JP7349501B2 - 粘膜下注入材キットおよび粘膜下注入用ゲル - Google Patents

Description

本発明は、水溶性の第一の化合物と、架橋剤である第二の化合物とを含む、粘膜下注入材キットに関する。本発明はさらに、水溶性の第一の化合物が架橋剤により架橋されてなる粘膜下注入用ゲルに関する。

内視鏡技術の発展に伴い、内視鏡的に病変部を切除する内視鏡的粘膜下層剥離術（ＥＳＤ）や内視鏡的粘膜切除術（ＥＭＲ）の実施数が増加している。安全な切除のため、関心病変部の粘膜下に液体を注入して、病変部の組織を隆起させる場合がある。既に市販されている粘膜下注入材としては、生理食塩水や、ヒアルロン酸ナトリウム又はアルギン酸ナトリウムの水溶液（非特許文献１及び２）などが知られている。

粘膜下注入材としてはさらに、特許文献１には、０．２質量％～１．２質量％のコラーゲン、水、緩衝剤及び２００ｍＭ～４２０ｍＭの塩化ナトリウムを含有する、粘膜下局注用ゾルが記載されている。特許文献１には、上記の粘膜下局注用ゾルにゲニピンをさらに含めてもよいことが記載されている。

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特開２０１８－８０１３６号公報

生理食塩水は粘性が低いため、粘膜下注入材として生理食塩水を使用することには、注射針の穿刺部や、切除開始後に生じた隙間等から漏れ出すという欠点がある。
粘度を増加させる目的でヒアルロン酸ナトリウム水溶液又はアルギン酸ナトリウム水溶液を粘膜下注入材として使用する場合もあるが（非特許文献１及び２）、隆起の維持には限界があることが報告されている（日本消化器内視鏡学会雑誌 Vol. 56 （6）, 2028-2036 Jun. 2014）。ヒアルロン酸ナトリウム水溶性又はアルギン酸ナトリウム水溶液は、高粘度であっても流動性を有する液体であることから、切除開始による隙間の拡大が生じた場合、原理的に流出が避けられない。また、切除後に残留しないため、人工潰瘍面を被覆できないという問題がある。

また、粘膜切除中に不必要に血管を傷つけないためには、粘膜下注入材または注入先で形成される物質は透明であることが望ましい。注入先で温度依存的にゲル化ないしは不溶化が進行するコラーゲン等は、その原理上、白濁が避けられない（KI Lee, JW Jang, KW Lee - Tendons, 2018）。この場合、血管に対する視認性が著しく低下し、安全な施術を妨げてしまう。特許文献１に記載されているコラーゲン材料には、白濁するという問題がある。

また、粘膜の切除が完了すると、関心領域には人工潰瘍面が生じる。人工潰瘍面は組織修復が生じるまでの間、外気から守られているべきであり、粘膜下注入材が粘膜切除後に潰瘍面に滞留することが望まれる。その目的には、術中／術後の体液による希釈および摂取した食物等との接触で剥離しないことが重要である。設置先での滞留性を高めるためには、生体組織との間に架橋を形成させることがある。例えば、比較的毒性の低いとされるゲニピンなどが挙げられるが（特許文献１）、ゲニピンは、ある一定以上の濃度においては細胞毒性という問題がある（G. Fessel, J. Cadby, S. Wunderli, R. Van Weeren, J. G. Snedeker, Acta Biomater. 2014, DOI 10.1016/j.actbio.2013.12.048）。

さらに、特許文献１に記載のコラーゲンは、残留したとしても組織修復における細胞増殖に伴い収縮を起こすため、潰瘍面の継続的な被覆に至らないことが容易に推測できる（Ulrika Zagai et al., Respiratory Research 2003, 4:13 ）。一般にコラーゲンは中性以下のpHにおいては徐々に溶離するため、常に酸性環境にある胃や、酸性の食物に触れる他の消化管では、特許文献１に記載のコラーゲン材料は粘膜被覆の観点において好ましくない。コラーゲンゲルのように元の形状を維持しようとする復元力が弱い材料では、粘膜切除開始後に充填部からゲルが脱離する可能性があり、滞留性の観点から不適である。

上記の通り、粘膜下注入材としては、注入場所における接着性を示しながらも細胞毒性を示さない材料が求められている。本発明が解決しようとする課題は、注入された部位における滞留性に優れ、かつ透明性に優れた、粘膜下注入材キットおよび粘膜下注入用ゲルを提供することである。

本発明者らは上記課題を解決するために鋭意検討した結果、アミノ基を２つ以上有し、３７℃かつ中性条件下において水溶性である第一の化合物と、アミノ基と共有結合できる官能基と親水性連結基とを含む鎖を少なくとも２本以上有する第二の化合物とを架橋することにより形成されるゲルを粘膜下に注入した場合に、粘膜隆起高の維持率が高く、かつ水洗耐性が優れていることを見出した。本発明はこれらの知見に基づいて完成したものである。

即ち、本発明によれば、以下の発明が提供される。
＜１＞ アミノ基を２つ以上有し、３７℃かつ中性条件下において水溶性である第一の化合物と、アミノ基と共有結合できる官能基と親水性連結基とを含む鎖を少なくとも２本以上有する第二の化合物とを含み、第一の化合物及び第二の化合物の少なくとも一方が、重量平均分子量３０００以上の高分子である、粘膜下注入材キット。
＜２＞ 第一の化合物が、リコンビナントペプチドである、＜１＞に記載の粘膜下注入材キット。
＜３＞ 第一の化合物が、リコンビナントゼラチンである、＜１＞又は＜２＞に記載の粘膜下注入材キット。
＜４＞ リコンビナントゼラチンが、下記式で示される、＜３＞に記載の粘膜下注入材キット。
Ａ－［（Ｇｌｙ－Ｘ－Ｙ）_ｎ］_ｍ－Ｂ
式中、Ａは任意のアミノ酸またはアミノ酸配列を示し、Ｂは任意のアミノ酸またはアミノ酸配列を示し、ｎ個のＸはそれぞれ独立にアミノ酸の何れかを示し、ｎ個のＹはそれぞれ独立にアミノ酸の何れかを示し、ｎは３～１００の整数を示し、ｍは２～１０の整数を示す。なお、ｎ個のＧｌｙ－Ｘ－Ｙはそれぞれ同一でも異なっていてもよい。
＜５＞ リコンビナントゼラチンが、
配列番号１に記載のアミノ酸配列からなるペプチド；
配列番号１に記載のアミノ酸配列において１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなり、かつ生体親和性を有するペプチド；または
配列番号１に記載のアミノ酸配列と８０％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつ生体親和性を有するペプチド；
の何れかである、＜３＞に記載の粘膜下注入材キット。
＜６＞ アミノ基と共有結合できる官能基と親水性連結基とを含む鎖が、下記式１で示される、＜１＞から＜５＞の何れか一に記載の粘膜下注入材キット。
Ｚ－（Ａ^１）_ｗ－（Ｂ^１）_ｘ－（Ｃ^１）_ｙ－ 式１
式中、Ｚはアミノ基と共有結合できる官能基であり、Ａ^１は疎水性の連結基であり、Ｂ^１は親水性の連結基であり、Ｃ^１は疎水性の連結基であり、ｗは１以上の整数であり、ｘは１以上の整数であり、ｙは０以上の整数である。
＜７＞ アミノ基と共有結合できる官能基が、スクシンイミジル基である、＜１＞から＜６＞の何れか一に記載の粘膜下注入材キット。
＜８＞ 親水性連結基が、エチレンオキシド単位を含む、＜１＞から＜７＞の何れか一に記載の粘膜下注入材キット。
＜９＞ 粘膜下注入材キットが内視鏡的切除術用である、＜１＞から＜８＞の何れか一に記載の粘膜注入材キット。
＜１０＞ 第１の化合物を含む溶液と第２の化合物を含む溶液を混合後に２２℃以下で２０分以上液体状態で保持できることを特徴とする＜１＞～＜９＞の何れか一に記載の粘膜下注入材キット。

＜１１＞ アミノ基を２つ以上有し、３７℃かつ中性条件下において水溶性である第一の化合物が、アミノ基と共有結合できる官能基と親水性連結基とを含む鎖を少なくとも２本以上有する第二の化合物により、架橋されてなるゲルであって、第一の化合物及び第二の化合物の少なくとも一方が、重量平均分子量３０００以上の高分子である、粘膜下注入用ゲル。
＜１２＞ 第一の化合物が、リコンビナントペプチドである、＜１１＞に記載の粘膜下注入用ゲル。
＜１３＞ 第一の化合物が、リコンビナントゼラチンである、＜１１＞又は＜１２＞に記載の粘膜下注入用ゲル。
＜１４＞ リコンビナントゼラチンが、下記式で示される、＜１３＞に記載の粘膜下注入用ゲル。
Ａ－［（Ｇｌｙ－Ｘ－Ｙ）_ｎ］_ｍ－Ｂ
式中、Ａは任意のアミノ酸またはアミノ酸配列を示し、Ｂは任意のアミノ酸またはアミノ酸配列を示し、ｎ個のＸはそれぞれ独立にアミノ酸の何れかを示し、ｎ個のＹはそれぞれ独立にアミノ酸の何れかを示し、ｎは３～１００の整数を示し、ｍは２～１０の整数を示す。なお、ｎ個のＧｌｙ－Ｘ－Ｙはそれぞれ同一でも異なっていてもよい。
＜１５＞ リコンビナントゼラチンが、
配列番号１に記載のアミノ酸配列からなるペプチド；
配列番号１に記載のアミノ酸配列において１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなり、かつ生体親和性を有するペプチド；または
配列番号１に記載のアミノ酸配列と８０％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつ生体親和性を有するペプチド；
の何れかである、＜１３＞に記載の粘膜下注入用ゲル。
＜１６＞ アミノ基と共有結合できる官能基と親水性連結基とを含む鎖が、下記式１で示される、＜１１＞から＜１５＞の何れか一に記載の粘膜下注入用ゲル。
Ｚ－（Ａ^１）_ｗ－（Ｂ^１）_ｘ－（Ｃ^１）_ｙ－ 式１
式中、Ｚはアミノ基と共有結合できる官能基であり、Ａ^１は疎水性の連結基であり、Ｂ^１は親水性の連結基であり、Ｃ^１は疎水性の連結基であり、ｗは１以上の整数であり、ｘは１以上の整数であり、ｙは０以上の整数である。
＜１７＞ アミノ基と共有結合できる官能基が、スクシンイミジル基である、＜１１＞から＜１６＞の何れか一に記載の粘膜下注入用ゲル。
＜１８＞ 親水性連結基が、エチレンオキシド単位を含む、＜１１＞から＜１７＞の何れか一に記載の粘膜下注入用ゲル。
＜１９＞ ゲル中における第二の化合物の濃度が、０．７５質量％～３．０質量％である、＜１１＞から＜１８＞の何れか一に記載の粘膜下注入用ゲル。
＜２０＞ 生体組織と接着性を有する、＜１１＞から＜１９＞の何れか一に記載の粘膜下注入用ゲル。
＜２１＞ 粘膜下注入材キットが内視鏡的切除用である、＜１１＞から＜２０＞の何れか一に記載の粘膜下注入用ゲル。
＜２２＞ ＜１＞から＜２１＞の何れか一に記載の粘膜下注入用キットまたは粘膜下注入用ゲルを注入することを含む方法。
＜２３＞ 切除部を切除することを含む、＜２２＞を含む方法。
＜２４＞ 粘膜下に注入するための＜１＞から＜１０＞の何れか一に記載の粘膜下注入材キットの使用。
＜２５＞ 切除前に切除部を隆起させるための＜１＞から＜１０＞の何れか一に記載の粘膜下注入材キットの使用。
＜２６＞ 粘膜下に注入するための＜１１＞から＜２１＞の何れか一に記載の粘膜下注入用ゲルの使用。
＜２７＞ 切除前に切除部を隆起させるための＜１１＞から＜２１＞の何れか一に記載の粘膜下注入用ゲルの使用。
＜２８＞ アミノ基を２つ以上有し、３７℃かつ中性条件下において水溶性である第一の化合物と、アミノ基と共有結合できる官能基と親水性連結基とを含む鎖を少なくとも２本以上有する第二の化合物を混合する工程を含む、粘膜下注入用ゲルの製造方法。

本発明の粘膜下注入材キットおよび粘膜下注入用ゲルは、注入された部位における滞留性に優れ、かつ透明性に優れている。

図１は、各種物質の電気泳動パターンを示す。リコンビナントペプチドはＣＢＥ３である。 図２は、粘膜隆起高の測定方法を示す。 図３は、粘膜隆起高維持率の継時変化を示す。 図４は、局注部に切り込みを入れた後の粘膜隆起高維持率を示す。 図５は、粘膜下層に形成された透明なＣＢＥ３ゲルを示す。 図６は、粘膜層切除後の着色されたＣＢＥ３ゲル（水洗前／後）を示す。 図７は、ＣＢＥ３と架橋剤ＰＥＧの混合溶液を１５℃で約２４分保持後に３７℃に昇温するプロファイルで、混合溶液の貯蔵弾性率の測定を行った結果を示す。 図８は、ＣＢＥ３と架橋剤ＰＥＧの混合溶液を得た後、直接３７℃に昇温するプロファイルで、混合溶液の貯蔵弾性率の測定を行った結果を示す。

以下、本発明の実施の形態について詳細に説明する。
［粘膜下注入材キット］
本発明の粘膜下注入材キットは、アミノ基を２つ以上有し、３７℃かつ中性条件下において水溶性である第一の化合物と、アミノ基と共有結合できる官能基と親水性連結基とを含む鎖を少なくとも２本以上有する第二の化合物とを含む。第一の化合物及び第二の化合物の少なくとも一方は、重量平均分子量３０００以上の高分子である。キットは、第一の化合物及び第二の化合物を混合し、注入するためのアプリケーターを含んでいてもよい。アプリケーターは注射筒が好ましく、より好ましくは吐出時の混合を実現するためのスタティックミキサーが接続されたデュアルシリンジである。内視鏡用途には更に内視鏡用注射針を接続することがある。

本発明によれば、容易に注入が可能でありながら注入先で透明な弾性体を形成でき、内視鏡的切除術中に流出することのない粘膜下注入用ゲルを提供できる。また、切除後には人工潰瘍面の被覆が可能な粘膜下注入用ゲルを提供できる。本発明の粘膜下注入用ゲルが、注入先の人工潰瘍面においても接着が維持されることは予期しないことであった。

本発明の粘膜下注入材キットおよび粘膜下注入用ゲルは、粘膜の内視鏡的切除術に用いる粘膜隆起材として利用可能である。本発明の粘膜下注入材キットは、ゲル化前の粘性が低いため、注入が容易である。本発明の粘膜下注入用ゲルは、内視鏡的切除術中に流れ出さず、透明性に優れており、切除後に設置場所に残留し、人工潰瘍面を被覆することができる。また、本発明の粘膜下注入材キットおよび粘膜下注入用ゲルは、細胞毒性が低い。さらに本発明の粘膜下注入材キットおよび粘膜下注入用ゲルは、細胞の活動による収縮を引き起こさず、形状的に安定である。
粘膜下注入材キットおよび粘膜下注入用ゲルは、切除部を隆起させるために、切除部の粘膜下に粘膜下注入材キットおよび粘膜下注入用ゲルを注入することができる。その後、安全に切除部を切除することができる。切除部は病変部であってもよい。切除の際、注入した粘膜下注入材キットおよび粘膜下注入用ゲルを病変部とともに完全に切除してもよいし、注入した粘膜下注入材キットおよび粘膜下注入用ゲルを残した状態で切除してもよい。粘膜下注入用ゲルを残した状態で切除することが人工潰瘍面被覆の点から好ましい。
切除術としては、内視鏡的に病変部を切除する内視鏡的粘膜下層剥離術（ＥＳＤ）や内視鏡的粘膜切除術（ＥＭＲ）であってもよい。
本発明の粘膜下注入材キットおよび粘膜下注入用ゲルは、病変部の切除を要する患者に用いることができる。病変部が腫瘍や非腫瘍性の腫瘤である場合には、病変部の粘膜下に注入した後に腫瘍や非腫瘍性の腫瘤の切除を行うことができる。

本発明の粘膜下注入材キットにおいては、第一の化合物および第二の化合物はそれぞれ、注入可能な形態としてキットに含めることができる。注入可能な形態とは、シリンジ針を通過可能な物質であり、好ましくは流動性のある溶液または懸濁液であり、特に好ましくは均質な水溶液である。注入可能な形態としては、溶液、懸濁液、粉末などが挙げられるが、特に限定されない。粉末の場合には、使用時に液体に溶解または懸濁してから使用することができる。

第一の化合物および第二の化合物の組み合わせは、時間依存的なゲル化能を示す組み合わせでもよい。時間依存的なゲル化能とは、注入された先で即時～６０分の間でゲル化することを意味し、好ましくは１分～１０分でゲル化、より好ましくは３分でゲル化する。
第一の化合物および第二の化合物は、動物の体温でゲル化させることの観点から、２０℃～５０℃でゲル化が進むことが好ましく、３０℃～４０℃でゲル化が進むことが更に好ましく、３５℃～４０℃でゲル化が進むことが最も好ましい。

（第一の化合物）
本発明における第一の化合物は、アミノ基を２つ以上有し、３７℃かつ中性の水に可溶である。
中性条件下とは、ｐＨ７であることを意味する。
水に可溶とは、水に対する溶解度が、１ｇ／１００ｍＬ以上であることを意味する。

本発明においては、第一の化合物及び第二の化合物の少なくとも一方が、重量平均分子量３０００以上の高分子である。
第一の化合物は、重量平均分子量が３０００以上でもよく、５０００以上でもよく、１００００以上でもよく、３００００以上でもよい。第一の化合物の重量平均分子量の上限は特に限定されないが、一般的には、１，０００，０００以下である。

第一の化合物は、２つ以上のアミノ基を有する生体適合性のある化合物が好ましく、リコンビナントペプチド、または２つ以上のアミノ基を有するポリエチレングリコールが好ましいく、リコンビナントペプチドが特に好ましい。
リコンビナントペプチドとしては、生体親和性を有するものが好ましい。生体親和性とは、生体に接触した際に、長期的かつ慢性的な炎症反応などのような顕著な有害反応を惹起しないことを意味する。

アミノ基と共有結合できる官能基（スクシンイミジル基など）が反応できるためには、リコンビナントペプチドとしては、リジンを含むペプチドが好ましく、リジンを５％以上含むペプチドがより好ましい。

リコンビナントペプチドの種類は特に限定されないが、例えば、ゼラチン、コラーゲン、エラスチン、フィブロネクチン、プロネクチン、ラミニン、テネイシン、フィブリン、フィブロイン、エンタクチン、トロンボスポンジン、レトロネクチンが好ましく、より好ましくはゼラチン、コラーゲン、アテロコラーゲンであり、最も好ましくはゼラチンである。リコンビナントゼラチンについては、本明細書中後記する。

（リコンビナントゼラチン）
リコンビナントペプチドとしては、リコンビナントゼラチンが好ましい。
リコンビナントゼラチンとは、遺伝子組み換え技術により作られたゼラチン類似のアミノ酸配列を有するポリペプチドもしくは蛋白様物質を意味する。本発明で用いることができるリコンビナントゼラチンは、コラーゲンに特徴的なＧｌｙ－Ｘ－Ｙで示される配列（ＸおよびＹはそれぞれ独立にアミノ酸の何れかを示す）の繰り返しを有するものが好ましい。ここで、複数個のＧｌｙ－Ｘ－Ｙはそれぞれ同一でも異なっていてもよい。本発明で用いるリコンビナントゼラチンとしては、コラーゲンの部分アミノ酸配列に由来するアミノ酸配列を有するゼラチンを用いることができる。例えばＥＰ１０１４１７６、米国特許第６９９２１７２号、国際公開ＷＯ２００４／８５４７３、国際公開ＷＯ２００８／１０３０４１等に記載のものを用いることができるが、これらに限定されるものではない。本発明で用いるリコンビナントゼラチンとして好ましいものは、以下の態様のゼラチンである。

リコンビナントゼラチンは、天然のゼラチン本来の性能から、生体親和性に優れ、且つ天然由来ではないことで牛海綿状脳症（ＢＳＥ）などの懸念がなく、非感染性に優れている。また、リコンビナントゼラチンは天然ゼラチンと比べて均一であり、配列が決定されているので、強度および分解性においても架橋等によってブレを少なく精密に設計することが可能である。

リコンビナントゼラチンの分子量は、特に限定されないが、好ましくは２０００以上１０００００以下（２ｋＤａ以上１００ｋＤａ以下）であり、より好ましくは２５００以上９５０００以下（２．５ｋＤａ以上９５ｋＤａ以下）であり、さらに好ましくは５０００以上９００００以下（５ｋＤａ以上９０ｋＤａ以下）であり、最も好ましくは１００００以上９００００以下（１０ｋＤａ以上９０ｋＤａ以下）である。
リコンビナントゼラチンの分子量分布は特に限定されないが、分子量分布測定における最大の分子量ピークの面積が、全ての分子量ピークの合計面積の７０％以上であるリコンビナントゼラチンを含むことが好ましく、９０％以上がより好ましく、９５％以上が最も好ましい。リコンビナントゼラチンの分子量分布は、PCT/JP2017/012284に記載の方法で測定することができる。

リコンビナントゼラチンは、コラーゲンに特徴的なＧｌｙ－Ｘ－Ｙで示される配列の繰り返しを有することが好ましい。ここで、複数個のＧｌｙ－Ｘ－Ｙはそれぞれ同一でも異なっていてもよい。Ｇｌｙ－Ｘ－Ｙにおいて、Ｇｌｙはグリシンを表し、ＸおよびＹは、任意のアミノ酸（好ましくは、グリシン以外の任意のアミノ酸）を表す。コラーゲンに特徴的なＧｌｙ－Ｘ－Ｙで示される配列とは、ゼラチン・コラーゲンのアミノ酸組成および配列における、他のタンパク質と比較して非常に特異的な部分構造である。この部分においてはグリシンが全体の約３分の１を占め、アミノ酸配列では３個に１個の繰り返しとなっている。グリシンは最も簡単なアミノ酸であり、分子鎖の配置への束縛も少なく、ゲル化に際してのヘリックス構造の再生に大きく寄与している。ＸおよびＹで表されるアミノ酸にはイミノ酸（プロリン、オキシプロリン）が多く含まれ、全体の１０％～４５％を占めることが好ましい。好ましくは、リコンビナントゼラチンの配列の８０％以上、更に好ましくは９５％以上、最も好ましくは９９％以上のアミノ酸が、Ｇｌｙ－Ｘ－Ｙの繰り返し構造である。

一般的なゼラチンは、極性アミノ酸のうち電荷を持つものと無電荷のものが１：１で存在する。ここで、極性アミノ酸とは具体的にシステイン、アスパラギン酸、グルタミン酸、ヒスチジン、リジン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシンおよびアルギニンを指し、このうち極性無電荷アミノ酸とはシステイン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニンおよびチロシンを指す。本発明で用いるゼラチンにおいては、構成する全アミノ酸のうち、極性アミノ酸の割合が１０～４０％であり、好ましくは２０～３０％である。且つ上記極性アミノ酸中の無電荷アミノ酸の割合が５％以上２０％未満、好ましくは５％以上１０％未満であることが好ましい。さらに、セリン、スレオニン、アスパラギン、チロシンおよびシステインのうちいずれか１種のアミノ酸、好ましくは２種以上のアミノ酸を配列上に含まないことが好ましい。

リコンビナントゼラチンは部分的に加水分解されていてもよい。

好ましくは、本発明で用いるリコンビナントゼラチンは、Ａ－［（Ｇｌｙ－Ｘ－Ｙ）_ｎ］_ｍ－Ｂで示されるものである。ｎ個のＸはそれぞれ独立にアミノ酸の何れかを示し、ｎ個のＹはそれぞれ独立にアミノ酸の何れかを示す。ｍは好ましくは２～１０の整数を示し、より好ましくは３～５の整数を示す。ｎは３～１００の整数が好ましく、１５～７０の整数がさらに好ましく、５０～６５の整数が最も好ましい。Ａは任意のアミノ酸またはアミノ酸配列を示し、Ｂは任意のアミノ酸またはアミノ酸配列を示す。なお、ｎ個のＧｌｙ－Ｘ－Ｙはそれぞれ同一でも異なっていてもよい。ＸとＹは同一でも異なっていてもよい。

より好ましくは、本発明で用いるリコンビナントゼラチンは、 式：Ｇｌｙ－Ａｌａ－Ｐｒｏ－［（Ｇｌｙ－Ｘ－Ｙ）_６３］_３－Ｇｌｙ（式中、６３個のＸはそれぞれ独立にアミノ酸の何れかを示し、６３個のＹはそれぞれ独立にアミノ酸の何れかを示す。なお、６３個のＧｌｙ－Ｘ－Ｙはそれぞれ同一でも異なっていてもよい。）で示されるものである。

繰り返し単位には天然に存在するコラーゲンの配列単位を複数結合することが好ましい。ここで言う天然に存在するコラーゲンとは天然に存在するものであればいずれでも構わないが、好ましくはＩ型、II型、III型、IV型、またはV型コラーゲンである。より好ましくは、I型、II型、またはIII型コラーゲンである。別の形態によると、上記コラーゲンの由来は好ましくは、ヒト、ウシ、ブタ、マウスまたはラットであり、より好ましくはヒトである。

本発明で用いるリコンビナントゼラチンの等電点は、好ましくは５～１０であり、より好ましくは６～１０であり、さらに好ましくは７～９．５である。リコンビナントゼラチンの等電点の測定は、等電点電気泳動法（Ｍａｘｅｙ，Ｃ．Ｒ．（１９７６；Ｐｈｉｔｏｇｒ．Ｇｅｌａｔｉｎ ２，Ｅｄｉｔｏｒ Ｃｏｘ，Ｐ．Ｊ．Ａｃａｄｅｍｉｃ，Ｌｏｎｄｏｎ，Ｅｎｇｌ．参照）に従って、１質量％リコンビナントゼラチン溶液をカチオンおよびアニオン交換樹脂の混晶カラムに通したあとのｐＨを測定することで実施することができる。

好ましくは、リコンビナントゼラチンは脱アミン化されていない。
好ましくは、リコンビナントゼラチンはテロペプタイドを有さない。
好ましくは、リコンビナントゼラチンは、アミノ酸配列をコードする核酸により調製された実質的に純粋なポリペプチドである。

本発明で用いるリコンビナントゼラチンとして特に好ましくは、
（１）配列番号１に記載のアミノ酸配列からなるペプチド；
（２）配列番号１に記載のアミノ酸配列において１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなり、かつ生体親和性を有するペプチド；または
（３）配列番号１に記載のアミノ酸配列と８０％以上（さらに好ましくは９０％以上、特に好ましくは９５％以上、最も好ましくは９８％以上）の配列同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつ生体親和性を有するペプチド；
の何れかである

「１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列」における「１若しくは数個」とは、好ましくは１～２０個、より好ましくは１～１０個、さらに好ましくは１～５個、特に好ましくは１～３個を意味する。

本発明で用いるリコンビナントゼラチンは、当業者に公知の遺伝子組み換え技術によって製造することができ、例えばＥＰ１０１４１７６Ａ２号公報、米国特許第６９９２１７２号公報、国際公開ＷＯ２００４／８５４７３号、国際公開ＷＯ２００８／１０３０４１号等に記載の方法に準じて製造することができる。具体的には、所定のリコンビナントゼラチンのアミノ酸配列をコードする遺伝子を取得し、これを発現ベクターに組み込んで、組み換え発現ベクターを作製し、これを適当な宿主に導入して形質転換体を作製する。得られた形質転換体を適当な培地で培養することにより、リコンビナントゼラチンが産生されるので、培養物から産生されたリコンビナントゼラチンを回収することにより、本発明で用いるゼラチンを調製することができる。

（第二の化合物）
本発明における第二の化合物は、アミノ基と共有結合できる官能基と親水性連結基とを含む鎖を少なくとも２本以上有する化合物である。

本発明で用いる第二の化合物は、アミノ基と共有結合できる官能基と親水性連結基とを含む鎖を少なくとも２本以上有する。アミノ基と共有結合できる官能基と親水性連結基とを含む鎖の数（即ち、枝分かれ構造の数）は、２本以上であれば特に限定されず、２本、３本、４本、５本、６本、７本、８本、９本、１０本またはそれ以上でもよいが、好ましくは２本～８本であり、より好ましくは２本～６本である。４分岐の高分子を用いると均一な三次元網目構造ができることから、最も好ましくは４本である。上記の鎖を２本以上有することにより、第二の化合物は、アミノ基と共有結合できる官能基を２個以上有することになる。

本発明においては、第一の化合物及び第二の化合物の少なくとも一方が、重量平均分子量３０００以上の高分子である。
第二の化合物の重量平均分子量は特に限定されないが、均一な網目構造を形成できることから、好ましくは５０００～４００００であり、より好ましくは５０００～３００００であり、さらに好ましくは１００００～３００００であり、特に好ましくは１５０００～２５０００であり、一例としては２００００を挙げることができる。

アミノ基と共有結合できる官能基と親水性連結基とを含む鎖は、好ましくは下記式１で示される。
Ｚ－（Ａ^１）_ｗ－（Ｂ^１）_ｘ－（Ｃ^１）_ｙ－ 式１
式中、Ｚはアミノ基と共有結合できる官能基であり、Ａ^１は疎水性の連結基であり、Ｂ^１は親水性の連結基であり、Ｃ^１は疎水性の連結基であり、ｗは１以上の整数であり、ｘは１以上の整数であり、ｙは０以上の整数である。

第二の化合物は、好ましくは下記式２で表される。
［Ｚ－（Ａ^１）_ｗ－（Ｂ^１）_ｘ－（Ｃ^１）_ｙ－］_ｖ－ＣＨ_ｎ 式２
式中、Ｚはアミノ基と共有結合できる官能基であり、Ａ^１は疎水性の連結基であり、Ｂ^１は親水性の連結基であり、Ｃ^１は疎水性の連結基であり、ｗは１以上の整数であり、ｘは１以上の整数であり、ｙは０以上の整数であり、ｖは２から４の整数であり、ｎは０から２の整数である。但し、ｖ＋ｎは４である。

Ｚ、Ａ^１、Ｂ^１、Ｃ^１は各枝の中、また枝間で同じでも異なっていてもよく、ｗ、ｘ、ｙ同士は枝間で同じでも異なっていてもよい。

ｗは、好ましくは１～１０の整数であり、より好ましくは１～５の整数であり、特に好ましくは５である。
ｘは、好ましくは１０～３００の整数であり、より好ましくは２０～２００の整数である。
ｙは、好ましくは０～５の整数であり、より好ましくは０～３の整数である。
ｖは好ましくは４であり、ｎは好ましくは０である。

アミノ基と共有結合できる官能基としては、イソシアネート、イソチオシアネート、スルホニルクロリド、アルデヒド、アシルアジド、酸無水物、イミドエステル、エポキシドまたは活性エステルを挙げることができるが、特に限定されない。生体ｐＨで容易に反応が進行するという観点から、より好ましくはアミノ基と共有結合できる官能基は、スクシンイミジル基である。第二の化合物は、アミノ基と共有結合できる官能基を２個以上有するが、官能基は同一のものでもよいし、異なるものでもよい。

Ｂ^１が示す親水性の連結基としては、エチレンオキシド基（－ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ－）、またはエチレンオキシド単位を含む基を挙げることができるが、特に限定されない。親水性連結基がエチレンオキシド基（－ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ－）、またはエチレンオキシド単位を含む基である場合における第二の化合物は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）架橋剤とも言う。第二の化合物としては、ＰＥＧ架橋剤が好ましい。なお、ＰＥＧ架橋剤を使用する場合、ＰＥＧ架橋剤以外の他の架橋剤を併用してもよい。

Ａ^１が示す疎水性の連結基としては、炭素数１～５の炭化水素基を挙げることができ、好ましくはメチレン基またはエチレン基であり、特に好ましくはエチレンである。（Ａ^１）_ｗが示す疎水性の連結基は末端に、－Ｏ－、－ＣＯ－または－ＣＯＯ－などの連結基を有していてもよく、Ｚとの間に－ＣＯＯ－を有していることが好ましい。
Ｃ^１が示す疎水性の連結基としては、炭素数１～３の炭化水素基を挙げることができ、好ましくはメチレン基またはエチレン基であり、特に好ましくはエチレンである。（Ｃ^１）_ｙが示す疎水性の連結基は末端に－Ｏ－、－ＣＯ－または－ＣＯＯ－などの連結基を有していてもよく、（Ｂ^１）_ｘとの間に－Ｏ－を有していることが好ましい。

（粘膜下注入材）
本発明の粘膜下注入材キットを用いて粘膜下注入用ゲルを調製することができる。粘膜下注入用ゲルは、粘膜下注入材として使用することができる。

例えば、内視鏡的に病変部を切除する内視鏡的粘膜下層剥離術（ＥＳＤ）や内視鏡的粘膜切除術（ＥＭＲ）において、病変部の粘膜下に、粘膜下注入用ゲルを注入して、病変部の組織を隆起させることができる。すなわち、本発明の粘膜下注入材キットは、第一の化合物および第二の化合物を混合して、対象者に局所的に投与することができる。

粘膜としては、胃粘膜、食道粘膜、十二指腸粘膜、大腸粘膜などを挙げることができるが、特に限定されない。

本発明のゲル形成キットにはさらに、アミノ基と共有結合できる官能基と親水性連結基とを含む鎖を少なくとも２本以上有する架橋剤、およびリコンビナントペプチドを対象に投与するための指示書を含めてもよい。

本発明によれば、アミノ基を２つ以上有し、３７℃かつ中性条件下において水溶性である第一の化合物と、アミノ基と共有結合できる官能基と親水性連結基とを含む鎖を少なくとも２本以上有する第二の化合物との混合物（但し、第一の化合物及び第二の化合物の少なくとも一方が、重量平均分子量３０００以上の高分子である）を、粘膜下注入を必要とする対象に投与することを含む、粘膜下注入方法が提供される。
本発明によれば、アミノ基を２つ以上有し、３７℃かつ中性条件下において水溶性である第一の化合物と、アミノ基と共有結合できる官能基と親水性連結基とを含む鎖を少なくとも２本以上有する第二の化合物とを（但し、第一の化合物及び第二の化合物の少なくとも一方が、重量平均分子量３０００以上の高分子である）、同時にまたは逐次に、粘膜下注入を必要とする対象に投与することを含む、粘膜下注入方法が提供される。

本発明によれば、粘膜下注入のために使用される、アミノ基を２つ以上有し、３７℃かつ中性条件下において水溶性である第一の化合物と、アミノ基と共有結合できる官能基と親水性連結基とを含む鎖を少なくとも２本以上有する第二の化合物とを含み、第一の化合物及び第二の化合物の少なくとも一方が、重量平均分子量３０００以上の高分子である、粘膜下注入材キットが提供される。
本発明によれば、粘膜下注入のために使用される、アミノ基を２つ以上有し、３７℃かつ中性条件下において水溶性である第一の化合物が、アミノ基と共有結合できる官能基と親水性連結基とを含む鎖を少なくとも２本以上有する第二の化合物により、架橋されてなるゲルであって、第一の化合物及び第二の化合物の少なくとも一方が、重量平均分子量３０００以上の高分子であるゲルが提供される。

本発明によれば、粘膜下注入材の製造のための、アミノ基を２つ以上有し、３７℃かつ中性条件下において水溶性である第一の化合物と、アミノ基と共有結合できる官能基と親水性連結基とを含む鎖を少なくとも２本以上有する第二の化合物とを含み、第一の化合物及び第二の化合物の少なくとも一方が、重量平均分子量３０００以上の高分子である、粘膜下注入材キットの使用が提供される。

本発明によれば、粘膜下注入材の製造のための、アミノ基を２つ以上有し、３７℃かつ中性条件下において水溶性である第一の化合物が、アミノ基と共有結合できる官能基と親水性連結基とを含む鎖を少なくとも２本以上有する第二の化合物により、架橋されてなるゲルであって、第一の化合物及び第二の化合物の少なくとも一方が、重量平均分子量３０００以上の高分子である、粘膜下注入用ゲルの使用が提供される。

＜ゲルおよびゲルの製造方法＞
本発明によれば、アミノ基を２つ以上有し、３７℃かつ中性条件下において水溶性である第一の化合物が、アミノ基と共有結合できる官能基と親水性連結基とを含む鎖を少なくとも２本以上有する第二の化合物により、架橋されてなるゲルであって、第一の化合物及び第二の化合物の少なくとも一方が、重量平均分子量３０００以上の高分子である、粘膜下注入用ゲルが提供される。
第一の化合物および第二の化合物についての詳細および好ましい態様は、本明細書中において上記した通りである。

本発明のゲルは、粘膜下注入用のゲルである。粘膜下注入についての詳細は、本明細書中において上記した通りである。

本発明の粘膜下注入用のゲルは、好ましくは生体組織と接着性を有する。接着性とは、ゲルと、ゲルが注入された組織との間で化学結合または物理結合することを意味する。第二の化合物と、組織を構成する細胞の表面タンパク質のアミノ基とが結合することが好ましい。

本発明のゲルを得るにあたり、混合前の第二の化合物の濃度としては１０ｇ／Ｌ～６０ｇ／Ｌが好ましく、１０ｇ／Ｌ～５０ｇ／Ｌがより好ましく、１０ｇ／Ｌ～４０ｇ／Ｌが特に好ましい。

本発明のゲルを得るにあたり、混合前の第一の化合物の濃度としては１０ｇ／Ｌ～６０ｇ／Ｌが好ましく、１０ｇ／Ｌ～５０ｇ／Ｌがより好ましく、１５ｇ／Ｌ～４５ｇ／Ｌが特に好ましい。活性末端モル濃度比である［アミノ基（－ＮＨ_２）］：［アミノ基と共有結合できる官能基］は１：２～６：１の範囲であり、好ましくは４：１である。

本発明のゲル中における第二の化合物の濃度（最終濃度）は、好ましくは０．７５質量％～６質量％であり、好ましくは０．７５質量％～３．０質量％であり、さらに好ましくは０．７５質量％～１．５質量％である。また、第一の化合物の質量濃度に対する第二の化合物の質量濃度は０．８倍～６．５倍であることが好ましく、細胞毒性の観点からは、０．８倍～１．６倍であることが好ましく、０．８倍がより好ましい。

本発明のゲルは、第一の化合物と第二の化合物とを混合して架橋反応を行うことにより製造することができる。第一の化合物と第二の化合物とを混合する方法としては、第一の化合物の溶液と第二の化合物の溶液とをピペット等により混合することが挙げられる。第一の化合物の溶液を含む注射筒と、第二の化合物の溶液を含む注射筒を連結して混合する方法を採用してもよい。２つ以上の注射筒から、第一の化合物の溶液と第二の化合物の溶液とを同時に混合しながら射出するデュアルシリンジ等のアプリケーターを用いてもよい。また、第一の化合物と第二の化合物を混合後、低温環境下において液体状態で保持したのちに粘膜下に注入してもよい。

第一の化合物と第二の化合物を混合後、低温環境下において液体状態で保持したのちに粘膜下に注入するという態様としては、混合後に２２℃以下で保持し、２０分以内であれば、複数回に分割して、注入することもできる。
この態様における低温環境下の温度範囲は５℃から２２℃が好ましく、すぐに注入できる粘度にできることから１０℃から２２℃がより好ましく、保持時間が長くできることから１１℃～１８℃が特に好ましい。また、低温において保持する時間としては１５分以上が好ましく、２０分以上がより好ましい。
保持時間を長くするために、第一の化合物の濃度ならびに第二の化合物の濃度の少なくとも一方または両方を下げるか、リン酸緩衝液の濃度を高くすることが好ましい。

混合後のゲル化液における第一の化合物の濃度は、好ましくは０．６５質量％～７．５質量％であり、より好ましくは０．６５質量％～５．０質量％であり、さらに好ましくは０．７５質量％～３．０質量％である。

ゲルは溶媒を含んでいても良い。溶媒は水系のものが好ましく、水系緩衝液が好ましく、リン酸緩衝液が最も好ましい。
緩衝液の濃度としては、いくらでもよいが、ゲル化時間を制御する点で０～５００ｍｍｏｌ／Ｌが好ましく、５～２００ｍｍｏｌ／Ｌがより好ましく、２５～７５ｍｍｏｌ／Ｌが最も好ましい。

以下の実施例により本発明をさらに具体的に説明するが、本発明は実施例によって限定されるものではない。

＜リコンビナントペプチド（リコンビナントゼラチン）＞
リコンビナントペプチド（リコンビナントゼラチン）として以下のＣＢＥ３を用意した（国際公開ＷＯ２００８／１０３０４１号公報に記載）。
ＣＢＥ３：
分子量：５１．６ｋＤ
構造：ＧＡＰ［（ＧＸＹ）_６３］_３Ｇ
アミノ酸数：５７１個
ＲＧＤ配列：１２個
イミノ酸含量：３３％
ほぼ１００％のアミノ酸がＧＸＹの繰り返し構造である。ＣＢＥ３のアミノ酸配列には、セリン、スレオニン、アスパラギン、チロシンおよびシステインは含まれていない。ＣＢＥ３はＥＲＧＤ配列を有している。
等電点：９．３４
ＧＲＡＶＹ値：－０．６８２
１／ＩＯＢ値：０．３２３
アミノ酸配列（配列表の配列番号１）（国際公開ＷＯ２００８／１０３０４１号公報の配列番号３と同じ。但し末尾のＸは「Ｐ」に修正）
GAP(GAPGLQGAPGLQGMPGERGAAGLPGPKGERGDAGPKGADGAPGAPGLQGMPGERGAAGLPGPKGERGDAGPKGADG
APGKDGVRGLAGPIGPPGERGAAGLPGPKGERGDAGPKGADGAPGKDGVRGLAGPIGPPGPAGAPGAPGLQGMPGERGAA
GLPGPKGERGDAGPKGADGAPGKDGVRGLAGPP)₃G

ＣＢＥ３の分子量は約５１ｋＤａであり、図１に示す各種物質の電気泳動パターンからもわかる通り、ブタ由来ゼラチンに比べ均一な分子量分布を持っている。

＜架橋剤＞
使用したＰＥＧ架橋剤（ＰＴＥ－２００ＨＳ，日油株式会社）の化学構造（製造元ウェブサイトより転載）を以下に示す。Ｍ_ｗは２０，０００であり、式中のｎは１１４程度である。

＜その他の材料＞
リン酸水素二ナトリウム（富士フイルム和光純薬株式会社）とリン酸二水素ナトリウム（富士フイルム和光純薬株式会社）から、５ｍｍｏｌ／ＬのｐＨ６．８リン酸バッファー（ＰＢ）を調製した。
ヒアルロン酸ナトリウムはムコアップ（生化学工業株式会社）を利用した。
購入したブタ切除胃は、約５ｃｍ×５ｃｍの試験片とした。切除胃の粘膜下層に０．５ｍＬの局注液を注入した。

＜粘膜隆起高の評価＞
粘膜隆起高の評価は二種類の実験にて行った。
第一の実験としては、各液の局注後、速やかに初期の隆起高（ｈ＿０）を計測し、その後、ある時点の隆起高（ｈ＿ｔ）を測定した（図２）。
第二の実験では、別のブタ切除胃において、各液を局注し、速やかにｈ＿０を計測した後、隆起させた部位にメスを用いて１ｃｍ程度の切り込みを入れた。その後、３分経過後の隆起高をｈ＿ｔとした。

注入後の粘膜隆起高維持率を、ｈ＿０およびｈ＿ｔを用いて次のように算出した（式１）。
式１： 粘膜隆起高維持率［％］＝ ｈ＿ｔ／ｈ＿０ × １００

＜水洗耐性の評価＞
各注入材によって隆起させた粘膜面を解剖はさみで完全に切除した後、ブタ切除胃をシリコーンシート上に画鋲で固定した。切除胃に対し、１．５Ｌ／ｍｉｎの速度で３０秒間、水道水を送液した。注入材残留の有無を目視にて評価した。

＜実施例１：ＣＢＥ３ゲル＞
ＣＢＥ３および架橋剤ＰＥＧを、ＰＢにそれぞれ３７．２３ｇ／Ｌおよび３０ｇ／Ｌとなるように溶解させた。得られたＣＢＥ３水溶液に対し、架橋剤ＰＥＧ水溶液を体積比１：１の割合で加えた。ボルテックスミキサーで撹拌したゲル化液を２３Ｇの注射針を介してブタ切除胃の粘膜下層に速やかに局注し、粘膜隆起高の評価を行った。切り込みの有無によらず、３０分後の粘膜隆起高維持率は１００％以上であった（図３および図４）。また、粘膜下層に生成されたゲルは透明であることを目視で確認した（図５）。
水洗耐性の評価のため、別に作製した青色に着色済みの局注液を注入した試験片の評価を行ったところ、洗浄後においても注入材が潰瘍面に接着・残留していることが確認された（図６）。

＜比較例１：ヒアルロン酸ナトリウム＞
ムコアップを２３Ｇの注射針を介してブタ切除胃に局注し、粘膜隆起高の評価を行った。切り込みが無い場合では３０分後の粘膜隆起高維持率は９７％であった（図３）。一方で、切り込みがある場合には粘膜隆起高維持率は６５％であった（図４）。水洗耐性の評価のために別に作製した試験片の評価を行ったところ、目視観察上、注入材の残留は認められなかった。

＜実施例２～６：低温での保持＞
ＣＢＥ３および架橋剤ＰＥＧを、ＰＢにそれぞれ表１に示す濃度となるように溶解させた。表１に記載の濃度はそれぞれ、ＣＢＥ３溶液におけるＣＢＥ３の濃度、及び架橋剤ＰＥＧ溶液における架橋剤ＰＥＧ濃度を示す。得られたＣＢＥ３水溶液に対し、架橋剤ＰＥＧ水溶液を体積比１：１の割合で加えて、混合溶液を得、下記の表の温度において保持した。ゲル化に伴う貯蔵弾性率の増加が現れない時間において、ＣＢＥ３と架橋剤ＰＥＧは混合後に低温で保持することが可能である。下記の表の保持温度における、混合溶液の貯蔵弾性率について経時変化をＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ 製レオメーター ＨＡＡＫＥ ＭＡＲＳ４０ にて測定した。
ＣＢＥ３と架橋剤ＰＥＧの混合溶液を表の温度において保持し始めてから、貯蔵弾性率が３Ｐａを超えるまでの時間を下記の表に示す。

＜実施例７＞
低温保持後にゲル化が起こるかを確認するため、実施例３と同様処方にて混合溶液を得た後、１５℃約２４分保持後に３７℃に昇温するプロファイルで混合溶液の貯蔵弾性率の測定を行った。結果を図７に示す

＜実施例８＞
実施例７において、１５℃で保持したことにより、品質が変化していないかを確認するため、実施例３と同様処方にて混合溶液を得た後、直接３７℃に昇温するプロファイルで貯蔵弾性率の測定を行った。実施例７の結果と共に図８に示す。

１５℃で２４分保持した後、３７℃に昇温したもの（実施例７）の貯蔵弾性率は３７℃に直接昇温したもの（実施例８）の貯蔵弾性率と同程度まで上昇することが確認され、低温で保持することによる貯蔵弾性率への影響はほぼないことが確認できた。

＜比較例２：特開２０１８－８０１３６号公報＞
特開２０１８－８０１３６公報に記載のコラーゲンとゲニピンの混合液を２３Ｇの注射針を介してブタ切除胃に局注し、粘膜隆起高の評価を行う。粘膜隆起高維持率は本実施例と同等になるが、水洗耐性の評価のために別に作製した試験片の評価を行うと、目視観察上、注入材の残留は認められないことが予想される。
これは、ゲニピンがコラーゲンならびに組織のアミノ基と反応する官能基を１つしか有しないため、接着性が弱くなることによると考えられる。

Claims (14)

1. アミノ基を２つ以上有し、３７℃かつ中性条件下において水溶性であり、リコンビナントペプチドである第一の化合物と、アミノ基と共有結合できる官能基と親水性連結基とを含む鎖を少なくとも２本以上有する第二の化合物とを含み、第一の化合物及び第二の化合物の少なくとも一方が、重量平均分子量３０００以上の高分子であり、
   第一の化合物が、
   配列番号１に記載のアミノ酸配列からなるペプチド；
   配列番号１に記載のアミノ酸配列において１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなり、かつ生体親和性を有するペプチド；または
   配列番号１に記載のアミノ酸配列と８０％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつ生体親和性を有するペプチド；
   の何れかである、
   粘膜下注入材キット。
2. アミノ基と共有結合できる官能基と親水性連結基とを含む鎖が、下記式１で示される、請求項１に記載の粘膜下注入材キット。
   Ｚ－（Ａ^１）_ｗ－（Ｂ^１）_ｘ－（Ｃ^１）_ｙ－ 式１
   式中、Ｚはアミノ基と共有結合できる官能基であり、Ａ^１は疎水性の連結基であり、Ｂ^１は親水性の連結基であり、Ｃ^１は疎水性の連結基であり、ｗは１以上の整数であり、ｘは１以上の整数であり、ｙは０以上の整数である。
3. アミノ基と共有結合できる官能基が、スクシンイミジル基である、請求項１又は２に記載の粘膜下注入材キット。
4. 親水性連結基が、エチレンオキシド単位を含む、請求項１から３の何れか一項に記載の粘膜下注入材キット。
5. 粘膜下注入材キットが内視鏡的切除術用である、請求項１から４の何れか一項に記載の粘膜注入材キット。
6. 第１の化合物を含む溶液と第2の化合物を含む溶液を混合後に22℃以下で20分以上液体状態で保持できることを特徴とする請求項１から５の何れか一項に記載の粘膜下注入材キット。
7. アミノ基を２つ以上有し、３７℃かつ中性条件下において水溶性であり、リコンビナントペプチドである第一の化合物が、アミノ基と共有結合できる官能基と親水性連結基とを含む鎖を少なくとも２本以上有する第二の化合物により、架橋されてなるゲルであって、第一の化合物及び第二の化合物の少なくとも一方が、重量平均分子量３０００以上の高分子であり、
   第一の化合物が、
   配列番号１に記載のアミノ酸配列からなるペプチド；
   配列番号１に記載のアミノ酸配列において１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなり、かつ生体親和性を有するペプチド；または
   配列番号１に記載のアミノ酸配列と８０％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつ生体親和性を有するペプチド；
   の何れかである、
   粘膜下注入用ゲル。
8. アミノ基と共有結合できる官能基と親水性連結基とを含む鎖が、下記式１で示される、請求項７に記載の粘膜下注入用ゲル。
   Ｚ－（Ａ^１）_ｗ－（Ｂ^１）_ｘ－（Ｃ^１）_ｙ－ 式１
   式中、Ｚはアミノ基と共有結合できる官能基であり、Ａ^１は疎水性の連結基であり、Ｂ^１は親水性の連結基であり、Ｃ^１は疎水性の連結基であり、ｗは１以上の整数であり、ｘは１以上の整数であり、ｙは０以上の整数である。
9. アミノ基と共有結合できる官能基が、スクシンイミジル基である、請求項７又は８に記載の粘膜下注入用ゲル。
10. 親水性連結基が、エチレンオキシド単位を含む、請求項７から９の何れか一項に記載の粘膜下注入用ゲル。
11. ゲル中における第二の化合物の濃度が、０．７５質量％～３．０質量％である、請求項７から１０の何れか一項に記載の粘膜下注入用ゲル。
12. 生体組織と接着性を有する、請求項７から１１の何れか一項に記載の粘膜下注入用ゲル。
13. 粘膜下注入材キットが内視鏡的切除用である、請求項７から１２の何れか一項に記載の粘膜下注入用ゲル。
14. アミノ基を２つ以上有し、３７℃かつ中性条件下において水溶性であり、リコンビナントペプチドである第一の化合物と、アミノ基と共有結合できる官能基と親水性連結基とを含む鎖を少なくとも２本以上有する第二の化合物を混合する工程を含む、粘膜下注入用ゲルの製造方法であって、
    第一の化合物が、
    配列番号１に記載のアミノ酸配列からなるペプチド；
    配列番号１に記載のアミノ酸配列において１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなり、かつ生体親和性を有するペプチド；または
    配列番号１に記載のアミノ酸配列と８０％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつ生体親和性を有するペプチド；
    の何れかである、製造方法。