JP7383043B2 - アミロスフェロイド(ASPD)の代替物となりうるアミロイドβタンパク質(Aβ)の架橋体、及びASPDの分析 - Google Patents
アミロスフェロイド(ASPD)の代替物となりうるアミロイドβタンパク質(Aβ)の架橋体、及びASPDの分析 Download PDFInfo
- Publication number
- JP7383043B2 JP7383043B2 JP2021558415A JP2021558415A JP7383043B2 JP 7383043 B2 JP7383043 B2 JP 7383043B2 JP 2021558415 A JP2021558415 A JP 2021558415A JP 2021558415 A JP2021558415 A JP 2021558415A JP 7383043 B2 JP7383043 B2 JP 7383043B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- aspd
- antibody
- crosslinking agent
- substance
- present disclosure
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 title claims description 72
- 108010090849 Amyloid beta-Peptides Proteins 0.000 title claims description 10
- 102000013455 Amyloid beta-Peptides Human genes 0.000 title claims description 10
- 239000003431 cross linking reagent Substances 0.000 claims description 48
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 46
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 claims description 30
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 29
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 24
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 claims description 15
- -1 oxypropylene group Chemical group 0.000 claims description 12
- 125000006353 oxyethylene group Chemical group 0.000 claims description 6
- QLHLYJHNOCILIT-UHFFFAOYSA-N 4-o-(2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 1-o-[2-[4-(2,5-dioxopyrrolidin-1-yl)oxy-4-oxobutanoyl]oxyethyl] butanedioate Chemical compound O=C1CCC(=O)N1OC(=O)CCC(=O)OCCOC(=O)CCC(=O)ON1C(=O)CCC1=O QLHLYJHNOCILIT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 claims description 3
- CKVQMGOTSMPIMP-UHFFFAOYSA-N 1,2-dihydroxyethanesulfonic acid;2-(2,5-dioxopyrrolidin-1-yl)butanedioic acid Chemical compound OCC(O)S(O)(=O)=O.OC(=O)CC(C(O)=O)N1C(=O)CCC1=O.OC(=O)CC(C(O)=O)N1C(=O)CCC1=O CKVQMGOTSMPIMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 112
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 34
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 34
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 33
- 238000012767 chemiluminescent enzyme immunoassay Methods 0.000 description 31
- 208000024827 Alzheimer disease Diseases 0.000 description 28
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 27
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 26
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 25
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 24
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 23
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 20
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 20
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 19
- 208000009829 Lewy Body Disease Diseases 0.000 description 18
- 201000002832 Lewy body dementia Diseases 0.000 description 18
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 17
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 17
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 15
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 14
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 11
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 11
- 108010064539 amyloid beta-protein (1-42) Proteins 0.000 description 10
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 10
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 10
- 210000001175 cerebrospinal fluid Anatomy 0.000 description 10
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 9
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 9
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 8
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 8
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 8
- 101000746373 Homo sapiens Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Proteins 0.000 description 7
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 7
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 7
- 239000010421 standard material Substances 0.000 description 7
- 101710137189 Amyloid-beta A4 protein Proteins 0.000 description 6
- 101710151993 Amyloid-beta precursor protein Proteins 0.000 description 6
- 102100022704 Amyloid-beta precursor protein Human genes 0.000 description 6
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 6
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 6
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 6
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 6
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- 239000004971 Cross linker Substances 0.000 description 5
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 5
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 5
- 108010064397 amyloid beta-protein (1-40) Proteins 0.000 description 5
- DZHSAHHDTRWUTF-SIQRNXPUSA-N amyloid-beta polypeptide 42 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)[C@@H](C)CC)C(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O)C(C)C)C(C)C)C1=CC=CC=C1 DZHSAHHDTRWUTF-SIQRNXPUSA-N 0.000 description 5
- 239000000032 diagnostic agent Substances 0.000 description 5
- 229940039227 diagnostic agent Drugs 0.000 description 5
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 5
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 5
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 5
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 4
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 4
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 4
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 4
- 239000012470 diluted sample Substances 0.000 description 4
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 4
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 4
- VILFTWLXLYIEMV-UHFFFAOYSA-N 1,5-difluoro-2,4-dinitrobenzene Chemical group [O-][N+](=O)C1=CC([N+]([O-])=O)=C(F)C=C1F VILFTWLXLYIEMV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WZKNLUWTEBWEOX-UHFFFAOYSA-N 6-[3-(pyridin-2-ylmethyl)pyrrolidin-1-yl]pyrido[3,2-d]pyrimidin-4-amine Chemical compound N1=C2C(N)=NC=NC2=CC=C1N(C1)CCC1CC1=CC=CC=N1 WZKNLUWTEBWEOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 3
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 3
- 238000005415 bioluminescence Methods 0.000 description 3
- 230000029918 bioluminescence Effects 0.000 description 3
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 3
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 3
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 230000004770 neurodegeneration Effects 0.000 description 3
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 3
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 3
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 3
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 3
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- 102000002659 Amyloid Precursor Protein Secretases Human genes 0.000 description 2
- 108010043324 Amyloid Precursor Protein Secretases Proteins 0.000 description 2
- 206010029350 Neurotoxicity Diseases 0.000 description 2
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 2
- 206010044221 Toxic encephalopathy Diseases 0.000 description 2
- 235000010724 Wisteria floribunda Nutrition 0.000 description 2
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 2
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000034994 death Effects 0.000 description 2
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- 231100001231 less toxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000016273 neuron death Effects 0.000 description 2
- 230000007135 neurotoxicity Effects 0.000 description 2
- 231100000228 neurotoxicity Toxicity 0.000 description 2
- 231100001083 no cytotoxicity Toxicity 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 2
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 2
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 2
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 2
- 239000012925 reference material Substances 0.000 description 2
- 238000010517 secondary reaction Methods 0.000 description 2
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- 150000008574 D-amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000009007 Diagnostic Kit Methods 0.000 description 1
- 238000008157 ELISA kit Methods 0.000 description 1
- 108010051975 Glycogen Synthase Kinase 3 beta Proteins 0.000 description 1
- 102100038104 Glycogen synthase kinase-3 beta Human genes 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101000823051 Homo sapiens Amyloid-beta precursor protein Proteins 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 125000001429 N-terminal alpha-amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 239000003125 aqueous solvent Substances 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 230000006287 biotinylation Effects 0.000 description 1
- 238000007413 biotinylation Methods 0.000 description 1
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 1
- 210000001638 cerebellum Anatomy 0.000 description 1
- 210000003710 cerebral cortex Anatomy 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 1
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 1
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 208000025688 early-onset autosomal dominant Alzheimer disease Diseases 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- IYBKWXQWKPSYDT-UHFFFAOYSA-L ethylene glycol disuccinate bis(sulfo-N-succinimidyl) ester sodium salt Chemical compound [Na+].[Na+].O=C1C(S(=O)(=O)[O-])CC(=O)N1OC(=O)CCC(=O)OCCOC(=O)CCC(=O)ON1C(=O)C(S([O-])(=O)=O)CC1=O IYBKWXQWKPSYDT-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 208000015756 familial Alzheimer disease Diseases 0.000 description 1
- 102000034287 fluorescent proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091006047 fluorescent proteins Proteins 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 102000046783 human APP Human genes 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 150000002463 imidates Chemical class 0.000 description 1
- 230000007124 immune defense Effects 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 230000002427 irreversible effect Effects 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- 210000004897 n-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 1
- 230000006320 pegylation Effects 0.000 description 1
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 125000004805 propylene group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([*:1])C([H])([H])[*:2] 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 239000012898 sample dilution Substances 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 230000000946 synaptic effect Effects 0.000 description 1
- 108010061506 tau-protein kinase Proteins 0.000 description 1
- 229940126585 therapeutic drug Drugs 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
- C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
- C07K14/4711—Alzheimer's disease; Amyloid plaque core protein
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/531—Production of immunochemical test materials
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/544—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being organic
- G01N33/545—Synthetic resin
- G01N33/547—Synthetic resin with antigen or antibody attached to the carrier via a bridging agent
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
- G01N33/6896—Neurological disorders, e.g. Alzheimer's disease
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
- G01N2333/46—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans from vertebrates
- G01N2333/47—Assays involving proteins of known structure or function as defined in the subgroups
- G01N2333/4701—Details
- G01N2333/4709—Amyloid plaque core protein
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
- G01N2800/28—Neurological disorders
- G01N2800/2814—Dementia; Cognitive disorders
- G01N2800/2821—Alzheimer
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Neurology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Psychiatry (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
また、ネイティブASPDと等価であると考えられる細胞分泌型ASPD様構造体は、例えば、所定のAPPタンパク質を発現するCHO細胞から分泌させることができ、該CHO細胞の培養上清から得ることができる(特許文献5)。
また、ASPDを標的とする治療薬が開発された際には、そのコンパニオン診断のためにASPDの分析が必要となる。
一方で、診断キットの標準物質としては、安定した製造が可能で、保管安定性に優れ、製造コストが低いことが望まれる。ネイティブASPD、合成ASPD、及び細胞分泌型ASPD様構造体は、ASPDを分析するためのキットの標準物質としては、製造の容易性、保管安定性、製造コストなどの観点から問題がある。
そこで、本開示は、一態様において、ASPDの代替物となりうる物質、又は、ASPDの分析においてASPDの標準物質となりうる物質を提供する。
本開示は、その他の態様において、Aβの架橋体であって、Aβが、スペーサーアーム長が4Å以上50Å以下である架橋剤、又は、スペーサーアームとして1以上13以下のオキシエチレン基及び/又はオキシプロピレン基を有する架橋剤によって架橋されている架橋体に関する。
(1)不溶性担体に結合している、ASPDに結合可能な抗体(第一抗体)に、ASPDを含有している可能性がある生体由来試料を接触させて、ASPDが含有されている場合に第一抗体にASPDを結合させる工程;及び
(2)工程(1)で第一抗体に結合したASPDに、抗ASPDモノクローナル抗体(第二抗体)を反応させる工程
を含み、
第一抗体が、ヒト化抗ASPDモノクローナル抗体huASD2、又は、モノクローナル抗体BAN50aであり、第二抗体が、抗ASPDモノクローナル抗体mASD3又はその標識化抗体である、ASPDの分析方法に関する。
また、本開示によれば、その他の一態様において、生体試料、例えば、血液や脳脊髄液中のASPDを分析できる方法を提供できる。
本開示は、その他の態様において、所定の抗体の組み合わせにより、生体試料内のASPDを効率的に分析できるという知見に基づく。
Aβは、アミロイド前駆体タンパク質(APP)の一部に相当する配列からなるタンパク質で、生体内でβセレクターゼ及びγセレクターゼによってAPPから切り出されるペプチドの配列を有するタンパク質である。
本開示において、単にAβというときは、Aβ38(Aβ1-38)、Aβ39(Aβ1-39)、Aβ40(Aβ1-40)、Aβ41(Aβ1-41)、Aβ42(Aβ1-42)、Aβ43(Aβ1-43)、又はこれらの全部若しくは一部を指し得る。
本開示において、単にAβというときは、ヒトAβ及び非ヒト哺乳類Aβを含みうる。
ヒトAPPとしては、一又は複数の実施形態において、hAPP770、hAPP751、及びhAPP695などのスプライシングバリアントが挙げられる。hAPP770(NCBIアクセッション番号NP_000475(VERSION NP#000475.1 GI:4502167)が挙げられるが、これに限定されない。
ヒトAβのN末端のアミノ酸(Aβの1番目のアミノ酸)は、hAPP770の672番目のアミノ酸D(アスパラギン酸)に相当する。
変異型Aβとしては、一又は複数の実施形態において、変異型APPから切り出されるペプチドの配列を有するものが挙げられる。変異型APPとしては、家族性アルツハイマー病に連鎖する変異が挙げられ、例えば、Swedish変異、Leuven変異、Icelandic変異、London変異、Iranian変異、Austrian変異、German変異、French変異、Florida変異、Iberian変異、Australian変異、Belgian変異、Flemish変異、Icelandic変異、British変異、Tottori変異、Italian変異、Arctic変異、Osaka変異、Iowa変異、Dutch変異などが挙げられる。その他の変異としては、修飾アミノ酸、非天然アミノ酸、D-アミノ酸等への変異を含みうる。修飾アミノ酸としては、一又は複数の実施形態において、アミノ基修飾、カルボキシル基修飾、チオール基修飾、水酸基修飾、糖化修飾、PEG化修飾等が挙げられる。
本開示は、一態様において、所定の架橋体でAβが架橋されたAβ架橋体に関する。Aβについては、上述のとおりである。
スペーサーアーム長としては、一又は複数の実施形態において、ASPDに特異的な抗体に対する反応性をASPDに近づける観点から、4Å以上であって、7Å以上が好ましく、10Å以上が好ましく、13Å以上がより好ましく、14Å以上がより好ましく、15Å以上がより好ましく、16Å以上がさらに好ましく、17Å以上がさらに好ましく、18Å以上がさらに好ましく、19Å以上がさらに好ましく、20Å以上がさらに好ましく、21Å以上がさらに好ましい。
スペーサーアーム長としては、一又は複数の実施形態において、同様の観点から、50Å以下であって、45Å以下が好ましく、40Å以下がより好ましく、36Å以下がさらに好ましく、33Å以下がさらに好ましく、30Å以下がさらに好ましく、27Å以下がさらに好ましく、24Å以下がさらに好ましい。
スペーサーアームにおけるEO基及びPO基の合計の数としては、一又は複数の実施形態において、ASPDに特異的な抗体に対する反応性をASPDに近づける観点から、1以上であって、2以上が好ましく、3以上がより好ましく、4以上がさらに好ましい。
スペーサーアームにおけるEO基及びPO基の合計の数としては、一又は複数の実施形態において、同様の観点から、13以下であって、10以下が好ましく、9以下がより好ましく、8以下がさらに好ましく、7以下がさらに好ましく、6以下がさらに好ましい。
本開示に係るAβ架橋体に用いる架橋剤の反応末端は、一又は複数の実施形態において、ASPDに特異的な抗体に対する反応性をASPDに近づける観点から、アミノ基間を架橋する反応末端が好ましく、NHSエステル又はイミドエステルが挙げられる。
本開示に係るAβ架橋体に用いる架橋剤は、開裂性があってもよく、なくてもよい。安定性の観点からは、開裂性はないことが好ましい。
本開示に係るAβ架橋体は、一又は複数の実施形態において、ASPDに特異的な抗体に対してASPDと競合する物質である。
本開示に係るAβ架橋体は、一又は複数の実施形態において、ASPDに特異的な抗体に対する反応性の観点から、ASPDの代替物となりうる。
本開示において、ASPDの分析は、一又は複数の実施形態において、ASPDの検出、測定、定量、及びそれらを利用するスクリーニングを含みうる。
本開示に係るAβ架橋体が標準物質として使用されるASPD分析としては、一又は複数の実施形態において、ASPDに特異的な抗体を使用する免疫測定法を利用した分析が挙げられ、より具体的には、ASPDに特異的な抗体を使用する酵素免疫測定法、化学発光・酵素免疫測定法が挙げられ、より具体的には、ASPDに特異的な抗体を使用するEnzyme-Linked Immunosorbent Assay(ELISA)やChemiluminescent Enzyme immunoassay(CLEIA)などが挙げられる。
一又は複数の実施形態において、本開示に係るAβ架橋体は、ASPD分析において検量線の作成に使用されうる。その他の一又は複数の実施形態において、本開示に係るAβ架橋体は、ASPD分析においてポジティブコントロールとして使用されうる。
本開示に係るAβ架橋体は、一又は複数の実施形態において、ASPDを標的とした治療薬のコンパニオン診断におけるASPD分析又はそのキットの標準物質となりうる。本開示に係るAβ架橋体は、一又は複数の実施形態において、ASPDを標的とした治療薬のコンパニオン診断薬の一成分となりうる。
本態様に係るASPD分析キットは、一又は複数の実施形態において、ASPDの蓄積を伴う疾病の診断のためのASPD分析キット、ASPDを標的とした治療薬のコンパニオン診断のためのASPD分析キット、又は、ASPDを標的とした治療薬のコンパニオン診断薬である。
ASPDを標的とした治療薬としては、一又は複数の実施形態において、ASPDの蓄積を伴う疾病の予防、改善、及び/又は治療のための医薬組成物が挙げられる。
また、本開示に係るAβ架橋体は、一又は複数の実施形態において、免疫原性を有し、ASPDに対する抗体の産生を誘導しうる。
よって、本開示に係るAβ架橋体は、一又は複数の実施形態において、ASPDに対する抗体を誘導できる観点から、ASPDの代替物となりうる。
本開示に係るAβ架橋体はASPDの代替物となりうることから、本開示に係るAβ架橋体も、能動ワクチンとして使用でき、また、ワクチンの製造に使用できる。
本開示に係る医薬組成物及びワクチンは、一又は複数の実施形態において、ASPDの蓄積を伴う疾病を罹患するおそれのある対象、罹患したおそれのある対象、又は、罹患した対象に投与されうる。本開示に係る医薬組成物は、一又は複数の実施形態において、アルツハイマー病及び/又はレビー小体型認知症を罹患するおそれのある対象、罹患したおそれのある対象、又は、罹患した対象に投与されうる。該対象としては、哺乳類、ヒト、ヒト以外の哺乳類が挙げられる。
本開示は、その他の態様において、ASPDそれ自体に対する免疫を対象に獲得させる方法であって、本開示に係るAβ架橋体又は本開示に係る医薬組成物若しくはワクチンを対象に投与することを含む方法に関する。
本開示は、さらにその他の態様において、ASPDの蓄積を伴う疾病に対する免疫を対象に獲得させる方法であって、本開示に係るAβ架橋体又は本開示に係る医薬組成物若しくはワクチンを対象に投与することを含む方法に関する。
本開示は、その他の態様において、本開示に係るAβ架橋体を有効成分とする医薬組成物、又は、本開示に係るAβ架橋体を有するワクチンの製造方法であって、後述する製造方法により本開示に係るAβ架橋体を製造する工程を含む製造方法に関する。
本開示に係るAβ架橋体は、一又は複数の実施形態において、Aβが水性溶媒に溶解したAβ水溶液に、架橋剤を添加して架橋反応をさせることで得ることができる。
Aβは、ペプチド合成により調製してもよく、組み換え技術で生産してもよい。
添加する架橋剤の量は、一又は複数の実施形態において、Aβに対しモル換算で、10倍以上、20倍以上、又は30倍以上である。添加する架橋剤の量は、一又は複数の実施形態において、モル換算で、200倍以下、100倍以下、又は75倍以下である。
架橋反応後の架橋体は、さらに、限外ろ過に供してもよい。保持液又はフィルター残渣の回収液中に本開示に係るAβ架橋体を得ることができる。
限外ろ過フィルターの分子量カットオフ値(MWCO)としては、一又は複数の実施形態において、30kDa、50kDa、又は100kDaが挙げられる。
本開示に係るAβ架橋体は、一又は複数の実施形態において、実施例の記載の方法で製造できる。
[A1] Aβが、スペーサーアーム長が4Å以上50Å以下である架橋剤によって架橋されている、Aβ架橋体。
[A2] Aβが、スペーサーアームとして1以上13以下のEO基及び/又はPO基を有する架橋剤によって架橋されている、Aβ架橋体。
[A3] Aβが、Aβ38、Aβ39、Aβ40、Aβ41、Aβ42、又はAβ43である、[A1]又は[A2]に記載のAβ架橋体。
[A4] 架橋剤が、アミノ基間を架橋する反応末端を有する架橋剤である、[A1]から[A3]のいずれかに記載のAβ架橋体。
[A5] 10-20%SDSPAGEで分析される分子量が100kDaを超える、[A1]から[A4]のいずれかに記載のAβ架橋体。
[A6] ASPDに特異的な抗体に対してASPDと競合する物質である、[A1]から[A5]のいずれかに記載のAβ架橋体。
[A7] ASPD分析の標準物質である、[A1]から[A6]のいずれかに記載のAβ架橋体。
[A8] ASPDの蓄積を伴う疾病の診断におけるASPD分析の標準物質である、[A1]から[A7]のいずれかに記載のAβ架橋体。
[A9] ASPDを標的とした治療薬のコンパニオン診断におけるASPD分析の標準物質である、[A1]から[A8]のいずれかに記載のAβ架橋体。
[A10] ASPDを標的とした治療薬のコンパニオン診断薬の一成分である、[A1]から[A9]のいずれかに記載のAβ架橋体。
[B1] ASPDに特異的な抗体に対してASPDと競合する物質としての、[A1]から[A10]のいずれかに記載のAβ架橋体の使用。
[B2] ASPDに特異的な抗体に対するASPDの代替物としての、[A1]から[A10]のいずれかに記載のAβ架橋体の使用。
[B3] ASPD分析の標準物質としての、[A1]から[A10]のいずれかに記載のAβ架橋体の使用。
[B4] ASPDの蓄積を伴う疾病の診断における、[A1]から[A10]のいずれかに記載のAβ架橋体の使用。
[B5] 前記診断が、ASPDを標的とした治療薬のコンパニオン診断である[B4]に記載の使用。
[B6] ASPDの蓄積を伴う疾病の診断におけるASPD分析の標準物質としての、[A1]から[A10]のいずれかに記載のAβ架橋体の使用。
[B7] ASPDの蓄積を伴う疾病が、アルツハイマー病及び/又はレビー小体型認知症である、[B6]に記載のAβ架橋体の使用。
[B8] ASPDを標的とした治療薬のコンパニオン診断におけるASPD分析の標準物質としての、[A1]から[A10]のいずれかに記載のAβ架橋体の使用。
[B9] ASPDを標的とした治療薬のコンパニオン診断薬の一成分としての、[A1]から[A10]のいずれかに記載のAβ架橋体の使用。
[C1] [A1]から[A10]のいずれかに記載のAβ架橋体を標準物質として含む、ASPD分析キット。
[C2] さらに、ASPDに特異的な抗体を含む、[C1]に記載のASPD分析キット。
[C3]ASPDの蓄積を伴う疾病の診断のための、[C1]又は[C2]に記載のASPD分析キット。
[C4] ASPDの蓄積を伴う疾病が、アルツハイマー病及び/又はレビー小体型認知症である、[C3]に記載のASPD分析キット。
[C5]ASPDを標的とした治療薬のコンパニオン診断のための、[C1]から[C4]のいずれかに記載のASPD分析キット。
[C6] [A1]から[A10]のいずれかに記載のAβ架橋体を標準物質として含む、ASPDを標的とした治療薬のコンパニオン診断薬。
[C7] [A1]から[A10]のいずれかに記載のAβ架橋体を標準物質として使用することを含む、ASPD分析方法。
[C8] ASPDに特異的な抗体を用いて免疫分析することを含む、[C7]に記載のASPD分析方法。
[C9] ASPDの蓄積を伴う疾病の診断のための、[C7]又は[C8]に記載のASPD分析方法。
[C10] ASPDの蓄積を伴う疾病が、アルツハイマー病及び/又はレビー小体型認知症である、[C9]に記載のASPD分析方法。
[C11] ASPDを標的とした治療薬のコンパニオン診断のための、[C7]から[C10]のいずれかに記載のASPD分析方法。
[C12] ASPDを標的とした治療薬のコンパニオン診断方法であって、[C7]から[C11]のいずれかに記載のASPD分析方法を行うことを含む、診断方法。
[C13] ASPDを標的とした治療薬が、ASPDの蓄積を伴う疾病の予防、改善、及び/又は治療のための医薬組成物である、[C12]に記載の診断方法。
[C14] ASPDの蓄積を伴う疾病が、アルツハイマー病及び/又はレビー小体型認知症である、[C13]に記載の診断方法。
[D1] [A1]から[A10]のいずれかに記載のAβ架橋体を有効成分とする医薬組成物。
[D2] [A1]から[A10]のいずれかに記載のAβ架橋体を含むワクチン。
[D3] [A1]から[A10]のいずれかに記載のAβ架橋体の能動ワクチンとしての使用。
[D4] ワクチン製造における[A1]から[A10]のいずれかに記載のAβ架橋体の使用。
[D5] ワクチンは、ASPDの蓄積を伴う疾病に対するワクチンである、[D2]に記載のワクチン、又は、[D3]若しくは[D4]に記載の使用。
[D6] ASPDの蓄積を伴う疾病の予防、改善、及び/又は治療の方法であって、[A1]から[A10]のいずれかに記載のAβ架橋体、[D1]に記載の医薬組成物、又は、[D2]に記載のワクチンを対象に投与することを含む、方法。
[D7] ASPDの蓄積を伴う疾病が、アルツハイマー病及び/又はレビー小体型認知症である、[D6]に記載の方法。
[D8] ASPDに対する免疫を対象に獲得させる方法であって、[A1]から[A10]のいずれかに記載のAβ架橋体、[D1]に記載の医薬組成物、又は、[D2]に記載のワクチンを対象に投与することを含む、方法。
[D9] ASPDの蓄積を伴う疾病に対する免疫を対象に獲得させる方法であって、[A1]から[A10]のいずれかに記載のAβ架橋体、[D1]に記載の医薬組成物、又は、[D2]に記載のワクチンを対象に投与することを含む、方法。
[D10] ASPDの蓄積を伴う疾病が、アルツハイマー病及び/又はレビー小体型認知症である、[D9]に記載の方法。
[D11] [A1]から[A10]のいずれかに記載のAβ架橋体と、薬学的に許容される腑形剤とを組み合わせることを含む、医薬組成物又はワクチンの製造方法。
本開示は、一態様において、下記の工程(1)及び(2)を含むASPDの分析方法(以下、「本開示に係るASPD分析方法」ともいう)に関する。
(1)不溶性担体に結合している、ASPDに結合可能な抗体(第1抗体)に、ASPDを含有している可能性がある生体由来試料を接触させて、ASPDが含有されている場合に第1抗体にASPDを結合させる工程。
(2)工程(1)で第1抗体に結合したASPDに、抗ASPDモノクローナル抗体(第2抗体)を反応させる工程。
ここで、第1抗体が、ヒト化抗ASPDモノクローナル抗体huASD2、又は、モノクローナル抗体BAN50aであり、
第2抗体が、マウスモノクローナル抗ASPD抗体mASD3又はその標識化抗体である。
huASD2は、WO2009/057664に記載されるものであり、配列表の配列番号1に記載のアミノ酸配列の重鎖可変領域及び、配列表の配列番号2に記載のアミノ酸配列の軽鎖可変領域を有するヒト化モノクローナル抗ASPD抗体である。
配列番号1:EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYFMSWVRQAPGKGLEWVGGIEIKSYFYATYYFGSVKGRFTISRDDSKNTLYLQMNSLKTEDTAVYYCTTNREVGGLDNWGQGTLVTVSS
配列番号2:QSVLTQPSSLSASPGASASLTCTLRSGISVGGKNIYWYQQKPGSPPQYLLKYSSYSNKQLGPGVPSRFSGSKDASANAGILLISGLQSEDEADYYCSIHESNAYVFGGGTKLTVLGR
huASD2は、例えば、ASD2RHApG1D200(特許生物寄託センター受託番号:FERM BP-11040)ASD2RLApLN100(特許生物寄託センター受託番号:FERM BP-11041)を公知の動物細胞にコトランスフェクトし、発現させることにより得ることができる。
なお、一又は複数の実施形態において、本開示におけるhuASD2は、配列表の配列番号3に記載のアミノ酸配列の重鎖可変領域及び、配列表の配列番号4に記載のアミノ酸配列の軽鎖可変領域を有する抗ASPD抗体で代用できる。
配列番号3:EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYFMSWVRQAPGKGLEWVXGIEIKSYFYATYYFGSVKGRFTISRDDSKNTXYLQMNSLKTEDTAVYYCTXNREVGGLDNWGQGTLVTVSS
配列番号4:QXVLTQPXSLSASPGASASLTCTLRSGISVGGKNIYWYQQKPGSPPQXXLXYSSYSNKQLGPGVPSRFSGSKDXSANAXILLISGLQSEDEADYYCSIHESNAYVFGGGTKLTVLG
(配列番号3において、第49位のXは、G又はAであり、第81のXは、L又はVであり、第100位のXは、T又はRである。配列番号4において、第2位のXは、S又はAであり、第8位のXは、S又はAであり、第48位のXは、Y又はFであり、第49位のXは、L又はFであり、第51位のXは、K又はF又はRであり、第74位のXは、A又はTであり、第79位のXは、G又はAである。)
本開示において、BAN50aは、国際公開WO94-17197号パンフレットに記載された、AβのN末端領域を特異的に認識する公知のモノクローナル抗体である。BAN50aは市販のものを使用でき、あるいは、特許生物寄託センターハイブリドーマBAN50(受託番号FERM BP4163)を用いて、公知の方法により製造することができる。
第2抗体は、一又は複数の実施形態において、検出感度を向上させる観点から、mASD3の標識化抗体が挙げられる。標識化としては、一又は複数の実施形態において、ビオチン化が挙げられる。
ASPDを含有している可能性がある生体由来試料としては、一又は複数の実施形態として血液、血漿、及び脳脊髄液、ならびにそれらの希釈物が挙げられる。
本開示に係るASPD分析方法は、一又は複数の実施形態において、工程(1)の前に生体由来試料を調製する工程(0)を含んでもよい。この試料調製工程(0)は、一又は複数の実施形態において、血液、血漿、及び脳脊髄液などの生体試料を適当な溶媒又はバッファーに希釈することを含む。また、この試料調製工程(0)は、一又は複数の実施形態において、前記溶媒又はバッファーは、分析を妨げない範囲で、界面活性剤やその他の薬剤を含んでもよい。
(3)工程(2)でASPDに結合した第2抗体に、レポーターが連結した抗マウス抗体を反応させる工程、又は、工程(2)でASPDに結合した第2抗体の標識に、レポーターが連結した前記標識の結合パートナーを反応させる工程。
レポーターとしては、一又は複数の実施形態において、化学発光や生物発光を利用する物質、蛍光タンパク質などが挙げられ、検出感度を向上させる観点からは化学発光や生物発光を利用する物質が好ましい。
化学発光や生物発光を利用する物質としては、一又は複数の実施形態において、生物発光酵素やその改変体などの酵素が挙げられる。
前記酵素としては、一又は複数の実施形態において、HRP(ホースラディッシュペルオキシダーゼ)、及び、アルカリフォスファターゼなどが挙げられる。
前記結合パートナーとしては、一又は複数の実施形態において、標識がビオチンである場合、ストレプトアビジン等が挙げられる。
発光の測定は、一又は複数の実施形態において、ルミノメーターやマルチプレートリーダーで行うことができる。
[E1] 下記の工程(1)及び(2)を含むASPDの分析方法。
工程(1)不溶性担体に結合している、ASPDに結合可能な抗体(第1抗体)に、ASPDを含有している可能性がある生体由来試料を接触させて、ASPDが含有されている場合に第1抗体にASPDを結合させる工程。
工程(2)工程(1)で第1抗体に結合したASPDに、抗ASPDモノクローナル抗体(第2抗体)を反応させる工程。
ここで、第1抗体が、ヒト化抗ASPDモノクローナル抗体huASD2、又は、モノクローナル抗体BAN50aであり、
第2抗体が、マウスモノクローナル抗ASPD抗体mASD3又はその標識化抗体である。
[E2] 免疫測定法の原理を利用する方法である、[E1]に記載の分析方法。
[E3] 免疫測定法の原理を利用する方法が、ELISA又はCLEIAである、[E2]に記載の分析方法。
[E4] 生体由来試料が、血液、血漿成分、脳脊髄液又はそれらの希釈液である、[E1]から[E3]のいずれかに記載の分析方法。
[E5] 工程(1)の前に生体由来試料を調製する工程(0)を含む、[E1]から[E4]のいずれかに記載の分析方法。
[E6] 試料調製工程(0)は血液、血漿、及び脳脊髄液からなる群から選択される生体試料を溶媒又はバッファーに希釈することを含む、[E5]に記載の分析方法。
[E7] さらに、下記の工程(3)を含む、[E1]から[E6]のいずれかに記載の分析方法。
工程(3)工程(2)でASPDに結合した第2抗体に、レポーターが連結した抗マウス抗体を反応させる工程、又は、工程(2)でASPDに結合した第2抗体の標識に、レポーターが連結した前記標識の結合パートナーを反応させる工程。
[E8] ASPDの標準物質として後記[1]に記載の物質を使用する、[E1]から[E7]のいずれかに記載の分析方法。
[E9] [A1]から[A10]のいずれかに記載のAβ架橋体を標準物質として使用することを含む、[E1]から[E7]のいずれかに記載の分析方法。
[E10] ASPDの蓄積を伴う疾病の診断のための、[E1]から[E9]のいずれかに記載の分析方法。
[E11] ASPDの蓄積を伴う疾病が、アルツハイマー病及び/又はレビー小体型認知症である、[E10]に記載の分析方法。
[E12] ASPDを標的とした治療薬のコンパニオン診断のための、[E1]から[E11]のいずれかに記載の分析方法。
[E13] ASPDの蓄積を伴う疾病の診断方法であって、[E1]から[E12]のいずれかに記載の分析方法を行うことを含む、診断方法。
[E14] ASPDの蓄積を伴う疾病が、アルツハイマー病及び/又はレビー小体型認知症である、[E13]に記載の診断方法。
[E15] ASPDを標的とした治療薬のコンパニオン診断方法であって、[E1]から[E12]のいずれかに記載の分析方法を行うことを含む、診断方法。
[E16] ASPDを標的とした治療薬が、ASPDの蓄積を伴う疾病の予防、改善、及び/又は治療のための医薬組成物である、[E15]に記載の診断方法。
[E17] ASPDの蓄積を伴う疾病が、アルツハイマー病及び/又はレビー小体型認知症である、[E16]に記載の診断方法。
[F1] ヒト化抗ASPDモノクローナル抗体huASD2又はモノクローナル抗体BAN50a(第1抗体)と、マウスモノクローナル抗ASPD抗体mASD3又はその標識化抗体(第2抗体)とを含む、ASPD分析キット。
[F2] さらに、[A1]から[A10]のいずれかに記載のAβ架橋体を含む、[F1]に記載のASPD分析キット。
[F3] [E1]から[E12]のいずれかに記載の分析方法又は[E13]から[E17]のいずれかに記載の診断方法のための、[F1]又は[F2]に記載のASPD分析キット。
[1] ASPDに特異的な抗体に対してASPDと競合する物質であって、Aβが架橋剤によって架橋された物質であり、前記架橋剤は、スペーサーアーム長が4Å以上50Å以下である架橋剤、又は、スペーサーアームとして1以上13以下のEO基及び/又はPO基を有する架橋剤である、物質。
[2] Aβの架橋体であって、Aβが、スペーサーアーム長が4Å以上50Å以下である架橋剤、又は、スペーサーアームとして1以上13以下のEO基及び/又はPO基を有する架橋剤によって架橋されている架橋体。
[3] [1]に記載の物質又は[2]に記載の架橋体と、抗ASPD抗体とを含む、ASPDを分析するためのキット。
[4] ASPD分析における、[1]に記載の物質又は[2]に記載の架橋体の標準物質としての使用。
[5] ASPDの蓄積を伴う疾病の診断における、[1]に記載の物質又は[2]に記載の架橋体の標準物質としての使用。
[6] 前記診断が、ASPDを標的とした治療薬のコンパニオン診断である、[5]に記載の使用。
[7] ASPDの蓄積を伴う疾病が、アルツハイマー病及び/又はレビー小体型認知症である、[5]又は[6]に記載の使用。
[8] 下記の工程:
(1)不溶性担体に結合している、ASPDに結合可能な抗体(第1抗体)に、ASPDを含有している可能性がある生体由来試料を接触させて、ASPDが含有されている場合に第1抗体にASPDを結合させる工程;及び
(2)工程(1)で第1抗体に結合したASPDに、抗ASPDモノクローナル抗体(第2抗体)を反応させる工程
を含み、
第1抗体が、ヒト化抗ASPDモノクローナル抗体huASD2、又は、モノクローナル抗体BAN50aであり、
第2抗体が、マウスモノクローナル抗ASPD抗体mASD3又はその標識化抗体である、ASPDの分析方法。
[9] さらに、下記の工程:
(3)工程(2)でASPDに結合した第2抗体に、レポーターが連結した抗マウス抗体を反応させる工程、又は、工程(2)でASPDに結合した第2抗体の標識に、レポーターが連結した前記標識の結合パートナーを反応させる工程
を含む、[8]に記載の分析方法。
[10] ASPDの標準物質として[1]に記載の物質又は[2]に記載の架橋体を使用する、[8]又は[9]に記載の分析方法。
下記のAβ架橋体1-3を調製した。
Aβ架橋体1:Aβ42、架橋剤は、BS(PEG)5
Aβ架橋体2:Aβ42、架橋剤は、BS(PEG)9
Aβ架橋体3:Aβ42、架橋剤は、DFDNB
使用した架橋剤は、以下の通り。
BS(PEG)5:Bis(succinimidyl) penta(ethylene glycol)
(スペーサーアーム長:21.7Å)
BS(PEG)9:Bis(succinimidyl) nona(ethylene glycol)
(スペーサーアーム長:35.8Å)
DFDNB:1,5-difluoro-2,4-dinitorobenzene
(スペーサーアーム長:3.0Å)
Aβ42 0.56mgを120μL DMSOで溶解(1mM)
↓
10μLを90μL PBS(-)に添加後25℃、15分静置(Aβとして100μM、0.046667mgに相当)
↓
架橋試薬BS(PEG)5,BS(PEG)9,又はDFDNBを50倍モル添加後、25℃、30分静置
↓
Tris-HCl pH8.0を添加(終濃度50mM)、25℃、30分静置
↓
MWCO50Kの限外ろ過フィルターでフィルター処理して、高分子画分を得る
PBS(-)300μL洗浄x3
メンブレン残渣を50μLのPBS(-)で回収
↓
BCA法で濃度測定
得られたAβ架橋体1~3を用いてSDSPAGE(10-20%Gel)を行い、架橋されていることを確認した。その結果の一例を図1に示す。
図1に示す通り、Aβ架橋体1~3は、それぞれ、高分子化しており、分子量は100kDa以上であると認められた。
得られたAβ架橋体1~3のASPD CLEIA反応性を確認した。
使用したASPD CLEIAは、図2に示すシステムであり、固相に固定化した抗ASPDポリクローナル抗体(第一抗体)、検出側のマウス抗ASPDモノクローナル抗体mASD3(第二抗体)、及び抗マウスIgG-HRPを使用するシステムである。mASD3は、WO2006/016644及びWO2009/057664に記載されるモノクローナル抗体であって、ハイブリドーマは特許生物寄託センターに寄託されている(寄託番号は、FERM BP-10394)。HRPは、ホースラディッシュペルオキシダーゼを表す。
Aβ架橋体1~3を被検体としたASPD CLEIA[抗ASPDポリクローナル抗体/mASD3]の反応性を、ASPDを被検体とした時と比べた結果の一例を図3に示す。
図3に示す通り、Aβ架橋体1及び2は、Aβ架橋体3に比べてASPDの反応性に近かった。なかでも、Aβ架橋体1は、ASPDと同等の反応性を示した。
次に、AβのN末端を特異的に認識するモノクローナル抗体82E1を使用する市販のAβオリゴマー測定キットを用いてAβ架橋体の反応性を比較した。
被検体として、Aβ架橋体1、ASPD、及びAβ1-16ダイマーを使用した。
また、ASPD CLEIA[抗ASPDポリクローナル抗体/mASD3]におけるAβ架橋体1、ASPD、及びAβ1-16ダイマーの反応性を比較した。
その結果の一例を図4に示す。
図4に示すとおり、ASPD CLEIAと同様に、市販のAβオリゴマー測定キットにおいても、Aβ架橋体1は、ASPDと同等の反応性を示した。
82E1を使用する市販のAβオリゴマー測定キットでは、Aβ架橋体1及びASPDは、Aβ1-16ダイマーと比較して著しく反応性が弱かった。
反対に、ASPD CLEIAにおいては、Aβ1-16ダイマーの反応性は、Aβ架橋体1及びASPDと比べて著しく反応性が弱かった。
また、ASPD CLEIAは、Aβ架橋体1及びASPDに対して特性が高い検出感度を有していることが認められた。
ウサギ(ニュージーランドホワイト)に、フロイントアジュバント(FCA、初回)、不完全フロイントアジュバント(FIA、5回)のアジュバンドとともにAβ架橋体1の免疫(100μg/回)を6回行い、その後、全採血を行い、血清中の抗体のAβ架橋体1及び合成ASPDに対する反応性の評価を行った。その結果の一例を図5に示す。
図5において、「pre血清」は、免疫前の血清のAβ架橋体1固相化プレートに対する反応性を示し、「固相化Aβ架橋体」は、得られた血清のAβ架橋体1固相化プレートに対する反応性を示し、「固相化合成ASPD」は、得られた血清の合成ASPD固相化プレートに対する反応性を示し、「control」は、得られた血清のF12タンパク質固相化プレートに対する反応性を示し、「Empty」は、得られた血清の空プレートに対する反応性を示す。
図5の結果から、Aβ架橋体1は、免疫原性があり、ASPDに反応する抗体を誘導できることが示された。
ASPD CLEIAシステム[抗ASPDポリクローナル抗体/mASD3]で、ヒトCSF検体中のASPDの測定を行った。具体的には以下のフローで行った。
(1)CSFに既知濃度ASPDを添加し、検体希釈液で希釈(1~16倍希釈)。
(2)一次反応:ウサギ抗ASPDポリクローナル抗体を固定化したマルチウェルプレートに100μL/ウェルで添加し、25℃60分静置。
洗浄×3
(3)二次反応:mASD3(1μg/ml)を100μL/ウェルで添加し、25℃60分静置。
洗浄×3
(4)三次反応:抗マウスIgG-HRP(1/20000)を100μL/ウェルで添加し、25℃60分静置。
洗浄×3
(5)測定:HRPの化学発光基質(商品名:SuperSignal pico、ThermoFisher社製)を100μL/ウェルで添加し、プレートリーダー(商品名:infinite M200pro、TECAN社製)で発光を測定。
測定用のスタンダードには、Aβ凝集体1又は細胞分泌型ASPD様構造体(WO2017/179646)を用いた。
検体希釈液には、3%BSA in PBS(-) 0.05%防腐剤(商品名:プロクリン、シグマアルドリッチ社製)を用いた。
洗浄液には、PBS(-) 0.05% Tween20を用いた。
次に、ヒトCSFにASPDをスパイクしたサンプルを検体希釈液で2倍、4倍、8倍に希釈し、希釈率が1倍、1/2、1/4、及び1/8であるサンプルを測定した結果を図6に示す。
図6に示すように、希釈サンプルの結果をプロットした結果、希釈直線性が得られた。
ASPD CLEIA[抗ASPDポリクローナル抗体/mASD3]で、ヒト血漿検体中のASPDの測定を行った。具体的には以下のフローで行った。
(1)ヒト血漿に既知濃度ASPDを添加し、検体希釈液で希釈(1~16倍希釈)。
(2)一次反応:ウサギ抗ASPDポリクローナル抗体を固定化したマルチウェルプレートに100μL/ウェルで添加し、25℃60分振とう。
洗浄×3
(3)二次反応:mASD3(1μg/ml)を100μL/ウェルで添加し、25℃60分振とう。
洗浄×3
(4)三次反応:抗マウスIgG-HRP(1/20000)を100μL/ウェルで添加し、25℃60分振とう。
洗浄×3
(5)測定:HRPの化学発光基質(商品名:SuperSignal pico、ThermoFisher社製)を100μL/ウェルで添加し、プレートリーダー(商品名:infinite M200pro、TECAN社製)で発光を測定。
測定用のスタンダードには、Aβ凝集体1又は細胞分泌型ASPD様構造体(WO2017/179646)を用いた。
検体希釈液には、3%BSA in PBS(-) 0.05%防腐剤(商品名:プロクリン、シグマアルドリッチ社製)を用いた。
洗浄液には、PBS(-) 0.05% Tween20を用いた。
次に、ヒト血漿にASPDをスパイクしたサンプルを検体希釈液で2倍、4倍、8倍、16倍に希釈し、希釈率が1倍、1/2、1/4、1/8、及び1/16であるサンプルを測定した結果を図7に示す。
図7に示すように、希釈サンプルの結果をプロットした結果、希釈直線性が得られた。しかし、バッファーに比べて傾きが1/2になった。血漿成分の影響であると考えられる。
なお、ヒト血漿試料における回収率への影響は、試料の希釈率を1/16とすると解消できた。
固相に固定化する抗体としてヒト化抗ASPDモノクローナル抗体huASD2を使用し、マウス抗ASPDモノクローナル抗体mASD3、及び抗マウスIgG-HRPを使用したASPD CLEIAでASPDを測定した(図8)。
huASD2はWO2009/057664に記載されるものである。
その結果の一例を図9に示す。図9に示すとおり、4回の独立したASPD測定を実施したところ、ほぼ同じ発光値が得られた。
ASPDの検出感度を向上させるため、mASD3抗体をビオチン化し、ストレプトアビジン(SA)が結合したHRPを使用するシステムを構築した(図10)。
huASD2/ビオチン化mASD3システムでASPDを測定したところ、huASD2/mASD3のシステムに比べて検出感度が向上した(図11)。
また、huASD2/ビオチン化mASD3システムは、ASPDに対する特性が高く、Aβ1-10が16分子結合したマルチ抗原ペプチド(MAP16、富士フィルム和光社製)をほとんど検出しなかった(図12)。一方、コントロールとしてBAN50/ビオチン化BAN50システム(高分子アミロイドβオリゴマーELISAキット、富士フィルム和光社製)で測定したところ、同システムは、MAP16を感度よく検出したが、ASPDをほとんど検出できなかった(図12)。
固定化する第一抗体と、検出側の第二抗体の組み合わせの中から、血漿の影響を低減できる組み合わせを見出した。
下記の[第一抗体/第二抗体]の組み合わせでASPD CEILAのシステムを構築し、血漿試料中のASPDを測定した。
[第一抗体/第二抗体]の組み合わせとしては、[huASD2/ビオチン化mASD3]、[mASD3/ビオチン化mASD3]、[82E1/ビオチン化mASD3]、[BAN50a/ビオチン化mASD3]、及び[6E10/ビオチン化mASD3]を採用した。サンプルとしては、ASPDを含有する希釈率1/4の血漿サンプルを準備し、バッファーサンプルと比較した。
その結果の一例を図13に示す。
図13に示す通り、[BAN50a/ビオチン化mASD3]の組み合わせの場合に、血漿成分の影響をもっとも効果的に回避できることが確認された。
アルツハイマー病(AD)と診断された患者の血漿サンプル10例(○)と、健常者の血漿サンプル10例(△)に対して、[huASD2/ビオチン化mASD3]の組み合わせでASPD CLEIAを行った。その結果、AD患者の4例についてASPDが検出された。その結果を図14に示す。
以上のこれら結果から、ASPD CLEIAによって血液中のASPDを測定することが可能であることが示された。
Claims (7)
- 下記の工程:
(1)不溶性担体に結合している、アミロスフェロイド(ASPD)に結合可能な抗体(第一抗体)に、ASPDを含有している可能性がある生体由来試料を接触させて、ASPDが含有されている場合に第一抗体にASPDを結合させる工程;及び
(2)工程(1)で第一抗体に結合したASPDに、抗ASPDモノクローナル抗体(第二抗体)を反応させる工程
を含み、
第一抗体が、ヒト化抗ASPDモノクローナル抗体huASD2、又は、モノクローナル抗体BAN50aであり、
第二抗体が、マウスモノクローナル抗ASPD抗体mASD3又はその標識化抗体である、ASPDの分析方法。 - さらに、下記の工程:
(3)工程(2)でASPDに結合した第二抗体に、レポーターが連結した抗マウス抗体を反応させる工程、又は、工程(2)でASPDに結合した第二抗体の標識に、レポーターが連結した前記標識の結合パートナーを反応させる工程
を含む、請求項1に記載の分析方法。 - ASPDの標準物質として、ASPDに特異的な抗体に対してASPDと競合する物質を使用し、
前記物質は、アミロイドβタンパク質(Aβ)が架橋剤によって架橋された物質であり、
前記架橋剤は、両端の反応末端がNHSエステルである架橋剤であって、前記架橋剤は、スペーサーアーム長が21Å以上36Å以下である架橋剤、又は、スペーサーアームとして1以上13以下のオキシエチレン基(-CH2CH2O-)及び/又はオキシプロピレン基(-CH2CH2CH2O-)を有する架橋剤である、請求項1又は2に記載の分析方法。 - 前記架橋剤は、エチレングリコールビス(スクシンイミジルスクシネート)、スルホエチレングリコールビス(スクシンイミジルスクシネート)、ビス(スクシンイミジル)ペンタ(エチレングリコール)、及びビス(スクシンイミジル)ノナ(エチレングリコールからなる群から選択される、請求項3に記載の分析方法。
- 請求項3又は4に記載の分析方法に使用するための、ASPDに特異的な抗体に対してASPDと競合する物質であって、
アミロイドβタンパク質(Aβ)が架橋剤によって架橋された物質であり、
前記架橋剤は、両端の反応末端がNHSエステルである架橋剤であって、前記架橋剤は、スペーサーアーム長が21Å以上36Å以下である架橋剤、又は、スペーサーアームとして1以上13以下のオキシエチレン基(-CH2CH2O-)及び/又はオキシプロピレン基(-CH2CH2CH2O-)を有する架橋剤である、物質。 - 前記架橋剤は、エチレングリコールビス(スクシンイミジルスクシネート)、スルホエチレングリコールビス(スクシンイミジルスクシネート)、ビス(スクシンイミジル)ペンタ(エチレングリコール)、及びビス(スクシンイミジル)ノナ(エチレングリコール)からなる群から選択される、請求項5に記載の物質。
- 請求項5又は6に記載の物質と、請求項1で規定された第1抗体と請求項1で規定された第2抗体とを含む、請求項3又は4に記載の分析方法に使用するためのキット。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2019209136 | 2019-11-19 | ||
JP2019209136 | 2019-11-19 | ||
PCT/JP2020/042938 WO2021100744A1 (ja) | 2019-11-19 | 2020-11-18 | アミロスフェロイド(ASPD)の代替物となりうるアミロイドβタンパク質(Aβ)の架橋体、及びASPDの分析 |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPWO2021100744A1 JPWO2021100744A1 (ja) | 2021-05-27 |
JPWO2021100744A5 JPWO2021100744A5 (ja) | 2022-08-18 |
JP7383043B2 true JP7383043B2 (ja) | 2023-11-17 |
Family
ID=75980558
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2021558415A Active JP7383043B2 (ja) | 2019-11-19 | 2020-11-18 | アミロスフェロイド(ASPD)の代替物となりうるアミロイドβタンパク質(Aβ)の架橋体、及びASPDの分析 |
Country Status (5)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20230021187A1 (ja) |
EP (1) | EP4062929A4 (ja) |
JP (1) | JP7383043B2 (ja) |
CN (1) | CN114729932A (ja) |
WO (1) | WO2021100744A1 (ja) |
Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2008531635A (ja) | 2005-03-05 | 2008-08-14 | アボット ゲーエムベーハー ウント カンパニー カーゲー | スクリーニング方法、非拡散性aベータオリゴマーの精製方法、前記非拡散性aベータオリゴマーに対する選択的抗体および前記抗体の製造方法 |
JP2008291025A (ja) | 2007-04-26 | 2008-12-04 | Mitsubishi Chemicals Corp | ヒトアミロスフェロイド類似会合体 |
WO2009057664A1 (ja) | 2007-10-29 | 2009-05-07 | Mitsubishi Chemical Corporation | 抗体及びその利用 |
US20090246191A1 (en) | 2007-10-11 | 2009-10-01 | University Of Tennessee Research Foundation | Preparation of Purified Covalently Cross-linked Abeta Oligomers and Uses Thereof |
WO2017179646A1 (ja) | 2016-04-14 | 2017-10-19 | Taoヘルスライフファーマ株式会社 | アミロスフェロイド(aspd)様構造体及び医薬組成物 |
JP2019518196A (ja) | 2016-04-29 | 2019-06-27 | フォルシュングスツェントルム・ユーリッヒ・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクテル・ハフツング | アミロイドベータ凝集の一次核形成阻害剤の同定方法 |
Family Cites Families (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
ATE239797T1 (de) | 1993-01-25 | 2003-05-15 | Takeda Chemical Industries Ltd | Antikörper gegen beta-amyloid oder derivative davon und seine verwendung |
AU2600499A (en) * | 1998-02-13 | 1999-08-30 | Arch Development Corporation | Methods and compositions comprising the use of blocked b-amyloid peptide |
AU2005272396A1 (en) | 2004-08-11 | 2006-02-16 | Mitsubishi Chemical Corporation | Antibody and utilization of the same |
EP2275814A4 (en) * | 2008-05-08 | 2011-07-20 | Takeda Pharmaceutical | A-BETA-Oligomer-MEASURING METHOD |
CN103827140B (zh) | 2011-12-22 | 2016-05-25 | 道健康生活医药株式会社 | 合成淀粉样蛋白球体的制造方法 |
KR101948400B1 (ko) | 2011-12-29 | 2019-02-14 | 타오 헬스 라이프 파마 가부시키가이샤 | 아밀로스페로이드가 결합하여 성숙 신경 세포사를 유발하는 표적 분자, 아밀로스페로이드가 유도하는 신경 세포사를 억제하는 방법 및 물질, 및 그들의 이용 |
-
2020
- 2020-11-18 JP JP2021558415A patent/JP7383043B2/ja active Active
- 2020-11-18 EP EP20889462.6A patent/EP4062929A4/en active Pending
- 2020-11-18 US US17/777,846 patent/US20230021187A1/en active Pending
- 2020-11-18 CN CN202080080620.4A patent/CN114729932A/zh active Pending
- 2020-11-18 WO PCT/JP2020/042938 patent/WO2021100744A1/ja unknown
Patent Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2008531635A (ja) | 2005-03-05 | 2008-08-14 | アボット ゲーエムベーハー ウント カンパニー カーゲー | スクリーニング方法、非拡散性aベータオリゴマーの精製方法、前記非拡散性aベータオリゴマーに対する選択的抗体および前記抗体の製造方法 |
JP2008291025A (ja) | 2007-04-26 | 2008-12-04 | Mitsubishi Chemicals Corp | ヒトアミロスフェロイド類似会合体 |
US20090246191A1 (en) | 2007-10-11 | 2009-10-01 | University Of Tennessee Research Foundation | Preparation of Purified Covalently Cross-linked Abeta Oligomers and Uses Thereof |
WO2009057664A1 (ja) | 2007-10-29 | 2009-05-07 | Mitsubishi Chemical Corporation | 抗体及びその利用 |
WO2017179646A1 (ja) | 2016-04-14 | 2017-10-19 | Taoヘルスライフファーマ株式会社 | アミロスフェロイド(aspd)様構造体及び医薬組成物 |
JP2019518196A (ja) | 2016-04-29 | 2019-06-27 | フォルシュングスツェントルム・ユーリッヒ・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクテル・ハフツング | アミロイドベータ凝集の一次核形成阻害剤の同定方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP4062929A4 (en) | 2024-03-13 |
US20230021187A1 (en) | 2023-01-19 |
WO2021100744A1 (ja) | 2021-05-27 |
JPWO2021100744A1 (ja) | 2021-05-27 |
EP4062929A1 (en) | 2022-09-28 |
CN114729932A (zh) | 2022-07-08 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US20200215209A1 (en) | Antibodies and Vaccines for Use in Therapeutic and Diagnostic Methods for Alpha-Synuclein-Related Disorders | |
US8871447B2 (en) | Immunogens and corresponding antibodies specific for high molecular weight aggregation intermediates common to amyloids formed from proteins of differing sequence | |
US20070110750A1 (en) | Monoclonal antibodies specific for high molecular weight aggregation intermediates common to amyloids formed from proteins of differing sequence | |
US9535076B2 (en) | Methods and compositions for eliciting an amyloid-selective immune response | |
US8318171B2 (en) | Neurotoxic oligomers | |
CZ303137B6 (cs) | Konjugát obsahující Aß 1-5 nebo Aß 1-6, jeho použití a farmaceutický prostredek jej obsahující | |
JP2019218362A (ja) | アルツハイマ病の治療および診断方法における使用のためのN末端切断型アミロイドβプロトフィブリル/オリゴマ | |
US20110200609A1 (en) | Monoclonal antibodies specific for pathological amyloid aggregates common to amyloids formed from proteins of differing sequence | |
US8512709B2 (en) | Modified amyloid β peptide | |
AU2001268828A1 (en) | Neurotoxic oligomers | |
JP7383043B2 (ja) | アミロスフェロイド(ASPD)の代替物となりうるアミロイドβタンパク質(Aβ)の架橋体、及びASPDの分析 | |
JP7161401B2 (ja) | アミロスフェロイド(aspd)様構造体及び医薬組成物 | |
US12005101B2 (en) | Modulation of proprotein convertase subtilisin/kexin 9 expression (PCSK9) with HSP 27 and/or HSP25 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20220809 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20220809 |
|
A871 | Explanation of circumstances concerning accelerated examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A871 Effective date: 20220809 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20221004 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20221125 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20230203 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20230206 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20230418 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20230714 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20230725 |
|
A911 | Transfer to examiner for re-examination before appeal (zenchi) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911 Effective date: 20230814 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20231102 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20231107 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 7383043 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |