt％以上含有）（入手先：日油株式会社）
グルコース：商品名 日食含水結晶ブドウ糖（入手先：日本食品化工株式会社）
無機酸塩：KH2PO3、MgSO4、NaCl（配合比［質量比］10：5：1）
酵母エキス：商品名 ミーストパウダーＮ（入手先：アサヒフードアンドヘルスケア株式会社）
ペプトン：商品名 Peptone from Glycine max（入手先：SIGMA-ALDRICH）
［測定方法］
（１）ＳＬ含有組成物中のＳＬ含有量とＳＬ組成の算出方法
ＳＬ含有組成物を、乾燥残分が約１％になるようにエタノール（99.5v％）で希釈し、調製したエタノール希釈物を前記表１に記載する条件の高速液体クロマトグラフィー（HPLC）に供する。乾燥残分の測定方法は、下記（２）において説明する。
（１）ＳＬ含有組成物中のＳＬ含有量とＳＬ組成の算出方法
ＳＬ含有組成物を、乾燥残分が約１％になるようにエタノール（99.5v％）で希釈し、調製したエタノール希釈物を前記表１に記載する条件の高速液体クロマトグラフィー（HPLC）に供する。乾燥残分の測定方法は、下記（２）において説明する。
表１に記載する条件のＨＰＬＣにおいて、単量体の酸型ＳＬは、保持時間１０～２３分（酸型ＳＬａ）及び４５～５８分（酸型ＳＬｂ）の領域に溶出する。単量体のラクトン型ＳＬ（ジアセチルラクトン型ＳＬを含む。以下、同じ。）は、保持時間２８～４０分の領域に溶出する。この領域の特に２８～３３分の領域に現れるピークのうち、最もピーク強度の高いピークがオレイン酸－ジアセチルラクトン型ＳＬに由来するピークである。二量体型ＳＬは保持時間５８～７０分の領域に溶出する。
ＳＬ含有組成物に含まれる酸型ＳＬ、ラクトン型ＳＬ、及び二量体型ＳＬの量は、前記ＨＰＣＬ分析で得られる各ピーク面積から、濃度公知の標準サンプルについて作成した検量線を利用して算出する。また、ＳＬ含有組成物中のＳＬ総量は、前記酸型ＳＬａ、酸型ＳＬｂ、ラクトン型ＳＬ、及び二量体型ＳＬの各含有量を合算して求める。ＳＬ含有組成物中に含まれるＳＬ総量１００質量％における、各ＳＬ（酸型ＳＬ、ラクトン型ＳＬ、二量体型ＳＬ）の割合（ＳＬ組成％）は、前記ＨＰＣＬ分析のピーク面積比から算出することができる。また、ラクトン型ＳＬ総量１００質量％におけるオレイン酸－ジアセチルラクトン型ＳＬの割合も前記ＨＰＣＬ分析のピーク面積比から算出することができる。
（２）ＳＬ含有組成物の乾燥残分及び水分量の測定方法
1. シャーレに乾燥させたガラス製のビーズ（玉の直径：3.0mm）を敷き詰め、ふたをして全体の重量（容器重量）を正確に測定しておく。
2. 混合均一化したＳＬ含有組成物（含水物）を、シャーレのビーズの上全体に広がるように載せて、速やかにふたをして重量（乾燥前重量）を正確に測定する。
3. これを１０５℃の乾燥器（定温乾燥器DY300：ヤマト科学株式会社製）に移し、ふたを開けた状態で３時間乾燥する。
4. ふたをして乾燥剤（シリカゲル）を入れたデシケーターに移し、室温まで放冷した後、重量（乾燥後重量）を正確に測定する。
5. 以下の式から乾燥残分および水分量を算出する。
1. シャーレに乾燥させたガラス製のビーズ（玉の直径：3.0mm）を敷き詰め、ふたをして全体の重量（容器重量）を正確に測定しておく。
2. 混合均一化したＳＬ含有組成物（含水物）を、シャーレのビーズの上全体に広がるように載せて、速やかにふたをして重量（乾燥前重量）を正確に測定する。
3. これを１０５℃の乾燥器（定温乾燥器DY300：ヤマト科学株式会社製）に移し、ふたを開けた状態で３時間乾燥する。
4. ふたをして乾燥剤（シリカゲル）を入れたデシケーターに移し、室温まで放冷した後、重量（乾燥後重量）を正確に測定する。
5. 以下の式から乾燥残分および水分量を算出する。
（３）ＳＬ含有組成物のヘキサン抽出物含量の測定方法
1. 遠沈管およびビーカーの重量を正確に測定しておく。
2. 混合均一化したＳＬ含有組成物約５ｇを遠沈管に取り、重量（重量ａ）を正確に測定する。
3. これに、分取したＳＬ含有組成物の容量と等量程度のｎ－ヘキサンを加え、密栓して激しく振り混ぜ混合する。
4. １０００×ｇで１０分間遠心分離する。
5. ピペット等を用いてヘキサン層のみを取り、ビーカーに移す。
6. 上記の抽出操作を３回繰り返す。以上の操作は、ＳＬ含有組成物及びｎ－ヘキサンの温度を室温（２０±５℃）に調整したうえで実施する。
7. 回収したヘキサン層を入れたビーカーを湯浴中（80℃程度）で加熱してヘキサンを揮発させた後、重量（重量ｂ）を正確に測定する。
8. 以下の式からヘキサン抽出物含量（湿重量換算、乾燥重量換算）を算出する。
1. 遠沈管およびビーカーの重量を正確に測定しておく。
2. 混合均一化したＳＬ含有組成物約５ｇを遠沈管に取り、重量（重量ａ）を正確に測定する。
3. これに、分取したＳＬ含有組成物の容量と等量程度のｎ－ヘキサンを加え、密栓して激しく振り混ぜ混合する。
4. １０００×ｇで１０分間遠心分離する。
5. ピペット等を用いてヘキサン層のみを取り、ビーカーに移す。
6. 上記の抽出操作を３回繰り返す。以上の操作は、ＳＬ含有組成物及びｎ－ヘキサンの温度を室温（２０±５℃）に調整したうえで実施する。
7. 回収したヘキサン層を入れたビーカーを湯浴中（80℃程度）で加熱してヘキサンを揮発させた後、重量（重量ｂ）を正確に測定する。
8. 以下の式からヘキサン抽出物含量（湿重量換算、乾燥重量換算）を算出する。
（４）培養期間中の培養物への酸素供給量の設定方法
培養期間中の培養物への酸素供給量の指標として、酸素移動容量係数（kLa）を採用した。
具体的には、実際に培養に使用する５Ｌ容量の培養槽に、培養物にみたてた水道水３Ｌを入れて（菌の接種なし）、実際に採用する培養条件下（30℃）で培養（擬似培養）した場合の酸素移動容量係数（kLa）を、排ガス計（測定ガス：O2）を用いた亜硫酸ソーダ法を用いて測定する。
培養期間中の培養物への酸素供給量の指標として、酸素移動容量係数（kLa）を採用した。
具体的には、実際に培養に使用する５Ｌ容量の培養槽に、培養物にみたてた水道水３Ｌを入れて（菌の接種なし）、実際に採用する培養条件下（30℃）で培養（擬似培養）した場合の酸素移動容量係数（kLa）を、排ガス計（測定ガス：O2）を用いた亜硫酸ソーダ法を用いて測定する。
こうして測定される酸素移動容量係数（kLa）を、以下「見掛けの酸素移動容量係数（kLa）」と称する。
1．排ガス計（OFF-GAS Jr. DEX-2561-1：エイブル（株）製）を大気中の酸素濃度でキャリブレーションする。
2．亜硫酸ナトリウムを水道水に溶解して、0.4 mol/L濃度の亜硫酸Na水溶液を3 L調製し、これに0.1 mol/L濃度の硫酸銅水溶液を3 mL添加する。
3. 実際に採用する３０℃での培養条件（通気量、撹拌（回転数）など）にて運転し、培養槽内（水中）の溶存酸素濃度、水の飽和溶存酸素濃度、大気中の酸素濃度、通気量、排ガス中の酸素濃度よりkLa を算出した。
1．排ガス計（OFF-GAS Jr. DEX-2561-1：エイブル（株）製）を大気中の酸素濃度でキャリブレーションする。
2．亜硫酸ナトリウムを水道水に溶解して、0.4 mol/L濃度の亜硫酸Na水溶液を3 L調製し、これに0.1 mol/L濃度の硫酸銅水溶液を3 mL添加する。
3. 実際に採用する３０℃での培養条件（通気量、撹拌（回転数）など）にて運転し、培養槽内（水中）の溶存酸素濃度、水の飽和溶存酸素濃度、大気中の酸素濃度、通気量、排ガス中の酸素濃度よりkLa を算出した。
具体的には、下式１から算出される式２に基づいて、見掛けの酸素移動容量係数（kLa）を求めた。
［物性評価方法］
（１）粘度（mPa・s）の評価
1. ＳＬ含有組成物を、ＰＥＴ製の容器（規格瓶（No.5）：50mL容量、口内径24.7mm、胴径38mm、本体高さ68.5mm）に５５ｇ入れて、－５℃の暗所条件下に７２時間静置する。
2．静置後、品温－５℃の状態のＳＬ含有組成物の粘度を、下記の機器を用いて、下記条件で測定する。
測定機器：TVB-10M形粘度計（東機産業（株）製）
ローター及び撹拌回転数：表２参照
測定時間：1分間
（１）粘度（mPa・s）の評価
1. ＳＬ含有組成物を、ＰＥＴ製の容器（規格瓶（No.5）：50mL容量、口内径24.7mm、胴径38mm、本体高さ68.5mm）に５５ｇ入れて、－５℃の暗所条件下に７２時間静置する。
2．静置後、品温－５℃の状態のＳＬ含有組成物の粘度を、下記の機器を用いて、下記条件で測定する。
測定機器：TVB-10M形粘度計（東機産業（株）製）
ローター及び撹拌回転数：表２参照
測定時間：1分間
（２）沈降性の評価
（２－１）ＳＬ含有培養物中でのＳＬ含有組成物の沈降性
1．培養終了後のＳＬ含有培養物を遠沈管に加える。
2．当該培養物の品温を２０℃に調整した状態で、遠沈管を手で１０秒間よく振って試料を撹拌する。
3．撹拌した培養物を、遠沈管に入った状態で、２０℃の暗所条件下に１２時間放置する。
4．静置後、目視判定で遠沈管内での沈降物の有無を確認し、下記の基準に従って評価する。
○ 沈降性あり：沈降物が認められる。
× 沈降性なし：沈降物が認められない。
（２－１）ＳＬ含有培養物中でのＳＬ含有組成物の沈降性
1．培養終了後のＳＬ含有培養物を遠沈管に加える。
2．当該培養物の品温を２０℃に調整した状態で、遠沈管を手で１０秒間よく振って試料を撹拌する。
3．撹拌した培養物を、遠沈管に入った状態で、２０℃の暗所条件下に１２時間放置する。
4．静置後、目視判定で遠沈管内での沈降物の有無を確認し、下記の基準に従って評価する。
○ 沈降性あり：沈降物が認められる。
× 沈降性なし：沈降物が認められない。
（２－２）蒸留水中でのＳＬ含有組成物の沈降性（分離・沈降物の有無の確認）
1．乾燥残分50％に調整したＳＬ含有組成物５ｇ、及び蒸留水２５ｇを遠沈管に加える。
2．当該試料（水分量：９１．７％）のｐＨを塩酸や硫酸、水酸化ナトリウム、水酸化カリウムなどにてｐＨメーター（HM-30G、東亜DKK製）を用いてｐＨ２．５～３．０に調整する。
3．試料の品温を２０℃に調整した状態で、遠沈管を手で１０秒間よく振って試料を撹拌し、２０℃の状態で５分間静置する。
4．静置後、目視判定で遠沈管内での沈降物の有無を確認し、下記の基準に従って評価する。
○ 沈降性あり：明らかな分離・沈降物〔透明の上澄み（水層）と白濁もしくは茶褐色の沈降層（ＳＬ含有組成物）〕が認められる。
× 沈降性なし：遠沈管内全体が一様に透明またはやや不透明であり、分離・沈降物が認められない。
1．乾燥残分50％に調整したＳＬ含有組成物５ｇ、及び蒸留水２５ｇを遠沈管に加える。
2．当該試料（水分量：９１．７％）のｐＨを塩酸や硫酸、水酸化ナトリウム、水酸化カリウムなどにてｐＨメーター（HM-30G、東亜DKK製）を用いてｐＨ２．５～３．０に調整する。
3．試料の品温を２０℃に調整した状態で、遠沈管を手で１０秒間よく振って試料を撹拌し、２０℃の状態で５分間静置する。
4．静置後、目視判定で遠沈管内での沈降物の有無を確認し、下記の基準に従って評価する。
○ 沈降性あり：明らかな分離・沈降物〔透明の上澄み（水層）と白濁もしくは茶褐色の沈降層（ＳＬ含有組成物）〕が認められる。
× 沈降性なし：遠沈管内全体が一様に透明またはやや不透明であり、分離・沈降物が認められない。
（３）低温流動性の評価
1. ＳＬ含有組成物を、ＰＥＴ製の容器（規格瓶（No.5））に１５ｇ入れて、蓋をして－５℃の暗所条件下に３日間（72h）静置する。なお、ＳＬ含有組成物の水分量が５０％でない場合は、５０％になるように水分量を調整したＳＬ含有組成物を用いた。
2．静置後、－５℃の条件で当該容器を倒置し、３０秒間、内容物の流動性を目視で確認し、下記の基準に従って評価する。
○ 低温流動性良好：内容物に流動性がある。倒置前に容器底部にあった内容物が、倒置後３０秒間以内に容器口部方向に流動する。
△ 低温流動性あり：内容物に流動性はあるものの、倒置前に容器底部にあった内容物が倒置後容器口部方向に移動するのに３０秒よりも多く時間を要する。
× 低温流動性不良：内容物に流動性がまったくない。容器底部にあった内容物がまったく移動しないか、固まったままの状態で容器口部に落下する。
1. ＳＬ含有組成物を、ＰＥＴ製の容器（規格瓶（No.5））に１５ｇ入れて、蓋をして－５℃の暗所条件下に３日間（72h）静置する。なお、ＳＬ含有組成物の水分量が５０％でない場合は、５０％になるように水分量を調整したＳＬ含有組成物を用いた。
2．静置後、－５℃の条件で当該容器を倒置し、３０秒間、内容物の流動性を目視で確認し、下記の基準に従って評価する。
○ 低温流動性良好：内容物に流動性がある。倒置前に容器底部にあった内容物が、倒置後３０秒間以内に容器口部方向に流動する。
△ 低温流動性あり：内容物に流動性はあるものの、倒置前に容器底部にあった内容物が倒置後容器口部方向に移動するのに３０秒よりも多く時間を要する。
× 低温流動性不良：内容物に流動性がまったくない。容器底部にあった内容物がまったく移動しないか、固まったままの状態で容器口部に落下する。
製造例１ ＳＬ含有組成物の製造（製造方法１）
（１）前培養
培養培地として、水１Ｌ当たり、グルコース１０ｇ、ペプトン１０ｇ、酵母エキス５ｇを含有する液体培地を使用し、３０℃で２日間、ＳＬ産生酵母（Starmerella bombicola ATCC22214株）を振盪培養し、これを前培養液とした。
（１）前培養
培養培地として、水１Ｌ当たり、グルコース１０ｇ、ペプトン１０ｇ、酵母エキス５ｇを含有する液体培地を使用し、３０℃で２日間、ＳＬ産生酵母（Starmerella bombicola ATCC22214株）を振盪培養し、これを前培養液とした。
（２）本培養
５Ｌ容量の発酵槽（卓上型培養装置Bioneer-NEO：（株）丸菱バイオエンジ製）に仕込んだ本培養培地（３Ｌ）に、上記前培養液１２０ｍＬを植菌し、３０℃で５日間、通気撹拌培養を行い発酵させた。通気撹拌培養条件は、培地への酸素供給量が、見掛けの酸素移動容量係数（kLa）に換算して540（1/hr）になるように設定した（通気量：1.8 L/min, 攪拌回転数：600 rpm）。
５Ｌ容量の発酵槽（卓上型培養装置Bioneer-NEO：（株）丸菱バイオエンジ製）に仕込んだ本培養培地（３Ｌ）に、上記前培養液１２０ｍＬを植菌し、３０℃で５日間、通気撹拌培養を行い発酵させた。通気撹拌培養条件は、培地への酸素供給量が、見掛けの酸素移動容量係数（kLa）に換算して540（1/hr）になるように設定した（通気量：1.8 L/min, 攪拌回転数：600 rpm）。
なお、本培養培地として、水に、表３に記載する疎水性基質（植物油、脂肪酸）及び親水性基質（グルコース、酵母エキス、及び尿素）に加えて、無機塩を含む水性の液体培地（滅菌前ｐＨ４．５～４．８）を使用した。培養期間中、培養物のｐＨは制御しなかった。
培養開始から６日目に培養を停止し、発酵槽から取り出した培養物（ｐＨ３程度）を５０～８０℃に加熱した後、室温（２５℃）に戻し、１日以上静置して、下から順に、褐色の液状物層、主に菌体と思われる乳白色の固形物層、上澄の３層に分離した。上澄を除去した後、工業用水または地下水を、除去した上澄の量と同量添加した。これを撹拌しながら、４８％濃度の水酸化ナトリウム水溶液を徐々に加えてｐＨ６．５～６．９とし、培養物中に含まれるＳＬを可溶化した。これを卓上遠心分離機（ウェストファリア：ウェストファリアセパレーターＡＧ製）で遠心処理（２，４００ｘｇ、１５分、室温（２５℃））することにより、乳白色の固形物（菌体）を沈殿させ、ＳＬを含有する上澄を回収した。回収した上澄を撹拌しながら、これに６２．５％濃度の硫酸水溶液を徐々に加えてｐＨ２．５～３．０とし、ＳＬを不溶化した。これを室温（２５℃）で２日間静置した後、デカンテーションにより上澄を可能な限り除去し、残留物（含水物）をＳＬ含有組成物として取得した。
斯くして取得したＳＬ含有組成物について、前述する方法でＳＬ総量、ＳＬ組成（％）、ラクトン型ＳＬ中に含まれるオレイン酸－ジアセチルラクトン型ＳＬの割合（％）、水分量、及びヘキサン抽出物含量を測定した。なお、ＳＬ総量、及びＳＬ組成とオレイン酸－ジアセチルラクトン型ＳＬの割合は、前記で得られたＳＬ含有組成物を、エタノール（99.5v%）で、乾燥残分が約１％になるように希釈した後、当該希釈物を前述する条件のＨＰＬＣに供して、各領域のピーク面積から求めた。
また得られたＳＬ含有組成物について、前述する方法に従って、粘度（mPa・s）、沈降性、及び低温流動性を評価した。
結果を表４－１（実施例１―１～１－１４）及び表４－２（比較例１－１～１－７）に合わせて示す。表４―１及び４－２に示す結果は、培養期間中、培養物のｐＨは制御せず（培養に伴い、当初の約ｐＨ５からｐＨ３に低下）、また、通気撹拌培養条件を、培養物への酸素供給量が、見掛けの酸素移動容量係数（kLa）に換算して表記載の数値（1/hr）になるように設定して、培養して取得したＳＬ含有組成物の測定・評価結果である。
また表４―２には、既存のＳＬ含有組成物（既製造品１～５）について、前記と同様にして、ＳＬ総量、ＳＬ組成（％）、ラクトン型ＳＬ中に含まれるオレイン酸－ジアセチルラクトン型ＳＬの割合（％）、水分量、ヘキサン抽出物含量、粘度、沈降性、及び低温流動性を測定ないし評価した結果も示す。
表４－２に示すように、この培養条件では、培地に配合する疎水性基質が植物油だけの場合、調製したＳＬ含有組成物に沈降性は認められなかった（比較例１－２～１－７参照）。また、疎水性基質が植物油と脂肪酸の場合でも、その総量１００％中に含まれる遊離脂肪酸の割合が１０％以下の場合は、前記と同様、ＳＬ含有組成物に沈降性は認められなかった（比較例１－１参照）。このことから、この場合に生成したＳＬは培養物中に可溶化しているものと思われる。
一方、表４－１に示すように、培地に配合する疎水性基質が植物油と脂肪酸の場合、その総量１００％中に含まれる遊離脂肪酸の割合が２０％以上であると、調製したＳＬ含有組成物に沈降性が認められた（実施例１－１～１－４、実施例１－７～１－１４）。このことから、この場合に生成したＳＬは培養物中で不溶化しているものと思われる。また、培地に配合する疎水性基質が脂肪酸だけの場合も、調製したＳＬ含有組成物に沈降性（ＳＬの不溶化）が認められた（実施例１－５～１－６）。
またこれらのＳＬ含有組成物（実施例１－１～１－１４）はいずれも－５℃での流動性（低温流動性）が良好であった。
またこれらのＳＬ含有組成物（実施例１－１～１－１４）はいずれも－５℃での流動性（低温流動性）が良好であった。
これらのことから、疎水性基質が脂肪酸だけの場合や、融点３０℃以下の植物油と脂肪酸であり、これらの総量１００％中の遊離脂肪酸含量が２０～１００％である場合、培養期間中のｐＨを制御せずとも、培養物の見掛けの酸素移動容量係数（kLa）を、好ましくは２００（l/hr）以上にすることで、沈降性及び低温流動性の両面から取り扱い性に優れている、ＳＬ含有組成物（実施例１－１～１－１４）が調製できることが確認された。また、脂肪酸（NAA-34）に代えて、脂肪酸（HE1885）を使用した場合も、同様の結果が得られた。
各種ＳＬ含有組成物の組成と物性との対比から、ラクトン型ＳＬの含有量がＳＬ総量１００％あたり４５～８１％、好ましくは４５～７０％；オレイン酸－ジアセチルラクトン型ＳＬの含有量がラクトン型ＳＬ総量１００％あたり９５％以下、好ましくは９２％以下；ヘキサン抽出物の含量が乾燥重量換算で６％以下、好ましくは３％以下（湿重量換算で３％以下、好ましくは１．５％以下）；酸型ＳＬ含量がＳＬ総量１００％あたり１０～５０％、好ましくは１５～５０％；二量体型ＳＬ含量がＳＬ総量１００％あたり４５％以下、好ましくは４０％以下の範囲にあると、沈降性及び低温流動性が良好であることが確認された。またこれらのＳＬ含有組成物（水分量４０～５５％）は－５℃で流動性を有しており、その粘度は２３１０～１８９８０ｍPa・sであった。
製造例２ ＳＬ含有組成物の製造（製造方法２）（２－１）
製造例１と同様にして調製した前培養液１２０ｍＬを、製造例１と同様に、本培養培地（３Ｌ）に植菌し、３０℃で５日間、通気撹拌培養を行い発酵させた。本培養培地として、水に、表５に記載する疎水性基質（植物油、脂肪酸）及び親水性基質（グルコース、酵母エキス、尿素）に加えて、無機塩を含む水性液体培地（滅菌前ｐＨ４．５～４．８）を使用した。培養期間中、培養物のｐＨを４～５．５の範囲になるように制御した。また、通気撹拌培養条件は、培養物への酸素供給量が、見掛けの酸素移動容量係数（kLa）に換算して５４０（1/hr）になるように設定した（通気量：1.8 L/min, 攪拌回転数：600 rpm）。
製造例１と同様にして調製した前培養液１２０ｍＬを、製造例１と同様に、本培養培地（３Ｌ）に植菌し、３０℃で５日間、通気撹拌培養を行い発酵させた。本培養培地として、水に、表５に記載する疎水性基質（植物油、脂肪酸）及び親水性基質（グルコース、酵母エキス、尿素）に加えて、無機塩を含む水性液体培地（滅菌前ｐＨ４．５～４．８）を使用した。培養期間中、培養物のｐＨを４～５．５の範囲になるように制御した。また、通気撹拌培養条件は、培養物への酸素供給量が、見掛けの酸素移動容量係数（kLa）に換算して５４０（1/hr）になるように設定した（通気量：1.8 L/min, 攪拌回転数：600 rpm）。
培養開始から６日目に培養を停止し、製造例１と同様にして、ＳＬ含有組成物を回収取得した。取得したＳＬ含有組成物を、製造例１と同様に、前述する方法でＳＬ総量、ＳＬ組成（％）、ラクトン型ＳＬ中に含まれるオレイン酸－ジアセチルラクトン型ＳＬの割合（％）、水分量、及びヘキサン抽出物含量を測定した。また得られたＳＬ含有組成物について、前述する方法に従って、粘度（mPa・s）、沈降性、及び低温流動性を評価した。
結果を表５に合わせて示す。
前述する製造例１の比較例１－２～１－７（表４－２）で示したように、培地の疎水性基質として植物油だけを用いた場合、培養期間中、培養物のｐＨを制御しないと、調製したＳＬ含有組成物に沈降性は認められない。表５に示すように、比較例２－３でも、同様の現象が認められた。これに対して、疎水性基質として植物油だけを用いた場合でも、培養期間中の培養物のｐＨを４．５～５の範囲に制御することで、得られたＳＬ含有組成物は沈降性を有することがわかった（実施例２－１～２－２）。一方、こうしたｐＨ制御条件でも、ｐＨがｐＨ４以下であると、調製されたＳＬ含有組成物には沈降性が認められなかった（比較例２－１）。またｐＨ制御条件でも、ｐＨがｐＨ５．５以上であると、調製されたＳＬ含有組成物は低温流動性が低下することが分かった（比較例２－２）。
前述する製造例１の実施例１－５～１－６（表４－１）で示したように、培地の疎水性基質が脂肪酸だけの場合、培養期間中、培養物のｐＨを制御しないで調製したＳＬ含有組成物は沈降性も低温流動性も良好であったが、培養期間中の培養物のｐＨを５に制御すると、得られるＳＬ含有組成物は低温流動性が低下することが確認された（比較例２－４）。
前述する製造例１の実施例１－５～１－６（表４－１）で示したように、培地の疎水性基質が脂肪酸だけの場合、培養期間中、培養物のｐＨを制御しないで調製したＳＬ含有組成物は沈降性も低温流動性も良好であったが、培養期間中の培養物のｐＨを５に制御すると、得られるＳＬ含有組成物は低温流動性が低下することが確認された（比較例２－４）。
製造例３ ＳＬ含有組成物の製造（製造方法２）（２－２）
通気撹拌培養条件を、培様物への酸素供給量が、見掛けの酸素移動容量係数（kLa）に換算して１６０～３６７（1/hr）になるように設定し、培養日数を６～１２日間とする以外は、製造例２に記載する実施例２－２と同様にしてＳＬ含有組成物を調製し、その組成、粘度（mPa・s）、沈降性、及び低温流動性を評価した。
通気撹拌培養条件を、培様物への酸素供給量が、見掛けの酸素移動容量係数（kLa）に換算して１６０～３６７（1/hr）になるように設定し、培養日数を６～１２日間とする以外は、製造例２に記載する実施例２－２と同様にしてＳＬ含有組成物を調製し、その組成、粘度（mPa・s）、沈降性、及び低温流動性を評価した。
結果を表６に示す。
疎水性基質として植物油だけを用いた場合、培養期間中の培養物のｐＨを５に制御し、酸素供給量を見掛けの酸素移動容量係数（kLa）に換算して１６０（1/hr）以下にした場合、得られたＳＬ含有組成物は良好に沈降するものの、低温流動性が低下することが分かった（比較例３－１）。このことから、疎水性基質として植物油だけを用いた場合、培養期間中の培養物のｐＨを５に制御するとともに、培養物への酸素供給量を見掛けの酸素移動容量係数（kLa）に換算して１６０（1/hr）よりも高く、好ましくは２００（1/hr）以上にすることが、沈降性及び低温流動性の両面から取り扱い性に優れたＳＬ含有組成物を製造するうえで有用であることが確認された。
製造例４ ＳＬ含有組成物の製造（製造方法３）
製造例１と同様にして調製した前培養液１２０ｍＬを、製造例１と同様に、本培養培地（３Ｌ）に植菌し、３０℃で５～１０日間（実施例４－１～４－３：１０日間、比較例４－１：７日間、比較例４－２：５日間）、通気撹拌培養を行い発酵させた。本培養培地として、水に、表７に記載する疎水性基質（植物油、脂肪酸）及び親水性基質（グルコース、酵母エキス、尿素）に加えて、無機塩を含む水性液体培地（滅菌前ｐＨ４．５～４．８）を使用した。培養期間中、培地のｐＨは制御せず（培養に伴いｐＨ３まで低下）、通気撹拌培養条件は、培地への酸素供給量が、見掛けの酸素移動容量係数（kLa）に換算して、表７記載の値になるように設定した（実施例４－１：通気量0.5 L/min, 攪拌回転数380 rpm、実施例４－２：通気量0.5 L/min, 攪拌回転数410 rpm、実施例４－３：通気量0.5 L/min, 攪拌回転数410 rpm）。
製造例１と同様にして調製した前培養液１２０ｍＬを、製造例１と同様に、本培養培地（３Ｌ）に植菌し、３０℃で５～１０日間（実施例４－１～４－３：１０日間、比較例４－１：７日間、比較例４－２：５日間）、通気撹拌培養を行い発酵させた。本培養培地として、水に、表７に記載する疎水性基質（植物油、脂肪酸）及び親水性基質（グルコース、酵母エキス、尿素）に加えて、無機塩を含む水性液体培地（滅菌前ｐＨ４．５～４．８）を使用した。培養期間中、培地のｐＨは制御せず（培養に伴いｐＨ３まで低下）、通気撹拌培養条件は、培地への酸素供給量が、見掛けの酸素移動容量係数（kLa）に換算して、表７記載の値になるように設定した（実施例４－１：通気量0.5 L/min, 攪拌回転数380 rpm、実施例４－２：通気量0.5 L/min, 攪拌回転数410 rpm、実施例４－３：通気量0.5 L/min, 攪拌回転数410 rpm）。
培養開始から６～１１日目に培養を停止し、製造例１と同様に、ＳＬ含有組成物を回収取得した。取得したＳＬ含有組成物を、製造例１と同様に、前述する方法でＳＬ組成（％）、ラクトン型ＳＬ中に含まれるオレイン酸－ジアセチルラクトン型ＳＬの割合（％）、水分量、及びヘキサン抽出物含量を測定した。また得られたＳＬ含有組成物について、前述する方法に従って、粘度（mPa・s）、沈降性、及び低温流動性を評価した。
結果を表７に合わせて示す。
前述する製造例１～３で示したように、培地の疎水性基質として植物油だけを用いた場合、培養期間中の培養物のｐＨを制御しない場合（培養により当初の約ｐＨ５から約ｐＨ３に低下）、得られたＳＬ含有組成物は沈降性を有しない（比較例１－２～１－７、比較例２－３）。これに対して、表７に示すように、疎水性基質として植物油だけ（遊離脂肪酸含量０％）を用い、培養物のｐＨを制御しない場合であっても、培養期間中の培養物への酸素供給量を見掛け酸素移動容量係数に換算して１４５（1/hr）以下になるように制御することで、得られるＳＬ含有組成物は沈降性を有し、また低温流動性も良好であることが確認された（実施例４－１～４－２）。
また、製造例１において、遊離脂肪酸の割合が１０％以下の培地で、ｐＨを制御することなく培養すると、ＳＬ含有組成物の沈降性は認められなかったが（比較例１－１）、実施例４－３の結果から、この場合でも、培養期間中の培養物への酸素供給量を見掛け酸素移動容量係数が１４５（１／ｈｒ）以下になるように制御することで、沈降性及び低温流動性の両面から良好なＳＬ含有組成物が調製できることが確認された。
実験例１ 培地中の残留脂肪酸とＳＬの沈降性との関係評価
製造例１において、ＳＬ含有組成物に沈降性が認められた培養系（実施例１－３）と沈降性が認められなかった培養系（比較例１－２）により調製した各ＳＬ含有組成物を用いて、ＳＬ含有組成物の沈降性とそれに含まれる遊離脂肪酸の量（乾燥重量換算）との関係を評価した。なお、実施例１－３で調製されたＳＬ含有組成物（水分含量：４４．１％）及び比較例１－２で調製されたＳＬ含有組成物（水分含量：５７．５％）中には、遊離脂肪酸がヘキサン抽出物量に換算（乾燥重量換算）して、それぞれ０．３６％及び０．１１７％の割合で含まれている。
製造例１において、ＳＬ含有組成物に沈降性が認められた培養系（実施例１－３）と沈降性が認められなかった培養系（比較例１－２）により調製した各ＳＬ含有組成物を用いて、ＳＬ含有組成物の沈降性とそれに含まれる遊離脂肪酸の量（乾燥重量換算）との関係を評価した。なお、実施例１－３で調製されたＳＬ含有組成物（水分含量：４４．１％）及び比較例１－２で調製されたＳＬ含有組成物（水分含量：５７．５％）中には、遊離脂肪酸がヘキサン抽出物量に換算（乾燥重量換算）して、それぞれ０．３６％及び０．１１７％の割合で含まれている。
具体的には、実施例１－３及び比較例１－２で得られた各ＳＬ含有組成物に、表８に記載する割合（質量％）になるように各種の脂肪酸を添加した。表８には、添加した脂肪酸の量を、ヘキサン抽出物量に換算（乾燥重量換算）した値も、併せて記載する。なお、実際のＳＬ含有組成物には、表８記載の「脂肪酸添加量のヘキサン抽出物量への換算値」に０．３６％または０．１１７％をプラスした「ＳＬ含有組成物のヘキサン抽出物量」に相当する遊離脂肪酸が含まれていることになる。
これを５ｇ入れた遠沈管に、蒸留水２５ｇを入れ全量３０ｇ（水分量９１．７％）に調製した。これを、２０℃の条件下で、手で１０秒間振って均一に混合した後に、５分間静置した場合の沈降性（沈降物の有無）を評価した。沈降性の評価方法は下記の基準に従って実施した。
［沈降性の評価］
○：静置から５分以内に沈降（沈降物）が認められる。
×：静置から５分以内に沈降（沈降物）が認められない。
結果を表８に纏めて記載する。
［沈降性の評価］
○：静置から５分以内に沈降（沈降物）が認められる。
×：静置から５分以内に沈降（沈降物）が認められない。
結果を表８に纏めて記載する。
表８（１）の結果から、実施例１－３で得られたＳＬ含有組成物、つまり、ラクトン型ＳＬ及びオレイン酸－ジアセチルラクトン型ＳＬの含有量が本発明の（Ａ）及び（Ｂ）の要件を満たすＳＬ含有組成物は、脂肪酸量（ヘキサン抽出物の含有量）に関係なく、沈降性が良好で取り扱い性がよいことが確認された。一方、表８（２）の結果から、比較例１－２で得られたＳＬ含有組成物、つまり、ラクトン型ＳＬの含有量が本発明の（Ａ）の要件を満たしていないＳＬ含有組成物は、脂肪酸の種類にもよるが、脂肪酸量がヘキサン抽出物の含有量に換算して、７％以下、特に６％以下であると、沈降性が不良になり取り扱い性が悪くなることが確認された。このことから、本発明の技術は、沈降性が不良になる傾向が認められるＳＬ含有組成物である、ヘキサン抽出物の含有量に換算して７％以下、特に６％以下の脂肪酸含有量のＳＬ含有組成物に、特に有用であると判断できる。
実験例２ ＳＬ含有組成物中の遊離脂肪酸含量の起泡力への影響評価
種々異なる量の遊離脂肪酸を含有するＳＬ含有組成物を、食器用洗剤に添加して、各食器用洗剤の起泡力を評価し、ＳＬ含有組成物中の遊離脂肪酸含量の起泡力に与える影響を評価した。
種々異なる量の遊離脂肪酸を含有するＳＬ含有組成物を、食器用洗剤に添加して、各食器用洗剤の起泡力を評価し、ＳＬ含有組成物中の遊離脂肪酸含量の起泡力に与える影響を評価した。
（１）被験試料の調製
実施例１－３のＳＬ含有組成物とオレイン酸を用いて、表９に示す各種の割合で脂肪酸を含有するＳＬ含有組成物１～４を調製した。また、表１０に示すように、これらのＳＬ含有組成物１～４を０．５ｇ、各々食器用洗剤(ハッピーエレファント 野菜・食器用洗剤（サラヤ株式会社製）；脂肪酸含有量０％)４．５ｇに添加して、被験試料１～４を調製した。
実施例１－３のＳＬ含有組成物とオレイン酸を用いて、表９に示す各種の割合で脂肪酸を含有するＳＬ含有組成物１～４を調製した。また、表１０に示すように、これらのＳＬ含有組成物１～４を０．５ｇ、各々食器用洗剤(ハッピーエレファント 野菜・食器用洗剤（サラヤ株式会社製）；脂肪酸含有量０％)４．５ｇに添加して、被験試料１～４を調製した。
（２）起泡力の評価方法
上記で調製した被験試料１～４、及び対照試料として食器用洗剤を、蒸留水を用いて、食器用洗剤濃度が１５％になるように希釈した。
メスシリンダーに、希釈した被験試料１～４及び対照試料を各々１ｇ、及び水道水(25℃)100mLを加え、ロボミックス(ホモディスパーφ40を装着)（品番：RM/1001,メーカー：プライミクス株式会社）にて、５０００ｒｐｍで３分間、撹拌した。
撹拌停止後、３０秒後、６０秒後、及び１８０秒後の泡沫高さをメスシリンダーの目盛りから読み取った。
上記で調製した被験試料１～４、及び対照試料として食器用洗剤を、蒸留水を用いて、食器用洗剤濃度が１５％になるように希釈した。
メスシリンダーに、希釈した被験試料１～４及び対照試料を各々１ｇ、及び水道水(25℃)100mLを加え、ロボミックス(ホモディスパーφ40を装着)（品番：RM/1001,メーカー：プライミクス株式会社）にて、５０００ｒｐｍで３分間、撹拌した。
撹拌停止後、３０秒後、６０秒後、及び１８０秒後の泡沫高さをメスシリンダーの目盛りから読み取った。
（３）起泡力の評価結果
結果を表１０に示す。
結果を表１０に示す。
表１０の結果から、食器用洗剤に本発明のＳＬ含有組成物を添加することでその起泡力が助長されることが確認された（対照試料及び被験試料１参照）。また、ＳＬ含有組成物中の脂肪酸含量が多くなるほど、その起泡力の助長性が抑制されることが確認された（被験試料１～４）。ＳＬ含有組成物中の脂肪酸含量を６％以下に抑えることで、食器用洗剤そのものの起泡力と同等レベルになることから、起泡性の観点からも、ＳＬ含有組成物中の遊離脂肪酸含量は６％以下であることが好ましいと考えられる。
Claims (8)
- 下記の特性を有することを特徴とするソホロリピッド含有組成物：
（Ａ）ラクトン型ソホロリピッドの含有量：ソホロリピッド総量１００質量％あたり、４５～８１質量％、
（Ｂ）オレイン酸－ジアセチルラクトン型ソホロリピッドの含有量：ラクトン型ソホロリピッド総量１００質量％あたり、５８．７～９１．８質量％、
（Ｃ）ヘキサン抽出物の含有量：乾燥重量換算で６質量％以下。 - 下記の特性を有する、請求項１に記載するソホロリピッド含有組成物：
（Ｄ）水分量：５５質量％以下。 - さらに下記（Ｅ）及び（Ｆ）の少なくとも１つの特性を有することを特徴とする、請求項１又は２に記載するソホロリピッド含有組成物：
（Ｅ）酸型ソホロリピッドの含有量：ソホロリピッド総量１００質量％あたり、１０～５０質量％、
（Ｆ）二量体型ソホロリピッドの含有量：ソホロリピッド総量１００質量％あたり、０．１～４０質量％。 - 水分量を５０質量％に調整し、－５℃条件下で７２時間静置させた後の品温－５℃のソホロリピッド含有組成物の粘度が１４９０ｍＰａ・ｓ以上（ＴＶＢ－１０Ｍ形粘度計、測定時間１分間）である、請求項１～３のいずれかに記載するソホロリピッド含有組成物。
- 下記（Ａ）～（Ｃ）の特性を有するソホロリピッド含有組成物の製造方法であって、
（Ａ）ラクトン型ソホロリピッドの含有量：ソホロリピッド総量１００質量％あたり、４５～８１質量％、
（Ｂ）オレイン酸－ジアセチルラクトン型ソホロリピッドの含有量：ラクトン型ソホロリピッド総量１００質量％あたり、５８．７～９１．８質量％、
（Ｃ）ヘキサン抽出物の含有量：乾燥重量換算で６質量％以下；
当該製造方法は、ソホロリピッド産生酵母を疎水性基質及び親水性基質を含む培地中で培養する工程を有し、
前記疎水性基質は、脂肪酸であり、植物油を含有せず、
培養初期の培養物のｐＨが４～５であり、培養期間中に培養物のｐＨを制御せず、
培養期間中の通気撹拌培養条件を、培養物への酸素供給量が見掛けの酸素移動容量係数（ｋＬａ）に換算して１４５（ｌ／ｈｒ）以上になるように設定することを特徴とする、
前記ソホロリピッド含有組成物の製造方法。 - 下記（Ａ）～（Ｃ）の特性を有するソホロリピッド含有組成物の製造方法であって、
（Ａ）ラクトン型ソホロリピッドの含有量：ソホロリピッド総量１００質量％あたり、４５～８１質量％、
（Ｂ）オレイン酸－ジアセチルラクトン型ソホロリピッドの含有量：ラクトン型ソホロリピッド総量１００質量％あたり、５８．７～９１．８質量％、
（Ｃ）ヘキサン抽出物の含有量：乾燥重量換算で６質量％以下；
当該製造方法は、ソホロリピッド産生酵母を疎水性基質及び親水性基質を含む培地中で培養する工程を有し、
前記疎水性基質は融点３０℃以下の植物油であり、
培養期間中、培養物のｐＨを４．５～５に調整し、
培養期間中の通気撹拌培養条件を、培養物への酸素供給量が見掛け酸素移動容量係数（ｋＬａ）に換算して２００（ｌ／ｈｒ）以上になるように設定することを特徴とする、前記ソホロリピッド含有組成物の製造方法。 - 下記（Ａ）～（Ｃ）の特性を有するソホロリピッド含有組成物の製造方法であって、
（Ａ）ラクトン型ソホロリピッドの含有量：ソホロリピッド総量１００質量％あたり、４５～８１質量％、
（Ｂ）オレイン酸－ジアセチルラクトン型ソホロリピッドの含有量：ラクトン型ソホロリピッド総量１００質量％あたり、５８．７～９１．８質量％、
（Ｃ）ヘキサン抽出物の含有量：乾燥重量換算で６質量％以下；
前記製造方法は、ソホロリピッド産生酵母を疎水性基質及び親水性基質を含む培地中で培養する工程を有し、
前記疎水性基質は、融点３０℃以下の植物油であり、
培養初期の培養物のｐＨが４～５であり、培養期間中に培養物のｐＨを制御せず、
培養期間中の通気撹拌培養条件を、培養物への酸素供給量が見掛け酸素移動容量係数（ｋＬａ）に換算して１４５（ｌ／ｈｒ）以下になるように設定することを特徴とする、ソホロリピッド含有組成物の製造方法。 - 下記（Ａ）～（Ｃ）の特性を有するソホロリピッド含有組成物の製造方法であって、
（Ａ）ラクトン型ソホロリピッドの含有量：ソホロリピッド総量１００質量％あたり、４５～８１質量％、
（Ｂ）オレイン酸－ジアセチルラクトン型ソホロリピッドの含有量：ラクトン型ソホロリピッド総量１００質量％あたり、５８．７～９１．８質量％、
（Ｃ）ヘキサン抽出物の含有量：乾燥重量換算で６質量％以下；
前記製造方法は、ソホロリピッド産生酵母を疎水性基質及び親水性基質を含む培地中で培養する工程を有し、
前記疎水性基質は、融点３０℃以下の植物油と脂肪酸を含有するものであり、
培地中に含まれる前記融点３０℃以下の植物油と脂肪酸の総量１００質量％中の遊離脂肪酸の割合は２０質量％以上であり、
培養初期の培養物のｐＨが４～５であり、培養期間中に培養物のｐＨを制御せず、
培養期間中の通気撹拌培養条件を、培養物への酸素供給量が見掛け酸素移動容量係数（ｋＬａ）に換算して１４５（ｌ／ｈｒ）以上になるように設定することを特徴とする、ソホロリピッド含有組成物の製造方法。
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