JP7368867B2 - 対称性ジメチル化アルギニン分析物に対する抗体及びその用途 - Google Patents
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Description
化学式1
R1は-Y-Z;そして、
Yは連結基であり、Zは水素、OH、SH、S-アシル、O-アルキル、ハロゲン、NH2、エポキシ、マレイミジル、ハロアセトアミド、カルボキシル、活性化されたカルボキシル、免疫原性担体、タンパク質及び標識から選択される。
分析物
測定する化合物または組成物、関心物質を指す。分析物は特異的結合対(sbp)の構成要素が1価または多価の、一般的に抗原またはハプテンのリガンドでもよく、1以上の共通エピトープまたは決定因子部位を共有する単一化合物または複数の化合物である。
合理的に分析物を含有する疑いがあるすべての試料は、本開示の方法によって分析し得る。該試料にはヒト、動物または人工試料を含み得る。試料は、アッセイを阻害しない、適切な培地で調製し得る。典型的に試料は限定されないが、尿、全血、血清、血漿、脳脊髄液または唾液等の水溶液または天然流体である。場合によっては、試料は血清である。
定量的、反定量的及び定性的方法及び分析物を決定する他のすべての方法は、分析物の量を測定する方法としてみなされる。例えば、分析物を含有する疑いがある試料内で単に分析物の有無のみを検出する方法も本発明の範囲に含まれるとみなされる。
特異的な結合対(sbp構成要素)の構成要素は、2つの異なる分子のうちの1個であり、表面または空洞に特定的に結合して他の分子の特定空間及び極性組織と相補的であると定義される領域を有する。特異的結合対の構成要素は、リガンド及び受容体(アンチリガンド)、sbp構成要素及びsbpパートナー等と称される。これらは一般的に抗原-抗体等の免疫学的対の構成要素である。
受容体が自然に存在もしくは調製し得るすべての有機化合物を指す。例えば、本開示のある文脈において、分析物はリガンドであり、本開示はリガンドの分析物の量または濃度を決定するための方法を提供する。
受容体は、分子の特定空間及び極性組織を認識し得るすべての化合物または構成である。分子の該組織化された領域をエピトープまたは決定子部位という。例示的な自然発生受容体には抗体及び酵素が含まれる。
「エピトープ」は、免疫反応を誘導し得て、該反応によって産生された特定の抗体と結合し得る抗原表面上の分子領域であって、決定基、抗原決定基ともいう。ハプテン(対称性ジメチルアルギニン等)と関連して、ハプテンを免疫原性担体に結合させることで非-抗原性ハプテン分子に対する抗体が産生し得る。その後、ハプテンにより規定された「エピトープ」を認識する抗体が産生される。
連結基は、2個以上の下位構造を連結する構造の一部である。連結基は、下位構造間で伸びる原子の中断されていない1以上の鎖を有している。連結基の原子自体は、化学結合で連結される。連結基の原子数は、水素以外の原子をカウントして決定される。
結合体は、連結基を通じて一緒に結合されて単一構造を形成する2個以上の下位構造から構成された分子である。結合は、連結基を通じてサブユニットを連結してなされ得る。本開示の文脈において、結合体はハプテン、sbp構成要素または分析物類似体に結合したグルコース-6-ホスフェート脱水素酵素(G6PDH)酵素、例えばG6PDH突然変異酵素が用いられる結合体を含み得る(例えば、米国特許第6,455,288号、第6,090,567号及び第6,033,890号に記載された組換え体G6PDH)。本開示の文脈において、G6PDHはG6PDH酵素等の酵素、またはG6PDH標識等の標識と呼ばれることがある。場合によっては、結合体は限定されないが、G6PDH、アルカリ性ホスファターゼ、β-ガラクトシダーゼ及びホースラディッシュ(horse radish)過酸化酵素を含む標識(例えば、標識タンパク質)またはハプテン、sbp構成要素または分析物類似体に結合した蛍光、発光または比色等の化学的標識を含み得る。
結合は、2つのサブユニットが一緒に連結されて結合体を形成するすべての過程である。結合過程は、例えば本明細書に記載されたように、任意の数の段階で構成することができる。
ハプテンは、相応する抗体に特異的に結合し得るが、一般的にそれ自体が抗体調製のための免疫原として作用しない。ハプテンを認識する抗体は、免疫原性担体に連結されたハプテンから構成された化合物に対して調製し得る。
「対称性ジメチル化アルギニン分析物」は、対称性ジメチルアルギニンに共通する抗体-結合エピトープを有する分析物を指す。対称性ジメチル化アルギニン分析物に含まれる分析物には、対称性ジメチルアルギニン(SDMA)、対称性Nα-アセチル-ジメチルアルギニン等の、対称性Nα-アシル化-ジメチルアルギニン及びSDMA-Gly-Glyジペプチド等のSDMA-ペプチド誘導体が含まれる。
用語「誘導体」は、1以上の化学反応によって親化合物から作られた化学的化合物または分子を指す。
「類似体」という用語は、他の化合物と類似する構造を有するが、特定の成分においては異なる化合物を指す。これは1以上の原子、官能基または下位構造で異なる場合があり、他の原子、グループまたは下位構造で置換される。
「標識」、「検出器分子」、「リポーター」または「検出可能なマーカー」は、検出可能なシグナルを生成、もしくは生成するように誘導し得る任意の分子である。標識は分析物、免疫原、抗体または受容体等の他の分子、または、特にハプテンまたは抗体等の受容体に結合し得る分子にコンジュゲートすることができる。標識は、連結基によって直接または間接的に結合し得る。標識の非制限的例としては、放射性同位元素(例えば125I)、酵素(例えば、β-ガラクトシダーゼ、ペルオキシダーゼ)、G6PDH(例えば米国特許番号6,455,288、6,090,567、及び8903に記載された組換えG6PDHである突然変異G6PDH)、酵素フラグメント、酵素基質、酵素阻害剤、補酵素、触媒、蛍光団(例えばローダミン、フルオレセインイソチオシアナートまたはFITC、またはDylight649)、染料、化学発光剤及び発光剤(例えば、ジオキセタン、ルシフェリン)、または増感剤を含む。
用語「免疫原」は、有機体において免疫反応を誘導、産生または作製し得る物質を指す。
本明細書に用いられた「免疫原性担体」は、1以上の位置でハプテンと結合し得る一般的なタンパク質であって、該ハプテンと特異的に結合し得る抗体の産生を可能にする免疫原性物質である。免疫原性担体物質の例は、タンパク質、糖タンパク質、複合ポリアミノ-多糖類、粒子、及び外来と認識されて宿主からの免疫学的反応を誘導する核酸を含むが、これに限定されない。ポリアミノ-多糖類は、該調製に対して公知の任意の通常の手段を用いて多糖類から調製し得る。
用語「タンパク質」、「ポリペプチド」及び「ペプチド」は、任意の長さを有するアミノ酸の重合体的形態を指すため、本願では区別なく用いられる。別途具体的に示さない限り、「ポリペプチド」、「ペプチド」及び「タンパク質」は、遺伝的コーディングされた、もしくはコーディングされていないアミノ酸、化学的または生化学的に修飾もしくは誘導体化アミノ酸、修飾ペプチド骨格を有するポリペプチド、及び融合タンパク質を含み得る。
「シグナル生成システム」は、分析物に対するアッセイに用いられ、1以上の構成要素を有することができ、少なくとも1個の構成要素は検出可能な標識(例えば、突然変異G6PDH等のG6PDH)である。シグナル生成システムは、試料内で分析物の存在または量と関連したシグナルを生成する。シグナル生成システムには、測定可能なシグナルを生成するのに必要なすべての試薬が含まれる。本開示の目的のために、典型的にはG6PDHまたは標識タンパク質(例えば、アルカリ性ホスファターゼ、β-ガラクトシダーゼまたはホースラディッシュ・ペルオキシダーゼ)は、分析物と類似するsbp構成要素にコンジュゲートされる。
抗体と関連して用いられる場合、「分離された」とは、なんらかの自然状態から「人の手によって」改変されたことを意味する。すなわち、自然発生する場合であれば、本来の環境から改変もしくは除去されたこと、または両方である。例えば、生きている動物が自然状態で自然に存在する自然発生抗体は、「分離された」ものではないが、自然状態の共存物質から分離された同一の抗体は、本明細書で用いられる用語の通り「分離された」ものである。抗体は、天然発生組成物でない免疫アッセイ試薬等の組成物で発生することがあり、その中には本願で用いられる用語の意味内で分離された抗体が残っている。
「交差-反応性」は、抗体の誘導に用いられなかった抗原と抗体の反応を意味する。「交差-反応性」は、標的分析物の公知の希釈液を用いて標準曲線を設定することで定量的免疫アッセイで決定され得る。その後、標準曲線を用いて類似する条件下定量された試料内で多様な既知量で存在する干渉物質の見かけ濃度を計算する。交差-反応性は見かけ濃度を実際濃度で割った値に100をかけた値である。
「キャリブレーション及び対照物質」という語句は、既知量の分析物を含むすべての標準または参照物質を示す。分析物と該キャリブレーション物質を含有する疑いがある試料を類似する条件で定量する。分析物質の濃度は、未知の試料または既知濃度の分析物質を含む試料に対して得られた結果と標準物質に対して得られた結果を比較して計算する。これは一般的にキャリブレーション曲線を構成もしくは生成することで行われる。
検出限界という意味、すなわち分析物がない時に得られるシグナルと区別できるシグナルを提供する最も少ない量の分析物という意味で用いられる。
「少量添加回収率」は、試料混合物に添加された(少量添加された)分析物の既知量と比較して試料混合物内の分析物(回収)の量を測定するアッセイを示す。分析物の量の測定は、濃度(ng/mL)または百分率(%)で表わされてもよい。
酵素が分析物に対するアッセイで標識として用いられる場合、分析物を検出するのに十分な酵素の活性変化。典型的には、酵素の活性は10~100%、例えば20~99%、または30~95%減少する。
酵素に存在するエピトープと結合して酵素または酵素-リガンド結合体の活性を阻害し得る抗体。該抗体は、リガンドに結合して酵素-リガンド結合体の酵素活性を阻害し得る抗リガンド抗体と区別される。
アッセイ実験において「調節」は、分析物-抗体結合部位のために競合する分析物を含有する疑いがある試料内で酵素及び分析物等の標識に結合したハプテンまたは分析物を指し、形成された酵素生成物の量を調節する(図10参照)。
「最大阻害」は、過剰の抗体がアッセイに添加される場合、酵素に存在するエピトープ及び分析物の不在下で得られたシグナルに結合する場合に酵素、または酵素-リガンド結合体の活性を阻害し得る抗体を指す。
多様な補助物質が本開示に係るアッセイで多く用いられる。例えば、緩衝液は、一般的にアッセイ培地に存在するだけでなく、アッセイ培地及びアッセイ成分に対する安定化剤も存在する。多くの場合、該添加剤に加え、アルブミンまたは界面活性剤、特に非イオン性界面活性剤、結合増強剤、例えばポリアルキレングリコール等の追加のタンパク質を含み得る。
均一の酵素免疫アッセイは、酵素活性がsbpパートナーの結合によって強く調節し得る酵素-sbp構成要素結合体の可溶性に依存する。本開示は、均一免疫アッセイに有用なアッセイを行う酵素-sbp構成要素結合体及び抗体を提供する。
R1は-Y-Z;
Yは連結基;そして、
Zは水素、OH、SH、S-アシル、O-アルキル、ハロゲン、NH2、エポキシ、マレイミジル、ハロアセトアミド、カルボキシル、活性化されたカルボキシル、免疫原性担体、タンパク質及び標識から選択される。
対称性ジメチルアルギニンのα-アミノ基の窒素原子に対するマレイミド官能基の結合は、反応式1に示した4-マレイミド-1-ブタナール(4)の使用を通じて達成されてもよく、その調製は実施例1に記載されている。対称性ジメチルアルギニンの窒素原子に対するアルキル化反応のために、AcOH及びNaBH3CNを、MeOHの4-マレイミド-1-ブタナール(4)及び対称性ジメチルアルギニンの溶液に添加し得る。生成された混合物を室温で3時間攪拌し得る。反応を水で冷却し、逆相クロマトグラフィーで精製してハプテンSDMA-Mを得ることができる(図4)。
マレイミド機能化されたハプテン(例えば、SDMA-M)は、タンパク質にコンジュゲートし得る。N-スクシンイミジルS-アセチルチオアセテート(SATA)を用いたイプシロン-窒素のアシル化によるタンパク質リシン残基の活性化、次いでヒドロキシルアミンを用いたS-アセチル基の後続加水分解は、親核性スルフヒドリル基を生成する。スルフヒドリル活性化タンパク質とマレイミド誘導体化されたハプテンの結合は、マイケル(Michael)付加反応を通じて行われる。適当なタンパク質(免疫原性担体)は、スカシ貝ヘモシアニン、牛チログロブリン及びオボアルブミンを含むが、これに限定されない。
ブロモアセトアミド機能があるハプテンSDMA-SBAPは、チオール基を含むタンパク質との反応に使用され得る。G6PDHを含むシステインに対するSDMA-SBAPの結合は、図7に示されており、その調製は実施例2に記載されている。
本開示の実施態様は、対称性ジメチル化アルギニン分析物に特異的に結合する抗体を含む。場合によっては、その抗体は、非対称性ジメチルアルギニン、L-アルギニン及びN-メチルアルギニンのうち1以上に特異的に結合する。一部の実施例において、本開示の抗体は、本明細書の別途記載されたいずれかの化学式1の化合物をはじめとする本開示の任意の化合物に特異的に結合する。
アミノ酸配列GFSLSSY(配列番号2)を含むVHCDR1
アミノ酸配列DIKTGDR(配列番号3)を含むVHCDR2、及び
アミノ酸配列ARVYVSGNDHYDL(配列番号4)を含むVHCDR3
を含む可変重鎖(VH)ポリペプチド;及び
アミノ酸配列QSISNY(配列番号6)を含むVLCDR1、
アミノ酸配列RAS(配列番号7)を含むVLCDR2、及び
アミノ酸配列QLGYTYSNVENA(配列番号8)を含むVLCDR3
を含む可変軽鎖(VL)ポリペプチド。
アミノ酸配列GFSLSSY(配列番号2)を含むVHCDR1
アミノ酸配列DIKTGDR(配列番号3)を含むVHCDR2、及び
アミノ酸配列ARVYVSGNDHYDL(配列番号4)を含むVHCDR3
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アミノ酸配列QSISNY(配列番号6)を含むVLCDR1、
アミノ酸配列RAS(配列番号7)を含むVLCDR2、及び
アミノ酸配列QLGYTYTNVENA(配列番号10)を含むVLCDR3
を含む可変軽鎖(VL)ポリペプチド。
アミノ酸配列GFSFSSTK(配列番号12)を含むVHCDR1
アミノ酸配列CIGTDT(配列番号13)を含むVHCDR2、及び
アミノ酸配列ARSSSTGYYNL(配列番号14)を含むVHCDR3
を含む可変重鎖(VH)ポリペプチド;及び
アミノ酸配列QSIRSY(配列番号16)を含むVLCDR1、
アミノ酸配列YAS(配列番号17)を含むVLCDR2、及び
アミノ酸配列HDYYTFTDND(配列番号18)を含むVLCDR3
を含む可変軽鎖(VL)ポリペプチド。
アミノ酸配列GFSFSSTK(配列番号12)を含むVHCDR1
アミノ酸配列CIGVGSRGS(配列番号20)を含むVHCDR2、及び
アミノ酸配列ARSSTTGYYIL(配列番号21)を含むVHCDR3
を含む可変重鎖(VH)ポリペプチド;及び
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アミノ酸配列KAS(配列番号24)を含むVLCDR2、及び
アミノ酸配列QNYYTFTEND(配列番号25)を含むVLCDR3
を含む可変軽鎖(VL)ポリペプチド。
アミノ酸配列GFSFWR(配列番号27)を含むVHCDR1
アミノ酸配列CIDGGNTNR(配列番号28)を含むVHCDR2、及び
アミノ酸配列ARVRLGNNDYIDL(配列番号29)を含むVHCDR3
を含む可変重鎖(VH)ポリペプチド;及び
アミノ酸配列QSISNY(配列番号6)を含むVLCDR1、
アミノ酸配列RAS(配列番号7)を含むVLCDR2、及び
アミノ酸配列QQGYNWDLDGA(配列番号31)を含むVLCDR3
を含む可変軽鎖(VL)ポリペプチド。
本開示はまた組成物を提供する。一部の実施例によれば、本開示の組成物は、本開示の任意の化合物、抗体、核酸、発現ベクター及び/または細胞を含む。
本開示の様態は、本開示の任意の化学式1の化合物及び/または本開示の任意の抗体を用いる方法をさらに含む。特定の実施例において、該化合物及び/または抗体は、培地、例えば関心生物学的試料を含む培地で少なくとも1個の対称性ジメチル化アルギニン分析物を検出(量の決定を含む)するために用いられる。例えば、一部の実施例によれば、培地で少なくとも1個の対称性ジメチル化アルギニン分析物の量を決定する方法が提供され、該方法は培地で少なくとも1個の対称性ジメチル化アルギニン分析物を含有する疑いがある試料、及び本開示の任意の抗体の結合を含む。該方法は対称性ジメチル化アルギニン分析物及び抗体を含む複合体の存在または不在を決定する段階をさらに含み、ここで複合体の存在は、試料内で対称性ジメチル化アルギニン分析物の存在を示す。特定の実施例において、培地は本開示の任意の化学式1の化合物をさらに含む。例えば、培地は対称性ジメチルアルギニンの部分及び検出可能な標識(例えば、G6PDH等の酵素)を有する対称性ジメチルアルギニン結合体をさらに含み得る。
本開示の実施形態は、キットをさらに含む。一部の実施例において、キットは試料内で少なくとも1個の対称性ジメチル化アルギニン分析物の量を決定するのに用いられる。該キットは、本開示の任意の化学式1の化合物、本開示の任意の抗体、または両方を含み得る。
下記実施例は、本発明を調製して用いる方法に対する完全な開示及び説明を通常の知識を有する者に提供するために提示されるものであり、本発明者らがそれらの発明とみなす範囲を制限しようとするものではない。下記の実験はすべて、または行われた唯一の実験であることを示すためのものである。用いられた数字(例えば、量、温度等)と関連して正確性を担保するために努力したが、一部実験の誤差及び偏差が考慮されなければならない。別途明示されない限り、部は重量部、分子量は重量平均分子量、温度は摂氏温度、圧力は大気圧またはその付近である。「平均」は算術平均を意味する。標準略語、例えばbp、塩基対;kb、キロベース;pl、ピコリットル;sまたはsec、秒、分;hまたはhr、時間;aa、アミノ酸;kb、キロベース;bp、塩基対;nt、ヌクレオチド;i.m.、筋肉内;i.p.、腹腔内;s.c.、皮下;等である。
開示された化合物の合成に有用な一般的な既知の化学的合成反応式及び条件を提供する様々な一般の参考文献を利用することができる(例えば、Smith and March,March´s AdvanCed Organic Chemistry:Reactions,Mechanisms,and Structure,Fifth Edition,Wiley-InterscienCe,2001;またはVogel,A Textbook of Practical Organic Chemistry,InClude Qualitative Organic Analysis,Fourth Edition,New York:Longman,1978)。
SDMA-Mハプテンの調製
1段階
SDMA-M-SH-KLH免疫原の調製
Hapten SDMA-Mは、チオール基がKLHに化学的に導入されたKLHにコンジュゲートされた。N-スクシンイミジル-S-アセチルチオアセテートを保護されたスルフヒドリルを添加したKLHの一次アミンと反応させた。ヒドロキシルアミンで保護されたスルフヒドリルの脱保護で所望のチオール化されたSH-KLHを産生した(図8)。ハプテンSDMA-MとSH-KLHの結合は、免疫原SDMA-M-SH-KLHを産生した(図8参照)。
凍結乾燥されたKLH(20mg)を脱イオン水で再構成し、1M炭酸塩-重炭酸塩緩衝液を用いてpHを8.6に調整した。N-スクシンイミジルS-アセチルチオアセテートの溶液を調製し(4.67mgを92μLのDMFに220mMの濃度で溶解)、KLH溶液に4時間かけてゆっくり添加した。N-スクシンイミジルS-アセチルチオアセテートを添加しながら反応混合物を室温で攪拌した後、さらに16時間、低温室(4℃)で攪拌した。
前記SH-KLH溶液にジチオトレイトール溶液を総1mM濃度で添加して二硫化結合形成を最小化した。1M炭酸塩-重炭酸塩緩衝液を用いてpHを7.2に調整した。SH-KLH溶液に、DMF(0.2mL、DMFに溶解された9.6mg)に溶解されたマレイミド誘導体ハプテンSDMA-M146μlを4ないし5時間かけてゆっくり添加した。反応を4℃で夜通し継続した。混合物を2-8℃で4リットルのNaH2P04-Na2HPO4緩衝液12.5mM、pH7.0のうち10,000MWCO Slide-A-Lyzer(商標登録)透析カセット(Pierce)を用いて透析によって精製した。この手順は、免疫原SDMA-M-SH-KLHを産出した(図8参照)。
SDMA-SBAP-SH-G6PDH結合体の調製
実施例2に記載されたように調製されたハプテンSDMA-SBAPは、突然変異G6PDH(米国特許第6,455,288号、第6,090,567号、第6,033,890号参照)等のシステイン基を含むタンパク質、または化学反応によって実施例3に記載されたようにG6PDHにチオール-基の導入のために設計される。
SDMAに対するポリクローナル抗体の調製
完全フロイントアジュバントで乳化させた、実施例3で調製したSDMA-M-SH-KLH免疫原200μg/ウサギを24匹のメスのニュージーランドホワイトウサギに皮下注射して免疫化させた。ウサギは不完全フロイントアジュバントで乳化された同一の免疫原の100μg/ウサギで初期注射後、4週ごとにブーストされた。初期免疫化134日後、各ウサギのポリクローナル抗体を含む出血を中耳動脈で採取した。SDMA-M-SH-KLH抗体を含むこれらの出血からの抗血清は、酵素結合体SDMA-SBAP-SH-G6PDHの最大抗体阻害及び実施例7及び8に記載された対称性ジメチルアルギニン存在下における調節を測定することで均一アッセイ形式(図10)で評価した。
ウサギモノクローナル抗体の調製
ウサギ組換えモノクローナル抗体は、免疫化されたウサギの天然抗体レパートリーを効率的に試料化するための単一B-細胞スクリーニング方法を用いて調製された。この技術は、一般的に本願に記載された対称性ジメチルアルギニンに対するモノクローナル抗体を産生するのに適用することができる。
SDMA標準及びキャリブレーションプロトコルの調製
対称性ジメチルアルギニンジ(p-ヒドロキシアゾベンゼン-p´-スルフォネート)塩(Sigma)をDMF:H2O(1:1)に溶解させ、合成マトリックスで4μg/mlストック溶液のSDMAの最終濃度に希釈した。SDMAストック溶液を0、15、50、100、150、200μg/dLの水準を達成するために、合成マトリックスの分注に移した。合成マトリックスは、HEPES(6.5mM、pH6.7)及びEDTA(0.25mM)、界面活性剤、消泡剤及び保存剤で緩衝されたタンパク質性溶液から構成された。標準は、LC/MSによって検証された(図17参照)。
試薬及びアッセイ
対称性ジメチルアルギニン抗体及び酵素結合体は、本開示によって試料内で対称ジメチル化アルギニン分析物を検出するために均一アッセイ形式で有利に用いられる抗体は、結合体阻害、結合体調節、キャリブレーション、交差反応性及び少量添加回収率等の公知の方法によって評価してもよい。該目的のために、抗体(ポリクローナル抗体ウサギ#21342、ウサギ#26494、またはウサギ#27420、またはクローニングされた抗体1H4/1K4、8H1/8K3、18H1/18K2、1H2/1K4、3H1/3K3または、5H1/5K1)は、抗体希釈剤に添加して抗体試薬を調製する。抗体試薬は前述のように、調製された抗体、緩衝剤、塩、安定化剤、保存剤、NAD+及びグルコース-6-ホスフェートを含む。酵素結合体SDMA-SBAP-SH-G6PDHを結合体希釈剤に添加して酵素結合体試薬を調製する。酵素結合体試薬は、結合体、緩衝剤、安定剤、塩及び防腐剤を含む。
対称性ジメチルアルギニン分析物を用いた抗体及びキャリブレーション
対称性ジメチル化アルギニン分析物抗体及び酵素結合体(SDMA-SBAP-SH-G6PDH)を均一アッセイ形式で用いて実施例7に記載された対称性ジメチルアルギニン標準を用いてキャリブレーション曲線を生成した。抗体試薬は、実施例8に記載されたように調製した。対称ジメチル化アルギニン分析物ポリクローナル抗体ウサギ#21342、ウサギ#26494、ウサギ#27420及びクローニングされた抗体1H4/1K4、8H1/8K3、18H1/18K2、1H2/1K4、3H1/3K3または5H1/5K1を用いて調製された。酵素結合体SDMA-SBAP-SH-G6PDHを用いて結合体試薬を調製した。実施例7及び8に記載されたようにBeckman AU480臨床化学分析器で6-ポイントキャリブレーション曲線を生成した。典型的なキャリブレーション曲線は下記の表に、用量-反応曲線は図11及び図12に示した。本実験は、ポリクローナル抗体ウサギ#21342、ウサギ#26494、ウサギ#27420及びクローニングされた単一クローン抗体1H4/1K4、8H1/8K3、18H1/18K2、1H2/1K4、3H1/3K3または5H1/5K等が用量-反応関係を示す対称性ジメチルアルギニンに対する反応に結合する抗体を有することを立証した。
Nα-Acetyl-Symmetric Dimethylarginine Analyteを用いた抗体及びキャリブレーション
対称性ジメチル化アルギニン分析物抗体及び酵素結合体(SDMA-SBAP-SH-G6PDH)を均一アッセイ形式で用いて実施例7に記載されたNα-アセチル-対称性ジメチルアルギニンを用いて調製された標準を用いてキャリブレーション曲線を生成した。抗体試薬を記載されたように調製した。実施例8において、対称ジメチル化アルギニン分析物ポリクローナル抗体ウサギ#21342、ウサギ#26494、ウサギ#27420及びクローニングされた抗体1H4/1K4、8H1/8K3、18H1/18K2、1H2/1K4、3H1/3H1/5、または酵素結合体SDMA-SBAP-SH-G6PDHを用いて結合体試薬を調製した。実施例8に記載されたようにBeckman AU480臨床化学分析器で6-ポイントキャリブレーション曲線を生成した。典型的なキャリブレーション曲線は下記表に、用量-反応曲線は図13及び図14に示した。本実験は、ポリクローナル抗体ウサギ#21342、ウサギ#26494、ウサギ#27420及びクローニングされたモノクローナル抗体1H4/1K4、8H1/8K3、18H1/18K2、1H2/1K4、3H1/3K3または5H1/5K等が用量-反応関係を示すNα対称性ジメチルアルギニンに対する反応に結合する抗体を有することを立証した。
少量添加回収率
既知量の対称性メチル化アルギニン分析用ストック溶液(4pg/mL)を実施例7に記載されたように合成マトリックスに添加(スパイク)して0、15、50、100、150、200pg/dLの濃度を達成した。これらの試料は、実施例8に記載されたようにBeckman AU480上の少量添加回収率(リカバリー)を確認するために均一酵素免疫アッセイによって3重で定量化された。試料は、6-ポイントキャリブレーション曲線を生成するのに別途調製された標準セットを用いて定量化された。テスト中の試料内で定量化される分析物等の分析物を用いて調製された標準を用いてキャリブレーション曲線を生成した。酵素結合体試薬は、結合体SDMA-SBAP-SH-G6PDHを含み、抗体試薬は、ウサギ#21342、ウサギ#26494、ウサギ#27420及び抗体クローン1H4/1K4、8H1/8K3、18H1/18K2、/1K4、3H1/3K3または5H1/5K1であった。少量添加回収率の実験で回収された対称性メチル化アルギニン分析物濃度を公知の濃度と比較してプロットした(図15~18)。本実験は、ポリクローナル抗体ウサギ#21342、ウサギ#26494、ウサギ#27420及びクローニングされた抗体1H4/1K4、8H1/8K3、18H1/18K2、1H2/1K4、3H1/3K3または5H1/5K1が対称性ジメチルアルギニン及びNα-アセチル-SDMAに対する抗体反応を有することを立証した。
対称性ジメチルアルギニン及びNα-アセチル-対称性ジメチルアルギニン分析物を用いた抗体及びキャリブレーション
ウサギ#27410及びSDMA-SBAP-SH-G6PDHからのポリクローナル抗体を用いて試薬を調製し、実施例8に記載されたように対称ジメチル化アルギニン及びNα-Ac-SDMA分析物を検出するために均一アッセイ形式で用いた。SDMA及びNα-Ac-SDMA試料を実施例7に記載されたように調製し、SDMAを用いて調製された標準から生成されたキャリブレーション曲線から定量化した。ウサギ#27410のポリクローナル抗体を用いて実施例11に記載されたように少量添加回収率の実験を行った。図20はウサギ#27410のポリクローナル抗体がSDMA及びNα-Ac-SDMAの両方で実質的に結合することを示す。ウサギ#27410のポリクローナル抗体に対する最大阻害(%)及び調節(%)は上の表1にある。
Claims (70)
- 化学式1の化合物に特異的に結合する抗体であって、化学式1の化合物は、以下:
式中:
R1は-Y-Z;
Yは連結基;そして、
Zは水素、OH、SH、S-アシル、O-アルキル、ハロゲン、NH2、エポキシ、マ
レイミジル、ハロアセトアミド、カルボキシル、活性化されたカルボキシル、免疫原性担
体、タンパク質、標識及び固体支持体から構成された群から選択される
で表され、
抗体は:
アミノ酸配列GFSLSSY(配列番号2)を含むVHCDR1
アミノ酸配列DIKTGDR(配列番号3)を含むVHCDR2、及び
アミノ酸配列ARVYVSGNDHYDL(配列番号4)を含むVHCDR3
を含む可変重鎖(VH)ポリペプチド;及び
アミノ酸配列QSISNY(配列番号6)を含むVLCDR1、
アミノ酸配列RAS(配列番号7)を含むVLCDR2、及び
アミノ酸配列QLGYTYSNVENA(配列番号8)を含むVLCDR3
を含む可変軽鎖(VL)ポリペプチド;
を含む抗体;
アミノ酸配列GFSLSSY(配列番号2)を含むVHCDR1、
アミノ酸配列DIKTGDR(配列番号3)を含むVHCDR2、及び
アミノ酸配列ARVYVSGNDHYDL(配列番号4)を含むVHCDR3
を含む可変重鎖(VH)ポリペプチド;及び
アミノ酸配列QSISNY(配列番号6)を含むVLCDR1、
アミノ酸配列RAS(配列番号7)を含むVLCDR2、及び
アミノ酸配列QLGYTYSNVENA(配列番号10)を含むVLCDR3
を含む可変軽鎖(VL)ポリペプチド;
を含む抗体;
アミノ酸配列GFSFSSTK(配列番号12)を含むVHCDR1、
アミノ酸配列CIGTDT(配列番号13)を含むVHCDR2、及び
アミノ酸配列ARSSSTGYYNL(配列番号14)を含むVHCDR3
を含む可変重鎖(VH)ポリペプチド;及び
アミノ酸配列QSIRSY(配列番号16)を含むVLCDR1、
アミノ酸配列YAS(配列番号17)を含むVLCDR2、及び
アミノ酸配列HDYYTFTDND(配列番号18)を含むVLCDR3
を含む可変軽鎖(VL)ポリペプチド;
を含む抗体:
アミノ酸配列GFSFSSTK(配列番号12)を含むVHCDR1、
アミノ酸配列CIGVGSRGS(配列番号20)を含むVHCDR2、及び
アミノ酸配列ARSSTTGYYIL(配列番号21)を含むVHCDR3
を含む可変重鎖(VH)ポリペプチド;及び
アミノ酸配列ESIYSY(配列番号23)を含むVLCDR1、
アミノ酸配列KAS(配列番号24)を含むVLCDR2、及び
アミノ酸配列QNYYTFTEND(配列番号25)を含むVLCDR3
を含む可変軽鎖(VL)ポリペプチド;
を含む抗体;および
アミノ酸配列GFSFWR(配列番号27)を含むVHCDR1、
アミノ酸配列CIDGGNTNR(配列番号28)を含むVHCDR2、及び
アミノ酸配列ARVRLGNNDYIDL(配列番号29)を含むVHCDR3
を含む可変重鎖(VH)ポリペプチド;及び
アミノ酸配列QSISNY(配列番号6)を含むVLCDR1、
アミノ酸配列RAS(配列番号7)を含むVLCDR2、及び
アミノ酸配列QQGYNWDLDGA(配列番号31)を含むVLCDR3
を含む可変軽鎖(VL)ポリペプチド;
を含む抗体
からなる群より選択される、前記抗体。 - 前記抗体は:
配列番号1に提示されたアミノ酸配列に対して70%以上の同一性を有するアミノ酸配
列を含む可変重鎖(VH)ポリペプチド;及び
配列番号5に提示されたアミノ酸配列に対して70%以上の同一性を有するアミノ酸配
列を含む可変軽鎖(VL)ポリペプチドを含む、請求項1に記載の抗体。 - 前記抗体は:
配列番号1に提示されたアミノ酸配列に対して70%以上の同一性を有するアミノ酸配
列を含む可変重鎖(VH)ポリペプチド;及び
配列番号9に提示されたアミノ酸配列に対して70%以上の同一性を有するアミノ酸配
列を含む可変軽鎖(VL)ポリペプチド;
を含む、請求項1に記載の抗体。 - 前記抗体は:
配列番号11に提示されたアミノ酸配列に対して70%以上の同一性を有するアミノ酸
配列を含む可変重鎖(VH)ポリペプチド;及び
配列番号15に提示されたアミノ酸配列に対して70%以上の同一性を有するアミノ酸
配列を含む可変軽鎖(VL)ポリペプチド;
を含む、請求項1に記載の抗体。 - 前記抗体は:
配列番号19に提示されたアミノ酸配列に対して70%以上の同一性を有するアミノ酸
配列を含む可変重鎖(VH)ポリペプチド;及び
配列番号22に提示されたアミノ酸配列に対して70%以上の同一性を有するアミノ酸
配列を含む可変軽鎖(VL)ポリペプチド;
を含む、請求項1に記載の抗体。 - 前記抗体は:
配列番号26に提示されたアミノ酸配列に対して70%以上の同一性を有するアミノ酸
配列を含む可変重鎖(VH)ポリペプチド;及び
配列番号30に提示されたアミノ酸配列に対して70%以上の同一性を有するアミノ酸
配列を含む可変軽鎖(VL)ポリペプチド;
を含む、請求項1に記載の抗体。 - 前記抗体はモノクローナル抗体である、請求項1に記載の抗体。
- 前記抗体はウサギモノクローナル抗体である、請求項7に記載の抗体。
- 前記抗体は:IgG、Fv、単鎖抗体、scFv、Fab、F(ab’)2、及びFa
b’から構成された群から選択される、請求項1に記載の抗体。 - 前記抗体がIgGである、請求項9に記載の抗体。
- 前記抗体がIgG1である、請求項10に記載の抗体。
- 前記抗体がFabである、請求項9に記載の抗体。
- 前記抗体が単鎖抗体である、請求項9に記載の抗体。
- 前記抗体がscFvである、請求項9に記載の抗体。
- 前記抗体が対称性ジメチルアルギニンの代謝産物にさらに特異的に結合する、請求項1
に記載の抗体。 - 前記代謝産物は対称性Nα-アセチル-ジメチルアルギニン(Ac-SDMA)である
、請求項15に記載の抗体。 - 請求項1に記載の抗体と、賦形剤とを含む組成物。
- 前記組成物が液体培地に存在する、請求項17に記載の組成物。
- 前記組成物は凍結乾燥された形態で存在する、請求項17に記載の組成物。
- 試料内で少なくとも1個の対称性ジメチル化アルギニン分析物の量を測定するためのキ
ットであって:
請求項1に記載の抗体;及び
試料内で少なくとも1個の対称性ジメチル化アルギニン分析物の量を決定するために前
記抗体を用いるための指針;
を含むキット。 - 化学式1の化合物に特異的に結合する抗体の、可変重鎖(VH)ポリペプチド、可変軽
鎖(VL)ポリペプチド、または両方を暗号化する、核酸であって、化学式1の化合物は
、以下:
式中:
R1は-Y-Z;
Yは連結基;そして、
Zは水素、OH、SH、S-アシル、O-アルキル、ハロゲン、NH2、エポキシ、マ
レイミジル、ハロアセトアミド、カルボキシル、活性化されたカルボキシル、免疫原性担
体、タンパク質、標識及び固体支持体から構成された群から選択される
で表され、
抗体は:
アミノ酸配列GFSLSSY(配列番号2)を含むVHCDR1
アミノ酸配列DIKTGDR(配列番号3)を含むVHCDR2、及び
アミノ酸配列ARVYVSGNDHYDL(配列番号4)を含むVHCDR3
を含む可変重鎖(VH)ポリペプチド;及び
アミノ酸配列QSISNY(配列番号6)を含むVLCDR1、
アミノ酸配列RAS(配列番号7)を含むVLCDR2、及び
アミノ酸配列QLGYTYSNVENA(配列番号8)を含むVLCDR3
を含む可変軽鎖(VL)ポリペプチド;
を含む抗体;
アミノ酸配列GFSLSSY(配列番号2)を含むVHCDR1、
アミノ酸配列DIKTGDR(配列番号3)を含むVHCDR2、及び
アミノ酸配列ARVYVSGNDHYDL(配列番号4)を含むVHCDR3
を含む可変重鎖(VH)ポリペプチド;及び
アミノ酸配列QSISNY(配列番号6)を含むVLCDR1、
アミノ酸配列RAS(配列番号7)を含むVLCDR2、及び
アミノ酸配列QLGYTYSNVENA(配列番号10)を含むVLCDR3
を含む可変軽鎖(VL)ポリペプチド;
を含む抗体;
アミノ酸配列GFSFSSTK(配列番号12)を含むVHCDR1、
アミノ酸配列CIGTDT(配列番号13)を含むVHCDR2、及び
アミノ酸配列ARSSSTGYYNL(配列番号14)を含むVHCDR3
を含む可変重鎖(VH)ポリペプチド;及び
アミノ酸配列QSIRSY(配列番号16)を含むVLCDR1、
アミノ酸配列YAS(配列番号17)を含むVLCDR2、及び
アミノ酸配列HDYYTFTDND(配列番号18)を含むVLCDR3
を含む可変軽鎖(VL)ポリペプチド;
を含む抗体:
アミノ酸配列GFSFSSTK(配列番号12)を含むVHCDR1、
アミノ酸配列CIGVGSRGS(配列番号20)を含むVHCDR2、及び
アミノ酸配列ARSSTTGYYIL(配列番号21)を含むVHCDR3
を含む可変重鎖(VH)ポリペプチド;及び
アミノ酸配列ESIYSY(配列番号23)を含むVLCDR1、
アミノ酸配列KAS(配列番号24)を含むVLCDR2、及び
アミノ酸配列QNYYTFTEND(配列番号25)を含むVLCDR3
を含む可変軽鎖(VL)ポリペプチド;
を含む抗体;および
アミノ酸配列GFSFWR(配列番号27)を含むVHCDR1、
アミノ酸配列CIDGGNTNR(配列番号28)を含むVHCDR2、及び
アミノ酸配列ARVRLGNNDYIDL(配列番号29)を含むVHCDR3
を含む可変重鎖(VH)ポリペプチド;及び
アミノ酸配列QSISNY(配列番号6)を含むVLCDR1、
アミノ酸配列RAS(配列番号7)を含むVLCDR2、及び
アミノ酸配列QQGYNWDLDGA(配列番号31)を含むVLCDR3
を含む可変軽鎖(VL)ポリペプチド;
を含む抗体
からなる群より選択される、前記核酸。 - 請求項21に記載の核酸を含む、発現ベクター。
- 請求項21に記載の核酸を含む、細胞。
- 請求項22に記載の発現ベクターを含む、細胞。
- 請求項21に記載の抗体の可変重鎖(VH)ポリペプチドを暗号化する第1核酸;及び
前記抗体の可変軽鎖(VL)ポリペプチドを暗号化する第2核酸;
を含む細胞。 - 抗体を作製する方法であって、
細胞が前記抗体を発現するのに適した条件下で、請求項24に記載の細胞を培養する段
階を含み、前記抗体が生産される方法。 - 抗体を作製する方法であって、
細胞が前記抗体を発現するのに適した条件下で、請求項25に記載の細胞を培養する段
階を含み、前記抗体が生産される方法。 - 前記抗体は:
配列番号1に提示されたアミノ酸配列に対して70%以上の同一性を有するアミノ酸配
列を含む可変重鎖(VH)ポリペプチド;及び
配列番号5に提示されたアミノ酸配列に対して70%以上の同一性を有するアミノ酸配
列を含む可変軽鎖(VL)ポリペプチドを含む、請求項21に記載の核酸。 - 前記抗体は:
配列番号1に提示されたアミノ酸配列に対して70%以上の同一性を有するアミノ酸配
列を含む可変重鎖(VH)ポリペプチド;及び
配列番号9に提示されたアミノ酸配列に対して70%以上の同一性を有するアミノ酸配
列を含む可変軽鎖(VL)ポリペプチド;
を含む、請求項21に記載の核酸。 - 前記抗体は:
配列番号11に提示されたアミノ酸配列に対して70%以上の同一性を有するアミノ酸
配列を含む可変重鎖(VH)ポリペプチド;及び
配列番号15に提示されたアミノ酸配列に対して70%以上の同一性を有するアミノ酸
配列を含む可変軽鎖(VL)ポリペプチド;
を含む、請求項21に記載の核酸。 - 前記抗体は:
配列番号19に提示されたアミノ酸配列に対して70%以上の同一性を有するアミノ酸
配列を含む可変重鎖(VH)ポリペプチド;及び
配列番号22に提示されたアミノ酸配列に対して70%以上の同一性を有するアミノ酸
配列を含む可変軽鎖(VL)ポリペプチド;
を含む、請求項21に記載の核酸。 - 前記抗体は:
配列番号26に提示されたアミノ酸配列に対して70%以上の同一性を有するアミノ酸
配列を含む可変重鎖(VH)ポリペプチド;及び
配列番号30に提示されたアミノ酸配列に対して70%以上の同一性を有するアミノ酸
配列を含む可変軽鎖(VL)ポリペプチド;
を含む、請求項21に記載の核酸。 - 前記抗体はモノクローナル抗体である、請求項21に記載の核酸。
- 前記抗体はウサギモノクローナル抗体である、請求項28に記載の核酸。
- 前記抗体は:IgG、Fv、単鎖抗体、scFv、Fab、F(ab’)2、及びFa
b’から構成された群から選択される、請求項21に記載の核酸。 - 前記抗体がIgGである、請求項35に記載の核酸。
- 前記抗体がIgG1である、請求項36に記載の核酸。
- 前記抗体がFabである、請求項35に記載の核酸。
- 前記抗体が単鎖抗体である、請求項35に記載の核酸。
- 前記抗体がscFvである、請求項35に記載の核酸。
- 前記抗体が対称性ジメチルアルギニンの代謝産物にさらに特異的に結合する、請求項2
1に記載の核酸。 - 前記代謝産物は対称性Nα-アセチル-ジメチルアルギニン(Ac-SDMA)である
、請求項41に記載の核酸。 - 培地内で少なくとも1個の対称性ジメチル化アルギニン分析物の量を測定する方法であ
って:
培地内で
少なくとも1個の対称性ジメチル化アルギニン分析物を含有する疑いがある試料、及び
以下の化学式1の化合物に特異的に結合する抗体を結合する段階;及び
対称性ジメチル化アルギニン分析物及び前記抗体を含む複合体の存在または不在を決定
する段階;
を含み、
前記複合体の存在は試料内で対称性ジメチル化アルギニン分析物の存在を示す、方法。
(ここで、化学式1の化合物は、以下:
[式中:
R1は-Y-Z;
Yは連結基;そして、
Zは標識酵素である。]
で表され、
抗体は:
アミノ酸配列GFSLSSY(配列番号2)を含むVHCDR1
アミノ酸配列DIKTGDR(配列番号3)を含むVHCDR2、及び
アミノ酸配列ARVYVSGNDHYDL(配列番号4)を含むVHCDR3
を含む可変重鎖(VH)ポリペプチド;及び
アミノ酸配列QSISNY(配列番号6)を含むVLCDR1、
アミノ酸配列RAS(配列番号7)を含むVLCDR2、及び
アミノ酸配列QLGYTYSNVENA(配列番号8)を含むVLCDR3
を含む可変軽鎖(VL)ポリペプチド;
を含む抗体;
アミノ酸配列GFSLSSY(配列番号2)を含むVHCDR1、
アミノ酸配列DIKTGDR(配列番号3)を含むVHCDR2、及び
アミノ酸配列ARVYVSGNDHYDL(配列番号4)を含むVHCDR3
を含む可変重鎖(VH)ポリペプチド;及び
アミノ酸配列QSISNY(配列番号6)を含むVLCDR1、
アミノ酸配列RAS(配列番号7)を含むVLCDR2、及び
アミノ酸配列QLGYTYSNVENA(配列番号10)を含むVLCDR3
を含む可変軽鎖(VL)ポリペプチド;
を含む抗体;
アミノ酸配列GFSFSSTK(配列番号12)を含むVHCDR1、
アミノ酸配列CIGTDT(配列番号13)を含むVHCDR2、及び
アミノ酸配列ARSSSTGYYNL(配列番号14)を含むVHCDR3
を含む可変重鎖(VH)ポリペプチド;及び
アミノ酸配列QSIRSY(配列番号16)を含むVLCDR1、
アミノ酸配列YAS(配列番号17)を含むVLCDR2、及び
アミノ酸配列HDYYTFTDND(配列番号18)を含むVLCDR3
を含む可変軽鎖(VL)ポリペプチド;
を含む抗体:
アミノ酸配列GFSFSSTK(配列番号12)を含むVHCDR1、
アミノ酸配列CIGVGSRGS(配列番号20)を含むVHCDR2、及び
アミノ酸配列ARSSTTGYYIL(配列番号21)を含むVHCDR3
を含む可変重鎖(VH)ポリペプチド;及び
アミノ酸配列ESIYSY(配列番号23)を含むVLCDR1、
アミノ酸配列KAS(配列番号24)を含むVLCDR2、及び
アミノ酸配列QNYYTFTEND(配列番号25)を含むVLCDR3
を含む可変軽鎖(VL)ポリペプチド;
を含む抗体;および
アミノ酸配列GFSFWR(配列番号27)を含むVHCDR1、
アミノ酸配列CIDGGNTNR(配列番号28)を含むVHCDR2、及び
アミノ酸配列ARVRLGNNDYIDL(配列番号29)を含むVHCDR3
を含む可変重鎖(VH)ポリペプチド;及び
アミノ酸配列QSISNY(配列番号6)を含むVLCDR1、
アミノ酸配列RAS(配列番号7)を含むVLCDR2、及び
アミノ酸配列QQGYNWDLDGA(配列番号31)を含むVLCDR3
を含む可変軽鎖(VL)ポリペプチド;
を含む抗体
からなる群より選択される抗体である。) - 前記培地が化学式1の化合物をさらに含む、請求項43に記載の方法。
- 前記標識酵素がグルコース-6-ホスフェート脱水素酵素(G6PDH)である、請求
項43に記載の方法。 - 前記決定する段階が前記化合物の酵素反応生成物の存在を検出することを含む、請求項
43に記載の方法。 - 連結基が1ないし15個の炭素原子及び/または0ないし6個のヘテロ原子を含む、請
求項43に記載の方法。 - 連結基は-(CH2)nC(O)-、-C(O)(CH2)n-、-C(O)(CH2
)nNHC(O)-、-C(O)(CH2)nNHC(O)(CH2)n-、-(CH2
)nSCH2C(O)-、-(CH2)nC(O)NH(CH2)n-、-(CH2)n
NHC(O)-、-(CH2)nNHc(O)(CH2)n-、-NH(CH2)nC(
O)-、-(CH2)n-、-(CH2)n(ヘテロシクリル)S(CH2)nC(O)
-から構成された群及びこれらの酸塩から選択され、nは1ないし10の整数である、請
求項43に記載の方法。 - 連結基が窒素原子に結合したアシルまたは置換されたアシル基を含む、請求項43に記
載の方法。 - 連結基が窒素原子に結合したアルキルまたは置換されたアルキル基を含む、請求項43
に記載の方法。 - 前記抗体は:
アミノ酸配列GFSLSSY(配列番号2)を含むVHCDR1
アミノ酸配列DIKTGDR(配列番号3)を含むVHCDR2、及び
アミノ酸配列ARVYVSGNDHYDL(配列番号4)を含むVHCDR3
を含む可変重鎖(VH)ポリペプチド;及び
アミノ酸配列QSISNY(配列番号6)を含むVLCDR1、
アミノ酸配列RAS(配列番号7)を含むVLCDR2、及び
アミノ酸配列QLGYTYSNVENA(配列番号8)を含むVLCDR3
を含む可変軽鎖(VL)ポリペプチド;
を含む抗体と前記化合物に対する結合に対して競合する、請求項43に記載の方法。 - 前記抗体は:
アミノ酸配列GFSLSSY(配列番号2)を含むVHCDR1
アミノ酸配列DIKTGDR(配列番号3)を含むVHCDR2、及び
アミノ酸配列ARVYVSGNDHYDL(配列番号4)を含むVHCDR3
を含む可変重鎖(VH)ポリペプチド;及び
アミノ酸配列QSISNY(配列番号6)を含むVLCDR1、
アミノ酸配列RAS(配列番号7)を含むVLCDR2、及び
アミノ酸配列QLGYTYTNVENA(配列番号10)を含むVLCDR3
を含む可変軽鎖(VL)ポリペプチド;
を含む抗体と前記化合物に対する結合に対して競合する、請求項43に記載の方法。 - 前記抗体は:
アミノ酸配列GFSFSSTK(配列番号12)を含むVHCDR1、
アミノ酸配列CIGTDT(配列番号13)を含むVHCDR2、及び
アミノ酸配列ARSSSTGYYNL(配列番号14)を含むVHCDR3
を含む可変重鎖(VH)ポリペプチド;及び
アミノ酸配列QSIRSY(配列番号16)を含むVLCDR1、
アミノ酸配列YAS(配列番号17)を含むVLCDR2、及び
アミノ酸配列HDYYTFTDND(配列番号18)を含むVLCDR3
を含む可変軽鎖(VL)ポリペプチド;
を含む抗体と前記化合物に対する結合に対して競合する、請求項43に記載の方法。 - 前記抗体は:
アミノ酸配列GFSFSSTK(配列番号12)を含むVHCDR1、
アミノ酸配列CIGVGSRGS(配列番号20)を含むVHCDR2、及び
アミノ酸配列ARSSTTGYYIL(配列番号21)を含むVHCDR3
を含む可変重鎖(VH)ポリペプチド;及び
アミノ酸配列ESIYSY(配列番号23)を含むVLCDR1、
アミノ酸配列KAS(配列番号24)を含むVLCDR2、及び
アミノ酸配列QNYYTFTEND(配列番号25)を含むVLCDR3
を含む可変軽鎖(VL)ポリペプチド;
を含む抗体と前記化合物に対する結合に対して競合する、請求項43に記載の方法。 - 前記抗体は:
アミノ酸配列GFSFWR(配列番号27)を含むVHCDR1、
アミノ酸配列CIDGGNTNR(配列番号28)を含むVHCDR2、及び
アミノ酸配列ARVRLGNNDYIDL(配列番号29)を含むVHCDR3
を含む可変重鎖(VH)ポリペプチド;及び
アミノ酸配列QSISNY(配列番号6)を含むVLCDR1、
アミノ酸配列RAS(配列番号7)を含むVLCDR2、及び
アミノ酸配列QQGYNWDLDGA(配列番号31)を含むVLCDR3
を含む可変軽鎖(VL)ポリペプチド;
を含む抗体と前記化合物に対する結合に対して競合する、請求項43に記載の方法。 - 前記抗体は:
配列番号1に提示されたアミノ酸配列に対して70%以上の同一性を有するアミノ酸配
列を含む可変重鎖(VH)ポリペプチド;及び
配列番号5に提示されたアミノ酸配列に対して70%以上の同一性を有するアミノ酸配
列を含む可変軽鎖(VL)ポリペプチドを含む、請求項51に記載の方法。 - 前記抗体は:
配列番号1に提示されたアミノ酸配列に対して70%以上の同一性を有するアミノ酸配
列を含む可変重鎖(VH)ポリペプチド;及び
配列番号9に提示されたアミノ酸配列に対して70%以上の同一性を有するアミノ酸配
列を含む可変軽鎖(VL)ポリペプチド;
を含む、請求項52に記載の方法。 - 前記抗体は:
配列番号11に提示されたアミノ酸配列に対して70%以上の同一性を有するアミノ酸
配列を含む可変重鎖(VH)ポリペプチド;及び
配列番号15に提示されたアミノ酸配列に対して70%以上の同一性を有するアミノ酸
配列を含む可変軽鎖(VL)ポリペプチド;
を含む、請求項53に記載の方法。 - 前記抗体は:
配列番号19に提示されたアミノ酸配列に対して70%以上の同一性を有するアミノ酸
配列を含む可変重鎖(VH)ポリペプチド;及び
配列番号22に提示されたアミノ酸配列に対して70%以上の同一性を有するアミノ酸
配列を含む可変軽鎖(VL)ポリペプチド;
を含む、請求項54に記載の方法。 - 前記抗体は:
配列番号26に提示されたアミノ酸配列に対して70%以上の同一性を有するアミノ酸
配列を含む可変重鎖(VH)ポリペプチド;及び
配列番号30に提示されたアミノ酸配列に対して70%以上の同一性を有するアミノ酸
配列を含む可変軽鎖(VL)ポリペプチド;
を含む、請求項55に記載の方法。 - 前記抗体はモノクローナル抗体である、請求項43に記載の方法。
- 前記抗体はウサギモノクローナル抗体である、請求項61に記載の方法。
- 前記抗体は:IgG、Fv、単鎖抗体、scFv、Fab、F(ab’)2、及びFa
b’から構成された群から選択される、請求項43に記載の方法。 - 前記抗体がIgGである、請求項43に記載の方法。
- 前記抗体がIgG1である、請求項64に記載の方法。
- 前記抗体がFabである、請求項43に記載の方法。
- 前記抗体が単鎖抗体である、請求項43に記載の方法。
- 前記抗体がscFvである、請求項43に記載の方法。
- 前記抗体が対称性ジメチルアルギニンの代謝産物にさらに特異的に結合する、請求項4
3に記載の方法。 - 前記代謝産物は対称性Nα-アセチル-ジメチルアルギニン(Ac-SDMA)である
、請求項69に記載の方法。
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US5122284A (en) | 1990-06-04 | 1992-06-16 | Abaxis, Inc. | Apparatus and method for optically analyzing biological fluids |
US5061381A (en) | 1990-06-04 | 1991-10-29 | Abaxis, Inc. | Apparatus and method for separating cells from biological fluids |
MX9100717A (es) * | 1990-08-24 | 1992-04-01 | Syntex Inc | Antagonistas de la bradiquinina |
US5413732A (en) | 1991-08-19 | 1995-05-09 | Abaxis, Inc. | Reagent compositions for analytical testing |
DE4211351A1 (de) | 1992-04-04 | 1993-10-07 | Behringwerke Ag | Verfahren zur Analyse partikelverstärkter Agglutinationsreaktionen auf Zentrifugalanalysatoren durch Bestimmung der Trübungsaufhellung |
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US6235531B1 (en) | 1993-09-01 | 2001-05-22 | Abaxis, Inc. | Modified siphons for improved metering precision |
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CA2244326C (en) | 1997-08-11 | 2006-03-28 | Shinichi Eda | Microparticle enhanced light scattering agglutination assay and microparticle reagents therefor |
IT1301992B1 (it) * | 1998-08-04 | 2000-07-20 | Menarini Ricerche Spa | Peptidi ciclici ad attivita' antagonista specifica per il recettoreb2 della bradichinina e formulazioni che li contengono. |
US6514770B1 (en) | 1999-07-30 | 2003-02-04 | Mitsubishi Chemical Corporation | Immunoassay |
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WO2006078813A2 (en) * | 2005-01-21 | 2006-07-27 | Biosite Incorporated | Arginine analogs, and methods for their synthesis and use |
ES2828097T3 (es) * | 2008-08-07 | 2021-05-25 | Idexx Lab Inc | Métodos para detectar dimetilarginina simétrica |
WO2015035155A1 (en) * | 2013-09-05 | 2015-03-12 | Idexx Laboratories, Inc. | Methods for detecting renal disease |
CA2977062A1 (en) | 2015-02-20 | 2016-08-25 | Idexx Laboratories, Inc. | Homogenous immunoassay with compensation for background signal |
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EP3289355A4 (en) * | 2015-04-30 | 2019-02-13 | IDEXX Laboratories, Inc. | METHODS OF DETECTING RENAL DISEASE |
TWI831753B (zh) * | 2017-10-19 | 2024-02-11 | 美商英代斯實驗公司 | 對稱性二甲基精胺酸之檢測 |
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