JP7778570B2 - アジュバントワクチンエマルジョンを噴霧乾燥するための組成物および方法 - Google Patents

アジュバントワクチンエマルジョンを噴霧乾燥するための組成物および方法

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Description

本明細書は、一般に、アジュバントおよび／またはアジュバント／抗原エマルジョンを噴霧乾燥するための乾燥粉末組成物および方法に関する。
パンデミックに備えてワクチンを備蓄すること、および遠隔または発展途上地域へのワクチンの提供は、冷蔵なしでのワクチン製剤化安定性の欠如によって制限される。これは、特に遠隔地域への輸送中の、冷蔵利用可能性の欠如のために、発展途上国へワクチンを提供することを困難にし得る。ワクチンについてのコールドチェーンの要件を排除することは、貯蔵および輸送のコストを大幅に低減し、パンデミックのための備蓄をさらに単純化するであろう。加えて、既存ワクチンは、一般に、対象へのワクチンの投与前に、抗原のアジュバントとの混合を必要とする。投与前に混合を必要としない１バイアルワクチンの提供は、損失のリスクを大幅に低減し、ワクチン接種のプロセスを単純化するであろう。
背景セクションで議論される主題は、単に背景セクションにおけるその言及の結果として先行技術であると想定されるべきではない。同様に、背景セクションにおいて言及されるか、または背景セクションの主題に関連する問題および問題の原因の理解は、先行技術において以前に認識されていたと想定されるべきではない。背景セクションにおける主題は、単に異なるアプローチを表し得、それ自体も発明であり得る。本明細書で引用されるすべての刊行物、特許、および特許出願は、すべての目的のためにその全体が参照により本明細書に組み込まれる。
本発明の一態様は、有効量の抗原、アジュバント、代謝可能な油、および１つ以上の賦形剤を含む、乾燥粉末ワクチン組成物であり、乾燥粉末の粒子サイズは、約１２０μｍ未満の直径を有する。本発明の他の態様は、有効量のアジュバント、代謝可能な油、および１つ以上の賦形剤を含む、乾燥粉末ワクチン組成物であり、乾燥粉末の粒子サイズは、約１２０μｍ未満の直径を有する。いくつかの実施形態において、乾燥粉末ワクチンの粒子は、約２０μｍ未満の直径を有する。いくつかの実施形態において、１つ以上の賦形剤は、トレハロース、ラクトース、ラフィノース、およびラクツロースからなる群から選択される糖である。いくつかの実施形態において、代謝可能な油は、スクアレン、合成スクアレン、ブドウ種子油、ポリプレノール、オリーブ油、または合成イソプレノイドから選択される。いくつかの実施形態において、アジュバントは、ＴＬＲ４アゴニストである。いくつかの実施形態において、組成物は、約８℃～約６０℃の温度で少なくとも１ヶ月間熱安定性である。いくつかの実施形態において、組成物は、少なくとも１２ヶ月を含む、少なくとも６ヶ月を含む、少なくとも３ヶ月間熱安定性である。
いくつかの態様において、組成物は、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＭＰＣ）、１－パルミトイル－２－オレオイル－ｓｎ－グリセロール－３－ホスホコリン（ＰＯＰＣ）、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＯＰＣ）、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）、卵ＰＣ、レシチン、Ｔｗｅｅｎ、またはそれらの組み合わせをさらに含む。いくつかの実施形態において、代謝可能な油は、スクアレンである。いくつかの実施形態において、ＴＬＲ４アゴニストは、ＭＰＬ、３ｄ－ＭＰＬ、または合成ＧＬＡである。いくつかの実施形態において、ＴＬＲ４アゴニストは、ＧＬＡである。いくつかの実施形態において、粒子サイズは、約１２０μｍ未満であり、組成物は、吸入可能である。いくつかの実施形態において、抗原は、ポリペプチド、ポリペプチドをコードする核酸、または病原体である。いくつかの実施形態において、乾燥粉末は、噴霧乾燥によって生成される。
本発明の他の態様は、有効量のアジュバント、代謝可能な油、および１つ以上の賦形剤を含む、吸入可能な乾燥粉末ワクチン組成物を含み、乾燥粉末の粒子サイズは、約１２０μｍ未満の直径を有する。いくつかの実施形態において、吸入可能な乾燥粉末ワクチン組成物は、有効量の抗原、アジュバント、代謝可能な油、および１つ以上の賦形剤を含み、乾燥粉末の粒子サイズは、約２０μｍ未満の直径を有する。いくつかの実施形態において、吸入可能な乾燥粉末ワクチンの粒子は、約１０μｍ未満または１００ｎｍ～３００ｎｍと低い直径を有する。いくつかの実施形態において、組成物は、約８℃～約６０℃の温度で少なくとも１ヶ月間熱安定性である。いくつかの実施形態において、組成物は、ペプチドまたはアミノ酸の群に由来するシェル形成剤を含む。いくつかの実施形態において、シェル形成剤は、ロイシンである。いくつかの実施形態において、組成物は、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＭＰＣ）、１－パルミトイル－２－オレオイル－ｓｎ－グリセロール－３－ホスホコリン（ＰＯＰＣ）、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＯＰＣ）、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）、卵ＰＣ、レシチン、Ｔｗｅｅｎ、またはそれらの組み合わせを含む。
本発明の他の態様は、水中油型エマルジョンを噴霧乾燥して熱安定性乾燥粉末ワクチン組成物を形成するステップを含む、熱安定性乾燥粉末ワクチン組成物を生成するための方法であり、水中油型エマルジョンは、（１）抗原、（２）代謝可能な油、（３）１つ以上の賦形剤、（４）アジュバント、および（５）シェル形成剤を含む。いくつかの実施形態において、方法は、噴霧乾燥ワクチンを、乾燥剤パウチと一緒にダブルヒートシーリングでアルミニウムバッグにパッケージングすることを含む。いくつかの実施形態において、水中油型エマルジョンは、シェル形成剤をさらに含む。いくつかの実施形態において、水中油型エマルジョンは、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＭＰＣ）、１－パルミトイル－２－オレオイル－ｓｎ－グリセロール－３－ホスホコリン（ＰＯＰＣ）、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＯＰＣ）、卵ＰＣ、レシチン、Ｔｗｅｅｎ、またはそれらの組み合わせをさらに含む。いくつかの実施形態において、方法は、噴霧乾燥粉末ワクチンを得るために、所定のプロセスパラメータで微粒化ガスを使用して噴霧乾燥機において組成物を噴霧乾燥することも含む。いくつかの実施形態において、パラメータは、１０ｐｓｉの微粒化ガス圧力、０．６ｍＬ／分の微粒化ガス流量、および２００ＳＬＰＭの乾燥ガス流量を含む。
本発明の他の態様は、熱安定性乾燥粉末ワクチンを乾燥粉末の吸入を介して投与することを含む、熱安定性乾燥粉末治療剤組成物を対象に投与する方法である。
本発明の他の態様は、（１）乾燥粉末ワクチンを水性希釈剤で再構成することと、（２）再構成された乾燥粉末ワクチンを非経口経路を介して投与することと、を含む、熱安定性乾燥粉末ワクチン組成物を対象に投与する方法である。いくつかの実施形態において、熱安定性乾燥粉末ワクチンは、本明細書で提供される組成物のいずれかである。
本発明の他の態様は、熱安定性乾燥粉末治療剤を乾燥粉末の吸入を介して投与することを含む、乾燥粉末治療剤組成物を対象に投与する方法である。方法によって誘発される治療的免疫応答は、癌の治療のためのものであり得る。方法はまた、乾燥粉末治療剤を再構成後に非経口的に投与することを含む。いくつかの実施形態において、乾燥粉末ワクチンは、結核（ＴＢ）、インフルエンザ（流感）、呼吸器合胞体ウイルス感染症（ＲＳＶ）、および肺癌を含むがこれらに限定されない、呼吸成分を有する疾患において治療上の利益を示し得る。いくつかの実施形態において、送達が吸入を介する場合、粒子サイズは、約２０μｍ未満である。いくつかの実施形態において、送達が呼吸経路（鼻または肺など）を介する場合、粒子サイズは、約１２０μｍ未満である。
上記の実施形態のいずれも、単独で、または任意の組み合わせで互いに一緒に使用され得る。本明細書内に包含される発明はまた、この概要において、または要約において、部分的にのみ言及もしくは示唆されるか、またはまったく言及もしくは示唆されない実施形態を含み得る。
以下の図面では、同様の参照番号が同様の要素を参照するために使用される。以下の図は本発明の様々な例を示すが、本発明は図に示される例に限定されない。
図１ａはナノ噴霧乾燥機の機能原理を示す単純化された概略図を示す。 図１ｂは粉末貯蔵中の湿度制御を確実にするためのパッケージングプロトコルについての単純化された概略図を示す。 示された温度で３ヶ月にわたって貯蔵された再構成ＳＤ－ＴＧ粉末（左）および再構成ＳＤ－ＴＧＩ粉末（右）についてのＡ）スクアレン濃度、Ｂ）ナノエマルジョン直径サイズ、およびＣ）ナノエマルジョンの多分散指数を示すプロットを示す。凡例は、粉末についての貯蔵温度を示す。エラーバーは、３つの測定値の標準偏差を示す。略語：ＳＤ－ＴＧ、噴霧乾燥トレハロース＋トリス＋ＧＬＡ－ＳＥ、ＳＤ－ＴＧＩ、噴霧乾燥トレハロース＋トリス＋ＧＬＡ－ＳＥ＋ＩＤ９３、ＧＬＡ、グルコピラノシル脂質アジュバント、ＳＥ、スクアレン水中油型エマルジョン。 ａ）ＳＤ－ＴＧ微粒子、ｂ）ＳＤ－ＴＧＩ微粒子、ｃ）１００ｍｇ／ｍｌ噴霧乾燥トレハロース、ｄ）凍結乾燥ＴＴ（凍結乾燥有力候補）のＳＥＭ画像を示す。尺度は、それぞれの画像上に提供される。略語：ＳＤ－ＴＧ、噴霧乾燥トレハロース＋トリス＋ＧＬＡ－ＳＥ、ＳＤ－ＴＧＩ、噴霧乾燥トレハロース＋トリス＋ＧＬＡ－ＳＥ＋ＩＤ９３、ＧＬＡ、グルコピラノシル脂質アジュバント、ＳＥ、スクアレン水中油型エマルジョン。 内部形態を示すために、ひびの入ったＳＤ－ＴＧ微粒子のＳＥＭ画像を示す。尺度は、それぞれの画像上に提供される。略語：ＳＤ－ＴＧ、噴霧乾燥トレハロース＋トリス＋ＧＬＡ－ＳＥ、ＧＬＡ、グルコピラノシル脂質アジュバント、ＳＥ、スクアレン水中油型エマルジョン。 ａ）加速貯蔵後に試料が外部形態を維持し、ｂ）内部粒子構造が維持されることを示す４０℃で３ヶ月の貯蔵後のＳＤ－ＴＧＩ粉末のＳＥＭ画像を示す。尺度は、それぞれの画像上に提供される。略語：ＳＤ－ＴＧＩ、噴霧乾燥トレハロース＋トリス＋ＧＬＡ－ＳＥ＋ＩＤ９３、ＧＬＡ、グルコピラノシル脂質アジュバント、ＳＥ、スクアレン水中油型エマルジョン。 ａ）加速貯蔵後に試料が外部形態を維持し、ｂ）内部粒子構造が維持されることを示す４０℃で３ヶ月の貯蔵後のＳＤ－ＴＧＩ粉末のＳＥＭ画像を示す。尺度は、それぞれの画像上に提供される。略語：ＳＤ－ＴＧＩ、噴霧乾燥トレハロース＋トリス＋ＧＬＡ－ＳＥ＋ＩＤ９３、ＧＬＡ、グルコピラノシル脂質アジュバント、ＳＥ、スクアレン水中油型エマルジョン ＳＤ－ＴＧ粉末試料の正規化されたラマンスペクトル、ならびに非晶質トレハロース、スクアレン、７．５ｐＨの１Ｍトリス緩衝剤、および結晶トレハロースの参照スペクトルを示す。生の測定されたＳＤ－ＴＧスペクトルから個々の成分の寄与を差し引くことによって得られる、正規化された剰余スペクトルも示される。略語：ＳＤ－ＴＧＩ、噴霧乾燥トレハロース＋トリス＋ＧＬＡ－ＳＥ＋ＩＤ９３、ＧＬＡ、グルコピラノシル脂質アジュバント、ＳＥ、スクアレン水中油型エマルジョン。 ５、２５、および４０℃で３ヶ月の貯蔵後、ならびに時点０で示される、ＳＤ－ＴＧＩ粉末製剤の正規化されたラマンスペクトルを示す。示されるすべての試料は、４６０ｃｍ－１のピークに従って正規化された。時点０で得られるスペクトルから３ヶ月、４０℃スペクトルを差し引いて得られる剰余スペクトルも示される。本質的にまっすぐな残りのスペクトルは、４０℃で３ヶ月間貯蔵されたＳＤ－ＴＧＩ粉末が、安定性研究の開始時と有意に異なる固相を有しないことを示す。 図８は次世代インパクター（ＮＧＩ）の図を示す。示されるバージョンは、Ａｌｂｅｒｔａ Ｉｄｅａｌｉｚｅｄ Ｔｈｒｏａｔと組み合わされており、ヒト喉および肺における沈着をモデル化するために使用することができる。
本発明の様々な実施形態は、本明細書における１つ以上の場所で議論または示唆され得る、先行技術で様々な欠陥によって動機付けられ得るが、本発明の実施形態は、これらの欠陥のいずれにも必ずしも対処しない。言い換えれば、本発明の異なる実施形態は、本明細書において議論され得る異なる欠陥に対処し得る。いくつかの実施形態は、本明細書において議論され得るいくつかの欠陥またはただ１つの欠陥に部分的にのみ対処する場合があり、いくつかの実施形態は、これらの欠陥のいずれにも対処しない場合がある。
一態様において、噴霧乾燥は、抗原もしくはアジュバント、または両方を含有する乾燥粉末ワクチンを生成するために使用される。よって、本発明は、有効量の抗原、アジュバント、代謝可能な油、および１つまたは複数の賦形剤を含む乾燥粉末ワクチン組成物を提供し、乾燥粉末の粒子サイズは、呼吸器送達（例えば、鼻または肺）の場合には、約１２０μｍ未満の直径、または呼吸器送達（例えば、吸入による）の場合には約２０μｍ未満の直径を有する。他の実施形態において、乾燥粉末ワクチンは、抗原を有しない。いくつかの実施形態において、乾燥粉末ワクチンは、アジュバントを有しない。いくつかの実施形態において、乾燥粉末ワクチンは、２つ以上の抗原もしくはアジュバント、または両方を有する。乾燥粉末ワクチンは、製剤化し、噴霧乾燥して、吸入を介した投与を促進する粒子サイズを作製することができる。よって、いくつかの態様において、乾燥粉末ワクチンは、１９μｍ、１８μｍ、１７μｍ、１６μｍ、１５μｍ、１４μｍ、１３μｍ、１２μｍ、１１μｍ、１０μｍ、９μｍ、８μｍ、７μｍ、６μｍ、５μｍ、４μｍ、３μｍ、２μｍ、１μｍ、９００ｎｍ未満、８００ｎｍ未満、７００ｎｍ未満、６００ｎｍ未満、５００ｎｍ未満、４００ｎｍ未満、３００ｎｍ未満、２００ｎｍ未満、および１００ｎｍ未満を含むがこれらに限定されない、約２０μｍ未満の粒子サイズを有する。いくつかの実施形態において、乾燥粉末ワクチンは、１１０μｍ、１００μｍ、９０μｍ、８０μｍ、７０μｍ、６０μｍ、５０μｍ、４０μｍ、３０μｍ、および２０μｍを含むがこれらに限定されない、約１２０μｍ未満の粒子サイズを有する。いくつかの実施形態において、吸入可能な乾燥粉末ワクチンのための製剤はまた、シェル形成剤（例えば、ロイシン）を含む。本発明の他の態様は、熱安定性および／または吸入可能である乾燥粉末ワクチン組成物を作製する方法である。
当業者が理解するように、噴霧乾燥ワクチン、噴霧乾燥アジュバント混合物、噴霧乾燥ワクチン組成物、熱安定性噴霧乾燥ワクチン、乾燥粉末ワクチン、乾燥粉末アジュバント、および乾燥粉末ワクチン組成物という用語は、本明細書において交換可能に使用される。この用語は、一般的には、有効量の抗原、アジュバント、代謝可能な油、および１つ以上の賦形剤を含む、噴霧乾燥粉末を指し、乾燥粉末の粒子サイズは、約５０μｍ未満の直径を有する。いくつかの実施形態において、乾燥粉末の粒子サイズは、約２０μｍ未満の直径を有する。いくつかの実施形態において、乾燥粉末の粒子サイズは、１０μｍ未満、５μｍ未満、４μｍ未満、３μｍ未満、２μｍ未満、１μｍ未満、９００ｎｍ未満、８００ｎｍ未満、７００ｎｍ未満、６００ｎｍ未満、５００ｎｍ未満、４００ｎｍ未満、３００ｎｍ未満、２００ｎｍ未満、および１００ｎｍ未満を含むがこれらに限定されない、１５μｍ未満の直径を有する。ワクチンは、乾燥粉末として（吸入を介して）または再構成後に（例えば、非経口経路を介して）投与することができる。
本明細書で提供されるように、噴霧乾燥ワクチンは、熱安定性である。例えば、組成物は、１０℃、１５℃、２０℃、２５℃、３０℃、３５℃、４０℃、４５℃、５０℃、および５５℃を含むがこれらに限定されない、約８℃～約６０℃で安定である。そのような組成物は、当該技術分野で周知であり、本明細書に記載される、緩衝剤、酸、塩基、糖、希釈剤、防腐剤、シェル形成剤、凍結保存剤などを含む薬学的に許容される賦形剤（担体）などの適切な賦形剤をさらに含む。
ワクチンなどの液体材料の、乾燥粉末への変換は、冷蔵および輸送に関連するコストを低減するであろう。噴霧乾燥は、粉末が特定の特性を有するように操作されることを可能にするため、独特な解決策を提供する。そのようなものとして、本明細書の例において、噴霧乾燥は、水中油型ナノエマルジョンとして製剤化された、アジュバント添加結核ワクチンを、乾燥粉末内にカプセル化する方法として調査された。非凝集性、非晶質微粒子内のアジュバント添加ワクチンのカプセル化の成功は、すべての成分の高い保持率で、１回の反復で達成された。粉末の安定性は、異なる温度で３ヶ月にわたって調査された。結果は、粉末がすべての温度について物理的に安定であったことを示した。再構成された粉末に対する物理化学的分析は、すべての試料についてナノエマルジョンサイズが維持されたが、上昇した温度での貯蔵で小さな抗原およびアジュバントの経時的な損失を示した。これらの概念実証結果は、さらなる製剤開発を介した安定性改善の余地がある、アジュバント添加ワクチンカプセル化の新規方法を示す。噴霧乾燥の使用はまた、吸入可能な送達経路を可能にする。
いくつかの態様において、本発明は、本明細書に記載される噴霧乾燥ワクチン組成物をエマルジョンに再構成し、エマルジョンを対象に投与することを含む、対象における免疫応答を刺激するための方法を提供する。いくつかの実施形態において、エマルジョンは、水中油型エマルジョンである。いくつかの実施形態において、免疫応答は、非特異的免疫応答である。いくつかの実施形態において、免疫応答は、抗原特異的免疫応答である。免疫応答を刺激するための本明細書に記載される方法、または本明細書に記載される再構成された熱安定性噴霧乾燥ワクチン組成物は、単独で、または他の従来の治療方法（例えば、化学療法剤）と組み合わせて使用することができる。別の実施形態において、本発明は、乾燥粉末を（吸入を介して）再構成なしに対象に投与することを含む、対象における免疫応答を刺激するための方法を提供する。
いくつかの態様において、本発明は、癌、自己免疫疾患などの治療のための治療剤を投与するための方法を提供する。方法は、治療量の乾燥粉末組成物を吸入または他の方法を介して肺または呼吸器系に投与することを含み得る。方法は、乾燥粉末組成物を再構成し、次いで再構成された組成物を非経口的に投与することを含み得る。
いくつかの態様において、噴霧乾燥ワクチン組成物が試験され、ナノエマルジョンサイズがすべての試料について維持された。室温で液体である物質のナノエマルジョンがゲル－微粒子に変換され、有意な損失なしに同じ液滴サイズに再構成され得ることは、当該分野において知られていなかったので、これは驚くべき結果であった。以前の試みは、液滴サイズの有意な損失または変化のいずれかをもたらした。
いくつかの実施形態において、本明細書における「約」の値またはパラメータの参照は、その値またはパラメータ自体に向けられる変形を含む（および説明する）。例えば、「約Ｘ」を参照する説明は、「Ｘ」の説明を含む。
定義
本明細書に記載される本発明の態様および実施形態は、態様および実施形態「を含む」、「からなる」、および「から本質的になる」ことを含むことが理解される。
「個体」または「対象」は、哺乳動物、より好ましくはヒトである。哺乳動物には、これらに限定されないが、農場動物、スポーツ動物、ペット（ネコ、イヌ、ウマなど）、霊長類、マウス、およびラットも含まれる。
本明細書および添付の特許請求の範囲で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、文脈が明らかに他のことを示さない限り、複数の参照を含む。
本明細書で使用される場合、「噴霧乾燥エマルジョン」は、「乾燥粉末ワクチン」、「乾燥粉末」、「乾燥粉末アジュバント」、「乾燥粉末組成物」、「噴霧乾燥組成物」、「噴霧乾燥ワクチン」、「粉末」、および「乾燥エマルジョン」と交換可能に使用される。
本明細書で使用される場合、「再構成された」乾燥粉末ワクチンまたはワクチンは、液体を乾燥粉末に添加することを指す。これは、ワクチンを投与するためであってもよく、またはワクチンを試験するためであってもよい。
本明細書で使用される場合、「噴霧乾燥」は、エアロゾル化された溶液液滴の乾燥を通して粉末を生成するプロセスである。
本明細書で使用される賦形剤は、薬理学的に活性な薬物の製造プロセス、または貯蔵もしくは出荷のための充填仕上げプロセスに含まれる、薬理学的に活性な薬物以外の物質を指す。本明細書で使用される「噴霧乾燥賦形剤」または「賦形剤」は、適切な粉末構造の形態または製剤化に寄与する噴霧乾燥プロセスに含まれる薬理学的に活性な薬物以外の物質を指し得る。賦形剤には、増量剤、緩衝剤、乳化剤、または可溶化剤が含まれ得る。
ＧＬＡ－ＳＥは、Ｔｏｌｌ様受容体４アゴニストであるグルコピラノシル脂質アジュバント安定性エマルジョン（ＧＬＡ－ＳＥ）、水中スクアレン型エマルジョン（ＳＥ）に製剤化された合成ＴＬＲ４アゴニストであるグルコピラノシル脂質アジュバント（ＧＬＡ）からなるワクチンアジュバントである。ＧＬＡ－ＳＥは、様々なワクチン抗原に対するＴＨ１およびＩｇＧ２に歪んだ抗体応答の両方を増強する。
ＩＤ９３は、Ｍｔｂタンパク質の異なるファミリーを表す４つの抗原で構成されるサブユニットＴＢワクチン候補である。Ｒｖ１８１３は、低酸素成長下で上方調節され、外膜に局在化されることが予測される保存された仮想タンパク質である。Ｒｖ２６０８（ＰＰＥ４２）は、推定外膜関連ＰＰＥ（Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ（ＰＰＥ）モチーフ含有）タンパク質である。Ｒｖ３６１９（ＥｓｘＶ）およびＲｖ３６２０（ＥｓｘＷ）は、病原性因子のＥＳＡＴ－６ファミリーに属する分泌タンパク質である。４つのＩＤ９３抗原は、Ｍｔｂ曝露個体において認識されることが示されている。
噴霧乾燥は、医薬品、食品、バイオテクノロジー、および他の工業材料合成に使用される、溶液、分散液、およびエマルジョンから定義された粒子サイズを有する粉末を生成するための穏やかな方法である。図１ａは、噴霧乾燥が乾燥ガスを使用して微粒化粒子から溶媒（または水）を急速に蒸発させ、溶液の固体成分（乾燥粉末）のみを残す、典型的な噴霧乾燥技法の図を示す。乾燥媒体は、典型的には、空気であるが、液体が可燃性溶媒である場合、または生成物が酸素感受性である場合、不活性ガス、例えば、窒素を使用することができる。
以前には、噴霧乾燥の制限は、粒子サイズ（最小２マイクロメートル）、収率（最大約７０％）、および試料体積（実験室規模のデバイスについて最小５０ｍｌ）であった。最近、最小粒子サイズは３００ｎｍに低減され、最大９０％の収率が可能であり、試料は１ｍｌまで小さくなり得る。これらの拡張された限界は、スプレーヘッド、加熱システム、および静電粒子捕集器への新しい技術開発により可能である。この新技術で可能な小さな粒子サイズを強調するために、「ナノ」噴霧乾燥として記載されている。しかしながら、生成される最小の粒子は、ナノメートル尺度の超微細粒子ではなく、微細粒子に共通するサブマイクロメートル範囲にある。
一般的な技法
本発明の実施は、他に示されない限り、当該分野の技術内である分子生物学、組換えＤＮＡ、生化学、および化学の従来の技法を使用するであろう。そのような技法は、文献で完全に説明されている。例えば、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，２ｎｄ Ｅｄ．，Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，ｅｄ．，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ：（１９８９）、ＤＮＡ Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ｖｏｌｕｍｅｓ Ｉ ａｎｄ ＩＩ（Ｄ．Ｎ．Ｇｌｏｖｅｒ ｅｄ．，１９８５）、Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｍ．Ｊ．Ｇａｉｔ ｅｄ．，１９８４）、Ｍｕｌｌｉｓ ｅｔ ａｌ．、米国特許第４，６８３，１９５号、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ（Ｂ．Ｄ．Ｈａｍｅｓ＆Ｓ．Ｊ．Ｈｉｇｇｉｎｓ ｅｄｓ．１９８４）、Ｂ．Ｐｅｒｂａｌ，Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ Ｔｏ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ（１９８４）、論文、Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．、Ｎ．Ｙ．）、およびＡｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，Ｍｄ．（１９８９）を参照されたい。
噴霧乾燥アジュバントまたは抗原組成物の特徴
抗原および／またはアジュバントを含む噴霧乾燥組成物が本明細書で提供される。いくつかの実施形態において、噴霧乾燥組成物は、乾燥粉末ワクチン組成物である。乾燥粉末ワクチン組成物は、抗原組成物、アジュバント組成物、および／または抗原／アジュバント（１バイアル）組成物であり得る。本発明は、抗原、アジュバントワクチン組成物を噴霧乾燥および貯蔵、維持、または約８℃～約６０℃の温度に曝露することができ、組成物を再構成形態でまたは吸入を介して乾燥粉末として投与することができることを記載する。さらに、再構成される場合、組成物は、以下の特徴のうちの１つ以上を有し得る：（１）生理学的７．４付近で望ましいｐＨを維持し、（２）凝集をほとんどまたは全く有しない１２０μｍ未満の粒子サイズを維持し、（３）各活性成分（例えば、抗原、アジュバント）の有意な劣化または改変を全く示さず、（４）対象における免疫応答を誘導または刺激するのに適している。
本明細書で提供される噴霧乾燥された（乾燥粉末）ワクチン組成物の熱安定性は、噴霧乾燥された（粉末）状態で、または再構成後に評価することができる。本明細書で提供される噴霧乾燥されたワクチン組成物の熱安定性は、目視観察によって、および／または本明細書で提供される１つ以上のアッセイの補助で評価することができる。これらのアッセイは、噴霧乾燥および再構成後のエマルジョン、抗原、および／またはアジュバントの完全性の推定値を提供することができる。
本明細書に記載される熱安定性アッセイおよび観察は、噴霧乾燥時に、噴霧乾燥の１時間後、噴霧乾燥の６時間後、噴霧乾燥の１２時間後、噴霧乾燥の２４時間後、噴霧乾燥の３６時間後、噴霧乾燥の４８時間後、噴霧乾燥の１週間後、噴霧乾燥の２週間後、噴霧乾燥の１ヶ月後、噴霧乾燥の２ヶ月後、噴霧乾燥の３ヶ月後、噴霧乾燥の４ヶ月後、噴霧乾燥の６ヶ月後、噴霧乾燥の１２ヶ月後、またはそれ以降に実施することができる。アッセイおよび観察を実施する前に、組成物は、約８℃以上、例えば、約２５℃以上、約３７℃以上、または約５０℃以上、または約６０℃の温度で維持、貯蔵、または曝露することができる。
本明細書に記載される熱安定性アッセイおよび観察は、乾燥粉末組成物の再構成時、再構成直後、再構成の１時間後、再構成の６時間後、再構成の１２時間後、再構成の２４時間後、再構成の３６時間後、再構成の４８時間後、または再構成の１週間後に実施することができる。
当業者は、本発明が、先進国または発展途上世界において周囲温度により近付く温度で貯蔵および／または出荷することができる乾燥粉末ワクチン組成物を提供するように設計されることを理解し、したがって、いくつかの実施形態において、噴霧乾燥組成物は、２つ以上の温度または約８℃～約６０℃の温度の組み合わせに維持、貯蔵、または曝露される。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供される乾燥粉末ワクチン組成物の熱安定性は、乾燥粉末としての再構成前に、目視観察によって評価される。他の実施形態において、本明細書で提供される乾燥粉末ワクチン組成物の熱安定性は、１つ以上のアッセイ、例えば、生物物理学的および生化学的アッセイの補助によって再構成後に評価される。
いくつかの実施形態において、乾燥粉末または再構成されたワクチンの粒子サイズが評価される。例えば、動的光散乱（ＤＬＳ）を使用して、エマルジョン粒子サイズを評価することができる。いくつかの実施形態において、これは、例えば、乾燥噴霧前の液体安定エマルジョン状態における、乾燥噴霧前のエマルジョン粒子サイズと比較される。いくつかの実施形態において、エマルジョン粒子サイズは、乾燥噴霧前の粒子サイズと比較されない。本明細書におけるいくつかの実施形態において、粒子サイズは、液体乾燥粉末組成物のＺ平均直径（Ｚ平均）を測定することによって決定される。特定の実施形態において、熱安定性組成物は、約８℃以上の温度で維持、貯蔵、または曝露される噴霧乾燥された組成物の再構成された液体エマルジョンが、約２００ｎｍ未満、約１９０ｎｍ未満、約１８０ｎｍ未満、約１７０ｎｍ未満、約１６０ｎｍ未満、約１５０ｎｍ未満、約１４０ｎｍ未満、約１３０ｎｍ未満、約１２０ｎｍ未満、約１１０ｎｍ未満、約１００ｎｍ未満、または約９０ｎｍ未満、約８０ｎｍ未満、約７０ｎｍ未満、または約６０ｎｍ未満のＺ平均直径を有する粒子サイズを有する場合に示される。特定の実施形態において、再構成されたエマルジョンは、約１００ｎｍ～約２００ｎｍのＺ平均直径範囲を有する粒子サイズを有する。
いくつかの実施形態において、多分散指数（ＰｄＩ）は、噴霧乾燥された組成物の再構成後に評価される。例えば、動的光散乱（ＤＬＳ）を使用して、ＰｄＩを評価することができる。いくつかの実施形態において、これは、噴霧乾燥前の、例えば、噴霧乾燥前の液体安定エマルジョン状態の液体エマルジョンのＰＤＩと比較される。
いくつかの実施形態において、エマルジョンのｐＨは、噴霧乾燥された（乾燥粉末）組成物の再構成後に評価される。いくつかの実施形態において、これは、噴霧乾燥前の、例えば、噴霧乾燥前の液体安定エマルジョン状態のｐＨと比較される。
いくつかの実施形態において、乾燥粉末組成物の抗原、アジュバント、および／または他の成分の劣化％または分解％は、再構成時に、または乾燥粉末として評価される。いくつかの実施形態において、逆相高速液体クロマトグラフィー（ＲＰ－ＨＰＬＣ）は、もしあれば、成分の化学的劣化を評価するために使用される。１つの例示的な実施形態において、スクアレン、ＤＭＰＣ、およびＧＬＡの化学的劣化は、ＲＰ－ＨＰＬＣによって監視される。他の実施形態において、再構成時に、もしあれば、噴霧乾燥組成物の、ワクチンのタンパク質抗原の劣化を評価するために、ゲルベースのクマシー染色が使用される。本明細書で提供される熱安定性組成物は、約８℃以上の温度に維持された熱安定性噴霧乾燥組成物の再構成後に約２５％、２０％、１５％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％以下の抗原および／もしくはアジュバント、または他の成分の劣化、喪失、または分解を示すものである。
賦形剤
本発明の賦形剤は、単独で、またはこれらに限定されないが、シェル形成剤、緩衝剤、可溶化剤、等張性剤、等張化剤、界面活性剤、乳化剤、抗微生物剤、および／もしくは崩壊温度調整剤を含む、他の賦形剤と組み合わせて使用され得る。
いくつかの実施形態において、賦形剤は、薬理学的に活性な薬物以外の物質であり、これは、製造プロセス、または限定なく、噴霧乾燥を含む、薬理学的に活性な薬物の貯蔵もしくは出荷のための充填仕上げプロセスに含まれ、仕上げ薬学的プロセスに含有される。
いくつかの実施形態において、賦形剤は、噴霧乾燥後に粉末を生成する噴霧乾燥前に液体安定水中油型エマルジョン製剤に添加される物質である。いくつかの実施形態において、賦形剤は、噴霧乾燥粉末の粒子サイズを低減するか、あるいは粒子が互いにまたは口、喉、もしくは食道における組織に付着する可能性を低くすることによってなど、噴霧乾燥製剤の吸入性を増強する物質である。
ワクチン製剤および／または噴霧乾燥ワクチンもしくはアジュバント製剤に適した賦形剤は、当該技術分野で知られ（例えば、Ｂａｈｅｔｉａ ｅｔ．ａｌ．，２０１０：Ｊ．Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ ａｎｄ Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍ．：１（１）４１－５４，Ｇｒａｂｅｎｓｔｅｉｎ Ｊ Ｄ．ＩｍｍｕｎｏＦａｃｔｓ：Ｖａｃｃｉｎｅｓ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃ Ｄｒｕｇｓ－－２０１２（３７ｔｈ ｒｅｖｉｓｉｏｎ）．Ｓｔ Ｌｏｕｉｓ，Ｍｏ．：Ｗｏｌｔｅｒｓ Ｋｌｕｗｅｒ Ｈｅａｌｔｈ，２０１１ ａｎｄ，ｂｙ Ｖａｃｃｉｎｅを参照されたい）、緩衝剤、可溶化剤、等張性剤、等張化剤、界面活性剤、乳化剤、抗微生物剤、および／または崩壊温度調整剤を含む。現在承認されているワクチン中の賦形剤のリストは、Ｃｅｎｔｅｒｓ ｆｏｒ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｃｏｎｔｒｏｌを介して見ることができ（ワールドワイドウェブｃｄｃ．ｇｏｖ／ｖａｃｃｉｎｅｓ／ｐｕｂｓ／ｐｉｎｋｂｏｏｋ／ｄｏｗｎｌｏａｄｓ／ａｐｐｅｎｄｉｃｅｓ／Ｂ／ｅｘｃｉｐｉｅｎｔ－ｔａｂｌｅ－２．ｐ－ｄｆ．、２０１３年９月、“Ｖａｃｃｉｎｅ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔ＆Ｍｅｄｉａ Ｓｕｍｍａｒｙ．Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ Ｉｎｃｌｕｄｅｄ ｉｎ Ｕ．Ｓ．Ｖａｃｃｉｎｅｓ，ｂｙ Ｖａｃｃｉｎｅ”を参照されたい）、限定なく、スクロース、Ｄ－マンノース、Ｄ－フルクトース、デキストロース、リン酸カリウム、プラスドンＣ、無水ラクトース、微結晶性セルロース、ポラクリリンカリウム、ステアリン酸マグネシウム、酢酸フタル酸セルロース、アルコール、アセトン、ヒマシ油、ＦＤ＆Ｃ Ｙｅｌｌｏｗ ＃６アルミニウムレーキ染料、ヒト血清アルブミン、ウシ胎児血清、重炭酸ナトリウム、ヒト二倍体線維芽細胞培養物（ＷＩ－３８）、ダルベッコ改変イーグル培地、水酸化アルミニウム、塩化ベンゼトニウム、ホルムアルデヒド、グルテルアルデヒド、アミノ酸、ビタミン、無機塩、糖、グリセリン、アスパラギン、クエン酸、リン酸カリウム、硫酸マグネシウム、クエン酸鉄アンモニウム、ラクトース、硫酸アルミニウムカリウム、ヒドロキシリン酸アルミニウム、硫酸アルミニウムカリウム、ペプトン、ウシ抽出物、チメロサル（微量）、改変ミューラーおよびミラー培地、ベータ－プロピオラクトン、チメロソル（多用量バイアルのみ）、一塩基性リン酸ナトリウム、二塩基性リン酸ナトリウム、一塩基性リン酸カリウム、塩化カリウム、グルタミン酸カリウム、塩化カルシウム、タウロデオキシコール酸ナトリウム、硫酸ネオマイシン、ポリミキシンＢ、卵タンパク質、ラクトアルブミン加水分解物、および硫酸ネオマイシンを含む。
緩衝剤
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、緩衝剤を含む。本発明において賦形剤として有用な緩衝剤には、酢酸トリス、トリス塩基、トリスＨＣｌ、リン酸アンモニウム、クエン酸、クエン酸ナトリウム、クエン酸カリウム、酒石酸、リン酸ナトリウム、塩化亜鉛、アルギニン、およびヒスチジンが含まれる。いくつかの実施形態において、緩衝剤には、塩酸、水酸化ナトリウム、およびメグルミンなどのｐＨ調節剤が含まれる。
可溶化剤
いくつかの実施形態において、適切な可溶化剤には、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、アルファシクロデキストリン、ヒドロキシプロピル－β－シクロデキストリン（ＨＰ－β－ＣＤ）などの錯化賦形剤が含まれる。界面活性剤はまた、ポリソルベート８０およびＴｗｅｅｎを含む可溶化賦形剤として含まれ得る。可溶化剤として当該技術分野で知られている他の共溶媒が使用され得、ｔｅｒｔ－ブチルアルコール、イソプロピルアルコール、ジクロロメタン、エタノール、およびアセトンを含む。
本発明における賦形剤としての使用のための等張化剤には、グリセロール、塩化ナトリウム、スクロース、マンニトール、およびデキストロースが含まれる。崩壊温度調整剤には、デキストラン、ヒドロキシエチルデンプン、フィコール、およびゼラチンが含まれる。抗微生物剤には、ベンジルアルコール、フェノール、ｍ－クレゾール、メチルパラベン、エチルパラベン、チメロソルが含まれる。
等張性剤
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、等張性剤を含む。いくつかの実施形態において、等張性剤は、グリセロールである。１つの特定の実施形態において、等張性剤は、噴霧乾燥前の水中油型エマルジョン製剤中、または再構成時の水中油型エマルジョン中に約０．３６％ｖ／ｖの濃度で存在する。
界面活性剤
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、界面活性剤を含む。いくつかの実施形態において、界面活性剤は、プルロニックＦ６８である。いくつかの実施形態において、界面活性剤は、約１００：１（油：界面活性剤）の比で存在する。いくつかの実施形態において、界面活性剤は、約０．０１８％ｗ／ｖの濃度で存在する。いくつかの実施形態において、界面活性剤は、約０．０００１％ｗ／ｖ、約０．０００５％ｗ／ｖ、約０．００１％ｗ／ｖ、約０．００５％ｗ／ｖ、約０．０１％ｗ／ｖ、約０．０１１％ｗ／ｖ、約０．０１２％ｗ／ｖ、約０．０１３％ｗ／ｖ、約０．０１４％ｗ／ｖ、約０．０１５％ｗ／ｖ、約０．０１６％ｗ／ｖ、約０．０１７％ｗ／ｖ、約０．０１８％ｗ／ｖ、約０．０１９％ｗ／ｖ、約０．０２％ｗ／ｖ、約０．０３％ｗ／ｖ、約０．０４％ｗ／ｖ、約０．０５％ｗ／ｖ、約０．０６％ｗ／ｖ、約０．０７％ｗ／ｖ、約０．０８％ｗ／ｖ、約０．０９％ｗ／ｖ、約０．１％ｗ／ｖ、約０．２％ｗ／ｖ、約０．３％ｗ／ｖ、約０．４％ｗ／ｖ、約０．５％ｗ／ｖ、約０．６％ｗ／ｖ、約０．７％ｗ／ｖ、約０．８％ｗ／ｖ、約０．９％ｗ／ｖ、または約１％ｗ／ｖの濃度で存在する。本明細書に記載されるパーセンテージおよび比は、噴霧乾燥前の水中油型エマルジョン製剤中、または乾燥粉末中、または再構成後の乾燥粉末中いずれかの比およびパーセンテージを指す。
乳化剤
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、乳化剤を含む。いくつかの実施形態において、乳化剤は、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＭＰＣ）である。いくつかの実施形態において、乳化剤は、レシチンである。いくつかの実施形態において、乳化剤は、約１：５（乳化剤：油）の比で存在する。いくつかの実施形態において、乳化剤は、約０．３８％ｗ／ｖの濃度で存在する。いくつかの実施形態において、乳化剤は、約０．００２％ｗ／ｖ、約０．００５％ｗ／ｖ、約０．０１０％ｗ／ｖ、約０．０１５％ｗ／ｖ、約０．０２０％ｗ／ｖ、約０．０２５％ｗ／ｖ、約０．０３０％ｗ／ｖ、約０．０３５％ｗ／ｖ、約０．０４０％ｗ／ｖ、約０．０４５％ｗ／ｖ、約０．０５０％ｗ／ｖ、約０．０５５％ｗ／ｖ、約０．０６０％ｗ／ｖ、約０．０６５％ｗ／ｖ、約０．０７０％ｗ／ｖ、約０．０７５％ｗ／ｖ、約０．０８０％ｗ／ｖ、約０．０８５％ｗ／ｖ、約０．０９０％ｗ／ｖ、約０．０９５％ｗ／ｖ、約０．１０％ｗ／ｖ、約０．１５％ｗ／ｖ、約０．２０％ｗ／ｖ、約０．２５％ｗ／ｖ、約０．３０％ｗ／ｖ、約０．３５％ｗ／ｖ、約０．４０％ｗ／ｖ、約０．４５％ｗ／ｖ、約０．５０％ｗ／ｖ、約０．５５％ｗ／ｖ、約０．６０％ｗ／ｖ、約０．６５％ｗ／ｖ、約０．７０％ｗ／ｖ、約０．７５％ｗ／ｖ、約０．８０％ｗ／ｖ、約０．８５％ｗ／ｖ、約０．９０％ｗ／ｖ、約０．９５％ｗ／ｖ、約１％ｗ／ｖ、約２％ｗ／ｖ、約３％ｗ／ｖ、約４％ｗ／ｖ、約５％ｗ／ｖ、約６％ｗ／ｖ、約７％ｗ／ｖ、約７．５％ｗ／ｖ、約８％ｗ／ｖ、約９％ｗ／ｖ、または約１０％ｗ／ｖの濃度で存在する。本明細書に記載されるパーセンテージおよび比は、噴霧乾燥前の水中油型エマルジョン製剤中または乾燥粉末中いずれかの比およびパーセンテージを指す。
熱安定性噴霧乾燥ワクチン組成物における使用のためのアジュバント
本明細書で提供される本発明のいくつかの態様において、本明細書に記載される組成物（例えば、熱安定性噴霧乾燥ワクチン）は、アジュバントを含む。いくつかの実施形態において、アジュバントは、例えば、治療剤としての使用のために単独で提供される。他の実施形態において、アジュバントは、抗原と組み合わせて提供される。
免疫応答を修飾する組成物における使用のためのアジュバントは、当該技術分野において周知である。例えば、本明細書に記載される組成物における使用のためのアジュバントは、免疫刺激性アジュバント、送達アジュバント、無機アジュバント、または有機アジュバントのうちの１つ以上を含み得る。本明細書に記載される組成物における使用のためのアジュバントの非限定的な例は、とりわけ、Ｂａｒｏｕｃｈ Ｄ．Ｈ．，２００８，Ｎａｔｕｒｅ，４５５（７２１３）：６１３－９、Ｍｏｒｒｏｗ ｅｔ ａｌ．，２００８，ＡＩＤＳ，２２（３）：３３３－８、およびＭｃＧｅａｒｙ ｅｔ ａｌ．，２００３，Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｃｉ．，９（７）：４０５－１８１に見出すことができる。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載される組成物において使用されるアジュバント（例えば、熱安定性乾燥粉末ワクチン）は、免疫刺激性アジュバントである。免疫刺激性アジュバントは、例えば、サイトカイン、ＴＬＲリガンド、または微生物毒素などの免疫系に直接作用するアジュバントであり得る。本明細書におけるいくつかの実施形態において、アジュバントは、サイトカインアジュバントである。１つ以上のサイトカインは、単独で、または本明細書に記載される組成物において１つ以上の追加のアジュバントと組み合わせて、アジュバントとして適切であり得る。適切なサイトカインには、インターフェロン（ＩＦＮ）、インターロイキン（ＩＬ）、ケモカイン、コロニー刺激因子、または腫瘍壊死因子が含まれる。いくつかの実施形態において、インターフェロンは、Ｉ型ＩＦＮ、ＩＩ型ＩＦＮ、またはＩＩＩ型ＩＦＮである。いくつかの実施形態において、インターフェロンは、Ｉｎａｌａ、Ｉｎｂｅａｔ’ｓ、ＩＦＮ－γ、またはＩＦＮ－λ、およびこれらの中からのサブタイプ（例えば、ＩＦＮ－λ、ＩＦＮ－λ２、およびＩＦＮ－λ３）である。いくつかの実施形態において、サイトカインは、インターロイキンである。本明細書に記載される組成物においてアジュバントとして使用することができるインターロイキンの非限定的な例には、ＩＬ－１、ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－８、ＩＬ－９、ＩＬ－１０、ＩＬ－１１、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、ＩＬ－１５、ＩＬ－１７、ＩＬ－１８、ＩＬ－１９、ＩＬ－２０、ＩＬ－２１、ＩＬ－２２、ＩＬ－２３、ＩＬ－２４、ＩＬ－２５、ＩＬ－２６、ＩＬ－２７、ＩＬ－２８、ＩＬ－２９、ＩＬ－３０、ＩＬ－３１、ＩＬ－３２、ＩＬ－３３、ＩＬ－３５、およびＩＬ－３６が含まれる。いくつかの実施形態において、サイトカインは、ケモカインである。いくつかの実施形態において、ケモカインは、ＣＣケモカイン、ＣＸＣケモカイン、Ｃケモカイン、またはＣＸ３Ｃケモカインである。本明細書に記載される組成物においてアジュバントとして使用することができるＣＣケモカインの非限定的な例には、ＣＣＬ１、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、ＣＣＬ６、ＣＣＬ７、ＣＣＬ７、ＣＣＬ８、ＣＣＬ９、ＣＣＬ１０、ＣＣＬ１１、ＣＣＬ１２、ＣＣＬ１３、ＣＣＬ１４、ＣＣＬ１５、ＣＣＬ１６、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ１８、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２０、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２２、ＣＣＬ２３、ＣＣＬ２４、ＣＣＬ２５、ＣＣＬ２６、ＣＣＬ２７、およびＣＣＬ２８が含まれる。本明細書に記載される組成物において使用することができるＣＸＣケモカインの非限定的な例には、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ３、ＣＸＣＬ４、ＣＸＣＬ５、ＣＸＣＬ６、ＣＸＣＬ７、ＣＸＣＬ８、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＣＸＣＬ１２、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ１４、ＣＸＣＬ１５、ＣＸＣＬ１６、およびＣＸＣＬ１７が含まれる。いくつかの実施形態において、サイトカインは、コロニー刺激因子である。いくつかの実施形態において、コロニー刺激因子は、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）、またはマクロファージコロニー刺激因子（Ｍ－ＣＳＦ）である。いくつかの実施形態において、サイトカインは、腫瘍壊死因子である。本明細書に記載される組成物においてアジュバントとして使用することができる腫瘍壊死因子ファミリータンパク質の非限定的な例には、ＴＮＦ－αおよび４－１ＢＢＬが含まれる。
いくつかの実施形態において、免疫刺激性アジュバントは、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）リガンド（例えば、ＴＬＲアゴニスト）である。１つ以上のＴＬＲリガンドは、単独で、または本明細書に記載される組成物において１つ以上の追加のアジュバントと組み合わせて、アジュバントとして適切であり得る。ＴＬＲには、多数の感染性病原体の中または上に存在し得るような様々な保存された微生物分子構造について宿主細胞に初期認識能力を付与する自然免疫系の細胞表面膜貫通受容体が含まれる。（例えば、Ａｒｍａｎｔ ｅｔ ａｌ．，２００２ Ｇｅｎｏｍｅ Ｂｉｏｌ．３（８）：ｒｅｖｉｅｗｓ３０１１．１－３０１１．６、Ｆｅａｒｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９９６ Ｓｃｉｅｎｃｅ ２７２：５０、Ｍｅｄｚｈｉｔｏｖ ｅｔ ａｌ．，１９９７ Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：４、Ｌｕｓｔｅｒ ２００２ Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４：１２９、Ｌｉｅｎ ｅｔ ａｌ．２００３ Ｎａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４：１１６２、Ｍｅｄｚｈｉｔｏｖ，２００１ Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１：１３５、Ｔａｋｅｄａ ｅｔ ａｌ．，２００３ Ａｎｎ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２１：３３５、Ｔａｋｅｄａ ｅｔ ａｌ．２００５ Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７：１、Ｋａｉｓｈｏ ｅｔ ａｌ．，２００４ Ｍｉｃｒｏｂｅｓ Ｉｎｆｅｃｔ．６：１３８８、Ｄａｔｔａ ｅｔ ａｌ．，２００３ Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７０：４１０２）。
自然免疫系を介した免疫応答の開始を促進するＴＬＲ媒介シグナル伝達の誘導は、細胞表面ＴＬＲに関与するＴＬＲアゴニスト（すなわち、ＴＬＲリガンド）によって引き起こされ得る。例えば、リポ多糖（ＬＰＳ）は、ＴＬＲ２またはＴＬＲ４を介したＴＬＲアゴニストであり得（Ｔｓａｎ ｅｔ ａｌ．，２００４ Ｊ．Ｌｅｕｋ．Ｂｉｏｌ．７６：５１４、Ｔｓａｎ ｅｔ ａｌ．，２００４ Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｃｅｌｌ Ｐｈｓｉｏｌ．２８６：Ｃ７３９、Ｌｉｎ ｅｔ ａｌ．，２００５ Ｓｈｏｃｋ ２４：２０６）、ポリ（イノシン－シチジン）（ポリｌ：Ｃ）は、ＴＬＲ３を介したＴＬＲアゴニストであり得（Ｓａｌｅｍ ｅｔ ａｌ．，２００６ Ｖａｃｃｉｎｅ ２４：５１１９）、ＣｐＧ配列（非メチル化シトシン－グアノシンまたは「ＣｐＧ」ジヌクレオチドモチーフを含有するオリゴデオキシヌクレオチド、例えば、ＣｐＧ ７９０９、Ｃｏｏｐｅｒ ｅｔ ａｌ．，２００５ ＡＩＤＳ １９：１４７３、ＣｐＧ １０１０１ Ｂａｙｅｓ ｅｔ ａｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｆｉｎｄ Ｅｘｐ Ｃｌｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ ２７：１９３、Ｖｏｌｌｍｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｏｎ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｔｈｅｒａｐｙ ５：６７３、Ｖｏｌｌｍｅｒ ｅｔ ａｌ．，２００４ Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．４８：２３１４、Ｄｅｎｇ ｅｔ ａｌ．，２００４ Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７３：５１４８）は、ＴＬＲ９を介したＴＬＲアゴニストであり得（Ａｎｄａｌｏｕｓｓｉ ｅｔ ａ．，２００６ Ｇｌｉａ ５４：５２６、Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，２００６ Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７７：２３７３）、ペプチドグリカンは、ＴＬＲ２および／またはＴＬＲ６アゴニストであり得（Ｓｏｂｏｌｌ ｅｔ ａｌ．，２００６ Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．７５：１３１、Ｎａｋａｏ ｅｔ ａｌ．，２００５ Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７４：１５６６）、３Ｍ００３（関連化合物３Ｍ００１および３Ｍ００２の供給源でもある、３Ｍ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ、Ｓｔ．Ｐａｕｌ、Ｍｉｎｎ．からの、４－アミノ－２－（エトキシメチル）－α，α－ジメチル－６，７，８，９－テトラヒドロ－１Ｈ－－イミダゾ［４，５－ｃ］キノリン－１－エタノール水和物、分子量３１８Ｄａ、Ｇｏｒｄｅｎ ｅｔ ａｌ．，２００５ Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７４：１２５９）は、ＴＬＲ７アゴニスト（Ｊｏｈａｎｓｅｎ ２００５ Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ａｌｌｅｒｇ．３５：１５９１）および／またはＴＬＲ８アゴニスト（Ｊｏｈａｎｓｅｎ ２００５）であり得、フラジェリンは、ＴＬＲ５アゴニストであり得（Ｆｅｕｉｌｌｅｔ ｅｔ ａｌ．，２００６ Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １０３：１２４８７）、プロフィリンは、ＴＬＲ１１アゴニストであり得（Ｈｅｄｈｌｉ ｅｔ ａｌ．，２００９，Ｖａｃｃｉｎｅ，２７（１６）：２２７４－８７）、リポペプチドは、ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、および／またはＴＬＲ６アゴニストであり得（Ｇａｏ ｅｔ ａｌ．，２０１３，Ｖａｃｃｉｎｅ，３１（２６）：２７９６－８０３）、かつＣ型肝炎抗原は、ＴＬＲ７および／またはＴＬＲ９を介してＴＬＲアゴニストとして作用し得る（Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．，２００６ Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １０３：１８２８、Ｈｏｒｓｍａｎｓ ｅｔ ａｌ．，２００５ Ｈｅｐａｔｏｌ．４２：７２４）。他のＴＬＲアゴニストが知られており（例えば、Ｓｃｈｉｒｍｂｅｃｋ ｅｔ ａｌ．，２００３ Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７１：５１９８）、特定の現在記載される実施形態に従って使用され得る。
例えば、背景として（例えば、米国特許第６，５４４，５１８号を参照されたい）、非メチル化ＣｐＧジヌクレオチド（「ＣｐＧ」）を含有する免疫刺激性オリゴヌクレオチドは、全身経路および粘膜経路の両方によって投与される場合アジュバントであることが知られている（ＷＯ９６／０２５５５、ＥＰ４６８５２０、Ｄａｖｉｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ，１９９８．１６０（２）：８７０－８７６、ＭｃＣｌｕｓｋｉｅ ａｎｄ Ｄａｖｉｓ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１９９８，１６１（９）：４４６３－６）。ＣｐＧは、ＤＮＡに存在するシトシン－グアノシンジヌクレオチドモチーフの略語である。免疫刺激におけるＣＧモチーフの中心的な役割は、Ｋｒｉｅｇ，Ｎａｔｕｒｅ ３７４，ｐ ５４６ １９９５によって解明された。詳細な分析は、ＣＧモチーフが特定の配列コンテキストにある必要があり、そのような配列が細菌ＤＮＡでは一般的であるが、脊椎動物ＤＮＡではまれであることを示した。免疫刺激性配列は、多くの場合、プリン、プリン、Ｃ、Ｇ、ピリミジン、ピリミジンであり、ジヌクレオチドＣＧモチーフは、メチル化されていないが、他の非メチル化ＣｐＧ配列は、免疫刺激性であることが知られており、本発明の特定の実施形態において使用され得る。ＣｐＧは、ワクチンに製剤化される場合、遊離抗原と一緒に遊離溶液で投与され得るか（ＷＯ９６／０２５５５、ＭｃＣｌｕｓｋｉｅ ａｎｄ Ｄａｖｉｓ、上記）、または抗原に共有結合され得るか（ＰＣＴ公開第９８／１６２４７号）、または水酸化アルミニウムなどの担体と製剤化され得る（例えば、Ｄａｖｉｓ ｅｔ ａｌ．上記、Ｂｒａｚｏｌｏｔ－Ｍｉｌｌａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡ，１９９８，９５（２６），１５５５３－８）。
いくつかの実施形態において、本発明のアジュバントとしての使用のためのオリゴヌクレオチドは、少なくとも３つ、より好ましくは少なくとも６つ以上のヌクレオチドによって分離される２つ以上のジヌクレオチドＣｐＧモチーフを含有する。本発明のオリゴヌクレオチドは、典型的には、デオキシヌクレオチドである。好ましい実施形態において、オリゴヌクレオチドにおけるヌクレオチド間は、ホスホロジチオエート、またはより好ましくはホスホロチオエート結合であるが、ホスホジエステルおよび他のヌクレオチド間結合は、混合ヌクレオチド間結合を有するオリゴヌクレオチドを含む本発明の範囲内である。ホスホロチオエートオリゴヌクレオチドまたはホスホロジチオエートを生成するための方法は、米国特許第５，６６６，１５３号、同第５，２７８，３０２号、およびＷＯ９５／２６２０４に記載されている。
好ましいオリゴヌクレオチドの例は、以下の刊行物に開示される配列を有し、特定の本明細書に開示される実施形態について、配列は、好ましくはホスホロチオエート修飾ヌクレオチド間結合を含有する：（１）ＣＰＧ ７９０９：Ｃｏｏｐｅｒ ｅｔ ａｌ．，“ＣＰＧ ７９０９ ａｄｊｕｖａｎｔ ｉｍｐｒｏｖｅｓ ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｂ ｖｉｒｕｓ ｖａｃｃｉｎｅ ｓｅｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ ｉｎ ａｎｔｉｒｅｔｒｏｖｉｒａｌ－ｔｒｅａｔｅｄ ＨＩＶ－ｉｎｆｅｃｔｅｄ ａｄｕｌｔｓ．”ＡＩＤＳ，２００５ Ｓｅｐ．２３；１９（１４）：１４７３－９、（２）ＣｐＧ １０１０１：Ｂａｙｅｓ ｅｔ ａｌ．，“Ｇａｔｅｗａｙｓ ｔｏ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｔｒｉａｌｓ．”Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｆｉｎｄ．Ｅｘｐ．Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２００５ Ａｐｒｉｌ；２７（３）：１９３－２１９、および（３）Ｖｏｌｌｍｅｒ Ｊ．，“Ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｉｎ ｄｒｕｇ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ ＣｐＧ ｏｌｉｇｏｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｌｉｇａｎｄｓ ｆｏｒ ＴＬＲ９．”Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｏｎ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｔｈｅｒａｐｙ．２００５ Ｍａｙ；５（５）：６７３－６８２。
代替ＣｐＧオリゴヌクレオチドは、それらがそれらに対する重要ではないヌクレオチド配列置換、挿入、欠失、および／または付加を有するという点で異なる、上記で引用された刊行物に記載される好ましい配列の多型を含み得る。本発明の特定の実施形態において利用されるＣｐＧオリゴヌクレオチドは、当該技術分野で知られている任意の方法（例えば、ＥＰ ４６８５２０）によって合成され得る。便利なことに、そのようなオリゴヌクレオチドは、自動合成装置を利用して合成され得る。オリゴヌクレオチドは、典型的には、デオキシヌクレオチドである。好ましい実施形態において、オリゴヌクレオチド中のヌクレオチド間結合は、ホスホロジチオエート、またはより好ましくは、ホスホロチオエート結合であるが、ホスホジエステルもまた、現在企図される実施形態の範囲内である。異なるヌクレオチド間結合を含むオリゴヌクレオチド、例えば、混合ホスホロチオエートホスホジエステルも企図される。オリゴヌクレオチドを安定化する他のヌクレオチド間結合もまた使用され得る。
特定の実施形態において、アジュバントは、ＴＬＲ４アゴニストである。いくつかの実施形態において、本発明の組成物において使用されるＴＬＲ４アゴニストは、米国特許公開第２００７／０２１０１７号、同第２００９／０４５０３３号、同第２０１０／０３７４６６号、および同第２０１０／０３１０６０２号に記載されるものなどのグルコピラノシル脂質アジュバント（ＧＬＡ）を含み、その内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態において、本明細書における本発明の組成物において使用されるアジュバントは、弱毒化リピドＡ誘導体（ＡＬＤ）である。ＡＬＤは、分子がリピドＡのより少ないか、または異なる有害作用を示すように改変または構築されているリピドＡ様分子である。これらの有害作用には、ニワトリ胚５０％致死用量アッセイ（ＣＥＬＤ５０）で評価される発熱性、局所的シュワルツマン反応性、および毒性が含まれる。本発明に従って有用なＡＬＤには、モノホスホリルリピドＡ（ＭＬＡ）および３－脱アシル化モノホスホリルリピドＡ（３Ｄ－ＭＬＡ）が含まれる。ＭＬＡおよび３Ｄ－ＭＬＡは、既知であり、本明細書において詳細に記載される必要はない。例えば、モノホスホリルリピドＡおよびその製造を開示する、Ｒｉｂｉ ＩｍｍｕｎｏＣｈｅｍ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｉｎｃ．に譲渡された、１９８４年３月１３日に発行された米国特許第４，４３６，７２７号を参照されたい。同様にＲｉｂｉ ＩｍｍｕｎｏＣｈｅｍ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｉｎｃ．に譲渡された、Ｍｙｅｒｓらの米国特許第４，９１２，０９４号および再審査証明書Ｂ１米国特許第４，９１２，０９４号は、３－脱アシル化モノホスホリルリピドＡおよびその製造方法を具現化する。
いくつかの実施形態において、イミダゾキノリンなどの応答修飾因子および当該技術分野で知られている他の免疫応答修飾因子もまた、特定の現在開示される実施形態においてアジュバントとして含まれ得る。特定の好ましいイミダゾキノリン免疫応答修飾因子には、非限定的な例として、レシキモド（Ｒ８４８）、イミキモド、およびガルジキモド（Ｈｅｍｍｉ ｅｔ ａｌ．，２００２ Ｎａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３：１９６、Ｇｉｂｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，２００２ Ｃｅｌｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２１８：７４、Ｇｏｒｄｅｎ ｅｔ ａｌ．，２００５ Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７４：１２５９）が含まれ、これらおよび他のイミダゾキノリン免疫応答修飾因子は、適切な条件下で、本明細書に記載されるようなＴＬＲアゴニスト活性も有し得る。他の免疫応答修飾因子は、核酸ベースの二重ステムループ免疫修飾因子（ｄＳＬＩＭ）である。特定の現在開示される実施形態における使用について企図されるｄＳＬＩＭの具体的な例は、Ｓｃｈｍｉｄｔ ｅｔ ａｌ．，２００６ Ａｌｌｅｒｇｙ ６１：５６、Ｗｅｉｈｒａｕｃｈ ｅｔ ａｌ．２００５ Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１１（１６）：５９９３－６００１、Ｍｏｄｅｒｎ Ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｊ．Ｋｎａｂｌｅｉｎ（Ｅｄｉｔｏｒ）．Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｄｅｃ．６，２００５．（ｄＳＬＩＭは１８３～約２００ページに議論される）において、およびＭｏｌｏｇｅｎ ＡＧ（Ｂｅｒｌｉｎ、ＦＲＧ：［２００６年８月１８日にオンラインで取得、ワールドワイドウェブｍｏｌｏｇｅｎ．ｃｏｍ／Ｅｎｇｌｉｓｈ／０４．２０－ｄＳＬＩＭ．ｓｈｔｍｌを参照されたい］）から見出すことができる。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載される組成物において使用されるアジュバントは、細菌または植物に由来する多糖である。本明細書に記載される組成物において単独でまたは１つ以上の追加のアジュバントと組み合わせて使用することができる多糖ベースのアジュバントの非限定的な例には、グルカン（例えば、ベータグルカン）、デキストラン（例えば、硫酸化およびジエチルアミノエチル－デキストラン）、グルコマンナン、ガラクトマンナン、レバン、キシラン、フルクタン（例えば、イヌリン）、キトサン、エンドトキシン（例えば、リポ多糖）、バイオブランＭＧＮ－３、Ａｃｔｉｎｉｄｉａ ｅｒｉａｎｔｈａからの多糖、エルデキソマー、およびそれらの変形が含まれる。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載される組成物において使用されるアジュバントは、プロテアソームまたはそのサブユニットである。いくつかの実施形態において、本明細書に記載される組成物において使用されるアジュバントは、リジンコアの周りに組み立てられる同一または異なる抗原ペプチド配列を含む。いくつかの実施形態において、本明細書に記載される組成物において使用されるアジュバントは、毒素（例えば、細菌毒素）である。いくつかの実施形態において、毒素は、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ、Ｖｉｂｒｉｏ ｃｈｏｌｅｒａ、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ、およびＢｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｐａｒａｐｅｒｔｕｓｓｉｓからなる群から選択される１つ以上の細菌に由来する。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載される組成物において使用されるアジュバント（例えば、熱安定性乾燥粉末ワクチン）は、送達アジュバントである。送達アジュバントは、アジュバントとして機能することができ、かつ／または抗原を送達することができる。本明細書に記載される組成物において単独でまたは１つ以上の追加のアジュバントと組み合わせて使用することができるアジュバントの非限定的な例には、鉱物塩（例えば、リン酸カルシウム）、エマルジョン（例えば、水中のスクアレン）、リポソーム（例えば、ＤＰＰＣ：コレステロールリポソーム）、ビロソーム（例えば、免疫増強再構成インフルエンザビロソーム）、およびミクロスフェアが含まれる。
特定の本明細書に開示される実施形態による使用のための他のアジュバントには、ブロックコポリマーまたは生分解性ポリマーが含まれ、これは、関連技術分野における当業者が精通しているであろうポリマー化合物のクラスを指す。本明細書に記載される組成物に含まれ得るブロックコポリマーまたは生分解性ポリマーの例には、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）Ｌ１２１（ＢＡＳＦ Ｃｏｒｐ．、Ｍｏｕｎｔ Ｏｌｉｖｅ、Ｎ．Ｊ．、例えば、Ｙｅｈ ｅｔ ａｌ．，１９９６ Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．１３：１６９３、米国特許第５，５６５，２０９号を参照されたい）、ＣＲＬ１００５（例えば、Ｔｒｉｏｚｚｉ ｅｔ ａｌ．，１９９７ Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃ．Ｒｅｓ．３：２３５５）、ポリ（乳酸－ｃｏ－グリコール酸）（ＰＬＧＡ）、ポリ（乳酸）（ＰＬＡ）、ポリ－（Ｄ，Ｌ－ラクチド－ｃｏ－グリコリド）（ＰＬＧ）、およびポリＩ：Ｃが含まれる。（例えば、Ｐｏｗｅｌｌ ａｎｄ Ｎｅｗｍａｎ，“Ｖａｃｃｉｎｅ ｄｅｓｉｇｎ－－Ｔｈｅ Ｓｕｂｕｎｉｔ ａｎｄ Ａｄｊｕｖａｎｔ Ａｐｐｒｏａｃｈ”，１９９５，Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋを参照されたい）。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載される組成物において使用されるアジュバント（例えば、熱安定性乾燥粉末ワクチン）は、有機アジュバントである。有機アジュバントは、生物に由来するか、または化学的に炭素を含有するアジュバントであり得る。いくつかの実施形態において、アジュバントは、微生物細胞壁に由来するペプチド（例えば、ムラミルジペプチドおよびその多型）である。いくつかの実施形態において、アジュバントは、トレハロース６，６’－ジミコレートまたはその多型である。Ｓｃｈｗｅｎｅｋｅｒ ｅｔ ａｌ．，２０１３，Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ，２１８（４）：６６４－７３を参照されたい。いくつかの実施形態において、アジュバントは、ステアリルチロシンである。
ＱＳ２１および同様の効果を与える構造的に関連する化合物を含み、本明細書ではＱＳ２１模倣物と呼ばれる、サポニンおよびサポニン模倣物。（例えば、米国特許第５，０５７，５４０号、ＥＰ０３６２２７９Ｂ１、ＷＯ９５／１７２１０を参照されたい）、トマチンなどの植物アルカロイド、サポニンなどの（ただしこれらに限定されない）洗剤、ポリソルベート８０、スパン８５およびステアリルチロシン、イミダゾキノリン免疫応答修飾因子、ならびに二重ステムループ免疫修飾因子（ｄＳＬＩＭ、例えば、Ｗｅｅｒａｔｎａ ｅｔ ａｌ．，２００５ Ｖａｃｃｉｎｅ ２３：５２６３）は、特定の現在記載される実施形態によるアジュバントとして使用され得る。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載される組成物において使用されるアジュバントは、サポニンまたはサポニン模倣物である。サポニンを含む洗剤は、例えば、米国特許第６，５４４，５１８号、Ｌａｃａｉｌｌｅ－Ｄｕｂｏｉｓ，Ｍ ａｎｄ Ｗａｇｎｅｒ Ｈ．（１９９６ Ｐｈｙｔｏｍｅｄｉｃｉｎｅ ２：３６３－３８６）、米国特許第５，０５７，５４０号、Ｋｅｎｓｉｌ，Ｃｒｉｔ Ｒｅｖ Ｔｈｅｒ Ｄｒｕｇ Ｃａｒｒｉｅｒ Ｓｙｓｔ，１９９６，１２（１－２）：１－５５、およびＥＰ０３６２２７９Ｂ１において教示される。Ｑｕｉｌ Ａ（サポニン）の画分を含む、免疫刺激複合体（ＩＳＣＯＭＳ）と呼ばれる粒子状構造は、溶血性であり、ワクチンの製造において使用されている（Ｍｏｒｅｉｎ，Ｂ．，ＥＰ０１０９９４２Ｂ１）。これらの構造は、アジュバント活性を有することが報告されている（ＥＰ０１０９９４２Ｂ１、ＷＯ９６／１１７１１）。溶血性サポニンＱＳ２１およびＱＳ１７（Ｑｕｉｌ ＡのＨＰＬＣ精製画分）は、強力な全身アジュバントとして記載されており、それらの生成の方法は、米国特許第５，０５７，５４０号およびＥＰ０３６２２７９Ｂ１に開示される。ＱＳ２１は、Ｑｕｉｌｌａｊａ Ｓａｐｏｎａｒｉａ Ｍｏｌｉｎａの樹皮に由来するＨＰＬＣ精製された非毒性画分を含み得る。ＱＳ２１の生成は、米国特許第５，０５７，５４０号に開示されている。（米国特許第６，９３６，２５５号、同第７，０２９，６７８号、および同第６，９３２，９７２号も参照されたい。）これらの参考文献には、全身ワクチンのための強力なアジュバントとして作用するＱＳ７（Ｑｕｉｌ－Ａの非溶血性画分）の使用も記載される。ＱＳ２１の使用は、Ｋｅｎｓｉｌ ｅｔ ａｌ．（１９９１．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １４６：４３１－４３７）においてさらに記載される。ＱＳ２１およびポリソルベートまたはシクロデキストリンの組み合わせも知られている（ＷＯ９９／１０００８）。ＱＳ２１およびＱＳ７などのＱｕｉｌＡの画分を含む粒子状アジュバントシステムは、ＷＯ９６／３３７３９およびＷＯ９６／１１７１１に記載されている。全身ワクチン接種研究において使用されてきた他のサポニンには、カスミソウおよびサポナリアなどの他の植物種に由来するものが含まれる（Ｂｏｍｆｏｒｄ ｅｔ ａｌ．，Ｖａｃｃｉｎｅ，１０（９）：５７２－５７７，１９９２）。
いくつかの実施形態において、アジュバントは、ＩＳＣＯＭＳとして知られる「免疫刺激性複合体」（例えば、米国特許第６，８６９，６０７号、同第６，８４６，４８９号、同第６，０２７，７３２号、同第４，９８１，６８４号）であり、サポニン由来のＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（登録商標）を含み、これは、例えば、Ｉｓｃｏｔｅｃ（Ｓｔｏｃｋｈｏｌｍ、Ｓｗｅｄｅｎ）およびＣＳＬ Ｌｔｄ．（Ｐａｒｋｖｉｌｌｅ、Ｖｉｃｔｏｒｉａ、Ａｕｓｔｒａｌｉａ）から市販されている。
エスシンは、本明細書に開示される実施形態のアジュバント組成物における使用のためのサポニンに関する別の洗剤である。エスシンは、Ｍｅｒｃｋ ｉｎｄｅｘ（１２ｔｈ Ｅｄ．：ｅｎｔｒｙ ３７３７）においてセイヨウトチノキ、Ａｅｓｃｕｌｕｓ ｈｉｐｐｏｃａｓｔａｎｕｍの種子において発生するサポニンの混合物として説明される。その単離は、クロマトグラフィーおよび精製（Ｆｉｅｄｌｅｒ，Ａｒｚｎｅｉｍｉｔｔｅｌ－Ｆｏｒｓｃｈ．４，２１３（１９５３））によって、ならびにイオン交換樹脂（Ｅｒｂｒｉｎｇ ｅｔ ａｌ．、米国特許第３，２３８，１９０号）によって説明される。エスシン（アエスシンとしても知られる）の画分は、精製され、生物学的に活性であることが示されている（Ｙｏｓｈｉｋａｗａ Ｍ，ｅｔ ａｌ．（Ｃｈｅｍ Ｐｈａｒｍ Ｂｕｌｌ（Ｔｏｋｙｏ）１９９６ Ａｕｇｕｓｔ；４４（８）：１４５４－１４６４））。
ジギトニンは、別の洗剤であり、またＭｅｒｃｋ ｉｎｄｅｘ（１２ｔｈ Ｅｄ．、ｅｎｔｒｙ ３２０４）においてサポニンとして記載され、Ｄｉｇｉｔａｌｉｓ ｐｕｒｐｕｒｅａの種子に由来し、Ｇｉｓｖｏｌｄ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｐｈａｒｍ．Ａｓｓｏｃ．，１９３４，２３，６６４、およびＲｕｂｅｎｓｔｒｏｔｈ－Ｂａｕｅｒ，Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，１９５５，３０１，６２１によって記載される手順に従って精製される。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載される組成物において使用されるアジュバント（例えば、熱安定性乾燥粉末ワクチン）は、無機アジュバントである。無機アジュバントは、例えば、鉱物塩、エマルジョン、およびリン酸カルシウムなどの、一般には炭素ベースではないアジュバントであり得る。本明細書で企図される鉱物塩アジュバントには、リン酸アルミニウムおよび水酸化アルミニウムなどのアルミニウムベースの化合物が含まれるが、これらに限定されない。本明細書で使用される場合、リン酸カルシウムアジュバントには、オルトリン酸塩（ＰＯ４３－）、メタリン酸塩（ＰＯ３－）、またはピロリン酸塩（Ｐ２Ｏ７４－）と一緒にカルシウムイオン（Ｃａ２＋）が含まれるが、これに限定されない。
また上記のように、本明細書に記載される組成物における使用のための１つのタイプのアジュバントは、一般に「アラム」と呼ばれる、アルミニウムアジュバントであり得る。アラムアジュバントは、以下：オキシ水酸化アルミニウム、ヒドロキシリン酸アルミニウム、または様々な独自の塩に基づいている。アラムアジュバントを使用するワクチンには、破傷風株、ＨＰＶ、Ａ型肝炎、不活化ポリオウイルス、および本明細書に記載される他の抗原についてのワクチンが含まれ得る。アラムアジュバントは、良好な安全性記録を有し、抗体応答を増強し、抗原を安定化し、大規模生成について比較的単純であるため、有利である。（Ｅｄｅｌｍａｎ ２００２ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２１：１２９－１４８、Ｅｄｅｌｍａｎ，Ｒ．１９８０ Ｒｅｖ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．２：３７０－３８３．）。
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、アジュバントを含む。いくつかの実施形態において、アジュバントは、ＴＬＲ４アゴニストである。いくつかの実施形態において、アジュバントは、約０．５μｇ／ｍＬ～約１２ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する。いくつかの実施形態において、アジュバントは、約０．５μｇ／ｍＬ、約１μｇ／ｍＬ、約２μｇ／ｍＬ、約３μｇ／ｍＬ、約４μｇ／ｍＬ、約５μｇ／ｍＬ、約６μｇ／ｍＬ、約７μｇ／ｍＬ、約８μｇ／ｍＬ、約９μｇ／ｍＬ、約１０μｇ／ｍＬ、約２０μｇ／ｍＬ、約３０μｇ／ｍＬ、約４０μｇ／ｍＬ、約５０μｇ／ｍＬ、約６０μｇ／ｍＬ、約７０μｇ／ｍＬ、約８０μｇ／ｍＬ、約９０μｇ／ｍＬ、または約１００μｇ／ｍＬの濃度で存在する。いくつかの実施形態において、アジュバントは、本明細書に記載されるＭＰＬまたはＧＬＡである。いくつかの実施形態において、アジュバントは、約０．５ｍｇ／ｍＬ、約１ｍｇ／ｍＬ、約２ｍｇ／ｍＬ、約３ｍｇ／ｍＬ、約４ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ、約６ｍｇ／ｍＬ、約７ｍｇ／ｍＬ、約８ｍｇ／ｍＬ、約９ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬ、約１１ｍｇ／ｍＬ、または約１２ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する。
本明細書に記載される特定の組成物（例えば、熱安定性噴霧乾燥ワクチン組成物）における使用に適したアジュバントには、例えば、フロイント不完全アジュバントおよび完全アジュバント（Ｄｉｆｃｏ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｄｅｔｒｏｉｔ、Ｍｉｃｈ．）、Ｍｅｒｃｋ Ａｄｊｕｖａｎｔ ６５（Ｍｅｒｃｋ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｉｎｃ．、Ｒａｈｗａｙ、Ｎ．Ｊ．）、ＡＳ－２およびその誘導体（ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ Ｂｅｅｃｈａｍ、Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ、Ｐａ．）、ＡｄｄａＶａｘ（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ）、ＭＦ５９（Ｎｏｒｖａｒｔｉｓ）、ＡＳ０３（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）、ＡＳ０１Ｂ（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）、ＡＳ０２Ａ（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）などの市販のアジュバントが含まれる。
本明細書で提供されるいくつかの実施形態は、１つのアジュバントおよび第１のアジュバントとは異なる少なくとも１つのさらなるアジュバントを含有する、組成物（例えば、熱安定性乾燥粉末ワクチン組成物）を含む。例えば、本明細書で提供される組成物は、ＧＬＡおよびＧＬＡ以外の第２のアジュバントを含み得る。いくつかの実施形態において、本明細書で提供される組成物は、２つ、３つ、４つ、または５つのアジュバントを含む。いくつかの実施形態において、本明細書で提供される組成物は、２つのアジュバントを含む。
本明細書に記載されるアジュバントは、ヒト（例えば、ヒト患者）、非ヒト霊長類、哺乳動物、または認識された免疫系を有する別の高等真核生物などの対象に投与される場合、免疫応答の効力および／または寿命を改変する（すなわち、統計的に有意に増加または減少させる、特定の実施形態において、増強または向上させる）ことができるアジュバントを含む。（例えば、Ｐｏｗｅｌｌ ａｎｄ Ｎｅｗｍａｎ，“Ｖａｃｃｉｎｅ ｄｅｓｉｇｎ－－Ｔｈｅ Ｓｕｂｕｎｉｔ ａｎｄ Ａｄｊｕｖａｎｔ Ａｐｐｒｏａｃｈ”，１９９５，Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋを参照されたい）。本明細書に開示される特定の実施形態において、ＧＬＡおよび所望の抗原、ならびに任意に１つ以上のアジュバントは、免疫応答を、所望の抗原に対して向けられるように改変、例えば、誘発または増強し得る。
熱安定性噴霧乾燥（乾燥粉末）ワクチン組成物における使用のための抗原
いくつかの実施形態において、熱安定性ワクチン組成物は、抗原に対する宿主における免疫反応性または免疫応答を誘発または増強するために使用される。
いくつかの実施形態において、自己免疫抗原、アレルゲン、または癌抗原などの抗原は、宿主にすでに存在し得、ワクチン組成物は、安定なエマルジョンおよび任意に、投与される場合、対象にすでに存在する抗原に対する免疫反応性を誘発または増強するアジュバントのみを含み得る。本明細書で使用される宿主にすでに存在する抗原に対する免疫応答を誘発するための熱安定性噴霧乾燥アジュバント組成物を含むワクチン組成物のこの投与は、単剤療法である。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載されるワクチン組成物は、１つ以上の抗原を含む。
本明細書に記載される組成物の特定の実施形態、ならびにそのような組成物を生成および使用するための方法における使用のための、抗原は、任意の標的エピトープ、分子（生体分子を含む）、分子複合体（生体分子を含有する分子複合体を含む）、細胞内集合体、対象における免疫反応性の誘発または増強が望まれる細胞または組織であり得る。頻繁に、抗原という用語は、目的のポリペプチド抗原を指す。しかしながら、本明細書で使用される抗原はまた、目的のポリペプチド抗原をコードする組換え構築物（例えば、発現構築物）を指し得る。特定の好ましい実施形態において、抗原は、感染性病原体および／または感染症、癌、自己免疫疾患、アレルギー、喘息、もしくは抗原特異的免疫応答の刺激が望ましいか、もしくは有益であろう任意の他の状態に関連するエピトープ、生体分子、細胞、もしくは組織であるか、またはそれらに由来し得るか、またはそれらと免疫学的に交差反応性であり得る。
いくつかの実施形態において、抗原は、所望のレベルで対象において免疫反応性を誘発または増強するのに十分な任意の濃度で存在し得る。いくつかの実施形態において、抗原は、これらに限定されないが、約１μｇ／ｍＬ～約５ｍｇ／ｍＬ、約１μｇ／ｍＬ～約２ｍｇ／ｍＬ、約２．５μｇ／ｍＬ～約１ｍｇ／ｍＬ、約５μｇ／ｍＬ～約５００μｇ／ｍＬ、約１０μｇ／ｍＬ～約５００μｇ／ｍＬ、０．１μｇ／ｍＬ～約２５０μｇ／ｍＬ、約１μｇ／ｍＬ～約２５０μｇ／ｍＬ、約２．５μｇ／ｍＬ～約２５０μｇ／ｍＬ、約５μｇ／ｍＬ～約２５０μｇ／ｍＬ、約１０μｇ／ｍＬ～約２５０μｇ／ｍＬ、０．１μｇ／ｍＬ～約１００μｇ／ｍＬ、約１μｇ／ｍＬ～約１００μｇ／ｍＬ、約２．５μｇ／ｍＬ～約１００μｇ／ｍＬ、約５μｇ／ｍＬ～約１００μｇ／ｍＬ、０．１μｇ／ｍＬ～約５０μｇ／ｍＬ、約１μｇ／ｍＬ～約５０μｇ／ｍＬ、約２．５μｇ／ｍＬ～約５０μｇ／ｍＬ、０．１μｇ／ｍＬ～約２．５μｇ／ｍＬ、約１μｇ／ｍＬ～約２．５μｇ／ｍＬ、または約０．１μｇ／ｍＬ～約１０μｇ／ｍＬを含む、約０．１μｇ／ｍＬ～約１０ｍｇ／ｍＬの濃度範囲で存在し得る。提供される濃度は、噴霧乾燥前の水中油型エマルジョン製剤中、または乾燥粉末中、または再構成時の乾燥粉末中いずれかの抗原の濃度を指す。
特定の実施形態において、本明細書に記載される組成物（例えば、熱安定性噴霧乾燥ワクチン組成物）は、ヒトまたは他の哺乳動物病原体に対する免疫応答を誘発することができる抗原または抗原性組成物を含み、抗原または抗原性組成物は、ＨＩＶ－１、（ｔａｔ、ｎｅｆ、ｇｐ１２０、またはｇｐ１６０など）由来などのウイルス、ヒトヘルペスウイルス、例えば、ｇＤもしくはその誘導体、またはＨＳＶ１もしくはＨＳＶ２に由来するＩＣＰ２７などの前初期タンパク質、サイトメガロウイルス（（特に、ヒト）（ｇＢまたはその誘導体など）、ロタウイルス（生弱毒化ウイルスを含む）、エプスタインバーウイルス（ｇｐ３５０またはその誘導体など）、水痘帯状疱疹ウイルス（ｇｐ１、ＩＩ、およびＩＥ６３など）、またはＢ型肝炎ウイルス（例えば、Ｂ型肝炎表面抗原またはその誘導体）、Ａ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、およびＥ型肝炎ウイルスなどの肝炎ウイルス由来、あるいはパラミクソウイルス：呼吸器合胞体ウイルス（ＦおよびＧタンパク質またはその誘導体など）、パラインフルエンザウイルス、麻疹ウイルス、ムンプスウイルス、ヒト乳頭腫ウイルス（例えば、ＨＰＶ６、１１、１６、１８など）、フラビウイルス（例えば、黄熱ウイルス、デングウイルス、ダニ媒介性脳炎ウイルス、日本脳炎ウイルス）、またはインフルエンザウイルス（全生または不活化ウイルス、スプリットインフルエンザウイルス、卵もしくはＭＤＣＫ細胞で増殖、または全流感ビロソーム（Ｇｌｕｃｋ，Ｖａｃｃｉｎｅ，１９９２，１０，９１５－９２０によって記載）などの、他のウイルス病原体由来、またはそれらの精製もしくは組換えタンパク質、例えば、ＨＡ、ＮＰ、ＮＡ、もしくはＭタンパク質、またはそれらの組み合わせ）などのウイルスに由来する組成物を含み得る。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載される組成物（例えば、熱安定性噴霧乾燥ワクチン組成物）は、ヒトまたは他の哺乳動物病原体に対する免疫応答を誘発することができる抗原または抗原性組成物を含み、抗原または抗原性組成物は、Ｎ．ｇｏｎｏｒｒｈｅａおよびＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ（例えば、莢膜多糖およびそのコンジュゲート、トランスフェリン結合タンパク質、ラクトフェリン結合タンパク質、ＰｉｌＣ、アドへシン）を含む、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｓｐｐ；Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ（例えば、Ｍタンパク質またはそのフラグメント、Ｃ５Ａプロテアーゼ、リポタイコ酸）、Ｓ．ａｇａｌａｃｔｉａｅ、Ｓ．ｍｕｔａｎｓ：Ｈ．ｄｕｃｒｅｙｉ；Ｂｒａｎｈａｍｅｌｌａ ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓとしても知られるＭ．ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ（例えば、高および低分子量アドへシンおよびインバシン）を含む、Ｍｏｒａｘｅｌｌａ ｓｐｐ；Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ（例えば、パータクチン、百日咳毒素またはその誘導体、線維状赤血球凝集素、アデニル酸シクラーゼ、フィンブリエ）を含む、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｓｐｐ、Ｂ．ｐａｒａｐｅｒｔｕｓｓｉｓおよびＢ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ；Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ（例えば、ＥＳＡＴ６、抗原８５Ａ、－－Ｂ、または－－Ｃ）、Ｍ．ｂｏｖｉｓ、Ｍ．ｌｅｐｒａｅ、Ｍ．ａｖｉｕｍ、Ｍ．ｐａｒａｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、Ｍ．ｓｍｅｇｍａｔｉｓを含む、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｐｐ．；Ｌ．ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａを含む、Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ ｓｐｐ；腸管毒性Ｅ．ｃｏｌｉ（例えば、定着因子、易熱性毒素またはその誘導体、熱安定性毒素またはその誘導体）、腸管出血性Ｅ．ｃｏｌｉ、腸管病原性Ｅ．ｃｏｌｉ（例えば、志賀毒素様毒素またはその誘導体）を含む、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｓｐｐ；Ｖ．ｃｈｏｌｅｒａ（例えば、コレラ毒素またはその誘導体）を含む、Ｖｉｂｒｉｏ ｓｐｐ；Ｓ．ｓｏｎｎｅｉ、Ｓ．ｄｙｓｅｎｔｅｒｉａｅ、Ｓ．ｆｌｅｘｎｅｒｉｉを含む、Ｓｈｉｇｅｌｌａ ｓｐｐ；Ｙ．ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｃａ（例えば、Ｙｏｐタンパク質）、Ｙ．ｐｅｓｔｉｓ、Ｙ．ｐｓｅｕｄｏｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓを含む、Ｙｅｒｓｉｎｉａ ｓｐｐ；Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ（例えば、毒素、アドへシン、およびインバシン）およびＣ．ｃｏｌｉを含む、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ ｓｐｐ；Ｓ．ｔｙｐｈｉ、Ｓ．ｐａｒａｔｙｐｈｉ、Ｓ．ｃｈｏｌｅｒａｅｓｕｉｓ、Ｓ．ｅｎｔｅｒｉｔｉｄｉｓを含む、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｓｐｐ；Ｌ．ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓを含む、Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｓｐｐ．；Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ（例えば、ウレアーゼ、カタラーゼ、空胞化毒素）を含む、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｓｐｐ；Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａを含む、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｐｐ；Ｓ．ａｕｒｅｕｓ、Ｓ．ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓを含む、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐｐ．；Ｅ．ｆａｅｃａｌｉｓ、Ｅ．ｆａｅｃｉｕｍを含む、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐｐ．；Ｃ．ｔｅｔａｎｉ（例えば、破傷風毒素およびその誘導体）、Ｃ．ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ（例えば、ボツリヌス毒素およびその誘導体）、Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ（例えば、クロストリジウム毒素ＡまたはＢおよびその誘導体）を含む、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｓｐｐ．；Ｂ．ａｎｔｈｒａｃｉｓ（例えば、ボツリヌス毒素およびその誘導体）を含む、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐｐ．；Ｃ．ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ（例えば、ジフテリア毒素およびその誘導体）を含む、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｐｐ．；Ｂ．ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ（例えば、ＯｓｐＡ、ＯｓｐＣ、ＤｂｐＡ、ＤｂｐＢ）、Ｂ．ｇａｒｉｎｉｉ（例えば、ＯｓｐＡ、ＯｓｐＣ、ＤｂｐＡ、ＤｂｐＢ）、Ｂ．ａｆｚｅｌｉｉ（例えば、ＯｓｐＡ、ＯｓｐＣ、ＤｂｐＡ、ＤｂｐＢ）、Ｂ．ａｎｄｅｒｓｏｎｉｉ（例えば、ＯｓｐＡ、ＯｓｐＣ、ＤｂｐＡ、ＤｂｐＢ）、Ｂ．ｈｅｒｍｓｉｉを含む、Ｂｏｒｒｅｌｉａ ｓｐｐ．；Ｅ．ｅｑｕｉおよびヒト顆粒球エーリキア症の因子を含む、Ｅｈｒｌｉｃｈｉａ ｓｐｐ．；Ｒ．ｒｉｃｋｅｔｔｓｉｉを含む、Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ ｓｐｐ；Ｃ．ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ（例えば、ＭＯＭＰ、ヘパリン結合タンパク質）、Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ（例えば、ＭＯＭＰ、ヘパリン結合タンパク質）、Ｃ．ｐｓｉｔｔａｃｉを含む、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｓｐｐ．；Ｌ．ｉｎｔｅｒｒｏｇａｎｓを含む、Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ ｓｐｐ．；Ｔ．ｐａｌｌｉｄｕｍ（例えば、希少外膜タンパク質）、Ｔ．ｄｅｎｔｉｃｏｌａ、Ｔ．ｈｙｏｄｙｓｅｎｔｅｒｉａｅを含む、Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ ｓｐｐ．；または他の細菌性病原体などの１つ以上の細菌性病原体に由来する組成物を含み得る。
特定の実施形態において、本明細書に記載される組成物（例えば、熱安定性噴霧乾燥ワクチン組成物）は、ヒトまたは他の哺乳動物病原体に対する免疫応答を誘発することができる抗原または抗原性組成物を含み、抗原または抗原性組成物は、Ｐ．ｆａｌｃｉｐａｒｕｍを含む、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｓｐｐ．；Ｔ．ｇｏｎｄｉｉ（例えば、ＳＡＧ２、ＳＡＧＳ、Ｔｇ３４）を含む、Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ ｓｐｐ．；Ｅ．ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃａを含む、Ｅｎｔａｍｏｅｂａ ｓｐｐ．；Ｂ．ｍｉｃｒｏｔｉを含む、Ｂａｂｅｓｉａ ｓｐｐ．；Ｔ．ｃｒｕｚｉを含む、Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ ｓｐｐ．；Ｇ．ｌａｍｂｌｉａを含む、Ｇｉａｒｄｉａ ｓｐｐ．；Ｌ．ｍａｊｏｒを含む、Ｌｅｓｈｍａｎｉａ ｓｐｐ．；Ｐ．ｃａｒｉｎｉｉを含む、Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ ｓｐｐ．；Ｔ．ｖａｇｉｎａｌｉｓを含む、Ｔｒｉｃｈｏｍｏｎａｓ ｓｐｐ．などの１つ以上の寄生生物に由来するか（例えば、Ｊｏｈｎ，Ｄ．Ｔ．ａｎｄ Ｐｅｔｒｉ，Ｗ．Ａ．，Ｍａｒｋｅｌｌ ａｎｄ Ｖｏｇｅ’ｓ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｐａｒａｓｉｔｏｌｏｇｙ－－９ｔｈ Ｅｄ．，２００６，ＷＢ Ｓａｕｎｄｅｒｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ、Ｂｏｗｍａｎ，Ｄ．Ｄ．，Ｇｅｏｒｇｉｓ’Ｐａｒａｓｉｔｏｌｏｇｙ ｆｏｒ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｉａｎｓ－８ｔｈ Ｅｄ．，２００２，ＷＢ Ｓａｕｎｄｅｒｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａを参照されたい）、または（ｉ）線虫感染症（これらに限定されないが、Ｅｎｔｅｒｏｂｉｕｓ ｖｅｒｍｉｃｕｌａｒｉｓ、Ａｓｃａｒｉｓ ｌｕｍｂｒｉｃｏｉｄｅｓ、Ｔｒｉｃｈｕｒｉｓ ｔｒｉｃｈｉｕｒａ、Ｎｅｃａｔｏｒ ａｍｅｒｉｃａｎｕｓ、Ａｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ ｄｕｏｄｅｎａｌｅ、Ｗｕｃｈｅｒｅｒｉａ ｂａｎｃｒｏｆｔｉ、Ｂｒｕｇｉａ ｍａｌａｙｉ、Ｏｎｃｈｏｃｅｒｃａ ｖｏｌｖｕｌｕｓ、Ｄｒａｃａｎｃｕｌｕｓ ｍｅｄｉｎｅｎｓｉｓ、Ｔｒｉｃｈｉｎｅｌｌａ ｓｐｉｒａｌｉｓ、およびＳｔｒｏｎｇｙｌｏｉｄｅｓ ｓｔｅｒｃｏｒａｌｉｓを含む）、（ｉｉ）吸虫感染症（これらに限定されないが、Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ ｍａｎｓｏｎｉ、Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ ｈａｅｍａｔｏｂｉｕｍ、Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ ｊａｐｏｎｉｃｕｍ、Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ ｍｅｋｏｎｇｉ、Ｏｐｉｓｔｈｏｒｃｈｉｓ ｓｉｎｅｎｓｉｓ、Ｐａｒａｇｏｎｉｍｕｓ ｓｐ、Ｆａｓｃｉｏｌａ ｈｅｐａｔｉｃａ、Ｆａｓｃｉｏｌａ ｍａｇｎａ、Ｆａｓｃｉｏｌａ ｇｉｇａｎｔｉｃａを含む）、および（ｉｉｉ）条虫感染症（これらに限定されないが、Ｔａｅｎｉａ ｓａｇｉｎａｔａおよびＴａｅｎｉａ ｓｏｌｉｕｍを含む）などの、哺乳動物を感染させることができる蠕虫に由来する、組成物を含み得る。特定の実施形態は、したがって、Ｓｃｈｉｓｏｓｔｏｍａ ｓｐｐ．、Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ ｍａｎｓｏｎｉｉ、Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ ｈａｅｍａｔｏｂｉｕｍ、および／もしくはＳｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ ｊａｐｏｎｉｃｕｍに由来するか、またはＣ．ａｌｂｉｃａｎｓを含む、Ｃａｎｄｉｄａ ｓｐｐ．、Ｃ．ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓを含む、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐｐ．などの酵母に由来する抗原を含むワクチン組成物を企図し得る。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載される組成物は、結核菌群のＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ種の少なくとも２つの異種ポリペプチドを含む。結核菌群のＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ種には、伝統的に結核という疾患を引き起こすとみなされる種、ならびにＡＩＤＳを有する患者などの免疫不全患者において結核および肺疾患を引き起こすＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ環境および日和見種、例えば、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ（Ｍｔｂ）、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｏｖｉｓ、またはＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｆｒｉｃａｎｕｍ、ＢＣＧ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｖｉｕｍ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｅ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｃｅｌａｔｕｍ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｇｅｎａｖｅｎｓｅ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｍ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｋａｎｓａｓｉｉ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｉｍｉａｅ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｖａｃｃａｅ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｆｏｒｔｕｉｔｕｍ、およびＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｃｒｏｆｕｌａｃｅｕｍが含まれる（例えば、Ｈａｒｒｉｓｏｎ’ｓ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｉｎｔｅｒｎａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，ｖｏｌｕｍｅ １，ｐｐ．１００４－１０１４および１０１９－１０２０を参照されたい）。Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ種由来の抗原の配列は、容易に入手可能である。例えば、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ配列は、Ｃｏｌｅ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３９３：５３７（１９９８）で見ることができ、Ｗｅｌｌｃｏｍｅ Ｔｒｕｓｔ、Ｓａｎｇｅｒ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ、およびＩｎｓｔｉｔｕｔ Ｐａｓｔｅｕｒによって維持されるものなどのウェブサイトで見ることができる。
本明細書に記載される組成物において使用され得るＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓの他の特異的抗原は、例えば、Ｔｈ Ｒａ１２、Ｔｂ Ｈ９、Ｔｂ Ｒａ３５、Ｔｂ３８－１、Ｅｒｄ １４、ＤＰＶ、ＭＴＩ、ＭＳＬ、ｍＴＴＣ２、およびｈＴＣＣ１（ＷＯ９９／５１７４８）である。
Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓのタンパク質には、融合タンパク質およびその多型も含まれ、Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓの少なくとも２つ、好ましくは３つのポリペプチドがより大きなタンパク質に融合される。特定の実施形態において、融合タンパク質には、Ｒａ１２－ＴｂＨ９－Ｒａ３５、Ｅｒｄ１４－ＤＰＶ－ＭＴＩ、ＤＰＶ－ＭＴＩ－ＭＳＬ、Ｅｒｄ１４ＤＰＶ－ＭＴＩ－ＭＳＬ－ｍＴＣＣ２、Ｅｒｄ１４－ＤＰＶ－ＭＴＩ－ＭＳＬ、ＤＰＶ－ＭＴＩ－ＭＳＬ－ｍＴＣＣ２、ＴｂＨ９－ＤＰＶ－ＭＴＩが含まれる（ＷＯ９９１５１７４８）。使用され得る他の抗原には、ＵＳ２０１０／０１２９３９１およびＷＯ２００８／１２４６４７に記載される抗原、抗原の組み合わせ、および融合タンパク質が含まれる。
特定の実施形態において、本明細書に記載される組成物は、２つ以上の共有結合したＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ抗原、またはその免疫原性フラグメントの組み合わせを含む単離された融合タンパク質を含み、抗原は、Ｒｖ０１６４、Ｒｖ０４９６、Ｒｖ２６０８、Ｒｖ３０２０、Ｒｖ３４７８、Ｒｖ３６１９、Ｒｖ３６２０、Ｒｖ１７３８、Ｒｖ１８１３、Ｒｖ３８１０、Ｒｖ２３８９、Ｒｖ２８６６、Ｒｖ３８７６、Ｒｖ００５４、Ｒｖ０４１０、Ｒｖ０６５５、Ｒｖ０８３１、Ｒｖ１００９、Ｒｖ１０９９、Ｒｖ１２４０、Ｒｖ１２８８、Ｒｖ１４１０、Ｒｖ１５６９、Ｒｖ１７８９、Ｒｖ１８１８、Ｒｖ１８６０、Ｒｖ１８８６、Ｒｖ１９０８、Ｒｖ２２２０、Ｒｖ２０３２、Ｒｖ２６２３、Ｒｖ２８７５、Ｒｖ３０４４、Ｒｖ３３１０、Ｒｖ３８８１、Ｒｖ０５７７、Ｒｖ１６２６、Ｒｖ０７３３、Ｒｖ２５２０、Ｒｖ１２５３、Ｒｖ１９８０、Ｒｖ３６２８、Ｒｖ１８８４、Ｒｖ３８７２、Ｒｖ３８７３、Ｒｖ１５１ １、およびＲｖ３８７５、ならびに前述の配列のいずれかに対して少なくとも９０％の同一性を有する抗原からなる群から選択される。
特定の実施形態において、本明細書に記載される組成物は、抗原Ｒｖ２６０８、Ｒｖ３６１９、Ｒｖ３６２０、およびＲｖ１８１３、または抗原の組み合わせに対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む、ＩＤ９３融合タンパク質を含む。ＩＤ９３抗原は、２０１６年１１月１０日に公開された、米国特許出願第２０１６／０３２４７８３号（単一バイアルワクチン製剤）に記載されており、配列番号１～８としてその全体が参照により本明細書に組み込まれる。別の実施形態において、組成物は、抗原Ｒｖ２６０８、Ｒｖ３６１９、Ｒｖ３６２０、およびＲｖ１８１３を含む、ＩＤ９３融合タンパク質を含み、抗原の配列は、Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓに由来する。別の実施形態において、ＩＤ９３融合タンパク質は、配列番号１に示される配列、またはそれに対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態において、融合タンパク質は、配列番号２に示される配列、またはそれに対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態において、治療ワクチンは、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ抗原Ｒｖ２６０８、Ｒｖ３６２０、およびＲｖ１８１３の組み合わせ、または抗原の組み合わせに対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む融合タンパク質を含む。いくつかの実施形態において、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ抗原Ｒｖ２６０８、Ｒｖ３６２０、およびＲｖ１８１３は、Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ抗原Ｒｖ２６０８、Ｒｖ３６２０、およびＲｖ１８１３である。いくつかの実施形態において、融合タンパク質は、配列番号３もしくは４に示される配列、または配列番号３もしくは配列番号４に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態において、抗原Ｒｖ１８１３は、配列番号５のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、抗原Ｒｖ３６２０は、配列番号６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、抗原Ｒｖ２６０８は、配列番号７のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、抗原Ｒｖ３６１９は、配列番号８のアミノ酸配列を含む。当業者は、１つ以上のＮ末端アミノ酸（シグナル配列など）が除去され得ることを理解するであろう。これらの配列は、参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第８，４８６，４１４号に記載されている。いくつかの実施形態において、組成物は、ＩＤ９３融合タンパク質、またはそれをコードするポリヌクレオチドを含み、これは、米国特許出願公開第２０１０／０１２９３９１号（具体的には、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載されるように、病原性（Ｒｖ２６０８、Ｒｖ３６１９、Ｒｖ３６２０）または潜伏性（Ｒｖ１８１３）に関連するＭｔｂタンパク質のファミリーに属する４つの抗原を含む。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載される組成物は、Ｃｈｌａｍｙｄｉａの抗原を含む。Ｃｈｌａｍｙｄｉａの抗原には、例えば、高分子量タンパク質（ＨＷＭＰ）（ＷＯ９９／１７７４１）、ＯＲＦ３（ＥＰ３６６４１２）、および推定膜タンパク質（Ｐｍｐ）が含まれる。組成物の他のＣｈｌａｍｙｄｉａ抗原は、ＷＯ９９１２８４７５に記載される群から選択することができる。いくつかの実施形態において、本明細書に記載される組成物は、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅを含む、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐｐに由来する抗原（例えば、莢膜多糖およびそのコンジュゲート、ＰｓａＡ、ＰｓｐＡ、ストレプトリジン、コリン結合タンパク質）およびタンパク質抗原ニューモリシン（Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ａｃｔａ，１９８９，６７，１００７、Ｒｕｂｉｎｓ ｅｔ ａｌ．，Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ，２５，３３７－３４２）、ならびにその変異体無毒化誘導体（ＷＯ９０／０６９５１、ＷＯ９９／０３８８４）を含む。他の細菌抗原は、Ｂ型Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ（例えば、ＰＲＰおよびそのコンジュゲート）、分類不能型Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、例えば、ＯＭＰ２６を含む、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｓｐｐ．、高分子量アドヘシン、Ｐ５、Ｐ６、タンパク質Ｄおよびリポタンパク質Ｄ、ならびにフィンブリンおよびフィンブリン由来ペプチド（米国特許第５，８４３，４６４号）、またはそれらの複数のコピー多型もしくは融合タンパク質に由来する。
Ｂ型肝炎表面抗原の誘導体は、当該技術分野で周知であり、とりわけ、欧州特許出願ＥＰ－Ａ４１４３７４、ＥＰ－Ａ－０３０４５７８、およびＥＰ１９８４７４に記載されるＰｒｅＳ１、Ｐａｒｓ２ Ｓ抗原を含む。いくつかの実施形態において、本明細書に記載される組成物は、特にＣＨＯ細胞で発現される場合、ＨＩＶ－１抗原、ｇｐ１２０を含む。さらなる実施形態において、組成物は、上記で定義されるようなｇＤ２ｔを含む。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載される組成物は、性器疣贅の原因であると考えられるヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）（ＨＰＶ６またはＨＰＶ１１など）、および子宮頸部癌の原因であるＨＰＶウイルス（ＨＰＶ１６、ＨＰＶ１８など）に由来する抗原を含む。いくつかの実施形態において、組成物は、Ｌ１粒子またはカプソメアを含む性器疣贅予防または治療ワクチン、ならびにＨＰＶ６およびＨＰＶ１１タンパク質Ｅ６、Ｅ７、Ｌ１、およびＬ２から選択される１つ以上の抗原を含む融合タンパク質である。融合タンパク質の特定の形態には、ＷＯ９６／２６２７７に開示されるＬ２Ｅ７、およびＧＢ９７１７９５３．５（ＰＣＴ／ＥＰ９８／０５２８５）に開示されるタンパク質Ｄ（１／３）－Ｅ７が含まれる。いくつかの実施形態において、組成物は、ＨＰＶ１６または１８抗原を含む、ＨＰＶ子宮頸部感染症または癌、予防または治療ワクチンである。例えば、Ｌ１もしくはＬ２抗原モノマー、またはウイルス様粒子（ＶＬＰ）として一緒に提示されるＬ１もしくはＬ２抗原、またはＶＬＰもしくはカプソメア構造で単独で提示されるＬ１単独タンパク質。そのような抗原、ウイルス様粒子、およびカプソメアは、それ自体が知られている。例えば、ＷＯ９４／００１５２、ＷＯ９４／２０１３７、ＷＯ９４／０５７９２、およびＷＯ９３／０２１８４を参照されたい。
追加の初期タンパク質は、単独で、または例えば、Ｅ７、Ｅ２、もしくは好ましくはＦ５などの融合タンパク質として含まれ得、いくつかの実施形態は、Ｌ１Ｅ７融合タンパク質を含むＶＬＰを含む（ＷＯ９６／１１２７２）。いくつかの実施形態において、ＨＰＶ１６抗原は、ＨＰＶ１６からタンパク質Ｄ－Ｅ６もしくはＥ７融合体を形成するタンパク質Ｄ担体と融合した初期タンパク質Ｅ６もしくはＦ７、またはそれらの組み合わせ、あるいはＥ６またはＥ７のＬ２との組み合わせを含む（ＷＯ９６／２６２７７）。あるいは、ＨＰＶ１６または１８初期タンパク質Ｅ６およびＥ７は、単一分子、好ましくはタンパク質Ｄ－Ｅ６／Ｅ７融合体で提示され得る。そのような組成物（例えば、熱安定性噴霧乾燥ワクチン組成物）は、任意に、ＨＰＶ１８の前にＥ６およびＥ７タンパク質のいずれかまたは両方を、好ましくはタンパク質Ｄ－Ｅ６もしくはタンパク質Ｄ－Ｅ７融合タンパク質またはタンパク質Ｄ Ｅ６／Ｅ７融合タンパク質の形態で含有し得る。本発明の組成物は、他のＨＰＶ株、好ましくはＨＰＶ３１または３３に由来する抗原をさらに含み得る。
本発明の組成物は、マラリアを引き起こす寄生生物に由来する抗原をさらに含み得る。例えば、Ｐｌａｓｍｏｄｉａ ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ由来の抗原には、ＲＴＳ、Ｓ、およびＴＲＡＰが含まれる。ＲＴＳは、Ｂ型肝炎表面抗原のｐｒｅＳ２部分の４つのアミノ酸を介してＢ型肝炎ウイルスの表面（Ｓ）抗原に連結されたＰ．ｆａｌｃｉｐａｒｕｍのサーカムスポロゾイト（ＣＳ）タンパク質の実質的にすべてのＣ末端部分を含むハイブリッドタンパク質である。その完全構造は、英国特許出願第９１２４３９０．７号からの優先権を主張するＷＯ９３／１０１５２として公開された国際特許出願第ＰＣＴ／ＥＰ９２／０２５９１号に開示される。酵母で発現される場合、ＲＴＳは、リポタンパク質粒子として生成され、ＨＢＶからのＳ抗原と共発現される場合、ＲＴＳ、Ｓとして知られる混合粒子を生成する。
ＴＲＡＰ抗原は、ＷＯ９０／０１４９６として公開された国際特許出願第ＰＣＴ／ＧＢ８９／００８９５号に記載されている。本発明の一実施形態は、抗原性調製物が、ＲＴＳ、Ｓ、およびＴＲＡＰ抗原の組み合わせを含む、マラリアワクチンである。多段マラリアワクチンの成分となる候補である可能性が高い他のマラリア原虫抗原は、Ｐ．ｆａｃｉｐａｒｕｍ ＭＳＰ１、ＡＭＡ１、ＭＳＰ３、ＥＢＡ、ＧＬＵＲＰ、ＲＡＰ１、ＲＡＰ２、Ｓｅｑｕｅｓｔｒｉｎ、ＰｆＥＭＰ１、Ｐｆ３３２、ＬＳＡ１、ＬＳＡ３、ＳＴＡＲＰ、ＳＡＬＳＡ、ＰｆＥＸＰ１、Ｐｆｓ２５、Ｐｆｓ２８、ＰＦＳ２７１２５、Ｐｆｓ１６、Ｐｆｓ４８／４５、Ｐｆｓ２３０、およびＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｓｐｐにおけるそれらの類似体である。
特定の本明細書に開示される実施形態は、Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓもしくはＭ．ｌｅｐｒａｅ、または別のマイコバクテリウムなどのＡｃｔｉｎｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ；Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ、Ｂｏｒｒｅｌｉａ、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ、またはＢｏｒｄｅｔｅｌｌａ属のメンバーなどの細菌；単純ヘルペスウイルス、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、ネコ免疫不全ウイルス（ＦＩＶ）、サイトメガロウイルス、水痘帯状疱疹ウイルス、肝炎ウイルス、エプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）、呼吸器合胞体ウイルス、ヒト乳頭腫ウイルス（ＨＰＶ）、およびサイトメガロウイルスなどのウイルス；ＨＩＶ－１またはＨＩＶ－２などのＨＩＶ；Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ、Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ、Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ、およびＰｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉなどの真菌、またはＣ．ａｌｂｉｃａｎｓ、Ｃ．ｇｌａｂｒａｔａ、Ｃ．ｋｒｕｓｅｉ、Ｃ．ｌｕｓｉｔａｎｉａｅ、Ｃ．ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ、およびＣ．ｐａｒａｐｓｉｌｏｓｉｓなどのＣａｎｄｉｄａ種を含む、酵母；原虫などの寄生生物、例えば、Ｐ．ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ、Ｐ．ｖｉｖａｘ、Ｐ．ｍａｌａｒｉａｅ、およびＰ．ｏｖａｌｅを含むＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ種；またはＡｃａｎｔｈａｍｏｅｂａ、Ｅｎｔａｍｏｅｂａ ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃａ、Ａｎｇｉｏｓｔｒｏｎｇｙｌｕｓ、Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ ｍａｎｓｏｎｉｉ、Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ ｈａｅｍａｔｏｂｉｕｍ、Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ ｊａｐｏｎｉｃｕｍ、Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ、Ａｎｃｙｌｏｓｔｏｍａ、Ｅｎｔａｍｏｅｂａ ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃａ、Ｅｎｔａｍｏｅｂａ ｃｏｌｉ、Ｅｎｔａｍｏｅｂａ ｄｉｓｐａｒ、Ｅｎｔａｍｏｅｂａ ｈａｒｔｍａｎｎｉ、Ｅｎｔａｍｏｅｂａ ｐｏｌｅｃｋｉ、Ｗｕｃｈｅｒｅｒｉａ ｂａｎｃｒｏｆｔｉ、Ｇｉａｒｄｉａ、およびＬｅｉｓｈｍａｎｉａのうちの１つ以上などの別の寄生生物を含む、細菌、ウイルス、または真菌などの少なくとも１つの感染性病原体に由来する抗原を企図する。
例えば、Ｂｏｒｒｅｌｉａ ｓｐ．に由来する抗原を含有する組成物の実施形態において、抗原は、核酸、病原体由来抗原または抗原性調製物、組換え的に生成されたタンパク質またはペプチド、およびキメラ融合タンパク質を含み得る。１つのそのような抗原は、ＯｓｐＡである。ＯｓｐＡは、宿主細胞におけるその生合成による脂質化形態の完全成熟タンパク質（Ｌｉｐｏ－ＯｓｐＡ）であってもよく、またはあるいは非脂質化誘導体であってもよい。そのような非脂質化誘導体には、インフルエンザウイルスの非構造タンパク質（ＮＳ１）の最初の８１個のＮ末端アミノ酸を有する非脂質化ＮＳ１－ＯｓｐＡ融合タンパク質、および完全ＯｓｐＡタンパク質が含まれ、別の、ＭＤＰ－ＯｓｐＡは、３個の追加のＮ末端アミノ酸を有するＯｓｐＡの非脂質化形態である。
本明細書に記載される感染性病原体での感染症を有するか、またはそれを有するリスクがあると疑われる対象を特定するための組成物および方法が当該技術分野で知られている。
例えば、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓという細菌は、結核（ＴＢ）を引き起こす。細菌は、通常、肺を攻撃するが、腎臓、脊椎、および脳も攻撃することができる。適切に治療されない場合、ＴＢ疾患は、致死的であり得る。疾患は、感染者がくしゃみまたは咳をするとき、空中で人から人へと蔓延する。２００３年、米国では１４，０００件を超えるＴＢが報告された。
結核は、一般に、長期抗生物質療法を使用して制御することができるが、そのような治療は、疾患の蔓延を防止するために十分ではなく、抗生物質耐性株の潜在的な選択に関する懸念が存在する。感染した個体は、しばらくの間、無症候性であるが、伝染性であり得る。加えて、治療レジメンの遵守は重要であるが、患者挙動は監視が困難である。一部の患者は、治療の経過を完了せず、これは効果のない治療および薬物耐性の発生につながり得る。（例えば、米国特許第７，０８７，７１３号）。
現在、生菌によるワクチン接種は、結核に対する防御免疫を誘導するための最も効率的な方法である。この目的で使用される最も一般的なＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍは、ウシ型Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍの非病原性株であるＢａｃｉｌｌｕｓ Ｃａｌｍｅｔｔｅ－Ｇｕｅｒｉｎ（ＢＣＧ）である。しかしながら、ＢＣＧの安全性および有効性は論争の源であり、米国などの一部の国は一般市民にワクチン接種しない。診断は、一般的には、ツベルクリンＰＰＤ（タンパク質精製誘導体）への皮内曝露を含む、皮膚検査を使用して達成される。抗原特異的Ｔ細胞応答は、注射の４８～７２時間後までに注射部位で測定可能な硬結をもたらし、これはＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ抗原への曝露を示す。感度および特異性は、この試験の問題であるが、ＢＣＧでワクチン接種された個体を感染した個体を区別することはできない。（例えば、米国特許第７，０８７，７１３号）。
マクロファージは、Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ免疫の主要なエフェクターとして作用することが示されているが、Ｔ細胞はそのような免疫の重要なインデューサーである。Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ感染に対する保護におけるＴ細胞の重要な役割は、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）感染に関連するＣＤ４ Ｔ細胞の枯渇により、ＡＩＤＳ患者におけるＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓの頻繁な発生によって示される。Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ反応性ＣＤ４ Ｔ細胞は、γ－インターフェロン（ＩＦＮ－γ）の強力なプロデューサーであることが示されており、これはひいては、マウスにおいてマクロファージの抗マイコバクテリア効果を誘導することが示されている。ヒトにおけるＩＦＮ－γの役割は、あまり明確ではないが、研究は、１，２５－ジヒドロキシ－ビタミンＤ３が、単独で、またはＩＦＮ－γもしくは腫瘍壊死因子－αと組み合わせて、ヒトマクロファージを活性化してＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ感染を阻害することを示している。さらに、ＩＦＮ－γは、ヒトマクロファージを刺激して１，２５－ジヒドロキシ－ビタミンＤ３を作製することが知られている。同様に、ＩＬ－１２は、Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ感染に対する抵抗性の刺激において役割を果たすことが示されている。Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ感染の免疫学の概説については、Ｃｈａｎ ａｎｄ Ｋａｕｆｍａｎｎ，ｉｎ Ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ：Ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｏｎｔｒｏｌ，Ｂｌｏｏｍ（ｅｄ．），ＡＳＭ Ｐｒｅｓｓ．Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．（１９９４）を参照されたい。
結核を診断するため、または結核に対する防御免疫を誘導するための既存の化合物および方法には、１つ以上のＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍタンパク質の少なくとも１つの免疫原性部分を含有するポリペプチドおよびそのようなポリペプチドをコードするＤＮＡ分子の使用が含まれる。そのようなポリペプチドまたはＤＮＡ配列および適切な検出試薬を含有する診断キットは、患者および生物学的試料におけるＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ感染の検出に使用され得る。そのようなポリペプチドに対する抗体も提供される。加えて、そのような化合物は、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ感染に対する免疫化のための本明細書に記載される組成物に製剤化され得る。（米国特許第６，９４９，２４６号および同第６，５５５，６５３号）。
マラリアは、１９６０年代に世界の多くの地域では根絶されたが、疾患は、依然として存続し、既存の薬物に耐性のある疾患の新しい株が出現している。マラリアは、９０を超える国で主要な公衆衛生問題である。マラリアの１０症例中の９症例は、サハラ以南のアフリカで発生する。世界の人口の３分の１超にリスクがあり、毎年３億５０００万～５億人がマラリアに感染している。今年、４５００万人の妊婦がマラリアに罹患するリスクがある。すでに感染した個体のうち、毎年１００万人超が予防可能な疾患で死亡する。それらの死亡の大部分は、アフリカの子どもたちである。
マラリアは、通常、感染した雌Ａｎｏｐｈｅｌｅｓ ｍｏｓｑｕｉｔｏに刺されたときに伝播する。伝播するには、蚊は、すでにマラリアに感染している人から吸血していることによって感染している必要がある。マラリアは、寄生生物によって引き起こされ、疾患の臨床症状には、発熱およびインフルエンザ様症状、例えば、悪寒、頭痛、筋肉痛、および倦怠感が含まれる。これらの症状は、悪心、嘔吐、および下痢を伴う場合がある。マラリアはまた、赤血球の損失のために貧血および黄疸を引き起こし得る。
マラリアの一種、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｆａｌｃｉｐａｒｕｍでの感染症は、迅速に治療されない場合、腎不全、発作、精神錯乱、昏睡、および死亡を引き起こし得る。
個体におけるマラリアのためのインビトロ診断方法が知られており、個体から採取された組織または生体液を分子またはポリペプチド組成物と接触させることを含み、当該分子またはポリペプチド組成物は、当該組成物と、組織または生体液中に存在し得る抗体と、の間で起こるインビトロ免疫学的反応、および形成された抗原－抗体複合体のインビトロ検出を可能にする条件下、Ｐ．ｆａｌｃｉｐａｒｕｍの感染活性に起因するタンパク質の１つ以上のＴエピトープの全部または一部を有する１つ以上のペプチド配列を含む（例えば、米国特許第７，０８７，２３１号を参照されたい）。
組換えＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ（３Ｄ７）ＡＭＡ－１エクトドメインの発現および精製が記載されている。以前の方法は、ネイティブ分子のフォールディングおよびジスルフィド架橋を保持する高度に精製されたタンパク質を生成している。組換えＡＭＡ－１は、診断試薬として、ならびに抗体産生において、および単独での使用のためのタンパク質として、またはマラリアを予防するためのワクチンの一部として有用である。（米国特許第７，０２９，６８５号）。感染後に感受性哺乳動物宿主の血漿に分泌されるタンパク質またはタンパク質のフラグメントである種特異的Ｐ．ｖｉｖａｘマラリアペプチド抗原をコードするポリヌクレオチドが当該技術分野で記載されており、これらの抗原に対するモノクローナルまたはポリクローナル抗体も同様である。ペプチド抗原、モノクローナル抗体、および／またはポリクローナル抗体は、マラリアを診断するため、およびＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｖｉｖａｘが感染症の原因となっている種であるかを決定するために使用されるアッセイにおいて利用される。（米国特許第６，７０６，８７２号）感染後に感受性哺乳動物宿主の血漿に分泌されるタンパク質またはタンパク質のフラグメントである種特異的Ｐ．ｖｉｖａｘマラリアペプチド抗原も報告されており、これらの抗原に対するモノクローナルまたはポリクローナル抗体も同様である。ペプチド抗原、モノクローナル抗体、および／またはポリクローナル抗体は、マラリアを診断するため、およびＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｖｉｖａｘが感染症の原因となっている種であるかを決定するために使用されるアッセイにおいて利用される（例えば、米国特許第６，２３１，８６１号を参照されたい）。
組換えＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ（３Ｄ７）ＡＭＡ－１エクトドメインはまた、ネイティブ分子のフォールディングおよびジスルフィド架橋を保持する高度に精製されたタンパク質を生成する方法によって発現されている。組換えＡＭＡ－１は、診断試薬として、抗体産生における使用のために、およびワクチンとして有用である。（米国特許第７，０６０，２７６号）同様に、ネイティブ分子のフォールディングおよびジスルフィド架橋を保持する、組換えＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ（３Ｄ７）ＭＳＰ－１４２の発現および精製が知られている。組換えＭＳＰ－１４２は、診断試薬として、抗体産生における使用のために、およびワクチンとして有用である。（米国特許第６，８５５，３２２号）。
マラリア感染性病原体での感染症を有するか、またはそれを有するリスクがあると疑われる対象を特定するヒトマラリア感染症の検出のための診断方法は、よってこれらおよび関連する開示に従って知られている。具体的には、例えば、血液試料は、３－アセチルピリジンアデニンジヌクレオチド（ＡＰＡＤ）、基質（例えば、乳酸塩または乳酸）、および緩衝剤を含有する試薬と組み合わされる。試薬は、マラリア原虫によって生成される独自の解糖酵素の存在を検出するように設計される。この酵素は、寄生生物乳酸デヒドロゲナーゼ（ＰＬＤＨ）として知られている。ＰＬＤＨは、上記の試薬を使用して宿主ＬＤＨから容易に区別可能である。試薬と寄生血液試料との組み合わせは、ＡＰＡＤの低減をもたらす。しかしながら、ＡＰＡＤは、宿主ＬＤＨによって低減されない。低減したＡＰＡＤは、次いでスペクトル、蛍光、電気泳動、または比色分析を含む、様々な技法によって検出され得る。
前述の方法で低減したＡＰＡＤの検出は、マラリア感染の肯定的な兆候を提供する（例えば、米国特許第５，１２４，１４１号）。マラリアを診断するための別の方法論において、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ抗原ＧＬＵＲＰに由来する特徴的なアミノ酸配列を含むポリペプチドは、ポリペプチドに対して産生されるか、またはそれと反応性である特異的抗体によって試験試料において認識される。（米国特許第５，２３１，１６８号）。
リーシュマニア症は、インド亜大陸、アフリカ、およびラテンアメリカで頻繁に流行する広範な寄生虫症であり、ワクチン開発についての世界保健機関の優先事項である。異なる疾患の複合体、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ寄生生物は、内臓の致命的な感染症、および重度の皮膚疾患を引き起こす。リーシュマニア症の最も破壊的な形態の１つは、鼻および口の外観を損なう感染症である。リーシュマニア症の症例数は増加しており、現在多くの地域で制御不能である。リーシュマニア症は、ＨＩＶ感染の結果として、一部の先進国、特に南ヨーロッパでも増加している。利用可能な薬物は、毒性であり、高価であり、長期間の毎日の注射を必要とする。
Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａは、マクロファージまたは免疫系の白血球に生息する寄生原虫である。寄生生物は、地球の広大な地域に生息するため、制御が難しい、小さな吸血昆虫（サシチョウバエ）に咬まれることによって伝播する。
内臓リーシュマニア症は、疾患の３つの症状の中で最も危険である。毎年約５０万の内臓形態（カラアザールまたは「死病」）の新規症例が発生すると推定される。現在、２億人超は、内臓リーシュマニア症に罹患するリスクがある。内臓リーシュマニア症の症例の９０％超は、インド、バングラデシュ、スーダン、ブラジル、およびネパールで発生する。死亡のほとんどは子どもたちに起こる。皮膚形態を有するものは、多くの場合、永久的に外観を損なわれたままとなる。
Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ感染症は、診断が難しく、典型的には、組織生検標本の組織病理学的分析を含む。しかしながら、いくつかの血清学的および免疫学的診断アッセイが開発されている。（米国特許第７，００８，７７４号、Ｓｅｎａｌｄｉ ｅｔ ａｌ．，（１９９６）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ １９３：９ ５、Ｚｉｊｌｓｔｒａ，ｅｔ ａｌ．，（１９９７）Ｔｒａｎｓ．Ｒ．Ｓｏｃ．Ｔｒｏｐ．Ｍｅｄ．Ｈｙｇ．９１：６７１ ６７３、Ｂａｄａｒｏ，ｅｔ ａｌ．，（１９９６）Ｊ．Ｉｎｆ．Ｄｉｓ．１７３：７５８ ７６１、Ｃｈｏｕｄｈａｒｙ，Ｓ．，ｅｔ ａｌ．，（１９９２）Ｊ．Ｃｏｍｍ．Ｄｉｓ．２４：３２ ３６、Ｂａｄａｒｏ，Ｒ．，ｅｔ ａｌ．，（１９８６）Ａｍ．Ｊ．Ｔｒｏｐ．Ｍｅｄ．Ｈｙｇ．３５：７２ ７８、Ｃｈｏｕｄｈａｒｙ，Ａ．，ｅｔ ａｌ．，（１９９０）Ｔｒａｎｓ．Ｒ．Ｓｏｃ．Ｔｒｏｐ．Ｍｅｄ．Ｈｙｇ．８４：３６３ ３６６、およびＲｅｅｄ，Ｓ．Ｇ．，ｅｔ ａｌ．，（１９９０）Ａｍ．Ｊ．Ｔｒｏｐ．Ｍｅｄ．Ｈｙｇ．４３：６３２ ６３９）。プロマスチゴートは、代謝産物を培養培地に放出して、条件培地を生成する。これらの代謝産物は、宿主に対して免疫原性である。Ｓｃｈｎｕｒ，Ｌ．Ｆ．，ｅｔ ａｌ．，（１９７２）ｌｓｒｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｓｃｉ．８：９３２ ９４２、Ｓｅｒｇｅｉｅｖ，Ｖ．Ｐ．，ｅｔ ａｌ．，（１９６９）Ｍｅｄ．Ｐａｒａｓｉｔｏｌ．３８：２０８ ２１２、Ｅｌ－Ｏｎ，Ｊ．，ｅｔ ａｌ．，（１９７９）Ｅｘｐｅｒ．Ｐａｒａｓｉｔｏｌ．４７：２５４ ２６９、およびＢｒａｙ，Ｒ．Ｓ．，ｅｔ ａｌ．，（１９６６）Ｔｒａｎｓ．Ｒ．Ｓｏｃ．Ｔｒｏｐ．Ｍｅｄ．Ｈｙｇ．６０：６０５ ６０９、米国特許第６，８４６，６４８号、米国特許第５，９１２，１６６号、米国特許第５，７１９，２６３号、米国特許第５，４１１，８６５号を参照されたい）。
いくつかの実施形態において、抗原は、参照により本明細書に組み込まれる、ＵＳ２００９／００４１７９８、ＵＳ２００９／０２９１０９９、米国特許第８，４１０，２５８号、米国特許第８，２３１，８８１号、およびＷＯ２０１２／０６４６５９に記載されるＬｅｉｓｈｍａｎｉａ抗原である。いくつかの実施形態において、抗原は、少なくともＬｅｉｓｈｍａｎｉａステロール２４－ｃ－メチルトランスフェラーゼ（ＳＭＴ）ポリペプチド配列およびＬｅｉｓｈｍａｎｉａ非特異的ヌクレオシドヒドロラーゼ（ＮＨ）ポリペプチド配列を含む融合ポリペプチドである。いくつかの実施形態において、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ ＮＨポリペプチド配列は、Ｌ．ｄｏｎｏｖａｎｉ、Ｌ．ｉｎｆａｎｔｕｍ、およびＬ．ｍａｊｏｒのＬｅｉｓｈｍａｎｉａ ＮＨ配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列の少なくとも免疫原性部分を含む。いくつかの実施形態において、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ ＮＨポリペプチド配列は、配列番号１、３、および５からなる群から選択される配列、またはそれに対して少なくとも９０％の同一性を有する配列の少なくとも免疫原性部分を含む。いくつかの実施形態において、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ ＳＭＴポリペプチド配列は、Ｌ．ｄｏｎｏｖａｎｉ、Ｌ．ｉｎｆａｎｔｕｍ、およびＬ．ｍａｊｏｒのＬｅｉｓｈｍａｎｉａ ＳＭＴ配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列の少なくとも免疫原性部分を含む。いくつかの実施形態において、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ ＳＭＴポリペプチド配列は、配列番号７、９、および１１からなる群から選択される配列、またはそれに対して少なくとも９０％の同一性を有する配列の少なくとも免疫原性部分を含む。いくつかの実施形態において、融合ポリペプチドは、配列番号１３に示されるアミノ酸配列、またはそれに対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む。配列番号１、３、５、７、９、１１、および１３の配列は、参照により本明細書に組み込まれる、ＷＯ２０１２／０６４６５９およびＵＳ２０１２／０１１４６８８に提供される。
世界中で約４０００万人が、ＡＩＤＳを引き起こすウイルスであるＨＩＶに感染している。毎年約３００万人が疾患で死亡し、その９５％が発展途上世界である。毎年、５００万人近くがＨＩＶに感染する。現在、サハラ以南に住むアフリカ人が疾患の最も高い負担を有するが、インド、中国、およびロシアなどの他の国へも急速に蔓延している。エピデミックは、マイノリティ人口の間で最も急速に拡大している。米国では、１９８１年以来９５万件超のＡＩＤＳが報告されている。ＡＩＤＳは、生殖適齢期に人々を襲う。女性は、生物学的および社会的理由の両方で、ＨＩＶ／ＡＩＤＳの増加したリスクを有する。
ＡＩＤＳは、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）によって引き起こされ、これは体の免疫系の細胞を殺滅および損傷し、感染症および特定の癌と闘う体の能力を徐々に破壊する。ＨＩＶは、最も一般的には、感染したパートナーと無防備な性交渉を行うことによって蔓延する。問題に対する最も堅牢な解決策は、ウイルスの蔓延するのを防止することである。安全、効果的、および手頃な価格のＨＩＶワクチンを作製することは、この目標を達成するための１つの方法である。世界中で、ＨＩＶ感染のリスクが高い５人に１人未満が効果的な予防へのアクセスを有する。
ウイルス培養、患者標本からの決定的核酸配列のＰＣＲ、および患者血清中の抗ＨＩＶ抗体の存在についての抗体検査を含む、ＨＩＶ感染を診断するための方法が知られている（例えば、米国特許第６，９７９，５３５号、同第６，５４４，７２８号、同第６，３１６，１８３号、同第６，２６１，７６２号、同第４，７４３，５４０号を参照されたい）。
本明細書に開示される特定の他の実施形態によれば、組成物および使用方法は、癌の免疫療法治療に有用であり得るように、癌細胞に由来する抗原を含み得る。例えば、組成物は、前立腺癌、乳癌、結腸直腸癌、肺癌、膵臓癌、腎癌、または黒色腫癌のものなどの腫瘍拒絶抗原に有用性を見出し得る。例示的な癌または癌細胞由来抗原には、ＭＡＧＥ １、３、およびＭＡＧＥ ４、またはＷＯ９９／４０１８８に開示されるものなどの他のＭＡＧＥ抗原、ＰＲＡＭＥ、ＢＡＧＥ、Ｌａｇｅ（ＮＹ Ｅｏｓ １としても知られる）ＳＡＧＥおよびＨＡＧＥ（ＷＯ９９／５３０６１）、またはＧＡＧＥ（Ｒｏｂｂｉｎｓ ａｎｄ Ｋａｗａｋａｍｉ，１９９６ Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ８，ｐｐｓ ６２８－６３６、Ｖａｎ ｄｅｎ Ｅｙｎｄｅ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ＆Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ（１９９７＆１９９８）、Ｃｏｒｒｅａｌｅ ｅｔ ａｌ．（１９９７），Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ８９，ｐ．２９３）が含まれる。癌抗原のこれらの非限定的な例は、黒色腫、肺癌、肉腫、および膀胱癌などの広範囲の腫瘍タイプで発現される。例えば、米国特許第６，５４４，５１８号を参照されたい。他の腫瘍特異的抗原は、本明細書に記載される組成物における使用に適しており、これらに限定されないが、ＧＭ２、ＧＭ３、もしくは担体タンパク質へのそのコンジュゲートを含むか、または抗癌免疫応答を誘発もしくは増強するためのＧＬＡワクチン組成物における使用のための抗原は、多くの癌の治療において有用な、全長ゴナドトロピンホルモン放出ホルモン（ＧｎＲＨ、ＷＯ９５／２０６００）、短い１０アミノ酸長ペプチドなどの自己ペプチドホルモンであり得る。
別の実施形態において、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）、ＰＡＰ、ＰＳＣＡ（例えば、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９５（４）１７３５－１７４０ １９９８）、ＰＳＭＡ、または好ましい実施形態においてプロスターゼとして知られる抗原などの、前立腺抗原が使用される。（例えば、Ｎｅｌｓｏｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ（１９９９）９６：３１１４－３１１９、Ｆｅｒｇｕｓｏｎ，ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １９９９．９６，３１１４－３１１９、ＷＯ９８／１２３０２、米国特許第５，９５５，３０６号、ＷＯ９８／２０１１７、米国特許第５，８４０，８７１号および同第５，７８６，１４８号、ＷＯ００／０４１４９）。他の前立腺特異抗原は、ＷＯ９８／１３７４１８およびＷＯ／００４１４９から知られている。もう１つは、ＳＴＥＡＰである（ＰＮＡＳ ９６ １４５２３ １４５２８ ７－１２ １９９９）。
本発明の文脈で有用な他の腫瘍関連抗原には、Ｐｌｕ－１（Ｊ Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ ２７４（２２）１５６３３－１５６４５，１９９９）、ＨＡＳＨ－１、ＨａｓＨ－２、Ｃｒｉｐｔｏ（Ｓａｌｏｍｏｎ ｅｔ ａｌ Ｂｉｏｅｓｓａｙｓ １９９，２１：６１－７０、米国特許第５，６５４，１４０号）、およびＣｒｉｐｔｉｎ（米国特許第５，９８１，２１５号）が含まれる。加えて、癌の療法におけるワクチンに特に関連する抗原には、チロシナーゼおよびサバイビンも含まれる。
癌抗原を含む組成物に関する本明細書に開示される実施形態は、ＨＥＲ－２／ｎｅｕ発現または他の癌特異的もしくは癌関連抗原などの、腫瘍関連抗原発現を特徴とする任意の癌に対して有用であり得る。
癌を有するか、または癌を有するリスクがあると疑われる対象における癌の診断は、広範囲の当該技術分野で認められる方法論のいずれかによって達成され得、これは臨床症状、癌の進行の程度、癌の種類、および他の因子を含む様々な因子に応じて様々であり得る。癌診断の例には、患者試料（例えば、血液、皮膚生検、他の組織生検、外科標本など）の組織病理学的、組織細胞化学的、免疫組織細胞化学的、および免疫組織病理学的検査、定義された遺伝子（例えば、核酸）マーカーのＰＣＲ検査、循環する癌関連抗原もしくはそのような抗原を有する細胞、または定義された特異性の抗体の血清学的試験、あるいは当業者が精通しているであろう他の方法論が含まれる。例えば、米国特許第６，７３４，１７２号、同第６，７７０，４４５号、同第６，８９３，８２０号、同第６，９７９，７３０号、同第７，０６０，８０２号、同第７，０３０，２３２号、同第６，９３３，１２３号、同第６，６８２，９０１号、同第６，５８７，７９２号、同第６，５１２，１０２号、同第７，０７８，１８０号、同第７，０７０，９３１号、ＪＰ５－３２８９７５、Ｗａｓｌｙｌｙｋ ｅｔ ａｌ．，１９９３ Ｅｕｒ．Ｊ Ｂｉｏｃｈ．２１１（７）：１８を参照されたい。
本発明の特定の実施形態による組成物および方法はまた、宿主または対象の免疫系が「自己」組織、細胞、生体分子（例えば、ペプチド、ポリペプチド、タンパク質、糖タンパク質、リポタンパク質、プロテオ脂質、脂質、糖脂質、ＲＮＡおよびＤＮＡなどの核酸、オリゴ糖、多糖、プロテオグリカン、グリコサミノグリカンなど、ならびに対象細胞および組織の他の分子成分）、またはエピトープ（例えば、抗体可変領域相補性決定領域（ＣＤＲ）によって、またはＴ細胞受容体ＣＤＲによって認識されるものなどの特定の免疫学的に定義される認識構造）に対して向けられる免疫応答を有害に媒介する疾患、状態、または障害を含む、自己免疫疾患の予防または治療に使用され得る。
自己免疫疾患は、よって、いずれの場合にも正常な自家組織に対して向けられる細胞または抗体のいずれかが関与する異常な免疫応答を特徴とする。哺乳動物における自己免疫疾患は、一般に、２つの異なるカテゴリー：細胞媒介性疾患（すなわち、Ｔ細胞）または抗体媒介性障害のうちの１つに分類することができる。細胞媒介性自己免疫疾患の非限定的な例には、多発性硬化症、リウマチ性関節炎、橋本甲状腺炎、Ｉ型糖尿病（若年発症型糖尿病）、および自己免疫性ブドウ膜網膜炎が含まれる。抗体媒介性自己免疫障害には、重症筋無力症、全身性エリテマトーデス（またはＳＬＥ）、グレーブス病、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性血小板減少症、自己免疫性喘息、クリオグロブリン血症、血栓性血小板減少性紫斑病、原発性硬化性胆管炎、および悪性貧血が含まれるが、これらに限定されない。全身性エリテマトーデスに関連する抗原は、核内低分子リボ核酸タンパク質（ｓｎＲＮＰ）であり、グレーブス病のそれは、チロトロピン受容体、チログロブリン、および甲状腺上皮細胞の他の成分であり（Ａｋａｍｉｚｕ ｅｔ ａｌ．，１９９６、Ｋｅｌｌｅｒｍａｎ ｅｔ ａｌ．，１９９５、Ｒａｊｕ ｅｔ ａｌ．，１９９７、およびＴｅｘｉｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９９２）、天疱瘡のそれは、デスモグレイン３および他の接着分子などのカドヘリン様天疱瘡抗原であり（Ｍｅｍａｒ ｅｔ ａｌ．，１９９６、Ｓｔａｎｌｅｙ，１９９５、Ｐｌｏｔｔ ｅｔ ａｌ．，１９９４、およびＨａｓｈｉｍｏｔｏ，１９９３）、血栓性血小板減少性紫斑病のそれは、血小板の抗原である。（例えば、米国特許第６，９２９，７９６号、Ｇｏｒｓｋｉ ｅｔ ａｌ．（Ｅｄｓ．），Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙ，２００１，Ｋｌｕｗｅｒ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｎｏｒｗｅｌｌ，Ｍａｓｓ．、Ｒａｄｂｒｕｃｈ ａｎｄ Ｌｉｐｓｋｙ，Ｐ．Ｅ．（Ｅｄｓ．）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｃｏｎｃｅｐｔｓ ｉｎ Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙ ａｎｄ Ｃｈｒｏｎｉｃ Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ（Ｃｕｒｒ．Ｔｏｐ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｏｌ．）２００１，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，ＮＹを参照されたい。）
自己免疫は、１型糖尿病、多発性硬化症、狼瘡、リウマチ性関節炎、強皮症、および甲状腺疾患を含む、８０を超える異なる疾患において役割を果す。ほとんどの自己免疫疾患についての罹患率の精力的な定量的推定は欠けている。１９９０年代後半に行われた最近の研究は、自己免疫疾患が米国で３番目に一般的な主要な病気であり、最も一般的な自己免疫疾患が８５０万人超のアメリカ人に影響を及ぼすことを明らかにする。疾患の有病率の現在の推定値は、米国人口の５～８パーセントの範囲である。ほとんどの自己免疫疾患は、女性に不釣り合いに影響を及ぼす。女性は、自己免疫疾患にかかる可能性が男性よりも２．７倍高い。女性は、自己免疫疾患の影響をより受けやすく、男性は、女性よりも高レベルのナチュラルキラー細胞活性を有すると思われる。（Ｊａｃｏｂｓｅｎ ｅｔ ａｌ，Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ，８４：２２３－２４３，１９９７．）
自己免疫疾患は、免疫系が自己組織を非自己と間違え、不適切な攻撃を仕掛ける場合に発症する。体は、例えば、腸（クローン病）および脳（多発性硬化症）を含む、自己免疫疾患とは異なる方法で影響を受け得る。自己抗体が自己細胞または自己組織を攻撃してそれらの機能を損傷し、結果として、自己免疫疾患を引き起こすこと、自己抗体が自己免疫疾患の実際の発症（例えば、臨床的兆候および症状の出現）前に患者の血清中で検出され得ることが知られている。よって、自己抗体の検出は、自己免疫疾患の存在またはこれを発症するリスクの早期発見または認識を可能にする。これらの所見に基づいて、自己抗原に対する様々な自己抗体が発見され、自己抗原に対する自己抗体が臨床試験において測定されている（例えば、米国特許第６，９１９，２１０号、同第６，５９６，５０１号、同第７，０１２，１３４号、同第６，９１９，０７８号）が、他の自己免疫診断は、関連代謝産物（例えば、米国特許第４，６５９，６５９号）または免疫学的反応性（例えば、米国特許第４，６１４，７２２号および同第５，１４７，７８５号、同第４，４２０，５５８号、同第５，２９８，３９６号、同第５，１６２，９９０号、同第４，４２０，４６１号、同第４，５９５，６５４号、同第５，８４６，７５８号、同第６，６６０，４８７号）の検出を含み得る。
特定の実施形態において、本発明の組成物は、腎臓透析の対象、化学療法および／または放射線療法の対象、移植レシピエントなどを含む、高齢者および／または免疫抑制者の治療に特に適用可能であろう。そのような個体は、一般に、ワクチンに対する低下した免疫応答を示し、したがって、本発明の組成物の使用は、これらの対象において達成される免疫応答を増強することができる。
他の実施形態において、本発明の組成物において使用される抗原（複数可）には、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）などの状態の予防および療法のための、細菌感染（例えば、肺炎球菌）によって引き起こされるか、または悪化されるものなどの、呼吸器疾患に関連する抗原が含まれる。ＣＯＰＤは、慢性気管支炎および／または肺気腫を有する患者における不可逆的または部分的に可逆的な気道閉塞の存在によって生理学的に定義される（Ａｍ Ｊ Ｒｅｓｐｉｒ Ｃｒｉｔ Ｃａｒｅ Ｍｅｄ．１９９５ Ｎｏｖｅｍｂｅｒ；１５２（５ Ｐｔ ２）：５７７－１２１）。ＣＯＰＤの悪化は、多くの場合、細菌（例えば、肺炎球菌）感染によって引き起こされる（Ｃｌｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｒｅｖ．２００１ Ａｐｒｉｌ；１４（２）：３３６－６３）。
熱安定性組成物における使用のための油
特定の実施形態は、油を含む本明細書に記載される組成物を企図し、これは、いくつかのそのような実施形態において、アジュバント活性に寄与し得、他のそのような実施形態において、追加的または代替的に、薬学的に許容される担体または賦形剤を提供し得る。任意の数の適切な油が知られており、本開示に基づいて組成物に含めるために選択され得る。そのような油の例には、限定ではなく例示として、スクアレン、合成スクアレン、生合成スクアレン、鉱物油、ブドウ種子油、合成イソプレノイド、生合成イソプレノイド、ポリプレノール、オリーブ油、コレステロール、およびモノオレイン酸マンニドが含まれる。
本明細書で企図される油は、エマルジョンシステムで使用することができ、そのようなエマルジョンシステムは、エマルジョンアジュバントと呼ばれる。エマルジョンアジュバントには、水中油型、油中水型、または水中油中水型混合物が含まれる。理論によって縛られることなく、そのようなエマルジョンアジュバントは、抗原の徐放を可能にして免疫系の持続的刺激を提供することによって機能することができる。特定のエマルジョンアジュバントは、限定されないが、ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＣｐＧ ＯＤＮ）、グルコピラノシル脂質アジュバント（ＧＬＡ）、モノホスホリルリピドＡ（ＭＬＡ）、および３－脱アシル化モノホスホリルリピドＡ（３Ｄ－ＭＬＡ）などの免疫刺激性アジュバントを含む他のアジュバントのための送達システムとしても使用することができる。単相または多相エマルジョンシステムを含む、アジュバント組成物を製剤化するための特定のエマルジョンシステムが記載されている。水中油型エマルジョンアジュバント自体は、アジュバント組成物として有用であることが示されており（ＥＰ０３９９８４３Ｂ）、また水中油型エマルジョンおよび他の活性剤の組み合わせは、ワクチンのアジュバントとして記載されている（ＷＯ９５／１７２１０、ＷＯ９８／５６４１４、ＷＯ９９／１２５６５、ＷＯ９９／１１２４１）。油中水型エマルジョン（米国特許第５，４２２，１０９号、ＥＰ０４８０９８２Ｂ２）および水中油型エマルジョン（米国特許第５，４２４，０６７号、ＥＰ０４８０９８１Ｂ）などの他の油エマルジョンアジュバントが記載されている。
本発明における使用のための油エマルジョンアジュバントは、天然または合成であり得、鉱物または有機であり得る。鉱物油および有機油の例は、当業者には容易に明らかになるであろう。特定の実施形態において、本発明の組成物（例えば、熱安定性噴霧乾燥ワクチン）は、アジュバントが油相に組み込まれている水中油型のエマルジョンを含む。水中油型組成物がヒト投与に適しているために、エマルジョンシステムの油相は、好ましくは、代謝可能な油を含む。代謝可能な油という用語の意味は、当該技術分野において周知である。代謝可能とは、「代謝によって変換することができる」として定義することができる（Ｄｏｒｌａｎｄ’ｓ ｉｌｌｕｓｔｒａｔｅｄ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ，Ｗ．Ｂ．Ｓａｕｎｄｅｒｓ Ｃｏｍｐａｎｙ，２５ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ（１９７４））。油は、レシピエントに毒性ではなく、代謝によって変換することができる、任意の植物油（ｐｌａｎｔ ｏｉｌ）、植物油（ｖｅｇｅｔａｂｌｅ ｏｉｌ）、魚油、動物油、または合成油であり得る。ナッツ（ピーナッツ油など）、種子、および穀物は、植物油の一般的な供給源である。合成油も使用され得る。
例えば、スクアレン（２，６，１０，１５，１９，２３－ヘキサメチル－２，６，１０，１４，１８，２２－テトラコサヘキサエン）は、サメ肝油に多量に、オリーブ油、小麦胚芽油、米糠油、および酵母により少量見られる不飽和油であり、本発明における使用のために特に好ましい油である。スクアレンは、コレステロールの生合成における中間体であるという事実によって、代謝可能な油である（Ｍｅｒｃｋ ｉｎｄｅｘ，１０ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，ｅｎｔｒｙ ｎｏ．８６１９）。本発明に従って有用な例示的な代謝可能な油には、スクアレン、大豆油、ゴマ油、およびカプリル酸／カプリン酸トリグリセリド（ＭＩＧＬＹＣＯＬ ８１０油）が含まれるが、これらに限定されない。一実施形態において、代謝可能な油は、スクアレンを含む。別の実施形態において、代謝可能な油は、酵母由来のスクアレンまたは酵母由来の関連イソプレノイド構造などの、１つ以上の酵母由来のイソプレノイドを含む。
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、０．０１％～５％ｖ／ｖ、約０．０１％～４％ｖ／ｖ、約０．０１％～３％ｖ／ｖ、約０．０１％～２％ｖ／ｖ、約０．０１％～１％ｖ／ｖ、または約０．０１％～０．５％ｖ／ｖの濃度で存在する代謝可能な油を含む。いくつかの実施形態において、代謝可能な油は、約０．０１％ｖ／ｖ、約０．０５％ｖ／ｖ、約０．１％ｖ／ｖ、約０．５％ｖ／ｖ、約１％ｖ／ｖ、約１．５％ｖ／ｖ、約２％ｖ／ｖ、約２．５％ｖ／ｖ、約３％ｖ／ｖ、約３．５％ｖ／ｖ、約４％ｖ／ｖ、約４．５％ｖ／ｖ、約５％ｖ／ｖ、約６％ｖ／ｖ、約７％ｖ／ｖ、約８％ｖ／ｖ、約９％ｖ／ｖ、約１０％ｖ／ｖ、約１１％ｖ／ｖ、約１２％ｖ／ｖ、約１３％ｖ／ｖ、約１４％ｖ／ｖ、約１５％ｖ／ｖ、約１６％ｖ／ｖ、約１７％ｖ／ｖ、約１８％ｖ／ｖ、約１９％ｖ／ｖ、または約２０％ｖ／ｖの濃度で存在する。いくつかの実施形態において、代謝可能な油は、約２％ｖ／ｖの濃度で存在する。いくつかの実施形態において、代謝可能な油は、１％ｖ／ｖ未満の濃度で存在する。記載されるパーセンテージは、噴霧乾燥前の水中油型エマルジョン製剤中、噴霧乾燥後の乾燥粉末中、または再構成された乾燥粉末中いずれかのパーセンテージを指す。
安定な水中油型エマルジョン内に見られる油滴のサイズは、好ましくは、１ミクロン未満であり、実質的に３０～６００ｎｍ、好ましくは直径が実質的に約３０～５００ｎｍ、最も好ましくは直径が実質的に１５０～５００ｎｍの範囲、特に光子相関分光法によって測定されるように直径が約１５０ｎｍであり得る。これに関して、数による油滴の８０％は、好ましい範囲内にあるべきであり、より好ましくは、数による油滴の９０％超、最も好ましくは９５％超は、定義されたサイズ範囲内にある。
エマルジョンの親水性－親油性バランス（ＨＬＢ）は、界面活性剤の親水性または親油性の力の推定を可能にする。両親媒性分子のＨＬＢは、一般的には、次のように計算される：ＨＬＢ＝（２ＯＸ親水性部分の重量）／（両親媒性分子の重量）。ＨＬＢは、０（最も親油性の分子の場合）～２０（最も親水性の分子の場合）の範囲の値を有し得る。界面活性剤の化学組成（特に、例えば、エトキシル基またはアルケンオキシドの添加）に従って、この推定は、変化し得、ＨＬＢ値のドメインは、増加し得る（例えば、ＬＵＴＲＯＬ Ｆ６８（登録商標）は２９のＨＬＢを有する）。界面活性剤の混合物では、混合物のＨＬＢは、その重量比によってバランスがとられる、各界面活性剤のＨＬＢの加算である：ＨＬＢ＝（ＨＬＢ界面活性剤Ｘ×重量界面活性剤Ｘ）＋（ＨＬＢ界面活性剤Ｙ×重量界面活性剤Ｙ）／（重量界面活性剤Ｘ＋重量界面活性剤Ｙ）。本発明に従って作製されるエマルジョンの一実施形態において、エマルジョンの最終的なＨＬＢは、約９～約１２、好ましくは約９．５～約１１．５、より好ましくは約１０～約１１．５である。いくつかの実施形態において、エマルジョンのＨＬＢは、約１０．５～約１１．０である。水中油型エマルジョンを生成する方法は、当業者には周知である。一般的には、方法は、油相をＰＢＳ／ＴＷＥＥＮ８０（登録商標）溶液などの適切な界面活性剤と混合すること、続いてホモジナイザーを使用した均質化を含む。例えば、混合物を１回、２回以上注射針に通過させることを含む方法は、少量の液体を均質化するのに適しているであろう。同様に、マイクロフルイダイザー（Ｍ１１０Ｓマイクロ流体力学装置、最大５０パス、最大圧力入力６バール（出力圧力約８５０バール）で２分間）での乳化プロセスは、少量または多量のエマルジョンを生成するように適応することができる。この適応は、調製物が必要な直径の油滴で達成されるまで、得られたエマルジョンの測定を含む日常的な実験によって達成することができる。
治療組成物
いくつかの実施形態において、噴霧乾燥組成物は、治療組成物であり、治療目的で有用である。よって、いくつかの実施形態において、記載される組成物は、乾燥粉末組成物を含み、疾患、状態、または障害の治療のための生物活性剤をさらに含む。いくつかの実施形態において、薬剤は、アレルギー、癌、感染性疾患、自己免疫、または依存症の治療または予防に有用である。いくつかの実施形態において、薬剤は、免疫応答を刺激、増強、および／または調節するために有用である。よって、本明細書において、「抗原」として記載されるが、生物活性剤はまた、他の治療および免疫応答を活性化し得る。
開示される実施形態のいくつかの態様において、組成物は、癌抗原または癌抗原をコードする核酸を含む。いくつかの実施形態において、癌抗原を含むワクチン組成物は、ＨＥＲ－２／ｎｅｕ発現などの腫瘍関連抗原発現、または他の癌特異的もしくは癌関連抗原を特徴とする任意の癌に対して有用であろう。
本開示の特定の実施形態による組成物および方法はまた、宿主または対象の免疫系が「自己」組織、細胞、生体分子（例えば、ペプチド、ポリペプチド、タンパク質、糖タンパク質、リポタンパク質、プロテオ脂質、脂質、糖脂質、ＲＮＡおよびＤＮＡなどの核酸、オリゴ糖、多糖、プロテオグリカン、グリコサミノグリカンなど、ならびに対象細胞および組織の他の分子成分）、またはエピトープ（例えば、抗体可変領域相補性決定領域（ＣＤＲ）によって、またはＴ細胞受容体ＣＤＲによって認識されるものなどの特定の免疫学的に定義される認識構造）に対して向けられる免疫応答を有害に媒介する疾患、状態、または障害を含む、自己免疫疾患の予防または治療に使用され得る。
自己免疫疾患は、よって、いずれの場合にも正常な自家組織に対して向けられる細胞または抗体のいずれかが関与する異常な免疫応答を特徴とする。哺乳動物における自己免疫疾患は、一般に、２つの異なるカテゴリー：細胞媒介性疾患（すなわち、Ｔ細胞）または抗体媒介性障害のうちの１つに分類することができる。細胞媒介性自己免疫疾患の非限定的な例には、多発性硬化症、リウマチ性関節炎、橋本甲状腺炎、Ｉ型糖尿病（若年発症型糖尿病）、および自己免疫性ブドウ膜網膜炎が含まれる。抗体媒介性自己免疫障害には、重症筋無力症、全身性エリテマトーデス（またはＳＬＥ）、グレーブス病、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性血小板減少症、自己免疫性喘息、クリオグロブリン血症、血栓性血小板減少性紫斑病、原発性硬化性胆管炎、および悪性貧血が含まれるが、これらに限定されない。全身性エリテマトーデスに関連する抗原は、核内低分子リボ核酸タンパク質（ｓｎＲＮＰ）であり、グレーブス病のそれは、チロトロピン受容体、チログロブリン、および甲状腺上皮細胞の他の成分であり、天疱瘡のそれは、デスモグレイン３および他の接着分子などのカドヘリン様天疱瘡抗原であり、血栓性血小板減少性紫斑病のそれは、血小板の抗原である。
本明細書で提供される組成物は、例えば、結核に対する防御免疫を誘導するために使用され得、１つ以上のＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍタンパク質の少なくとも１つの免疫原性部分を含有するポリペプチドならびにそのようなポリペプチドをコードするＤＮＡおよびＲＮＡ分子の使用を含む。加えて、そのような化合物は、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ感染に対する免疫化のためのワクチンおよび／または薬学的組成物に製剤化され得る。
他の実施形態において、本開示の組成物には、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）などの状態の予防および療法のための、細菌感染（例えば、肺炎球菌）によって引き起こされるか、または悪化されるものなどの、呼吸器疾患に関連する抗原が含まれる。治療され得る呼吸成分を有する他の疾患には、結核（ＴＢ）、インフルエンザ（流感）、呼吸器合胞体ウイルス感染症（ＲＳＶ）、および肺癌が含まれるが、これらに限定されない。
直接的なインビボ手順に加えて、細胞が宿主から取り出され、修飾され、同じまたは別の宿主動物に配置されるエクスビボ手順が使用され得る。エクスビボの文脈において、上記の組成物のいずれかを、抗原をコードする核酸分子の組織細胞への導入に利用することができることは明らかであろう。ウイルス、物理的、および化学的取り込み方法のためのプロトコルは、当該技術分野において周知である。
いくつかの態様において、本開示の組成物は、宿主、患者、または細胞培養において、免疫応答を増強または誘発するために有用である。本明細書で使用される場合、「対象」という用語は、任意の哺乳動物を指す。患者は、感染性疾患、乳癌などの癌、または自己免疫疾患に罹患している場合があるか、または正常である（すなわち、検出可能な疾患および／または感染症を有しない）場合がある。「細胞培養物」は、免疫担当細胞または免疫系の単離された細胞（Ｔ細胞、マクロファージ、単球、Ｂ細胞、および樹状細胞を含むがこれらに限定されない）を含有する任意の調製物である。そのような細胞は、当業者に周知の様々な技法のいずれかによって単離され得る（例えば、フィコール－ハイパック密度遠心分離）。細胞は、癌に罹患している患者から（そうである必要はないが）単離されている場合があり、治療後に患者に再導入され得る。
薬学的および治療的熱安定性組成物の使用
別の態様において、本明細書に記載される再構成された噴霧乾燥ワクチン組成物を対象に投与することを含む、対象における免疫応答を刺激するための方法が本明細書に提供される。方法は、投与前に熱安定性噴霧乾燥ワクチン組成物を水中油型エマルジョンに再構成するステップをさらに含み得る。
別の態様において、本明細書に記載される再構成された噴霧乾燥ワクチン組成物を対象に投与することを含む、対象における治療応答を刺激するための方法が本明細書に提供される。方法は、投与前に熱安定性噴霧乾燥ワクチン組成物を水中油型エマルジョンに再構成するステップをさらに含み得る。いくつかの実施形態において、治療応答は、アレルギー、癌、感染性疾患、自己免疫、または依存症の治療または予防のためのものである。
別の実施形態において、噴霧乾燥ワクチンまたはアジュバント粉末を吸入可能な方法を介して投与することを含む、対象における免疫応答を刺激するための方法が本明細書に提供される。
別の実施形態において、噴霧乾燥ワクチンまたはアジュバント粉末を吸入可能な方法を介して投与することを含む、対象における免疫応答を刺激するための方法が本明細書に提供される。いくつかの実施形態において、治療応答は、アレルギー、癌、感染性疾患、自己免疫、または依存症の治療または予防のためのものである。
いくつかの実施形態において、本発明は、呼吸成分を有する疾患を治療するために有用である。いくつかの実施形態において、呼吸成分は、結核（ＴＢ）、インフルエンザ（流感）、呼吸器合胞体ウイルス感染症（ＲＳＶ）、および肺癌（またはそれらの治療）に関連する抗原を含む。
したがって、本発明は、宿主、患者、もしくは対象において、または細胞培養において、免疫応答を増強または誘発するために有用である。患者は、感染性疾患、乳癌などの癌、または自己免疫疾患に罹患している場合があるか、または正常である（すなわち、検出可能な疾患および／または感染症を有しない）場合がある。「細胞培養物」は、免疫担当細胞または免疫系の単離された細胞（Ｔ細胞、マクロファージ、単球、Ｂ細胞、および樹状細胞を含むがこれらに限定されない）を含有する任意の調製物である。そのような細胞は、当業者に周知の様々な技法のいずれかによって単離され得る（例えば、フィコール－ハイパック密度遠心分離）。細胞は、癌に罹患している患者から（そうである必要はないが）単離されている場合があり、治療後に患者に再導入され得る。
投与経路
本発明は、感染性疾患、癌、または自己免疫疾患などの状態のワクチン接種、治療的処置、および予防のための方法および組成物に関する。本発明の方法は、非経口および非経口投与を含む投与経路を含む。非経口投与経路には、経口、頬側、舌下、局所、経皮、眼、耳、鼻、直腸、吸入、および膣内経路が含まれるが、これらに限定されない。注射可能な方法には、非経口投与経路、静脈内、筋肉内、皮下、腹腔内、脊髄内、髄腔内、脳室内、動脈内、および他の注射経路が含まれるが、これらに限定されない。これらの発明は、所定の期間にわたって抗原および／またはアジュバントの制御された、持続放出または徐放を提供することができる組成物を企図する。
いくつかの実施形態において、ワクチン接種用の組成物は、乾燥粉末組成物であり、投与は、乾燥粉末ワクチンをワクチンの投与前に水性希釈剤で再構成し、再構成されたワクチンを非経口的に投与することを含む。いくつかの実施形態において、アジュバントワクチン組成物は、抗原組成物とは別に再構成され、投与前に混合される。いくつかの実施形態において、再構成されたワクチンは、直ちに投与される。他の実施形態において、乾燥粉末ワクチンは、例えば、吸入を介して、乾燥粉末として投与される。いくつかの実施形態において、吸入の方法は、吸入器の使用を含む。いくつかの実施形態において、吸入器は、能動的もしくは受動的な乾燥粉末吸入器または加圧定量吸入器である。いくつかの実施形態において、乾燥粉末製剤は、肺に直接投与される。
製剤
本明細書における製剤の実施形態は、乾燥粉末製剤および／または再構成された乾燥粉末製剤であるが、そのような製剤、プロセスステップ、および材料は、多少異なり得るので、本発明は、本明細書に開示される特定の製剤、プロセスステップ、および材料に限定されないことを理解されたい。
製剤は、当業者に知られており、錠剤、コーティング錠、チュアブル錠、発泡錠、ペレット、カプセル、シロップ、坐剤、注射可能な製剤、ならびに生理液に不溶性であるか、または抗原および／もしくはアジュバントの放出が機械的、化学的、もしくは酵素的活性のために製剤の分解後に放出される培地中の活性剤の分散物などの製剤が含まれるが、これらに限定されない。
キットおよび薬学的パック
特定の実施形態において、本明細書に記載されるワクチン組成物を含むキットも企図されており、これは１つ以上の容器で提供され得る。一実施形態において、ワクチン組成物のすべての成分は、単一の容器に一緒に存在するが、本発明の実施形態は、そのように限定されることを意図せず、２つ以上の容器も企図する。
そのようなキット実施形態による容器は、任意の適切な容器、器、バイアル、アンプル、チューブ、カップ、ボックス、ボトル、フラスコ、ジャー、ディッシュ、シングルウェルもしくはマルチウェル装置のウェル、リザーバー、タンクなど、または本明細書に開示される組成物が配置、貯蔵、および／もしくは輸送され、内容物を取り出すためにアクセスされ得る他のデバイスであり得る。典型的には、そのような容器は、意図された使用と適合性があり、そこからの含有される内容物の回収を容易に達成することができる材料で作製され得る。そのような容器の好ましい例は、ガラスおよび／またはプラスチックの封止された、または再封止可能なチューブおよびアンプルを含み、針および注射器を使用した内容物の取り出しと互換性のあるゴム隔壁または他のシーリング手段を有するものを含む。
そのような容器は、例えば、ガラスまたは化学的に適合性のあるプラスチックもしくは樹脂で作製され得、これは容器からの材料の効率的な回収を可能にし、かつ／または材料を、例えば、紫外線もしくは温度限界などの劣化条件から、または微生物汚染物質を含む望ましくない汚染物質の導入から保護する材料で作製されるか、またはコーティングされ得る。容器は、好ましくは、滅菌または滅菌可能であり、本明細書に記載されるワクチン組成物および／または免疫学的アジュバント組成物および／または抗原および／または組換え発現構築物などを懸濁または溶解するために使用され得るような、任意の担体、賦形剤、溶媒、ビヒクルなどと適合性であろう材料で作製される。
本発明は、以下の例を参照することによってより完全に理解されるであろう。しかしながら、それらは、本発明の範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。本明細書に記載される例および実施形態は例示のみを目的としていることが理解される。上記の様々な実施形態を組み合わせて、さらなる実施形態を提供することができる。それに照らした様々な修飾または変更は、前述の記載から当業者には明らかになり、本出願の精神および範囲内に含まれ、添付の特許請求の範囲内に含まれるものである。
ワクチンなどの液体材料の、乾燥粉末への変換は、冷蔵および輸送に関連するコストを低減する。噴霧乾燥は、粉末が特定の特性を有するように操作されることを可能にするため、独特な解決策を提供する。例えば、乾燥粉末処理方法としての噴霧乾燥の使用は、流動性、サイズ、および形態などの特性を制御するように得られた粉末を操作することを可能にする。実施例１～４において、噴霧乾燥は、水中油型ナノエマルジョンとして製剤化された、アジュバント添加結核ワクチンを、乾燥粉末内にカプセル化する方法として調査された。非凝集性、非晶質微粒子内のアジュバント添加ワクチンのカプセル化の成功は、すべての成分の高い保持率で、１回の反復で達成された。異なる温度での３ヶ月にわたる粉末の安定性は、粉末がすべての温度について物理的に安定であったことを示した。再構成された粉末の物理化学的分析は、すべての試料についてナノエマルジョンサイズが維持されたが、上昇した温度での貯蔵で抗原およびアゴニストの経時的な損失を示した。室温で液体である物質のナノエマルジョンがゲル－微粒子に変換され、有意な損失なしに同じ液滴サイズに再構成され得ることは、当該分野において知られていなかったので、これは驚くべき結果であった。実施例４において、噴霧乾燥の使用は、吸入可能な送達経路について調査された。
実施例１～４の方法は、噴霧乾燥ワクチンまたはアジュバントを使用し、乾燥粉末、ならびに安定性および噴霧乾燥製剤の実現可能性を決定する他の重要な特徴について再構成されたワクチン製剤を特徴分析した。操作された粒子は、長期安定性のために非晶質微粒子内にナノエマルジョンをカプセル化するべきである。２つの製剤を噴霧乾燥し、安定性について評価した：トレハロースおよびトリス緩衝剤（ＳＤ－ＴＧ）で噴霧乾燥されたＧＬＡ－ＳＥビヒクル、ならびにトレハロースおよびトリス緩衝剤（ＳＤ－ＴＧＩ）で噴霧乾燥されたＩＤ９３タンパク質を含むＧＬＡ－ＳＥビヒクル。吸入可能な製剤は、ロイシンをさらに含み得る。
ＩＤ９３は、すべての年齢で結核（ＴＢ）と闘うためのワクチンとして強力なＴヘルパー細胞（ＴＨ１）免疫応答を誘導する４つのＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ（Ｍｔｂ）抗原で構成される組換えタンパク質であるため、使用した［３］。この抗原は、グルコピラノシルリピドＡ（ＧＬＡ）スクアレン水中油型エマルジョン（ＳＥ）と組み合わされ、ＧＬＡ－ＳＥは、ナノエマルジョンとして製剤化されるアジュバントシステムである［３］。世界保健機関（ＷＨＯ）は、２０１８ Ｇｌｏｂａｌ Ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ Ｒｅｐｏｒｔにおいて、ＴＢが単一の感染性因子による主要な死因であると述べている［４］。Ｍｔｂの感染を予防する現在認可されている唯一のＴＢワクチン、Ｂａｃｃｉｌｌｅ Ｃａｌｍｅｔｔｅ－Ｇｕｅｒｉｎ（ＢＣＧ）は、１５８ヶ国で子どもの免疫化のために効果的に実施されているが、現在、成人におけるＴＢの予防に有効なワクチンはない［４］。マウス、モルモット、および非ヒト霊長類に対するＧＬＡ－ＳＥ＋ＩＤ９３ワクチン投与量試験は、誘導されたＴＨ１応答、およびＢＣＧ免疫化の増強を示した［３］。アジュバント成分は、ヒト臨床研究において、ＧＬＡ－ＳＥ＋ＩＤ９３製剤によるワクチン接種が、ＩＤ９３単独によるワクチン接種よりも高い抗体応答を誘発したことが示されたので、使用した［５］。
水中油型エマルジョンを噴霧乾燥することによる乾燥粉末ワクチンの製造
以下の製剤および方法を使用して、乾燥粉末噴霧乾燥ワクチンおよび／またはアジュバント組成物を生成した。
製剤は、粒子設計のためのインシリコモデリングを使用して生成した。トレハロースは、賦形剤として使用した。トレハロースは、生物製剤を安定化するために賦形剤として使用される二糖であり、この研究において使用される賦形剤として選択した。比較的高い溶質濃度（１００ｍｇ／ｍｌ）の賦形剤を利用した。
非晶質材料の物理的安定性は、貯蔵温度の関数である、その分子運動性と密接に関連しているため、最高温度のための安定性の設計が可能であった［１３］。カウズマン温度以下での貯蔵、すなわち、分子運動性が重要でない温度は、物理的安定性を最大化するであろう。カウズマン温度は、Ｔｇを下回る約５０Ｋである［１３］。３７℃での長期安定性の製剤目標に基づいて、噴霧乾燥粉末のＴｇは、≧８８℃でなければならない。Ｇｏｒｄｏｎ－Ｔａｙｌｏｒ方程式によって説明されるように［１４］、砂糖－水混合物のＴｇは、それらの質量分率および経験的パラメータｋに基づいて決定することができる。Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．［１５］は、文献データをＧｏｒｄｏｎ－Ｔａｙｌｏｒ方程式に当てはめることによって、トレハロース－水ガラス転移曲線をモデル化して、５．２のｋを決定した。
最終的な噴霧乾燥粉末の水分含有量は、トレハロースの水分収着データを使用して操作し、これは、トレハロース粉末を１０％の出口相対湿度に供することが、約２～３％の水分含有量をもたらすであろうことを示す［１６］［１７］。このトレハロース－水可塑化曲線［１５］および水分収着データ［１６］［１７］に基づき、乾燥機出口および収集点での相対湿度は、物理的安定性を確保するには、＜１０％でなければならない。同様に、得られる粉末の結晶化を防止するには、出口温度は、Ｔｇよりも有意に低くなければならない。これらの計算に基づいて、処理パラメータは、出口温度が約３６℃であり、出口相対湿度が７％であるように計算した。噴霧乾燥プロセス中にナノエマルジョンの可能な蒸発を防止するために、比較的低い乾燥ガス温度も選択した。これらの計算は、トレハロース－水システムから生成される粉末についてのデータに基づいて行われたものであり、この作業における粒子は、理論的には約１７％のＧＬＡ－ＳＥエマルジョンからなるであろうことに留意されるべきである。
化学物質は、次のとおり製剤化した：水中のＧＬＡ－ＳＥビヒクルおよび水中のＩＤ９３タンパク質は、ＩＤＲＩ（Ｓｅａｔｔｌｅ、ＷＡ、ＵＳＡ）によって製剤化した。トレハロース二水和物（トレハロース）およびＨＰＬＣグレード水は、Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（Ｏｔｔａｗａ、ＯＮ、Ｃａｎａｄａ）から購入した。トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（トリス）および塩酸（ＨＣｌ）は、Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｏａｋｖｉｌｌｅ、ＯＮ、Ｃａｎａｄａ）から購入した。有力な凍結乾燥ワクチン候補（ＴＴ）のバイアル［８］は、比較のためにＩＤＲＩ（Ｓｅａｔｔｌｅ、ＷＡ、ＵＳＡ）によって提供された。
実施例１
原料調製
原料調製は、次のとおりであった：ＩＤ９３（１．２ｍｇ／ｍｌのＩＤ９３タンパク質）は、使用前に－８０℃で小さなアリコートに貯蔵した。同様に、ストック濃度のＧＬＡ－ＳＥ溶液（１０％［ｖ／ｖ］のスクアレン、５０μｇ／ｍＬのＧＬＡ）は、使用前に冷蔵庫に貯蔵した（ストックＧＬＡ－ＳＥの調製については［２７］［２８］も参照されたい）。原料は、４０ｍＭのトリスをＨＰＬＣ水中の２００ｍｇ／ｍｌのトレハロースと混合し、次いで塩酸を使用して７．５±１のｐＨにｐＨ調節することによって調製した。質量は、所与の成分の必要な質量に応じて、２つの天秤（モデルＸＳ４００２Ｓ、Ｍｅｔｔｌｅｒ Ｔｏｌｅｄｏ、Ｍｉｓｓｉｓｓａｕｇａ、ＯＮ、Ｃａｎａｄａ）、（モデルＭＥ２０４Ｅ、Ｍｅｔｔｌｅｒ Ｔｏｌｅｄｏ、Ｍｉｓｓｉｓｓａｕｇａ、ＯＮ、Ｃａｎａｄａ）のうちの１つを使用して測定した。ＧＬＡ－ＳＥまたはＧＬＡＳＥ＋ＩＤ９３タンパク質を、ＨＰＬＣグレード水で、それぞれ、２倍作業濃度（４％［ｖ／ｖ］のスクアレン、２０μｇ／ｍＬのＧＬＡ、８μｇ／ｍＬのＩＤ９３）製剤ＳＤ－ＴＧおよびＳＤ－ＴＧＩに希釈した。２つの溶液を次いで、噴霧乾燥前の溶液の最終組成が、１００ｍｇ／ｍｌのトレハロース、２０ｍＭのトリス、２％［ｖ／ｖ］のスクアレン、ＳＤ－ＴＧについて１０μｇ／ｍＬのＧＬＡ、ＳＤ－ＴＧＩについて追加の４μｇ／ｍＬのＩＤ９３タンパク質であるように、１：１の比で混合した。ＳＤ－ＴＧおよびＳＤ－ＴＧＩの賦形剤組成目標は、２０ｍＭのトリス、１０％［ｗ／ｖ］のトレハロースであった。
実施例２
噴霧乾燥プロセス
噴霧乾燥を、Ｐａｒｔｉｃｌｅ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｇｒｏｕｐのカスタム研究噴霧乾燥機を使用して実施した［１９］。噴霧乾燥は、以下の成分を有する：二流体微粒化機、乾燥チャンバー（３０Ｌ体積）、サイクロン分離器、４００ＳＬＰＭ（標準リットル毎分）で１マイクロメートル未満のカットオフサイズ、サーモスタットシステムを備えた二重壁収集容器、蠕動ポンプ、プロセスガスヒーター、ガス源（圧縮空気）、プロセス制御システム、ならびにプロセスセンサーおよびデータ取得システム。原料を、他の場所で特徴分析されている、Ｂｕｃｈｉ Ｂ－１９１二流体微粒化機（Ｂｕｃｈｉ Ｌａｂｏｒｔｅｃｈｎｉｋ、ＡＧ、Ｆｌａｗｉｌ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）のカスタマイズバージョンを使用して微粒化した［２０］。処理条件は、インシリコモデルに基づいて決定した。原料を、蠕動ポンプ（モデル７７２００－６０、Ｃｏｌｅ－Ｐａｒｍｅｒ、Ｍｏｎｔｒｅａｌ、ＱＣ、Ｃａｎａｄａ）を使用して０．６ｍｌ／分の速度で微粒化機に供給して、８の空気－液体比をもたらした。微粒化された液滴を、乾燥ガス温度が６５℃である、２００ＳＬＰＭで流動する空気中で乾燥した。乾燥粉末をサイクロンによって空気から分離し、粉末をガラスジャーに収集した。これらのジャーを、封止し、２５℃および７％ＲＨに設定された環境チャンバー（モデルＣＥＯ ９１０Ｗ－４、Ｌｕｎａｉｒｅ Ｌｉｍｉｔｅｄ、Ｗｉｌｌｉａｍｓｐｏｒｔ、ＰＡ、ＵＳＡ）においてパッケージングまで（１～２日）貯蔵した。乾燥粉末を吸入するリスクを最小限に抑えるために、噴霧乾燥プロセス中にレスピレーターを含む実験室ＰＰＥを着用した。
実施例３
パッケージングおよび貯蔵
噴霧乾燥製剤を、以下のプロトコルを使用してパッケージングおよび貯蔵した。パッケージング－安定性研究の間の粉末中の水分取り込みを防止するために、集中的なパッケージングプロセスが利用された。一般に、薬学的粉末完全性を保存するために適切なパッケージングが使用され、そうでなければ、粉末は、水分に供され、それによってタンパク質アンラベリングのために生物学的成分を不活性化し得る。粉末のバイアルを含有するパッケージは、温度貯蔵に入れた。パッケージング調製は、乾燥剤を噴霧乾燥機の出口相対湿度に平衡化するために、２５℃および７％ＲＨに設定された環境チャンバー（モデルＣＥＯ ９１０Ｗ－４；Ｌｕｎａｉｒｅ Ｌｉｍｉｔｅｄ、Ｗｉｌｌｉａｍｓｐｏｒｔ、ＰＡ、ＵＳＡ）に３～４日間シリカゲルパウチを入れることを含んだ。同時に、同数のシリカゲルパウチを調整グローブボックスにおいて０％ＲＨに平衡化した。デジタル比重計（ＨＭＰ７７Ｂ湿度および温度プローブを備えたＭ１７０測定インジケーター、Ｖａｉｓａｌａ、Ｖａｎｔａａ、Ｆｉｎｌａｎｄ）を使用して、環境の相対湿度を監視した。
パッケージングプロセスを、０％ＲＨに設定されたカスタムグローブボックス内で行った。粉末を、低結合スナップキャップチューブ（製品Ｚ７６８８２０、Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｏａｋｖｉｌｌｅ、ＯＮ、Ｃａｎａｄａ）に測定し、これを次いで、７％ＲＨ乾燥剤パウチとともに、アルミニウムバッグに入れた。このアルミニウムバッグを次いで、ダブルヒートシーリングし、０％ＲＨ乾燥剤パウチとともに、別のアルミニウムバッグに入れた。この外部バッグもダブルヒートシーリングした。プロセスを要約する単純化された概略図を図１に示す。粉末を、次のように貯蔵した：低温安定性（５℃）のためのパッケージは、冷蔵庫（モデルＳＣＧＰ－１８０４、ＶＷＲ、Ｅｄｍｏｎｔｏｎ、ＡＢ、Ｃａｎａｄａ）に入れた。２５℃および４０℃貯蔵のためのパッケージを、２つの別々のインキュベーター（モデル４１４００５－１２０、ＶＷＲ、Ｅｄｍｏｎｔｏｎ、ＡＢ、Ｃａｎａｄａ）に入れた。前者について、インキュベーター設定値は２５℃であったが、温度コントローラーは２５～２８℃の間で変動した。
実施例４
収率および生成速度
粉末の収率および生成速度の結果は、次のとおりである：インシリコ計算は、公称固体スループットが７５ｍｇ／分であると予測した。安定性研究のための粉末製造は、ＳＤ－ＴＧおよびＳＤ－ＴＧＩ粉末を生成するための実際の生成速度が、それぞれ、４９ｍｇ／分および４５ｍｇ／分であったことを示した。理論値の６０％の収率は、小規模噴霧乾燥について典型的である。しかしながら、インシリコモデリングによって決定される現在の製剤および処理パラメータは、カプセル化効率を最大化することを目標とした。いくつかの実施形態において、より大きな凝集物は、サイクロンで濾過して除去され得る。いくつかの実施形態において、増加した収率は、製剤への分散性薬剤の添加によって達成され得る。
実施例５
噴霧乾燥された乾燥粉末ワクチン組成物の特徴分析
エマルジョンの保存および化学的完全性を研究して、噴霧乾燥プロセス中に溶質が失われたかを特定した。製剤開発および適切な処理パラメータを、油成分の蒸発、またはエマルジョンの凝集のいずれかを通して、プロセスにエマルジョンサイズを有意に変化させないように選択した。よって、分析を、配合された液体ＳＤ－ＴＧおよびＳＤ－ＴＧＩ原料ならびに実施例１で議論される再構成された粉末の化学およびコロイド特性を比較するために完了した。噴霧乾燥の前および後の製剤のこれらの測定された特性を表２に示す。
走査電子顕微鏡法、カールフィッシャー熱量測定、ラマン分光法、ＨＰＬＣ、ＥＬＩＳＡ、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、ならびにｐＨおよび浸透圧試験などの方法を使用して、乾燥粉末および再構成粉末を次のように特徴分析した：
Ａ．乾燥粉末特徴分析
乾燥粉末特徴分析は、走査電子顕微鏡法およびラマン分光法、ならびにカールフィッシャー熱量測定を使用した。すべての場合において、結果は、レプリケート測定の平均±標準偏差として報告される。各方法についてのレプリケートの数が示される。両側スチューデントのｔ検定を分析に使用し、統計的に有意な差をｐ＜０．０５で報告した。
走査電子顕微鏡法について、粉末試料は、ひびの入った粒子を意図的に生成するような方法で、アルミニウムＳＥＭスタブ（製品１６１１１、Ｔｅｄ Ｐｅｌｌａ，Ｉｎｃ．、Ｒｅｄｄｉｎｇ、ＣＡ、ＵＳＡ）上に直接取り付けた。これらの試料を、イメージング機器への損傷を防止するために、露出したナノ油滴を除去するために、インハウス真空に接続されたデシケーターに２～４日間配置した。このプロセス後、試料を８０％金および２０％パラジウムのコーティング（Ｌｅｉｃａ ＡＣＥ６００カーボン／メタルコーター、Ｃｏｎｃｏｒｄ、ＯＮ、Ｃａｎａｄａ）で１０～１５ｎｍの厚さにスパッタリングした。粒子の画像を、Ｚｅｉｓｓ Ｓｉｇｍａ電界放出走査電子顕微鏡（Ｚｅｉｓｓ Ｓｉｇｍａ ＦＥ－ＳＥＭ、Ｃａｒｌ Ｚｅｉｓｓ、Ｏｂｅｒｋｏｃｈｅｎ、Ｇｅｒｍａｎｙ）で撮影した。５００～２００００倍の倍率の範囲の画像は、３～４ｋＶの加速電圧を使用して５．３～６．３ｍｍの作動距離で撮影した。
カスタム分散ラマン分光法システムを使用したラマン分光法を利用して、粉末の固体状態を評価し、参照スペクトルを得た。システムは、６７１ｎｍダイオード励起固体状態レーザー（Ｖｅｎｔｕｓ Ｓｏｌｏ ＭＰＣ６０００、Ｌａｓｅｒ Ｑｕａｎｔｕｍ、Ｓｔｏｃｋｐｏｒｔ、ＵＫ）と、シグナルをスペクトログラフに到達する前に最適化およびクリーンアップするための一連のフィルターと、を含む。同様にＰａｒｔｉｃｌｅ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｇｒｏｕｐによって開発された、姉妹装置の詳細な説明、および分析の方法は、他の刊行物に見ることができる［２２］。低い質量分率を有する成分（試料の約１％）を検出することができない。試料を、水分曝露を防止するために窒素下の密閉された試料チャンバーに入れ、そのようなものとしてすべてのスペクトルを、２２．０～２３．０℃の温度および＜５％ＲＨで取得した。測定されたＳＤ－ＴＧおよびＳＤ－ＴＧＩ粉末試料に加えて、ラマンスペクトル分析はまた、参照として非晶質および結晶トレハロース粉末試料で実施した。同様に、参照スペクトルをまた、ｐＨ７．５にｐＨ調節された、水中のスクアレンおよび２００ｍｇ／ｍｌのトリス緩衝剤の液体試料について得た。
カールフィッシャー熱量測定を使用して、質量による粉末の含水量をカールフィッシャー電量滴定装置（モデルＣ３０、Ｍｅｔｔｌｅｒ Ｔｏｌｅｄｏ、Ｍｉｓｓｉｓｓａｕｇａ、ＯＮ、Ｃａｎａｄａ）で測定し、結果を測定された試料質量に基づくパーセンテージとして表示した。試料中の水は、試料中のすべての水を反応させるのに必要な電流を測定することによって計算される。試料を、デフォルトＳｔｒｏｍｂｏｌｉクーロメトリー法の修正バージョンを使用して分析した。試験の各セットについて、２つの「ブランク」バイアルを使用して、実験時の周囲の含水量のベースラインを得た。粉末の水分含有量を、同じ粉末の２つのバイアルを測定および平均化することによって決定した。ＨＹＤＲＡＮＡＬ水標準（Ｈｏｎｅｙｗｅｌｌ、Ｍｅｘｉｃｏ Ｃｉｔｙ、Ｍｅｘｉｃｏ）の水分含有量を決定する実験の分析は、機械分散が０．３％であることを示した。
Ｂ．再構成粉末特徴分析
噴霧乾燥された粉末を、次のように再構成した：予め１０８ｍｇの粉末が集塊化およびパッケージングされたバイアルの各々は、試験時に０．８ｍｌの水で再構成して、液体薬物生成物と同様の濃度をもたらした。各試験を、再構成された粉末に対して３通り行った。原料に対する測定のレプリケートは、同じバイアルから作製した。再構成された粉末を、動的光散乱、ＨＰＬＣ、ＥＬＩＳＡ、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、ｐＨ、および浸透圧によって次のように特徴分析した：動的光散乱を使用して、エマルジョンの平均流体力学的直径、およびＭａｌｖｅｒｎ Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ ＡＰＳ（Ｍａｌｖｅｒｎ、ＵＫ）を使用してそれらの多分散性を特定した。液体原料測定は、３回分析された１レプリケートについてであった。ＧＬＡおよびスクアレン定量化を、逆相ＨＰＬＣ分析の使用で達成した。これらの試験を、分離のための１２００シリーズＨＰＬＣデバイス（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、および分析物検出のためのＣｏｒｏｎａ Ｃｈａｒｇｅｄ Ａｅｒｏｓｏｌ Ｄｅｔｅｃｔｏｒ（ＣＡＤ）（ＥＳＡ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｃｈｅｌｍｓｆｏｒｄ、ＭＡ、ＵＳＡ）を使用して実施した。液体原料測定は、１回分析された２レプリケートであった。ＥＬＩＳＡを使用して、試料を播種し、特定の抗体を使用してＩＤ９３含有量を定量化することによって、噴霧乾燥の前および後の抗原含有量を特定した。液体原料測定は、３回分析された１レプリケートであった。ＳＤＳ－ＰＡＧＥを使用して、それぞれ、バンドの存在または強度に基づいて、試料中のＩＤ９３タンパク質の存在および完全性を測定した。ＩＤ９３完全性を、バンド強度をＩＤ９３タンパク質のストック対照と比較することによって定量化した。ｐＨを見つけるために、再構成された粉末の３００μＬのアリコートを、Ｏｒｉｏｎ ＲＯＳＳ Ｕｌｔｒａ Ｓｅｍｉ－ｍｉｃｒｏ ｐＨ Ｅｌｅｃｔｒｏｄｅ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ、ＵＳＡ）を使用して測定し、試料ｐＨを決定した。ｐＨメーターを、４．００、７．００、および１０．００標準を使用して各測定前に較正した。液体原料の測定は、１レプリケートで構成された。再構成された粉末の浸透圧を、浸透圧計（モデル２０２０、Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、Ｎｏｒｗｏｏｄ、ＭＡ、ＵＳＡ）を使用して測定した。液体原料の測定は、１レプリケートで構成された。
実施例６
安定性研究噴霧乾燥された乾燥粉末ワクチン組成物
実施例１からの製剤を、様々な温度での化学、コロイド、および物理的安定性について研究した。特徴分析に使用される方法の多くを、安定性を見るために使用した。したがって、実施例２は、安定性研究に使用される方法を提供する。エマルジョン不安定性は、アジュバント（ＧＬＡなどのＴＬＲ４アゴニスト）の不活性化および低下した濃度を引き起こし得、それによってアジュバントシステムによって生成される免疫応答を低下させるため、安定性は重要である。加えて、エマルジョン不安定性は、より大きな液滴を形成するエマルジョンをもたらす可能性もあり得る［６］。より大きな粒子はより早く体から除去されるので、これは免疫応答を低減することもできる。さらに、４μｍよりも大きなエマルジョンは、血圧の変化を引き起こし、塞栓症の可能性を増加させ得る［７］。ＧＬＡ－ＳＥアジュバントは、冷蔵された液体として安定であり、したがって、現在のアジュバント添加ＩＤ９３ワクチン候補は、再水和された凍結乾燥ＩＤ９３および液体アジュバントからなる２バイアルシステムで臨床研究において投与され、これは投与前に混合される［８］。
実施例７
化学およびコロイド安定性
噴霧乾燥粉末の安定性を、表１で議論される予め設定された基準に基づいて評価した。３７℃などのより高い温度で３ヶ月での安定性は、室温での長期安定性を示した。
表２に示される結果では、原料液体および再構成粉末の比較は、高いカプセル化効率を示した。結果は、両方の製剤についてスクアレン成分の高い保持（＞９０％）を示す。驚くべきことに、再構成されたエマルジョンの液滴サイズは、原料中のエマルジョンとほぼ同一であり、含有量は、ほぼ不変であった。これは、これらのナノエマルジョンを、それらの破壊または（液体である）油の損失なしに噴霧乾燥することが可能であることを意味する。より小さいエマルジョンは大きいものよりも経時的に安定であることが示されているが［６］、このナノエマルジョンで示される成功は見られていなかった。さらに、多分散指数、ＧＬＡ含有量、およびｐＨは、両方の製剤についての噴霧乾燥の経過にわたって有意に変化せず（ｐ＞０．０５）、集塊化するエマルジョンの数が低いことを示す。ＧＬＡおよびＩＤ９３含有量の保持は、これらの成分が噴霧乾燥の経過にわたって劣化しなかったことを示し、これらの成分は熱応力に感受性であるため、これは特に成功であった。ＳＤ－ＴＧＩ粉末中の低いＩＤ９３含有量は、配合中の原料容器の側面へのタンパク質結合のためであり得る。
噴霧乾燥直後の分析は高い保持率を示したが（実施例２を参照されたい）、ワクチンとしての噴霧乾燥エマルジョンの適用性は経時的なナノエマルジョン安定性に依存するため、経時的な粉末の安定性も調査した。脂質ナノ粒子を噴霧乾燥するＭｌａｌｉｌａ ｅｔ．ａｌ［２４］の実験は、ＧＬＡ－ＳＥと同様の直径スケールをまず示したが、デシケーターでの１ヶ月の貯蔵後、ナノ粒子サイズは２～８倍で増加した。安定性研究には、いくつかの貯蔵温度：－２０、２～８、２５、および４０℃での噴霧乾燥粉末の貯蔵が含まれた。各温度について、所与の時点で粉末を再構成し、スクアレン含有量、エマルジョン直径、多分散指数、ＧＬＡ濃度、ＩＤ９３濃度、およびｐＨについて評価した。浸透圧を、すべての貯蔵温度について、当初および３ヶ月後に測定した。
安定性研究の３ヶ月にわたるＧＬＡ－ＳＥビヒクルのスクアレン成分の特性を図２に示す。スクアレン含有量は、すべての貯蔵温度で両方の粉末製剤について減少した。４０℃で３ヶ月間の貯蔵後、ＳＤ－ＴＧのスクアレン含有量は、１８．８±０．３ｍｇ／ｍｌから１５．８±０．４ｍｇ／ｍｌまで低減し（１６％損失）、ＳＤ－ＴＧＩについては１７．３±０．６ｍｇ／ｍｌから１５．７±０．８ｍｇ／ｍｌまで低減した（９％損失）。エマルジョン直径は、それぞれ、ＳＤ－ＴＧおよびＳＤ－ＴＧＩについて、９６．９±０．２ｎｍから９７．７±０．５ｎｍまで（１％増加のみ）および９７．６±１．１ｎｍから９９±０．９ｎｍまで本質的に不変のままであった。ＰＤＩは、任意の所与の貯蔵温度で３ヶ月の経過にわたって有意に変化しなかった（ｐ＞０．０５）。そのようなものとして、これらの変化は、すべて前述のスクアレンについての安定性基準、すなわち、＜２０％スクアレンの損失、＜５０％エマルジョンサイズの変化、および多分散指数＜０．２内である。有力な凍結乾燥候補に対して実施される３７℃での３ヶ月の安定性研究と比較して、噴霧乾燥粉末は、粒子サイズ変化に関して同等の性能を有した［８］。加えて、噴霧乾燥候補の性能は、現在の２バイアル臨床提示、液体単一バイアル、および概念実証（ＰＯＣ）凍結乾燥候補よりも有意に良好であり、後者は、８４％の粒子サイズ変化を受ける［８］。ＧＬＡ保持は、－２０および２～８℃での貯蔵について両方の粉末で３ヶ月後に高かった（８７～９３％保持された）。しかしながら、２５℃で３ヶ月の貯蔵後、ＧＬＡ含有量は、ＳＤ－ＴＧ製剤について９．５±０．４μｇ／ｍｌから８．７±０．２μｇ／ｍｌまで低減し（１２％損失）、ＳＤ－ＴＧＩ製剤について９．０±０．４μｇ／ｍｌから７．２±０．１μｇ／ｍｌまで低減した（１９％損失）。同様に、４０℃では、ＧＬＡ含有量は、ＳＤ－ＴＧ製剤について５．８±０．２μｇ／ｍｌ（４０％損失）に、ＳＤ－ＴＧＩ製剤について５．１±０．３μｇ／ｍｌ（４３％損失）に低減した。
ＳＤＳ－ＰＡＧＥ結果は、ＩＤ９３がすべての貯蔵温度で存在したことを確認した。イメージングソフトウェアでの分析は、ＩＤ９３＋ＧＬＡ－ＳＥ対照を比較して、対照のパーセンテージを単位として残るＩＤ９３タンパク質を定量化した。この分析を使用して、３ヶ月での貯蔵後、ＳＤ－ＴＧＩ製剤中のＩＤ９３タンパク質の量は、－２０℃で８３±１９％、２～８℃で６６．５±１１％、２５℃で４０±５％、および４０℃で４４±３％であることがわかった。
全体として、再構成された液体のｐＨは、すべての温度について経時的に低下する傾向があった。しかしながら、ｐＨは、再構成されたＳＤ－ＴＧおよびＳＤ－ＴＧＩについて７．４１～７．６１のままであった。最大変化は、０．１６ｐＨ単位であり、比較的に、３７℃で３ヶ月間貯蔵された液体、２バイアル、およびＰＯＣ試料は、０．２～０．８ｐＨ単位のより大きなｐＨ低下を示した［８］。あるいは、浸透圧は、すべての試料について経時的にわずかに増加した。ＳＤ－ＴＧ試料について、浸透圧は、２～４％増加し、最小変化は４０℃で発生し、最大変化は－２０℃貯蔵で発生した。浸透圧は、再構成されたＳＤ－ＴＧＩ粉末について３～９％増加し、最小変化は４０℃で発生し、最大変化は２～８℃貯蔵で発生した。
噴霧乾燥された製剤は、製剤目標外でＧＬＡおよびＩＤ９３タンパク質のいくらかの損失を経験したが、乾燥粉末特徴分析結果は、粒子がすべての温度で物理的に安定なままであることを示した。
Ｂ．物理的安定性
ＳＥＭ画像の粒子形態分析は、製剤を噴霧乾燥することが、微粒子が約１～２０μｍの幾何学的直径の範囲であった多分散試料を生成したことを示した。それぞれ、図３ａおよび３ｂに示される、ＳＤ－ＴＧおよびＳＤ－ＴＧＩのＳＥＭ画像は、噴霧乾燥された微粒子が、球状、非凝集性であり、滑らか～わずかにくぼみのある範囲であった表面を有することを示した。加えて、これらの微粒子の類似性は、タンパク質の存在が粒子構造に影響を与えなかったことを示した。比較のために図３ｃに示される、同じ条件下で噴霧乾燥された１００ｍｇ／ｍＬのトレハロースの微粒子は、ＳＤ－ＴＧおよびＳＤ－ＴＧＩ製剤と非常に類似した外部粒子形態を有し、すなわち、滑らかな、またはわずかにくぼんだ表面を有する、球状非凝集性粒子であった。ＳＤ－ＴＧおよびＳＤ－ＴＧＩ粒子はまた、トレハロース粒子よりもわずかに大きかったが、これはＳＤ－ＴＧおよびＳＤ－ＴＧＩ製剤の増加した固体含有量によるものであると予想される。
ＳＤ－ＴＧ、ＳＤ－ＴＧＩ、およびトレハロースのひびの入った微粒子のＳＥＭ画像はすべて、これらの粒子が中空または中実であり得ることを示し、所与の試料内に様々なシェルの厚さがあった。しかしながら、このシェルの内部構造は、噴霧乾燥されたトレハロースとは異なった。トレハロース粒子は中実シェルを示したが、ＳＤ－ＴＧおよびＳＤ－ＴＧＩ粒子の内部はトレハロース構造内に多数のボイドを有した。ＳＤ－ＴＧおよびＳＤ－ＴＧＩのＳＥＭ画像に示されるこれらのボイドは、凍結乾燥されたＴＴ製剤の画像にも現れた（図３ｄ）。これらのボイドのサイズもほぼナノエマルジョンサイズであるように見えたことを考慮して、ボイドは蒸発したナノエマルジョンによって残された可能性があった。表面のより高い倍率の画像は、粒子の表面上に比較的少ないボイドを示し、ナノエマルジョンの、有意な量ではないが、一部が、粒子の外面上での蓄積のために失われたことを示した。
図５は、異なる貯蔵温度で３ヶ月貯蔵後のＳＤ－ＴＧＩ製剤を示す。図５ａにおけるより低い倍率の図は、
４０℃で貯蔵された試料がその外部粒子構造を維持したことを示す。微粒子は、依然として多分散、球状、非凝集性であった。粒子融合および形状変化の欠如は、物理的安定性を示した。図５ｂに示されるように、ナノエマルジョンによって残されたボイドが明確に異なったため、粒子の内部構造は、４０℃での貯蔵後も維持された。高倍率で示される外側の特徴のわずかな球状化は、粉末運動性が取るに足らないものではないことを示す。ＧＬＡ－ＳＥ成分は、粉末Ｔｇを予測された約９０℃未満に低下した可能性がある。
粉末水分含有量を、次のように特定した：湿量基準による粉末の初期水分含有量は、２．６±０．１％であると測定された。５、２５、および４０℃で３ヶ月の貯蔵後の水分含有量は、それぞれ、２．７％、２．４％、２．１％であり、すべての値は、±０．１％であり、これらの変化は、統計的に有意ではないと決定された（ｐ＞０．０５）。カールフィッシャー実験に使用されるバイアルにおける高温および比較的大きな量のヘッドスペースのため、より高い温度でのわずかな粉末乾燥は予想外ではない。＞３０％ＲＨの内部環境を有する冷蔵庫に貯蔵された、５℃試料は、水分取り込みを示さなかったことは注目に値した。この水分取り込みの欠如は、特に興味深く、実装されたパッケージングシステムが非常に堅牢であったことを示した。前述のように、噴霧乾燥粉末におけるタンパク質分解は、これらの粉末の結晶化に関連し、したがって、タンパク質分解は、粉末のＴｇの任意の低下を防止することによって、これらの粉末の水分取り込みを防止することによって軽減され得る。
固体状態分析は、試料内の成分の存在を確認し、固体状態の任意の変化を決定するために、安定性研究内の様々な時点でＳＤ－ＴＧおよびＳＤ－ＴＧＩ粉末に対するラマンスペクトル分析を見ることを含んだ。時点０で得られるＳＤ－ＴＧ粉末の試料スペクトル、ならびに非晶質トレハロース、スクアレン、トリスｐＨ７．５、および結晶トレハロースの参照スペクトルを図７に示す。ＩＤ９３タンパク質成分寄与は、その低質量分率（約０．００３％）がラマンシステムの検出限界内になかったため、分析には含まれなかった。参照スペクトルは、ＧＬＡ－ＳＥの他の成分についても得られたが、試料中のそれらの質量分率も検出限界の外であった。
試料スペクトルの検査は、トレハロース成分が完全に非晶質であったことを示した。これは、試料中の４２５、４６０、５６０、８６５、９３５、および１１４５ｃｍ－１での非晶質トレハロース特徴的ピークの存在によって明らかであり、いくつか例を挙げると、約３９５、４５５、６９５、９８０、および１２３５ｃｍ－１での結晶トレハロース特徴的ピークの欠如によってさらに支持された。試料中のスクアレンの存在は、１４００ｃｍ－１で現れるその特徴的なピークによって特定した。トレハロースの固体状態は、図６ａおよび６ｂに示される、剰余スペクトルの低い正規化された強度によってさらに確認され、ａ）試料が加速貯蔵後に外部形態を維持し、ｂ）内部粒子構造が維持されることを示す４０℃で３ヶ月の貯蔵後のＳＤ－ＴＧＩ粉末のＳＥＭ画像を示す。尺度は、それぞれの画像上に提供される。略語：ＳＤ－ＴＧＩ、噴霧乾燥トレハロース＋トリス＋ＧＬＡ－ＳＥ＋ＩＤ９３、ＧＬＡ、グルコピラノシル脂質アジュバント、ＳＥ、スクアレン水中油型エマルジョン。図７において、剰余スペクトルを、試料スペクトルから非晶質トレハロース（質量分率８１％）、スクアレン（質量分率１４％）、およびトリス（質量分率２％）についての参照スペクトルを差し引くことによって得た。ＤＭＰＣ（質量分率３％）参照スペクトルは得ることができなかったが、剰余スペクトルにおける１３２５および１４６０ｃｍ－１［２５］でのピークの存在は、ＧＬＡ－ＳＥビヒクルのこの成分による可能性が高い。
同様の分析を、ＳＤ－ＴＧＩ粉末に対して完了し、トレハロース成分が非晶質であること、ならびに試料中のスクアレンおよびトリス緩衝剤の存在も確認した。ＳＤ－ＴＧおよびＳＤ－ＴＧＩは、試料間の製剤化の唯一の違いが後者におけるＩＤ９３の存在であるため、同様の結果を有するであろうことが予想された。
時点０ならびに５、２５、および４０℃での３ヶ月の貯蔵後のＳＤ－ＴＧＩの試料ペクトルを図８に示す。すべてのスペクトルは非常に類似して見え、粉末の固体状態が安定性研究の経過にわたって有意に変化しなかったことを示す。実際に、安定性研究の異なる点で収集されたＳＤ－ＴＧおよびＳＤ－ＴＧＩスペクトルのデコンボリューションは、すべての試料がスクアレンおよびトリスの存在を示し、トレハロースが非晶質のままであったことを確認した。これは、水分含有量が上昇しなかった場合、操作されたＴｇが＞８８℃であったため、トレハロースが結晶化する可能性が低かったので、水分含有量のデータと適合する。時点０スペクトル（図８）から４０℃試料で３ヶ月後に収集されたＳＤ－ＴＧＩスペクトルを差し引いた後に残るスペクトルは、極めて低い正規化された残りのスペクトルが、２つの試料が著しく類似しており、したがって粉末上に加えられた熱応力があっても、粉末の固相がこの期間にわたって維持されたことを示したことを示した。
賦形剤としてトレハロースを含む噴霧乾燥された水中油型製剤は、安定性について評価し、長期貯蔵のための非晶質微粒子内へのナノエマルジョンのカプセル化の実現可能性を評価した。アジュバント添加結核ワクチンの２つの製剤を安定性について試験した：水中油型エマルジョンとして製剤化された、アジュバントシステムの組成物、およびアジュバントシステムとワクチンタンパク質とを組み合わせる組成物。インシリコモデリングを、増加した成功の可能性を有する処理条件を予測するために、既知のトレハロースデータと組み合わせて使用し、よって試行錯誤の実証研究の必要量を低減した。製剤化原料および再構成された噴霧乾燥粉末の比較は、サイズおよび濃度の両方で、エマルジョン完全性が保存されたことを示した。同様に、アジュバントおよびタンパク質は、噴霧後に同様の濃度を有することが示された。これらの結果は、再構成時に示された物理化学的特性の保存のために、ワクチンの有効性が噴霧乾燥にわたって保存されたことを強く示す。
これらの噴霧乾燥粉末を次いで、再構成された粉末および乾燥粉末自体の特徴分析を通して、４０℃の温度まで、３ヶ月にわたる安定性について評価した。結果は、粉末が３ヶ月後にすべての温度について物理的安定性を維持したことを示した。同様に、エマルジョンサイズおよび多分散性は、両方の製剤についてすべての温度で有意に変化せず、これらの試験における性能は、凍結乾燥概念実証よりも有意に良好であり、有力な凍結乾燥候補と同等であった［８］。ＧＬＡ保存は、概念実証バージョンと同等であった［８］。
生成物の実証された可能性は、グローバルヘルス用途などの、室温での長期安定性が必要とされる用途に特に有用であることを示す。乾燥粉末として抗原を含むか、または含まないアジュバントを製剤化し、投与直前に再構成することは、輸送および貯蔵に関連するコストを大幅に低減するであろう。さらに、噴霧乾燥は、より低い処理コストを有するため、凍結乾燥よりも実行可能な代替手段である［１０］。
実施例８
肺送達のための噴霧乾燥製剤
実施例１～８でワクチン組成物についての噴霧乾燥の可能性を実証した後、実験を実施して、肺送達（吸入）に適した粒子サイズを生成するように製剤を精製した。噴霧乾燥は、凍結乾燥とは異なり、粒子サイズなどの特性の操作を可能にする。これは、筋肉内注射ではなく、肺（吸入）などの他の送達経路への扉を開く。
吸入可能な粒子は、以下を含む投与を成功させるための特定の特性を必要とする：１．固体含有量を低下させ、噴霧乾燥パラメータを操作することによって入手可能であり得る、２～３μｍを含む、２０μｍ未満の空気力学的粒子サイズ、および２．しわのある中空の粒子を作製するための高い分散性。これは、濃度が０．２５質量分率を超えるようにＬ－ロイシンを賦形剤として導入することによって得ることができる。
以下の製剤を、噴霧乾燥されたＩＤ９３およびＧＬＡアジュバントのために作製した。当初、抗原ＩＤ９３は、少量をｐＨ測定することが困難であったため、吸入可能な製剤（ＬＮ－２３－３２およびＬＮ－２３－３３）には含まれなかった。トレハロースおよびＧＬＡ－ＳＥ濃度を、凍結乾燥および噴霧乾燥ＴＴに使用されるものの１／３で調製した（以下の表３のＬＮ－２３－１７を参照されたい）。ＬＮ－２３－３３を、シェル形成剤としてロイシンを含んで製剤化した。
表４は、図８に示されるＡｌｂｅｒｔａ Ｉｄｅａｌｉｚｅｄ Ｔｈｒｏａｔ（次世代インパクター）の形態の乾燥粉末吸入器を使用した予備粒子サイズ結果を提供する。以下を分析した：（１）吸入器からの放出用量（％）、（２）総肺沈着（ＴＬＤ）（％）口－喉への損失を示す）、（３）質量中央空気力学的直径、ＭＭＡＤ（μｍ）、（４）幾何標準偏差、ＧＳＤ。ＭＭＡＤは、乾燥粒子の直径を見る。２つの吸入可能な製剤を試験した：ＬＮ－２３－３２およびＬＮ－２３－３３（ロイシンを含む）。
表３の結果は、噴霧乾燥の前および後の３つの製剤からの成分の濃度を比較した。２つの吸入可能な製剤（ＬＮ－２３－３２およびＬＮ－２３－３３）を、乾燥された注射可能な製剤ＬＮ－２３－１７と比較した。表３の結果は、噴霧乾燥後に回収された成分の質量に基づいて、ロイシンが収率を増加させたことを示した。
表４の結果は、ロイシンを含有する製剤（ＬＮ－２３－３３）が吸入器からの最良の放出用量をもたらしたことを示し、総肺沈着は、口および喉で失われる粒子が少なかった（より多くの粒子が肺に到達した）ことを示す。これは、ロイシンを有する製剤がエアロゾル化ワクチン組成物に最良の結果をもたらしたことを示す。
噴霧乾燥された吸入可能な製剤の特徴分析に使用される方法を、その中の噴霧乾燥（乾燥粉末）ワクチン組成物に関して実施例２で議論されるように実施した。例えば、ｐＨを見つけるために、再構成された粉末の３００μＬのアリコートを、Ｏｒｉｏｎ ＲＯＳＳ Ｕｌｔｒａ Ｓｅｍｉ－ｍｉｃｒｏ ｐＨ Ｅｌｅｃｔｒｏｄｅ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ、ＵＳＡ）を使用して測定し、試料ｐＨを決定した。ｐＨメーターを、４．００、７．００、および１０．００標準を使用して各測定前に較正した。液体原料の測定は、１レプリケートで構成された。再構成された粉末の浸透圧を、浸透圧計（モデル２０２０、Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、Ｎｏｒｗｏｏｄ、ＭＡ、ＵＳＡ）を使用して測定した。液体原料の測定は、１レプリケートで構成された。ＳＤは、標準偏差を表す。粒子サイズを、液体乾燥粉末組成物のＺ平均直径（Ｚ－Ａｖｅｄ）を測定することによって決定した（表５のＺａｖｇを参照されたい）。ＧＬＡおよびスクアレン定量化を、逆相ＨＰＬＣ分析を使用して達成した。試験を、分離のための１２００シリーズＨＰＬＣデバイス、および分析物検出のためのＣｏｒｏｎａ Ｃｈａｒｇｅｄ Ａｅｒｏｓｏｌ Ｄｅｔｅｃｔｏｒ（ＣＡＤ）を使用して実施した。液体原料測定は、１回分析された２レプリケートであった。多分散指数（ＰｄＩ）は、噴霧乾燥された組成物の再構成後に評価される。例えば、動的光散乱（ＤＬＳ）を使用して、ＰｄＩを評価することができる。
表５は、注射可能物と比較した吸入可能な製剤の試験の結果を示す。結果は、スクアレンおよびＧＬＡの高い保持（低い損失％）を示し、これらの成分が噴霧乾燥の過程にわたって劣化せず、粒子直径（Ｚａｖｇ）が維持されたことを示す。多分散指数（ＰｄＩ）は、有意に変化せず、エマルジョンの集塊化が低かったことを示す。
表５の結果は、１％ロイシンを含有する吸入可能な製剤であるＬＮ－２３－３３が、再構成時に粒子サイズの倍化、および試料が多分散であったことを示す。しかしながら、粉末ワクチンは、再構成なしに吸入可能な乾燥粉末として使用されることが想定されるため、この結果が有効性を低減する可能性は低い。さらに、再構成体積が厳密に正確でない場合があると考えると、ＧＬＡ含有量は、ほぼ予想通りであった。よって、所望の特徴を有する熱安定性の吸入可能なアジュバント組成物が成功裏に生成された。吸入可能な製剤ＬＮ－２３－３３およびＬＮ－２３－３２を使用して、活性量の抗原ＩＤ９３または別の抗原を含む例示的な吸入可能な製剤を生成することができる。実施例１～３の噴霧乾燥製剤での他の結果は、抗原の添加が粒子サイズおよび安定性に影響を及ぼさなかったことを示した。ＩＤ９３含有量を、ＳＤＳ－ＰＡＧＥおよびＥＬＩＳＡを使用して定量化することができる。総固体含有量は、トレハロース、ＧＭＰ、スクアレン、ＤＭＰＣ、および／またはロイシンの量を低減して、吸入可能な送達に適した粒子サイズを保持することによって、ＩＤ９３を含有する異なる製剤間で変動する。よって、実施例４の吸入可能な製剤を、吸入可能なワクチンのためのＩＤ９３などの抗原と使用することができる。
代替および拡張
本明細書に開示される各実施形態は、使用され得るか、またはそうでなければ開示される他の実施形態のいずれかと組み合わされ得る。任意の実施形態の任意の要素は、任意の実施形態において使用され得る。
本発明は特定の実施形態を参照して説明されたが、本発明の真の精神および範囲から逸脱することなく、様々な変更が行われ得、同等物がその要素に置換され得ることが当業者によって理解されるであろう。加えて、本発明の本質的な教示から逸脱することなく、修飾が行われ得る。
表６：ＩＤ９３配列（配列番号１－８）
配列 任意のＨｉｓタグを有するＩＤ９３融合ポリペプチド（配列番号１）
ＭＧＳＳＨＨＨＨＨＨＳＳＧＬＶＰＲＧＳＨＭＴＩＮＹＱＦＧＤＶＤＡＨＧＡＭＩＲＡＱＡＧＳＬＥＡＥＨＱＡ ＩＩＳＤＶＬＴＡＳＤＦＷＧＧＡＧＳＡＡＣＱＧＦＩＴＱＬＧＲＮＦＱＶＩＹＥＱＡＮＡＨＧＱＫＶＱＡＡＧＮ ＮＭＡＱＴＤＳＡＶＧＳＳＷＡＧＴＨＬＡＮＧＳＭＳＥＶＭＭＳＥＩＡＧＬＰＩＰＰＩＩＨＹＧＡＩＡＹＡＰＳ ＧＡＳＧＫＡＷＨＱＲＴＰＡＲＡＥＱＶＡＬＥＫＣＧＤＫＴＣＫＶＶＳＲＦＴＲＣＧＡＶＡＹＮＧＳＫＹＱＧＧ ＴＧＬＴＲＲＡＡＥＤＤＡＶＮＲＬＥＧＧＲＩＶＮＷＡＣＮＥＬＭＴＳＲＦＭＴＤＰＨＡＭＲＤＭＡＧＲＦＥＶ ＨＡＱＴＶＥＤＥＡＲＲＭＷＡＳＡＱＮＩＳＧＡＧＷＳＧＭＡＥＡＴＳＬＤＴＭＴＱＭＮＱＡＦＲＮＩＶＮＭＬ ＨＧＶＲＤＧＬＶＲＤＡＮＮＹＥＱＱＥＱＡＳＱＱＩＬＳＳＶＤＩＮＦＡＶＬＰＰＥＶＮＳＡＲＩＦＡＧＡＧＬ ＧＰＭＬＡＡＡＳＡＷＤＧＬＡＥＥＬＨＡＡＡＧＳＦＡＳＶＴＴＧＬＡＧＤＡＷＨＧＰＡＳＬＡＭＴＲＡＡＳＰ ＹＶＧＷＬＮＴＡＡＧＱＡＡＱＡＡＧＱＡＲＬＡＡＳＡＦＥＡＴＬＡＡＴＶＳＰＡＭＶＡＡＮＲＴＲＬＡＳＬＶ ＡＡＮＬＬＧＱＮＡＰＡＩＡＡＡＥＡＥＹＥＱＩＷＡＱＤＶＡＡＭＦＧＹＨＳＡＡＳＡＶＡＴＱＬＡＰＩＱＥＧ ＬＱＱＱＬＱＮＶＬＡＱＬＡＳＧＮＬＧＳＧＮＶＧＶＧＮＩＧＮＤＮＩＧＮＡＮＩＧＦＧＮＲＧＤＡＮＩＧＩＧ ＮＩＧＤＲＮＬＧＩＧＮＴＧＮＷＮＩＧＩＧＩＴＧＮＧＱＩＧＦＧＫＰＡＮＰＤＶＬＶＶＧＮＧＧＰＧＶＴＡＬ ＶＭＧＧＴＤＳＬＬＰＬＰＮＩＰＬＬＥＹＡＡＲＦＩＴＰＶＨＰＧＹＴＡＴＦＬＥＴＰＳＱＦＦＰＦＴＧＬＮＳ ＬＴＹＤＶＳＶＡＱＧＶＴＮＬＨＴＡＩＭＡＱＬＡＡＧＮＥＶＶＶＦＧＴＳＱＳＡＴＩＡＴＦＥＭＲＹＬＱＳＬ ＰＡＨＬＲＰＧＬＤＥＬＳＦＴＬＴＧＮＰＮＲＰＤＧＧＩＬＴＲＦＧＦＳＩＰＱＬＧＦＴＬＳＧＡＴＰＡＤＡＹ ＰＴＶＤＹＡＦＱＹＤＧＶＮＤＦＰＫＹＰＬＮＶＦＡＴＡＮＡＩＡＧＩＬＦＬＨＳＧＬＩＡＬＰＰＤＬＡＳＧＶ ＶＱＰＶＳＳＰＤＶＬＴＴＹＩＬＬＰＳＱＤＬＰＬＬＶＰＬＲＡＩＰＬＬＧＮＰＬＡＤＬＩＱＰＤＬＲＶＬＶＥ ＬＧＹＤＲＴＡＨＱＤＶＰＳＰＦＧＬＦＰＤＶＤＷＡＥＶＡＡＤＬＱＱＧＡＶＱＧＶＮＤＡＬＳＧＬＧＬＰＰＰ ＷＱＰＡＬＰＲＬＦＳＴ ＩＤ９３
融合ポリペプチド（配列番号２）
ＭＴＩＮＹＱＦＧＤＶＤＡＨＧＡＭＩＲＡＱＡＧＳＬＥＡＥＨＱＡＩＩＳＤＶＬＴＡＳＤＦＷＧＧＡＧＳＡＡＣ ＱＧＦＩＴＱＬＧＲＮＦＱＶＩＹＥＱＡＮＡＨＧＱＫＶＱＡＡＧＮＮＭＡＱＴＤＳＡＶＧＳＳＷＡＧＴＨＬＡＮ ＧＳＭＳＥＶＭＭＳＥＩＡＧＬＰＩＰＰＩＩＨＹＧＡＩＡＹＡＰＳＧＡＳＧＫＡＷＨＱＲＴＰＡＲＡＥＱＶＡＬ ＥＫＣＧＤＫＴＣＫＶＶＳＲＦＴＲＣＧＡＶＡＹＮＧＳＫＹＱＧＧＴＧＬＴＲＲＡＡＥＤＤＡＶＮＲＬＥＧＧＲ ＩＶＮＷＡＣＮＥＬＭＴＳＲＦＭＴＤＰＨＡＭＲＤＭＡＧＲＦＥＶＨＡＱＴＶＥＤＥＡＲＲＭＷＡＳＡＱＮＩＳ ＧＡＧＷＳＧＭＡＥＡＴＳＬＤＴＭＴＱＭＮＱＡＦＲＮＩＶＮＭＬＨＧＶＲＤＧＬＶＲＤＡＮＮＹＥＱＱＥＱＡ ＳＱＱＩＬＳＳＶＤＩＮＦＡＶＬＰＰＥＶＮＳＡＲＩＦＡＧＡＧＬＧＰＭＬＡＡＡＳＡＷＤＧＬＡＥＥＬＨＡＡ ＡＧＳＦＡＳＶＴＴＧＬＡＧＤＡＷＨＧＰＡＳＬＡＭＴＲＡＡＳＰＹＶＧＷＬＮＴＡＡＧＱＡＡＱＡＡＧＱＡＲ ＬＡＡＳＡＦＥＡＴＬＡＡＴＶＳＰＡＭＶＡＡＮＲＴＲＬＡＳＬＶＡＡＮＬＬＧＱＮＡＰＡＩＡＡＡＥＡＥＹＥ ＱＩＷＡＱＤＶＡＡＭＦＧＹＨＳＡＡＳＡＶＡＴＱＬＡＰＩＱＥＧＬＱＱＱＬＱＮＶＬＡＱＬＡＳＧＮＬＧＳＧ ＮＶＧＶＧＮＩＧＮＤＮＩＧＮＡＮＩＧＦＧＮＲＧＤＡＮＩＧＩＧＮＩＧＤＲＮＬＧＩＧＮＴＧＮＷＮＩＧＩＧ ＩＴＧＮＧＱＩＧＦＧＫＰＡＮＰＤＶＬＶＶＧＮＧＧＰＧＶＴＡＬＶＭＧＧＴＤＳＬＬＰＬＰＮＩＰＬＬＥＹＡ ＡＲＦＩＴＰＶＨＰＧＹＴＡＴＦＬＥＴＰＳＱＦＦＰＦＴＧＬＮＳＬＴＹＤＶＳＶＡＱＧＶＴＮＬＨＴＡＩＭＡ ＱＬＡＡＧＮＥＶＶＶＦＧＴＳＱＳＡＴＩＡＴＦＥＭＲＹＬＱＳＬＰＡＨＬＲＰＧＬＤＥＬＳＦＴＬＴＧＮＰＮ ＲＰＤＧＧＩＬＴＲＦＧＦＳＩＰＱＬＧＦＴＬＳＧＡＴＰＡＤＡＹＰＴＶＤＹＡＦＱＹＤＧＶＮＤＦＰＫＹＰＬ ＮＶＦＡＴＡＮＡＩＡＧＩＬＦＬＨＳＧＬＩＡＬＰＰＤＬＡＳＧＶＶＱＰＶＳＳＰＤＶＬＴＴＹＩＬＬＰＳＱＤ ＬＰＬＬＶＰＬＲＡＩＰＬＬＧＮＰＬＡＤＬＩＱＰＤＬＲＶＬＶＥＬＧＹＤＲＴＡＨＱＤＶＰＳＰＦＧＬＦＰＤ ＶＤＷＡＥＶＡＡＤＬＱＱＧＡＶＱＧＶＮＤＡＬＳＧＬＧＬＰＰＰＷＱＰＡＬＰＲＬＦＳＴ
任意のＨｉｓタグを有するＩＤ８３融合ポリペプチド（配列番号３）
ＭＧＳＳＨＨＨＨＨＨＳＳＧＬＶＰＲＧＳＨＭＧＴＨＬＡＮＧＳＭＳＥＶＭＭＳＥＩＡＧＬＰＩＰＰＩＩＨＹＧ ＡＩＡＹＡＰＳＧＡＳＧＫＡＷＨＱＲＴＰＡＲＡＥＱＶＡＬＥＫＣＧＤＫＴＣＫＶＶＳＲＦＴＲＣＧＡＶＡＹＮ ＧＳＫＹＱＧＧＴＧＬＴＲＲＡＡＥＤＤＡＶＮＲＬＥＧＧＲＩＶＮＷＡＣＮＥＬＭＴＳＲＦＭＴＤＰＨＡＭＲＤ ＭＡＧＲＦＥＶＨＡＱＴＶＥＤＥＡＲＲＭＷＡＳＡＱＮＩＳＧＡＧＷＳＧＭＡＥＡＴＳＬＤＴＭＴＱＭＮＱＡＦ ＲＮＩＶＮＭＬＨＧＶＲＤＧＬＶＲＤＡＮＮＹＥＱＱＥＱＡＳＱＱＩＬＳＳＶＤＩＮＦＡＶＬＰＰＥＶＮＳＡＲ ＩＦＡＧＡＧＬＧＰＭＬＡＡＡＳＡＷＤＧＬＡＥＥＬＨＡＡＡＧＳＦＡＳＶＴＴＧＬＡＧＤＡＷＨＧＰＡＳＬＡ ＭＴＲＡＡＳＰＹＶＧＷＬＮＴＡＡＧＱＡＡＱＡＡＧＱＡＲＬＡＡＳＡＦＥＡＴＬＡＡＴＶＳＰＡＭＶＡＡＮＲ ＴＲＬＡＳＬＶＡＡＮＬＬＧＱＮＡＰＡＩＡＡＡＥＡＥＹＥＱＩＷＡＱＤＶＡＡＭＦＧＹＨＳＡＡＳＡＶＡＴＱ ＬＡＰＩＱＥＧＬＱＱＱＬＱＮＶＬＡＱＬＡＳＧＮＬＧＳＧＮＶＧＶＧＮＩＧＮＤＮＩＧＮＡＮＩＧＦＧＮＲＧ ＤＡＮＩＧＩＧＮＩＧＤＲＮＬＧＩＧＮＴＧＮＷＮＩＧＩＧＩＴＧＮＧＱＩＧＦＧＫＰＡＮＰＤＶＬＶＶＧＮＧ ＧＰＧＶＴＡＬＶＭＧＧＴＤＳＬＬＰＬＰＮＩＰＬＬＥＹＡＡＲＦＩＴＰＶＨＰＧＹＴＡＴＦＬＥＴＰＳＱＦＦ ＰＦＴＧＬＮＳＬＴＹＤＶＳＶＡＱＧＶＴＮＬＨＴＡＩＭＡＱＬＡＡＧＮＥＶＶＶＦＧＴＳＱＳＡＴＩＡＴＦＥ ＭＲＹＬＱＳＬＰＡＨＬＲＰＧＬＤＥＬＳＦＴＬＴＧＮＰＮＲＰＤＧＧＩＬＴＲＦＧＦＳＩＰＱＬＧＦＴＬＳＧ ＡＴＰＡＤＡＹＰＴＶＤＹＡＦＱＹＤＧＶＮＤＦＰＫＹＰＬＮＶＦＡＴＡＮＡＩＡＧＩＬＦＬＨＳＧＬＩＡＬＰ ＰＤＬＡＳＧＶＶＱＰＶＳＳＰＤＶＬＴＴＹＩＬＬＰＳＱＤＬＰＬＬＶＰＬＲＡＩＰＬＬＧＮＰＬＡＤＬＩＱＰ ＤＬＲＶＬＶＥＬＧＹＤＲＴＡＨＱＤＶＰＳＰＦＧＬＦＰＤＶＤＷＡＥＶＡＡＤＬＱＱＧＡＶＱＧＶＮＤＡＬＳ ＧＬＧＬＰＰＰＷＱＰＡＬＰＲＬＦＳＴ
ＩＤ８３融合ポリペプチド（配列番号４）
ＨＬＡＮＧＳＭＳＥＶＭＭＳＥＩＡＧＬＰＩＰＰＩＩＨＹＧＡＩＡＹＡＰＳＧＡＳＧＫＡＷＨＱＲＴＰＡＲＡＥ ＱＶＡＬＥＫＣＧＤＫＴＣＫＶＶＳＲＦＴＲＣＧＡＶＡＹＮＧＳＫＹＱＧＧＴＧＬＴＲＲＡＡＥＤＤＡＶＮＲＬ ＥＧＧＲＩＶＮＷＡＣＮＥＬＭＴＳＲＦＭＴＤＰＨＡＭＲＤＭＡＧＲＦＥＶＨＡＱＴＶＥＤＥＡＲＲＭＷＡＳＡ ＱＮＩＳＧＡＧＷＳＧＭＡＥＡＴＳＬＤＴＭＴＱＭＮＱＡＦＲＮＩＶＮＭＬＨＧＶＲＤＧＬＶＲＤＡＮＮＹＥＱ ＱＥＱＡＳＱＱＩＬＳＳＶＤＩＮＦＡＶＬＰＰＥＶＮＳＡＲＩＦＡＧＡＧＬＧＰＭＬＡＡＡＳＡＷＤＧＬＡＥＥ ＬＨＡＡＡＧＳＦＡＳＶＴＴＧＬＡＧＤＡＷＨＧＰＡＳＬＡＭＴＲＡＡＳＰＹＶＧＷＬＮＴＡＡＧＱＡＡＱＡＡ ＧＱＡＲＬＡＡＳＡＦＥＡＴＬＡＡＴＶＳＰＡＭＶＡＡＮＲＴＲＬＡＳＬＶＡＡＮＬＬＧＱＮＡＰＡＩＡＡＡＥ ＡＥＹＥＱＩＷＡＱＤＶＡＡＭＦＧＹＨＳＡＡＳＡＶＡＴＱＬＡＰＩＱＥＧＬＱＱＱＬＱＮＶＬＡＱＬＡＳＧＮ ＬＧＳＧＮＶＧＶＧＮＩＧＮＤＮＩＧＮＡＮＩＧＦＧＮＲＧＤＡＮＩＧＩＧＮＩＧＤＲＮＬＧＩＧＮＴＧＮＷＮ ＩＧＩＧＩＴＧＮＧＱＩＧＦＧＫＰＡＮＰＤＶＬＶＶＧＮＧＧＰＧＶＴＡＬＶＭＧＧＴＤＳＬＬＰＬＰＮＩＰＬ ＬＥＹＡＡＲＦＩＴＰＶＨＰＧＹＴＡＴＦＬＥＴＰＳＱＦＦＰＦＴＧＬＮＳＬＴＹＤＶＳＶＡＱＧＶＴＮＬＨＴ ＡＩＭＡＱＬＡＡＧＮＥＶＶＶＦＧＴＳＱＳＡＴＩＡＴＦＥＭＲＹＬＱＳＬＰＡＨＬＲＰＧＬＤＥＬＳＦＴＬＴ ＧＮＰＮＲＰＤＧＧＩＬＴＲＦＧＦＳＩＰＱＬＧＦＴＬＳＧＡＴＰＡＤＡＹＰＴＶＤＹＡＦＱＹＤＧＶＮＤＦＰ ＫＹＰＬＮＶＦＡＴＡＮＡＩＡＧＩＬＦＬＨＳＧＬＩＡＬＰＰＤＬＡＳＧＶＶＱＰＶＳＳＰＤＶＬＴＴＹＩＬＬ ＰＳＱＤＬＰＬＬＶＰＬＲＡＩＰＬＬＧＮＰＬＡＤＬＩＱＰＤＬＲＶＬＶＥＬＧＹＤＲＴＡＨＱＤＶＰＳＰＦＧ ＬＦＰＤＶＤＷＡＥＶＡＡＤＬＱＱＧＡＶＱＧＶＮＤＡＬＳＧＬＧＬＰＰＰＷＱＰＡＬＰＲＬＦＳＴ Ｒｖ１８１３（配列番号５） ＭＩＴＮＬＲＲＲＴＡＭＡＡＡＧＬＧＡＡＬＧＬＧＩＬＬＶＰＴＶＤＡＨＬＡＮＧＳＭＳＥＶＭＭＳＥＩＡＧＬ ＰＩＰＰＩＩＨＹＧＡＩＡＹＡＰＳＧＡＳＧＫＡＷＨＱＲＴＰＡＲＡＥＱＶＡＬＥＫＣＧＤＫＴＣＫＶＶＳＲＦ ＴＲＣＧＡＶＡＹＮＧＳＫＹＱＧＧＴＧＬＴＲＲＡＡＥＤＤＡＶＮＲＬＥＧＧＲＩＶＮＷＡＣＮ Ｒｖ３６２０（配列番号６）
ＭＴＳＲＦＭＴＤＰＨＡＭＲＤＭＡＧＲＦＥＶＨＡＱＴＶＥＤＥＡＲＲＭＷＡＳＡＱＮＩＳＧＡＧＷＳＧＭＡＥ ＡＴＳＬＤＴＭＴＱＭＮＱＡＦＲＮＩＶＮＭＬＨＧＶＲＤＧＬＶＲＤＡＮＮＹＥＱＱＥＱＡＳＱＱＩＬＳＳ Ｒｖ２６０８（配列番号７）
ＭＮＦＡＶＬＰＰＥＶＮＳＡＲＩＦＡＧＡＧＬＧＰＭＬＡＡＡＳＡＷＤＧＬＡＥＥＬＨＡＡＡＧＳＦＡＳＶＴＴ ＧＬＡＧＤＡＷＨＧＰＡＳＬＡＭＴＲＡＡＳＰＹＶＧＷＬＮＴＡＡＧＱＡＡＱＡＡＧＱＡＲＬＡＡＳＡＦＥＡＴ ＬＡＡＴＶＳＰＡＭＶＡＡＮＲＴＲＬＡＳＬＶＡＡＮＬＬＧＱＮＡＰＡＩＡＡＡＥＡＥＹＥＱＩＷＡＱＤＶＡＡ ＭＦＧＹＨＳＡＡＳＡＶＡＴＱＬＡＰＩＱＥＧＬＱＱＱＬＱＮＶＬＡＱＬＡＳＧＮＬＧＳＧＮＶＧＶＧＮＩＧＮ ＤＮＩＧＮＡＮＩＧＦＧＮＲＧＤＡＮＩＧＩＧＮＩＧＤＲＮＬＧＩＧＮＴＧＮＷＮＩＧＩＧＩＴＧＮＧＱＩＧＦ ＧＫＰＡＮＰＤＶＬＶＶＧＮＧＧＰＧＶＴＡＬＶＭＧＧＴＤＳＬＬＰＬＰＮＩＰＬＬＥＹＡＡＲＦＩＴＰＶＨＰ ＧＹＴＡＴＦＬＥＴＰＳＱＦＦＰＦＴＧＬＮＳＬＴＹＤＶＳＶＡＱＧＶＴＮＬＨＴＡＩＭＡＱＬＡＡＧＮＥＶＶ ＶＦＧＴＳＱＳＡＴＩＡＴＦＥＭＲＹＬＱＳＬＰＡＨＬＲＰＧＬＤＥＬＳＦＴＬＴＧＮＰＮＲＰＤＧＧＩＬＴＲ ＦＧＦＳＩＰＱＬＧＦＴＬＳＧＡＴＰＡＤＡＹＰＴＶＤＹＡＦＱＹＤＧＶＮＤＦＰＫＹＰＬＮＶＦＡＴＡＮＡＩ ＡＧＩＬＦＬＨＳＧＬＩＡＬＰＰＤＬＡＳＧＶＶＱＰＶＳＳＰＤＶＬＴＴＹＩＬＬＰＳＱＤＬＰＬＬＶＰＬＲＡ ＩＰＬＬＧＮＰＬＡＤＬＩＱＰＤＬＲＶＬＶＥＬＧＹＤＲＴＡＨＱＤＶＰＳＰＦＧＬＦＰＤＶＤＷＡＥＶＡＡＤ ＬＱＱＧＡＶＱＧＶＮＤＡＬＳＧＬＧＬＰＰＰＷＱＰＡＬＰＲＬＦ Ｒｖ３６１９（配列番号８）
ＭＴＩＮＹＱＦＧＤＶＤＡＨＧＡＭＩＲＡＱＡＧＳＬＥＡＥＨＱＡＩＩＳＤＶＬＴＡＳＤＦＷＧＧＡＧＳＡＡＣ ＱＧＦＩＴＱＬＧＲＮＦＱＶＩＹＥＱＡＮＡＨＧＱＫＶＱＡＡＧＮＮＭＡＱＴＤＳＡＶＧＳＳＷＡ

Claims (25)

  1. 有効量の抗原と、アジュバントと、代謝可能な油を含むゲル－微粒子であって該代謝可能な油は室温で液体である水中油型エマルジョン中に存在する、ゲル－微粒子と、１つ以上の賦形剤を含む、乾燥粉末の形態にある噴霧乾燥ワクチン組成物であって、前記乾燥粉末の粒子サイズが、約１２０μｍ未満の直径を有し、前記賦形剤はトレハロースであり、前記代謝可能な油は、スクアレンであり、前記アジュバントがグルコピラノシル脂質アジュバント（ＧＬＡ）であり、前記スクアレンと前記ＧＬＡがＧＬＡスクアレン水中油型エマルジョン（ＧＬＡ－ＳＥ）を形成し、前記噴霧乾燥ワクチン組成物は、前記乾燥粉末の再構成後の水中油型エマルジョンの液滴サイズが噴霧乾燥前の水中油型エマルジョンの液滴サイズと有意に相違しないことにより測定されるコロイド安定性を示す、噴霧乾燥ワクチン組成物。
  2. 前記乾燥粉末が、約２～３％の水分含有量を有する、請求項１記載の噴霧乾燥ワクチン組成物。
  3. 前記乾燥粉末の粒子が、約２０μｍ未満の直径を有する、請求項１または２に記載の噴霧乾燥ワクチン組成物。
  4. 前記乾燥粉末の粒子サイズが、約１０μｍ未満の直径を有する、請求項３記載の噴霧乾燥ワクチン組成物。
  5. 前記乾燥粉末の粒子サイズが、約１００ｎｍ～３００ｎｍの直径を有する、請求項４記載の噴霧乾燥ワクチン組成物。
  6. 前記噴霧乾燥ワクチン組成物は、吸入可能である、請求項１～５のいずれか１項に記載の噴霧乾燥ワクチン組成物。
  7. 前記アジュバントが、ＴＬＲ４アゴニストである、請求項１～６のいずれか１項に記載の噴霧乾燥ワクチン組成物。
  8. 前記噴霧乾燥ワクチン組成物が、約８℃～約６０℃の温度で少なくとも１ヶ月間、少なくとも３ヶ月間、少なくとも６ヶ月間又は少なくとも１２ヶ月間熱安定性である、請求項１～７のいずれか１項に記載の噴霧乾燥ワクチン組成物。
  9. 前記噴霧乾燥ワクチン組成物が、再構成後、安定なナノエマルジョンサイズを維持する、請求項１～８のいずれか１項に記載の噴霧乾燥ワクチン組成物。
  10. 噴霧乾燥前及び再構成後の水中油型エマルジョンの液滴サイズが約100nmである、請求項９記載の噴霧乾燥ワクチン組成物。
  11. 前記噴霧乾燥ワクチン組成物は、前記乾燥粉末の再構成後の水中油型エマルジョンの多分散指数(PDI)が噴霧乾燥前の水中油型エマルジョンPDIと有意に相違しないことにより測定されるコロイド安定性を示す、請求項１～１０のいずれか１項に記載の噴霧乾燥ワクチン組成物。
  12. １，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＭＰＣ）、１－パルミトイル－２－オレオイル－ｓｎ－グリセロール－３－ホスホコリン（ＰＯＰＣ）、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＯＰＣ）、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）、卵ＰＣ、レシチン、Ｔｗｅｅｎ、またはそれらの組み合わせをさらに含む、請求項１～１１のいずれか１項に記載の噴霧乾燥ワクチン組成物。
  13. 前記抗原が、ポリペプチド、ポリペプチドをコードする核酸、または病原体である、請求項１～１２のいずれか１項に記載の噴霧乾燥ワクチン組成物。
  14. シェル形成剤をさらに含む、請求項１～１３のいずれか１項に記載の噴霧乾燥ワクチン組成物。
  15. 前記シェル系製剤が、ペプチド、アミノ酸又はロイシンである、請求項１４に記載の噴霧乾燥ワクチン組成物。
  16. 熱安定性乾燥粉末ワクチン組成物を生成するための方法であって、微粒化ガスを使用して噴霧乾燥機において、乾燥粉末がゲル－微粒子を含むようなプロセスパラメータで水中油型エマルジョンを噴霧乾燥して乾燥粉末を得るステップを含み、前記水中油型エマルジョンが、（１）抗原、（２）室温で液体である代謝可能な油、（３）１つ以上の賦形剤、（４）アジュバント、および（５）シェル形成剤を含み、前記代謝可能な油は、スクアレンであり、前記賦形剤はトレハロースであり、前記アジュバントがグルコピラノシル脂質アジュバント（ＧＬＡ）であり、前記スクアレンと前記ＧＬＡがＧＬＡスクアレン水中油型エマルジョン（ＧＬＡ－ＳＥ）を形成し、前記噴霧乾燥ワクチン組成物は、前記乾燥粉末の再構成後の水中油型エマルジョンの液滴サイズが噴霧乾燥前の水中油型エマルジョンの液滴サイズと有意に相違しないことにより測定されるコロイド安定性を示す、方法。
  17. 前記水中油型エマルジョンが、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＭＰＣ）、１－パルミトイル－２－オレオイル－ｓｎ－グリセロール－３－ホスホコリン（ＰＯＰＣ）、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＯＰＣ）、卵ＰＣ、レシチン、Ｔｗｅｅｎ、またはそれらの組み合わせをさらに含む、請求項１６に記載の方法。
  18. 前記プロセスパラメータが、１０ｐｓｉの微粒化ガス圧力、０．６ｍＬ／分の微粒化ガス流量、および２００ＳＬＰＭの乾燥ガス流量を含む、請求項１６又は１７に記載の方法。
  19. 前記プロセスパラメータが、約３６℃の出口温度を含む、請求項１６～１８のいずれか１項に記載の方法。
  20. 前記プロセスパラメータが、約７％の出口湿度を含む、請求項１６～１９のいずれか１項に記載の方法。
  21. 吸入又は呼吸器送達を介して投与される、請求項１～１５のいずれか１項に記載の前記噴霧乾燥ワクチン組成物。
  22. （１）前記噴霧乾燥ワクチンは、水性希釈剤で再構成され、（２）再構成された前記乾燥粉末ワクチンが非経口経路を介して投与される、請求項１～１５のいずれか１項に記載の噴霧乾燥ワクチン組成物。
  23. 請求項１～１５のいずれか１項に記載の乾燥粉末を含み、吸入により投与される、呼吸器疾患の治療剤。
  24. 前記呼吸器疾患が、結核（ＴＢ）、インフルエンザ（流感）、呼吸器合胞体ウイルス感染症（ＲＳＶ）又は肺癌である請求項２３記載の治療剤。
  25. 噴霧乾燥ワクチン組成物が、約４０℃で約３ヶ月安定である、請求項９記載の噴霧乾燥ワクチン組成物。
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