JP7828500B2 - ホスホ－タウ抗体および使用の方法 - Google Patents

ホスホ－タウ抗体および使用の方法

Info

Publication number
JP7828500B2
JP7828500B2 JP2025115822A JP2025115822A JP7828500B2 JP 7828500 B2 JP7828500 B2 JP 7828500B2 JP 2025115822 A JP2025115822 A JP 2025115822A JP 2025115822 A JP2025115822 A JP 2025115822A JP 7828500 B2 JP7828500 B2 JP 7828500B2
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
seq
amino acid
acid sequence
tau
antibody
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
JP2025115822A
Other languages
English (en)
Other versions
JP2025137567A (ja
Inventor
ジェロミン アンドレアス
ベンカト クリシュ
Original Assignee
アルツパス， インコーポレイテッド
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by アルツパス， インコーポレイテッド filed Critical アルツパス， インコーポレイテッド
Publication of JP2025137567A publication Critical patent/JP2025137567A/ja
Application granted granted Critical
Publication of JP7828500B2 publication Critical patent/JP7828500B2/ja
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6854—Immunoglobulins
    • G01N33/6857—Antibody fragments
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
    • G01N33/6896—Neurological disorders, e.g. Alzheimer's disease
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/40—Immunoglobulins specific features characterized by post-translational modification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/46—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans from vertebrates
    • G01N2333/47—Assays involving proteins of known structure or function as defined in the subgroups
    • G01N2333/4701—Details
    • G01N2333/4703—Regulators; Modulating activity
    • G01N2333/4704—Inhibitors; Supressors
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/46—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans from vertebrates
    • G01N2333/47—Assays involving proteins of known structure or function as defined in the subgroups
    • G01N2333/4701—Details
    • G01N2333/4709—Amyloid plaque core protein
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
    • G01N2333/914—Hydrolases (3)
    • G01N2333/948—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • G01N2333/95—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99)
    • G01N2333/964—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99) derived from animal tissue
    • G01N2333/96402—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99) derived from animal tissue from non-mammals
    • G01N2333/96405—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99) derived from animal tissue from non-mammals in general
    • G01N2333/96408—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99) derived from animal tissue from non-mammals in general with EC number
    • G01N2333/96416—Aspartic endopeptidases (3.4.23)
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2440/00—Post-translational modifications [PTMs] in chemical analysis of biological material
    • G01N2440/14—Post-translational modifications [PTMs] in chemical analysis of biological material phosphorylation
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/28—Neurological disorders
    • G01N2800/2814—Dementia; Cognitive disorders
    • G01N2800/2821—Alzheimer

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Description

相互参照
本出願は、その全体が参照により組み込まれる、２０２１年９月９日出願の米国仮特許出願第６３／２４２，４３７号に基づく利益を主張する。
背景
アルツハイマー病（ＡＤ）および他のタウオパチーのバイオマーカーおよびスクリーニング技法の発見は、現在進行中の開発領域であり、これらのツールは、どの非認知症個体がＡＤ認知症を発症するリスクが最も高いかを決定するため、およびまた、患者において疾患進行を評価するために、集団をスクリーニングするために適用され得る。アミロイドベータ４２（Ａβ４２）、ニューロフィラメント軽鎖および種々のタウアイソフォームが含まれる、ＡＤ病理を反映するタンパク質は、種々の手段によって検出されている。タウの異常なまたは過剰なリン酸化は、病理学的に正常なタウ分子の、種々のタウオパチー病理を示すペアードヘリカルフィラメント（ＰＨＦ）タウおよび神経原線維変化（ＮＦＴ）への変換に関連付けられている。
要旨
タウは、ＣＮＳニューロンにおいて豊富に発現される重要な微小管関連タンパク質であり、正常な細胞生理において重要な役割を果たす。タウはまた、アルツハイマー病および他のタウオパチーにおいて調節不全であることが見出されている。タウタンパク質の６つのアイソフォームが、選択的スプライシングによってタウ遺伝子から生成される。これらのアイソフォームは、２つのＮ末端挿入およびＲ２と呼ばれる１つのリピートの存在または非存在によって、互いに異なる。タウの６つ全てのタンパク質アイソフォームは、正常および健康な細胞条件下で高度に可溶性であり、典型的には、リン酸化および脱リン酸化によって調節される。タウは、微小管と相互作用し、微小管アセンブリを促進することが実証されている。ニューロンでは、タウは、軸索微小管の形成を促進し、それらを安定化する。タウは、神経突起伸長を駆動する際にさらなる役割を有する。タウと微小管との障害された相互作用は、タウオパチーの病理、発症および進行における重要な構成要素であり得る。タウの過剰リン酸化は、ＡＤおよび他のタウオパチーのホールマーク特色であり、過剰リン酸化の程度は、疾患進行と相関する場合が多い。タウタンパク質の過剰リン酸化は、タウのペアードヘリカルフィラメントおよびストレートフィラメントの不溶性タングルの自己アセンブリを生じ得る。神経原線維変化（ＮＦＴ）と呼ばれる、タングルのこれらの不溶性凝集体は、過剰リン酸化されたタウから構成され、タウオパチーの病理学的マーカーであるとみなされる。
脳脊髄液（ＣＳＦ）および／または血液から各々検出されるリン酸化されたタウ（ｐタウ）、総タウおよびＡβ４２は、アルツハイマー病およびいくつかの他の関連するタウオパチーの個々のバイオマーカーである。ＣＳＦ ｐタウは、年齢および性別が一致した対照と比較して、前駆ステージおよび認知症ステージの両方においてＡＤを有することが後に確認された個体において増加する。ＣＳＦ ｐタウレベルは、ＡＤを有する個体における認知障害の程度との、強い程度の相関を示す。実際、ＣＳＦ ｐタウレベルは、認知的に障害されていないところから、軽度認知障害（ＭＣＩ）まで、次いでＡＤ認知症までの進行を予測するバイオマーカーとして、ある程度の精度で使用され得る。ＡＤ進行の比較的早期のステージでさえも予測するためのバイオマーカーとしての有用性に関して、ＣＳＦ ｐタウは、プレクリニカルＡＤを有する個体由来の試料中で有意に増加することが示されている。ｐタウリン酸化の程度における変化は、ＡＤのプレクリニカル孤発例および常染色体優性ＡＤの早期ステージの両方において、実証されている。ｐタウ、総タウおよびＡβ４２の血中レベルは、同じ個体内でアッセイした場合には、ＣＳＦレベルよりも一般に低く、これらのバイオマーカーの血中レベルを、十分な特異度および精度でアッセイすることができる場合には、ＡＤおよび他の関連するタウオパチーの情報価値のあるバイオマーカーとして利用され得る。
ＮＦＴへと凝集する過剰リン酸化されたタウに寄与するリン酸化のいくつかの部位は、同定されている。最も長いタウアイソフォームでは、７９個の潜在的なセリンまたはスレオニンリン酸化部位が存在し、これらの部位のうち少なくとも３０個は、ＮＦＴ凝集体においてリン酸化されると同定されている。リン酸化ステータスについてタウ分子をアッセイするために使用される共通の部位は、スレオニン－１８１にある。ＣＳＦ液は、種々の存在量で、タウ断片のアレイを含有する。タウポリペプチドのＮ末端領域からのおよび中央領域からのタウの断片は、ＣＳＦ試料中にＣ末端タウ断片よりもかなり豊富である。個体由来の血漿試料もまた、タウポリペプチドおよびタウポリペプチド断片を含有するが、これらは、一致したＣＳＦ試料中よりも低い濃度で存在する傾向がある。疾患の病理および進行に関連する特定のアミノ酸残基におけるタウリン酸化を検出することができることは、診断、疾患ステージ分けの、ならびにＡＤおよび他のタウオパチーに対する処置有効性を測定するための測定基準としての、重要な構成要素である。血漿試料からの、特定の疾患関連残基におけるｐタウレベルの検出および測定は、ＡＤもしくは他のタウオパチーを発症するリスクがあり得るまたはＡＤもしくは他のタウオパチーの早期ステージにある個体のための、より高感度の精密に調整された診断、予後予測および疾患分析の開発にとって大きな力になる。スレオニン２１７におけるタウのリン酸化（ｐタウ２１７）は、新たなバイオマーカーおよび診断アッセイの開発において、特に目的とされる１つのそのような残基である。ＣＳＦおよび血漿中のｐタウバイオマーカー濃度における変更は、ＡＤおよび他のタウオパチーにおける測定可能な行動的または認知的変化に先行すると考えられる。ある特定の残基のタウリン酸化の一連の特定の点および程度を可能にする新たなアッセイの開発は、臨床的に適切な医学的診断および処置決定において疑いようもなく役に立つ。新たなアッセイからの結果の、既存のアッセイからの結果との比較もまた、さらなる医学的に情報価値のある決定を生じることができる。血漿ベースのタウバイオマーカーアッセイからの結果は、特に、プレクリニカルまたは早期疾患ステージにおける分析のための、それらの有用性についての測定基準として、一致したＣＳＦ試料（ＣＳＦ ｐタウまたはＣＳＦ可溶性Ａβを検出する）に対して、およびまた、Ａβ凝集体の程度および位置を検出する陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）スキャンに対して、比較され得る。
個体由来の試料中のリン酸化されたタウを検出するための方法であって、可変ドメイン重鎖領域（ＶＨ）および可変ドメイン軽鎖領域（ＶＬ）を含む抗体または抗体断片を使用して、試料に対してイムノアッセイを実施するステップを含み、ＶＨが、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つに示される配列と少なくとも約９０％同一なアミノ酸配列を含み、ＶＬが、配列番号３５～４０のうちのいずれか１つに示される配列と少なくとも約９０％同一なアミノ酸配列を含む、方法が本明細書で提供される。個体由来の試料中のリン酸化されたタウを検出するための方法であって、リン酸化されたタウが、ｐタウ－１８１、ｐタウ－２１２、ｐタウ－２１７、ｐタウ－２３１、ｐタウ－２１４およびｐタウ－２２０からなる群から選択される、方法が、本明細書でさらに提供される。個体由来の試料中のリン酸化されたタウを検出するための方法であって、リン酸化されたタウがｐタウ－２１７である、方法が、本明細書でさらに提供される。個体由来の試料中のリン酸化されたタウを検出するための方法であって、リン酸化されたタウがｐタウ－２３１である、方法が、本明細書でさらに提供される。個体由来の試料中のリン酸化されたタウを検出するための方法であって、ｐタウ－２１７およびｐタウ－２３１を検出する方法が、本明細書でさらに提供される。個体由来の試料中のリン酸化されたタウを検出するための方法であって、ｐタウ－２１２およびｐタウ－２１７を検出する方法が、本明細書でさらに提供される。個体由来の試料中のリン酸化されたタウを検出するための方法であって、ｐタウ－２１２およびｐタウ－２３１を検出する方法が、本明細書でさらに提供される。個体由来の試料中のリン酸化されたタウを検出するための方法であって、ｐタウ－１８１およびｐタウ－２１７を検出する方法が、本明細書でさらに提供される。個体由来の試料中のリン酸化されたタウを検出するための方法であって、ｐタウ－１８１およびｐタウ－２３１を検出する方法が、本明細書でさらに提供される。個体由来の試料中のリン酸化されたタウを検出するための方法であって、ｐタウ－１８１、ｐタウ－２１７およびｐタウ－２３１を検出する方法が、本明細書でさらに提供される。個体由来の試料中のリン酸化されたタウを検出するための方法であって、ｐタウ－２１２、ｐタウ－２１７およびｐタウ－２３１を検出する方法が、本明細書でさらに提供される。個体由来の試料中のリン酸化されたタウを検出するための方法であって、血漿試料および血清試料からなる群から選択される試料中のｐタウ－２１７およびｐタウ－２３１を検出する方法が、本明細書でさらに提供される。個体由来の試料中のリン酸化されたタウを検出するための方法であって、血漿試料および血清試料からなる群から選択される試料中のｐタウ－２１２およびｐタウ－２１７を検出する方法が、本明細書でさらに提供される。個体由来の試料中のリン酸化されたタウを検出するための方法であって、血漿試料および血清試料からなる群から選択される試料中のｐタウ－２１２およびｐタウ－２３１を検出する方法が、本明細書でさらに提供される。個体由来の試料中のリン酸化されたタウを検出するための方法であって、血漿試料および血清試料からなる群から選択される試料中のｐタウ－１８１およびｐタウ－２１７を検出する方法が、本明細書でさらに提供される。個体由来の試料中のリン酸化されたタウを検出するための方法であって、血漿試料および血清試料からなる群から選択される試料中のｐタウ－１８１およびｐタウ－２３１を検出する方法が、本明細書でさらに提供される。個体由来の試料中のリン酸化されたタウを検出するための方法であって、血漿試料および血清試料からなる群から選択される試料中のｐタウ－１８１、ｐタウ－２１７およびｐタウ－２３１を検出する方法が、本明細書でさらに提供される。個体由来の試料中のリン酸化されたタウを検出するための方法であって、血漿試料および血清試料からなる群から選択される試料中のｐタウ－２１２、ｐタウ－２１７およびｐタウ－２３１を検出する方法が、本明細書でさらに提供される。個体由来の試料中のリン酸化されたタウを検出するための方法であって、ＶＨが、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つに従うアミノ酸配列を含む、方法が、本明細書でさらに提供される。個体由来の試料中のリン酸化されたタウを検出するための方法であって、ＶＬが、配列番号３５～４０のうちのいずれか１つに従うアミノ酸配列を含む、方法が、本明細書でさらに提供される。個体由来の試料中のリン酸化されたタウを検出するための方法であって、ＶＨが、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つに従うアミノ酸配列を含み、ＶＬが、配列番号３５～４０のうちのいずれか１つに従うアミノ酸配列を含む、方法が、本明細書でさらに提供される。個体由来の試料中のリン酸化されたタウを検出するための方法であって、ＶＨが、配列番号３０と少なくとも約９０％同一なアミノ酸配列を含み、ＶＬが、配列番号３５と少なくとも約９０％同一なアミノ酸配列を含む、方法が、本明細書でさらに提供される。個体由来の試料中のリン酸化されたタウを検出するための方法であって、ＶＨが、配列番号３１と少なくとも約９０％同一なアミノ酸配列を含み、ＶＬが、配列番号３６と少なくとも約９０％同一なアミノ酸配列を含む、方法が、本明細書でさらに提供される。個体由来の試料中のリン酸化されたタウを検出するための方法であって、ＶＨが、配列番号３１と少なくとも約９０％同一なアミノ酸配列を含み、ＶＬが、配列番号３７と少なくとも約９０％同一なアミノ酸配列を含む、方法が、本明細書でさらに提供される。個体由来の試料中のリン酸化されたタウを検出するための方法であって、ＶＨが、配列番号３２と少なくとも約９０％同一なアミノ酸配列を含み、ＶＬが、配列番号３８と少なくとも約９０％同一なアミノ酸配列を含む、方法が、本明細書でさらに提供される。個体由来の試料中のリン酸化されたタウを検出するための方法であって、ＶＨが、配列番号３３と少なくとも約９０％同一なアミノ酸配列を含み、ＶＬが、配列番号３９と少なくとも約９０％同一なアミノ酸配列を含む、方法が、本明細書でさらに提供される。個体由来の試料中のリン酸化されたタウを検出するための方法であって、ＶＨが、配列番号３４と少なくとも約９０％同一なアミノ酸配列を含み、ＶＬが、配列番号４０と少なくとも約９０％同一なアミノ酸配列を含む、方法が、本明細書でさらに提供される。個体由来の試料中のリン酸化されたタウを検出するための方法であって、抗体または抗体断片が、配列番号４１～５１のうちのいずれか１つと少なくとも約９０％同一なアミノ酸配列を含む、方法が、本明細書でさらに提供される。個体由来の試料中のリン酸化されたタウを検出するための方法であって、試料に対してアッセイを実施して、Ａβ４２、Ａβ４０、Ａβ３８、ＢＡＣＥ１、ｈＦＡＢＰ、ＴＲＥＭ２、ＹＫＬ－４０、ＩＰ－１０、ニューログラニン、ＳＮＡＰ－２５、シナプトタグミン、アルファ－シヌクレイン、ＴＤＰ－４３、フェリチン、ＶＩＬＩＰ－１、ＮｆＬ、ＧＦＡＰ、およびそれらの組合せからなる群から選択されるバイオマーカーのレベルを決定するステップをさらに含む、方法が、本明細書でさらに提供される。個体由来の試料中のリン酸化されたタウを検出するための方法であって、試料が、血液試料、血漿試料、血清試料および脳脊髄液（ＣＳＦ）試料からなる群から選択される、方法が、本明細書でさらに提供される。個体由来の試料中のリン酸化されたタウを検出するための方法であって、リン酸化されたタウの検出に基づいて、個体におけるアルツハイマー病を立証するステップをさらに含む、方法が、本明細書でさらに提供される。個体由来の試料中のリン酸化されたタウを検出するための方法であって、リン酸化されたタウの検出に基づいて、アルツハイマー病の発症について個体の予後予測を立証するステップをさらに含む、方法が、本明細書でさらに提供される。個体由来の試料中のリン酸化されたタウを検出するための方法であって、個体の年齢、遺伝子型、またはバイオマーカーの発現をさらに決定する、方法が、本明細書でさらに提供される。個体由来の試料中のリン酸化されたタウを検出するための方法であって、バイオマーカーが、Ａβ４２、Ａβ４０、Ａβ３８、ＢＡＣＥ１、ｈＦＡＢＰ、ＴＲＥＭ２、ＹＫＬ－４０、ＩＰ－１０、ニューログラニン、ＳＮＡＰ－２５、シナプトタグミン、アルファ－シヌクレイン、ＴＤＰ－４３、フェリチン、ＶＩＬＩＰ－１、ＮｆＬ、ＧＦＡＰ、およびそれらの組合せからなる群から選択される、方法が、本明細書でさらに提供される。個体由来の試料中のリン酸化されたタウを検出するための方法であって、リン酸化されたタウを検出するのに、少なくとも約８０％の特異度を有する、方法が、本明細書でさらに提供される。個体由来の試料中のリン酸化されたタウを検出するための方法であって、リン酸化されたタウを検出するのに、少なくとも約８５％の特異度を有する、方法が、本明細書でさらに提供される。個体由来の試料中のリン酸化されたタウを検出するための方法であって、リン酸化されたタウを検出するのに、少なくとも約９０％の特異度を有する、方法が、本明細書でさらに提供される。個体由来の試料中のリン酸化されたタウを検出するための方法であって、リン酸化されたタウを検出するのに、少なくとも約８０％の感度を有する、方法が、本明細書でさらに提供される。個体由来の試料中のリン酸化されたタウを検出するための方法であって、リン酸化されたタウを検出するのに、少なくとも約８５％の感度を有する、方法が、本明細書でさらに提供される。個体由来の試料中のリン酸化されたタウを検出するための方法であって、リン酸化されたタウを検出するのに、少なくとも約９０％の感度を有する、方法が、本明細書でさらに提供される。個体由来の試料中のリン酸化されたタウを検出するための方法であって、少なくとも約１．０ピコグラム／ミリリットル（ｐｇ／ｍＬ）の検出限界で、試料中のリン酸化されたタウを検出することが可能である、方法が、本明細書でさらに提供される。個体由来の試料中のリン酸化されたタウを検出するための方法であって、少なくとも約１．５ピコグラム／ミリリットル（ｐｇ／ｍＬ）の検出限界で、試料中のリン酸化されたタウを検出することが可能である、方法が、本明細書でさらに提供される。個体由来の試料中のリン酸化されたタウを検出するための方法であって、少なくとも約５ピコグラム／ミリリットル（ｐｇ／ｍＬ）の検出限界で、試料中のリン酸化されたタウを検出することが可能である、方法が、本明細書でさらに提供される。
ある特定の実施形態において、ｉ）可変重鎖（ＶＨ）ドメインを含む重鎖およびｉｉ）可変軽鎖（ＶＬ）ドメインを含む軽鎖を含む抗タウ抗体であって、ＶＨドメインが、配列番号１～５から選択される配列を含むＨＣＤＲ１配列、配列番号６～９から選択される配列を含むＨＣＤＲ２配列および配列番号１０～１３から選択される配列を含むＨＣＤＲ３配列を含み、ＶＬドメインが、配列番号１４～１９から選択される配列を含むＬＣＤＲ１配列、配列番号２０～２３から選択される配列を含むＬＣＤＲ２配列および配列番号２４～２９から選択される配列を含むＬＣＤＲ３配列を含む、抗タウ抗体もまた本明細書で提供される。一部の実施形態では、ＨＣＤＲ１配列は配列番号１を含み、ＨＣＤＲ２配列は配列番号６を含み、ＨＣＤＲ３配列は配列番号１０を含み、ＬＣＤＲ１配列は配列番号１４を含み、ＬＣＤＲ２配列は配列番号２０を含み、ＬＣＤＲ３配列は配列番号２４を含む。一部の実施形態では、ＨＣＤＲ１配列は配列番号２を含み、ＨＣＤＲ２配列は配列番号７を含み、ＨＣＤＲ３配列は配列番号１１を含み、ＬＣＤＲ１配列は配列番号１５を含み、ＬＣＤＲ２配列は配列番号２１を含み、ＬＣＤＲ３配列は配列番号２５を含む。一部の実施形態では、ＨＣＤＲ１配列は配列番号２を含み、ＨＣＤＲ２配列は配列番号７を含み、ＨＣＤＲ３配列は配列番号１１を含み、ＬＣＤＲ１配列は配列番号１６を含み、ＬＣＤＲ２配列は配列番号２２を含み、ＬＣＤＲ３配列は配列番号２６を含む。一部の実施形態では、ＨＣＤＲ１配列は配列番号３を含み、ＨＣＤＲ２配列は配列番号８を含み、ＨＣＤＲ３配列は配列番号１０を含み、ＬＣＤＲ１配列は配列番号１７を含み、ＬＣＤＲ２配列は配列番号２０を含み、ＬＣＤＲ３配列は配列番号２７を含む。一部の実施形態では、ＨＣＤＲ１配列は配列番号４を含み、ＨＣＤＲ２配列は配列番号７を含み、ＨＣＤＲ３配列は配列番号１２を含み、ＬＣＤＲ１配列は配列番号１８を含み、ＬＣＤＲ２配列は配列番号２３を含み、ＬＣＤＲ３配列は配列番号２８を含む。一部の実施形態では、ＨＣＤＲ１配列は配列番号５を含み、ＨＣＤＲ２配列は配列番号９を含み、ＨＣＤＲ３配列は配列番号１３を含み、ＬＣＤＲ１配列は配列番号１９を含み、ＬＣＤＲ２配列は配列番号２１を含み、ＬＣＤＲ３配列は配列番号２９を含む。一部の実施形態では、ｉ）可変重鎖（ＶＨ）ドメインを含む重鎖およびｉｉ）可変軽鎖（ＶＬ）ドメインを含む軽鎖を含む抗タウ抗体であって、ＶＨドメインが、配列番号３０～３４から選択される配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％の配列同一性を含む、抗タウ抗体が本明細書でさらに提供される。一部の実施形態では、ｉ）可変重鎖（ＶＨ）ドメインを含む重鎖およびｉｉ）可変軽鎖（ＶＬ）ドメインを含む軽鎖を含む抗タウ抗体であって、ＶＬドメインが、配列番号３５～４０から選択される配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％の配列同一性を含む、抗タウ抗体が本明細書でさらに提供される。一部の実施形態では、本明細書で記載される抗タウ抗体は、キメラ抗体またはその抗原結合性断片である。一部の実施形態では、本明細書で記載される抗タウ抗体は、ＩｇＧ－ｓｃＦｖ、ナノボディ、ＢｉＴＥ、ダイアボディ、ＤＡＲＴ、ＴａｎｄＡｂ、ｓｃダイアボディ、ｓｃダイアボディ－ＣＨ３、トリプルボディ、ミニ－抗体、ミニボディ、ＴｒｉＢｉミニボディ、ｓｃＦｖ－ＣＨ３ ＫＩＨ、Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃ ＫＩＨ、Ｆａｂ－ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ－ＣＨ－ＣＬ－ｓｃＦｖ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ’）３、Ｆ（ａｂ’）２－ｓｃＦｖ２、ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ－ＫＩＨ、Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃ、四価ＨＣＡｂ、ｓｃダイアボディ－Ｆｃ、ダイアボディ－Ｆｃ、タンデムｓｃＦｖ－Ｆｃまたはイントラボディを含む。一部の実施形態では、本明細書で記載される抗タウ抗体は、ＩｇＧ１抗体である。一部の実施形態では、本明細書で記載される抗タウ抗体は、ＩｇＧ２抗体である。一部の実施形態では、本明細書で記載される抗タウ抗体は、ＩｇＧ４抗体である。一部の実施形態では、ｉ）可変重鎖（ＶＨ）ドメインを含む重鎖およびｉｉ）可変軽鎖（ＶＬ）ドメインを含む軽鎖を含む抗タウ抗体であって、軽鎖がカッパ鎖である、抗タウ抗体が本明細書でさらに提供される。一部の実施形態では、ｉ）可変重鎖（ＶＨ）ドメインを含む重鎖およびｉｉ）可変軽鎖（ＶＬ）ドメインを含む軽鎖を含む抗タウ抗体であって、約１００ｐＭ～約３ｎＭの、ヒトタウに対する結合親和性を有する、抗タウ抗体が本明細書でさらに提供される。一部の実施形態では、配列番号５２～５６から選択される配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％の配列同一性を含む核酸によってコードされるＶＨドメインを含む抗タウ抗体が本明細書でさらに提供される。一部の実施形態では、配列番号５７～６２から選択される配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％の配列同一性を含む核酸によってコードされるＶＬドメインを含む抗タウ抗体が本明細書でさらに提供される。一部の実施形態では、配列番号５２～５６から選択される配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％の配列同一性を含む核酸によってコードされるＶＨドメインおよび配列番号５７～６２から選択される配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％の配列同一性を含む核酸によってコードされるＶＬドメインを含む抗タウ抗体が本明細書でさらに提供される。一部の実施形態では、配列番号５２～５６と同一な配列を含む核酸によってコードされるＶＨドメインを含む抗タウ抗体が本明細書でさらに提供される。一部の実施形態では、配列番号５７～６２と同一な配列を含む核酸によってコードされるＶＬドメインを含む抗タウ抗体が本明細書でさらに提供される。一部の実施形態では、配列番号５２～５６と同一な配列を含む核酸によってコードされるＶＨドメインおよび配列番号５７～６２と同一な配列を含む核酸によってコードされるＶＬドメインを含む抗タウ抗体が本明細書でさらに提供される。
参照による組み込み
本明細書で言及される全ての刊行物、特許および特許出願は、各個々の刊行物、特許または特許出願が参照により組み込まれると具体的かつ個々に示されるのと同じ程度まで、本明細書で参照により組み込まれる。
特許または出願ファイルは、カラーで描かれた少なくとも１枚の図面を含有する。カラーの図面（複数可）を有するこの特許または特許出願公報のコピーは、請求および必要な手数料の納付により、特許庁によって提供される。
図１は、本明細書に記載されるタウ抗体をアッセイするために本明細書で使用される単一分子アレイ（Ｓｉｍｏａ（登録商標））法のスキーマを示す。基質を試料に添加した（ビーズ上でのサンドイッチＥＬＩＳＡ、１．１）後、試料をＳｉｍｏａ（登録商標）ディスクに添加する（１．２）。ビーズに、ディスク上のマイクロアレイウェル中に沈殿する時間を与える（１ウェル当たり１つのビーズ）（１．３）。次いで、シーリングオイルを使用して過剰なビーズを除去して、イメージングを可能にする（１．４）。サンドイッチ複合体を有するビーズ（陽性ビーズ）は、基質と共に蛍光を発し、イメージングの間にはっきり写る；サンドイッチ複合体を有さないビーズ（陰性）は、イメージングにおいてなおもはっきり写るが、蛍光は発しない（１．５）。陽性ビーズのパーセンテージを、ＡＥＢ（平均酵素／ビーズ）値に変換する。
図２Ａ～２Ｄは、Ｓｉｍｏａ（登録商標）アッセイにおける、抗体１、抗体２、抗体３、抗体４、抗体５および抗体６についてのデータを示す。 図２Ａ～２Ｄは、Ｓｉｍｏａ（登録商標）アッセイにおける、抗体１、抗体２、抗体３、抗体４、抗体５および抗体６についてのデータを示す。
図３は、ＥＬＩＳＡデータを示す。
図４Ａ～４Ｇは、抗体６の免疫組織化学染色についてのデータを示す。 図４Ａ～４Ｇは、抗体６の免疫組織化学染色についてのデータを示す。 図４Ａ～４Ｇは、抗体６の免疫組織化学染色についてのデータを示す。 図４Ａ～４Ｇは、抗体６の免疫組織化学染色についてのデータを示す。 図４Ａ～４Ｇは、抗体６の免疫組織化学染色についてのデータを示す。 図４Ａ～４Ｇは、抗体６の免疫組織化学染色についてのデータを示す。 図４Ａ～４Ｇは、抗体６の免疫組織化学染色についてのデータを示す。
図５Ａ～５Ｇは、抗体５の免疫組織化学染色についてのデータを示す。 図５Ａ～５Ｇは、抗体５の免疫組織化学染色についてのデータを示す。 図５Ａ～５Ｇは、抗体５の免疫組織化学染色についてのデータを示す。 図５Ａ～５Ｇは、抗体５の免疫組織化学染色についてのデータを示す。 図５Ａ～５Ｇは、抗体５の免疫組織化学染色についてのデータを示す。 図５Ａ～５Ｇは、抗体５の免疫組織化学染色についてのデータを示す。 図５Ａ～５Ｇは、抗体５の免疫組織化学染色についてのデータを示す。
図６Ａ～６Ｇは、抗体２の免疫組織化学染色についてのデータを示す。 図６Ａ～６Ｇは、抗体２の免疫組織化学染色についてのデータを示す。 図６Ａ～６Ｇは、抗体２の免疫組織化学染色についてのデータを示す。 図６Ａ～６Ｇは、抗体２の免疫組織化学染色についてのデータを示す。 図６Ａ～６Ｇは、抗体２の免疫組織化学染色についてのデータを示す。 図６Ａ～６Ｇは、抗体２の免疫組織化学染色についてのデータを示す。 図６Ａ～６Ｇは、抗体２の免疫組織化学染色についてのデータを示す。
図７は、間接的ＥＬＩＳＡアッセイの図およびｐタウ－２１７ペプチドへの抗体結合をアッセイするＥＬＩＳＡデータのグラフを示す。
図８は、血漿に由来する１２０個のクリニック試料についてのｐタウ－２１７ペプチドへの抗体２結合についてのＥＬＩＳＡアッセイのシグナル／ノイズ（Ｓ／Ｎ）分析のグラフ、および血漿に由来する１２０個のクリニック試料についてのｐタウ－２１７ペプチドへの抗体２結合についてのＥＬＩＳＡアッセイについての変動係数（ＣＶ％）のグラフを示す。
図９は、ＡＤｘ ｐ２０４抗体を使用するアッセイと比較した、脳脊髄液に由来する臨床試料（６８個のＣＳＦ試料）および血漿に由来する臨床試料（１２０個の血漿試料）のＱＴｘで示される群（プレート）に対する、抗体２を使用するＳｉｍｏａ（登録商標）ベースのｐタウ－２１７アッセイについての較正曲線（Ｃａｌ曲線）のグラフを示す。
図１０は、非アルツハイマー病、不確定の診断またはアルツハイマー病のいずれかの臨床診断を有する個体における、血漿（Ｙ軸）またはＣＳＦ（Ｘ軸）のいずれかに由来する試料個体由来の一致した試料における、抗体２を使用するＳｉｍｏａ（登録商標）ベースのｐタウアッセイ－２１７結果のグラフ、および相関結果の統計分析を示す。
図１１は、試料ごとの、抗体２を使用するＳｉｍｏａ（登録商標）ベースのｐタウアッセイ－２１７結果 対 試料ごとの、抗体２を使用するＳｉｍｏａ（登録商標）ベースのｐタウアッセイ－１８１結果のグラフ、および相関結果の統計分析を示す。
図１２は、試料ごとの、抗体２を使用するＳｉｍｏａ（登録商標）ベースのｐタウアッセイ－２１７結果 対 試料ごとの、Ｉｎｎｏｔｅｓｔ ｐタウ１８１抗体を使用するＳｉｍｏａ（登録商標）ベースのタウアッセイ結果のグラフ、および相関結果の統計分析を示す。
図１３は、捕捉抗体としての抗体２、検出子抗体としての抗体ＡＤｘ ｐ２０４およびキャリブレーターとしてのペプチドを使用するＳｉｍｏａ（登録商標）ベースのｐタウアッセイ結果のグラフ、ならびに相関結果の統計分析を示す。
図１４は、ＣＳＦまたは血漿のいずれかに由来する、アルツハイマー病の臨床診断を有する個体由来の試料および対照個体由来の試料を一緒にグループ化する、抗体２を使用するＳｉｍｏａ（登録商標）ベースのｐタウアッセイ－２１７結果のグラフを示す。
図１５は、種々の濃度のＥＤＴＡ血漿試料に対する、抗体２を使用するＳｉｍｏａ（登録商標）ベースのｐタウアッセイ－２１７結果のグラフ、およびアッセイの精度を示すための、各試料濃度についての変動係数を列挙するチャートを示す。
図１６は、変動係数（ＣＶ％） 対 測定された濃度としてグラフ化した、抗体２を使用するＳｉｍｏａ（登録商標）ベースのｐタウアッセイ－２１７結果のグラフを示す。
図１７は、高い内因性分析物濃度を含有する実際の試料が、希釈後に標準曲線において類似の程度の検出を提供するかどうかを決定する、抗体２を使用するＳｉｍｏａ（登録商標）ベースのｐタウアッセイ－２１７結果のグラフ、および並行性の統計分析を示す。
図１８は、検出上限を上回る検出分析物でスパイクした試料マトリックスが、４つの試料プラス緩衝液スパイクについて標準曲線範囲内の希釈後の信頼性のある定量化をなおも提供できるかどうかを決定する、抗体２を使用するＳｉｍｏａ（登録商標）ベースのｐタウアッセイ－２１７結果のグラフ、および線形性の統計分析を示す。
図１９は、検出上限を上回る検出分析物でスパイクした試料マトリックスが、３つの試料プラス較正試料について標準曲線範囲内の希釈後の信頼性のある定量化をなおも提供できるかどうかを決定する、抗体２を使用するＳｉｍｏａ（登録商標）ベースのｐタウアッセイ－２１７結果のグラフ、および線形性の統計分析を示す。
図２０は、物忘れクリニックコホートの臨床的検証における抗体２を使用するＳｉｍｏａ（登録商標）ベースのｐタウアッセイ－２１７結果のグラフ、およびｐタウ－２１７アッセイ感度に対してグラフ化した受信者動作特性（ＲＯＣ）分析のグラフを示す。
図２１は、対照およびＡＤ認知症個体からの群に対する、抗体２を使用するＳｉｍｏａ（登録商標）ベースのｐタウアッセイ－２１７結果のグラフを示す。
図２２は、対照およびＡＤ認知症個体からの群に対する、Ｑｕａｎｔｅｒｉｘ（登録商標）からの抗体を使用するＳｉｍｏａ（登録商標）ベースのｐタウアッセイ－１８１結果のグラフ、および試料階層化のチャートを示す。
図２３は、計算された変動係数を伴う精度プロットを示す、抗体２を使用するＳｉｍｏａ（登録商標）ベースのｐタウアッセイ－２１７結果およびＱｕａｎｔｅｒｉｘ（登録商標）からの抗体を使用するＳｉｍｏａ（登録商標）ベースのｐタウアッセイ－１８１結果のグラフを示す。
図２４は、感度および特異度を比較する種々のｐタウＳｉｍｏａ（登録商標）ベースのアッセイの臨床的性能のグラフ、および結果の統計分析を含むチャートを示す。
図２５は、種々のタンパク質ドメインの相対位置と、本明細書で開示される方法を使用してリン酸化ステータスについてアッセイされ得るスレオニン残基の位置とを示す、タウの概略図を示す。
図２６は、種々の抗体についての、間接的ＥＬＩＳＡにおける、非リン酸化Ｔ２１７（Ｂｉｏ－ｐｔ６５４）および全長タウ（タウ４４１）を用いた、タウ断片に対する反応性のグラフを示す。
図２７は、種々の抗体についての、間接的ＥＬＩＳＡにおける、リン酸化されたＴ１８１（Ｂｉｏ－ｐｔ１２６）およびリン酸化されたＴ２３１（Ｂｉｏ－ｐｔ１４６）を用いた、タウ断片に対する反応性のグラフを示す。
図２８は、種々の合成ペプチドに対する捕捉ツールとしてｐタウ２１７モノクローナル抗体を利用するアッセイの図、および捕捉ツールとして抗体２を使用するこのアッセイについての結果のグラフを示す。
図２９は、ＡＤ患者または対照対象由来の脳溶解物試料に対する、種々のタウ抗体を使用するウエスタンブロット分析を示す。
詳細な説明
アルツハイマー病（ＡＤ）は、複雑な疾患であり、有効な処置は、正確な診断を必要とする。診断および／または予後予測アッセイにおける使用のための改善された抗体を含む、ＡＤを検出するための改善された組成物および方法が、本明細書に記載される。
特定の専門用語
本開示を通じて、種々の実施形態が、範囲形式で示される。範囲形式での記載は、単に簡便さおよび簡潔さのためであり、任意の実施形態の範囲に対する硬直的な限定として解釈すべきでないことを理解すべきである。したがって、範囲の記載は、文脈が他を明らかに示さない限り、具体的に開示された全ての可能な部分範囲、ならびに下限の単位の１０分の１までの、その範囲内の個々の数値を有するとみなすべきである。例えば、範囲の記載、例えば、１～６は、具体的に開示された部分範囲、例えば、１～３、１～４、１～５、２～４、２～６、３～６など、ならびにその範囲内の個々の値、例えば、１．１、２、２．３、５および５．９を有するとみなすべきである。これは、範囲の広さにかかわらず適用される。これらの介在する範囲の上限および下限は、より小さい範囲内に独立して含まれ得、また、述べられた範囲内の任意の具体的に排除された限界に従って、本発明内に包含される。述べられた範囲が限界の一方または両方を含む場合、含まれる限界のいずれかまたは両方を排除する範囲もまた、文脈が他を明らかに示さない限り、本発明中に含まれる。
本明細書で使用される専門用語は、特定の実施形態を記載することのみを目的としており、いずれの実施形態の限定とも解釈されない。本明細書で使用される場合、単数形「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」および「この（ｔｈｅ）」は、文脈が他を明らかに示さない限り、複数形も含む意図である。用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」および／または「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は、本明細書で使用される場合、述べられた特色、整数、ステップ、操作、要素および／または構成要素の存在を特定するが、１つまたは複数の他の特色、整数、ステップ、操作、要素、構成要素、および／またはそれらの群の存在または追加を除外しないことがさらに理解される。本明細書で使用される場合、用語「および／または」は、関連する列挙された項目のうちの１つまたは複数の任意のおよび全ての組合せを含む。
具体的に述べられない限り、または文脈から明らかでない限り、本明細書で使用される場合、数または数の範囲に関する用語「約」は、述べられた数およびその数＋／－１０％、または範囲について列挙された値についての列挙された下限を１０％下回ることおよび列挙された上限を１０％上回ることを意味すると理解される。
用語「個体」、「患者」または「対象」は、互換的に使用される。これらの用語はいずれも、ヘルスケア労働者（例えば、医師、正看護師、ナース・プラクティショナー、医師の助手、病院雑役係またはホスピス労働者）の監督（例えば、定期的または断続的）によって特徴付けられる状況を要求せず、それに限定されることもない。さらに、これらの用語は、ヒトまたは動物対象を指す。
本明細書の用語「抗体」は、最も広い意味で使用され、断片抗原結合性（Ｆａｂ）断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆａｂ’断片、Ｆｖ断片、組換えＩｇＧ（ｒＩｇＧ）断片、単鎖可変断片（ｓＦｖまたはｓｃＦｖ）が含まれる単鎖抗体断片、または単一ドメイン抗体（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｄＦｖ、ナノボディ（ｎａｎｏｂｏｄｙ））断片が含まれるインタクトな抗体およびその機能的（抗原結合性）抗体断片が含まれる、モノクローナル抗体が含まれる。この用語は、遺伝子操作されたおよび／または他の方法で改変された形態の免疫グロブリン、例えば、イントラボディ（ｉｎｔｒａｂｏｄｙ）、ペプチボディ（ｐｅｐｔｉｂｏｄｙ）、キメラ抗体、およびヘテロコンジュゲート抗体、タンデムジ－ｓｃＦｖ、タンデムトリ－ｓｃＦｖを包含する。他に述べられない限り、用語「抗体」は、その機能的抗体断片を包含すると理解すべきである。この用語は、ＩｇＧおよびそのサブクラス、ＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＡならびにＩｇＤが含まれる任意のクラスまたはサブクラスの抗体が含まれる、インタクトな抗体または全長抗体もまた包含する。抗体は、ウサギＩｇＧ１定常領域を含み得る。抗体は、ウサギＩｇＧ４定常領域を含み得る。抗体には、全長およびネイティブ抗体、ならびにその結合特異性を保持するその断片および部分、例えば、任意の数の免疫グロブリンクラスおよび／またはアイソタイプ（例えば、ＩｇＧｌ、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥおよびＩｇＭ）を有するものが含まれる、その任意の特異的結合性部分；ならびにＦａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、ＦｖおよびｓｃＦｖ（単鎖または関連する実体）が含まれるがこれらに限定されない、その生物学的に適切な（抗原結合性）断片または特異的結合性部分が含まれるがこれらに限定されない。モノクローナル抗体は、一般に、実質的に均質な抗体の組成物内の抗体である；したがって、モノクローナル抗体組成物内に含まれる任意の個々の抗体は、微量で存在し得る可能な天然に存在する変異を除き、同一である。モノクローナル抗体は、ウサギＩｇＧ１定常領域またはウサギＩｇＧ４定常領域を含み得る。
用語「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」は、抗体が結合するエピトープに対して構造的に相補的であり、可変領域の残部よりも可変性が高い、抗体の可変領域のセグメントである。したがって、ＣＤＲは、時折、超可変領域と呼ばれる。可変領域は、３つのＣＤＲを含む。ＣＤＲペプチドは、目的の抗体のＣＤＲをコードする遺伝子を構築することによって得られ得る。かかる遺伝子は、例えば、抗体産生細胞のＲＮＡから可変領域を合成するためにポリメラーゼ連鎖反応を使用することによって調製される。例えば、Larrick et al., Methods: A Companion to Methods in Enzymology 2: 106 (1991)；Courtenay-Luck, "Genetic Manipulation of Monoclonal Antibodies," in Monoclonal Antibodies: Production, Engineering and Clinical Application, Ritter
et al. (eds.), pages 166-179 (Cambridge University Press 1995)；およびWard et al., "Genetic Manipulation and Expression of Antibodies," in Monoclonal Antibodies: Principles and Applications, Birch et al., (eds.),
pages 137-185 (Wiley-Liss, Inc. 1995)を参照されたい。
用語「Ｆａｂ」は、軽鎖の定常ドメインおよび重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）を含むタンパク質を指す。Ｆａｂ断片は、抗体ヒンジ領域由来の１つまたは複数のシステインを含む重鎖ＣＨ１ドメインのカルボキシ末端における数個の残基の付加により、Ｆａｂ’断片とは異なる。Ｆａｂ’－ＳＨは、定常ドメインのシステイン残基（複数可）が遊離チオール基を保有するＦａｂ’のための、本明細書での名称である。Ｆａｂ’断片は、Ｆ（ａｂ’）２断片の重鎖ジスルフィド架橋を還元することによって産生される。抗体断片の他の化学的カップリングもまた公知である。
「単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）」は、１０～約２５アミノ酸の短いリンカーペプチドで接続された、抗体の重鎖の可変領域（ＶＨ）と軽鎖の可変領域（ＶＬ）との融合タンパク質である。リンカーは通常、柔軟性のためにはグリシンに富み、溶解度のためにはセリンまたはスレオニンに富み、ＶＨのＮ末端をＶＬのＣ末端に接続し得るかまたはその逆かであり得る。このタンパク質は、定常領域の除去およびリンカーの導入にもかかわらず、元の抗体の特異性を保持する。ｓｃＦｖ抗体は、例えば、Houston, J. S., Methods in Enzymol. 203 (1991) 46-96に記載されている。さらに、抗体断片は、機能的抗原結合部位になるように、ＶＨドメインの特徴、すなわち、ＶＬドメインと一緒にアセンブルすることができるという特徴、またはＶＬドメインの特徴、すなわち、ＶＨドメインと一緒にアセンブルすることができるという特徴を有し、それにより、全長抗体の抗原結合特性を提供する、単鎖ポリペプチドを含む。
本明細書で使用される場合、配列に関する用語「パーセント（％）アミノ酸配列同一性」は、いずれの保存的置換も配列同一性の一部とみなすことなく、配列をアラインさせ、必要に応じて最大のパーセント配列同一性を達成するためにギャップを導入した後に、特定の配列中のアミノ酸残基と同一な候補配列中のアミノ酸残基のパーセンテージとして定義される。パーセントアミノ酸配列同一性を決定することを目的としたアラインメントは、当業者の技術範囲内の種々の方式で、例えば、公に入手可能なコンピュータソフトウェア、例えば、ＥＭＢＯＳＳ ＭＡＴＣＨＥＲ、ＥＭＢＯＳＳ ＷＡＴＥＲ、ＥＭＢＯＳＳ
ＳＴＲＥＴＣＨＥＲ、ＥＭＢＯＳＳ ＮＥＥＤＬＥ、ＥＭＢＯＳＳ ＬＡＬＩＧＮ、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、ＡＬＩＧＮまたはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアを使用して、達成され得る。当業者は、比較されている配列の全長にわたって最大のアラインメントを達成するために必要とされる任意のアルゴリズムが含まれる、アラインメントを測定するための適切なパラメーターを決定することができる。
ＡＬＩＧＮ－２がアミノ酸配列比較に使用される状況では、所与のアミノ酸配列Ｂとの／に対する（ｔｏ，ｗｉｔｈ，ｏｒ ａｇａｉｎｓｔ）所与のアミノ酸配列Ａの％アミノ酸配列同一性（これは、所与のアミノ酸配列Ｂとの／に対するある特定の％のアミノ酸配列同一性を有するまたは含む所与のアミノ酸配列Ａとして、代替的に表現され得る）は、以下のように計算される：１００×分数Ｘ／Ｙ、式中、Ｘは、ＡおよびＢの、そのプログラムのアラインメントにおける配列アラインメントプログラムＡＬＩＧＮ－２によって同一なマッチとしてスコアされるアミノ酸残基の数であり、Ｙは、Ｂ中のアミノ酸残基の総数である。アミノ酸配列Ａの長さがアミノ酸配列Ｂの長さと等しくない場合、ＡのＢに対する％アミノ酸配列同一性は、ＢのＡに対する％アミノ酸配列同一性と等しくないことが理解される。他に具体的に述べられない限り、本明細書で使用される全ての％アミノ酸配列同一性値は、ＡＬＩＧＮ－２コンピュータプログラムを使用して、直前の段落に記載されるように得られる。
「超可変領域」または「ＨＶＲ」と同義である用語「相補性決定領域」および「ＣＤＲ」は、抗原特異性および／または結合親和性を付与する、抗体可変領域内のアミノ酸の非連続の配列を指すことが、当該分野で公知である。一般に、各重鎖可変領域中には３つのＣＤＲ（ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３）が存在し、各軽鎖可変領域中には３つのＣＤＲ（ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、ＣＤＲ－Ｌ３）が存在する。「フレームワーク領域」および「ＦＲ」は、重鎖および軽鎖の可変領域の非ＣＤＲ部分を指すことが、当該分野で公知である。一般に、各全長重鎖可変領域中には４つのＦＲ（ＦＲ－Ｈ１、ＦＲ－Ｈ２、ＦＲ－Ｈ３およびＦＲ－Ｈ４）が存在し、各全長軽鎖可変領域中には４つのＦＲ（ＦＲ－Ｌ１、ＦＲ－Ｌ２、ＦＲ－Ｌ３およびＦＲ－Ｌ４）が存在する。所与のＣＤＲまたはＦＲの正確なアミノ酸配列境界は、Kabat et al. (1991), "Sequences of Proteins of Immunological Interest," 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD（「Ｋａｂａｔ」番号付けスキーム）、Al-Lazikani et al., (1997) JMB 273,927-948（「Ｃｈｏｔｈｉａ」番号付けスキ
ーム）；MacCallum et al., J. Mol. Biol. 262:732-745 (1996), "Antibody-antigen interactions: Contact analysis and binding site topography," J. Mol. Biol. 262, 732-745."（「Ｃｏｎｔａｃｔ」番号付けスキーム）；Lefranc MP et al., "IMGT unique numbering for immunoglobulin and T cell receptor
variable domains and Ig superfamily V-like domains," Dev Comp Immunol, 2003 Jan;27(1):55-77（「ＩＭＧＴ」番号付けスキーム）；Honegger A and Pluckthun A, "Yet another numbering scheme for immunoglobulin variable domains: an automatic modeling and analysis tool," J Mol Biol, 2001 Jun 8;309(3):657-70（「Ａｈｏ」番号付けスキーム）；およびWhitelegg NR and Rees AR, "WAM: an improved algorithm for modelling antibodies on the WEB," Protein Eng. 2000 Dec;13(12):819-24（「ＡｂＭ」番号付けスキーム）によって記載されるものが含まれる、いくつかの周知のスキームのいずれかを使用して容易に決定され得る。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体のＣＤＲは、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＩＭＧＴ、Ａｈｏ、ＡｂＭ、またはそれらの組合せから選択される方法によって定義され得る。
所与のＣＤＲまたはＦＲの境界は、同定のために使用されるスキームに依存して変動し得る。例えば、Ｋａｂａｔスキームは、構造的アラインメントに基づくが、Ｃｈｏｔｈｉａスキームは、構造的情報に基づく。ＫａｂａｔスキームおよびＣｈｏｔｈｉａスキームの両方についての番号付けは、最も一般的な抗体領域配列長さに基づき、挿入には、挿入文字、例えば、「３０ａ」が提供され、欠失は、一部の抗体において出現する。これら２つのスキームは、異なる位置においてある特定の挿入および欠失（「インデル」）を配置して、差次的な番号付けを生じる。Ｃｏｎｔａｃｔスキームは、複雑な結晶構造の分析に基づき、Ｃｈｏｔｈｉａ番号付けスキームと多くの点で類似している。
他に定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語および科学用語は、本明細書に記載される方法および組成物が属する分野の当業者によって一般に理解される意味と同じ意味を有する。本明細書に記載される方法および材料と類似または等価な任意の方法および材料もまた、本明細書に記載される方法および組成物の実施または試験において使用され得るが、代表的な例示的な方法および材料は、これから記載される。
タウ抗体
タウに結合する抗体が本明細書で提供される。一部の例では、タウに結合する抗体は、モノクローナル抗体である。ある特定の態様では、抗タウ抗体が本明細書で開示される。一部の例では、抗タウ抗体は、哺乳動物タウに特異的に結合する。一部の例では、抗タウ抗体は、ヒトタウに特異的に結合する。一部の例では、抗タウ抗体は、タウのＮ末端部分に特異的に結合する。一部の例では、抗タウ抗体は、ヒトタウのＮ末端部分に特異的に結合する。一部の例では、抗タウ抗体は、タンパク質ドメインＰ２を含むタウの一部分に特異的に結合する。一部の例では、抗タウ抗体は、タンパク質ドメインＰ２を含むヒトタウの一部分に特異的に結合する。一部の例では、抗タウ抗体は、タンパク質ドメインＰ１を含むタウの一部分に特異的に結合する。一部の例では、抗タウ抗体は、タンパク質ドメインＰ１を含むヒトタウの一部分に特異的に結合する。一部の例では、抗タウ抗体は、タンパク質ドメインＰ１およびＰ２を含むタウの一部分に特異的に結合する。一部の例では、抗タウ抗体は、タンパク質ドメインＰ１およびＰ２を含むヒトタウの一部分に特異的に結合する。
一部の実施形態では、抗タウ抗体は、ｉ）可変重鎖（ＶＨ）ドメインを含む重鎖およびｉｉ）可変軽鎖（ＶＬ）ドメインを含む軽鎖を含む。一部の実施形態では、ＶＨドメインは、配列番号１～５から選択される配列を含む重鎖ＣＤＲ１（ＨＣＤＲ１）配列、配列番号６～９から選択される配列を含む重鎖ＣＤＲ２（ＨＣＤＲ２）配列および配列番号１０～１３から選択される配列を含む重鎖ＣＤＲ３（ＨＣＤＲ３）配列を含む。一部の実施形態では、ＶＬドメインは、配列番号１４～１９から選択される配列を含む軽鎖ＣＤＲ１（ＬＣＤＲ１）配列、配列番号２０～２３から選択される配列を含む軽鎖ＣＤＲ２（ＬＣＤＲ２）配列および配列番号２４～２９から選択される配列を含む軽鎖ＣＤＲ３（ＬＣＤＲ３）配列を含む。
一部の実施形態では、抗タウ抗体のＶＨ領域は、表１から選択されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３配列を含む。
一部の実施形態では、ＶＨ領域は、配列番号１を含むＨＣＤＲ１配列；配列番号６を含むＨＣＤＲ２配列；および配列番号１０を含むＨＣＤＲ３配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨ領域は、配列番号２を含むＨＣＤＲ１配列；配列番号７を含むＨＣＤＲ２配列；および配列番号１１を含むＨＣＤＲ３配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨ領域は、配列番号３を含むＨＣＤＲ１配列；配列番号８を含むＨＣＤＲ２配列；および配列番号１０を含むＨＣＤＲ３配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨ領域は、配列番号４を含むＨＣＤＲ１配列；配列番号７を含むＨＣＤＲ２配列；および配列番号１２を含むＨＣＤＲ３配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨ領域は、配列番号５を含むＨＣＤＲ１配列；配列番号９を含むＨＣＤＲ２配列；および配列番号１３を含むＨＣＤＲ３配列を含む。
一部の実施形態では、抗タウ抗体のＶＬ領域は、表２から選択されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３配列を含む。
一部の実施形態では、ＶＬ領域は、配列番号１４を含むＬＣＤＲ１配列；配列番号２０を含むＬＣＤＲ２配列；および配列番号２４を含むＬＣＤＲ３配列を含む。一部の実施形態では、ＶＬ領域は、配列番号１５を含むＬＣＤＲ１配列；配列番号２１を含むＬＣＤＲ２配列；および配列番号２５を含むＬＣＤＲ３配列を含む。一部の実施形態では、ＶＬ領域は、配列番号１６を含むＬＣＤＲ１配列；配列番号２２を含むＬＣＤＲ２配列；および配列番号２６を含むＬＣＤＲ３配列を含む。一部の実施形態では、ＶＬ領域は、配列番号１７を含むＬＣＤＲ１配列；配列番号２０を含むＬＣＤＲ２配列；および配列番号２７を含むＬＣＤＲ３配列を含む。一部の実施形態では、ＶＬ領域は、配列番号１８を含むＬＣＤＲ１配列；配列番号２３を含むＬＣＤＲ２配列；および配列番号２８を含むＬＣＤＲ３配列を含む。一部の実施形態では、ＶＬ領域は、配列番号１９を含むＬＣＤＲ１配列；配列番号２１を含むＬＣＤＲ２配列；および配列番号２９を含むＬＣＤＲ３配列を含む。
一部の実施形態では、抗タウ抗体は、その抗原結合性断片である。一部の実施形態では、抗タウ抗体は、キメラ抗体またはその抗原結合性断片である。一部の実施形態では、抗タウ抗体は、ＩｇＧ－ｓｃＦｖ、ナノボディ、ミニ－抗体、ミニボディ（ｍｉｎｉｂｏｄｙ）、ｓｃＦｖ－ＣＨ３ ＫＩＨ、Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃ ＫＩＨ、Ｆａｂ－ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ－ＣＨ－ＣＬ－ｓｃＦｖ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ’）３、Ｆ（ａｂ’）２－ｓｃＦｖ２、ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ－ＫＩＨ、Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃまたはイントラボディを含む。一部の実施形態では、抗タウ抗体は、二特異性抗体を含む。一部の実施形態では、抗タウ抗体は、多特異性抗体を含む。一部の実施形態では、抗タウ抗体は、ＩｇＧ１抗体である。一部の実施形態では、抗タウ抗体は、ＩｇＧ２抗体である。一部の実施形態では、抗タウ抗体は、ＩｇＧ４抗体である。一部の実施形態では、抗タウ抗体は、軽鎖を含み、軽鎖は、カッパ鎖である。
一部の実施形態では、抗タウ抗体は、約１００ｐＭ～約３ｎＭの、ヒトタウに対する結合親和性を有する。一部の実施形態では、抗タウ抗体は、約１００ｐＭ～３００ｐＭの、ヒトタウに対する結合親和性を有する。一部の実施形態では、抗タウ抗体は、約１００ｐＭ～５００ｐＭの、ヒトタウに対する結合親和性を有する。一部の実施形態では、抗タウ抗体は、約１００ｐＭ～８００ｐＭの、ヒトタウに対する結合親和性を有する。一部の実施形態では、抗タウ抗体は、約３００ｐＭ～６００ｐＭの、ヒトタウに対する結合親和性を有する。一部の実施形態では、抗タウ抗体は、約３００ｐＭ～９００ｐＭの、ヒトタウに対する結合親和性を有する。一部の実施形態では、抗タウ抗体は、約４００ｐＭ～１ｎＭの、ヒトタウに対する結合親和性を有する。一部の実施形態では、抗タウ抗体は、約５００ｐＭ～１．５ｎＭの、ヒトタウに対する結合親和性を有する。一部の実施形態では、抗タウ抗体は、約５００ｐＭ～２ｎＭの、ヒトタウに対する結合親和性を有する。一部の実施形態では、抗タウ抗体は、約６００ｐＭ～３ｎＭの、ヒトタウに対する結合親和性を有する。一部の実施形態では、抗タウ抗体は、約１００ｐＭ～約３ｎＭの、ヒトタウに対する結合親和性を有する。
一部の実施形態では、抗タウ抗体は、約１００ｐＭ～３００ｐＭの、リン酸化されたヒトタウに対する結合親和性を有する。一部の実施形態では、抗タウ抗体は、約１００ｐＭ～５００ｐＭの、リン酸化されたヒトタウに対する結合親和性を有する。一部の実施形態では、抗タウ抗体は、約１００ｐＭ～８００ｐＭの、リン酸化されたヒトタウに対する結合親和性を有する。一部の実施形態では、抗タウ抗体は、約３００ｐＭ～６００ｐＭの、リン酸化されたヒトタウに対する結合親和性を有する。一部の実施形態では、抗タウ抗体は、約３００ｐＭ～９００ｐＭの、リン酸化されたヒトタウに対する結合親和性を有する。一部の実施形態では、抗タウ抗体は、約４００ｐＭ～１ｎＭの、リン酸化されたヒトタウに対する結合親和性を有する。一部の実施形態では、抗タウ抗体は、約５００ｐＭ～１．５ｎＭの、リン酸化されたヒトタウに対する結合親和性を有する。一部の実施形態では、抗タウ抗体は、約５００ｐＭ～２ｎＭの、リン酸化されたヒトタウに対する結合親和性を有する。一部の実施形態では、抗タウ抗体は、約６００ｐＭ～３ｎＭの、リン酸化されたヒトタウに対する結合親和性を有する。
表３または表４に示される任意の配列の配列を含む抗体が、本明細書に記載される。
一部の実施形態では、可変ドメイン重鎖領域（ＶＨ）は、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つに従うアミノ酸配列と少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つに従うアミノ酸配列と少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つに従うアミノ酸配列と少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つに従うアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つに従うアミノ酸配列と少なくとも９１％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つに従うアミノ酸配列と少なくとも９２％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つに従うアミノ酸配列と少なくとも９３％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つに従うアミノ酸配列と少なくとも９４％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つに従うアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つに従うアミノ酸配列と少なくとも９６％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つに従うアミノ酸配列と少なくとも９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つに従うアミノ酸配列と少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つに従うアミノ酸配列と少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つに従うアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つの少なくとも５０連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つの少なくとも６０連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つの少なくとも７０連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つの少なくとも８０連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つの少なくとも９０連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つの少なくとも１００連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つの少なくとも１０５連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つの少なくとも１１０連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つの少なくとも１１５連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つの少なくとも１２０連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つの少なくとも５０連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含み、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つの少なくとも５０連続するアミノ酸残基と少なくとも８０％の配列同一性を有する。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つの少なくとも６０連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含み、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つの少なくとも６０連続するアミノ酸残基と少なくとも８０％の配列同一性を有する。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つの少なくとも７０連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含み、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つの少なくとも７０連続するアミノ酸残基と少なくとも８０％の配列同一性を有する。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つの少なくとも８０連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含み、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つの少なくとも８０連続するアミノ酸残基と少なくとも８０％の配列同一性を有する。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つの少なくとも９０連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含み、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つの少なくとも９０連続するアミノ酸残基と少なくとも８０％の配列同一性を有する。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つの少なくとも１００連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含み、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つの少なくとも１００連続するアミノ酸残基と少なくとも８０％の配列同一性を有する。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つの少なくとも１０５連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含み、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つの少なくとも１０５連続するアミノ酸残基と少なくとも８０％の配列同一性を有する。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つの少なくとも１１０連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含み、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つの少なくとも１１０連続するアミノ酸残基と少なくとも８０％の配列同一性を有する。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つの少なくとも１１５連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含み、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つの少なくとも１１５連続するアミノ酸残基と少なくとも８０％の配列同一性を有する。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つの少なくとも１２０連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含み、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つの少なくとも１２０連続するアミノ酸残基と少なくとも８０％の配列同一性を有する。
一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つの少なくとも５０連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含み、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つの少なくとも５０連続するアミノ酸残基と少なくとも９０％の配列同一性を有する。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つの少なくとも６０連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含み、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つの少なくとも６０連続するアミノ酸残基と少なくとも９０％の配列同一性を有する。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つの少なくとも７０連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含み、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つの少なくとも７０連続するアミノ酸残基と少なくとも９０％の配列同一性を有する。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つの少なくとも８０連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含み、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つの少なくとも８０連続するアミノ酸残基と少なくとも９０％の配列同一性を有する。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つの少なくとも９０連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含み、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つの少なくとも９０連続するアミノ酸残基と少なくとも９０％の配列同一性を有する。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つの少なくとも１００連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含み、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つの少なくとも１００連続するアミノ酸残基と少なくとも９０％の配列同一性を有する。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つの少なくとも１０５連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含み、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つの少なくとも１０５連続するアミノ酸残基と少なくとも９０％の配列同一性を有する。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つの少なくとも１１０連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含み、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つの少なくとも１１０連続するアミノ酸残基と少なくとも９０％の配列同一性を有する。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つの少なくとも１１５連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含み、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つの少なくとも１１５連続するアミノ酸残基と少なくとも９０％の配列同一性を有する。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つの少なくとも１２０連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含み、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つの少なくとも１２０連続するアミノ酸残基と少なくとも９０％の配列同一性を有する。
一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つの少なくとも５０連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含み、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つの少なくとも５０連続するアミノ酸残基と少なくとも９５％の配列同一性を有する。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つの少なくとも６０連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含み、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つの少なくとも６０連続するアミノ酸残基と少なくとも９５％の配列同一性を有する。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つの少なくとも７０連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含み、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つの少なくとも７０連続するアミノ酸残基と少なくとも９５％の配列同一性を有する。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つの少なくとも８０連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含み、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つの少なくとも８０連続するアミノ酸残基と少なくとも９５％の配列同一性を有する。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つの少なくとも９０連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含み、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つの少なくとも９０連続するアミノ酸残基と少なくとも９５％の配列同一性を有する。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つの少なくとも１００連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含み、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つの少なくとも１００連続するアミノ酸残基と少なくとも９５％の配列同一性を有する。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つの少なくとも１０５連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含み、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つの少なくとも１０５連続するアミノ酸残基と少なくとも９５％の配列同一性を有する。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つの少なくとも１１０連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含み、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つの少なくとも１１０連続するアミノ酸残基と少なくとも９５％の配列同一性を有する。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つの少なくとも１１５連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含み、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つの少なくとも１１５連続するアミノ酸残基と少なくとも９５％の配列同一性を有する。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つの少なくとも１２０連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含み、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つの少なくとも１２０連続するアミノ酸残基と少なくとも９５％の配列同一性を有する。
一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つの少なくとも１００連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含み、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つの少なくとも１００連続するアミノ酸残基と少なくとも９９％の配列同一性を有する。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つの少なくとも１０５連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含み、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つの少なくとも１０５連続するアミノ酸残基と少なくとも９９％の配列同一性を有する。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つの少なくとも１１０連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含み、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つの少なくとも１１０連続するアミノ酸残基と少なくとも９９％の配列同一性を有する。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つの少なくとも１１５連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含み、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つの少なくとも１１５連続するアミノ酸残基と少なくとも９９％の配列同一性を有する。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つの少なくとも１２０連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含み、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つの少なくとも１２０連続するアミノ酸残基と少なくとも９９％の配列同一性を有する。
一部の実施形態では、可変ドメイン軽鎖領域（ＶＬ）は、配列番号３５～４０のうちのいずれか１つに従うアミノ酸配列と少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号３５～４０のうちのいずれか１つに従うアミノ酸配列と少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号３５～４０のうちのいずれか１つに従うアミノ酸配列と少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号３５～４０のうちのいずれか１つに従うアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号３５～４０のうちのいずれか１つに従うアミノ酸配列と少なくとも９１％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号３５～４０のうちのいずれか１つに従うアミノ酸配列と少なくとも９２％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号３５～４０のうちのいずれか１つに従うアミノ酸配列と少なくとも９３％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号３５～４０のうちのいずれか１つに従うアミノ酸配列と少なくとも９４％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号３５～４０のうちのいずれか１つに従うアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号３５～４０のうちのいずれか１つに従うアミノ酸配列と少なくとも９６％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号３５～４０のうちのいずれか１つに従うアミノ酸配列と少なくとも９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号３５～４０のうちのいずれか１つに従うアミノ酸配列と少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号３５～４０のうちのいずれか１つに従うアミノ酸配列と少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号３５～４０のうちのいずれか１つに従うアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号３５～４０のうちのいずれか１つの少なくとも５０連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号３５～４０のうちのいずれか１つの少なくとも６０連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号３５～４０のうちのいずれか１つの少なくとも７０連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号３５～４０のうちのいずれか１つの少なくとも８０連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号３５～４０のうちのいずれか１つの少なくとも９０連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号３５～４０のうちのいずれか１つの少なくとも１００連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号３５～４０のうちのいずれか１つの少なくとも１０５連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号３５～４０のうちのいずれか１つの少なくとも５０連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含み、配列番号３５～４０のうちのいずれか１つの少なくとも５０連続するアミノ酸残基と少なくとも８０％の配列同一性を有する。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号３５～４０のうちのいずれか１つの少なくとも６０連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含み、配列番号３５～４０のうちのいずれか１つの少なくとも６０連続するアミノ酸残基と少なくとも８０％の配列同一性を有する。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号３５～４０のうちのいずれか１つの少なくとも７０連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含み、配列番号３５～４０のうちのいずれか１つの少なくとも７０連続するアミノ酸残基と少なくとも８０％の配列同一性を有する。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号３５～４０のうちのいずれか１つの少なくとも８０連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含み、配列番号３５～４０のうちのいずれか１つの少なくとも８０連続するアミノ酸残基と少なくとも８０％の配列同一性を有する。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号３５～４０のうちのいずれか１つの少なくとも９０連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含み、配列番号３５～４０のうちのいずれか１つの少なくとも９０連続するアミノ酸残基と少なくとも８０％の配列同一性を有する。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号３５～４０のうちのいずれか１つの少なくとも１００連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含み、配列番号３５～４０のうちのいずれか１つの少なくとも１００連続するアミノ酸残基と少なくとも８０％の配列同一性を有する。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号３５～４０のうちのいずれか１つの少なくとも１０５連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含み、配列番号３５～４０のうちのいずれか１つの少なくとも１０５連続するアミノ酸残基と少なくとも８０％の配列同一性を有する。
一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号３５～４０のうちのいずれか１つの少なくとも５０連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含み、配列番号３５～４０のうちのいずれか１つの少なくとも５０連続するアミノ酸残基と少なくとも９０％の配列同一性を有する。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号３５～４０のうちのいずれか１つの少なくとも６０連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含み、配列番号３５～４０のうちのいずれか１つの少なくとも６０連続するアミノ酸残基と少なくとも９０％の配列同一性を有する。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号３５～４０のうちのいずれか１つの少なくとも７０連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含み、配列番号３５～４０のうちのいずれか１つの少なくとも７０連続するアミノ酸残基と少なくとも９０％の配列同一性を有する。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号３５～４０のうちのいずれか１つの少なくとも８０連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含み、配列番号３５～４０のうちのいずれか１つの少なくとも８０連続するアミノ酸残基と少なくとも９０％の配列同一性を有する。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号３５～４０のうちのいずれか１つの少なくとも９０連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含み、配列番号３５～４０のうちのいずれか１つの少なくとも９０連続するアミノ酸残基と少なくとも９０％の配列同一性を有する。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号３５～４０のうちのいずれか１つの少なくとも１００連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含み、配列番号３５～４０のうちのいずれか１つの少なくとも１００連続するアミノ酸残基と少なくとも９０％の配列同一性を有する。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号３５～４０のうちのいずれか１つの少なくとも１０５連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含み、配列番号３５～４０のうちのいずれか１つの少なくとも１０５連続するアミノ酸残基と少なくとも９０％の配列同一性を有する。
一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号３５～４０のうちのいずれか１つの少なくとも５０連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含み、配列番号３５～４０のうちのいずれか１つの少なくとも５０連続するアミノ酸残基と少なくとも９５％の配列同一性を有する。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号３５～４０のうちのいずれか１つの少なくとも６０連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含み、配列番号３５～４０のうちのいずれか１つの少なくとも６０連続するアミノ酸残基と少なくとも９５％の配列同一性を有する。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号３５～４０のうちのいずれか１つの少なくとも７０連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含み、配列番号３５～４０のうちのいずれか１つの少なくとも７０連続するアミノ酸残基と少なくとも９５％の配列同一性を有する。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号３５～４０のうちのいずれか１つの少なくとも８０連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含み、配列番号３５～４０のうちのいずれか１つの少なくとも８０連続するアミノ酸残基と少なくとも９５％の配列同一性を有する。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号３５～４０のうちのいずれか１つの少なくとも９０連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含み、配列番号３５～４０のうちのいずれか１つの少なくとも９０連続するアミノ酸残基と少なくとも９５％の配列同一性を有する。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号３５～４０のうちのいずれか１つの少なくとも１００連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含み、配列番号３５～４０のうちのいずれか１つの少なくとも１００連続するアミノ酸残基と少なくとも９５％の配列同一性を有する。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号３５～４０のうちのいずれか１つの少なくとも１０５連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含み、配列番号３５～４０のうちのいずれか１つの少なくとも１０５連続するアミノ酸残基と少なくとも９５％の配列同一性を有する。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号３５～４０のうちのいずれか１つの少なくとも１００連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含み、配列番号３５～４０のうちのいずれか１つの少なくとも１００連続するアミノ酸残基と少なくとも９９％の配列同一性を有する。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号３５～４０のうちのいずれか１つの少なくとも１０５連続するアミノ酸残基のアミノ酸配列を含み、配列番号３５～４０のうちのいずれか１つの少なくとも１０５連続するアミノ酸残基と少なくとも９９％の配列同一性を有する。
一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つに従うアミノ酸配列と少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；ＶＬは、配列番号３５～４０のうちのいずれか１つに従うアミノ酸配列と少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つに従うアミノ酸配列と少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；ＶＬは、配列番号３５～４０のうちのいずれか１つに従うアミノ酸配列と少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つに従うアミノ酸配列と少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；ＶＬは、配列番号３５～４０のうちのいずれか１つに従うアミノ酸配列と少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つに従うアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；ＶＬは、配列番号３５～４０のうちのいずれか１つに従うアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つに従うアミノ酸配列と少なくとも９１％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；ＶＬは、配列番号３５～４０のうちのいずれか１つに従うアミノ酸配列と少なくとも９１％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つに従うアミノ酸配列と少なくとも９２％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；ＶＬは、配列番号３５～４０のうちのいずれか１つに従うアミノ酸配列と少なくとも９２％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つに従うアミノ酸配列と少なくとも９３％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；ＶＬは、配列番号３５～４０のうちのいずれか１つに従うアミノ酸配列と少なくとも９３％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つに従うアミノ酸配列と少なくとも９４％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；ＶＬは、配列番号３５～４０のうちのいずれか１つに従うアミノ酸配列と少なくとも９４％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つに従うアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；ＶＬは、配列番号３５～４０のうちのいずれか１つに従うアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つに従うアミノ酸配列と少なくとも９６％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；ＶＬは、配列番号３５～４０のうちのいずれか１つに従うアミノ酸配列と少なくとも９６％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つに従うアミノ酸配列と少なくとも９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；ＶＬは、配列番号３５～４０のうちのいずれか１つに従うアミノ酸配列と少なくとも９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つに従うアミノ酸配列と少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；ＶＬは、配列番号３５～４０のうちのいずれか１つに従うアミノ酸配列と少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つに従うアミノ酸配列と少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；ＶＬは、配列番号３５～４０のうちのいずれか１つに従うアミノ酸配列と少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３０に従うアミノ酸配列と少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；ＶＬは、配列番号３５に従うアミノ酸配列と少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３０に従うアミノ酸配列と少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；ＶＬは、配列番号３５に従うアミノ酸配列と少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３０に従うアミノ酸配列と少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；ＶＬは、配列番号３５に従うアミノ酸配列と少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３０に従うアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；ＶＬは、配列番号３５に従うアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３０に従うアミノ酸配列と少なくとも９１％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；ＶＬは、配列番号３５に従うアミノ酸配列と少なくとも９１％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３０に従うアミノ酸配列と少なくとも９２％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；ＶＬは、配列番号３５に従うアミノ酸配列と少なくとも９２％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３０に従うアミノ酸配列と少なくとも９３％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；ＶＬは、配列番号３５に従うアミノ酸配列と少なくとも９３％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３０に従うアミノ酸配列と少なくとも９４％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；ＶＬは、配列番号３５に従うアミノ酸配列と少なくとも９４％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３０に従うアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；ＶＬは、配列番号３５に従うアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３０に従うアミノ酸配列と少なくとも９６％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；ＶＬは、配列番号３５に従うアミノ酸配列と少なくとも９６％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３０に従うアミノ酸配列と少なくとも９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；ＶＬは、配列番号３５に従うアミノ酸配列と少なくとも９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３０に従うアミノ酸配列と少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；ＶＬは、配列番号３５に従うアミノ酸配列と少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３０に従うアミノ酸配列と少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；ＶＬは、配列番号３５に従うアミノ酸配列と少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３１に従うアミノ酸配列と少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；ＶＬは、配列番号３６に従うアミノ酸配列と少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３１に従うアミノ酸配列と少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；ＶＬは、配列番号３６に従うアミノ酸配列と少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３１に従うアミノ酸配列と少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；ＶＬは、配列番号３６に従うアミノ酸配列と少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３１に従うアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；ＶＬは、配列番号３６に従うアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３１に従うアミノ酸配列と少なくとも９１％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；ＶＬは、配列番号３６に従うアミノ酸配列と少なくとも９１％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３１に従うアミノ酸配列と少なくとも９２％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；ＶＬは、配列番号３６に従うアミノ酸配列と少なくとも９２％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３１に従うアミノ酸配列と少なくとも９３％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；ＶＬは、配列番号３６に従うアミノ酸配列と少なくとも９３％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３１に従うアミノ酸配列と少なくとも９４％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；ＶＬは、配列番号３６に従うアミノ酸配列と少なくとも９４％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３１に従うアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；ＶＬは、配列番号３６に従うアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３１に従うアミノ酸配列と少なくとも９６％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；ＶＬは、配列番号３６に従うアミノ酸配列と少なくとも９６％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３１に従うアミノ酸配列と少なくとも９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；ＶＬは、配列番号３６に従うアミノ酸配列と少なくとも９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３１に従うアミノ酸配列と少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；ＶＬは、配列番号３６に従うアミノ酸配列と少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３１に従うアミノ酸配列と少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；ＶＬは、配列番号３６に従うアミノ酸配列と少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３１に従うアミノ酸配列と少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；ＶＬは、配列番号３７に従うアミノ酸配列と少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３１に従うアミノ酸配列と少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；ＶＬは、配列番号３７に従うアミノ酸配列と少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３１に従うアミノ酸配列と少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；ＶＬは、配列番号３７に従うアミノ酸配列と少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３１に従うアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；ＶＬは、配列番号３７に従うアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３１に従うアミノ酸配列と少なくとも９１％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；ＶＬは、配列番号３７に従うアミノ酸配列と少なくとも９１％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３１に従うアミノ酸配列と少なくとも９２％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；ＶＬは、配列番号３７に従うアミノ酸配列と少なくとも９２％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３１に従うアミノ酸配列と少なくとも９３％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；ＶＬは、配列番号３７に従うアミノ酸配列と少なくとも９３％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３１に従うアミノ酸配列と少なくとも９４％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；ＶＬは、配列番号３７に従うアミノ酸配列と少なくとも９４％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３１に従うアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；ＶＬは、配列番号３７に従うアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３１に従うアミノ酸配列と少なくとも９６％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；ＶＬは、配列番号３７に従うアミノ酸配列と少なくとも９６％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３１に従うアミノ酸配列と少なくとも９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；ＶＬは、配列番号３７に従うアミノ酸配列と少なくとも９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３１に従うアミノ酸配列と少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；ＶＬは、配列番号３７に従うアミノ酸配列と少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３１に従うアミノ酸配列と少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；ＶＬは、配列番号３７に従うアミノ酸配列と少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３２に従うアミノ酸配列と少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；ＶＬは、配列番号３８に従うアミノ酸配列と少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３２に従うアミノ酸配列と少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；ＶＬは、配列番号３８に従うアミノ酸配列と少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３２に従うアミノ酸配列と少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；ＶＬは、配列番号３８に従うアミノ酸配列と少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３２に従うアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；ＶＬは、配列番号３８に従うアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３２に従うアミノ酸配列と少なくとも９１％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；ＶＬは、配列番号３８に従うアミノ酸配列と少なくとも９１％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３２に従うアミノ酸配列と少なくとも９２％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；ＶＬは、配列番号３８に従うアミノ酸配列と少なくとも９２％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３２に従うアミノ酸配列と少なくとも９３％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；ＶＬは、配列番号３８に従うアミノ酸配列と少なくとも９３％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３２に従うアミノ酸配列と少なくとも９４％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；ＶＬは、配列番号３８に従うアミノ酸配列と少なくとも９４％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３２に従うアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；ＶＬは、配列番号３８に従うアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３２に従うアミノ酸配列と少なくとも９６％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；ＶＬは、配列番号３８に従うアミノ酸配列と少なくとも９６％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３２に従うアミノ酸配列と少なくとも９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；ＶＬは、配列番号３８に従うアミノ酸配列と少なくとも９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３２に従うアミノ酸配列と少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；ＶＬは、配列番号３８に従うアミノ酸配列と少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３２に従うアミノ酸配列と少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；ＶＬは、配列番号３８に従うアミノ酸配列と少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３３に従うアミノ酸配列と少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；ＶＬは、配列番号３９に従うアミノ酸配列と少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３３に従うアミノ酸配列と少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；ＶＬは、配列番号３９に従うアミノ酸配列と少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３３に従うアミノ酸配列と少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；ＶＬは、配列番号３９に従うアミノ酸配列と少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３３に従うアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；ＶＬは、配列番号３９に従うアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３３に従うアミノ酸配列と少なくとも９１％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；ＶＬは、配列番号３９に従うアミノ酸配列と少なくとも９１％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３３に従うアミノ酸配列と少なくとも９２％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；ＶＬは、配列番号３９に従うアミノ酸配列と少なくとも９２％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３３に従うアミノ酸配列と少なくとも９３％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；ＶＬは、配列番号３９に従うアミノ酸配列と少なくとも９３％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３３に従うアミノ酸配列と少なくとも９４％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；ＶＬは、配列番号３９に従うアミノ酸配列と少なくとも９４％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３３に従うアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；ＶＬは、配列番号３９に従うアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３３に従うアミノ酸配列と少なくとも９６％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；ＶＬは、配列番号３９に従うアミノ酸配列と少なくとも９６％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３３に従うアミノ酸配列と少なくとも９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；ＶＬは、配列番号３９に従うアミノ酸配列と少なくとも９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３３に従うアミノ酸配列と少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；ＶＬは、配列番号３９に従うアミノ酸配列と少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３３に従うアミノ酸配列と少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；ＶＬは、配列番号３９に従うアミノ酸配列と少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３４に従うアミノ酸配列と少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；ＶＬは、配列番号４０に従うアミノ酸配列と少なくとも７０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３４に従うアミノ酸配列と少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；ＶＬは、配列番号４０に従うアミノ酸配列と少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３４に従うアミノ酸配列と少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；ＶＬは、配列番号４０に従うアミノ酸配列と少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３４に従うアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；ＶＬは、配列番号４０に従うアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３４に従うアミノ酸配列と少なくとも９１％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；ＶＬは、配列番号４０に従うアミノ酸配列と少なくとも９１％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３４に従うアミノ酸配列と少なくとも９２％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；ＶＬは、配列番号４０に従うアミノ酸配列と少なくとも９２％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３４に従うアミノ酸配列と少なくとも９３％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；ＶＬは、配列番号４０に従うアミノ酸配列と少なくとも９３％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３４に従うアミノ酸配列と少なくとも９４％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；ＶＬは、配列番号４０に従うアミノ酸配列と少なくとも９４％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３４に従うアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；ＶＬは、配列番号４０に従うアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３４に従うアミノ酸配列と少なくとも９６％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；ＶＬは、配列番号４０に従うアミノ酸配列と少なくとも９６％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３４に従うアミノ酸配列と少なくとも９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；ＶＬは、配列番号４０に従うアミノ酸配列と少なくとも９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３４に従うアミノ酸配列と少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；ＶＬは、配列番号４０に従うアミノ酸配列と少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号３４に従うアミノ酸配列と少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；ＶＬは、配列番号４０に従うアミノ酸配列と少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、配列番号４１、４３、４６、４８および５０のうちのいずれか１つに示される配列と少なくとも約９０％同一な重鎖配列を含む抗体または抗体断片が、本明細書に記載される。一部の例では、抗体または抗体断片は、配列番号４１、４３、４６、４８および５０のうちのいずれか１つと少なくともまたは約７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性の重鎖配列を含む。
一部の実施形態では、配列番号４２、４４、４５、４７、４９および５１のうちのいずれか１つに示される配列と少なくとも約９０％同一な軽鎖配列を含む抗体または抗体断片が、本明細書に記載される。一部の例では、抗体または抗体断片は、配列番号４２、４４、４５、４７、４９および５１のうちのいずれか１つと少なくともまたは約７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性の軽鎖配列を含む。
一部の実施形態では、配列番号４１、４３、４６、４８および５０のうちのいずれか１つに示される配列と少なくとも約９０％同一な重鎖配列ならびに配列番号４２、４４、４５、４７、４９および５１のうちのいずれか１つに示される配列と少なくとも約９０％同一な軽鎖配列を含む抗体または抗体断片が、本明細書に記載される。一部の例では、抗体または抗体断片は、配列番号４１、４３、４６、４８および５０のうちのいずれか１つと少なくともまたは約７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性の重鎖配列ならびに配列番号４２、４４、４５、４７、４９および５１のうちのいずれか１つと少なくともまたは約７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性の軽鎖配列を含む。
一部の実施形態では、抗タウ抗体は、配列番号５２～５６から選択される配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％の配列同一性を含む核酸によってコードされるＶＨドメインを含む。一部の実施形態では、抗タウ抗体は、配列番号５７～６２から選択される配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％の配列同一性を含む核酸によってコードされるＶＬドメインを含む。本明細書に記載される抗タウ－タウ抗体のＶＨドメインの核酸配列は、表６に列挙され、本明細書に記載される抗タウ－タウ抗体のＶＬドメインの核酸配列は、表７に列挙される。一部の実施形態では、抗タウ－タウ抗体は、配列番号５２と少なくとも９０％の配列同一性を含む核酸によってコードされるＶＨドメインを含む。一部の実施形態では、抗タウ－タウ抗体は、配列番号５３と少なくとも９０％の配列同一性を含む核酸によってコードされるＶＨドメインを含む。一部の実施形態では、抗タウ－タウ抗体は、配列番号５４と少なくとも９０％の配列同一性を含む核酸によってコードされるＶＨドメインを含む。一部の実施形態では、抗タウ－タウ抗体は、配列番号５５と少なくとも９０％の配列同一性を含む核酸によってコードされるＶＨドメインを含む。一部の実施形態では、抗タウ－タウ抗体は、配列番号５６と少なくとも９０％の配列同一性を含む核酸によってコードされるＶＨドメインを含む。一部の実施形態では、抗タウ－タウ抗体は、配列番号５７と少なくとも９０％の配列同一性を含む核酸によってコードされるＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、抗タウ－タウ抗体は、配列番号５８と少なくとも９０％の配列同一性を含む核酸によってコードされるＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、抗タウ抗体は、配列番号５９と少なくとも９０％の配列同一性を含む核酸によってコードされるＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、抗タウ抗体は、配列番号６０と少なくとも９０％の配列同一性を含む核酸によってコードされるＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、抗タウ抗体は、配列番号６１と少なくとも９０％の配列同一性を含む核酸によってコードされるＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、抗タウ抗体は、配列番号６２と少なくとも９０％の配列同一性を含む核酸によってコードされるＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、抗タウ抗体は、配列番号５２と少なくとも９０％の配列同一性を含む核酸によってコードされるＶＨドメインおよび配列番号５７と少なくとも９０％の配列同一性を含む核酸によってコードされるＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、抗タウ抗体は、配列番号５３と少なくとも９０％の配列同一性を含む核酸によってコードされるＶＨドメインおよび配列番号５８と少なくとも９０％の配列同一性を含む核酸によってコードされるＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、抗タウ抗体は、配列番号５３と少なくとも９０％の配列同一性を含む核酸によってコードされるＶＨドメインおよび配列番号５９と少なくとも９０％の配列同一性を含む核酸によってコードされるＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、抗タウ抗体は、配列番号５４と少なくとも９０％の配列同一性を含む核酸によってコードされるＶＨドメインおよび配列番号６０と少なくとも９０％の配列同一性を含む核酸によってコードされるＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、抗タウ抗体は、配列番号５５と少なくとも９０％の配列同一性を含む核酸によってコードされるＶＨドメインおよび配列番号６１と少なくとも９０％の配列同一性を含む核酸によってコードされるＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、抗タウ抗体は、配列番号５６３と少なくとも９０％の配列同一性を含む核酸によってコードされるＶＨドメインおよび配列番号６２と少なくとも９０％の配列同一性を含む核酸によってコードされるＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、抗タウ抗体は、配列番号５２と同一な配列を含む核酸によってコードされるＶＨドメインを含む。一部の実施形態では、抗タウ抗体は、配列番号５３と同一な配列を含む核酸によってコードされるＶＨドメインを含む。一部の実施形態では、抗タウ抗体は、配列番号５４と同一な配列を含む核酸によってコードされるＶＨドメインを含む。一部の実施形態では、抗タウ抗体は、配列番号５５と同一な配列を含む核酸によってコードされるＶＨドメインを含む。一部の実施形態では、抗タウ抗体は、配列番号５６と同一な配列を含む核酸によってコードされるＶＨドメインを含む。一部の実施形態では、抗タウ抗体は、配列番号５７と同一な配列を含む核酸によってコードされるＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、抗タウ抗体は、配列番号５８と同一な配列を含む核酸によってコードされるＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、抗タウ抗体は、配列番号５９と同一な配列を含む核酸によってコードされるＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、抗タウ抗体は、配列番号６０と同一な配列を含む核酸によってコードされるＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、抗タウ抗体は、配列番号６１と同一な配列を含む核酸によってコードされるＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、抗タウ抗体は、配列番号６２と同一な配列を含む核酸によってコードされるＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、抗タウ抗体は、配列番号５２と同一な配列を含む核酸によってコードされるＶＨドメインおよび配列番号５７と同一な配列を含む核酸によってコードされるＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、抗タウ抗体は、配列番号５３と同一な配列を含む核酸によってコードされるＶＨドメインおよび配列番号５８と同一な配列を含む核酸によってコードされるＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、抗タウ抗体は、配列番号５３と同一な配列を含む核酸によってコードされるＶＨドメインおよび配列番号５９と同一な配列を含む核酸によってコードされるＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、抗タウ抗体は、配列番号５４と同一な配列を含む核酸によってコードされるＶＨドメインおよび配列番号６０と同一な配列を含む核酸によってコードされるＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、抗タウ抗体は、配列番号５５と同一な配列を含む核酸によってコードされるＶＨドメインおよび配列番号６１と同一な配列を含む核酸によってコードされるＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、抗タウ抗体は、配列番号５６と同一な配列を含む核酸によってコードされるＶＨドメインおよび配列番号６２と同一な配列を含む核酸によってコードされるＶＬドメインを含む。
一部の実施形態では、抗タウ抗体は、配列番号６３～６７から選択される配列と同一な配列を含む核酸によってコードされる重鎖を含む。一部の実施形態では、抗タウ抗体は、配列番号６８～７３から選択される配列と同一な配列を含む核酸によってコードされる軽鎖を含む。本明細書に記載される抗タウ抗体の重鎖の核酸配列は、表８に列挙され、本明細書に記載される抗タウ抗体の軽鎖の核酸配列は、表９に列挙される。表８および表９に列挙される核酸配列は、本明細書に記載される抗体のｉｎ ｖｉｔｒｏ産生のプロセスにおいて使用され得る。一部の実施形態では、抗タウ抗体は、配列番号６３と同一な配列を含む核酸によってコードされる重鎖を含む。一部の実施形態では、抗タウ抗体は、配列番号６４と同一な配列を含む核酸によってコードされる重鎖を含む。一部の実施形態では、抗タウ抗体は、配列番号６５と同一な配列を含む核酸によってコードされる重鎖を含む。一部の実施形態では、抗タウ抗体は、配列番号６６と同一な配列を含む核酸によってコードされる重鎖を含む。一部の実施形態では、抗タウ抗体は、配列番号６７と同一な配列を含む核酸によってコードされる重鎖を含む。一部の実施形態では、抗タウ抗体は、配列番号６８と同一な配列を含む核酸によってコードされる軽鎖を含む。一部の実施形態では、抗タウ抗体は、配列番号６９と同一な配列を含む核酸によってコードされる軽鎖を含む。一部の実施形態では、抗タウ抗体は、配列番号７０と同一な配列を含む核酸によってコードされる軽鎖を含む。一部の実施形態では、抗タウ抗体は、配列番号７１と同一な配列を含む核酸によってコードされる軽鎖を含む。一部の実施形態では、抗タウ抗体は、配列番号７２と同一な配列を含む核酸によってコードされる軽鎖を含む。一部の実施形態では、抗タウ抗体は、配列番号７３と同一な配列を含む核酸によってコードされる軽鎖を含む。一部の実施形態では、抗タウ抗体は、配列番号６３と同一な配列を含む核酸によってコードされる重鎖および配列番号６８と同一な配列を含む核酸によってコードされる軽鎖を含む。一部の実施形態では、抗タウ抗体は、配列番号６４と同一な配列を含む核酸によってコードされる重鎖および配列番号６９と同一な配列を含む核酸によってコードされる軽鎖を含む。一部の実施形態では、抗タウ抗体は、配列番号６４と同一な配列を含む核酸によってコードされる重鎖および配列番号７０と同一な配列を含む核酸によってコードされる軽鎖を含む。一部の実施形態では、抗タウ抗体は、配列番号６５と同一な配列を含む核酸によってコードされる重鎖および配列番号７１と同一な配列を含む核酸によってコードされる軽鎖を含む。一部の実施形態では、抗タウ抗体は、配列番号６６と同一な配列を含む核酸によってコードされる重鎖および配列番号７２と同一な配列を含む核酸によってコードされる軽鎖を含む。一部の実施形態では、抗タウ抗体は、配列番号６７と同一な配列を含む核酸によってコードされる重鎖および配列番号７３と同一な配列を含む核酸によってコードされる軽鎖を含む。
本開示の方法
本明細書に記載される抗体を使用する、個体由来の試料中のリン酸化されたタウを検出するための方法が、本明細書で開示される。一部の実施形態では、リン酸化されたタウは、ｐタウ－２１２、ｐタウ－２１７、ｐタウ－２３１、ｐタウ－２１４およびｐタウ－２２０からなる群から選択される。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗体を使用する、個体由来の試料中のリン酸化されたタウを検出するための方法は、改善された特異度および感度を含む。
個体由来の試料中のリン酸化されたタウを検出するための方法であって、リン酸化されたタウに結合する抗体または抗体断片を使用して、試料に対してアッセイを実施するステップを含む、方法が、本明細書に記載される。個体由来の試料中のリン酸化されたタウを検出するための方法であって、リン酸化されたタウに結合する抗体または抗体断片を使用して、試料に対してイムノアッセイを実施するステップを含む、方法が、本明細書に記載される。一部の実施形態では、リン酸化されたタウは、ｐタウ－２１２、ｐタウ－２１７、ｐタウ－２３１、ｐタウ－２１４、ｐタウ－２２０およびｐタウ－１８１からなる群から選択される。一部の実施形態では、リン酸化されたタウは、ｐタウ－２１２、ｐタウ－２１７、ｐタウ－２３１、ｐタウ－２１４およびｐタウ－２２０からなる群から選択される。一部の実施形態では、リン酸化されたタウは、ｐタウ－２１７である。一部の実施形態では、リン酸化されたタウは、ｐタウ－２３１である。一部の実施形態では、リン酸化されたタウは、ｐタウ－１８１である。一部の実施形態では、リン酸化されたタウは、ｐタウ－２１２である。一部の実施形態では、リン酸化されたタウは、ｐタウ－２１７である。一部の実施形態では、リン酸化されたタウは、ｐタウ－２１４である。一部の実施形態では、リン酸化されたタウは、ｐタウ－２２０である。一部の実施形態では、リン酸化されたタウは、ｐタウ－１８１およびｐタウ－２１７である。一部の実施形態では、リン酸化されたタウは、ｐタウ－１８１およびｐタウ－２３１である。一部の実施形態では、リン酸化されたタウは、ｐタウ－２１７およびｐタウ－２３１である。一部の実施形態では、リン酸化されたタウは、ｐタウ－１８１、ｐタウ－２１７およびｐタウ－２３１である。
個体由来の試料中のリン酸化されたタウを検出するための方法であって、複数のリン酸化されたタウタンパク質に結合する抗体または抗体断片を使用して、試料に対してアッセイを実施するステップを含む、方法が、本明細書にさらに記載される。一部の実施形態では、方法は、ｐタウ－２１７およびｐタウ－２３１を検出する。一部の実施形態では、方法は、ｐタウ－２１２およびｐタウ－２１７を検出する。一部の実施形態では、方法は、ｐタウ－２１２およびｐタウ－２３１を検出する。一部の実施形態では、方法は、ｐタウ－２１２、ｐタウ－２１７およびｐタウ－２３１を検出する。
個体由来の試料中のリン酸化されたタウを検出するための方法であって、血漿試料および血清試料からなる群から選択される試料中のｐタウ－２１７およびｐタウ－２３１を検出する方法が、本明細書に記載される。一部の実施形態では、方法は、血漿試料および血清試料からなる群から選択される試料中のｐタウ－２１２およびｐタウ－２１７を検出する。一部の実施形態では、方法は、血漿試料および血清試料からなる群から選択される試料中のｐタウ－２１２およびｐタウ－２３１を検出する。一部の実施形態では、方法は、血漿試料および血清試料からなる群から選択される試料中のｐタウ－２１２、ｐタウ－２１７およびｐタウ－２３１を検出する。
本明細書に記載される方法は、試料に対してアッセイを実施するステップを含み得、試料は、血漿試料および血清試料からなる群から選択される。一部の例では、試料は、血液試料である。一部の例では、試料は、脳脊髄液試料である。試料は、静脈採血によって得られる血液試料であり得る。試料は、指穿刺採血から得られる血液試料であり得る。試料は、ヘルスケア提供者または対象によって得られ得る。方法は、対象から試料を得るステップを含み得る。一部の場合には、試料は、クリニックまたは病院への通院の間に、対象から得られる。
一部の実施形態では、Ａβ４２、Ａβ４０、Ａβ３８、ＢＡＣＥ１、ｈＦＡＢＰ、ＴＲＥＭ２、ＹＫＬ－４０、ＩＰ－１０、ニューログラニン、ＳＮＡＰ－２５、シナプトタグミン、アルファ－シヌクレイン、ＴＤＰ－４３、フェリチン、ＶＩＬＩＰ－１、ＮｆＬ、ＧＦＡＰ、およびそれらの組合せからなる群から選択されるバイオマーカーのレベルを決定するための方法が、本明細書にさらに記載される。一部の例では、バイオマーカーは、Ａβ４２である。一部の例では、バイオマーカーは、Ａβ４０である。一部の例では、バイオマーカーは、Ａβ４２およびＡβ４０である。一部の例では、バイオマーカーは、ＡＰＯＥである。一部の例では、バイオマーカーは、ＡＰＯＥ２、ＡＰＯＥ３およびＡＰＯＥ４からなる群から選択される。一部の例では、バイオマーカーは、ＡＰＯＥ４である。
一部の実施形態では、試料中のリン酸化されたタウを検出するための方法は、本明細書に記載される抗体または抗体断片を使用するイムノアッセイまたはリガンドアッセイを含む。一部の場合には、アッセイは、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、比色分析イムノアッセイ、均一系イムノアッセイ、非光学イムノアッセイ、蛍光イムノアッセイ、化学発光イムノアッセイ、電気化学発光イムノアッセイ、蛍光共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）イムノアッセイ、時間分解蛍光イムノアッセイ、側方流動イムノアッセイ、マイクロスポット（ｍｉｃｒｏｓｐｏｔ）イムノアッセイ、表面プラズモン共鳴アッセイ、リガンドアッセイ、凝固アッセイ、クロマトグラフィーアッセイ、および質量分析とカップリングさせたイムノキャプチャーからなる群から選択される。一部の場合には、アッセイは、イムノアッセイを含む。一部の場合には、アッセイは、ウエスタンブロット、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）およびクロマトグラフィーからなる群から選択される。一部の場合には、イムノアッセイは、一重化される（ｓｉｎｇｌｅ－ｐｌｅｘｅｄ）。一部の場合には、イムノアッセイは、多重化される。
本明細書に記載される方法は、本明細書に記載される抗体または抗体断片を使用する複数のイムノアッセイを含み得る。一部の場合には、複数のイムノアッセイは、同じイムノアッセイ（例えば、４つまたはそれよりも多くのＥＬＩＳＡアッセイ）である。複数のイムノアッセイが同じイムノアッセイである場合、複数のイムノアッセイの各々は、異なるリン酸化されたタウを検出することができる。複数のイムノアッセイが同じイムノアッセイである場合、複数のイムノアッセイの各々は、同じ反応チャンバーまたは異なる反応チャンバー中で実施され得る。反応チャンバーは、イムノアッセイを実施するための任意の適切な空間であり得る。反応チャンバーの例には、マイクロプレート中のウェル、Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆチューブ、または液滴が含まれるがこれらに限定されない。
一部の場合には、複数のイムノアッセイは、異なるイムノアッセイである。複数のイムノアッセイが異なるイムノアッセイである場合、複数のイムノアッセイの各々は、異なるリン酸化されたタウを検出することができる。複数のイムノアッセイが異なるイムノアッセイである場合、複数のイムノアッセイの各々は、同じ反応チャンバーまたは異なる反応チャンバー中で実施され得る。
一部の場合には、アッセイは、非イムノアッセイを含む。一部の場合には、アッセイは、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、高速液体クロマトグラフィー質量分析（ＨＰＬＣ－ＭＳ）、ガスクロマトグラフィー質量分析（ＧＣ－ＭＳ）、液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ－ＭＳ）、液体クロマトグラフィータンデム質量分析（ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ）、免疫組織化学（ＩＨＣ）、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）、定量的ＰＣＲ（ｑＰＣＲ）、およびそれらの組合せからなる群から選択される。
本明細書に記載される抗体を使用する本明細書に記載される方法は、リン酸化されたタウの検出に基づいて、個体におけるアルツハイマー病を立証するために使用され得る。一部の実施形態では、個体におけるアルツハイマー病は、ｐタウ－２１２、ｐタウ－２１７、ｐタウ－２３１、ｐタウ－２１４、ｐタウ－２２０、またはそれらの組合せが個体由来の試料中で検出される場合に、立証される。
本明細書に記載される抗体を使用する本明細書に記載される方法は、リン酸化されたタウの検出に基づいて、アルツハイマー病の発症についての個体の予後予測のために使用され得る。一部の実施形態では、アルツハイマー病の発症についての個体の予後予測は、ｐタウ－２１２、ｐタウ－２１７、ｐタウ－２３１、ｐタウ－２１４、ｐタウ－２２０、またはそれらの組合せが個体由来の試料中で検出される場合に、決定される。
本明細書に記載される抗体を使用する本明細書に記載される方法は、非アルツハイマー病（ＡＤ）神経変性疾患、Ａβ陰性非ＡＤ神経変性疾患、Ａβ陽性非ＡＤ神経変性疾患、行動障害型前頭側頭葉型認知症（ＢｖＦＴＤ）、原発性進行性失語症（ＰＰＡ）、血管性認知症（ＶａＤ）、パーキンソン病（ＰＤ）、認知症を伴うＰＤ（ＰＤＤ）、多系統萎縮症（ＭＳＡ）、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、大脳皮質基底核症候群（ＣＢＳ）、Ａβ陰性の認知的に障害されたまたは障害されていない状態、およびそれらの組合せからなる群から選択される疾患もしくは障害または神経学的および認知的に障害されていない対照と比較して、個体におけるアルツハイマー病（ＡＤ）を正確かつ特異的に立証するために使用され得る。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗体を使用する本明細書に記載される方法は、疾患もしくは障害または神経学的および認知的に障害されていない状態と比較して、ＡＤを立証するにあたり、少なくともまたは約７０％、８０％、９０％、９５％、９９％またはそれよりも高い、改善された正確さまたは特異度を含む。
本明細書に記載される抗体を使用する本明細書に記載される方法は、神経病理学的試験または臨床診断と比較して、個体におけるアルツハイマー病（ＡＤ）を正確かつ特異的に立証するために使用され得る。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗体を使用する本明細書に記載される方法は、神経病理学的試験または臨床診断と比較して、ＡＤを立証するにあたり、少なくともまたは約７０％、８０％、９０％、９５％、９９％またはそれよりも高い、改善された正確さまたは特異度を含む。一部の実施形態では、神経病理学的試験または臨床診断は、神経学的試験、精神試験または脳イメージング（例えば、ＭＲＩ、ＣＴまたはＰＥＴスキャン）を含む。
本明細書に記載される抗体を使用する本明細書に記載される方法は、低い検出限界で、試料中のリン酸化されたタウを検出することが可能であり得る。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗体を使用する本明細書に記載される方法は、少なくとも約１．５ピコグラム／ミリリットル（ｐｇ／ｍＬ）の検出限界で、試料中のリン酸化されたタウを検出することが可能である。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗体を使用する本明細書に記載される方法は、少なくとも約５ピコグラム／ミリリットル（ｐｇ／ｍＬ）の検出限界で、試料中のリン酸化されたタウを検出することが可能である。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗体を使用する本明細書に記載される方法は、約０．５ｐｇ／ｍＬ～約１０ｐｇ／ｍＬ、約１ｐｇ／ｍＬ～約８ｐｇ／ｍＬ、約１．５ｐｇ／ｍＬ～約７ｐｇ／ｍＬ、約２ｐｇ／ｍＬ～約６ｐｇ／ｍＬまたは約３ｐｇ／ｍＬ～約５ｐｇ／ｍＬの範囲内の検出限界で、試料中のリン酸化されたタウを検出することが可能である。
タウ抗体の産生
一部の実施形態では、本明細書に記載される抗体または抗体断片は、特に、化学的合成または組換え発現による抗体または抗体断片の合成のために有用であることが当該分野で公知の任意の方法を使用して産生され、好ましくは、組換え発現技法によって産生される。
一部の例では、抗体またはその結合性断片は、組換え的に発現され、抗体またはその結合性断片をコードする核酸は、化学的に合成されたオリゴヌクレオチドからアセンブルされ（例えば、Kutmeier et al., 1994, BioTechniques 17:242に記載される通り）、これには、抗体をコードする配列の部分を含有する重複するオリゴヌクレオチドの合成、これらのオリゴヌクレオチドのアニーリングおよびライゲーション、ならびに次いで、ＰＣＲによるライゲーションされたオリゴヌクレオチドの増幅が関与する。
あるいは、抗体をコードする核酸分子は、配列の３’末端および５’末端にハイブリダイズ可能な合成プライマーを使用するＰＣＲ増幅によって、または特定の遺伝子配列に対して特異的なオリゴヌクレオチドプローブを使用するクローニングによって、適切な供給源（例えば、抗体ｃＤＮＡライブラリー、または免疫グロブリンを発現する任意の組織もしくは細胞から生成されたｃＤＮＡライブラリー）から、必要に応じて生成される。
一部の例では、抗体またはその結合は、例えば、Kohler and Milstein (1975, Nature 256:495-497)によって記載されるように、またはKozbor et al. (1983, Immunology Today 4:72)もしくはCole et al. (1985 in Monoclonal Antibodies and
Cancer Therapy, Alan R. Liss, Inc., pp. 77-96)によって記載されるように、ポリクローナル抗体を生成するために動物、例えば、マウスを免疫化することによって、またはより好ましくは、モノクローナル抗体を生成することによって、必要に応じて生成される。あるいは、抗体のＦａｂ部分を少なくともコードするクローンは、特異的抗原に結合するＦａｂ断片のクローンについてＦａｂ発現ライブラリーをスクリーニングすること（例えば、Huse et al., 1989, Science 246:1275-1281に記載される通り）に
よって、または抗体ライブラリーをスクリーニングすること（例えば、Clackson et al., 1991, Nature 352:624；Hane et al., 1997 Proc. Natl. Acad. Sci. USA
94:4937を参照されたい）によって、必要に応じて得られる。
一部の実施形態では、適切な生物学的活性のヒト抗体分子からの遺伝子と併せて、適切な抗原特異性のマウス抗体分子からの遺伝子をスプライシングすることによる、「キメラ抗体」（Morrison et al., 1984, Proc. Natl. Acad. Sci. 81:851-855；Neuberger et al., 1984, Nature 312:604-608；Takeda et al., 1985, Nature 314:452-454）の産生のために開発された技法が使用される。キメラ抗体は、異なる部分が異
なる動物種に由来する分子、例えば、マウスモノクローナル抗体に由来する可変領域およびヒト免疫グロブリン定常領域を有する分子である。
一部の実施形態では、単鎖抗体の産生のための記載された技法（米国特許第４，６９４，７７８号；Bird, 1988, Science 242:423-42；Huston et al., 1988, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883；およびWard et al., 1989, Nature 334:544-54）は、単鎖抗体を産生するために適合される。単鎖抗体は、アミノ酸架橋を介して
Ｆｖ領域の重鎖および軽鎖断片を連結することによって形成され、単鎖ポリペプチドを生じる。Ｅ．ｃｏｌｉにおける機能的Ｆｖ断片のアセンブリのための技法もまた、必要に応じて使用される（Skerra et al., 1988, Science 242:1038-1041）。
一部の実施形態では、抗体のヌクレオチド配列を含む発現ベクターまたは抗体のヌクレオチド配列は、従来の技法（例えば、電気穿孔、リポソームトランスフェクションおよびリン酸カルシウム沈殿）によって宿主細胞に移入され、次いで、トランスフェクトされた細胞は、抗体を産生するために従来の技法によって培養される。具体的な実施形態では、抗体の発現は、構成的、誘導可能な、または組織特異的プロモーターによって調節される。
一部の実施形態では、種々の宿主－発現ベクター系が、本明細書に記載される抗体またはその結合性断片を発現するために使用される。かかる宿主－発現系は、抗体のコード配列が産生され、引き続いて精製されるビヒクルを示すが、適切なヌクレオチドコード配列で形質転換またはトランスフェクトされた場合に、抗体またはその結合性断片をｉｎ ｓｉｔｕで発現する細胞もまた示す。これらには、微生物、例えば、抗体またはその結合性断片コード配列を含有する組換えバクテリオファージＤＮＡ、プラスミドＤＮＡまたはコスミドＤＮＡ発現ベクターで形質転換された細菌（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉおよびＢ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）；抗体またはその結合性断片コード配列を含有する組換え酵母発現ベクターで形質転換された酵母（例えば、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ、Ｐｉｃｈｉａ）；抗体またはその結合性断片コード配列を含有する組換えウイルス発現ベクター（例えば、バキュロウイルス）に感染した昆虫細胞系；抗体もしくはその結合性断片コード配列を含有する組換えウイルス発現ベクター（例えば、カリフラワーモザイクウイルス（ＣａＭＶ）およびタバコモザイクウイルス（ＴＭＶ））に感染した、または抗体もしくはその結合性断片コード配列を含有する組換えプラスミド発現ベクター（例えば、Ｔｉプラスミド）で形質転換された植物細胞系；あるいは哺乳動物細胞のゲノムに由来するプロモーター（例えば、メタロチオネインプロモーター）または哺乳動物ウイルスに由来するプロモーター（例えば、アデノウイルス後期プロモーター；ワクシニアウイルス７．５Ｋプロモーター）を含有する組換え発現構築物を保有する哺乳動物細胞系（例えば、ＣＯＳ、ＣＨＯ、ＢＨ、２９３、２９３Ｔ、３Ｔ３細胞）が含まれるがこれらに限定されない。
組換えタンパク質の長期の高収量の産生のためには、安定な発現が好ましい。一部の例では、抗体を安定に発現する株化細胞は、必要に応じて操作される。ウイルス複製起点を含有する発現ベクターを使用するのではなく、宿主細胞は、適切な発現制御エレメント（例えば、プロモーター、エンハンサー、配列、転写ターミネーター、ポリアデニル化部位など）によって制御されるＤＮＡ、および選択可能なマーカーで形質転換される。外来ＤＮＡの導入後、次いで、操作された細胞は、富化培地中で１～２日間成長させられ、次いで、選択培地に切り替えられる。組換えプラスミド中の選択可能なマーカーは、選択に対する耐性を付与し、細胞がプラスミドをそれらの染色体中に安定に組み込み、成長してフォーカスを形成することを可能にし、これらは次に、クローニングされ、株化細胞へと拡大増殖される。この方法は、抗体またはその結合性断片を発現する株化細胞を操作するために有利に使用され得る。
一部の例では、単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ（Wigler et al., 1977, Cell 11:223）、ヒポキサンチン－グアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（Szybalska & Szybalski, 192, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 48:202）およびアデニン
ホスホリボシルトランスフェラーゼ（Lowy et al., 1980, Cell 22:817）遺伝子が
含まれるがこれらに限定されない、いくつかの選択系が使用され、これらは、それぞれｔｋ－、ｈｇｐｒｔ－またはａｐｒｔ－細胞において使用される。また、代謝拮抗薬耐性が、以下の遺伝子についての選択の基礎として使用される：メトトレキサートに対する耐性を付与するｄｈｆｒ（Wigler et al., 1980, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:357；O'Hare et al., 1981, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 78:1527）；ミコフ
ェノール酸に対する耐性を付与するｇｐｔ（Mulligan & Berg, 1981, Proc. Natl.
Acad. Sci. USA 78:2072）；アミノグリコシドＧ－４１８に対する耐性を付与する
ｎｅｏ（Clinical Pharmacy 12:488-505；Wu and Wu, 1991, Biotherapy 3:87-95；Tolstoshev, 1993, Ann. Rev. Pharmacol. Toxicol. 32:573-596；Mulligan, 1993, Science 260:926-932；およびMorgan and Anderson, 1993, Ann. Rev. Biochem. 62:191-217; May 1993, TIB TECH 11(5):155-215）およびハイグロマイシンに対する耐性を付与するｈｙｇｒｏ（Santerre et al., 1984, Gene 30:147）。使
用され得る組換えＤＮＡ技術の分野で一般に公知の方法は、Ausubel et al. (eds., 1993, Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, NY；Kriegler, 1990, Gene Transfer and Expression, A Laboratory Manual, Stockton Press, NY；およびin Chapters 12 and 13, Dracopoli et al. (eds), 1994, Current Protocols in Human Genetics, John Wiley & Sons, NY.；Colberre-Garapin et al., 1981, J. Mol. Biol. 150:1）に記載されている。
一部の例では、抗体の発現レベルは、ベクター増幅によって増加される（総説については、Bebbington and Hentschel, the use of vectors based on gene amplification for the expression of cloned genes in mammalian cells in DNA cloning, Vol. 3. (Academic Press, New York, 1987)を参照されたい）。抗体を発現するベクター系中のマーカーが増幅可能である場合、宿主細胞の培養物中に存在する阻害剤のレベルにおける増加は、マーカー遺伝子のコピー数を増加させる。増幅された領域は、抗体のヌクレオチド配列に関連するので、抗体の産生もまた増加する（Crouse et
al., 1983, Mol. Cell Biol. 3:257）。
一部の例では、抗体の精製のための当該分野で公知の任意の方法は、例えば、クロマトグラフィー（例えば、イオン交換、親和性、特に、プロテインＡ後の特異的抗原に対する親和性による、およびサイジングカラムクロマトグラフィー）、遠心分離、差次的溶解度によって、またはタンパク質の精製のための任意の他の標準的な技法によって、使用される。
発現ベクター
一部の実施形態では、ベクターには、真核生物供給源または原核生物供給源のいずれかに由来する任意の適切なベクターが含まれる。一部の場合には、ベクターは、細菌（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ）、昆虫、酵母（例えば、Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）、藻類または哺乳動物供給源から得られる。例示的な細菌ベクターには、ｐＡＣＹＣ１７７、ｐＡＳＫ７５、ｐＢＡＤベクターシリーズ、ｐＢＡＤＭベクターシリーズ、ｐＥＴベクターシリーズ、ｐＥＴＭベクターシリーズ、ｐＧＥＸベクターシリーズ、ｐＨＡＴ、ｐＨＡＴ２、ｐＭａｌ－ｃ２、ｐＭａｌ－ｐ２、ｐＱＥベクターシリーズ、ｐＲＳＥＴ Ａ、ｐＲＳＥＴ Ｂ、ｐＲＳＥＴ Ｃ、ｐＴｒｃＨｉｓ２シリーズ、ｐＺＡ３１－Ｌｕｃ、ｐＺＥ２１－ＭＣＳ－１、ｐＦＬＡＧ ＡＴＳ、ｐＦＬＡＧ ＣＴＳ、ｐＦＬＡＧ ＭＡＣ、ｐＦＬＡＧ Ｓｈｉｆｔ－１２ｃ、ｐＴＡＣ－ＭＡＴ－１、ｐＦＬＡＧ ＣＴＣまたはｐＴＡＣ－ＭＡＴ－２が含まれる。
例示的な昆虫ベクターには、ｐＦａｓｔＢａｃ１、ｐＦａｓｔＢａｃ ＤＵＡＬ、ｐＦａｓｔＢａｃ ＥＴ、ｐＦａｓｔＢａｃ ＨＴａ、ｐＦａｓｔＢａｃ ＨＴｂ、ｐＦａｓｔＢａｃ ＨＴｃ、ｐＦａｓｔＢａｃ Ｍ３０ａ、ｐＦａｓｔＢａｃｔ Ｍ３０ｂ、ｐＦａｓｔＢａｃ、Ｍ３０ｃ、ｐＶＬ１３９２、ｐＶＬ１３９３、ｐＶＬ１３９３ Ｍ１０、ｐＶＬ１３９３ Ｍ１１、ｐＶＬ１３９３ Ｍ１２、ＦＬＡＧベクター、例えば、ｐＰｏｌｈ－ＦＬＡＧ１もしくはｐＰｏｌｈ－ＭＡＴ ２、またはＭＡＴベクター、例えば、ｐＰｏｌｈ－ＭＡＴ１もしくはｐＰｏｌｈ－ＭＡＴ２が含まれる。
一部の場合には、酵母ベクターには、Ｇａｔｅｗａｙ（登録商標）ｐＤＥＳＴ（商標）１４ベクター、Ｇａｔｅｗａｙ（登録商標）ｐＤＥＳＴ（商標）１５ベクター、Ｇａｔｅｗａｙ（登録商標）ｐＤＥＳＴ（商標）１７ベクター、Ｇａｔｅｗａｙ（登録商標）ｐＤＥＳＴ（商標）２４ベクター、Ｇａｔｅｗａｙ（登録商標）ｐＹＥＳ－ＤＥＳＴ５２ベクター、ｐＢＡＤ－ＤＥＳＴ４９ Ｇａｔｅｗａｙ（登録商標）デスティネーションベクター、ｐＡＯ８１５ Ｐｉｃｈｉａベクター、ｐＦＬＤ１ Ｐｉｃｈｉ ｐａｓｔｏｒｉｓベクター、ｐＧＡＰＺＡ、ＢおよびＣ Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓベクター、ｐＰＩＣ３．５Ｋ Ｐｉｃｈｉａベクター、ｐＰＩＣ６ Ａ、ＢおよびＣ Ｐｉｃｈｉａベクター、ｐＰＩＣ９Ｋ Ｐｉｃｈｉａベクター、ｐＴＥＦ１／Ｚｅｏ、ｐＹＥＳ２酵母ベクター、ｐＹＥＳ２／ＣＴ酵母ベクター、ｐＹＥＳ２／ＮＴ Ａ、ＢおよびＣ酵母ベクター、またはｐＹＥＳ３／ＣＴ酵母ベクターが含まれる。
例示的な藻類ベクターには、ｐＣｈｌａｍｙ－４ベクターまたはＭＣＳベクターが含まれる。
哺乳動物ベクターの例には、一過性発現ベクターまたは安定な発現ベクターが含まれる。哺乳動物の一過性発現ベクターには、ｐＲＫ５、ｐ３ｘＦＬＡＧ－ＣＭＶ ８、ｐＦＬＡＧ－Ｍｙｃ－ＣＭＶ １９、ｐＦＬＡＧ－Ｍｙｃ－ＣＭＶ ２３、ｐＦＬＡＧ－ＣＭＶ
２、ｐＦＬＡＧ－ＣＭＶ ６ａ，ｂ，ｃ、ｐＦＬＡＧ－ＣＭＶ ５．１、ｐＦＬＡＧ－ＣＭＶ ５ａ，ｂ，ｃ、ｐ３ｘＦＬＡＧ－ＣＭＶ ７．１、ｐＦＬＡＧ－ＣＭＶ ２０、ｐ３ｘＦＬＡＧ－Ｍｙｃ－ＣＭＶ ２４、ｐＣＭＶ－ＦＬＡＧ－ＭＡＴ１、ｐＣＭＶ－ＦＬＡＧ－ＭＡＴ２、ｐＢＩＣＥＰ－ＣＭＶ ３、ｏｒ ｐＢＩＣＥＰ－ＣＭＶ ４が含まれ得る。哺乳動物の安定な発現ベクターには、ｐＦＬＡＧ－ＣＭＶ ３、ｐ３ｘＦＬＡＧ－ＣＭＶ ９、ｐ３ｘＦＬＡＧ－ＣＭＶ １３、ｐＦＬＡＧ－Ｍｙｃ－ＣＭＶ ２１、ｐ３ｘＦＬＡＧ－Ｍｙｃ－ＣＭＶ ２５、ｐＦＬＡＧ－ＣＭＶ ４、ｐ３ｘＦＬＡＧ－ＣＭＶ １０、ｐ３ｘＦＬＡＧ－ＣＭＶ １４、ｐＦＬＡＧ－Ｍｙｃ－ＣＭＶ ２２、ｐ３ｘＦＬＡＧ－Ｍｙｃ－ＣＭＶ ２６、ｐＢＩＣＥＰ－ＣＭＶ １、またはｐＢＩＣＥＰ－ＣＭＶ ２が含まれ得る。
一部の例では、無細胞系は、細胞由来の細胞質および／または核構成要素の混合物であり、ｉｎ ｖｉｔｒｏ核酸合成に使用される。一部の場合には、無細胞系は、原核生物細胞構成要素または真核生物細胞構成要素のいずれかを利用する。時折、核酸合成は、例えば、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ細胞、Ｘｅｎｏｐｕｓ卵またはＨｅＬａ細胞に基づく無細胞系において得られる。例示的な無細胞系には、Ｅ．ｃｏｌｉ Ｓ３０ Ｅｘｔｒａｃｔ系、Ｅ．ｃｏｌｉ Ｔ７ Ｓ３０系またはＰＵＲＥｘｐｒｅｓｓ（登録商標）が含まれるがこれらに限定されない。
宿主細胞
一部の実施形態では、宿主細胞には、任意の適切な細胞、例えば、天然由来の細胞または遺伝子改変された細胞が含まれる。一部の例では、宿主細胞は、産生宿主細胞である。一部の例では、宿主細胞は、真核生物細胞である。他の例では、宿主細胞は、原核生物細胞である。一部の場合には、真核生物細胞には、真菌（例えば、酵母細胞）、動物細胞または植物細胞が含まれる。一部の場合には、原核生物細胞は、細菌細胞である。細菌細胞の例には、グラム陽性細菌またはグラム陰性細菌が含まれる。時折、グラム陰性細菌は、嫌気性、桿状形状またはその両方である。
一部の例では、グラム陽性細菌には、放線菌門、ファーミキューテス門またはテネリクテス門が含まれる。一部の場合には、グラム陰性細菌には、アクウィフェクス門、ディノコッカス属－サーマス属、フィブロバクター門－クロロビウム門／バクテロイデス門（ＦＣＢ群）、フソバクテリウム門、ゲンマティモナス門、ニトロスピラ門、プランクトミセス門－ベルコミクロビウム門／クラミジア属（ＰＶＣ群）、プロテオバクテリア門、スピロヘータ門またはシネルギステス門が含まれる。他の細菌は、アシドバクテリウム門、クロロフレクサス門、クリシオゲネス門、シアノバクテリア門、デフェリバクター門、ディクチオグロムス属、サーモデスルフォバクテリア門またはテルモトガ門であり得る。細菌細胞は、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｂｏｔｕｌｉｎｕｍまたはＣｏｌｉ ｂａｃｉｌｌｉであり得る。
例示的な原核生物宿主細胞には、ＢＬ２１、Ｍａｃｈ１（商標）、ＤＨ１０Ｂ（商標）、ＴＯＰ１０、ＤＨ５α、ＤＨ１０Ｂａｃ（商標）、ＯｍｎｉＭａｘ（商標）、ＭｅｇａＸ（商標）、ＤＨ１２Ｓ（商標）、ＩＮＶ１１０、ＴＯＰ１０Ｆ’、ＩＮＶαＦ、ＴＯＰ１０／Ｐ３、ｃｃｄＢ Ｓｕｒｖｉｖａｌ、ＰＩＲ１、ＰＩＲ２、Ｓｔｂｌ２（商標）、Ｓｔｂｌ３（商標）またはＳｔｂｌ４（商標）が含まれるがこれらに限定されない。
一部の例では、動物細胞には、脊椎動物由来または無脊椎動物由来の細胞が含まれる。一部の場合には、動物細胞には、海生無脊椎動物、魚類、昆虫、両生類、爬虫類または哺乳動物由来の細胞が含まれる。一部の場合には、真菌細胞には、酵母細胞、例えば、ビール酵母、パン酵母またはワイン酵母が含まれる。
真菌には、子嚢菌類、例えば、酵母、カビ、糸状菌、担子菌類または接合菌類が含まれる。一部の例では、酵母には、子嚢菌門または担子菌門が含まれる。一部の場合には、子嚢菌門には、サッカロミセス亜門（真正酵母（ｔｒｕｅ ｙｅａｓｔ）、例えば、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ（パン酵母））またはタフリナ菌亜門（例えば、シゾサッカロミケス綱（分裂酵母））が含まれる。一部の場合には、担子菌門には、ハラタケ亜門（例えば、シロキクラゲ綱）またはプクキニア菌亜門（例えば、ミクロボトリウム綱）が含まれる。
例示的な酵母または糸状菌には、例えば、属：Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ、Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ、Ｃａｎｄｉｄａ、Ｐｉｃｈｉａ、Ｈａｎｓｅｎｕｌａ、Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ、Ｚｙｇｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ、Ｙａｒｒｏｗｉａ、Ｔｒｉｃｈｏｓｐｏｒｏｎ、Ｒｈｏｄｏｓｐｏｒｉｄｉ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ、ＦｕｓａｒｉｕｍまたはＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａが含まれる。例示的な酵母または糸状菌には、例えば、種：Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ、Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｐｏｍｂｅ、Ｃａｎｄｉｄａ ｕｔｉｌｉｓ、Ｃａｎｄｉｄａ ｂｏｉｄｉｎｉ、Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ、Ｃａｎｄｉｄａ ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ、Ｃａｎｄｉｄａ ｓｔｅｌｌａｔｏｉｄｅａ、Ｃａｎｄｉｄａ ｇｌａｂｒａｔａ、Ｃａｎｄｉｄａ ｋｒｕｓｅｉ、Ｃａｎｄｉｄａ ｐａｒａｐｓｉｌｏｓｉｓ、Ｃａｎｄｉｄａ ｇｕｉｌｌｉｅｒｍｏｎｄｉｉ、Ｃａｎｄｉｄａ ｖｉｓｗａｎａｔｈｉｉ、Ｃａｎｄｉｄａ ｌｕｓｉｔａｎｉａｅ、Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ ｍｕｃｉｌａｇｉｎｏｓａ、Ｐｉｃｈｉａ ｍｅｔａｎｏｌｉｃａ、Ｐｉｃｈｉａ ａｎｇｕｓｔａ、Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ、Ｐｉｃｈｉａ ａｎｏｍａｌａ、Ｈａｎｓｅｎｕｌａ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈａ、Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ ｌａｃｔｉｓ、Ｚｙｇｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｒｏｕｘｉｉ、Ｙａｒｒｏｗｉａ ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ、Ｔｒｉｃｈｏｓｐｏｒｏｎ ｐｕｌｌｕｌａｎｓ、Ｒｈｏｄｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ ｔｏｒｕ－Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｄｕｌａｎｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ａｗａｍｏｒｉ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｏｒｙｚａｅ、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｅｉ、Ｙａｒｒｏｗｉａ ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ、Ｂｒｅｔｔａｎｏｍｙｃｅｓ ｂｒｕｘｅｌｌｅｎｓｉｓ、Ｃａｎｄｉｄａ ｓｔｅｌｌａｔａ、Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｐｏｍｂｅ、Ｔｏｒｕｌａｓｐｏｒａ
ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ、Ｚｙｇｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｂａｉｌｉｉ、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｇａｔｔｉｉ、またはＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｂｏｕｌａｒｄｉｉが含まれる。
例示的な酵母宿主細胞には、Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ酵母株、例えば、ＧＳ１１５、ＫＭ７１Ｈ、ＳＭＤ１１６８、ＳＭＤ１１６８ＨおよびＸ－３３；ならびにＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ酵母株、例えば、ＩＮＶＳｃ１が含まれるがこれらに限定されない。
一部の例では、さらなる動物細胞には、軟体動物、節足動物、環形動物または海綿から得られる細胞が含まれる。一部の場合には、さらなる動物細胞は、哺乳動物細胞、例えば、霊長類、類人猿、ウマ、ウシ、ブタ、イヌ、ネコまたはげっ歯類由来である。一部の場合には、げっ歯類には、マウス、ラット、ハムスター、スナネズミ、ハムスター、チンチラ、ファンシーラットまたはモルモットが含まれる。
例示的な哺乳動物宿主細胞には、２９３Ａ株化細胞、２９３ＦＴ株化細胞、２９３Ｆ細胞、２９３ Ｈ細胞、ＣＨＯ ＤＧ４４細胞、ＣＨＯ－Ｓ細胞、ＣＨＯ－Ｋ１細胞、ＦＵＴ８ ＫＯ ＣＨＯＫ１、Ｅｘｐｉ２９３Ｆ（商標）細胞、Ｆｌｐ－Ｉｎ（商標）Ｔ－ＲＥｘ（商標）２９３株化細胞、Ｆｌｐ－Ｉｎ（商標）－２９３株化細胞、Ｆｌｐ－Ｉｎ（商標）－３Ｔ３株化細胞、Ｆｌｐ－Ｉｎ（商標）－ＢＨＫ株化細胞、Ｆｌｐ－Ｉｎ（商標）－ＣＨＯ株化細胞、Ｆｌｐ－Ｉｎ（商標）－ＣＶ－１株化細胞、Ｆｌｐ－Ｉｎ（商標）－Ｊｕｒｋａｔ株化細胞、ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ（商標）２９３－Ｆ細胞、ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ（商標）ＣＨＯ－Ｓ細胞、ＧｒｉｐＴｉｔｅ（商標）２９３ ＭＳＲ株化細胞、ＧＳ－ＣＨＯ株化細胞、ＨｅｐａＲＧ（商標）細胞、Ｔ－ＲＥｘ（商標）Ｊｕｒｋａｔ株化細胞、Ｐｅｒ．Ｃ６細胞、Ｔ－ＲＥｘ（商標）－２９３株化細胞、Ｔ－ＲＥｘ（商標）－ＣＨＯ株化細胞およびＴ－ＲＥｘ（商標）－ＨｅＬａ株化細胞が含まれるがこれらに限定されない。
一部の例では、哺乳動物宿主細胞は、安定な株化細胞、またはそれ自身のゲノム中に目的の遺伝子材料を取り込んでおり、多世代の細胞分裂の後に遺伝子材料の産物を発現する能力を有する株化細胞である。一部の場合には、哺乳動物宿主細胞は、一過性株化細胞、またはそれ自身のゲノム中に目的の遺伝子材料を取り込んでおらず、多世代の細胞分裂の後に遺伝子材料の産物を発現する能力を有さない株化細胞である。
例示的な昆虫宿主細胞には、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ Ｓ２細胞、Ｓｆ９細胞、Ｓｆ２１細胞、Ｈｉｇｈ Ｆｉｖｅ（商標）細胞およびｅｘｐｒｅｓＳＦ＋（登録商標）細胞が含まれるがこれらに限定されない。一部の例では、植物細胞には、藻類由来の細胞が含まれる。例示的な昆虫株化細胞には、Ｃｈｌａｍｙｄｏｍｏｎａｓ ｒｅｉｎｈａｒｄｔｉｉ
１３７ｃまたはＳｙｎｅｃｈｏｃｏｃｃｕｓ ｅｌｏｎｇａｔｕｓ ＰＰＣ ７９４２由来の株が含まれるがこれらに限定されない。
番号付き実施形態
番号付き実施形態１は、個体由来の試料中のリン酸化されたタウを検出するための方法であって、可変ドメイン重鎖領域（ＶＨ）および可変ドメイン軽鎖領域（ＶＬ）を含む抗体または抗体断片を使用して、試料に対してイムノアッセイを実施するステップを含み、ＶＨが、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つに示される配列と少なくとも約９０％同一なアミノ酸配列を含み、ＶＬが、配列番号３５～４０のうちのいずれか１つに示される配列と少なくとも約９０％同一なアミノ酸配列を含む、方法を含む。
番号付き実施形態２は、リン酸化されたタウが、ｐタウ－１８１、ｐタウ－２１２、ｐタウ－２１７、ｐタウ－２３１、ｐタウ－２１４およびｐタウ－２２０からなる群から選択される、番号付き実施形態１に記載の方法を含む。
番号付き実施形態３は、リン酸化されたタウがｐタウ－２１７である、番号付き実施形態１から２の方法を含む。
番号付き実施形態４は、リン酸化されたタウがｐタウ－２３１である、番号付き実施形態１から２の方法を含む。
番号付き実施形態５は、ｐタウ－２１７およびｐタウ－２３１を検出する、番号付き実施形態２に記載の方法を含む。
番号付き実施形態６は、ｐタウ－２１２およびｐタウ－２１７を検出する、番号付き実施形態２の方法を含む。
番号付き実施形態７は、ｐタウ－２１２およびｐタウ－２３１を検出する、番号付き実施形態２の方法を含む。
番号付き実施形態８は、ｐタウ－１８１およびｐタウ－２１７を検出する、番号付き実施形態２の方法を含む。
番号付き実施形態９は、ｐタウ－１８１およびｐタウ－２３１を検出する、番号付き実施形態２の方法を含む。
番号付き実施形態１０は、ｐタウ－１８１、ｐタウ－２１７およびｐタウ－２３１を検出する、番号付き実施形態２の方法を含む。
番号付き実施形態１１は、ｐタウ－２１２、ｐタウ－２１７およびｐタウ－２３１を検出する、番号付き実施形態２の方法を含む。
番号付き実施形態１２は、血漿試料および血清試料からなる群から選択される試料中のｐタウ－２１７およびｐタウ－２３１を検出する、番号付き実施形態５の方法を含む。
番号付き実施形態１３は、血漿試料および血清試料からなる群から選択される試料中のｐタウ－２１２およびｐタウ－２１７を検出する、番号付き実施形態６の方法を含む。
番号付き実施形態１４は、血漿試料および血清試料からなる群から選択される試料中のｐタウ－２１２およびｐタウ－２３１を検出する、番号付き実施形態７の方法を含む。
番号付き実施形態１５は、血漿試料および血清試料からなる群から選択される試料中のｐタウ－１８１およびｐタウ－２１７を検出する、番号付き実施形態１１の方法を含む。
番号付き実施形態１６は、血漿試料および血清試料からなる群から選択される試料中のｐタウ－１８１およびｐタウ－２３１を検出する、番号付き実施形態１１の方法を含む。
番号付き実施形態１７は、血漿試料および血清試料からなる群から選択される試料中のｐタウ－１８１、ｐタウ－２１７およびｐタウ－２３１を検出する、番号付き実施形態１１の方法を含む。
番号付き実施形態１８は、血漿試料および血清試料からなる群から選択される試料中のｐタウ－２１２、ｐタウ－２１７およびｐタウ－２３１を検出する、番号付き実施形態１１の方法を含む。
番号付き実施形態１９は、ＶＨが、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つに従うアミノ酸配列を含む、番号付き実施形態１から１８の方法を含む。
番号付き実施形態２０は、ＶＬが、配列番号３５～４０のうちのいずれか１つに従うアミノ酸配列を含む、番号付き実施形態１から１９の方法を含む。
番号付き実施形態２１は、ＶＨが、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つに従うアミノ酸配列を含み、ＶＬが、配列番号３５～４０のうちのいずれか１つに従うアミノ酸配列を含む、番号付き実施形態１から２０の方法を含む。
番号付き実施形態２２は、ＶＨが、配列番号３０と少なくとも約９０％同一なアミノ酸配列を含み、ＶＬが、配列番号３５と少なくとも約９０％同一なアミノ酸配列を含む、番号付き実施形態１から２１の方法を含む。
番号付き実施形態２３は、ＶＨが、配列番号３１と少なくとも約９０％同一なアミノ酸配列を含み、ＶＬが、配列番号３６と少なくとも約９０％同一なアミノ酸配列を含む、番号付き実施形態１から２１の方法を含む。
番号付き実施形態２４は、ＶＨが、配列番号３１と少なくとも約９０％同一なアミノ酸配列を含み、ＶＬが、配列番号３７と少なくとも約９０％同一なアミノ酸配列を含む、番号付き実施形態１から２１の方法を含む。
番号付き実施形態２５は、ＶＨが、配列番号３２と少なくとも約９０％同一なアミノ酸配列を含み、ＶＬが、配列番号３８と少なくとも約９０％同一なアミノ酸配列を含む、番号付き実施形態１から２１の方法を含む。
番号付き実施形態２６は、ＶＨが、配列番号３３と少なくとも約９０％同一なアミノ酸配列を含み、ＶＬが、配列番号３９と少なくとも約９０％同一なアミノ酸配列を含む、番号付き実施形態１から２１の方法を含む。
番号付き実施形態２７は、ＶＨが、配列番号３４と少なくとも約９０％同一なアミノ酸配列を含み、ＶＬが、配列番号４０と少なくとも約９０％同一なアミノ酸配列を含む、番号付き実施形態１から２１の方法を含む。
番号付き実施形態２８は、抗体または抗体断片が、配列番号４１～５１のうちのいずれか１つと少なくとも約９０％同一なアミノ酸配列を含む、番号付き実施形態１から２７の方法を含む。
番号付き実施形態２９は、試料に対してアッセイを実施して、Ａβ４２、Ａβ４０、Ａβ３８、ＢＡＣＥ１、ｈＦＡＢＰ、ＴＲＥＭ２、ＹＫＬ－４０、ＩＰ－１０、ニューログラニン、ＳＮＡＰ－２５、シナプトタグミン、アルファ－シヌクレイン、ＴＤＰ－４３、フェリチン、ＶＩＬＩＰ－１、ＮｆＬ、ＧＦＡＰ、およびそれらの組合せからなる群から選択されるバイオマーカーのレベルを決定するステップをさらに含む、番号付き実施形態１から２８の方法を含む。
番号付き実施形態３０は、試料が、血液試料、血漿試料、血清試料および脳脊髄液（ＣＳＦ）試料からなる群から選択される、番号付き実施形態１から２９の方法を含む。
番号付き実施形態３１は、リン酸化されたタウの検出に基づいて、個体におけるアルツハイマー病を立証するステップをさらに含む、番号付き実施形態１から３０の方法を含む。
番号付き実施形態３２は、リン酸化されたタウの検出に基づいて、アルツハイマー病の発症について個体の予後予測を立証するステップをさらに含む、番号付き実施形態１から３１の方法を含む。
番号付き実施形態３３は、個体の年齢、遺伝子型、またはバイオマーカーの発現をさらに決定する、番号付き実施形態３２の方法を含む。
番号付き実施形態３４は、バイオマーカーが、Ａβ４２、Ａβ４０、Ａβ３８、ＢＡＣＥ１、ｈＦＡＢＰ、ＴＲＥＭ２、ＹＫＬ－４０、ＩＰ－１０、ニューログラニン、ＳＮＡＰ－２５、シナプトタグミン、アルファ－シヌクレイン、ＴＤＰ－４３、フェリチン、ＶＩＬＩＰ－１、ＮｆＬ、ＧＦＡＰ、およびそれらの組合せからなる群から選択される、番号付き実施形態３３の方法を含む。
番号付き実施形態３５は、リン酸化されたタウを検出するのに、少なくとも約８０％の特異度を有する、番号付き実施形態１から３４の方法を含む。
番号付き実施形態３６は、リン酸化されたタウを検出するのに、少なくとも約８５％の特異度を有する、番号付き実施形態１から３４の方法を含む。
番号付き実施形態３７は、リン酸化されたタウを検出するのに、少なくとも約９０％の特異度を有する、番号付き実施形態１から３４の方法を含む。
番号付き実施形態３８は、リン酸化されたタウを検出するのに、少なくとも約８０％の感度を有する、番号付き実施形態１から３７の方法を含む。
番号付き実施形態３９は、リン酸化されたタウを検出するのに、少なくとも約８５％の感度を有する、番号付き実施形態１から３７の方法を含む。
番号付き実施形態４０は、リン酸化されたタウを検出するのに、少なくとも約９０％の感度を有する、番号付き実施形態１から３７の方法を含む。
番号付き実施形態４１は、少なくとも約１．０ピコグラム／ミリリットル（ｐｇ／ｍＬ）の検出限界で、試料中のリン酸化されたタウを検出することが可能である、番号付き実施形態１から４０の方法を含む。
番号付き実施形態４２は、少なくとも約１．５ピコグラム／ミリリットル（ｐｇ／ｍＬ）の検出限界で、試料中のリン酸化されたタウを検出することが可能である、番号付き実施形態１から４０の方法を含む。
番号付き実施形態４３は、少なくとも約５ピコグラム／ミリリットル（ｐｇ／ｍＬ）の検出限界で、試料中のリン酸化されたタウを検出することが可能である、番号付き実施形態１から４０の方法を含む。
番号付き実施形態４４は、ｉ）可変重鎖（ＶＨ）ドメインを含む重鎖およびｉｉ）可変軽鎖（ＶＬ）ドメインを含む軽鎖を含む抗タウ抗体であって、ＶＨドメインが、配列番号１～５から選択される配列を含むＨＣＤＲ１配列、配列番号６～９から選択される配列を含むＨＣＤＲ２配列および配列番号１０～１３から選択される配列を含むＨＣＤＲ３配列を含み、ＶＬドメインが、配列番号１４～１９から選択される配列を含むＬＣＤＲ１配列、配列番号２０～２３から選択される配列を含むＬＣＤＲ２配列および配列番号２４～２９から選択される配列を含むＬＣＤＲ３配列を含む、抗タウ抗体を含む。
番号付き実施形態４５は、ＨＣＤＲ１配列が配列番号１を含み、ＨＣＤＲ２配列が配列番号６を含み、ＨＣＤＲ３配列が配列番号１０を含み、ＬＣＤＲ１配列が配列番号１４を含み、ＬＣＤＲ２配列が配列番号２０を含み、ＬＣＤＲ３配列が配列番号２４を含む、番号付き実施形態４４の抗タウ抗体を含む。
番号付き実施形態４６は、ＨＣＤＲ１配列が配列番号２を含み、ＨＣＤＲ２配列が配列番号７を含み、ＨＣＤＲ３配列が配列番号１１を含み、ＬＣＤＲ１配列が配列番号１５を含み、ＬＣＤＲ２配列が配列番号２１を含み、ＬＣＤＲ３配列が配列番号２５を含む、番号付き実施形態４４の抗タウ抗体を含む。
番号付き実施形態４７は、ＨＣＤＲ１配列が配列番号２を含み、ＨＣＤＲ２配列が配列番号７を含み、ＨＣＤＲ３配列が配列番号１１を含み、ＬＣＤＲ１配列が配列番号１６を含み、ＬＣＤＲ２配列が配列番号２２を含み、ＬＣＤＲ３配列が配列番号２６を含む、番号付き実施形態４４の抗タウ抗体を含む。
番号付き実施形態４８は、ＨＣＤＲ１配列が配列番号３を含み、ＨＣＤＲ２配列が配列番号８を含み、ＨＣＤＲ３配列が配列番号１０を含み、ＬＣＤＲ１配列が配列番号１７を含み、ＬＣＤＲ２配列が配列番号２０を含み、ＬＣＤＲ３配列が配列番号２７を含む、番号付き実施形態４４の抗タウ抗体を含む。
番号付き実施形態４９は、ＨＣＤＲ１配列が配列番号４を含み、ＨＣＤＲ２配列が配列番号７を含み、ＨＣＤＲ３配列が配列番号１２を含み、ＬＣＤＲ１配列が配列番号１８を含み、ＬＣＤＲ２配列が配列番号２３を含み、ＬＣＤＲ３配列が配列番号２８を含む、番号付き実施形態４４の抗タウ抗体を含む。
番号付き実施形態５０は、ＨＣＤＲ１配列が配列番号５を含み、ＨＣＤＲ２配列が配列番号９を含み、ＨＣＤＲ３配列が配列番号１３を含み、ＬＣＤＲ１配列が配列番号１９を含み、ＬＣＤＲ２配列が配列番号２１を含み、ＬＣＤＲ３配列が配列番号２９を含む、番号付き実施形態４４の抗タウ抗体を含む。
番号付き実施形態５１は、ＶＨドメインが、配列番号３０～３４から選択される配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％の配列同一性を含む、番号付き実施形態４４の抗タウ抗体を含む。
番号付き実施形態５２は、ＶＬドメインが、配列番号３５～４０から選択される配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％の配列同一性を含む、番号付き実施形態４４の抗タウ抗体を含む。
番号付き実施形態５３は、キメラ抗体またはその抗原結合性断片である、番号付き実施形態４４から５２の抗タウ抗体を含む。
番号付き実施形態５４は、ＩｇＧ－ｓｃＦｖ、ナノボディ、ＢｉＴＥ、ダイアボディ、ＤＡＲＴ、ＴａｎｄＡｂ、ｓｃダイアボディ、ｓｃダイアボディ－ＣＨ３、トリプルボディ、ミニ－抗体、ミニボディ、ＴｒｉＢｉミニボディ、ｓｃＦｖ－ＣＨ３ ＫＩＨ、Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃ ＫＩＨ、Ｆａｂ－ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ－ＣＨ－ＣＬ－ｓｃＦｖ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ’）３、Ｆ（ａｂ’）２－ｓｃＦｖ２、ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ－ＫＩＨ、Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃ、四価ＨＣＡｂ、ｓｃダイアボディ－Ｆｃ、ダイアボディ－Ｆｃ、タンデムｓｃＦｖ－Ｆｃまたはイントラボディを含む、番号付き実施形態４４から５３の抗タウ抗体を含む。
番号付き実施形態５５は、ＩｇＧ１抗体である、番号付き実施形態４４から５４の抗タウ抗体を含む。
番号付き実施形態５６は、ＩｇＧ２抗体である、番号付き実施形態４４から５５の抗タウ抗体を含む。
番号付き実施形態５７は、ＩｇＧ４抗体である、番号付き実施形態４４から５６の抗タウ抗体を含む。
番号付き実施形態５８は、軽鎖がカッパ鎖である、番号付き実施形態４４から５７の抗タウ抗体を含む。
番号付き実施形態５９は、約１００ｐＭ～約３ｎＭの、ヒトタウに対する結合親和性を有する、番号付き実施形態４４から５８の抗タウ抗体を含む。
番号付き実施形態６０は、配列番号５２～５６から選択される配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％の配列同一性を含む核酸によってコードされるＶＨドメインを含む、番号付き実施形態４４から５９の抗タウ抗体を含む。
番号付き実施形態６１は、配列番号５７～６２から選択される配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％の配列同一性を含む核酸によってコードされるＶＬドメインを含む、番号付き実施形態４４から６０の抗タウ抗体を含む。
番号付き実施形態６２は、配列番号５２～５６から選択される配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％の配列同一性を含む核酸によってコードされるＶＨドメインおよび配列番号５７～６２から選択される配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％の配列同一性を含む核酸によってコードされるＶＬドメインを含む、番号付き実施形態４４から６１の抗タウ抗体を含む。
番号付き実施形態６３は、配列番号５２～５６と同一な配列を含む核酸によってコードされるＶＨドメインを含む、番号付き実施形態４４から６２の抗タウ抗体を含む。
番号付き実施形態６４は、配列番号５７～６２と同一な配列を含む核酸によってコードされるＶＬドメインを含む、番号付き実施形態４４から６３の抗タウ抗体を含む。
番号付き実施形態６５は、配列番号５２～５６と同一な配列を含む核酸によってコードされるＶＨドメインおよび配列番号５７～６２と同一な配列を含む核酸によってコードされるＶＬドメインを含む、番号付き実施形態４４から６４の抗タウ抗体を含む。
以下の実施例は、本発明の種々の実施形態を示すことを目的として提供され、いかなる様式でも本発明を限定することを意味しない。本実施例は、本明細書に記載される方法と共に、好ましい実施形態を目下代表し、例示的であり、本発明の範囲に対する限定としては解釈されない。特許請求の範囲によって定義される本発明の趣旨内に包含される、その中での変化および他の使用は、当業者に想起される。
（実施例１）
タウ抗体スクリーニング
リン酸化されたタウを検出するタウ抗体は、製造業者の使用説明書に従って２－ステップまたは３－ステッププロトコールアッセイを使用するＳｉｍｏａ（登録商標）ビーズアッセイでアッセイした。図１を参照されたい。
試験した抗体は、抗体１、抗体２、抗体３、抗体４、抗体５および抗体６であった。捕捉結果は、図２Ａ～２Ｄで見ることができる。図２Ａは、全ての捕捉抗体をタウ－１２検出子（Ｎ末端においてタウを検出する）に対して試験した２－ステッププロトコールアッセイからのデータである。データは、全ての捕捉が、抗体６で見られた改善された感度と類似の結果を有したことを実証している。図２Ｂは、全ての捕捉抗体がＨＴ７－ＢＴ２検出子（中央ドメイン領域においてタウを検出する）に対して試験した２－ステッププロトコールアッセイからのデータである。両方のビオチン化抗体を使用した。データは、タウ－１２検出子と比較して、背景における約１０倍の増加を示す。いずれの捕捉についても、１０００ｐｇ／ｍＬではシグナルは検出されなかった。図２Ｃは、全ての捕捉抗体をタウ－１２検出子に対して試験した３－ステッププロトコールアッセイからのデータである。データは、２－ステッププロトコール、および抗体６で見られた改善された感度と比較して、低減された感度を実証している。図２Ｄは、全ての捕捉抗体をＨＴ７－ＢＴ２検出子に対して試験した３－ステッププロトコールアッセイからのデータである。両方のビオチン化抗体を使用した。データは、タウ－１２検出子と比較して、背景における約１０倍の増加を示す。これらの結果に基づいて、２－ステッププロトコールを次いで、感度についてさらに最適化した。
（実施例２）
タウ抗体の薬物動態
抗体を、薬物動態学的プロファイルについて試験した。
抗体についての抗原情報は、表１０で見られる。
抗体を生成し精製した。抗体を、標準的な間接的ＥＬＩＳＡプロトコールを使用してアッセイした。簡潔に述べると、配列番号７４～８１に対応するペプチド抗原を、ＰＢＳ中で１ｕｇ／ｍｌに希釈し、Ｇｒｅｉｎｅｒ Ｂｉｏ Ｏｎｅ Ｍｉｃｒｏｌｏｎ ９６ウェルプレート上にプレートした。ペプチド抗原は、製造業者Ａｂｃａｍが産生した。ＷＺＮ－１ＡおよびＷＺＮ－１Ｂは、標的として機能した。ＷＺＮ－１Ｃ、ＷＺＮ－１Ｄ、ＷＺＮ－１Ｅ、ＷＺＮ－１Ｆ、ＷＺＮ－１ＧおよびＷＺＮ－１Ｈは、陰性対照として機能した。ペプチド抗原配列中、リン酸化された残基は、リン酸化されたスレオニンについては（ｐＴ）で、またはリン酸化されたセリンについては（ｐＳ）で示される。ＰＢＳ ｐＨ７．４中１％のＢＳＡでブロッキングした後、抗体を、１ｕｇ／ｍｌの初期濃度で、１：４連続希釈した。インキュベーション後、未結合の抗体を、１×ＴＢＳＴで洗浄して除き、ＨＲＰ標識ヤギ抗ウサギ二次抗体を、製造業者の使用説明書に従って適用した。引き続いて、未結合の二次抗体を、１×ＴＢＳＴで洗浄して除き、３，３’５，５’－テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）を、室温で５分間適用し、プレートを６５０ｎｍで読み取った。データは図３で見られる。図３は、変動するペプチド濃度に対する異なるモノクローナル抗体のスクリーニングデータを示す。
（実施例３）
免疫組織化学のためのタウ抗体
本明細書に記載されるタウ抗体を、免疫組織化学アッセイで試験した。
簡潔に述べると、全ての抗体を、ある範囲の濃度（０．０１～３．００ｕｇ／ｍｌ）を使用して最適化し、Ｌｅｉｃａ Ｂｏｎｄ ＲＸ自動化ＩＨＣプラットフォームを使用して染色した：ＥＲ１抗原賦活化（クエン酸ナトリウム、ｐＨ６）、１００℃で２０分間；一次抗体、ＲＴで１５分間；ＩＶＤグレードのＬｅｉｃａ Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｒｅｆｉｎｅ ＨＲＰ検出、室温で８分間；ＤＡＢ色素原、室温で１０分間、最後に、ヘマトキシリン対比染色、室温で５分間。基本的ＩＨＣ染色をパスした抗体を、アルカリホスファターゼ（ＡＰ）処置（２００Ｕ／ｍｌ、３７℃で６０分間）後にＩＨＣ染色を受けるように進めた。ビヒクルのみ対照（ＡＰを含有しない緩衝液）もまた使用した。陽性抗原対照組織は、ＦＦＰＥ正常ヒト大脳皮質、およびアルツハイマー患者由来の大脳皮質であった。陰性抗原対照組織は、ＦＦＰＥ正常ヒト肝臓、骨格筋および心筋であった。全ての組織を、組織マイクロアレイへと順に並べて、ＩＨＣ染色プロセスを簡素化した。陰性試薬（検出系のみ）対照を使用したところ、陰性であることが示された。試験抗体と共に染色したベンチマーク抗体は、タウに対するウサギモノクローナル［ＥＰＲ２２５２４－９５］（ａｂ２５４２５６、Ａｂｃａｍ ｐｌｃ）およびタウ（ホスホＳ２１４）に対するウサギモノクローナル［ＥＰＲ１８８４（２）］（ａｂ１７０８９２、Ａｂｃａｍ ｐｌｃ）であった。
ベンチマーク抗体は、抗体が、陰性対照組織における陰性染色および陽性対照組織における陽性染色を示したことを実証した（データ示さず）。タウ抗体についてのデータは、図４Ａ～４Ｇ（抗体６）、図５Ａ～５Ｇ（抗体５）および図６Ａ～６Ｇ（抗体２）で見られる。抗体５および抗体６は、陰性染色が、正常心臓、正常肝臓および正常骨格筋および正常大脳皮質を含んだ陰性対照組織において観察され、陽性染色が、アルツハイマー大脳皮質を含んだ陽性対照組織において観察されたという点で、ベンチマーク抗体と類似のデータを実証した。抗体１～４は、ベンチマーク抗体と類似のデータを示さなかった。
（実施例４）
タウ抗体を使用するタウペプチドの検出
リン酸化されたタウを検出する本明細書に記載されるタウ抗体を、ＥＬＩＳＡアッセイで試験した。タウ抗体を、間接的ＥＬＩＳＡによって、ｐタウ２１７反応性について最初に試験した。図７は、利用した間接的ＥＬＩＳＡアッセイ形式を示す図を示す。簡潔に述べると、ストレプトアビジンビーズをプレートに結合させ、ビオチン化ペプチドを、ビオチン－ストレプトアビジン結合を可能にする条件下で、プレートに添加した。ビオチン化ペプチドは、タウの一部分を含み、２１７位においてリン酸化されたスレオニン残基（ｐＴ２１７）を有する合成ペプチドであった。これは、標的ペプチドであった。ビオチン－ストレプトアビジン複合体の形成による、プレートへの合成ペプチドの結合の後、タウ抗体を、抗体－標的ペプチド結合を可能にする条件下で、プレートに添加した。結合後、プレートを洗浄して、あらゆる未結合の抗体を除去し、次いで、プレートに、二次抗体、またはタウ抗体が由来する種に対するトレーサー抗体（ペルオキシダーゼにコンジュゲートしたヤギ抗マウス抗体またはペルオキシダーゼにコンジュゲートしたロバ抗ウサギ抗体のいずれか）を添加した。結合後、プレートを洗浄して、あらゆる未結合のトレーサー抗体を除去し、次に、プレートに、ＴＭＢ ＥＬＩＳＡペルオキシダーゼ発色基質（３，３’，５，５’－テトラメチルベンジジン）を添加して、間接的ＥＬＩＳＡ実験における抗体反応性を可視化した。抗体試料結合を、ＥＬＩＳＡマイクロプレートリーダーを使用して定量化した。
図７に示されるように、５つの抗体を、この間接的ＥＬＩＳＡ技法を使用して、リン酸化されたタウを検出する能力について試験した。ＩＢＡ４９３ ｍＡｂは、スレオニン残基２１７においてリン酸化されたタウ（ｐタウ２１７）に結合することが可能なウサギ抗タウ抗体（Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ）に対応する。ＰＴ３は、マウス抗ホスホ（Ｔ２１２／Ｔ２１７）タウ選択的抗体（Ｊａｎｓｓｅｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ Ｉｎｃ．）に対応する。３０Ｈ１０Ｌ２は、本明細書に記載される抗体２に対応する。７１Ｈ１Ｌ２は、本明細書に記載される抗体６に対応する。６２Ｈ１０Ｌ７は、本明細書に記載される抗体５に対応する。５つ全ての抗体を、以下の濃度で、２つの別々のＥＬＩＳＡ機器中で、ｐタウ２１７に対する反応性についてアッセイした：プレート１つにつき１０－２、１０－１、１０－０、１０１、１０２、１０３および１０４ｎｇ／ｍＬ。Ｂｉｏ－ｐｔ６５５（ホスホＴ２１７）およびＢｉｏ－ｐｔ６６０（ホスホＴ２１７）グラフでわかるように、ＩＢＡ４９３ ｍＡｂおよびＰＴ３は共に、ｐタウ２１７に対する、ロバストな濃度依存的レベルの反応性を実証した。抗体２は、プレート１つにつき１０４ｎｇ／ｍＬで明らかになった、ｐタウ２１７に対するより控えめな濃度依存的レベルの反応性を実証した。抗体５および抗体６は、これらのアッセイにおいて、ｐタウ２１７に対する反応性を実証しなかった。ホスファターゼ処置したｐタウに対する、５つの試験抗体を使用するこのＥＬＩＳＡアッセイの結果を示す図７のグラフは、リン酸化されたタウを検出する際の、抗体ＩＢＡ４９３ ｍＡｂ、ＰＴ３および抗体２の特異度を実証した。
リン酸化されたタウを検出する本明細書に記載されるタウ抗体を、Ｓｉｍｏａ（登録商標）ベースのアッセイで試験した。図８～２４は、本明細書に記載される抗体に対するタウ反応性についての高感度の試験のために設計されたＳｉｍｏａ（登録商標）アッセイの結果を示す。一部の態様では、Ｓｉｍｏａ（登録商標）ベースのアッセイは、間接的ＥＬＩＳＡアッセイにおける同じ分析物の検出と比較した場合、所与の分析物を検出するにあたりおよそ１０００倍高い感度であり得る。Ｓｉｍｏａ（登録商標）ベースのアッセイのこの上昇した感度は、伝統的なアッセイ、例えば、間接的ＥＬＩＳＡを使用して検出可能なシグナルを生成することが以前にはできなかったバイオマーカーの開発および使用を可能にする。従来のイムノアッセイ、例えば、間接的ＥＬＩＳＡと比較した場合のＳｉｍｏａ（登録商標）ベースのアッセイの上昇した感度は、Ｓｉｍｏａ（登録商標）法は、単一の標的分子を検出することが可能であるが、従来のイムノアッセイが、典型的には、光学シグナルが検出できる前に、大きい反応体積および数百万のフルオロフォア、または発色基質と反応した数百万の抗体コンジュゲート酵素を必要とするという事実に起因する。Ｓｉｍｏａ（登録商標）ベースのアッセイについて、平均酵素／ビーズ（ＡＥＢ）は、生シグナル出力を示す。
図８では、本明細書に記載される、ｐタウ２１７を検出することが可能な抗体２を、Ｓｉｍｏａ（登録商標）ベースのアッセイにおいて使用して、個体に由来する血漿試料１つ当たりの分析物のレベルを検出した。シグナル－対－ノイズ（Ｓ／Ｎ）比を、各試料についてＳｉｍｏａ（登録商標）によって決定し、グラフにプロットした。１２０個の血漿試料を、個体から取得し、アッセイした。グラフ化したＳ／Ｎ比は、１つを除き、試験した全ての試料が、予期された濃度範囲内のシグナルを生じたことを示した。血漿試料を１：３希釈し、次いで再度アッセイした場合、１２０個の試料のうちの３つのみが、ブランク対照の測定値を下回る結果を生じ、５つの試料のみが、検出限界（ＬＯＤ）であると決定された１．５のＳ／Ｎ測定値を記録した。図８では、アッセイした１２０個の血漿試料の各々を用いて計算を行って、各試料について変動係数（ＣＶ％）を決定し、結果を、測定された濃度に対してグラフ化した。１２０個の試料のうちの１０個は、２０よりも大きいＣＶ％を生じ、この分析から、推定された分析的な定量化下限（ＬＬＯＱ）は、０．０８ｐｇ／ｍＬであると決定された。このＬＬＯＱ値は、許容可能なレベルの精度で定量的に決定され得る最も低い量の分析物（Ｔ２１７においてリン酸化されたタウ）を示す。図８中のこれらの結果は、抗体２を使用してＴ２１７においてリン酸化されたタウを検出するＳｉｍｏａ（登録商標）法の感度を示した。
図９では、較正曲線を、Ｓｉｍｏａ（登録商標）ｐタウ－２１７アッセイについて生成し、抗体２を使用する４つのプレートおよびＡＤｘ Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ抗体ＡＤｘ２０４を使用する４つのプレートへと分離した６８個のＣＳＦ試料および１２０個の血漿試料を使用してグラフ化した［ＡＥＢ 対 ｌｏｇ（ＣＡＬ）ｐｇ／ｍＬ］。別々の機器で実施したこのアッセイからの別のグラフでは、対数スケール上にＡＥＢをプロットした［ＡＥＢ 対 ｌｏｇ（ＣＡＬ）ｐｇ／ｍＬ］は、データのフィットが、試料を測定する場合に正確な分析物定量化計算を可能にできることを実証した。
図１０では、３８個の対になったＣＳＦおよびＥＤＴＡ血漿試料を、抗体２を使用するＳｉｍｏａ（登録商標）ｐタウ－２１７アッセイを用いて測定した。このアッセイは、ＡＬＺｐａｔｈ Ｄｘとも呼ばれる。結果をグラフ化し、試料を、それらの臨床診断（非ＡＤ、不確定またはＡＤ）で示した。これらの結果およびその統計分析は、抗体２を使用するＳｉｍｏａ（登録商標）ｐタウ－２１７アッセイを用いて測定した場合、ＣＳＦ ｐタウレベルと血漿ｐタウレベルとの間での強い相関を示した（非ＡＤとＡＤとの間で、約０．７のＲ値および両側Ｔ検定についてのＰ値＜０．０００１）。
図１１では、４２個のＣＳＦ試料を、抗体２を使用するＳｉｍｏａ（登録商標）ｐタウ－２１７アッセイおよびＱｕａｎｔｅｒｉｘ（登録商標）からのｐタウ－１８１抗体（Ｑｕａｎｔｅｒｉｘ（登録商標）Ｃｏｒｐ．、商品番号１０３７１４）を使用するＳｉｍｏａ（登録商標）ｐタウ－１８１アッセイを用いて測定し、互いに対してプロットした。これは、抗体２を使用するＳｉｍｏａ（登録商標）ｐタウ－２１７アッセイが、ＣＳＦにおいて検出されたＡＤに関与する分析物（ｐタウ－１８１）との予期された関連性を示したことを実証した。統計分析は、約０．８のＲ値および両側Ｔ検定についてのＰ値＜０．０００１を示した。
図１２では、４２個のＣＳＦ試料を、抗体２を使用するＳｉｍｏａ（登録商標）ｐタウ－２１７アッセイおよびＩｎｎｏｔｅｓｔ ｐタウ－１８１抗体を使用するＳｉｍｏａ（登録商標）ｐタウアッセイを用いて測定し、互いに対してプロットした。これは、抗体２を使用するＳｉｍｏａ（登録商標）ｐタウ－２１７アッセイが、ＣＳＦにおいて検出されたＡＤに関与する分析物（ｐタウ）との予期された関連性を示したことを実証した。統計分析は、約０．７７のＲ値および両側Ｔ検定についてのＰ値＜０．０００１を示した。
図１３では、４２個のＣＳＦ試料を、捕捉抗体としての抗体２、検出子としてのＡＤｘ２０４抗体およびキャリブレーターとしてのペプチドを使用して、Ｓｉｍｏａ（登録商標）ＨＤ－Ｘアッセイを用いて測定した。これは、公知のＡＤバイオマーカーを使用するＳｉｍｏａ（登録商標）アッセイが、予期された関連性を示したことを実証した。統計分析は、約０．９のＲ値および両側Ｔ検定についてのＰ値＜０．０００１を示した。
図１４では、ＣＳＦ試料および血漿試料を、抗体２を使用するＳｉｍｏａ（登録商標）ｐタウ－２１７アッセイを用いて測定し、別々のグラフでグラフ化した。ＡＤの臨床診断、またはＡＤ診断なしの対照を、各試料についての分類器として使用した。グラフ化した結果の分析は、ＣＳＦ試料および血漿試料の両方について、臨床的ＡＤ診断を有する個体に由来する試料 対 対照に由来する試料間で、有意差を示した。曲線下面積（ＡＵＣ）計算は、ＣＳＦ試料については０．９４、血漿試料については０．８６であった。これらの結果は、抗体２を使用するＳｉｍｏａ（登録商標）ｐタウ－２１７アッセイが、ＣＳＦおよび血漿中のＡＤ例を識別することができたことを示した。
図１５では、品質管理として機能する、高いｐタウレベルを有する４つのＥＤＴＡ血漿試料（ＱＣ＿Ｌ１、ＱＣ＿Ｌ２、ＱＣ＿ＭおよびＱＣ＿Ｈで表示される）を、抗体２を使用するＳｉｍｏａ（登録商標）ｐタウ－２１７アッセイを用いて二連の試験で測定し、ｐタウレベルを計算した。反復試験からの結果をプロットすることで、抗体２を使用するＳｉｍｏａ（登録商標）ｐタウ－２１７アッセイの精度および再現性が実証された。
図１６では、図１５からの対照試料およびさらなる測定された試料を、抗体２を使用するＳｉｍｏａ（登録商標）ｐタウ－２１７アッセイを用いて測定し、２つの別々の実験でプロットして、精度プロファイルを生成した。精度プロファイルは、測定された試料濃度と、４つのＱＣ試料の実行間ＣＶ％とに基づく。この実験から、このアッセイにおけるｐタウ－２１７の機能的ＬＬＯＱは、０．２６ｐｇ／ｍＬであると決定された。
図１７では、並行性を、抗体２を使用するＳｉｍｏａ（登録商標）ｐタウ－２１７アッセイで評価した。並行性の決定は、シグナルが特異的であるかどうかをそれが示すという点でも重要である。並行性は、高い内因性分析物濃度を含有する実際の試料が、希釈後に標準曲線においてアッセイにおける同じ程度の検出を提供するかどうかを決定する。これは、内因性分析物および標準または較正分析物に対する抗体結合親和性における差異を示し得る。これは、組換え標準が内因性分析物の自然な認識と並行することを確実にし得る。この実験では、比較的高い濃度の検出されたｐタウ－２１７を有する、各々異なるドナー由来の４つの血漿試料、およびスパイクした希釈緩衝液（試料５）を、３×の希釈で開始して、５つのステップで２の係数で希釈した。濃度は、４つ全ての血漿試料について、希釈係数１２×以降、ＬＬＯＤ下に低下した。ｌｏｇ（測定されたｐｇ／ｍＬ） 対 ｌｏｇ［希釈係数（ＤＦ）］のグラフにおいて、血漿測定値 対 スパイク測定値は、種々の希釈に沿った検出における線形性を実証した。４つの血漿試料のうちの３つは、並行性の許容される範囲内に入ると決定され、試料４は、許容される範囲のすぐ外側に入った。並行性の許容される範囲は、＜１５％である。これらの結果は、血漿試料に対する、抗体２を使用するＳｉｍｏａ（登録商標）ｐタウ－２１７アッセイが、種々の濃度にわたってｐタウ－２１７レベルの一貫した正確な計算を生じることを実証し、したがって、バイオマーカーアッセイとしてのその有用性を実証した。
図１８～１９では、抗体２を使用するＳｉｍｏａ（登録商標）ｐタウ－２１７アッセイを使用する希釈線形性を実施して、約定量化上限（ＵＬＯＱ）のスパイク濃度を有する試料が、信頼性のあるアッセイ結果をなおも生じつつ、作業範囲内の濃度に希釈され得ることを実証した。図１８では、３つのスパイクした試料（ｓ１、ｓ２およびｓ３）および較正試料をアッセイし、ｌｏｇ（測定されたｐｇ／ｍＬ） 対 ｌｏｇ（ＤＦ）としてプロットして、希釈線形性を決定した。図１９では、３つのスパイクした試料（ｓ１、ｓ２およびｓ３）および較正試料をアッセイし、ｌｏｇ（測定されたｐｇ／ｍＬ） 対 ｌｏｇ（ＤＦ）としてプロットして、希釈線形性を決定し、最も高いスパイクポイントは、５０ｐｇ／ｍＬの較正範囲の外側であったので、ｓ１、ｓ２およびｓ３から除外した。
図２０では、抗体２を使用するＳｉｍｏａ（登録商標）ｐタウ－２１７アッセイを使用して、物忘れクリニックコホートから取得した試料を評価した。血漿試料を測定し、計算されたｐタウ２１７濃度についてグラフ化した。ＡＤの臨床診断を、分類器として使用した。ＡＵＣを、抗体２を使用するＳｉｍｏａ（登録商標）ｐタウ－２１７アッセイを用いてこのコホート内のＡＤ＋をＡＤ－から区別する際の成功を示す０．９１６で計算した。図２０ではまた、受信者動作特性（ＲＯＣ）曲線をプロットして、この二項分類器（ＡＤ＋またはＡＤ－）システムの診断能力を示したが、それは、分類器間の弁別閾値を変動させることが可能だからである。
図２１～２２では、抗体２を使用するＳｉｍｏａ（登録商標）ｐタウ－２１７アッセイの臨床的性能を、抗体Ｐ－タウ１８１ － Ｑｕａｎｔｅｒｉｘ（登録商標）を使用するＳｉｍｏａ（登録商標）ｐタウ－１８１アッセイと比較した。図２１では、抗体２は、ＡＤ認知症個体 対 対照から取得したアッセイした血漿試料を区別することができた（抗体２について１．３ｅ－１２のＰ値）。図２２では、市販のＰ－タウ１８１ － Ｑｕａｎｔｅｒｉｘ（登録商標）Ｓｉｍｏａ（登録商標）アッセイ（Ｑｕａｎｔｅｒｉｘ（登録商標）Ｃｏｒｐ．、商品番号１０３７１４）もまた、ＡＤ認知症個体 対 対照から取得したアッセイした血漿試料を区別することができた（９．６ｅ－０８のＰ値）。図２１～２２からのデータのために試料が由来した個体からのデータは、図２２に列挙される。
図２３では、精度プロットを、Ｐ－タウ２１７抗体２およびＰ－タウ１８１ － Ｑｕａｎｔｅｒｉｘ（登録商標）抗体（Ｑｕａｎｔｅｒｉｘ（登録商標）Ｃｏｒｐ．、商品番号１０３７１４）を使用するＳｉｍｏａ（登録商標）アッセイについて生成した。計算されたＬＬＯＤは、それぞれ０．５５ｐｇ／ｍＬおよび０．２４ｐｇ／ｍＬであった。濃度は逆算せず、したがって、ＬＬＯＤ値は逆算しなかった。
図２４では、ＲＯＣ曲線を、Ｐ－タウ１８１ － Ｑｕａｎｔｅｒｉｘ（登録商標）抗体（Ｑｕａｎｔｅｒｉｘ（登録商標）Ｃｏｒｐ．、商品番号１０３７１４）およびＰ－タウ２１７抗体２についてプロットした。データの分析は、Ｐ－タウ２１７抗体２が、ＡＤ認知症を対照から識別する際に、Ｐ－タウ１８１ － Ｑｕａｎｔｅｒｉｘ（登録商標）抗体を使用するＳｉｍｏａ（登録商標）アッセイと比較して優れた感度および特異度を示したことを示した。このＳｉｍｏａ（登録商標）法におけるＡＤ認知症についての抗体２の診断的正確さは、血漿試料に対して試験した場合、９２．５％である。このＳｉｍｏａ（登録商標）法におけるＡＤ認知症についての抗体２の診断的特異度は、血漿試料に対して試験した場合、８５％である。
図２５では、種々のタンパク質ドメインの相対位置と、本明細書で開示される方法を使用してリン酸化ステータスについてアッセイされ得るスレオニン残基の位置とを示す、タウポリペプチドの概略図が示される。タウのＰ２ドメイン内のｐＴ２１７の位置が示される。ｐＴ１８１は、Ｐ１ドメイン内に存在し、ｐＴ２３１は、Ｐ２ドメインとＲ１ドメインとの間の境界線付近に存在する。
図２６では、種々のタウ抗体を、間接的ＥＬＩＳＡを使用してアッセイし、非リン酸化Ｔ２１７（Ｂｉｏ－ｐｔ６５４）および全長タウ（タウ４４１）を用いた、タウ断片に対する反応性の程度をグラフ化した。ＩＢＡ４９３ ｍＡＢおよびＰＴ３は、Ｂｉｏ－ｐｔ６５４およびタウ４４１の両方に対する濃度依存的反応性を示した。本明細書に記載される抗体２、５および６は、このアッセイにおいて、Ｂｉｏ－ｐｔ６５４に対してもタウ４４１に対しても反応性を示さず、抗体２、５および６についての、ｐタウ－２１７検出における精度および特異度を実証した。
図２７では、種々のタウ抗体を、間接的ＥＬＩＳＡを使用してアッセイし、リン酸化されたＴ１８１（Ｂｉｏ－ｐｔ１２６）およびリン酸化されたＴ２３１（Ｂｉｏ－ｐｔ１４６）を用いた、タウ断片に対する反応性の程度をグラフ化した。ＩＢＡ４９３ ｍＡＢおよび本明細書に記載される抗体２は、Ｂｉｏ－ｐｔ１２６に対する濃度依存的反応性を示した。ＩＢＡ４９３ ｍＡＢは、Ｂｉｏ－ｐｔ１４６に対する濃度依存的反応性を示す、試験した抗体のうちで唯一の抗体であった。これは、ＩＢＡ４９３ ｍＡＢ、ＰＴ３、および本明細書に記載される抗体２が各々、間接的ＥＬＩＳＡを介して各抗体が相互作用した分析物がどれかに基づいて、区別可能であったことを実証している。ＩＢＡ４９３ ｍＡＢは、ｐタウ－２１７、非ホスホＴ２１７、全長タウ、ｐタウ－１８１およびｐタウ－２３１と相互作用する。ＰＴ３は、ｐタウ－２１７、非ホスホＴ２１７および全長タウと相互作用する。抗体２は、ｐタウ－２１７およびｐタウ－１８１と相互作用する。ＩＢＡ４９３ ｍＡＢの非ホスホＴ２１７との相互作用が、ＰＴ３の非ホスホＴ２１７との相互作用よりもかなり低いことも示された。
図２８では、特定のタウペプチドの捕捉を検出するために抗体２を使用するアッセイの図が示される。このアッセイでは、抗体２は、プレートに結合され、プレートからの試料ウェルは、特異的抗体－リガンド相互作用の形成を促す条件下で、種々のビオチン化ペプチドに供される。次いで、試料を洗浄して、過剰な未結合のビオチン化ペプチドを除去する。次いで、ペルオキシダーゼにコンジュゲートしたストレプトアビジンビーズを試料に添加して、ペプチド結合した抗体上にビオチン－ストレプトアビジン複合体を形成させた。次いで、ＴＭＢｒｅｄ基質を添加し、試料を、ＥＬＩＳＡプレートリーダーを使用して比色分析呈色について測定する。結果をグラフ化したところ、試験した種々のｐタウ－２１７、ｐタウ－２３１およびｐタウ－１８１ペプチドのうち、Ａｄｘ－ｐｔ６５５が、特異的な用量依存的反応性を生じた。これらの結果は、ｐタウ（すなわち、スレオニン２１７においてリン酸化されたタウ）の特異的特色に対する抗体２の特異性を示している。同じタウペプチドを使用して同じ条件下で間接的ＥＬＩＳＡによって試験した抗体５および抗体６は、試験したタウペプチドに対する特異的な用量依存的反応性を生じなかった。
本明細書に記載される抗体１、抗体２、抗体３、抗体４、抗体５および抗体５に対応する種々のｐタウ－２１７抗体を、Ｍｅｓｏｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ技術プラットフォーム上で、プレート上に直接コーティングされた、またはストレプトアビジンコーティングされたプレート上の、捕捉抗体としても評価した。このシステムは、非放射性の電気化学発光標識を使用し、それにより、伝統的なＥＬＩＳＡアッセイを超える顕著な利点を付与する。これらの利点には、検出のより低い背景シグナル、改善された感度およびダイナミックレンジが含まれる。
図２９では、ウエスタンブロットを使用して、ＡＤ患者および対照対象由来の脳溶解物試料への種々の抗体の結合を評価した。示される５つのウエスタンブロットでは、試料を、図２９に示されるのと同じ試料キーに従ってロードする。タンパク質ラダーを、レーン１および１０において泳動した。０．０５ｕｇの量でロードしたホスファターゼ処置したｐタウを、レーン２において泳動した。０．０５ｕｇの量でロードした全長タウ（タウ４１１）を、レーン３において泳動した。レーン４～６は、５の希釈係数で、異なる対照対象由来の試料を含有する。レーン７～９は、５の希釈係数で、異なるＡＤ対象由来の試料を含有する。これらの結果は、ＩＢＡ３９４ ｍＡｂおよびＰＴ３が共に、対照試料およびＡＤ試料中のタウの異なる長さのアイソフォームに結合してそれを免疫沈降させ、ＡＤ試料において有意により多くのタウを免疫沈降させたが、合成全長タウまたはホスファターゼ処置したｐタウとは相互作用を示さなかったことを示した。抗体２（３０Ｈ２Ｌ１０）は、ＡＤ試料中のタウの異なる長さのアイソフォームに結合してそれを免疫沈降させたが、対照個体由来の試料中のタウのかなりの量を免疫沈降させなかった。抗体５および抗体６は、このアッセイにおいて、検出可能なウエスタンブロットシグナルを生じなかった。
本開示の好ましい実施形態が、本明細書に示され記載されてきたが、かかる実施形態が例のみとして提供されていることは、当業者に明らかである。多数のバリエーション、変化および置換が、本開示から逸脱することなしに、当業者にすぐに想起される。本明細書に記載される本開示の実施形態に対する種々の代替法が、本開示を実施する際に使用され得ることを理解すべきである。以下の特許請求の範囲が本開示の範囲を定義すること、ならびにこれらの特許請求の範囲およびそれらの等価物の範囲内の方法および構造がそれによってカバーされることが意図される。
本発明は、例えば、以下の項目を提供する。
（項目１）
個体由来の試料中のリン酸化されたタウを検出するための方法であって、可変ドメイン重鎖領域（ＶＨ）および可変ドメイン軽鎖領域（ＶＬ）を含む抗体または抗体断片を使用して、前記試料に対してイムノアッセイを実施するステップを含み、前記ＶＨが、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つに示される配列と少なくとも約９０％同一なアミノ酸配列を含み、前記ＶＬが、配列番号３５～４０のうちのいずれか１つに示される配列と少なくとも約９０％同一なアミノ酸配列を含む、方法。
（項目２）
前記リン酸化されたタウが、ｐタウ－１８１、ｐタウ－２１２、ｐタウ－２１７、ｐタウ－２３１、ｐタウ－２１４およびｐタウ－２２０からなる群から選択される、項目１に記載の方法。
（項目３）
前記リン酸化されたタウがｐタウ－２１７である、項目１から２のいずれか一項に記載の方法。
（項目４）
前記リン酸化されたタウがｐタウ－２３１である、項目１から２のいずれか一項に記載の方法。
（項目５）
ｐタウ－２１７およびｐタウ－２３１を検出する、項目２に記載の方法。
（項目６）
ｐタウ－２１２およびｐタウ－２１７を検出する、項目２に記載の方法。
（項目７）
ｐタウ－２１２およびｐタウ－２３１を検出する、項目２に記載の方法。
（項目８）
ｐタウ－１８１およびｐタウ－２１７を検出する、項目２に記載の方法。
（項目９）
ｐタウ－１８１およびｐタウ－２３１を検出する、項目２に記載の方法。
（項目１０）
ｐタウ－１８１、ｐタウ－２１７およびｐタウ－２３１を検出する、項目２に記載の方法。
（項目１１）
ｐタウ－２１２、ｐタウ－２１７およびｐタウ－２３１を検出する、項目２に記載の方法。
（項目１２）
血漿試料および血清試料からなる群から選択される試料中のｐタウ－２１７およびｐタウ－２３１を検出する、項目５に記載の方法。
（項目１３）
血漿試料および血清試料からなる群から選択される試料中のｐタウ－２１２およびｐタウ－２１７を検出する、項目６に記載の方法。
（項目１４）
血漿試料および血清試料からなる群から選択される試料中のｐタウ－２１２およびｐタウ－２３１を検出する、項目７に記載の方法。
（項目１５）
血漿試料および血清試料からなる群から選択される試料中のｐタウ－１８１およびｐタウ－２１７を検出する、項目８に記載の方法。
（項目１６）
血漿試料および血清試料からなる群から選択される試料中のｐタウ－１８１およびｐタウ－２３１を検出する、項目９に記載の方法。
（項目１７）
血漿試料および血清試料からなる群から選択される試料中のｐタウ－１８１、ｐタウ－２１７およびｐタウ－２３１を検出する、項目１０に記載の方法。
（項目１８）
血漿試料および血清試料からなる群から選択される試料中のｐタウ－２１２、ｐタウ－２１７およびｐタウ－２３１を検出する、項目１１に記載の方法。
（項目１９）
前記ＶＨが、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つに従うアミノ酸配列を含む、項目１から１８のいずれか一項に記載の方法。
（項目２０）
前記ＶＬが、配列番号３５～４０のうちのいずれか１つに従うアミノ酸配列を含む、項目１から１９のいずれか一項に記載の方法。
（項目２１）
前記ＶＨが、配列番号３０～３４のうちのいずれか１つに従うアミノ酸配列を含み、前記ＶＬが、配列番号３５～４０のうちのいずれか１つに従うアミノ酸配列を含む、項目１から２０のいずれか一項に記載の方法。
（項目２２）
前記ＶＨが、配列番号３０と少なくとも約９０％同一なアミノ酸配列を含み、前記ＶＬが、配列番号３５と少なくとも約９０％同一なアミノ酸配列を含む、項目１から２１のいずれか一項に記載の方法。
（項目２３）
前記ＶＨが、配列番号３１と少なくとも約９０％同一なアミノ酸配列を含み、前記ＶＬが、配列番号３６と少なくとも約９０％同一なアミノ酸配列を含む、項目１から２１のいずれか一項に記載の方法。
（項目２４）
前記ＶＨが、配列番号３１と少なくとも約９０％同一なアミノ酸配列を含み、前記ＶＬが、配列番号３７と少なくとも約９０％同一なアミノ酸配列を含む、項目１から２１のいずれか一項に記載の方法。
（項目２５）
前記ＶＨが、配列番号３２と少なくとも約９０％同一なアミノ酸配列を含み、前記ＶＬが、配列番号３８と少なくとも約９０％同一なアミノ酸配列を含む、項目１から２１のいずれか一項に記載の方法。
（項目２６）
前記ＶＨが、配列番号３３と少なくとも約９０％同一なアミノ酸配列を含み、前記ＶＬが、配列番号３９と少なくとも約９０％同一なアミノ酸配列を含む、項目１から２１のいずれか一項に記載の方法。
（項目２７）
前記ＶＨが、配列番号３４と少なくとも約９０％同一なアミノ酸配列を含み、前記ＶＬが、配列番号４０と少なくとも約９０％同一なアミノ酸配列を含む、項目１から２１のいずれか一項に記載の方法。
（項目２８）
前記抗体または抗体断片が、配列番号４１～５１のうちのいずれか１つと少なくとも約９０％同一なアミノ酸配列を含む、項目１から２７のいずれか一項に記載の方法。
（項目２９）
前記試料に対してアッセイを実施して、Ａβ４２、Ａβ４０、Ａβ３８、ＢＡＣＥ１、ｈＦＡＢＰ、ＴＲＥＭ２、ＹＫＬ－４０、ＩＰ－１０、ニューログラニン、ＳＮＡＰ－２５、シナプトタグミン、アルファ－シヌクレイン、ＴＤＰ－４３、フェリチン、ＶＩＬＩＰ－１、ＮｆＬ、ＧＦＡＰ、およびそれらの組合せからなる群から選択されるバイオマーカーのレベルを決定するステップをさらに含む、項目１から２８のいずれか一項に記載の方法。
（項目３０）
前記試料が、血液試料、血漿試料、血清試料および脳脊髄液（ＣＳＦ）試料からなる群から選択される、項目１から２９のいずれか一項に記載の方法。
（項目３１）
リン酸化されたタウの検出に基づいて、前記個体におけるアルツハイマー病を立証するステップをさらに含む、項目１から３０のいずれか一項に記載の方法。
（項目３２）
リン酸化されたタウの検出に基づいて、アルツハイマー病の発症について前記個体の予後予測を立証するステップをさらに含む、項目１から３１のいずれか一項に記載の方法。
（項目３３）
前記個体の年齢、遺伝子型、またはバイオマーカーの発現をさらに決定する、項目３２に記載の方法。
（項目３４）
前記バイオマーカーが、Ａβ４２、Ａβ４０、Ａβ３８、ＢＡＣＥ１、ｈＦＡＢＰ、ＴＲＥＭ２、ＹＫＬ－４０、ＩＰ－１０、ニューログラニン、ＳＮＡＰ－２５、シナプトタグミン、アルファ－シヌクレイン、ＴＤＰ－４３、フェリチン、ＶＩＬＩＰ－１、ＮｆＬ、ＧＦＡＰ、およびそれらの組合せからなる群から選択される、項目３３に記載の方法。
（項目３５）
リン酸化されたタウを検出するのに、少なくとも約８０％の特異度を有する、項目１から３４のいずれか一項に記載の方法。
（項目３６）
リン酸化されたタウを検出するのに、少なくとも約８５％の特異度を有する、項目１から３４のいずれか一項に記載の方法。
（項目３７）
リン酸化されたタウを検出するのに、少なくとも約９０％の特異度を有する、項目１から３４のいずれか一項に記載の方法。
（項目３８）
リン酸化されたタウを検出するのに、少なくとも約８０％の感度を有する、項目１から３７のいずれか一項に記載の方法。
（項目３９）
リン酸化されたタウを検出するのに、少なくとも約８５％の感度を有する、項目１から３７のいずれか一項に記載の方法。
（項目４０）
リン酸化されたタウを検出するのに、少なくとも約９０％の感度を有する、項目１から３７のいずれか一項に記載の方法。
（項目４１）
少なくとも約１．０ピコグラム／ミリリットル（ｐｇ／ｍＬ）の検出限界で、前記試料中のリン酸化されたタウを検出することが可能である、項目１から４０のいずれか一項に記載の方法。
（項目４２）
少なくとも約１．５ピコグラム／ミリリットル（ｐｇ／ｍＬ）の検出限界で、前記試料中のリン酸化されたタウを検出することが可能である、項目１から４０のいずれか一項に記載の方法。
（項目４３）
少なくとも約５ピコグラム／ミリリットル（ｐｇ／ｍＬ）の検出限界で、前記試料中のリン酸化されたタウを検出することが可能である、項目１から４０のいずれか一項に記載の方法。
（項目４４）
ｉ）可変重鎖（ＶＨ）ドメインを含む重鎖およびｉｉ）可変軽鎖（ＶＬ）ドメインを含む軽鎖を含む抗タウ抗体であって、前記ＶＨドメインが、配列番号１～５から選択される配列を含むＨＣＤＲ１配列、配列番号６～９から選択される配列を含むＨＣＤＲ２配列および配列番号１０～１３から選択される配列を含むＨＣＤＲ３配列を含み、ＶＬドメインが、配列番号１４～１９から選択される配列を含むＬＣＤＲ１配列、配列番号２０～２３から選択される配列を含むＬＣＤＲ２配列および配列番号２４～２９から選択される配列を含むＬＣＤＲ３配列を含む、抗タウ抗体。
（項目４５）
前記ＨＣＤＲ１配列が配列番号１を含み、ＨＣＤＲ２配列が配列番号６を含み、ＨＣＤＲ３配列が配列番号１０を含み、ＬＣＤＲ１配列が配列番号１４を含み、ＬＣＤＲ２配列が配列番号２０を含み、ＬＣＤＲ３配列が配列番号２４を含む、項目４４に記載の抗タウ抗体。
（項目４６）
前記ＨＣＤＲ１配列が配列番号２を含み、ＨＣＤＲ２配列が配列番号７を含み、ＨＣＤＲ３配列が配列番号１１を含み、ＬＣＤＲ１配列が配列番号１５を含み、ＬＣＤＲ２配列が配列番号２１を含み、ＬＣＤＲ３配列が配列番号２５を含む、項目４４に記載の抗タウ抗体。
（項目４７）
前記ＨＣＤＲ１配列が配列番号２を含み、ＨＣＤＲ２配列が配列番号７を含み、ＨＣＤＲ３配列が配列番号１１を含み、ＬＣＤＲ１配列が配列番号１６を含み、ＬＣＤＲ２配列が配列番号２２を含み、ＬＣＤＲ３配列が配列番号２６を含む、項目４４に記載の抗タウ抗体。
（項目４８）
前記ＨＣＤＲ１配列が配列番号３を含み、ＨＣＤＲ２配列が配列番号８を含み、ＨＣＤＲ３配列が配列番号１０を含み、ＬＣＤＲ１配列が配列番号１７を含み、ＬＣＤＲ２配列が配列番号２０を含み、ＬＣＤＲ３配列が配列番号２７を含む、項目４４に記載の抗タウ抗体。
（項目４９）
前記ＨＣＤＲ１配列が配列番号４を含み、ＨＣＤＲ２配列が配列番号７を含み、ＨＣＤＲ３配列が配列番号１２を含み、ＬＣＤＲ１配列が配列番号１８を含み、ＬＣＤＲ２配列が配列番号２３を含み、ＬＣＤＲ３配列が配列番号２８を含む、項目４４に記載の抗タウ抗体。
（項目５０）
前記ＨＣＤＲ１配列が配列番号５を含み、ＨＣＤＲ２配列が配列番号９を含み、ＨＣＤＲ３配列が配列番号１３を含み、ＬＣＤＲ１配列が配列番号１９を含み、ＬＣＤＲ２配列が配列番号２１を含み、ＬＣＤＲ３配列が配列番号２９を含む、項目４４に記載の抗タウ抗体。
（項目５１）
前記ＶＨドメインが、配列番号３０～３４から選択される配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％の配列同一性を含む、項目４４に記載の抗タウ抗体。
（項目５２）
前記ＶＬドメインが、配列番号３５～４０から選択される配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％の配列同一性を含む、項目４４に記載の抗タウ抗体。
（項目５３）
キメラ抗体またはその抗原結合性断片である、項目４４から５２のいずれか一項に記載の抗タウ抗体。
（項目５４）
ＩｇＧ－ｓｃＦｖ、ナノボディ、ＢｉＴＥ、ダイアボディ、ＤＡＲＴ、ＴａｎｄＡｂ、ｓｃダイアボディ、ｓｃダイアボディ－ＣＨ３、トリプルボディ、ミニ－抗体、ミニボディ、ＴｒｉＢｉミニボディ、ｓｃＦｖ－ＣＨ３ ＫＩＨ、Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃ ＫＩＨ、Ｆａｂ－ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ－ＣＨ－ＣＬ－ｓｃＦｖ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ’）３、Ｆ（ａｂ’）２－ｓｃＦｖ２、ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ－ＫＩＨ、Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃ、四価ＨＣＡｂ、ｓｃダイアボディ－Ｆｃ、ダイアボディ－Ｆｃ、タンデムｓｃＦｖ－Ｆｃまたはイントラボディを含む、項目４４から５３のいずれか一項に記載の抗タウ抗体。
（項目５５）
ＩｇＧ１抗体である、項目４４から５４のいずれか一項に記載の抗タウ抗体。
（項目５６）
ＩｇＧ２抗体である、項目４４から５５のいずれか一項に記載の抗タウ抗体。
（項目５７）
ＩｇＧ４抗体である、項目４４から５６のいずれか一項に記載の抗タウ抗体。
（項目５８）
前記軽鎖がカッパ鎖である、項目４４から５７のいずれか一項に記載の抗タウ抗体。
（項目５９）
約１００ｐＭ～約３ｎＭの、ヒトタウに対する結合親和性を有する、項目４４から５８のいずれか一項に記載の抗タウ抗体。
（項目６０）
配列番号５２～５６から選択される配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％の配列同一性を含む核酸によってコードされるＶＨドメインを含む、項目４４から５９のいずれか一項に記載の抗タウ抗体。
（項目６１）
配列番号５７～６２から選択される配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％の配列同一性を含む核酸によってコードされるＶＬドメインを含む、項目４４から６０のいずれか一項に記載の抗タウ抗体。
（項目６２）
配列番号５２～５６から選択される配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％の配列同一性を含む核酸によってコードされるＶＨドメインおよび配列番号５７～６２から選択される配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％の配列同一性を含む核酸によってコードされるＶＬドメインを含む、項目４４から６１のいずれか一項に記載の抗タウ抗体。
（項目６３）
配列番号５２～５６と同一な配列を含む核酸によってコードされるＶＨドメインを含む、項目４４から６２のいずれか一項に記載の抗タウ抗体。
（項目６４）
配列番号５７～６２と同一な配列を含む核酸によってコードされるＶＬドメインを含む、項目４４から６３のいずれか一項に記載の抗タウ抗体。
（項目６５）
配列番号５２～５６と同一な配列を含む核酸によってコードされるＶＨドメインおよび配列番号５７～６２と同一な配列を含む核酸によってコードされるＶＬドメインを含む、項目４４から６４のいずれか一項に記載の抗タウ抗体。

Claims (14)

  1. 抗タウ抗体またはその抗原結合性断片であって、
    可変重鎖（ＶＨ）ドメインを含む重鎖および可変軽鎖（ＶＬ）ドメインを含む軽鎖を含み、
    前記ＶＨドメインが、配列番号２を含むＨＣＤＲ１配列、配列番号７を含むＨＣＤＲ２配列、および配列番号１１を含むＨＣＤＲ３配列を含み；
    前記ＶＬドメインが、配列番号１５を含むＬＣＤＲ１配列、配列番号２１を含むＬＣＤＲ２配列、および配列番号２５を含むＬＣＤＲ３配列を含む、抗タウ抗体またはその抗原結合性断片。
  2. 前記ＶＨドメインが、配列番号３１を含み、かつ前記ＶＬドメインが、配列番号３６を含む、請求項１に記載の抗タウ抗体またはその抗原結合性断片。
  3. 前記重鎖が、配列番号４３を含み、かつ前記軽鎖が、配列番号４４を含む、請求項１に記載の抗タウ抗体またはその抗原結合性断片。
  4. 前記抗タウ抗体またはその抗原結合性断片が、タウタンパク質に特異的に結合する、請求項１に記載の抗タウ抗体またはその抗原結合性断片。
  5. 前記抗タウ抗体またはその抗原結合性断片が、ヒトタウタンパク質に特異的に結合する、請求項１に記載の抗タウ抗体またはその抗原結合性断片。
  6. 前記抗タウ抗体またはその抗原結合性断片が、リン酸化されたタウタンパク質に特異的に結合する、請求項１に記載の抗タウ抗体またはその抗原結合性断片。
  7. 前記リン酸化されたタウタンパク質が、ｐタウ－１８１、ｐタウ－２１７、またはその両方である、請求項６に記載の抗タウ抗体またはその抗原結合性断片。
  8. 前記抗タウ抗体が、モノクローナル抗体である、請求項１に記載の抗タウ抗体またはその抗原結合性断片。
  9. 前記抗タウ抗体が、ウサギモノクローナル抗体である、請求項１に記載の抗タウ抗体またはその抗原結合性断片。
  10. 前記抗タウ抗体が、キメラ抗体またはその抗原結合性断片である、請求項１に記載の抗タウ抗体またはその抗原結合性断片。
  11. 前記抗タウ抗体が、ＩｇＧ１定常領域を含む、請求項１に記載の抗タウ抗体またはその抗原結合性断片。
  12. 前記抗タウ抗体が、ＩｇＧ２定常領域を含む、請求項１に記載の抗タウ抗体またはその抗原結合性断片。
  13. 前記抗タウ抗体が、ＩｇＧ４定常領域を含む、請求項１に記載の抗タウ抗体またはその抗原結合性断片。
  14. 前記抗タウ抗体が、ＩｇＧ－ｓｃＦｖ、ナノボディ、ＢｉＴＥ、ダイアボディ、ＤＡＲＴ、ＴａｎｄＡｂ、ｓｃダイアボディ、ｓｃダイアボディ－ＣＨ３、トリプルボディ、ミニ－抗体、ミニボディ、ＴｒｉＢｉミニボディ、ｓｃＦｖ－ＣＨ３ ＫＩＨ、Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃ ＫＩＨ、Ｆａｂ－ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ－ＣＨ－ＣＬ－ｓｃＦｖ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ’）３、Ｆ（ａｂ’）２－ｓｃＦｖ２、ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ－ＫＩＨ、Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃ、四価ＨＣＡｂ、ｓｃダイアボディ－Ｆｃ、ダイアボディ－Ｆｃ、タンデムｓｃＦｖ－Ｆｃまたはイントラボディを含む、請求項１に記載の抗タウ抗体またはその抗原結合性断片。
JP2025115822A 2021-09-09 2025-07-09 ホスホ－タウ抗体および使用の方法 Active JP7828500B2 (ja)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US202163242437P 2021-09-09 2021-09-09
US63/242,437 2021-09-09
PCT/US2022/042963 WO2023039107A2 (en) 2021-09-09 2022-09-08 Phospho-tau antibodies and methods of use
JP2024515564A JP7836885B2 (ja) 2021-09-09 2022-09-08 ホスホ－タウ抗体および使用の方法

Related Parent Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2024515564A Division JP7836885B2 (ja) 2021-09-09 2022-09-08 ホスホ－タウ抗体および使用の方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
JP2025137567A JP2025137567A (ja) 2025-09-19
JP7828500B2 true JP7828500B2 (ja) 2026-03-11

Family

ID=85507770

Family Applications (3)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2024515564A Active JP7836885B2 (ja) 2021-09-09 2022-09-08 ホスホ－タウ抗体および使用の方法
JP2025115822A Active JP7828500B2 (ja) 2021-09-09 2025-07-09 ホスホ－タウ抗体および使用の方法
JP2025239499A Pending JP2026034506A (ja) 2021-09-09 2025-12-08 ホスホ－タウ抗体および使用の方法

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2024515564A Active JP7836885B2 (ja) 2021-09-09 2022-09-08 ホスホ－タウ抗体および使用の方法

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2025239499A Pending JP2026034506A (ja) 2021-09-09 2025-12-08 ホスホ－タウ抗体および使用の方法

Country Status (7)

Country Link
US (3) US12276671B2 (ja)
EP (1) EP4399524A4 (ja)
JP (3) JP7836885B2 (ja)
KR (1) KR102888596B1 (ja)
CN (1) CN118235043A (ja)
CA (1) CA3231228A1 (ja)
WO (1) WO2023039107A2 (ja)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2023039107A2 (en) 2021-09-09 2023-03-16 Alzpath, Inc. Phospho-tau antibodies and methods of use
KR20250173598A (ko) * 2023-03-16 2025-12-10 알즈패스, 인크. 신경퇴행성 질환의 진단 및 치료 방법
CN119470917A (zh) * 2024-11-14 2025-02-18 苏州智研医康医疗科技有限公司 一种检测人血中阿尔茨海默病相关蛋白的试剂盒及检测方法

Family Cites Families (31)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4694778A (en) 1984-05-04 1987-09-22 Anicon, Inc. Chemical vapor deposition wafer boat
US20040219509A1 (en) 2001-08-20 2004-11-04 Biosite, Inc. Diagnostic markers of stroke and cerebral injury and methods of use thereof
US7604956B2 (en) 2004-03-01 2009-10-20 Biotraces, Inc. Supersensitive immunoassays
ES2367311T3 (es) 2004-04-15 2011-11-02 University Of Florida Research Foundation, Inc. Productos de degradación proteolítica de map-2 como biomarcadores de diagnóstico para las lesiones neurales.
US7914734B2 (en) 2007-12-19 2011-03-29 Singulex, Inc. Scanning analyzer for single molecule detection and methods of use
US20110177509A1 (en) 2008-07-23 2011-07-21 The Washington University Risk factors and a therapeutic target for neurodegenerative disorders
WO2010144358A1 (en) 2009-06-08 2010-12-16 Singulex, Inc. Highly sensitive biomarker panels
JP2013518927A (ja) * 2010-02-09 2013-05-23 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニー 免疫アッセイ標準物質およびアッセイ内の校正標準物質を用いる臨床バイオマーカーの測定
WO2012142301A2 (en) 2011-04-12 2012-10-18 Quanterix Corporation Methods of determining a treatment protocol for and/or a prognosis of a patients recovery from a brain injury
WO2012142300A2 (en) 2011-04-12 2012-10-18 Quanterix Corporation Methods of determining a treatment protocol for and/or a prognosis of a patient's recovery from a brain injury resulting from a hypoxic event
GB201112056D0 (en) 2011-07-14 2011-08-31 Univ Leuven Kath Antibodies
KR101981351B1 (ko) 2011-10-07 2019-09-02 에이씨 이뮨 에스.에이. 타우를 인식하는 포스포특이적 항체
MX350311B (es) 2011-12-20 2017-09-01 Janssen Biotech Inc Anticuerpos anti-phf-tau y sus usos.
NZ630542A (en) * 2012-08-16 2017-06-30 Ipierian Inc Methods of treating a tauopathy
AR100978A1 (es) * 2014-06-26 2016-11-16 Hoffmann La Roche LANZADERAS CEREBRALES DE ANTICUERPO HUMANIZADO ANTI-Tau(pS422) Y USOS DE LAS MISMAS
NZ775762A (en) * 2015-06-05 2025-02-28 Genentech Inc Anti-tau antibodies and methods of use
GB201518675D0 (en) * 2015-10-21 2015-12-02 Cellcap Technologies Ltd Detection of structural forms of proteins
US20180080945A1 (en) * 2016-09-20 2018-03-22 Nanosomix, Inc. Biomarkers and diagnostic methods for alzheimer's disease and other neurodegenerative disorders
KR102048987B1 (ko) * 2017-02-22 2019-11-27 한국과학기술연구원 신경퇴행성 장애의 진단을 위한 정보 제공 방법
JP7029718B2 (ja) * 2017-07-31 2022-03-04 国立研究開発法人量子科学技術研究開発機構 リン酸化タウタンパク質の測定方法
WO2019085804A1 (en) 2017-11-02 2019-05-09 Peking University Methods and use for detecting and inhibiting cell-free mg53
EP3706795A4 (en) 2017-11-09 2021-10-13 Pinteon Therapeutics Inc. METHODS AND COMPOSITIONS FOR GENERATING AND USING HUMANIZED CONFORMATION SPECIFIC PHOSPHORYLATED TAU ANTIBODIES
US20200377609A1 (en) 2018-02-14 2020-12-03 Kite Pharma, Inc. Anti-idiotypic antibodies directed to the antigen-binding portion of an bcma-binding molecule
WO2020105700A1 (ja) 2018-11-22 2020-05-28 富士レビオ株式会社 抗体コンジュゲート
KR102905634B1 (ko) 2019-05-31 2025-12-30 일라이 릴리 앤드 캄파니 인간 타우를 표적화하는 화합물 및 방법
WO2021178545A1 (en) 2020-03-03 2021-09-10 Seattle Children's Hospital D/B/A Seattle Children's Research Institute Proteomic screening for diseases
CN112505322A (zh) * 2020-10-16 2021-03-16 威海纽普生物技术有限公司 阿尔茨海默病标志物p-Tau217检测试剂盒及其制造方法
US20240003918A1 (en) 2020-11-30 2024-01-04 Enigma Biointelligence, Inc. Non-invasive assessment of alzheimer's disease
TWI843040B (zh) 2021-01-11 2024-05-21 美商美國禮來大藥廠 抗N3pGlu類澱粉β抗體及其用途
WO2023039107A2 (en) 2021-09-09 2023-03-16 Alzpath, Inc. Phospho-tau antibodies and methods of use
KR20250173598A (ko) * 2023-03-16 2025-12-10 알즈패스, 인크. 신경퇴행성 질환의 진단 및 치료 방법

Non-Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Adam M. BRICKMAN et al.，"Plasma p‐tau181, p‐tau217, and other blood‐based Alzheimer's disease biomarkers in a multi‐eth，Alzheimer's & Dementia，2021年02月13日，Vol. 17, No. 8，p.1353-1364，DOI: 10.1002/alz.12301
Cristina D’ABRAMO et al.，"Significance of Blood and Cerebrospinal Fluid Biomarkers for Alzheimer’s Disease: Sensitivity, Specificity and Potential for Clinical Use"，Journal of Personalized Medicine，2020年09月08日，Vol. 10, No. 3，p.116，DOI: 10.3390/jpm10030116
Ebru ERCAN-HERBST et al.，"A post-translational modification signature defines changes in soluble tau correlating with oligomerization in early stage Alzheimer's disease brain"，Acta Neuropathologica Communications，2019年12月，Vol. 7, No. 1，192，DOI: 10.1186/s40478-019-0823-2
Gallen TRIANA-BALTZER et al.，"Development and Validation of a High Sensitivity Assay for Measuring p217 + tau in Cerebrospinal Fluid"，Journal of Alzheimer's Disease，2020年10月13日，Vol. 77, No. 4，p.1417-1430，DOI: 10.3233/JAD-200463
Joelle ROSSEELS et al.，"Tau Monoclonal Antibody Generation Based on Humanized Yeast Models"，Journal of Biological Chemistry，2015年02月，Vol. 290, No. 7，p.4059-4074，DOI: 10.1074/jbc.M114.627919
Marc SUAREZ‐CALVET et al.，"Novel tau biomarkers phosphorylated at T181, T217 or T231 rise in the initial stages of the preclinical Alzheimer's continuum when only sublte changes in Aβ pathology are detected，EMBO Molecular Medicine，2020年11月10日，Vol. 12, No. 12，e12921，DOI: 10.15252/emmm.202012921
Sebastian PALMQVIST et al.，"Cerebrospinal fluid and plasma biomarker trajectories with increasing amyloid deposition in Alzheimer's disease"，EMBO Molecular Medicine，2019年11月11日，Vol. 11, No. 12，e11170，DOI: 10.15252/emmm.201911170

Also Published As

Publication number Publication date
US12276671B2 (en) 2025-04-15
EP4399524A4 (en) 2025-10-08
CN118235043A (zh) 2024-06-21
EP4399524A2 (en) 2024-07-17
US12339290B2 (en) 2025-06-24
CA3231228A1 (en) 2023-03-16
US20250277799A1 (en) 2025-09-04
JP2026034506A (ja) 2026-02-27
KR102888596B1 (ko) 2025-11-20
KR20240067082A (ko) 2024-05-16
US20240353428A1 (en) 2024-10-24
US20240360206A1 (en) 2024-10-31
JP2024534348A (ja) 2024-09-20
WO2023039107A2 (en) 2023-03-16
JP7836885B2 (ja) 2026-03-27
JP2025137567A (ja) 2025-09-19
KR20250108128A (ko) 2025-07-15
WO2023039107A3 (en) 2023-10-05

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP7828500B2 (ja) ホスホ－タウ抗体および使用の方法
EP3762414A1 (en) Assays to detect neurodegeneration
CN116348769A (zh) 用于检测tau蛋白病或淀粉样蛋白形成性疾病的基于血液的测定
TW201938584A (zh) 抗pla2-gib抗體及其用途
JP2022058435A (ja) ウイルス抗原の血清学的検出方法
JP7830486B2 (ja) オキシントモジュリン結合分子、及びそれらの使用
JP2026509486A (ja) 神経変性障害を診断および処置する方法
JP7044721B2 (ja) Ｈｃｖコア抗原の迅速な検出のための前処理法
KR102959196B1 (ko) 포스포-타우 항체 및 사용 방법
BR122025017050A2 (pt) Anticorpo anti-tau ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo
HK40112938A (zh) 磷酸化-tau抗体和使用方法
CN120500626A (zh) Hbv诊断、预后和治疗方法及产品
US20250034236A1 (en) Anti-thyroglobulin Antibody, Kit and Use Thereof
JP2021517639A (ja) 補体ｃ３転換酵素のプロテアーゼ活性を測定するためのスループットの高い方法
EA049359B1 (ru) Анализ проб, полученных из крови, для обнаружения таупатии или амилоидогенного заболевания
CN116789817A (zh) Tau重组抗原、靶向Tau蛋白重组抗体与检测Tau蛋白的试剂盒
WO2019079970A1 (zh) 一种治疗性抗体的放行检测方法

Legal Events

Date Code Title Description
A621 Written request for application examination

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621

Effective date: 20250709

A871 Explanation of circumstances concerning accelerated examination

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A871

Effective date: 20250709

A131 Notification of reasons for refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131

Effective date: 20251002

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20251223

TRDD Decision of grant or rejection written
A01 Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01

Effective date: 20260218

A61 First payment of annual fees (during grant procedure)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61

Effective date: 20260227

R150 Certificate of patent or registration of utility model

Ref document number: 7828500

Country of ref document: JP

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150