JP7473948B2

JP7473948B2 - インターロイキン３７発現促進剤

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Publication number: JP7473948B2
Application number: JP2020006712A
Authority: JP
Inventors: 知大松本; 千奈佐藤
Original assignee: Nippon Menard Cosmetic Co Ltd
Current assignee: Nippon Menard Cosmetic Co Ltd
Priority date: 2020-01-20
Filing date: 2020-01-20
Publication date: 2024-04-24
Anticipated expiration: 2040-01-20
Also published as: JP2021113173A

Description

本発明は、グァバ葉を含有することを特徴とするインターロイキン３７発現促進剤、抗炎症剤、美白剤に関する。さらに詳しくは、グァバ葉、パイナップル果実及びパパイヤ果実を含有することを特徴とするインターロイキン３７発現促進剤、抗炎症剤、美白剤に関する。

インターロイキン３７（ＩＬ－３７）は、サイトカインのインターロイキン１（ＩＬ－１）ファミリーのメンバーであり、炎症抑制作用（抗炎症作用）を有している。ＩＬ－３７には、細菌感染や紫外線などの外部刺激により誘発される炎症性サイトカインなどにより引き起こされる炎症を抑制する働きがあり、炎症に対する広範な防御的役割を担っている。

炎症は、細菌感染や紫外線などの外部刺激で誘発される生体防御反応のひとつである。しかし、この炎症が過剰になると、組織や細胞を損傷させ、正常な生体反応を維持できない場合もある。炎症が生体を損傷させる疾病として、アレルギー疾患、慢性関節リウマチ、炎症性腸疾患などが知られている。つまり、外部刺激への対応として炎症反応は必要不可欠であるが、抗炎症作用により炎症が過剰にならないようにコントロールすることで、疾病などから生体を守ることができる。

美白は、色素沈着が少なく、白くて明るい皮膚の色のことを指す。この美白においても炎症が大きく関与している。紫外線暴露でケラチノサイト（表皮細胞）から産生される炎症性サイトカイン（ＩＬ－１など）がメラノサイト（色素細胞）を刺激し、メラニンが過剰に産生される。この過剰に産生されたメラニンが色素沈着の原因であり、その繰り返しによってシミやそばかすが生じる。シミやそばかすのない、白くて明るい皮膚の色を保つには、紫外線で誘発される炎症を抑えることが非常に重要となる。

ＩＬ－３７に関連する技術情報として、ＩＬ－３７のバリアントを含むポリペプチド、並びに関連する治療法及び組成物（特許文献１）が、抗炎症性ポリペプチドを提供する技術として知られているが、グァバ葉は記載されておらず、また、文献中に美白を想到させる記載は一切見当らない。また、グァバ葉、パイナップル果実、パパイヤ果実を含有する美白剤（特許文献２、３、４）は提案されているものの、この３種を組み合わせた抗炎症剤や美白剤については全く知られていない。

特開２０１８－５２２５４７号公報特許第３１９３４４１号特許第５７１４８６９号特開２００６－６２９９１号公報

本発明は、グァバ葉を含有することを特徴とするＩＬ－３７発現促進剤、抗炎症剤、美白剤に関する。さらに詳しくは、グァバ葉、パイナップル果実及びパパイヤ果実を含有することを特徴とするＩＬ－３７発現促進剤、抗炎症剤、美白剤に関する。

本発明者らは、鋭意研究した結果、グァバ葉がＩＬ－３７発現促進作用、抗炎症作用、美白作用を有することを見出した。さらに、グァバ葉、パイナップル果実、パパイヤ果実を組み合わせることにより、ＩＬ－３７発現促進作用、抗炎症作用、美白作用がさらに顕著に増加することを見出した。

本発明のグァバ葉として、フトモモ科（Ｍｙｒｔａｉｅｓ）バンジロウ属（Ｐｓｉｄｉｕｍ）に属するグァバ（Ｐｓｉｄｉｕｍｇｕａｊａｖａ）の葉を用いることができる。

本発明のパイナップル果実として、パイナップル科（Ｂｒｏｍｅｌｉａｃｅａｅ）アナナス属（Ａｎａｎａｓ）に属するパイナップル（Ａｎａｎａｓｃｏｍｏｓｕｓ）の果実を用いることができる。

本発明のパパイヤ果実として、パパイヤ科（Ｃａｒｉｃａｃｅａｅ）パパイヤ属（Ｃａｒｉｃａ）に属するパパイヤ（Ｃａｒｉｃａｐａｐａｙａ）の果実を用いることができる。

本発明に用いるグァバ葉、パイナップル果実、パパイヤ果実は、必要に応じてそのままの状態、破砕物、圧搾物、乾燥物などを適宜選択することができる。また、微粒化処理、ロールプレス処理、摩砕処理、超高圧マイクロスチーム処理、通常工業的に用いられるその他機械的方法などで処理して用いてもよい。

本発明に用いるグァバ葉、パイナップル果実、パパイヤ果実は、必要に応じて抽出操作に付することができる。抽出溶媒として、水、低級アルコール類（メタノール、エタノール、１－プロパノール、２－プロパノール、１－ブタノール、２－ブタノールなど）、液状多価アルコール類（１，３－ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリンなど）、ケトン類（アセトン、メチルエチルケトンなど）、アセトニトリル、エステル類（酢酸エチル、酢酸ブチルなど）、炭化水素類（ヘキサン、ヘプタン、石油エーテルなど）、エーテル類（エチルエーテル、テトラヒドロフラン、プロピルエーテルなど）などを用いることができる。これらの溶媒は一種でも二種以上を混合して用いても良い。また、抽出方法としては、連続抽出、浸漬抽出などが挙げられ、必要に応じて、濃縮、希釈、濾過、活性炭処理などによる脱色、脱臭などの処理をして用いてもよい。更には、抽出した溶液を濃縮乾固、噴霧乾燥、凍結乾燥などの処理を行い、乾燥物として用いてもよい。

本発明のグァバ葉、パイナップル果実、パパイヤ果実は、いずれの処理物あるいは抽出物を用いてもよい。更に、グァバ葉は含水エタノール抽出物、パイナップル果実はエタノール抽出物、パパイヤ果実は乾燥破砕した粉末を用いることが好ましい。

本発明に用いるグァバ葉、パイナップル果実、パパイヤ果実の摂取量は、投与形態、使用目的、年齢、体重などによって異なる。グァバ葉含水エタノール抽出物として０．１～１００ｍｇ／日、好ましくは０．５～２０ｍｇ／日、より好ましくは１～１０ｍｇ／日の範囲で１日１回から数回経口投与できる。パイナップル果実エタノール抽出物として１～１０００ｍｇ／日、好ましくは１０～１００ｍｇ／日、より好ましくは２０～５０ｍｇ／日の範囲で１日１回から数回経口投与できる。パパイヤ果実粉末として０．１～１００ｍｇ／日、好ましくは０．５～２０ｍｇ／日、より好ましくは１～１０ｍｇ／日の範囲で１日１回から数回経口投与できる。上記投与範囲より少ない量で十分な場合もあるし、また、範囲を超えて投与する必要がある場合もある。また、製剤化における薬効成分の添加法については、予め加えておいても、製造途中で添加しても良く、作業性を考えて適宜選択すれば良い。

本発明のＩＬ－３７発現促進剤は、食品、医薬部外品又は医薬品のいずれにも用いることができる。その剤形は内服用であることが好ましく、散剤、顆粒剤、錠剤、糖衣錠剤、カプセル剤、シロップ剤、丸剤、懸濁剤、液剤、乳剤などの剤形で用いることができる。また、皮膚外用剤、注射剤、座剤などとして用いることもできる。

本発明のＩＬ－３７発現促進剤は、効果を損なわない範囲内で、必要に応じて通常の食品、医薬部外品又は医薬品に用いられる賦形剤、安定剤、保存剤、結合剤、崩壊剤、炭化水素類、脂肪酸類、ビタミン類、アルコール類、エステル類、ｐＨ調整剤、防腐剤、香料などの成分を含有することもできる。ビタミン類を含有することが好ましく、更にβ―カロテン（ビタミンＡ）、ビタミンＣ、ビタミンＥを含有することが好ましく、特にβ―カロテンを１～２ｍｇ、ビタミンＣを１０００～２０００ｍｇ、ビタミンＥを１０～２０ｍｇで含有することが好ましい。

本発明における抗炎症剤は、生体で生じた過剰な炎症を抑制する剤である。美白には抗炎症作用による色素沈着抑制が重要であることから、本発明の抗炎症剤は美白剤として用いることができる。また、アレルギー疾患、慢性関節リウマチ、炎症性腸疾患、などの炎症性疾患の症状の予防改善に用いることができる。

本発明における美白剤は、紫外線などによるメラニン生成に起因する色素沈着を抑制、改善する剤であり、シミ、そばかすの予防改善に用いることができる。

本発明のグァバ葉を含有することを特徴とするＩＬ－３７発現促進剤は、ＩＬ－３７発現促進作用、抗炎症作用、美白作用を有する。さらに、グァバ葉、パイナップル果実及びパパイヤ果実を含有することを特徴とするＩＬ－３７発現促進剤は、極めて優れたＩＬ－３７発現促進作用、抗炎症作用、美白作用を有する。

以下の実施例は例示のために説明するものであり、本発明の特許請求の範囲はこれらの実施例により何ら限定されるものではない。尚、実施例に示す含有量の％は重量％を示す。

製造例１グァバ葉熱水抽出物
グァバ葉１００ｇに、精製水２Ｌを加え、９５～１００℃で２時間抽出した後、濾液を濃縮、凍結乾燥して、グァバ葉熱水抽出物９．３ｇを得た。

製造例２グァバ葉３０％エタノール抽出物
グァバ葉１００ｇに、精製水１．４Ｌとエタノール０．６Ｌを加え、常温で５日間抽出した後、濾液を濃縮乾固して、グァバ葉３０％エタノール抽出物５．７ｇを得た。

製造例３グァバ葉７０％エタノール抽出物
グァバ葉１００ｇに、精製水０．６Ｌとエタノール１．４Ｌを加え、常温で５日間抽出した後、濾液を濃縮乾固して、グァバ葉７０％エタノール抽出物３．２ｇを得た。

製造例４パイナップル熱水抽出物
パイナップル果実１００ｇに、精製水２Ｌを加え、９５～１００℃で２時間抽出した後、濾液を濃縮、凍結乾燥して、パイナップル果実熱水抽出物７．４ｇを得た。

製造例５パイナップル果実３０％エタノール抽出物
パイナップル果実１００ｇに、精製水１．４Ｌとエタノール０．６Ｌを加え、常温で５日間抽出した後、濾液を濃縮乾固して、パイナップル果実３０％エタノール抽出物４．０ｇを得た。

製造例６パイナップル果実エタノール抽出物
パイナップル果実１００ｇに、エタノール１Ｌを加え、常温で５日間抽出した後、濾液を濃縮乾固して、パイナップル果実エタノール抽出物４．１ｇを得た。

製造例７パパイヤ果実粉末
パパイヤ果実１００ｇを乾燥させ、粉砕後にふるい選別して、パパイヤ果実粉末８０ｇを得た。

製造例８パパイヤ果実熱水抽出物
パパイヤ果実１００ｇに、精製水２Ｌを加え、９５～１００℃で２時間抽出した後、濾液を濃縮、凍結乾燥して、パパイヤ果実熱水抽出物８．７ｇを得た。

製造例９パパイヤ果実３０％エタノール抽出物
パパイヤ果実１００ｇに、精製水１．４Ｌとエタノール０．６Ｌを加え、常温で５日間抽出した後、濾液を濃縮乾固して、パパイヤ果実３０％エタノール抽出物４．７ｇを得た。

処方例１顆粒剤
＜処方＞
成分含有量（％）
１．グァバ葉３０％エタノール抽出物（製造例２）０．１６
２．乳糖９１．８４
３．セルロース８．００
＜製造方法＞
成分１～３を乾式法により造粒し、顆粒剤を得る。
＜用法＞
１日当り３．２ｇ摂取する。

処方例２顆粒剤
＜処方＞
成分含有量（％）
１．グァバ葉３０％エタノール抽出物（製造例２）０．１６
２．パイナップル果実エタノール抽出物（製造例６）１．２５
３．パパイヤ果実粉末（製造例７）０．１６
４．乳糖９０．４３
５．セルロース８．００
＜製造方法＞
成分１～５を乾式法により造粒し、顆粒剤を得る。
＜用法＞
１日当り３．２ｇ摂取する。

処方例３顆粒剤
＜処方＞
成分含有量（％）
１．グァバ葉３０％エタノール抽出物（製造例２）０．１６
２．パイナップル果実エタノール抽出物（製造例６）１．２５
３．パパイヤ果実粉末（製造例７）０．１６
４．β―カロテン０．０５
５．ビタミンＣ５０．００
６．ビタミンＥ０．５０
７．乳糖３９．８８
８．セルロース８．００
＜製造方法＞
成分１～８を乾式法により造粒し、顆粒剤を得る。
＜用法＞
１日当り３．２ｇ摂取する。

処方例４軟カプセル剤
＜処方＞
成分含有量（％）
１．グァバ葉熱水抽出物（製造例１）０．０９０
２．パイナップル果実熱水抽出物（製造例４）１．８００
３．パパイヤ果実熱水抽出物（製造例８）０．００６
４．米胚芽油７８．１０４
５．ミツロウ１２．０００
６．ビタミンＥ８．０００
＜製造方法＞
成分１～６を混合し、ゼラチン、グリセリン、カラメル色素で構成される被膜に、３５０ｍｇ充填し、乾燥後、軟カプセル剤を得る。
＜用法＞
１日当り３粒摂取する。

処方例５飲料
＜処方＞
成分含有量（％）
１．グァバ葉７０％エタノール抽出物（製造例３）０．１０
２．パイナップル果実３０％エタノール抽出物（製造例５）１．８０
３．パパイヤ果実３０％エタノール抽出物（製造例９）０．０１
４．クエン酸６．００
５．ショ糖１１．００
６．香料１．００
７．水８０．０９
＜製造方法＞
成分１～６を成分７の一部の水に撹拌溶解する。次いで、成分７の残りの水を加えて混合し、殺菌したものを飲料とする。
＜用法＞
１日当り５０ｍＬ摂取する。

処方例６化粧水
＜処方＞
成分含有量（％）
１．グァバ葉３０％エタノール抽出物（製造例２）５．０
２．パイナップル果実エタノール抽出物（製造例６）５．０
３．パパイヤ果実粉末（製造例７）５．０
４．グリセリン５．０
５．ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート１．５
６．エタノール５．０
７．防腐剤０．５
８．水７３．０
＜製造方法＞
成分１～７を成分８の水に撹拌溶解する。
＜用法＞
１日当り２ｍＬを皮膚に塗布する。

比較例１従来の顆粒剤
処方例１の顆粒剤において、グァバ葉３０％エタノール抽出物（製造例２）を乳糖に置換えたものを、従来の顆粒剤とした。

試験例１グァバ葉による抗炎症作用
ＤＭＥＭ培地でコンフルエントまで培養したヒトケラチノサイトＨａＣａＴを用いて、紫外線Ｂ（ＵＶＢ）未照射とＵＶＢ照射（５０ｍＪ／ｃｍ^２）の条件にて、グァバ葉３０％エタノール抽出物（製造例２）を２４時間添加して、リアルタイムＰＣＲ法による遺伝子発現解析を行った。未添加かつＵＶＢ未照射の条件での発現量を１として比較した。

ＩＬ－３７用のプライマーセット
ＴＣＴＴＴＧＣＡＴＴＡＧＣＣＴＣＡＴＣＣ（配列番号１）
ＡＴＣＡＧＴＴＴＣＴＣＣＴＴＣＴＴＣＡＧＣ（配列番号２）
ＩＬ－１β用のプライマーセット
ＡＣＧＡＡＴＣＴＣＣＧＡＣＣＡＣＣＡＣＴＡ（配列番号３）
ＧＧＣＡＧＧＧＡＡＣＣＡＧＣＡＴＣＴＴ（配列番号４）

試験例１の結果を表１に示す。グァバ葉３０％エタノール抽出物（製造例２）は、ＵＶＢ未照射時のＩＬ－３７の発現を促進し、ＵＶＢ照射で抑制されたＩＬ－３７発現を回復させた。このことから、グァバ葉のＩＬ－３７発現促進作用が示された。

さらに、グァバ葉３０％エタノール抽出物（製造例２）は、ＵＶＢ未照射時のＩＬ－１β発現とＵＶＢ照射で促進されたＩＬ－１β発現を抑制した。このことから、グァバ葉はＩＬ－３７発現促進とＩＬ－１β発現抑制による抗炎症作用を有していることが示された。更に、美白には抗炎症作用による色素沈着の抑制、改善が重要であることから、グァバ葉は美白作用も有していることが示された。

試験例２グァバ葉、パイナップル果実、パパイヤ果実によるＩＬ－３７発現促進作用
ＤＭＥＭ培地でコンフルエントまで培養したヒトケラチノサイトＨａＣａＴに、グァバ葉３０％エタノール抽出物（製造例２）、パイナップル果実エタノール抽出物（製造例６）、パパイヤ果実粉末（製造例７）を２４時間添加して、リアルタイムＰＣＲ法による遺伝子発現解析を行った。プライマーは試験例１と同じものを用い、未添加の条件での発現量を１として比較した。

試験例２の結果を表２に示す。グァバ葉３０％エタノール抽出物（製造例２）、パイナップル果実エタノール抽出物（製造例６）、パパイヤ果実粉末（製造例７）を各々添加した場合と比較して、製造例２、６、７の組み合わせはＩＬ－３７発現量の大幅な増加を示した。このことから、グァバ葉、パイナップル果実、パパイヤ果実の組み合わせは格別顕著なＩＬ－３７発現促進作用を示し、極めて優れた抗炎症作用、美白作用を有していることが示された。

試験例３ヒト飲用による色素沈着改善作用
男女１０４名（２０～５０歳代）を２６人ずつ４群に分け、グァバ葉を含有する顆粒剤（処方例１）、グァバ葉、パイナップル果実、パパイヤ果実を含有する顆粒剤（処方例２）、グァバ葉、パイナップル果実、パパイヤ果実、β―カロテン、ビタミンＣ、ビタミンＥを含有する顆粒剤（処方例３）、従来の顆粒剤（比較例１）を、１回１．６ｇを１日２回、４週間飲用させた。飲用は、右上腕内側への紫外線照射（２２００ｍＪ／ｃｍ^２）後に開始した。紫外線照射１週後（色素沈着が最も顕著な時）及び紫外線照射４週後に分光測色計を用いて皮膚のＬ値（明度、数値が高いほど白いことを示す）の測定を行い、紫外線照射１週後から紫外線照射４週後にかけてのＬ値の変化量を比較した。

試験例３の結果を表３に示す。グァバ葉を含有する顆粒剤（処方例１）の飲用によりＬ値が上昇したことから、グァバ葉の色素沈着改善作用が示された。

グァバ葉、パイナップル果実、パパイヤ果実を含有する顆粒剤（処方例２）の飲用は、処方例１の飲用と比較して、著しくＬ値が上昇したことから、グァバ葉、パイナップル果実、パパイヤ果実の組み合わせによる極めて優れた色素沈着改善作用が示された。

試験例４ヒト飲用による色素沈着抑制作用
男女１０４名（２０～５０歳代）を２６人ずつ４群に分け、グァバ葉を含有する顆粒剤（処方例１）、グァバ葉、パイナップル果実、パパイヤ果実を含有する顆粒剤（処方例２）、グァバ葉、パイナップル果実、パパイヤ果実、β―カロテン、ビタミンＣ、ビタミンＥを含有する顆粒剤（処方例３）、従来の顆粒剤（比較例１）を、１回１．６ｇを１日２回、４週間飲用させた。４週間飲用した後に左上腕内側への紫外線照射（２２００ｍＪ／ｃｍ^２）を行った。紫外線照射前及び紫外線照射１週後にＬ値の測定を行い、紫外線照射前から紫外線照射１週後にかけてのＬ値の変化量を比較した。

試験例４の結果を表４に示す。グァバ葉を含有する顆粒剤（処方例１）の飲用によりＬ値の低下を抑制したことから、グァバ葉の色素沈着抑制作用が示された。

グァバ葉、パイナップル果実、パパイヤ果実を含有する顆粒剤（処方例２）の飲用は、処方例１の飲用と比較して、著しいＬ値の低下抑制を示したことから、グァバ葉、パイナップル果実、パパイヤ果実の組み合わせによる極めて優れた色素沈着抑制作用が示された。

グァバ葉は、色素沈着改善作用と色素沈着抑制作用を有することから、美白作用が示された。また、グァバ葉、パイナップル果実、パパイヤ果実の組み合わせは、優れた色素沈着改善作用と色素沈着抑制作用を有することから、極めて優れた美白作用が示された。

以上の結果より、グァバ葉のＩＬ－３７発現促進作用、抗炎症作用、美白作用が示された。また、グァバ葉、パイナップル果実、パパイヤ果実の組み合わせによる極めて優れたＩＬ－３７発現促進作用、抗炎症作用、美白作用が示された。

本発明のＩＬ－３７発現促進剤は、優れたＩＬ－３７発現促進作用、抗炎症作用、美白作用を示した。従って、優れたＩＬ－３７発現促進作用、抗炎症作用、美白作用を有する食品、医薬部外品又は医薬品としての利用に有用である。また、皮膚外用剤としても利用可能である。さらに、ケラチノサイトなどの細胞を培養する系において、ＩＬ－３７産生増強を目的とした細胞培養時に使用する培地への利用も可能である。

Claims

グァバ葉、パイナップル果実及びパパイヤ果実を含有することを特徴とするインターロイキン３７（ＩＬ－３７）発現促進剤。
請求項１記載のＩＬ－３７発現促進剤を含有するＩＬ－３７発現促進用食品組成物。