JP7440265B2 - べと病抵抗性キャベツ及びその育成方法 - Google Patents
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Description
このため、べと病が多発する地域では、病害を低減させるために薬剤による防除を行う必要があり、そのために多大な労力やコストが費やされていた。このため、抵抗性育種素材の開発、及び抵抗性品種の開発が望まれていた。
<8> 前記<1>~<6>のいずれかのキャベツまたはその後代の種子。
本発明は、前記したように、べと病に対する抵抗性を有するキャベツ(べと病抵抗性キャベツ)、またはその後代に関する。
ここで「親系統」とは、交雑品種を作製するために育成された系統であり、通常は表現型が相違する2種類以上の親系統を材料として、これらを掛け合わせた交雑品種を作製する。
すなわち、本発明の好ましい態様によれば、本発明によるべと病抵抗性キャベツまたはその後代は、配列番号1~配列番号7のいずれか1以上で示される遺伝子座の近傍に座乗するべと病抵抗性遺伝子を有する。
したがって、例えば、「配列番号1~配列番号7のいずれか1以上で示される」は、以下の(a)~(c)の塩基配列のいずれか1以上で示される場合も包含する意味で使用される。
(a) 配列番号1~配列番号7に示される、いずれか1以上の塩基配列、
(b) 配列番号1~配列番号7に示される塩基配列と95%以上の配列同一性を有する、いずれか1以上の塩基配列、および
(c) 配列番号1~配列番号7に示される塩基配列の1個または複数個の塩基が、欠失、置換、挿入、および/または付加された、いずれか1以上の塩基配列。
(a’) 配列番号22~配列番号28に示される、いずれか1以上の塩基配列、
(b’) 配列番号22~配列番号28に示される塩基配列と95%以上の配列同一性を有する、いずれか1以上の塩基配列、および
(c’) 配列番号22~配列番号28に示される塩基配列の1個または複数個の塩基が、欠失、置換、挿入、および/または付加された、いずれか1以上の塩基配列。
また、配列番号1~配列番号7で示したDNA配列のいずれか1以上のマーカーを用いて、べと病抵抗性遺伝子の存在を検定することを含む、ブラシカ・オレラセア植物におけるべと病抵抗性の検出方法も提供される。
本発明のより好ましい態様によれば、本発明によるべと病抵抗性キャベツまたはその後代は、配列番号8~配列番号21に示される塩基配列を有するプライマーのいずれか1以上で検出可能なべと病抵抗性遺伝子を有する。なおこれらプライマーは、以下において、「DMTLRマーカー」ということがある。
これらDNAマーカーを使用すれば、接種試験による選抜を行わなくても、効率的にべと病抵抗性を有する新規キャベツ系統を育成することが可能となる。
(1) 具体的には、配列番号1~配列番号7で示したDNA配列をべと病抵抗性遺伝子座近傍に有する植物であり、そのアレルを有することによってべと病抵抗性を示す植物である。
(2) 上記配列を有する系統を交配材料に利用することで、べと病抵抗性を有した新規キャベツ親系統の育成が可能となる。べと病抵抗性の導入に際しては、接種試験による確認も可能であるが、配列番号1~配列番号7に基づいて作製されたDNAマーカーや、公的な情報から当該配列番号1~配列番号7の近傍に位置するDNA配列を選び出し、新たにマーカーを設計して抵抗性植物の選抜に用いてもよい。更に、べと病抵抗性遺伝子座近傍のマーカーを用いることによって、べと病抵抗性遺伝子座に連鎖する非目的形質を切り離した個体を選抜することも可能である。
(3) このようにして開発された本発明のキャベツは、べと病菌Hyaloperonospora brassicaeに対する抵抗性を有しているため、栽培期間中における病害防除のための殺菌剤散布の労力やコストを削減することができる。
1) べと病抵抗性遺伝子が、受託番号FERM BP-22343で特定されるブロッコリー品種に見出されるものである、べと病抵抗性キャベツ、またはその後代;
2) べと病抵抗性遺伝子が、受託番号FERM BP-22344で特定されるキャベツ品種に見出されるものである、べと病抵抗性キャベツ、またはその後代;および
3) 受託番号FERM BP-22344で特定される、べと病に対する抵抗性を有する雑種第一代キャベツ。
ここで、「植物体の一部」とは、花、葉、茎、根等の器官もしくはその部分または組織、或いは、これら器官または組織からの細胞、細胞の集合体等を包含する。
本発明によるべと病抵抗性キャベツの育成方法は、前記したように、べと病に対する抵抗性を有するブラシカ・オレラセア植物から、べと病抵抗性を、所望のキャベツに導入することを含む。
例えば、戻し交配第一世代(BC1F1)は分離世代であるために個々体が有するゲノム置換率は異なり、集団の規模を拡大すれば、個体によっては90%以上のゲノム領域が戻し親と同じ遺伝子型を示す個体を獲得することも可能である。このような個体を選抜することで、べと病抵抗性の遺伝子座以外の領域を早期に、少ない世代数で戻し親と同じ遺伝子型に揃えることが可能となる。
ゲノムワイドなDNAマーカーとして利用可能な具体的手段として、戻し親のゲノム配列情報を有している場合には、その情報に基づくDNAマーカーを作製して各遺伝子座のジェノタイピングを行ってもよい。
株式会社サカタのタネが保有するブロッコリーの遺伝資源を材料とし、2種類のべと病菌株(菌株Dm-A、及び菌株Dm-B(このうち、菌株Dm-Bはより多くの品種を侵す))の両方に対して抵抗性を示すブロッコリーを、2系統(「BR-23」、及び「BR-35」)見出した。
なお、世代表示として、F1は雑種第1代を意味し、BC1は、戻し交配を1回行った世代を意味する。すなわち、「BC1F1」とは、雑種第1代を経てさらに戻し交配を1回行った世代を意味する。
0: 無病徴、
1: 褐色病斑を形成、胞子形成はない、
2: 褐色病斑上に僅かな胞子形成、
3: 中程度の胞子形成、
4: 多量の胞子形成。
結果のとおり、F2集団は抵抗性:感受性が3:1に分離した一方、感受性系統を交配したBC1F1集団は1:1に分離した。これらのことから、本病害の抵抗性因子は単因子優性的に働くことが明らかになった。
表1において、抵抗性と感受性の分離が見られたF2集団(Mapping population-1,-2)やBC1F1集団(Mapping population-3,-4)を材料として、Bulked Segregant Analysis法(BSA法)によるRAPDマーカーの検索を行った。
バルクDNAには、Mapping population-4の集団より、抵抗性の個体を4個体、感受性の個体を4個体選び、それらのDNAを使用して、抵抗性個体のバルクDNAと、感受性個体のバルクDNAを作製した。
この段階で表現型とマーカーの分離パターンがほぼ一致したものについては、mapping population-1~mapping population-4の全個体に当てて、マーカーと表現型のスコアにどの程度矛盾が生じているのか確認し、表現型と強い相関を持つマーカーを選抜した。
またこれら各プライマー(マーカー)の電気泳動試験の結果(電気泳動図)を図2に示した。
なお、このようにして開発したマーカーを、本明細書では「DMTLRマーカー」と称する。
実施例2で使用したMapping population-2と同じF2集団を使用して、べと病菌株Dm-Aに対する抵抗性反応についても調査した。
F2集団の規模は240個体とし(mapping population-5とする)、Dm-Aに対する各個体の反応を調査した結果、表3のような分離を示した。なお、菌株Dm-Aによる接種試験については、実施例1の接種試験と同様に実施し評価した。
結果のように、配列番号1~7の近傍、特に配列番号4、配列番号5の極近傍に抵抗性因子が座乗すると推測された。
実施例2で解析した抵抗性系統「BR-23」とは異なる系統「BR-35」について、系統「BR-23」と同じ抵抗性因子を有しているか否かを確認するため、感受性系統の「BR-13」とのF2分離集団を作製し、菌株Dm-Aによる接種試験を実施した(表4)。なお、菌株Dm-Aによる接種試験については、実施例1の接種試験と同様に実施し評価した。
株式会社サカタのタネが保有するブロッコリーの系統である「BR-23」と「BR-35」を、べと病抵抗性の素材とし、当該抵抗性を導入するキャベツとして4つの品種群(葉深系、寒玉系、春系、ボール系)からそれぞれ各1系統「CB-20」、「CB-35」、「CB-23」、または「CB-97」を選定し、戻し交配親系統として交配試験を行った。
戻し交配を効率的に進めるため、20種類のRAPDプライマーによる選抜を行い、それぞれの戻し交配系統において、それぞれの戻し親系統である「CB-20」、「CB-35」、「CB-23」及び「CB-97」に近い遺伝子型を示す個体を選抜した。
その結果、「CB-20」においてはBC2F1世代で、その他の「CB-35」、「CB-23」及び「CB-97」においてはBC3F1世代で、これらのRAPDマーカーがそれぞれの戻し交配親系統と完全に一致する個体を選抜した。
発病程度
0:病斑なし、
1:病斑数少、
2:病斑数中程度、
3:病斑数多。
結果に示されるように、抵抗性の遺伝子座を導入した系統は、ヘテロであっても抵抗性が本葉及び玉においても発現し、且つ、寒玉系、春系、ボール系の親系統「CB-35」、「CB-23」及び「CB-97」と同等になったことを確認した。すなわち、図6から分かるように、元の親系統に対し、べと病抵抗性因子を導入したisogenic lineは、べと病の発病が抑えられた。
さらに、べと病抵抗性を付与した「DMR-CB-20」(前記で育成されたDMキャベツ系統)を花粉親に、他の有望なキャベツ系統である「CB-5」細胞質雄性不稔系統を種子親として、F1(品種試作名:SK3-005)を作出した。
このF1系統をサカタのタネ君津育種場で継続的に試作し、べと病抵抗性が、安定的に発現していることを確認した。
このようにしてべと病抵抗性F1キャベツ品種の初めての育成に至った。
図7に示されるとおり、べと病抵抗性を付与したF1品種(左写真)は、元のF1品種に比べて、べと病の発病が抑えられた。
Claims (11)
- 配列番号1~配列番号7のいずれか1以上で示される遺伝子座の近傍に座乗するべと病抵抗性遺伝子を有する、べと病抵抗性キャベツ、または前記遺伝子を有するその後代であって、
前記べと病抵抗性遺伝子が、受託番号FERM BP-22343で特定されるブロッコリー品種に見出されるものであるか、または受託番号FERM BP-22344で特定されるキャベツ品種に見出されるものである、べと病抵抗性キャベツ、または前記遺伝子を有するその後代。 - 配列番号8~配列番号21に示される塩基配列を有するプライマーのいずれか1以上で検出可能なべと病抵抗性遺伝子を有する、請求項1に記載のべと病抵抗性キャベツ、またはその後代。
- べと病が、Hyaloperonospora brassicaeにより引き起こされる病害である、請求項1又は2に記載のべと病抵抗性キャベツ、またはその後代。
- 請求項1~3のいずれか一項に記載のキャベツまたはその後代の種子。
- 受託番号FERM BP-22344で特定される、べと病に対する抵抗性を有する雑種第一代キャベツ、またはそのキャベツの種子。
- べと病に対する抵抗性を有するブラシカ・オレラセア植物から、配列番号1~配列番号7のいずれか1以上で示される遺伝子座の近傍に座乗するべと病抵抗性遺伝子によるべと病抵抗性を、所望のキャベツに導入することを含む、べと病抵抗性キャベツの育成方法であって、
前記べと病に対する抵抗性を有するブラシカ・オレラセア植物が、受託番号FERM BP-22343で特定されるブロッコリー品種であるか、または受託番号FERM BP-22344で特定されるキャベツ品種である、べと病抵抗性キャベツの育成方法。 - べと病に対する抵抗性を有するブラシカ・オレラセア植物が、キャベツ以外のブラシカ・オレラセア植物である、請求項6に記載のべと病抵抗性キャベツの育成方法。
- べと病抵抗性の所望のキャベツへの導入を、該キャベツを連続戻し交雑することにより行う、請求項6または7に記載の育成方法。
- 配列番号1~配列番号7で示したDNA配列のいずれか1以上、または該DNA配列を増幅しうる1以上のプライマーもしくはプライマー対を用いて、べと病抵抗性遺伝子の存在を検定することを含む、請求項6~8のいずれか一項に記載の育成方法。
- 前記プライマーが、配列番号8~配列番号21のいずれか1以上で示されるものである、請求項9に記載の育成方法。
- 配列番号8~配列番号21に示される塩基配列を有するプライマーのいずれか1以上を用いて、べと病抵抗性遺伝子の存在を検定することを含む、請求項6~8のいずれか一項に記載の育成方法。
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