JP7341897B2 - Ｃ３ｂ不活性化ポリペプチド - Google Patents

Description

本出願は、２０１７年６月９日出願のＧＢ１７０９２２２．２の優先権を請求し、該文献の内容および要素は、すべての目的のため、本明細書に援用される。
本発明は、分子生物学、免疫学、および医学の分野に関する。より具体的には、本発明は、Ｃ３ｂ結合領域およびＣ３ｂ不活性化領域を含むポリペプチド、該ポリペプチドをコードする核酸およびベクター、該核酸／ベクターを含み、そして／または該ポリペプチドを産生する細胞、該ポリペプチド／核酸／ベクター／細胞を含む組成物、ならびに例えばＣ３ｂが病理学的に関与している疾患／状態を治療するための、該ポリペプチド／核酸／ベクター／細胞の療法的および予防的使用に関する。

加齢黄斑変性症（ＡＭＤ）は、先進国世界における失明の主因であり：２０２０年までに１億９６００万人の人々が罹患すると概算されている。該疾患の初期段階は、黄斑（中心視力に関与する網膜の中心部分）における病変（ドルーゼンと称される）の形成によって特徴づけられる。これらのドルーゼンは、ブルッフ膜（ＢｒＭ）に隣接して形成され、該膜は、目の血液供給（脈絡膜）を、視覚に必要な桿体細胞および錐体細胞を裏打ちする網膜色素上皮（ＲＰＥ）から分離する膜である。ドルーゼンは、ＲＰＥ細胞機能不全および細胞死を導き、そして続いて桿体細胞および錐体細胞の細胞死を導く。ＡＭＤは、主に遺伝性疾患であり、補体系の遺伝子における突然変異がＡＭＤのリスク増加と強く関連する。実際、補体系の過剰活性化が、疾患病因形成に大きな役割を果たすことが明らかになってきている。

代替経路、古典的経路およびレクチン経路を介した補体系の活性化は、Ｃ３転換酵素の形成に行きつく。代替経路によって形成されるＣ３転換酵素は、因子ＢｂおよびＣ３ｂを含む。Ｃ３転換酵素は、Ｃ３タンパク質のＣ３ａおよびＣ３ｂ断片への加水分解を触媒する。表面（例えば細胞／組織）上へのＣ３ｂの沈着は、補体カスケードの増幅ループを開始し、最終的には細胞／組織破壊および局所炎症反応（これらはすべて、初期ＡＭＤに特徴的である）を導く。

無細胞構造、例えばＢｒＭ上での補体の活性化は、補体因子Ｈ（ＦＨ）および補体因子Ｉ（ＦＩ）によって制御される。因子ＩはＣ３ｂを切断し、そして不活性化し（ｉＣ３ｂは、機能性Ｃ３転換酵素を形成するために因子Ｂｂと集合することができない）、したがって、補体活性化を停止するが、因子Ｈなどの補因子の存在下でしかこれを行えない。

最近５～１０年で、ＡＭＤに対する、補体に基づくいくつかの療法が研究されてきている。これらには、補体制御因子全体、例えば因子Ｈまたは一部切除（ｔｒｕｎｃａｔｅｄ）因子ＨアイソフォームＦＨＬ－１を目の中に注入する試みが含まれている。こうした療法はほとんど成功してこなかったが、これは主に、これらのタンパク質が、ターゲット領域、すなわちＢｒＭ／ＲＰＥ細胞界面に到達できないためである。

１つの側面において、本発明は、Ｃ３ｂ結合領域およびＣ３ｂ不活性化領域を含むポリペプチドを提供する。
いくつかの態様において、Ｃ３ｂ不活性化領域は、Ｃ３ｂをタンパク質分解的に切断可能である。いくつかの態様において、Ｃ３ｂ不活性化領域は、１３０３および／または１３２０位でＣ３ α’鎖を切断可能である。いくつかの態様において、Ｃ３ｂ不活性化領域は、配列番号９のアミノ酸配列に対して少なくとも６５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたは該アミノ酸配列からなる。いくつかの態様において、Ｃ３ｂ結合領域は、補体因子Ｉの補因子によって結合される領域で、Ｃ３ｂに結合する。

いくつかの態様において、Ｃ３ｂ結合領域は、補体因子Ｈ、ＣＲ１、ＣＤ４６、ＣＤ５５またはＣ４結合タンパク質の１つによって結合される領域で、Ｃ３ｂに結合する。いくつかの態様において、Ｃ３ｂ結合領域は、補体因子Ｈによって結合される領域、または補体受容体１（ＣＲ１）によって結合される領域で、Ｃ３ｂに結合する。いくつかの態様において、Ｃ３ｂ結合領域は、補体因子Ｈ補体制御タンパク質（ＣＣＰ）ドメイン１～４によって結合される領域、あるいはＣＲ１ ＣＣＰドメイン８～１０または１５～１７によって結合される領域で、Ｃ３ｂに結合する。いくつかの態様において、Ｃ３ｂ結合領域は、配列番号１１、１３または１４のアミノ酸配列に対して少なくとも６５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたは該アミノ酸配列からなる。

いくつかの態様において、ポリペプチドは、ブルッフ膜（ＢｒＭ）を渡って拡散可能である。いくつかの態様において、ポリペプチドはグリコシル化されていない。いくつかの態様において、Ｃ３ｂ不活性化領域は、配列番号２７のコンセンサス配列に一致するアミノ酸配列を欠く。

いくつかの態様において、ポリペプチドは検出配列を含み、該検出配列はタンパク質分解酵素の切断部位を含むかまたは該部位からなり、そしてタンパク質分解酵素でのポリペプチドの切断が、非内因性ペプチドの産生を生じる。

いくつかの態様において、ポリペプチドは、配列番号３２、３３、３４、３５、３６、３７、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６９、７０、７１、７２または７３のアミノ酸配列に対して少なくとも６５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたは該アミノ酸配列からなる。

いくつかの態様において、ポリペプチドは、分泌経路配列（ｓｅｃｅｒｅｔａｒｙ ｐａｔｈｗａｙ ｓｅｑｕｅｎｃｅ）をさらに含む。いくつかの態様において、分泌経路配列は、配列番号２７のコンセンサス配列に一致するアミノ酸配列の１つまたはそれより多いコピーを含み、そしてポリペプチドが分泌経路配列を除去するための切断配列をさらに含む。いくつかの態様において、分泌経路配列を除去するための切断部位は、エンドプロテアーゼ切断部位、例えばＲＰＥ細胞によって発現されるエンドプロテアーゼ、例えばフーリン（ｆｕｒｉｎ）・エンドプロテアーゼの切断部位である。

別の側面において、本発明は、本発明記載のポリペプチドをコードする核酸を提供する。
別の側面において、本発明は、本発明の核酸を含むベクターを提供する。

別の側面において、本発明は、本発明記載のポリペプチド、核酸、またはベクターを含む、細胞を提供する。
別の側面において、本発明は、ポリペプチドを産生するための方法であって、細胞内に、本発明記載の核酸またはベクターを導入し、そしてポリペプチドの発現に適した条件下で、該細胞を培養する工程を含む、前記方法を提供する。

別の側面において、本発明は、本発明記載のポリペプチドを産生するための方法によって得られるかまたは得られうる、細胞を提供する。
別の側面において、本発明は、本発明記載のポリペプチド、核酸、ベクター、または細胞、並びに、薬学的に許容されうるキャリアー、アジュバント、賦形剤、または希釈剤を含む、薬学的組成物を提供する。

別の側面において、本発明は、疾患または状態を治療するかまたは防止する方法における使用のための、本発明記載のポリペプチド、核酸、ベクターまたは薬学的組成物を提供する。

別の側面において、本発明は、疾患または状態を治療するかまたは防止するための医薬品の製造における、本発明記載のポリペプチド、核酸、ベクターまたは薬学的組成物の使用を提供する。

別の側面において、本発明は、本発明記載のポリペプチド、核酸、ベクターまたは薬学的組成物を、被験体に投与する工程を含む、疾患または状態を治療するかまたは防止する方法を提供する。

別の側面において、本発明は、被験体において疾患または状態を治療するかまたは防止する方法であって、本発明記載の核酸またはベクターを発現するかまたは含むように、被験体の少なくとも１つの細胞を修飾する工程を含む、前記方法を提供する。

本発明の多様な側面にしたがったいくつかの態様において、疾患または状態は、Ｃ３ｂまたはＣ３ｂ含有複合体、Ｃ３ｂまたはＣ３ｂ含有複合体に関連する活性／反応、あるいはＣ３ｂまたはＣ３ｂ含有複合体に関連する活性／反応の産物が、病理学的に関与している疾患または状態である。いくつかの態様において、疾患または状態は、加齢黄斑変性症（ＡＭＤ）である。

別の側面において、本発明は、あらかじめ決定した量の、本発明記載のポリペプチド、核酸、ベクター、細胞、または薬学的組成物を含む、部品キット（ｋｉｔ ｏｆ ｐａｒｔｓ）を提供する。

別の側面において、本発明は、試料におけるポリペプチドを検出する方法であって：
（ｉ）本発明のポリペプチドを含有すると推測される試料を、検出配列のタンパク質分解的切断部位に特異的なタンパク質分解酵素と接触させ；そして
（ｉｉ）非内因性ペプチドの存在を検出する
工程を含む、前記方法を提供する。

補体因子Ｈ補因子領域を含むＣ３ｂ不活性化ポリペプチドの模式図。Ｃ３ｂ不活性化ポリペプチドは、補体因子ＨのＣ３ｂ結合領域（すなわちＣＣＰ１～４）、質量分析による生物学的試料における検出を可能にするように設計されたユニークなペプチドを生成する、操作されたタンパク質分解的切断部位（^＊によって示される）を含む柔軟なリンカー、および補体因子Ｉのタンパク質分解ドメインを含む。図１Ａは、補体因子Ｉのタンパク質分解ドメイン上でＮ－グリカンを含むポリペプチドを示す。図１Ｂは、補体因子Ｉのタンパク質分解ドメインが、Ｎ－グリコシル化のための部位を除去するように突然変異されているポリペプチドを示す。 補体因子Ｈ補因子領域を含むＣ３ｂ不活性化ポリペプチドの模式図。Ｃ３ｂ不活性化ポリペプチドは、補体因子ＨのＣ３ｂ結合領域（すなわちＣＣＰ１～４）、質量分析による生物学的試料における検出を可能にするように設計されたユニークなペプチドを生成する、操作されたタンパク質分解的切断部位（^＊によって示される）を含む柔軟なリンカー、および補体因子Ｉのタンパク質分解ドメインを含む。図１Ｃは、補体因子Ｉのタンパク質分解ドメインが、Ｎ－グリコシル化のための部位を除去するように突然変異されており、そしてポリペプチドがタンパク質のＮ末端の代替グリコシル化配列、およびタンパク質から代替グリコシル化配列を除去するためのエンドペプチダーゼ切断部位を含む、ポリペプチドを示す。 Ｃ３ｂ分解の分析のウェスタンブロットの結果を示す写真。^＊は、Ｃ３ｂ分解のｉＣ３ｂ産物を示す。「キメラ」は、図１Ａに模式的に示したポリペプチドを指す。 図１Ａに模式的に示したポリペプチドの酵素的脱グリコシル化後のバンドシフトを示すＩｎｓｔａｎｔ Ｂｌｕｅ染色ゲルを示す写真。「ｄキメラ」は脱グリコシル化ポリペプチドを指す。 （図４Ａ）ＢｒＭを通じた拡散後の全ヒト血清における可溶性補体タンパク質の存在を検出するウェスタンブロット、および（図４Ｂ）純粋な補体タンパク質に関して、全ヒト血清において見られたものと同じ拡散パターンが観察されたことを示すＩｎｓｔａｎｔ Ｂｌｕｅ染色ゲルの写真。 （図４Ａ）ＢｒＭを通じた拡散後の全ヒト血清における可溶性補体タンパク質の存在を検出するウェスタンブロット、および（図４Ｂ）純粋な補体タンパク質に関して、全ヒト血清において見られたものと同じ拡散パターンが観察されたことを示すＩｎｓｔａｎｔ Ｂｌｕｅ染色ゲルの写真。 異なる精製タンパク質またはＢｒＭ拡散アッセイ由来の拡散物質の存在下での、Ｃ３ｂ分解のＩｎｓｔａｎｔ Ｂｌｕｅ染色ゲル分析の写真。（Ａ）補体因子ＩがＢｒＭを渡って拡散し、そしてＣ３ｂを分解する能力の分析結果を示す。（Ｂ）天然補体因子Ｉの脱グリコシル化（ｄＦＩ）および生じるバンドシフトパターンを示す。 異なる精製タンパク質またはＢｒＭ拡散アッセイ由来の拡散物質の存在下での、Ｃ３ｂ分解のＩｎｓｔａｎｔ Ｂｌｕｅ染色ゲル分析の写真。（Ｃ）脱グリコシル化補体因子ＩがＢｒＭを渡って拡散し、そしてＣ３ｂを分解する能力の分析結果を示す。 ＢｒＭを渡って拡散する能力の分析後の試料チャンバーおよび拡散物質チャンバーにおける、図１Ｃに模式的に示す脱グリコシル化キメラＦＨ－ＦＩポリペプチド（ｄＦＨ－ＦＩ）の存在を検出するウェスタンブロットの結果の写真。 図１Ａに模式的に示すキメラＦＨ－ＦＩポリペプチドの脱グリコシル化型（ｄＦＨ－ＦＩ）を用いたＣ３ｂ分解アッセイの分析のウェスタンブロットの結果を示す写真。 ブルッフ膜（ＢｒＭ）によって維持される目の別個のコンプリメントーム（ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔｏｎｅ）領域の模式図。 バイオレイヤー干渉計によって測定した、Ｃ３ｂのグリコシル化および脱グリコシル化キメラＦＨ－ＦＩポリペプチド（９Ａ）ならびにＦＨおよびＦＨＬ－１（９Ｂ）の結合アフィニティを示す表およびグラフ。 バイオレイヤー干渉計によって測定した、Ｃ３ｂのグリコシル化および脱グリコシル化キメラＦＨ－ＦＩポリペプチド（９Ａ）ならびにＦＨおよびＦＨＬ－１（９Ｂ）の結合アフィニティを示す表およびグラフ。 補体受容体１補因子領域を含む、Ｃ３ｂ不活性化ポリペプチドの模式図。Ｃ３ｂ不活性化ポリペプチドは、補体受容体１のＣ３ｂ結合領域ＣＣＰ８～１０または１５～１７、質量分析適合性検出ペプチドを生成するためのモチーフ（「Ｍ」によって示される）、質量分析による生物学的試料における検出を可能にするように設計されたユニークなトリプシンペプチド（^＊によって示される）を含む柔軟なリンカー、および補体因子Ｉのタンパク質分解ドメインを含む。図１０Ａは、ＣＲ１ ＣＣＰ８～１０および補因子上のＮ－グリカンおよびタンパク質分解ドメインを含むポリペプチド（ＣＲ１ａ－ＦＩ）を示す。図１０Ｂは、ＣＲ１ ＣＣＰ８～１０を含み、そして補因子およびタンパク質分解ドメインが、Ｎ－グリコシル化のための部位を除去するように突然変異されているポリペプチド（ｎＣＲ１ａ－ＦＩ）を示す。 補体受容体１補因子領域を含む、Ｃ３ｂ不活性化ポリペプチドの模式図。Ｃ３ｂ不活性化ポリペプチドは、補体受容体１のＣ３ｂ結合領域ＣＣＰ８～１０または１５～１７、質量分析適合性検出ペプチドを生成するためのモチーフ（「Ｍ」によって示される）、質量分析による生物学的試料における検出を可能にするように設計されたユニークなトリプシンペプチド（^＊によって示される）を含む柔軟なリンカー、および補体因子Ｉのタンパク質分解ドメインを含む。図１０Ｃは、ＣＲ１ ＣＣＰ １５～１７、ならびに補因子およびタンパク質分解ドメイン上にＮ－グリカンを含むポリペプチド（ＣＲ１ｂ－ＦＩ）を示す。図１０Ｄは、ＣＲ１ ＣＣＰ １５～１７を含み、補因子およびタンパク質分解ドメインが、Ｎ－グリコシル化のための部位を除去するように突然変異されているポリペプチド（ｎＣＲ１ｂ－ＦＩ）を示す。

本発明は、Ｃ３ｂ結合領域およびＣ３ｂ不活性化領域を含むポリペプチドに関する。該ポリペプチドは、ポリペプチドが、第二のタンパク質の必要性を伴わずに、Ｃ３ｂをｉＣ３ｂに酵素的に切断可能であるように、補体因子Ｉおよび補体因子Ｉの補因子（例えば本明細書に記載するようなもの、例えば補体因子Ｈ、補体受容体１（ＣＲ１）等）の両方の活性ドメインを含む。重要なことに、ｉＣ３ｂ、ならびにその分解産物Ｃ３ｄｇおよびＣ３ｄはすべてオプソニンであり、そして破片除去の重要な仲介因子である。

Ｃ３およびＣ３ｂ
補体構成要素３（Ｃ３）は、自然免疫および補体系において、中心的な役割を有する免疫系タンパク質である。Ｃ３のプロセシングは、例えば、その全体が本明細書に援用されるＦｏｌｅｙら Ｊ Ｔｈｒｏｍｂ Ｈａｅｍｏｓｔａｓｉｓ （２０１５） １３：６１０－６１８に記載される。ヒトＣ３（ＵｎｉＰｒｏｔ：Ｐ０１０２４；配列番号１）は、１，６６３アミノ酸配列（Ｎ末端の２２アミノ酸シグナルペプチドを含む）を含む。アミノ酸２３～６６７はＣ３ β鎖（配列番号２）をコードし、そしてアミノ酸７４９～１，６６３はＣ３ α’鎖（配列番号３）をコードする。Ｃ３ β鎖およびＣ３ α’鎖は、鎖間ジスルフィド結合（Ｃ３ β鎖のシステイン５５９、およびＣ３ α’鎖のシステイン８１６の間に形成される）を通じて会合し、Ｃ３ｂを形成する。Ｃ３ａは、Ｃ３のアミノ酸６７２～７４８位に対応する７７アミノ酸断片（配列番号４）であり、古典的経路およびレクチン経路を通じた活性化後、Ｃ３のタンパク質分解的切断によって生成される。

Ｃ３ｂは、食細胞およびＮＫ細胞による食作用のため、病原体、抗体－抗原免疫複合体、およびアポトーシス細胞をターゲティングする、強力なオプソニンである。Ｃ３ｂはまた、補体反応を活性化し、そして増幅するための転換酵素複合体の形成にも関与する。Ｃ３ｂは因子Ｂと会合して、Ｃ３ｂＢｂ型Ｃ３転換酵素（代替経路）を形成し、そしてＣ４ｂおよびＣ２ａと会合してＣ４ｂ２ａ３ｂ型Ｃ５転換酵素（古典的経路）を形成するか、またはＣ３ｂＢｂと会合してＣ３ｂＢｂ３ｂ型Ｃ５転換酵素（代替経路）を形成することも可能である。

Ｃ３ｂは、α’鎖断片１（Ｃ３のアミノ酸７４９～１３０３位に対応する；配列番号５）およびα’鎖断片２（Ｃ３のアミノ酸１３２１～１，６６３位に対応する；配列番号６）を形成する、アミノ酸１３０３および１３２０位でのα’鎖のタンパク質分解的切断によって、ｉＣ３ｂと称される、転換酵素集合に関与不能な不活性型にプロセシングされうる。したがって、ｉＣ３ｂは、Ｃ３ β鎖、Ｃ３ α’鎖断片１およびＣ３ α’鎖断片２（ジスルフィド結合を通じて会合する）を含む。α’鎖の切断はまた、Ｃ３ｆも遊離させ、これはＣ３のアミノ酸１３０４～１３２０位に対応する（配列番号７）。

本明細書において、「Ｃ３」は、任意の種由来のＣ３を指し、そして任意の種由来のＣ３のアイソフォーム、断片、変異体または相同体を含む。いくつかの態様において、Ｃ３は、哺乳動物Ｃ３（例えばカニクイザル（ｃｙｎｏｍｏｌｇｏｕｓ）、ヒトおよび／または齧歯類（例えばラットおよび／またはネズミ）Ｃ３）である。Ｃ３のアイソフォーム、断片、変異体または相同体は、随意に、所定の種由来の未成熟または成熟Ｃ３、例えばヒトＣ３（配列番号１）のアミノ酸配列に対して、少なくとも７０％、好ましくは８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の１つのアミノ酸配列同一性を有すると特徴づけられてもよい。

本明細書において、「Ｃ３ｂ」は、任意の種由来のＣ３ｂのアイソフォーム、断片、変異体または相同体を指し、そしてこれらを含む。いくつかの態様において、Ｃ３ｂは、哺乳動物Ｃ３ｂ（例えばカニクイザル、ヒトおよび／または齧歯類（例えばラットおよび／またはネズミ）Ｃ３ｂ）である。

Ｃ３ｂのアイソフォーム、断片、変異体または相同体は、随意に、所定の種、例えばヒト由来のそれぞれのポリペプチドのアミノ酸配列に対して、少なくとも７０％、好ましくは８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の１つのアミノ酸配列同一性を有するＣ３ α’鎖断片１、Ｃ３ α’鎖断片２およびＣ３ βを含むと特徴づけられてもよい。すなわち、Ｃ３ｂは：配列番号５に対して、少なくとも７０％、好ましくは８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の１つのアミノ酸配列同一性を有するＣ３ α’鎖断片１；配列番号６に対して、少なくとも７０％、好ましくは８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の１つのアミノ酸配列同一性を有するＣ３ α’鎖断片２；および配列番号２に対して、少なくとも７０％、好ましくは８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の１つのアミノ酸配列同一性を有するＣ３ β鎖を含んでもよい。

Ｃ３ｂのアイソフォーム、断片、変異体または相同体は、随意に、例えば、機能的特性／活性に関する適切なアッセイによる分析によって決定した際、参照Ｃ３ｂの機能的特性／活性を有する、機能的アイソフォーム、断片、変異体または相同体であってもよい。例えば、Ｃ３ｂのアイソフォーム、断片、変異体または相同体は、オプソニンとして作用する能力、および／または機能的Ｃ３／Ｃ５転換酵素を形成する能力によって特徴づけられてもよい。

補体因子Ｉおよび補体因子Ｉの補因子
Ｃ３ｂからｉＣ３ｂへのプロセシングは、補体因子Ｉ（ヒトにおいては遺伝子ＣＦＩによってコードされる）によって行われる。ヒト補体因子Ｉ（ＵｎｉＰｒｏｔ：Ｐ０５１５６；配列番号８）は、５８３アミノ酸配列（Ｎ末端の１８アミノ酸シグナルペプチドを含む）を有する。前駆体ポリペプチドは、フーリンによって切断されて、鎖間ジスルフィド結合によって連結された重鎖（アミノ酸１９～３３５）および軽鎖（アミノ酸３４０～５８３）を含む、成熟補体因子Ｉを生じる。軽鎖のアミノ酸３４０～５７４は、補体因子Ｉのタンパク質分解ドメイン（配列番号９）をコードし、該ドメインは、Ｃ３ｂを切断してｉＣ３ｂを産生する際に関与する、触媒三連構造を含有するセリンプロテアーゼである（Ｅｋｄａｈｌら， Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ （１９９０） １４４ （１１）：４２６９－７４）。

本明細書において、「補体因子Ｉ」は、任意の種由来の補体因子Ｉを指し、そして任意の種由来の補体因子Ｉのアイソフォーム、断片、変異体または相同体を含む。いくつかの態様において、補体因子Ｉは、哺乳動物補体因子Ｉ（例えばカニクイザル、ヒトおよび／または齧歯類（例えばラットおよび／またはネズミ）補体因子Ｉ）である。

補体因子Ｉのアイソフォーム、断片、変異体または相同体は、随意に、所定の種由来の未成熟または成熟補体因子Ｉ、例えばヒト補体因子Ｉ（配列番号８）のアミノ酸配列に対して、少なくとも７０％、好ましくは８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の１つのアミノ酸配列同一性を有すると特徴づけられてもよい。補体因子Ｉのアイソフォーム、断片、変異体または相同体は、随意に、例えば、機能的特性／活性に関する適切なアッセイによる分析によって決定した際、参照補体因子Ｉ（例えば全長ヒト補体因子Ｉ）の機能的特性／活性を有する、機能的アイソフォーム、断片、変異体または相同体であってもよい。例えば、補体因子Ｉのアイソフォーム、断片、変異体または相同体は、セリンプロテアーゼ活性を示してもよく、そして／またはＣ３ｂを不活性化することが可能であってもよい。

補体因子Ｉの断片は、任意の長さ（アミノ酸数で）であってもよいが、随意に、成熟補体因子Ｉの長さの少なくとも２５％であってもよく、そして成熟補体因子Ｉの長さの５０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の１つの最大長を有してもよい。補体因子Ｉの断片は、１０アミノ酸の最小長、および１５、２０、２５、３０、４０、５０、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、５５０または５７５アミノ酸の１つの最大長を有してもよい。

いくつかの態様において、補体因子Ｉは、配列番号８に対して、少なくとも７０％、好ましくは８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の１つのアミノ酸配列同一性を有する。

ｉＣ３ｂを生じる、補体因子ＩによるＣ３ｂのタンパク質分解的切断は、補体因子Ｉの補因子によって促進される。補体因子Ｉの補因子は、典型的には、Ｃ３ｂおよび／または補体因子Ｉに結合し、そして補体因子ＩによるＣ３ｂからｉＣ３ｂへのプロセシングを増強する。補体因子Ｉの補因子として作用可能な分子には、補体因子Ｈ、補体受容体１（ＣＲ１）、ＣＤ４６、ＣＤ５５およびＣ４結合タンパク質（Ｃ４ＢＰ）、ＳＰＩＣＥ、ＶＣＰ（またはＶＩＣＥ）、ならびにＭＯＰＩＣＥが含まれる。

補体因子Ｈ構造および機能は、その全体が本明細書に援用される、Ｗｕら， Ｎａｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ （２００９） １０（７）： ７２８－７３３に概説される。ヒト補体因子Ｈ（ＵｎｉＰｒｏｔ：Ｐ０８６０３；配列番号１０）は、１，２３３アミノ酸配列（Ｎ末端の１８アミノ酸シグナルペプチド）を含み、そして～６０アミノ酸の、２０の補体制御タンパク質（ＣＣＰ）ドメイン： ＣＣＰ１＝１９～８２位、ＣＣＰ２＝８３～１４３位、ＣＣＰ３＝１４４～２０７位、ＣＣＰ４＝２０８～２６４位、ＣＣＰ５＝２６５～３２２位、ＣＣＰ６＝３２４～３８６位、ＣＣＰ７＝３８７～４４４位、ＣＣＰ８＝４４６～５０７位、ＣＣＰ９＝５１５～５６６位、ＣＣＰ１０＝５６７～６２５位、ＣＣＰ１１＝６２８～６８６位、ＣＣＰ１２＝６８９～７４６位、ＣＣＰ１３＝７５１～８０５位、ＣＣＰ１４＝８０９～８６６位、ＣＣＰ１５＝８６８～９２８位、ＣＣＰ１６＝９２９～９８６位、ＣＣＰ１７＝９８７～１０４５位、ＣＣＰ１８＝１０４６～１１０４位、ＣＣＰ１９＝１１０７～１１６５位、およびＣＣＰ２０＝１１７０～１２３０を含む。１９～２６４位（配列番号１１）に対応する補体因子Ｈの最初の４つのＣＣＰドメイン（すなわちＣＣＰ１～ＣＣＰ４）は、Ｃ３ｂからｉＣ３ｂに切断するための補体因子Ｉ補因子活性に必要かつ十分である。ＣＣＰ１９～２０もまた、Ｃ３ｂおよびＣ３ｄと会合することが示されてきている（Ｍｏｒｇａｎら， Ｎａｔ Ｓｔｒｕｃｔ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ （２０１１） １８（４）：４６３－４７０）一方、ＣＣＰ７およびＣＣＰ１９～２０は、グリコサミノグリカン（ＧＡＧ）およびシアル酸と結合し、そして自己および非自己の間の区別に関与する（Ｓｃｈｍｉｄｔら， Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ （２００８） １８１（４）：２６１０－２６１９； Ｋａｊａｎｄｅｒら， ＰＮＡＳ （２０１１） １０８（７）：２８９７－２９０２）。

補体受容体１（ＣＲ１）構造および機能は、どちらもその全体が本明細書に援用される、ＫｈｅｒａおよびＤａｓ， Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ （２００９） ４６（５）：７６１－７７２、ならびにＪａｃｑｕｅｔら， Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ （２０１３） １９０（７）：３７２１－３７３１に概説される。ヒトＣＲ１（ＵｎｉＰｒｏｔ：Ｐ１７９２７；配列番号１２）は、２，０３９アミノ酸配列（Ｎ末端の４１アミノ酸シグナルペプチドを含む）を有し、そして各々７つのＣＣＰを含む、４つの長鎖相同反復（ＬＨＲ）ドメイン：ＬＨＲ－Ａ、ＬＨＲ－Ｂ、ＬＨＲ－ＣおよびＬＨＲ－Ｄに編成される、Ｎ末端の２８のＣＣＰを含む。ＣＲ１のＣ３ｂ結合領域は、ＬＨＲ－Ｂ中のＣＣＰ８～１０（ＵｎｉＰｒｏｔ：Ｐ１７９２７ ４９１～６８４位；配列番号１３）、およびＬＨＲ－Ｃ中のＣＣＰ１５～１７（ＵｎｉＰｒｏｔ：Ｐ１７９２７ ９４１～１１３４位；配列番号１４）に見出される。

ＣＤ４６（膜補因子タンパク質（ＭＣＰ）とも称される）構造および機能は、例えば、どちらもその全体が本明細書に援用される、ＬｉｓｚｅｗｓｋｉおよびＡｔｋｉｎｓｏｎ， Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｏｍｉｃｓ （２０１５） ９：７、ならびにＬｉｓｚｅｗｓｋｉら， Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ （２０００） ２７５：３７６９２－３７７０１に記載される。ヒトＣＤ４６（ＵｎｉＰｒｏｔ：Ｐ１５５２９；配列番号１５）は、３９２アミノ酸配列（Ｎ末端の３４アミノ酸シグナルペプチドを含む）を有し、そして３０９アミノ酸細胞外ドメイン（ＵｎｉＰｒｏｔ：Ｐ１５５２９ ３５～３４３位）、２３アミノ酸膜貫通ドメイン（ＵｎｉＰｒｏｔ：Ｐ１５５２９ ３４４～３６６位）、および２６アミノ酸細胞質ドメイン（ＵｎｉＰｒｏｔ：Ｐ１５５２９ ３６７～３９２位）を含む。ＣＤ４６の細胞外ドメインは、４つのＣＣＰ： ＣＣＰ１＝３５～９５位、ＣＣＰ２＝９７～１５９位、ＣＣＰ３＝１６０～２２５位、およびＣＣＰ４＝２２６～２８５位を含む。ＣＤ４６のＣ３ｂへの結合および補因子活性は、ＣＣＰ２～４を通じて仲介されることが示されてきている（ＵｎｉＰｒｏｔ：Ｐ１５５２９ ９７～２８５位、配列番号１６； Ｆｏｒｎｅｒｉｓら， ＥＭＢＯ Ｊ ３５（１０）： １１３３－１１４９を参照されたい）。痘瘡ウイルスタンパク質、補体酵素痘瘡阻害剤（Ｓｍａｌｌｐｏｘ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｏｆ Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ Ｅｎｚｙｍｅｓ）（ＳＰＩＣＥ）は、４つのＣＣＰドメインを含み、そして補体因子Ｉに対する補因子活性を示す、ウイルスタンパク質であり（Ｒｏｓｅｎｇａｒｄら， ＰＮＡＳ （２００２） ９９： ８８０８－８８１３）、そしてヒトＣＤ４６に対して、～４０％の配列同一性を有する。

ＣＤ５５（崩壊加速因子（ＤＡＦ）とも称される）構造および機能は、例えば、その全体が本明細書に援用される、Ｂｒｏｄｂｅｃｋら， Ｉｍｍｎｏｌｏｇｙ （２０００） １０１（１）：１０４－１１１に記載される。ヒトＣＤ５５（ＵｎｉＰｒｏｔ：Ｐ０８１７４；配列番号１７）は、３８１アミノ酸配列（Ｎ末端の３４アミノ酸シグナルペプチドを含む）を有し、そして４つのＣＣＰ： ＣＣＰ１＝３５～９６位、ＣＣＰ２＝９６～１６０位、ＣＣＰ３＝１６１～２２２位、およびＣＣＰ４＝２２３～２８５位を含む。ＣＤ５５のＣ３ｂへの結合および補因子活性は、ＣＣＰ２～４を通じて仲介されることが示されてきている（ＵｎｉＰｒｏｔ：Ｐ０８１７４ ９６～２８５位、配列番号１８； Ｆｏｒｎｅｒｉｓら， ＥＭＢＯ Ｊ ３５（１０）：１１３３－１１４９を参照されたい）。

Ｃ４結合タンパク質（Ｃ４ＢＰ）構造および機能は、どちらも、その全体が本明細書に援用される、Ｂｌｏｍら， Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ （２００１） ２７６（２９）：２７１３６－２７１４４およびＦｕｋｕｉら， Ｊ Ｂｉｏｃｈｅｍ （２００２） １３２（５）：７１９－７２８に記載される。ヒトＣ４ＢＰ（ＵｎｉＰｒｏｔ：Ｐ０４００３；配列番号１９）は、５９７アミノ酸配列（Ｎ末端の４８アミノ酸シグナルペプチドを含む）を有し、そして８つのＣＣＰ： ＣＣＰ１＝４９～１１０位、ＣＣＰ２＝１１１～１７２位、ＣＣＰ３＝１７３～２３６位、ＣＣＰ４＝２３７～２９６位、ＣＣＰ５＝２９７～３６２位、ＣＣＰ６＝３６３～４２４位、ＣＣＰ７＝４２５～４８２位、およびＣＣＰ８＝４８３～５４０位を含む。Ｃ３ｂの補体因子Ｉ仲介性不活性化のための補因子活性は、Ｃ４ＢＰのＣＣＰ２～４を必要とすることが示されてきている（ＵｎｉＰｒｏｔ：Ｐ０４００３ １１１～２９６位、配列番号２０； Ｆｕｋｕｉら、上記を参照されたい）。

本明細書において、「補体因子Ｈ」、「補体受容体１（ＣＲ１）」、「ＣＤ４６」、「ＣＤ５５」および「Ｃ４結合タンパク質（Ｃ４ＢＰ）」は、任意の種由来の該タンパク質を指し、そして任意の種由来のタンパク質のアイソフォーム、断片、変異体または相同体を含む。いくつかの態様において、該タンパク質は、哺乳動物（例えばカニクイザル、ヒトおよび／または齧歯類（例えばラットおよび／またはネズミ））のものである。

ＳＰＩＣＥ、ＶＣＰ（またはＶＩＣＥ）、およびＭＯＰＩＣＥとして知られる痘瘡、ワクシニア、およびサル痘のポックスウイルス補体阻害剤は、補体因子Ｉの補因子に相同性を有し、そして例えば、Ｌｉｓｚｅｗｓｋｉら Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ （２００８） １８１（６）：４１９９－４２０７およびＬｉｓｚｅｗｓｋｉら Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ （２００９） １８３（５）：３１５０－３１５９に概説される。ＳＰＩＣＥ、ＶＣＰおよびＭＯＰＩＣＥのアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号２１、配列番号２２および配列番号２３に示される。

補体因子Ｉの補因子のアイソフォーム、断片、変異体または相同体は、随意に、所定の種、例えばヒト由来の未成熟または成熟タンパク質のアミノ酸配列に対して、少なくとも７０％、好ましくは８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の１つのアミノ酸配列同一性を有すると特徴づけられてもよい。補因子のアイソフォーム、断片、変異体または相同体は、随意に、例えば、機能的特性／活性に関する適切なアッセイによる分析によって決定した際、参照タンパク質の機能的特性／活性を有する、機能的アイソフォーム、断片、変異体または相同体であってもよい。例えば、補体因子Ｉの所定の補因子のアイソフォーム、断片、変異体または相同体は、補体因子Ｉに関する補因子活性、例えば、補体因子ＩによるＣ３ｂの不活性化を増強する能力を示してもよい。

断片は、任意の長さ（アミノ酸数で）であってもよいが、随意に、成熟タンパク質の長さの少なくとも２５％であってもよく、そして成熟タンパク質の長さの５０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の１つの最大長を有してもよい。

いくつかの態様において、補体因子Ｈは、配列番号１０に対して、少なくとも７０％、好ましくは８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の１つのアミノ酸配列同一性を有する。いくつかの態様において、補体受容体１は、配列番号１２に対して、少なくとも７０％、好ましくは８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の１つのアミノ酸配列同一性を有する。いくつかの態様において、ＣＤ４６は、配列番号１５に対して、少なくとも７０％、好ましくは８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の１つのアミノ酸配列同一性を有する。いくつかの態様において、ＣＤ５５は、配列番号１７に対して、少なくとも７０％、好ましくは８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の１つのアミノ酸配列同一性を有する。いくつかの態様において、Ｃ４ＢＰは、配列番号１９に対して、少なくとも７０％、好ましくは８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の１つのアミノ酸配列同一性を有する。いくつかの態様において、ＳＰＩＣＥは、配列番号２１に対して、少なくとも７０％、好ましくは８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の１つのアミノ酸配列同一性を有する。いくつかの態様において、ＶＣＰは、配列番号２２に対して、少なくとも７０％、好ましくは８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の１つのアミノ酸配列同一性を有する。いくつかの態様において、ＭＯＰＩＣＥは、配列番号２３に対して、少なくとも７０％、好ましくは８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の１つのアミノ酸配列同一性を有する。

Ｃ３ｂ結合領域
本発明のポリペプチドはＣ３ｂ結合領域を含む。
本明細書において、「Ｃ３ｂ結合領域」は、Ｃ３ｂに結合可能な領域を指す。いくつかの態様において、Ｃ３ｂ結合領域は、Ｃ３ｂに特異的に結合可能である。Ｃ３ｂへの結合は、Ｃ３ｂ結合領域およびＣ３ｂの間で形成される、非共有相互作用、例えばファンデルワールス力、静電相互作用、水素結合、および疎水性相互作用によって仲介されてもよい。いくつかの態様において、Ｃ３ｂ結合領域は、Ｃ３ｂ以外の分子に結合するよりも、より大きなアフィニティ、および／またはより長い期間、Ｃ３ｂに結合する。

ＥＬＩＳＡ、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ；例えば、Ｈｅａｒｔｙら， Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ （２０１２） ９０７：４１１－４４２；またはＲｉｃｈら， Ａｎａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ． ２００８ Ｆｅｂ １； ３７３（１）：１１２－２０を参照されたい）、バイオレイヤー干渉法（例えば、Ｌａｄら， （２０１５） Ｊ Ｂｉｏｍｏｌ Ｓｃｒｅｅｎ ２０（４）：４９８－５０７；またはＣｏｎｃｅｐｃｉｏｎら， Ｃｏｍｂ Ｃｈｅｍ Ｈｉｇｈ Ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ Ｓｃｒｅｅｎ． ２００９ Ｓｅｐ； １２（８）：７９１－８００を参照されたい）、マイクロスケール熱泳動（ＭＳＴ）分析（例えば、Ｊｅｒａｂｅｋ－Ｗｉｌｌｅｍｓｅｎら， Ａｓｓａｙ Ｄｒｕｇ Ｄｅｖ Ｔｅｃｈｎｏｌ． ２０１１ Ａｕｇ； ９（４）： ３４２－３５３を参照されたい）を含む、当業者に周知の技術を用いて、あるいは放射標識抗原結合アッセイ（ＲＩＡ）によって、推定上のＣ３ｂ結合領域がＣ３ｂに結合する能力を分析してもよい。こうした分析を通じて、所定のターゲットに対する結合を決定し、そして定量化してもよい。いくつかの態様において、結合は、所定のアッセイにおいて検出される反応であってもよい。

いくつかの態様において、こうしたアッセイにおいて、Ｃ３ｂ結合領域は、こうしたアッセイにおいて検出される、該領域が結合しない陰性対照分子に対する結合シグナルのレベルの１倍より高く、例えば、＞１．０１、＞１．０２、＞１．０３、＞１．０４、＞１．０５、＞１．０６、＞１．０７、＞１．０８、＞１．０９、＞１．１、＞１．２、＞１．３、＞１．４、＞１．５、＞１．６、＞１．７、＞１．８、＞１．９、＞２、＞３、＞４、＞５、＞６、＞７、＞８、＞９、＞１０、＞１５、＞２０、＞２５、＞３０、＞３５、＞４０、＞４５、＞５０、＞６０、＞７０、＞８０、＞９０、または＞１００倍の１つである、Ｃ３ｂへの結合を示す。

いくつかの態様において、Ｃ３ｂ結合領域は、所定のアッセイにおいて、補体因子Ｉの補因子（またはその断片）によって示される、Ｃ３ｂへの結合のアフィニティに類似である結合アフィニティで、Ｃ３ｂに結合可能である。結合の参照アフィニティに類似の結合アフィニティは、例えば、匹敵するアッセイにおける、補体因子Ｉの参照補因子によって示されるＣ３ｂへの結合レベルの±４０％、例えば該結合レベルの±３５％、±３０％、±２５％、±２０％、±１５％、±１０％または±５％の１つであってもよい。

Ｃ３ｂ結合領域は、例えば、Ｃ３ｂに結合可能な核酸またはアミノ酸配列を含んでもよいし、またはこうした配列からなってもよい。いくつかの態様において、Ｃ３ｂ結合領域は、Ｃ３ｂに結合可能な核酸アプタマーを含むかまたは該アプタマーからなる。いくつかの態様において、Ｃ３ｂ結合領域は、Ｃ３ｂに結合可能なアミノ酸配列を含むかまたは該配列からなる。いくつかの態様において、Ｃ３ｂに結合可能なアミノ酸配列は、Ｃ３ｂ結合アプタマー、またはＣ３ｂ結合抗体、またはＣ３ｂ結合抗原結合断片（例えばＣ３結合ｓｃＦｖ、ミニボディ、Ｆａｂ等）のアミノ酸配列を含むかまたは該配列からなる。Ｃ３ｂに結合可能な核酸およびペプチドアプタマーならびに抗体／断片は、当該技術分野に知られ、そしてＣ３ｂ結合核酸／ペプチドアプタマーおよび抗体／断片を、当業者に周知の方法によって産生してもよい。例えば、核酸およびペプチドアプタマーの選択および産生のための方法は、例えば、Ｙｕｅｃｅら， Ａｎａｌｙｓｔ （２０１５） １４０（１６）：５３７９－９９に記載され、そして抗体／断片を生成するための方法は、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ， 第２版， ２０１４； Ｅｄｗａｒｄ Ａ． Ｇｒｅｅｎｆｉｅｌｄ， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓに記載される。

いくつかの態様において、本発明記載のポリペプチドのＣ３ｂ結合領域は、補体因子Ｉの補因子によって結合される領域で、Ｃ３ｂに結合可能である（すなわち同じ領域または重複する領域に結合する）。いくつかの態様において、本発明記載のポリペプチドのＣ３ｂ結合領域は、補体因子Ｈ、ＣＲ１、ＣＤ４６、ＣＤ５５、Ｃ４ＢＰ、ＳＰＩＣＥ、ＶＣＰ、またはＭＯＰＩＣＥの１またはそれより多くに結合されるＣ３ｂの領域で、Ｃ３ｂに結合可能である。

いくつかの態様において、本発明記載のポリペプチドのＣ３ｂ結合領域は、補体因子Ｈによって結合されるＣ３ｂの領域で、Ｃ３ｂに結合可能である。いくつかの態様において、Ｃ３ｂ結合領域は、補体因子Ｈ ＣＣＰ１～４（配列番号１１）によって結合されるＣ３ｂの領域で、Ｃ３ｂに結合可能である。

Ｃ３ｂ結合領域が、補体因子Ｉの所定の補因子（またはその断片）によって結合されるＣ３ｂの領域で、Ｃ３ｂに結合するかどうかを、ＥＬＩＳＡ、および表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）分析を含む、当業者に知られる多様な方法によって決定してもよい。Ｃ３ｂ結合領域が、補体因子Ｉの所定の補因子（またはその断片）によって結合される領域で、Ｃ３ｂに結合するかどうかを決定する、適切なアッセイの例は、競合ＥＬＩＳＡアッセイである。

例えば、Ｃ３ｂ結合領域が、補体因子Ｉの所定の補因子（またはその断片）によって結合されるＣ３ｂの領域で、Ｃ３ｂに結合するかどうかを、補因子／断片およびＣ３ｂの一方または両方と、Ｃ３ｂ結合領域を含む／からなるペプチド／ポリペプチドの存在下で、またはこれらのインキュベーション後、補因子／断片とＣ３ｂの相互作用の分析によって決定してもよい。所定の補因子／断片によって結合されるＣ３ｂの領域で、Ｃ３ｂに結合する、Ｃ３ｂ結合領域を、Ｃ３ｂ結合領域の非存在下（または適切な対照ペプチド／ポリペプチドの存在下）での相互作用レベルに比較した際の、Ｃ３ｂ結合領域の存在下で、あるいは一方または両方の相互作用パートナーとＣ３ｂ結合領域のインキュベーション後、補因子／断片およびＣ３ｂの間の相互作用レベルの低下／減少の観察によって同定する。例えば、組換え相互作用パートナーを用いて、適切な分析をｉｎ ｖｉｔｒｏで行ってもよい。こうしたアッセイの目的のため、相互作用レベルを検出しそして／または測定する目的のために、相互作用パートナーの一方または両方および／または所定のＣ３ｂ結合領域を含む／からなるペプチド／ポリペプチドを標識するか、あるいは検出可能実体と組み合わせて用いてもよい。

いくつかの態様において、Ｃ３ｂ結合領域は、補体因子Ｉの補因子として作用する。補体因子Ｉの補因子は、補体因子ＩによるＣ３ｂの切断を増強する。補体因子Ｉの補因子は、例えば補体因子Ｉによるタンパク質分解的切断に好ましい配向で、Ｃ３ｂを提示してもよい。Ｃ３ｂ結合領域は、好ましくは、補体因子ＩによるＣ３ｂのタンパク質分解的切断を阻害しない。

例えば、Ｃ３ｂ結合領域の非存在下（または適切な対照ペプチド／ポリペプチドの存在下）での補体因子ＩによるＣ３ｂのタンパク質分解的切断のレベルまたは速度に比較した際の、Ｃ３ｂ結合領域を含む/からなるペプチド/ポリペプチドの存在下で（またはこれらとのインキュベーション後）、適切なアッセイにおいて、補体因子ＩによるＣ３ｂのタンパク質分解的切断のレベルまたは速度の分析によって、補体因子Ｉの補因子として作用するＣ３ｂ結合領域を決定してもよい。Ｃ３ｂ結合領域を含む／からなるペプチド／ポリペプチドの存在下で（またはこれらとのインキュベーション後）、補体因子ＩによるＣ３ｂのタンパク質分解的切断のレベルまたは速度の増加の検出によって、補体因子Ｉの補因子として作用するＣ３ｂ結合領域を同定する。例えば、補体因子ＩによるＣ３ｂの切断の１つまたはそれより多い産物、例えばｉＣ３ｂまたはＣ３ｆの検出によって、補体因子ＩによるＣ３ｂのタンパク質分解のレベルまたは速度を決定してもよい。

いくつかの態様において、本発明記載のポリペプチドのＣ３ｂ結合領域は、補体因子Ｈ、ＣＲ１、ＣＤ４６、ＣＤ５５、Ｃ４ＢＰ、ＳＰＩＣＥ、ＶＣＰ、またはＭＯＰＩＣＥの１つまたはそれより多くのＣ３ｂ結合領域を含む。いくつかの態様において、ポリペプチドのＣ３ｂ結合領域は、補体因子ＨまたはＣＲ１のＣ３ｂ結合領域を含む。

いくつかの態様において、本発明記載のポリペプチドのＣ３ｂ結合領域は、配列番号１１、１３、１４、１６、１８、２０、２１、２２または２３の１つのアミノ酸配列に対して、少なくとも６０％、例えば少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の１つの配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたは該配列からなる。

いくつかの態様において、本発明記載のポリペプチドのＣ３ｂ結合領域は、配列番号１１の１つのアミノ酸配列に対して、少なくとも６０％、例えば少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の１つの配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたは該配列からなる。いくつかの態様において、本発明記載のポリペプチドのＣ３ｂ結合領域は、アミノ酸配列、配列番号１１を含むかまたは該配列からなる。

いくつかの態様において、本発明記載のポリペプチドのＣ３ｂ結合領域は、配列番号１３の１つのアミノ酸配列に対して、少なくとも６０％、例えば少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の１つの配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたは該配列からなる。いくつかの態様において、本発明記載のポリペプチドのＣ３ｂ結合領域は、アミノ酸配列、配列番号１３を含むかまたは該配列からなる。

いくつかの態様において、本発明記載のポリペプチドのＣ３ｂ結合領域は、配列番号１４の１つのアミノ酸配列に対して、少なくとも６０％、例えば少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の１つの配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたは該配列からなる。いくつかの態様において、本発明記載のポリペプチドのＣ３ｂ結合領域は、アミノ酸配列、配列番号１４を含むかまたは該配列からなる。

Ｃ３ｂ不活性化領域
本発明のポリペプチドは、Ｃ３ｂ不活性化領域を含む。
本明細書において、「Ｃ３ｂ不活性化領域」は、Ｃ３ｂの生物学的機能を減少させるかまたは防止することが可能な領域を指す。Ｃ３ｂ不活性化領域は、Ｃ３ｂに結合可能であり、そして／またはＣ３ｂの構造に物理的変化を引き起こすことも可能である。

いくつかの態様において、Ｃ３ｂ不活性化領域は、以下の１つまたはそれより多くが可能である：機能性Ｃ３ｂＢｂ型Ｃ３転換酵素形成の減少／防止；機能性Ｃ４ｂ２ａ３ｂ型Ｃ５転換酵素形成の減少／防止；機能性Ｃ３ｂＢｂ３ｂ型Ｃ５転換酵素形成の減少／防止；Ｃ３ｂＢｂ型Ｃ３転換酵素活性の減少；Ｃ４ｂ２ａ３ｂ型Ｃ５転換酵素活性の減少；Ｃ３ｂＢｂ３ｂ型Ｃ５転換酵素活性の減少；Ｃ３ｂＢｂ型Ｃ３転換酵素量の減少；Ｃ３ｂＢｂ３ｂ型Ｃ５転換酵素量の減少；Ｃ４ｂ２ａ３ｂ型Ｃ５転換酵素量の減少；Ｃ３ｂ量の減少；ｉＣ３ｂ量の増加；Ｃ３ｆ量の増加；Ｃ３ｄｇ量の増加；Ｃ３ｄ量の増加；Ｃ５ｂ量の減少；Ｃ５ａ量の減少。

適切なアッセイにおける、転換酵素量および／または転換酵素活性の分析によって、推定上のＣ３ｂ不活性化領域が、機能性転換酵素形成を減少させる／防止するか、あるいは転換酵素量を減少させる能力を分析してもよい。例えば、推定上のＣ３ｂ不活性化領域を含む／からなるペプチド／ポリペプチドの存在下で、または該ペプチド／ポリペプチドとのインキュベーション後、転換酵素量および／または転換酵素活性を分析してもよい。推定上のＣ３ｂ結合領域の非存在下（または適切な対照ペプチド／ポリペプチドの存在下）での、転換酵素レベルおよび／または転換酵素活性と比較した際の、推定上のＣ３ｂ不活性化領域の存在下での、または該領域とのインキュベーション後の、転換酵素レベルおよび／または転換酵素活性の低下／減少の観察によって、Ｃ３ｂ不活性化領域を同定する。適切な読み取り、例えば転換酵素活性の産物を用いて、転換酵素レベル／転換酵素活性を検出してもよい。

例えば、当業者に周知の抗体に基づく方法、例えばウェスタンブロット、ＥＬＩＳＡ、質量分析またはレポーターに基づく方法によって、所定の転換酵素、Ｃ３ｂ、ｉＣ３ｂ、Ｃ３ｄｇ、Ｃ３ｄ、Ｃ３ｆ、Ｃ５ｂまたはＣ５ａの量を分析してもよい。

例えば組換え的に産生されていてもよい適切な因子を用いて、適切な分析をｉｎ ｖｉｔｒｏで行ってもよい。
いくつかの態様において、Ｃ３ｂ不活性化領域は、Ｃ３ｂを不可逆的に不活性化することが可能である。いくつかの態様において、Ｃ３ｂ不活性化領域は、Ｃ３ｂをタンパク質分解的に切断することが可能である。いくつかの態様において、Ｃ３ｂ不活性化領域は、セリンプロテアーゼ活性を示す。いくつかの態様において、Ｃ３ｂ不活性化領域は、Ｃ３ｂをタンパク質分解的に切断して、ｉＣ３ｂおよびＣ３ｆを形成することが可能である。いくつかの態様において、Ｃ３ｂ不活性化領域は、残基１３０３および／または１３２０で、Ｃ３ｂのＣ３ α’鎖を切断することが可能である。

切断が起こるために適切な条件下で、そして適切な時間量で、推定上のＣ３ｂ不活性化領域を含む／からなるペプチド／ポリペプチドと、組換えＣ３ｂをインキュベーションして、そして続いてｉＣ３ｂおよび／またはＣ３ｆを検出することによって、推定上のＣ３ｂ不活性化領域が、Ｃ３ｂを切断して、ｉＣ３ｂおよびＣ３ｆを形成する能力を分析してもよい。

例えば、本明細書にその全体が援用される、Ｃｌａｒｋら Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ （２０１４） １９３， ４９６２－４９７０に記載される方法によって、推定上のＣ３ｂ不活性化領域がＣ３ｂを切断する能力を分析してもよい。

いくつかの態様において、本発明記載のポリペプチドのＣ３ｂ不活性化領域は、補体因子ＩのＣ３ｂ不活性化領域を含む。
いくつかの態様において、本発明記載のポリペプチドのＣ３ｂ不活性化領域は、配列番号９の１つのアミノ酸配列に対して、少なくとも６０％、例えば少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の１つの配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたは該配列からなる。いくつかの態様において、本発明記載のポリペプチドのＣ３ｂ不活性化領域は、アミノ酸配列、配列番号９を含むかまたは該配列からなる。

ポリペプチドのさらなる特徴
いくつかの態様において、本発明のポリペプチドは、Ｃ３ｂ結合領域およびＣ３ｂ不活性化領域の間にリンカーを含んでもよい。連結されたＣ３ｂ結合領域およびＣ３ｂ不活性化領域は、単一ポリペプチドとして好適に発現され、そしてしたがって、その相補的活性は共局在する。

リンカーは、好適には、ポリペプチドの効率的な発現および／または拡散を提供するために十分に短い一方、これらがそれぞれの機能を実行可能であるように、すなわちＣ３ｂ結合領域がＣ３ｂに結合可能であり、そしてＣ３ｂ不活性化領域がＣ３ｂを不活性化可能であるように、（リンカーの長さおよび／または組成を通じて）領域間の連結の柔軟性の度合いを保持するように設計される。リンカーは、アミノ酸配列を含むかまたは該配列からなってもよく、そしてＣ３ｂ結合領域およびＣ３ｂ不活性化領域のアミノ酸配列の末端に（例えばペプチド結合によって）共有結合されていてもよい。

リンカーはペプチドまたはポリペプチドリンカーであってもよい。リンカーは柔軟なリンカーであってもよい。柔軟なリンカーのアミノ酸配列は、当業者に知られ、そして例えば、その全体が本明細書に援用される、Ｃｈｅｎら， Ａｄｖ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ Ｒｅｖ （２０１３） ６５（１０）：１３５７－１３６９に記載される。いくつかの態様において、柔軟なリンカーの配列は、セリンおよびグリシン残基を含む。いくつかの態様において、リンカーは、１～１００、１～５０、１～２０、１～１０または１～５アミノ酸残基のアミノ酸配列からなるペプチド／ポリペプチドである。

いくつかの態様において、リンカーは、モチーフＧＧＧＧＳ（配列番号４５）；すなわち「Ｇ_４Ｓ」の１つまたはそれより多いコピーを含む。いくつかの態様において、リンカーは、配列番号４５の少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、少なくとも６つ、少なくとも７つまたは少なくとも８つのコピーを含む。

好適には、Ｃ３ｂ結合領域およびＣ３ｂ不活性化領域の連結は、Ｃ３ｂの効率的な捕捉および不活性化を提供する。
本発明のポリペプチドの他の領域の間に、さらなるリンカーを提供してもよい。

例えば産生、半減期、最大濃度等を分析するため、ｉｎ ｖｉｖｏで剤を追跡し、検出し、そしてそのレベルおよび位置を定量化することが可能な療法剤を開発することが好適である。したがって、本発明のポリペプチドの検出を容易にする部分の包含は、例えば内因性タンパク質（例えば内因性補体因子Ｈおよび／または補体因子Ｉの内因性補因子）からポリペプチドを区別可能にするために有用である。

本明細書において、「内因性」タンパク質／ペプチドは、（本発明記載のポリペプチド、核酸、ベクター、細胞または薬学的組成物での治療前に）関連する細胞タイプ、組織、または被験体によってコードされ／発現されている、タンパク質／ペプチドを指す。「非内因性」タンパク質／ペプチドは、（本発明記載のポリペプチド、核酸、ベクター、細胞または薬学的組成物での治療前に）関連する細胞タイプ、組織、または被験体によってコードされていない／発現されていない、タンパク質／ペプチドを指す。

したがって、いくつかの態様において、本発明のポリペプチドは、例えばポリペプチドを含有する生物学的試料において、ポリペプチドの検出を容易にするアミノ酸配列（本明細書において、以後、「検出配列」と称される）を含む。いくつかの態様において、検出配列は、例えば、本発明記載のポリペプチド、核酸、ベクター、細胞または薬学的組成物を、被験体に投与した後、被験体から得た試料において、ポリペプチドの検出を容易にするアミノ酸配列を含むかまたは該配列からなる。

例えば、いくつかの態様において、検出配列は、内因性ヒトＣ３ｂ結合タンパク質および／または内因性ヒトＣ３ｂ不活性化タンパク質に存在しないアミノ酸配列を含むかまたは該配列からなる。いくつかの態様において、検出配列は、内因性ヒトタンパク質に存在しないアミノ酸配列を含むかまたは該配列からなる。

いくつかの態様において、検出配列は、酵素、例えばタンパク質分解酵素で処理した試料において、ポリペプチドの検出を容易にする。いくつかの態様において、検出配列は、プロテアーゼの切断部位を含むかまたは該部位からなる。いくつかの態様において、検出配列は、プロテアーゼでの処理後、非内因性ペプチドの生成を提供する（ここで、「非内因性ペプチド」は、関連する宿主細胞／組織／被験体によって内因性に産生されないペプチドを指す）。この方式で、本発明のポリペプチドは、内因性タンパク質（例えばＣ３ｂ結合タンパク質および／または内因性Ｃ３ｂ不活性化タンパク質）から区別されることも可能であり、そしてしたがって、検出され、そして定量化されることも可能である。

いくつかの態様において、検出配列は、トリプシンペプチドの生成を提供し、それによってトリプシンで処理された試料におけるポリペプチドの検出を容易にする。
いくつかの態様において、検出配列は、ポリペプチドのリンカーに含まれる。いくつかの態様において、検出配列は、リンカーに隣接する（すなわち、リンカーのＮまたはＣ末端の１～５、１～１０、１～１５、１～２０または１～３０アミノ酸残基以内）。いくつかの態様において、検出配列は、本発明のポリペプチドの１つまたはそれより多い他の領域、例えばＣ３ｂ結合領域、リンカー、Ｃ３ｂ不活性化領域等の１つまたはそれより多いアミノ酸を含んでもよい。

例えば、配列番号３２、３３および３４に示す本発明の例示的なポリペプチドは、アルギニン残基を含むリンカーを含み、トリプシンでのポリペプチドの切断に際して、２つの特異的ペプチド：ＧＤＡＶＣＴＥＳＧＷＲＰＬＰＳＣＥＥＧＧＧＧＳＲ（配列番号４６）、およびＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＩＶＧＧＫ（配列番号４７）の生成を提供する。

いくつかの態様において、リンカーは、配列番号２４のアミノ酸配列を含むかまたは該配列からなるペプチド／ポリペプチドである。いくつかの態様において、リンカーは、配列番号４８のアミノ酸配列を含むかまたは該配列からなるペプチド／ポリペプチドである。いくつかの態様において、リンカーは、配列番号６７のアミノ酸配列を含むかまたは該配列からなるペプチド／ポリペプチドである。いくつかの態様において、リンカーは、配列番号６８のアミノ酸配列を含むかまたは該配列からなるペプチド／ポリペプチドである。

いくつかの態様において、ポリペプチドは、Ｃ３ｂ結合領域以外の補体因子Ｉの補因子（例えば補体因子Ｈ、ＣＲ１、ＣＤ４６、ＣＤ５５、Ｃ４ＢＰ、ＳＰＩＣＥ、ＶＣＰ、またはＭＯＰＩＣＥ）の領域に対して、実質的な配列同一性を有するアミノ酸配列を欠いてもよい。すなわち、いくつかの態様において、ポリペプチドは、補体因子Ｉの補因子のＣ３ｂ結合領域以外の、補体因子Ｉの補因子のアミノ酸配列に対応するアミノ酸配列を欠く。

本明細書において、参照アミノ酸配列に対応するアミノ酸配列は、典型的には、参照配列に対して、少なくとも６０％、例えば少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の１つの配列同一性を含む。

ポリペプチドが、Ｃ３ｂ結合機能以外の補体因子Ｉの補因子の特定の特性を欠くことが望ましい可能性もある。例えば、そうでなければ、ブルッフ膜（ＢｒＭ）を通じた拡散を阻害するか、または天然補因子ファミリータンパク質の作用に干渉するか、またはそうでなければ病原性細菌によって利用されて、宿主免疫系を破壊しうる領域を、ポリペプチドが欠くことが望ましい可能性もある。

いくつかの態様において、本発明のポリペプチドは、ＣＣＰ６～８をコードする補体因子Ｈのアミノ酸配列に対応するアミノ酸配列を欠く。いくつかの態様において、ポリペプチドは、配列番号３９に対応するアミノ酸配列を欠く。

いくつかの態様において、本発明のポリペプチドは、ＣＣＰ１９～２０をコードする補体因子Ｈのアミノ酸配列に対応するアミノ酸配列を欠く。いくつかの態様において、ポリペプチドは、配列番号４０に対応するアミノ酸配列を欠く。

いくつかの態様において、本発明のポリペプチドは、補体因子ＨのＣ３ｂ結合領域以外の、補体因子Ｈのアミノ酸配列に対応するアミノ酸配列を欠く。いくつかの態様において、ポリペプチドは、配列番号２５に対応するアミノ酸配列を欠く。

いくつかの態様において、本発明のポリペプチドは、Ｃ３ｂ結合領域以外の、補体因子ＨアイソフォームＦＨＬ－１のアミノ酸配列に対応するアミノ酸配列を欠く。いくつかの態様において、ポリペプチドは、配列番号４１に対応する配列を欠く。

いくつかの態様において、ポリペプチドは、タンパク質分解ドメイン以外の、補体因子Ｉに対して実質的な配列同一性を有するアミノ酸配列を欠いてもよい。すなわち、いくつかの態様において、ポリペプチドは、タンパク質分解ドメイン以外の補体因子Ｉのアミノ酸配列に対応するアミノ酸配列を欠く。いくつかの態様において、ポリペプチドは、配列番号２６に対応するアミノ酸配列を欠く。

いくつかの態様において、本発明のポリペプチドは、３００～１０００アミノ酸、例えば３５０～９００、４００～８５０、４５０～８００、５００～７５０アミノ酸の１つからなる。

いくつかの態様において、本発明のポリペプチドは、グリコシル化のための１つまたはそれより多い部位を欠く。いくつかの態様において、本発明のポリペプチドは、Ｎ連結グリコシル化のための１つまたはそれより多い部位を欠く。いくつかの態様において、ポリペプチドは、Ｎ連結グリカンを欠く。いくつかの態様において、ポリペプチドは、非グリコシル化（ａｇｌｙｃｏｓｙｌ）されている（すなわち、グリコシル化されていない）。いくつかの態様において、ポリペプチドは、例えばグリコシダーゼ（例えばペプチドＮグリコシダーゼ）での処理によって脱グリコシル化されている。脱グリコシル化は、好ましくは非変性性である。

Ｆｅｎａｉｌｌｅら， Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ （２００７） １７（９）９３２－９４４は、補体因子Ｈの２１７位（ＵｎｉＰｒｏｔ：Ｐ０８６０３にしたがった番号付け、配列番号１０に示す）のアスパラギンが、２２０位（ＵｎｉＰｒｏｔ：Ｐ０８６０３にしたがった番号付け）のプロリン残基の存在のため、グリコシル化されないことを報告する。

いくつかの態様において、ポリペプチドは、配列番号６６のコンセンサス配列に一致する配列を欠く。いくつかの態様において、Ｃ３ｂ結合領域およびＣ３ｂ不活性化領域の１つまたはそれより多くは、配列番号６６のコンセンサス配列に一致する配列を欠く。いくつかの態様において、ポリペプチドは、Ｃ３ｂ結合領域および／またはＣ３ｂ不活性化領域を含み、ここで、配列番号６６のコンセンサス配列に一致する１つまたはそれより多くの配列が、Ｎグリコシル化のための部位を除去するように突然変異されている。

いくつかの態様において、ポリペプチドは、配列番号２７のコンセンサス配列に一致する配列を欠く。いくつかの態様において、Ｃ３ｂ結合領域およびＣ３ｂ不活性化領域の１つまたはそれより多くは、配列番号２７のコンセンサス配列に一致する配列を欠く。いくつかの態様において、ポリペプチドは、Ｃ３ｂ結合領域および／またはＣ３ｂ不活性化領域を含み、ここで、配列番号２７のコンセンサス配列に一致する１つまたはそれより多くの配列が、Ｎグリコシル化のための部位を除去するように突然変異されている。

いくつかの態様において、Ｃ３ｂ不活性化領域は、配列番号２７のコンセンサス配列に一致する配列を欠く。いくつかの態様において、Ｃ３ｂ不活性化領域は、配列番号９の１つのアミノ酸配列に対して、少なくとも６０％、例えば少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の１つの配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたは該配列からなり、ここでＣ３ｂ不活性化領域は、置換Ｎ４６４Ｑ、Ｎ４９４Ｑ、およびＮ５３６Ｑ（ＵｎｉＰｒｏｔ：Ｐ０５１５６にしたがった番号付け）を含む。

いくつかの態様において、本発明のポリペプチドは、分泌経路配列をさらに含んでもよい。本明細書において、分泌経路配列は、ポリペプチドの分泌を指示するアミノ酸配列である。分泌経路配列は、粗面小胞体を渡るポリペプチド鎖の搬出が開始されたら、成熟タンパク質から切断されてもよい。哺乳動物細胞によって分泌されるポリペプチドは、一般的に、ポリペプチドのＮ末端に融合したシグナルペプチドを有し、これは、翻訳されたポリペプチドから切断されて、ポリペプチドの「成熟」型を産生する。

いくつかの態様において、分泌経路配列は、グリコシル化のための１つまたはそれより多い部位を含む。いくつかの態様において、分泌経路配列はグリコシル化されている。いくつかの態様において、分泌経路配列は、Ｎ連結グリコシル化のための１つまたはそれより多い部位を含む。いくつかの態様において、分泌経路配列は、配列番号２７のコンセンサス配列に一致する１つまたはそれより多い配列を含む。

いくつかの態様において、分泌経路配列は、リーダー配列（シグナルペプチドまたはシグナル配列としてもまた知られる）を含んでもよいしまたは該配列からなってもよい。リーダー配列は、通常、単一のアルファ螺旋を形成する、５～３０の疎水性アミノ酸の配列からなる。分泌されるタンパク質および細胞表面で発現されるタンパク質は、しばしば、リーダー配列を含む。リーダー配列は、新規に翻訳されたポリペプチド（例えばリーダー配列を除去するプロセシングの前）に存在しうる。リーダー配列は、多くのタンパク質に関して知られ、そしてＧｅｎＢａｎｋ、ＵｎｉＰｒｏｔ、Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ、ＴｒＥＭＢＬ、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ Ｒｅｓｏｕｒｃｅ、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄａｔａ Ｂａｎｋ、Ｅｎｅｍｂｌ、およびＩｎｔｅｒＰｒｏなどのデータベースに記録され、そして／または例えばＳｉｇｎａｌＰ（Ｐｅｔｅｒｓｅｎら， ２０１１ Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｔｈｏｄｓ ８： ７８５－７８６）またはＳｉｇｎａｌ－ＢＬＡＳＴ（ＦｒａｎｋおよびＳｉｐｐｌ， ２００８ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ２４： ２１７２－２１７６）などのアミノ酸配列分析ツールを用いて、同定／予測可能である。

いくつかの態様において、本発明のポリペプチドは、ポリペプチドから分泌経路配列を除去するための切断部位をさらに含んでもよい。いくつかの態様において、ポリペプチドから分泌経路配列を除去するための切断部位は、エンドプロテアーゼの切断部位である。いくつかの態様において、切断部位は、ポリペプチドが発現される細胞によって発現されるエンドプロテアーゼのものである。いくつかの態様において、切断部位は、シグナルペプチダーゼ切断部位である。いくつかの態様において、切断部位は、プロテアーゼ切断部位、例えばポリペプチドを発現する細胞によって発現されるエンドプロテアーゼの切断部位である。いくつかの態様において、切断部位は、ＲＰＥ細胞によって発現されるエンドプロテアーゼの切断部位である。いくつかの態様において、切断部位は、フーリン・エンドプロテアーゼ切断部位である。いくつかの態様において、ポリペプチドから分泌経路配列を除去するための切断部位は、配列番号２８または２９のコンセンサス配列に一致する配列を含むかまたは該配列からなる。

いくつかの態様において、本発明のポリペプチドは、さらなる機能性アミノ酸配列を含んでもよい。例えば、ポリペプチドは、ポリペプチドの発現、フォールディング、輸送、プロセシング、精製または検出を容易にするアミノ酸配列（単数または複数）を含んでもよい。例えば、ポリペプチドは、タンパク質タグ、例えばＨｉｓ（例えば６ＸＨｉｓ；配列番号３０）、ＦＬＡＧ、Ｍｙｃ、ＧＳＴ、ＭＢＰ、ＨＡ、Ｅ、またはビオチンタグをコードする配列を、随意に：ポリペプチドのＮまたはＣ末端に；リンカー中に；あるいはリンカーのＮまたはＣ末端に、含んでもよい。

いくつかの態様において、本発明のポリペプチドは、タンパク質タグを除去するための切断部位をさらに含んでもよい。例えば、精製後、ポリペプチドの精製のために用いたタグを除去することが望ましい可能性もある。いくつかの態様において、切断部位は、例えばタバコエッチウイルス（ＴＥＶ）プロテアーゼ切断部位、例えば配列番号３１に示すようなものであってもよい。

本明細書において、「ポリペプチド」には、複合体に（例えば共有的にまたは非共有的に）会合していてもよい、１つより多いポリペプチド鎖を含む分子が含まれる。すなわち、本発明の意味内の「ポリペプチド」は、１つまたはそれより多いポリペプチド鎖を含む分子を含む。例えば、いくつかの態様において、ポリペプチドは、多数のポリペプチド鎖の複合体であってもよい。

本発明のポリペプチドは、異なる領域の特定の組み合わせおよび相対配置で提供されてもよい。
いくつかの態様において、本発明のポリペプチドは、以下の１つにしたがった相対配置で提供されてもよい：
Ｎ末端－［Ｃ３ｂ結合領域］－［リンカー領域］－［Ｃ３ｂ不活性化領域］－Ｃ末端
Ｎ末端－［分泌経路配列］－［エンドプロテアーゼ切断部位］－［Ｃ３ｂ結合領域］－［リンカー領域］－［Ｃ３ｂ不活性化領域］－Ｃ末端。

本発明のポリペプチドは、多様な異なる態様において、そしてｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏの発現／産生の異なる段階で、例えばシグナルペプチド、タンパク質タグ、その除去のための切断部位等を含んでもよい。

本発明のポリペプチドは、本明細書記載の任意のＣ３ｂ結合領域、および本明細書記載の任意のＣ３ｂ不活性化領域を、随意に、本明細書記載の本発明のポリペプチドの任意のさらなる特徴（例えばシグナルペプチド、リンカー、検出配列、タンパク質タグ、タンパク質タグを除去するための切断部位、分泌経路配列、分泌経路配列を除去するための切断部位）の１つまたはそれより多くと組み合わせて含んでもよい。

本発明のポリペプチドの特定の例示的態様の領域を、以下の表に要約する。

いくつかの態様において、本発明記載のポリペプチドは、配列番号３２、３３、３４、３５、３６、３７、４９または６９のアミノ酸配列に対して、少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたは該配列からなる。

いくつかの態様において、本発明記載のポリペプチドは、配列番号５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、７０、７１、７２または７３のアミノ酸配列に対して、少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたは該配列からなる。

ポリペプチドの機能特性
本発明のポリペプチドは、１つまたはそれより多い機能特性を参照することによって特徴づけられてもよい。

特に、本発明記載のポリペプチドは、以下の特性の１つまたはそれより多くを所持してもよい（前記特性に関する適切なアッセイにおける分析によって決定されるように）：
Ｃ３ｂへの結合；
補体因子Ｉの補因子（またはその断片）によって示される、Ｃ３ｂへの結合のアフィニティに類似である結合アフィニティでのＣ３ｂへの結合；
補体因子Ｉの補因子（またはその断片）によって結合されるＣ３ｂ領域でのＣ３ｂへの結合；
Ｃ３ｂの不活性化；
機能性Ｃ３ｂＢｂ型Ｃ３転換酵素の形成の減少／防止；
機能性Ｃ３Ｂｂ３ｂ型Ｃ５転換酵素の形成の減少／防止；
機能性Ｃ４ｂ２ａ３ｂ型Ｃ５転換酵素の形成の減少／防止；
Ｃ３ｂＢｂ型Ｃ３転換酵素活性の減少；
Ｃ３ｂＢｂ３ｂ型Ｃ５転換酵素活性の減少；
Ｃ４ｂ２ａ３ｂ型Ｃ５転換酵素活性の減少；
Ｃ３ｂＢｂ型Ｃ３転換酵素量の減少；
Ｃ３ｂＢｂ３ｂ型Ｃ５転換酵素量の減少；
Ｃ４ｂ２ａ３ｂ型Ｃ５転換酵素量の減少；
Ｃ３ｂ量の減少；
ｉＣ３ｂ量の増加；
Ｃ３ｄｇ量の増加；
Ｃ３ｄ量の増加；
Ｃ３ｆ量の増加；
Ｃ５ｂ量の減少；
Ｃ５ａ量の減少。

所定のポリペプチドが、先の段落に言及した機能特性を所持するかどうかを、例えば本明細書で上に記載するように分析してもよい。
いくつかの態様において、本発明記載のポリペプチドは、こうした特性に関する適切なアッセイにおける分析によって決定されるように、ブルッフ膜（ＢｒＭ）を通じて拡散する能力を所持する。

ブルッフ膜（ＢｒＭ）は、網膜および脈絡膜の間に位置する、薄い（２～４μｍ）無細胞の５層細胞外マトリックスであり、前方の鋸状縁に伸長している。ブルッフ膜は、代謝活性網膜色素上皮（ＲＰＥ）および毛細血管床（脈絡毛細管枝）の間に位置し、そしてＲＰＥ基底層および血管壁としての２つの主要な機能を果たす。ＢｒＭの構造および機能は、例えば、その全体が本明細書に援用される、ＣｕｒｃｉｏおよびＪｏｈｎｓｏｎ， Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ， Ｆｕｎｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｂｒｕｃｈ’ｓ Ｍｅｍｂｒａｎｅ， ： Ｒｙａｎら （２０１３）， Ｒｅｔｉｎａ， Ｖｏｌ． １， Ｐａｒｔ ２： Ｂａｓｉｃ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ ｔｏ Ｔｈｅｒａｐｙ． 第５版 Ｌｏｎｄｏｎ： Ｅｌｓｅｖｉｅｒ中， ｐｐ４６６－４８１に概説される。

所定のポリペプチドがＢｒＭを通じて拡散する能力を、例えば、Ｃｌａｒｋら Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ （２０１４） １９３， ４９６２－４９７０に記載されるように、例えばｉｎ ｖｉｔｒｏで分析してもよい。簡潔には、ＭｃＨａｒｇら， Ｊ Ｖｉｓ Ｅｘｐ （２０１５） １－７に記載されるように、ＢｒＭをドナーの目から単離してもよく、そしてウッシングチャンバーに黄斑部をマウントしてもよい。マウントしたら、５ｍｍ直径の黄斑部は、２つの同一区画間の唯一のバリアである。ＢｒＭの両側をＰＢＳで洗浄してもよく、そしてヒト血清をＰＢＳと１：１で希釈して、そしてＢｒＭの片側のウッシング区画（試料チャンバー）に添加してもよい。分析しようとするポリペプチドを、ＰＢＳ中で試料チャンバーに添加してもよく、そしてＢｒＭのもう一方の側の区画（拡散物質チャンバー）にＰＢＳのみを添加してもよく、そしてウッシングチャンバーを、試料チャンバーおよび拡散物質チャンバーの両方で穏やかに攪拌しながら、室温で２４時間インキュベーションしてもよい。続いて、各チャンバー由来の試料を、ポリペプチドの存在に関して、例えばＥＬＩＳＡ分析またはウェスタンブロットなどの抗体に基づく検出法を用いて、分析してもよい。拡散物質チャンバー中のポリペプチドの検出は、ポリペプチドが、ＢｒＭを通じて拡散可能であることを示す。こうした実験において、ＢｒＭを通じて拡散可能／拡散不能であることが知られる、適切な陽性および陰性対照タンパク質を含めてもよい。

いくつかの態様において、本発明のポリペプチドは、補体因子Ｉよりも、ＢｒＭを通じて拡散する優れた能力を示す。いくつかの態様において、本発明のポリペプチドは、補体因子Ｈよりも、ＢｒＭを通じて拡散する優れた能力を示す。いくつかの態様において、本発明のポリペプチドは、一部切除補体因子ＨアイソフォームＦＨＬ－１（ＵｎｉＰｒｏｔ：Ｐ０８６０３－２；配列番号３８）に比較した際、ＢｒＭを通じて拡散する、類似の能力を示す。いくつかの態様において、本発明のポリペプチドは、補体因子ＨアイソフォームＦＨＬ－１に比較した際、ＢｒＭを通じて拡散する優れた能力を示す。

上述のように、ＢｒＭを通じた拡散を分析し、そして拡散物質チャンバーへの拡散速度の改善を検出し、そして／または実験終了時の拡散物質チャンバー中のポリペプチドの比率の増加を検出することによって、所定の参照ポリペプチドに比較した際、ＢｒＭを通じて拡散する優れた能力を示すポリペプチドを同定してもよい。上述のように、ＢｒＭを通じた拡散を分析し、そして参照ポリペプチドに関する拡散速度の３０％以内、例えば２５％、２０％、１５％、または１０％の１つ以内の拡散物質チャンバーへの拡散速度を検出し、そして／または実験終了時の拡散物質チャンバー中の参照ポリペプチドの比率の３０％以内、例えば２５％、２０％、１５％、または１０％の１つ以内の拡散チャンバー中のポリペプチドの比率を検出することによって、所定の参照ポリペプチドに比較した際、ＢｒＭを通じて拡散する、類似の能力を示すポリペプチドを同定してもよい。

核酸、細胞、組成物およびキット
本発明は、本発明記載のポリペプチドをコードする核酸を提供する。いくつかの態様において、核酸は、例えば他の核酸、または天然存在生物学的物質から精製されるかまたは単離される。

本発明はまた、本発明記載のポリペプチドをコードする核酸を含むベクターも提供する。
「ベクター」は、本明細書において、細胞内に外因性核酸をトランスファーするためのビヒクルとして用いられる核酸（ＤＮＡまたはＲＮＡ）である。ベクターは、細胞における核酸の発現のための発現ベクターであってもよい。こうしたベクターには、発現しようとする配列をコードする核酸に機能可能であるように連結されたプロモーター配列が含まれてもよい。ベクターにはまた、終結コドンおよび発現エンハンサーも含まれてもよい。当該技術分野に知られる、任意の適切なベクター、プロモーター、エンハンサーおよび終結コドンを用いて、本発明記載のベクターから、本発明記載のポリペプチドを発現してもよい。

本明細書において、用語「機能可能であるように連結された」には、選択した核酸配列および制御核酸配列（例えばプロモーターおよび／またはエンハンサー）が、ヌクレオチドの発現を制御配列の影響または調節下に置く（それによって発現カセットを形成する）ように、共有連結されている状況が含まれてもよい。したがって、制御配列は、制御配列が、核酸配列の転写を達成可能である場合、選択した核酸配列に機能可能であるように連結されている。適切な場合、次いで、生じた転写物を所望のポリペプチドに翻訳してもよい。

本発明記載の核酸および／またはベクターは、好ましくは、細胞、例えば初代ヒト免疫細胞内への導入のために提供される。適切なベクターには、例えば、どちらもその全体が本明細書に援用される、Ｍａｕｓら， Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ （２０１４） ３２：１８９－２２５またはＭｏｒｇａｎおよびＢｏｙｅｒｉｎａｓ， Ｂｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅｓ ２０１６ ４， ９に記載されるように、プラスミド、バイナリーベクター、ＤＮＡベクター、ｍＲＮＡベクター、ウイルスベクター（例えばガンマレトロウイルスベクター（例えばネズミ白血病ウイルス（ＭＬＶ）由来ベクター）、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、ワクシニアウイルスベクターおよびヘルペスウイルスベクター）、トランスポゾンに基づくベクター、および人工染色体（例えば酵母人工染色体）が含まれる。いくつかの態様において、ウイルスベクターは、レンチウイルス、レトロウイルス、アデノウイルス、または単純ヘルペスウイルスベクターであってもよい。いくつかの態様において、レンチウイルスベクターは、ｐＥＬＮＳであってもよいし、またはｐＥＬＮＳに由来してもよい。いくつかの態様において、ベクターは、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９をコードするベクターであってもよい。

いくつかの態様において、本発明記載の核酸は、配列番号３２、３３、３４、３５、３６、３７、または４９のアミノ酸配列に対して、少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードする核酸配列を含むかまたは該配列からなる。

いくつかの態様において、本発明記載の核酸は、配列番号４２、４３または４４、あるいはコドン縮重の結果として、配列番号４２、４３または４４の１つと同じアミノ酸配列をコードする核酸配列に対して、少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含むかまたは該配列からなる。

いくつかの態様において、本発明記載の核酸は、配列番号５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、７０、７１、７２または７３のアミノ酸配列に対して、少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードする核酸配列を含むかまたは該配列からなる。

いくつかの態様において、本発明記載の核酸は、配列番号６２、６３、６４または６５、あるいはコドン縮重の結果として、配列番号６２、６３、６４または６５の１つと同じアミノ酸配列をコードする核酸配列に対して、少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸配列を含むかまたは該配列からなる。

本発明はまた、本発明記載のポリペプチドを含むかまたは発現する細胞も提供する。やはり提供するのは、本発明記載の核酸またはベクターを含むかまたは発現する細胞である。本発明記載のポリペプチド、核酸またはベクターを含むかまたは発現する細胞は、本発明記載のポリペプチドを分泌してもよい。すなわち、ポリペプチド、核酸またはベクターの発現は、細胞からの本発明記載のポリペプチドの可溶性産生を生じてもよい。

細胞は、真核細胞、例えば哺乳動物細胞であってもよい。哺乳動物は、ヒト、または非ヒト哺乳動物（例えばウサギ、モルモット、ラット、マウスまたは他の齧歯類（齧歯目の任意の動物を含む）、ネコ、イヌ、ブタ、ヤギ、ウシ（雌牛、例えば乳牛、またはウシ目の任意の動物を含む）、ウマ（ウマ目の任意の動物を含む）、ロバ、および非ヒト霊長類）であってもよい。いくつかの態様において、細胞は、ヒト被験体由来であってもよいし、またはヒト被験体から得られていてもよい。

いくつかの態様において、細胞は目の細胞である。いくつかの態様において、細胞は、網膜、脈絡膜、網膜色素上皮または黄斑の細胞である。いくつかの態様において、細胞は網膜細胞である。いくつかの態様において、細胞は網膜色素上皮細胞（ＲＰＥ）である。

本発明はまた、本発明記載の核酸またはベクターを含む細胞を産生するための方法であって、本発明記載の核酸またはベクターを細胞内に導入する工程を含む、前記方法も提供する。本発明はまた、本発明記載のポリペプチドを含むかまたは発現する細胞を産生するための方法であって、本発明記載の核酸またはベクターを細胞内に導入する工程を含む、前記方法も提供する。いくつかの態様において、方法は、細胞による核酸またはベクターの発現に適した条件下で、細胞を培養する工程をさらに含む。いくつかの態様において、方法は、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｅｘ ｖｉｖｏで実行される。いくつかの態様において、方法はｉｎ ｖｉｖｏで実行される。

本発明はまた、本発明記載の細胞を産生するための方法によって得られたかまたは得られうる細胞も提供する。
本発明はまた、本発明記載のポリペプチド、核酸、ベクターまたは細胞を含む組成物も提供する。

本発明記載のポリペプチド、核酸、ベクターおよび細胞を、臨床使用のための薬学的組成物として配合してもよく、そしてこれらは、薬学的に許容されうるキャリアー、希釈剤、賦形剤またはアジュバントを含んでもよい。

本発明にしたがって、薬学的に有用な組成物を産生するための方法もまた提供し、こうした産生法は：本明細書に記載するようなポリペプチド、細胞、核酸またはベクターを単離し；そして／または本明細書に記載するようなポリペプチド、細胞、核酸またはベクターを、薬学的に許容されうるキャリアー、アジュバント、賦形剤または希釈剤と混合する工程より選択される、１つまたはそれより多い工程を含んでもよい。

部品キットもまた提供する。いくつかの態様において、キットは、あらかじめ決定した量の、本発明記載のポリペプチド、核酸、ベクター、細胞または組成物を有する少なくとも１つの容器を有してもよい。

キットは、明記する疾患／状態を治療するため、被験体に投与するための使用説明書とともに、ポリペプチド、核酸、ベクター、細胞または組成物を提供してもよい。注射または注入に適切であるように、ポリペプチド、核酸、ベクター、細胞または組成物を配合してもよい。いくつかの態様において、静脈内、眼内、網膜下または結膜内注射、点眼剤としての投与（すなわち眼適用）または経口投与に適しているように、ポリペプチド、核酸、ベクター、細胞または組成物を配合してもよい。

いくつかの態様において、キットは、本発明記載の細胞を産生するための材料を含んでもよい。例えば、キットは、本発明記載のポリペプチド、核酸またはベクターを発現するかまたは含むように、細胞を修飾するための材料、あるいは本発明記載の核酸またはベクターを細胞内に導入するための材料を含んでもよい。

いくつかの態様において、キットは、あらかじめ決定した量の別の療法剤（例えばＡＭＤの治療のための療法剤）を有する少なくとも１つの容器をさらに含んでもよい。こうした態様において、キットはまた、２つの医薬品または薬学的組成物が特定の疾患または状態のための組み合わせた治療を提供するように、これらを同時にまたは別個に投与してもよいように、第二の医薬品または薬学的組成物も含んでもよい。

タンパク質発現
本発明記載のポリペプチドを細胞において産生するために適した分子生物学技術は当該技術分野に周知であり、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ： Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ， １９８９に示されるものがある。ポリペプチドは、核酸配列から発現されてもよい。核酸配列は、細胞に存在するベクターに含有されてもよいし、または細胞ゲノム内に取り込まれてもよい。

本発明記載のタンパク質を産生するために、ポリペプチドの発現に適した任意の細胞を用いてもよい。細胞は原核細胞または真核細胞であってもよい。適切な原核細胞には大腸菌（Ｅ． ｃｏｌｉ）が含まれる。真核細胞の例には、酵母細胞、植物細胞、昆虫細胞または哺乳動物細胞（例えばチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞）が含まれる。原核細胞は真核細胞と同じ翻訳後修飾を可能にしないものがあるため、いくつかの場合、細胞は原核細胞ではない。さらに、真核細胞においては非常に高い発現レベルが可能であり、そして適切なタグを用いると、真核細胞からタンパク質を精製するのはより容易でありうる。タンパク質の細胞培地内への分泌を増進する、特定のプラスミドもまた利用してもよい。

関心対象のポリペプチドを産生する方法は、ポリペプチドを発現するように修飾された細胞の培養または発酵を伴ってもよい。栄養素、空気／酸素および／または増殖因子の適切な供給を提供して、培養または発酵をバイオリアクター中で行ってもよい。培地／発酵ブロスを細胞から分配し、タンパク質内容物を抽出し、そして分泌されたポリペプチドを単離するため、個々のタンパク質を分離することによって、分泌されたタンパク質を収集してもよい。培養、発酵および分離技術は、当業者に周知である。

バイオリアクターには、１つまたはそれより多い容器が含まれ、その中で細胞を培養してもよい。バイオリアクター中の培養は、リアクター内への反応物の連続流入およびリアクターからの培養細胞の連続流出を伴って、連続的に行われてもよい。あるいは、培養はバッチで行われてもよい。バイオリアクターは、培養中の細胞にとって最適な条件が提供されるように、ｐＨ、酸素、流入および流出速度、ならびに容器内の攪拌などの環境条件を監視し、そして制御する。

ポリペプチドを発現する細胞の培養後、好ましくはポリペプチドを単離する。細胞培養からポリペプチドを分離するために適した任意の方法を用いてもよい。関心対象のポリペプチドを培養から単離するため、関心対象のポリペプチドを含有する培地から、培養した細胞をまず分離することが必要でありうる。関心対象のポリペプチドが細胞から分泌される場合、分泌されたポリペプチドを含有する培地から、遠心分離によって、細胞を分離してもよい。関心対象のポリペプチドが細胞内で集積する場合、遠心分離前に、例えば超音波、迅速凍結融解または浸透圧溶解を用いて、細胞を破壊することが必要であろう。遠心分離は、培養した細胞を含有するペレット、または培養した細胞の細胞破片、ならびに培地および関心対象のポリペプチドを含有する上清を生じるであろう。

次いで、他のタンパク質および非タンパク質構成要素を含有しうる上清または培地から、関心対象のポリペプチドを単離することが望ましい可能性もある。上清または培地からポリペプチド構成要素を分離する一般的なアプローチは、沈殿によるものである。異なる溶解度のポリペプチド／タンパク質は、硫酸アンモニウムなどの沈殿剤の異なる濃度で沈殿する。例えば、沈殿剤が低濃度であると、水溶性タンパク質が抽出される。したがって、増加する濃度の沈殿剤を添加することによって、異なる溶解度のタンパク質を区別することも可能である。続いて、透析を用いて、分離されたタンパク質から硫酸アンモニウムを除去してもよい。

ポリペプチドを単離／精製するための他の方法、例えばイオン交換クロマトグラフィおよびサイズクロマトグラフィが当該技術分野に知られる。また、ポリペプチド上の分子タグ（例えばＨｉｓ、ＦＬＡＧ、Ｍｙｃ、ＧＳＴ、ＭＢＰ、ＨＡ、Ｅ、またはビオチンタグ）に対する適切な結合パートナーを用いて、ポリペプチドをアフィニティ精製してもよい。これらの技術を沈殿の代替法として用いてもよいし、または沈殿に続いて行ってもよい。

いくつかの場合、例えばアミノ酸配列、分子タグ、部分等を除去するため、ポリペプチドをプロセシングすることがさらに望ましい可能性もある。
いくつかの態様において、処理は、アミノ酸配列の切断および除去のための適切なエンドペプチダーゼでの処理である。

いくつかの態様において、処理は、関心対象の部分を除去する酵素での処理である。いくつかの態様において、ペプチド：Ｎ－グリコシダーゼ（ＰＮＧアーゼ）での処理のように、例えばグリコシダーゼでの処理によって、ポリペプチドを処理してグリカンを除去する（すなわちポリペプチドを脱グリコシル化する）。

関心対象のポリペプチドが培地から単離されたら、タンパク質を濃縮することが望ましい可能性もある。限外濾過または凍結乾燥によるなど、関心対象のタンパク質を濃縮するためのいくつかの方法が当該技術分野に知られる。

いくつかの態様において、ポリペプチドの産生は、例えば本発明のポリペプチドをコードする核酸またはベクターを含む細胞を宿主に導入した後、あるいは本発明のポリペプチドをコードする核酸またはベクターを宿主の細胞内に導入した後、ｉｎ ｖｉｖｏで起こる。こうした態様において、ポリペプチドは転写され、翻訳され、そして成熟ポリペプチドへと翻訳後プロセシングされる。いくつかの態様において、ポリペプチドは、宿主において所望の位置で、ｉｎ ｓｉｔｕで産生される。

補体系および加齢黄斑変性症（ＡＭＤ）
ＡＭＤにおける補体の役割は、例えば、本明細書にその全体が援用される、Ｚｉｐｆｅｌら 第２章， ＬａｍｂｒｉｓおよびＡｄａｍｉｓ（監修）， Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｒｅｔｉｎａｌ Ｄｉｓｅａｓｅ： Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ Ｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ， Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｙ ７０３， Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｓｃｉｅｎｃｅ＋Ｂｕｓｉｎｅｓｓ Ｍｅｄｉａ， ＬＬＣ（２０１０）中に記載される。加齢黄斑変性症（ＡＭＤ）は、目の裏側の網膜の中心部分である黄斑の進行性破壊として現れ、中心視力の喪失を導く。該疾患は、よく見られる疾患であり、推測値では、２０２０年までに、何らかの型のＡＭＤを患う人々は、全世界で１億９６００万になると予測されており；ＡＭＤは現在、世界中で、すべての失明登録の８．７％に関与している（Ｗｏｎｇら Ｌａｎｃｅｔ Ｇｌｏｂ Ｈｅａｌ （２０１４） ２：ｅ１０６－１６）。疾患初期段階では、黄斑の形態学的変化が見られ、これにはまず、脈絡毛細管枝における血管の喪失が含まれ（Ｗｈｉｔｍｏｒｅら， Ｐｒｏｇ Ｒｅｔｉｎ Ｅｙｅ Ｒｅｓ （２０１５） ４５：１－２９）、これらの血管は、ブルッフ膜（ＢｒＭ）直下にある有窓血管である。これはまた、ＡＭＤに先立つ補体活性化および代謝回転増加の主な領域の１つでもある。

初期ＡＭＤ型のドルーゼンと呼ばれる特徴的な病変は、ＢｒＭ内にある。ドルーゼンは、脂質および細胞破片の集積から形成され、そしてこれには、一連の補体活性化産物が含まれる（Ａｎｄｅｒｓｏｎら， Ｐｒｏｇ Ｒｅｔｉｎ Ｅｙｅ Ｒｅｓ （２００９） ２９：９５－１１２； Ｗｈｉｔｃｕｐら， Ｉｎｔ Ｊ Ｉｎｆｌａｍ （２０１３） １－１０）。ＢｒＭ内にドルーゼンが存在すると、細胞外マトリックスを渡る脈絡膜からＲＰＥ細胞への栄養素の流動が妨げられ、細胞機能不全および最終的には死を導く。ＲＰＥ細胞の単層が、神経感覚網膜の桿体細胞および錐体細胞を支持するため、これらの細胞が死ぬと、光受容細胞の機能不全が引き起こされ、そして続いて視力が失われる。これは、症例のほぼ９０％に相当する地図状委縮、または「乾性」ＡＭＤと称される、ＡＭＤの後期段階の１つに相当する。症例の残りの割合においては、ドルーゼンの存在が脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）を促進し、この場合、ＲＰＥ細胞からの血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）の合成増加が、脈絡膜／脈絡毛細管枝からの過剰な血管増殖を促進し、これがＢｒＭを突破し、そして神経感覚網膜内に漏出する。これは「湿性」ＡＭＤと称され、そして症例の１０％にしか相当しないが、後期段階ＡＭＤの最も悪性の型である。抗ＶＥＧＦ抗体断片の目の硝子体内への注射が、これらの血管の増殖を遅延させるかまたは逆転させることが可能な、湿性ＡＭＤの治療があるが、これは、そもそもその形成を防止することはできない。乾性ＡＭＤは治療不能なままである。

ＡＭＤを発展させる遺伝的リスクに関連する主要なＳＮＰの１つは、補体、因子Ｈ（ＦＨ；例えば、Ｈａｉｎｅｓら， Ｓｃｉｅｎｃｅ （２００５） ３０８：４１９－２１を参照されたい）およびその選択的スプライシング変異体、因子Ｈ様タンパク質１（ＦＨＬ－１）の主な液相制御因子におけるＹ４０２Ｈ多型を導くＣＦＨ遺伝子におけるものである。白人欧州遺伝形質の個体のほぼ３０％は、この多型を少なくとも１コピー有し、ヘテロ接合体であると、ＡＭＤのリスクは～３倍増加する（Ｓｏｆａｔら， Ｉｎｔ Ｊ Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌ （２０１２） ４１：２５０－２６２）。第七の補体制御タンパク質（ＣＣＰ）ドメインに現れるＹ４０２Ｈ多型は、ＢｒＭへのＦＨ／ＦＨＬ－１の結合を減少させ、そしてＢｒＭが無細胞性であることを考慮すると、これらの血液伝播性補体制御因子の結合のいかなる妨害も、この表面上での補体制御の減衰を生じるであろう（Ｃｌａｒｋら， Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ （２０１０） ２８５：３０１９２－２０２）。ＢｒＭへのＦＨ／ＦＨＬ－１の結合は、グルコサミノグリカン（ＧＡＧ）、ヘパラン硫酸（ＨＳ）およびデルマタン硫酸（ＤＳ）を含む、硫酸化糖によって仲介される。ＢｒＭに見られるＧＡＧ配列のファミリーは、そのＣＣＰ７ドメインを通じて、そしてＣＣＰ１９～２０に見られるＦＨの二次係留部位は通じずに、ＦＨ／ＦＨＬ－１を補充可能であるため、以前考えられていたよりも、高い組織特異性を有するようである（Ｃｌａｒｋら， Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ （２０１３） １９０：２０４９－２０５７）。ＢｒＭ内の補体の主な制御因子は、一部切除ＦＨＬ－１タンパク質であり（Ｃｌａｒｋら Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ （２０１４） １９３， ４９６２－４９７０）、これはＣＣＰ７に１つの表面係留部位を持つのみであり、そしてＣＣＰ１９～２０を欠き：Ｙ４０２Ｈ多型は、ＦＨのＣＣＰ１９～２０ドメインが主なＧＡＧ仲介性係留部位であることが知られる腎臓疾患とは関連しない（Ｃｌａｒｋら， Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ （２０１３） １９０：２０４９－２０５７）ことが発見されてきているため、これは進化のねじれである可能性がある。それ自体、正常な加齢プロセスの一部と見なされる、ＨＳおよびＤＳのＢｒＭ発現レベルにおける加齢性の変化もまた、ＡＭＤと関連付けられてきており、そして遺伝的に駆動されるＡＭＤの加齢性の性質をある程度説明することも可能である。

根底にある血管系もまた、ＡＭＤに重要であることを示唆する、説得力があるデータがある。ＢｒＭに結合しないＦＨのＣ末端ＣＣＰ１９～２０領域の稀な突然変異（Ｒ１２１０Ｃ）は、ＡＭＤと非常に高レベルの関連を有し、そしてこの突然変異を所持するＦＨタンパク質は、アルブミンに共有結合することが見出されている（Ｓａｎｃｈｅｚ－Ｃｏｒｒａｌら， Ａｍ Ｊ Ｈｕｍ Ｇｅｎｅｔ （２００２） ７１：１２８５－１２９５）。また、いくつかの研究によって、地図状委縮およびＲＰＥ細胞における関連する色素変化に先立つ、大きな融合性のドルーゼンは、ＲＰＥ細胞の機能不全から、乾性ＡＭＤがまず生じ、脈絡膜内の二次的影響が伴うことが示唆される（ＢｈｕｔｔｏおよびＬｕｔｔｙ Ｍｏｌ Ａｓｐｅｃｔｓ Ｍｅｄ （２０１２） ３３：２９５－３１７）。対照的に、Ｗｈｉｔｍｏｒｅらは、終末補体膜攻撃複合体（ＭＡＣ）の沈着を含む、後期段階ＡＭＤのすべての型に先行する脈絡毛細管枝の変化を報告し、そしてこれが一次事象であり、ＲＰＥ委縮が二次事象であると論じる（Ｗｈｉｔｍｏｒｅら， Ｐｒｏｇ Ｒｅｔｉｎ Ｅｙｅ Ｒｅｓ （２０１５） ４５：１－２９）。これらの変化が、酸化ストレスによって駆動される加齢性のものであるか、またはＲＰＥ細胞機能不全の結果であるかどうかは、現時点では不明であるが、これらの構造における天然存在変化は、年齢によって影響を受けることが知られている。

療法的適用
本発明記載のポリペプチド、核酸、ベクター、細胞および薬学的組成物は、療法的および予防的方法に使用を見出す。

本発明は、医学的治療または予防の方法において使用するための、本発明記載のポリペプチド、核酸、ベクター、細胞または薬学的組成物を提供する。本発明はまた、疾患または状態を治療するかまたは防止するための医薬品の製造における、本発明記載のポリペプチド、核酸、ベクター、細胞または薬学的組成物の使用も提供する。本発明はまた、疾患または状態を治療するかまたは防止する方法であって、本発明記載のポリペプチド、核酸、ベクター、細胞または薬学的組成物の療法的または予防的有効量を、被験体に投与する工程を含む、前記方法も提供する。

特に、本発明記載のポリペプチド、核酸、ベクター、細胞および薬学的組成物は、補体制御不全、特に過活動性補体反応に関連する疾患／状態の治療または防止に使用を見出す。

ポリペプチド、核酸、ベクター、細胞および薬学的組成物は：Ｃ３ｂＢｂ型Ｃ３転換酵素、Ｃ３ｂＢｂ３ｂ型Ｃ５転換酵素またはＣ４ｂ２ａ３ｂ型Ｃ５転換酵素のレベルまたは活性の減少；Ｃ３ｂ、Ｃ５ｂまたはＣ５ａのレベルの減少；あるいはｉＣ３ｂ、Ｃ３ｆ、Ｃ３ｄｇまたはＣ３ｄのレベルの増加の１つまたはそれより多くから利益を得るであろう疾患／状態の治療または防止に使用を見出す。

「治療」は、例えば、疾患／状態の発展または進行の減少、疾患／状態の症状の軽減、あるいは疾患／状態の病理の減少であってもよい。疾患／状態の治療または軽減は、疾患／状態の進行の防止、例えば状態の悪化の防止または発展速度の遅延に有効であってもよい。いくつかの態様において、治療または軽減は、疾患／状態の改善、例えば疾患／状態の症状の減少または疾患／状態の重症度／活性の何らかの他の相関物の減少を導いてもよい。疾患／状態の防止／予防は、状態の悪化の防止または疾患／状態の発展の防止、例えば初期段階の疾患／状態がより後期の慢性段階に発展することの防止を指してもよい。

いくつかの態様において、治療または防止しようとする疾患または状態は、Ｃ３ｂまたはＣ３ｂ含有複合体に関連する疾患／状態、Ｃ３ｂまたはＣ３ｂ含有複合体と関連する活性／反応、あるいはＣ３ｂまたはＣ３ｂ含有複合体と関連する活性／反応の産物であってもよい。すなわち、いくつかの態様において、治療または防止しようとする疾患または状態は、Ｃ３ｂ、Ｃ３ｂ含有複合体、Ｃ３ｂまたはＣ３ｂ含有複合体と関連する活性／反応、あるいは前記活性／反応の産物が病理学的に関連する疾患／状態である。いくつかの態様において、疾患／状態は、対照状態と比較した際の、Ｃ３ｂまたはＣ３ｂ含有複合体のレベル増加、Ｃ３ｂまたはＣ３ｂ含有複合体と関連する活性／反応のレベル増加、あるいはＣ３ｂまたはＣ３ｂ含有複合体と関連する活性／反応の産物のレベル増加と関連してもよい。

いくつかの態様において、障害は、ＦＨ、ＦＨＬ－１、ＦＩ、ＦＢ、ＦＤ、ＣＲ１および／またはＣＤ４６と、ＦＨ、ＦＨＬ－１、ＦＩ、ＦＢ、ＦＤ、ＣＲ１および／またはＣＤ４６と関連する活性／反応と、あるいはＦＨ、ＦＨＬ－１、ＦＩ、ＦＢ、ＦＤ、ＣＲ１および／またはＣＤ４６と関連する活性／反応の産物と、関連する障害であってもよい。いくつかの態様において、障害は、ＦＨ、ＦＨＬ－１、ＦＩ、ＦＢ、ＦＤ、ＣＲ１および／またはＣＤ４６が、ＦＨ、ＦＨＬ－１、ＦＩ、ＦＢ、ＦＤ、ＣＲ１および／またはＣＤ４６と関連する活性／反応が、あるいは前記活性／反応の産物が、病理学的に関連している障害である。いくつかの態様において、障害は、対照状態と比較した際の、ＦＨ、ＦＨＬ－１、ＦＩ、ＦＢ、ＦＤ、ＣＲ１および／またはＣＤ４６のレベル減少と、ＦＨ、ＦＨＬ－１、ＦＩ、ＦＢ、ＦＤ、ＣＲ１および／またはＣＤ４６と関連する活性／または反応のレベル減少と、あるいはＦＨ、ＦＨＬ－１、ＦＩ、ＦＢ、ＦＤ、ＣＲ１および／またはＣＤ４６と関連する活性／反応の産物のレベル減少と、関連してもよい。

いくつかの態様において、障害は、対照状態に比較した際の、Ｃ３、Ｃ３ｂ、Ｃ３転換酵素および／またはＣ３ｂＢｂのレベル増加と関連する。いくつかの態様において、障害は、対照状態と比較した際の、ｉＣ３ｂのレベル減少と関連する。

治療は、Ｃ３ｂまたはＣ３ｂ含有複合体のレベル、Ｃ３ｂまたはＣ３ｂ含有複合体と関連する活性／反応、あるいはＣ３ｂまたはＣ３ｂ含有複合体と関連する活性／反応の産物のレベルの減少を目的としてもよい。いくつかの態様において、治療は：Ｃ３ｂＢｂ型Ｃ３転換酵素、Ｃ３ｂＢｂ３ｂ型Ｃ５転換酵素またはＣ４ｂ２ａ３ｂ型Ｃ５転換酵素のレベルまたは活性の減少；Ｃ３ｂ、Ｃ５ｂまたはＣ５ａのレベルの減少；あるいはｉＣ３ｂ、Ｃ３ｆ、Ｃ３ｄｇまたはＣ３ｄのレベルの増加を目的とする。

本発明のポリペプチド、核酸、ベクター、細胞および組成物の投与は、Ｃ３ｂの切断を通じて、Ｃ３ｂまたはＣ３ｂ含有複合体、Ｃ３ｂまたはＣ３ｂ含有複合体と関連する活性／反応、あるいはＣ３ｂまたはＣ３ｂ含有複合体と関連する活性／反応の産物のレベルの減少を引き起こしてもよい。

いくつかの態様において、治療は、被験体における、例えば特定の位置での、特定の臓器、組織、構造または細胞タイプでの、Ｃ３ｂまたはＣ３ｂ含有複合体、Ｃ３ｂまたはＣ３ｂ含有複合体と関連する活性／反応、あるいはＣ３ｂまたはＣ３ｂ含有複合体と関連する活性／反応の産物のレベルの減少を目的としてもよい。いくつかの態様において、治療は、目における、例えば網膜、脈絡膜、網膜色素上皮、黄斑における、そして／またはＢｒＭ／ＲＰＥ細胞界面での、Ｃ３ｂまたはＣ３ｂ含有複合体、Ｃ３ｂまたはＣ３ｂ含有複合体と関連する活性／反応、あるいはＣ３ｂまたはＣ３ｂ含有複合体と関連する活性／反応の産物のレベルの減少を目的としてもよい。

いくつかの態様において、治療は、本発明のポリペプチド、核酸またはベクターを含む／発現するように、細胞または細胞集団を修飾する工程を含んでもよい。いくつかの態様において、治療は、本発明のポリペプチドのｉｎ ｓｉｔｕ産生のため、ｉｎ ｖｉｖｏでの細胞／集団の修飾を含んでもよい。

いくつかの態様において、治療は、本発明のポリペプチド、核酸またはベクターを含む／発現するように修飾された細胞または細胞集団を、被験体に投与する工程を含んでもよい。いくつかの態様において、治療は、ｅｘ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｔｒｏでの細胞／集団の修飾を含んでもよい。

いくつかの態様において、治療は、例えば本発明記載の細胞を投与するか、または本発明記載の細胞を生成することによる、本発明のポリペプチドを産生する細胞または細胞集団を被験体に提供することを目的とする。

いくつかの態様において、細胞は目の細胞である。いくつかの態様において、細胞は、網膜、脈絡膜、網膜色素上皮または黄斑の細胞である。いくつかの態様において、細胞は網膜細胞である。いくつかの態様において、細胞は網膜色素上皮細胞（ＲＰＥ）である。

本発明は、被験体において疾患または状態を治療するかまたは防止する方法であって、少なくとも１つの細胞が、本発明記載のポリペプチド、核酸またはベクターを発現するかまたは含むように修飾する工程を含む、前記方法を提供する。

本発明にしたがって修飾される少なくとも１つの細胞は、当業者に周知の方法にしたがって修飾されてもよい。修飾は、トランスファーされた核酸の永続的または一過性の発現のための核酸トランスファーを含んでもよい。任意の適切な遺伝子操作プラットホームを用いて、本発明にしたがって細胞を修飾してもよい。細胞を修飾するために適した方法には、遺伝子操作プラットホーム、例えばガンマレトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター、ＤＮＡトランスフェクション、トランスポゾンに基づく遺伝子送達およびＲＮＡトランスフェクションの使用が含まれ、例えば、本明細書の上記に援用される、Ｍａｕｓら， Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ （２０１４） ３２：１８９－２２５に記載される通りである。

治療すべき被験体は、任意の動物またはヒトであってもよい。被験体は、好ましくは哺乳動物、より好ましくはヒトである。被験体は非ヒト哺乳動物であってもよいが、より好ましくはヒトである。被験体は男性または女性であってもよい。被験体は患者であってもよい。被験体は、治療が必要な疾患または状態を持つと診断されたか、あるいはこうした疾患または状態を有すると推測されていてもよい。

治療すべき被験体は、例えば、適切なアッセイを用いた、被験体、または被験体から得た試料（例えば細胞、組織、血液試料）の分析によって決定した際に、Ｃ３ｂまたはＣ３ｂ含有複合体、Ｃ３ｂまたはＣ３ｂ含有複合体と関連する活性／反応、あるいはＣ３ｂまたはＣ３ｂ含有複合体と関連する活性／反応の産物のレベル上昇を示してもよい。

被験体は、Ｃ３ｂまたはＣ３ｂ含有複合体、あるいはＣ３ｂまたはＣ３ｂ含有複合体と関連する活性／反応の陽性制御因子／エフェクターの発現または活性のレベルの増加を有してもよいし、あるいはＣ３ｂまたはＣ３ｂ含有複合体と関連する活性／反応の産物の発現または活性のレベルの増加を有してもよい。被験体は、Ｃ３ｂまたはＣ３ｂ含有複合体によって上方制御される活性のレベルの増加を有してもよい。

被験体は、Ｃ３ｂまたはＣ３ｂ含有複合体、あるいはＣ３ｂまたはＣ３ｂ含有複合体と関連する活性／反応の陰性制御因子の発現または活性のレベルの減少を有してもよいし、あるいはＣ３ｂまたはＣ３ｂ含有複合体によって下方制御される因子の発現または活性のレベルの減少を有してもよい。被験体は、Ｃ３ｂまたはＣ３ｂ含有複合体によって下方制御される活性のレベルの減少を有してもよい。

増加／減少は、関連する疾患／状態の非存在下での発現／活性のレベル、例えば健康な対照被験体または健康な対照被験体から得た試料における発現／活性のレベルに対するものであってもよい。

いくつかの態様において、被験体は、疾患または状態を発展させる／これらに罹患するリスクを有してもよい。いくつかの態様において、被験体は、疾患または状態を発展させる／これらに罹患するリスクを増加させる、１つまたはそれより多い素因要因を所持してもよい。

いくつかの態様において、被験体は、加齢黄斑変性症（ＡＭＤ）の１つまたはそれより多いリスク要因を所持してもよい。いくつかの態様において、被験体は、ＡＭＤ関連遺伝的変異体を１つまたはそれより多く所持してもよい。ＡＭＤ関連遺伝的変異体は、例えば、本明細書にその全体が援用される、Ｃｌａｒｋら， Ｊ Ｃｌｉｎ Ｍｅｄ （２０１５） ４（１）：１８－３１に記載される。いくつかの態様において、被験体は、以下のＡＭＤ関連遺伝的変異体（またはこうした変異体とＬＤ＝ｒ^２≧０．８を有する変異体）の１つまたはそれより多くを所持してもよい：ＣＦＨにおけるＹ４０２Ｈ（すなわちｒｓ１０６１１７０^Ｃ）、ｒｓ１４１０９９６^Ｃ、ＣＦＨにおけるＩ６２Ｖ、ＣＦＨにおけるＲ５３Ｃ、ＣＦＨにおけるＤ９０Ｇ、ＣＦＨにおけるＲ１２１０Ｃ、またはｒｓ６６８５９３１^Ｔ。

いくつかの態様において、被験体は、ＡＭＤに関する１つまたはそれより多いリスク要因、例えば１つまたはそれより多いＡＭＤ関連遺伝的変異体を所持すると決定されたことに基づいて、本発明のポリペプチド、核酸、ベクター、細胞または組成物での療法的または予防的治療に関して選択される。いくつかの態様において、被験体は、１つまたはそれより多いこうしたリスク要因を有すると決定されている。いくつかの態様において、本発明の方法は、被験体が、１つまたはそれより多いこうしたリスク要因を所持するかどうかを決定する工程を含む。

いくつかの態様において、治療または防止すべき疾患または状態は、目の疾患／状態であってもよい。いくつかの態様において、治療または防止すべき疾患または状態は、ＡＭＤ、乾性（すなわち非滲出性）ＡＭＤ、緑内障、自己免疫ブドウ膜炎、脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）、および糖尿病性網膜症より選択されてもよい。いくつかの態様において、治療または防止すべき疾患または状態は、ＡＭＤである。いくつかの態様において、治療または防止すべき疾患または状態は、乾性ＡＭＤである。いくつかの態様において、治療すべき疾患または状態は、湿性（滲出性）ＡＭＤである。本明細書において、用語「ＡＭＤ」には、初期ＡＭＤ、中期ＡＭＤ、後期／進行ＡＭＤ、地図状委縮（「乾性」（すなわち非滲出性）ＡＭＤ）、および「湿性」（すなわち滲出性）ＡＭＤが含まれ、これらは各々、それ自体で、本明細書に記載するように検出され、治療され、そして／または防止される障害でありうる。

いくつかの態様において、障害は、溶血性尿毒症症候群（ＨＵＳ）、非典型的溶血性尿毒症症候群（ａＨＵＳ）、自己免疫ブドウ膜炎、ＩＩ型膜性増殖性糸球体腎炎（ＭＰＧＮ ＩＩ）、敗血症、ヘノッホ・シェーンライン紫斑病（ＨＳＰ）、ＩｇＡ腎症、発作性夜間血色素尿症（ＰＮＨ）、自己免疫溶血性貧血（ＡＩＨＡ）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、シェーグレン症候群（ＳＳ）、関節リウマチ（ＲＡ）、Ｃ３腎炎因子糸球体腎炎（Ｃ３ ＮＦ ＧＮ）、遺伝性血管性浮腫（ＨＡＥ）、後天性血管性浮腫（ＡＡＥ）、脳脊髄炎、アテローム性動脈硬化症、多発性硬化症（ＭＳ）、パーキンソン病、およびアルツハイマー病より選択されてもよい。いくつかの場合、障害は、神経学的および／または神経変性性障害である。

医学的治療法はまた、自己および／または異種細胞または不死化細胞株を用いるものを含む、ｉｎ ｖｉｖｏ、ｅｘ ｖｉｖｏ、および養子免疫療法を伴ってもよい。
投与は、好ましくは、「療法的有効量」であり、これは、個体に対して利益を示すために十分なものである。投与する実際の量、ならびに投与の速度および時間経過は、治療中の疾患の性質および重症度に応じるであろう。治療の処方、例えば投薬量に関する決定等は、開業医および他の医師の責任の範囲内であり、そして典型的には、治療すべき状態、個々の患者の状態、送達部位、投与法、および医師に知られる他の要因を考慮する。上述の技術およびプロトコルの例は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， 第２０版， ２０００， Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ， Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ刊行に見出されうる。

本発明記載のポリペプチド、核酸、ベクターおよび細胞は、臨床的使用のための薬学的組成物または医薬品として配合されてもよく、そして薬学的に許容されうるキャリアー、希釈剤、賦形剤またはアジュバントを含んでもよい。組成物は、注射または注入、あるいは点眼剤としての投与（すなわち眼適用）を含んでもよい、局所、非経口、全身、腔内、静脈内、動脈内、筋内、クモ膜下腔内、眼内、結膜内、網膜下、皮下、皮内、クモ膜下腔内、経口または経皮投与経路のために配合されてもよい。適切な配合物は、無菌または等張媒体中に、ポリペプチド、核酸、ベクター、または細胞を含んでもよい。医薬品および薬学的組成物は、ゲルを含む液体型で配合されてもよい。液体配合物は、ヒトまたは動物の体の選択した臓器または領域への注射または注入（例えばカテーテルを通じたもの）による投与のために配合されてもよい。

投与の特定の様式および／または部位は、Ｃ３ｂ不活性化が望ましい位置にしたがって選択されてもよい。
本発明にしたがって、薬学的に有用な組成物の産生のための方法もまた提供され、こうした産生法は：本明細書に記載するようなポリペプチド、核酸、ベクター、または細胞の単離；および／または本明細書に記載するようなポリペプチド、核酸、ベクター、または細胞と、薬学的に許容されうるキャリアー、アジュバント、賦形剤または希釈剤との混合より選択される１つまたはそれより多い工程を含んでもよい。

例えば、本発明のさらなる側面は、医学的治療の方法において使用するための医薬品または薬学的組成物を配合するかまたは産生する方法であって、本明細書に記載するようなポリペプチド、核酸、ベクター、または細胞と、薬学的に許容されうるキャリアー、アジュバント、賦形剤または希釈剤を混合することによって、薬学的組成物または医薬品を配合する工程を含む、前記方法に関する。

投与は、単独であっても、あるいは治療すべき状態に応じて、同時または連続的のいずれかで、他の治療（例えば他の療法的または予防的介入）と組み合わされてもよい。
本発明で使用するために適した他の療法剤または治療は、食事療法、光力学療法（ＰＤＴ）、レーザー光凝固、抗ＶＥＧＦ（血管内皮増殖因子）療法、および／または当該技術分野に知られるさらなる療法を含んでもよく、例えば、Ａｌ－Ｚａｍｉｌ ＷＭおよびＹａｓｓｉｎ ＳＡ， Ｃｌｉｎ Ｉｎｔｅｒｖ Ａｇｉｎｇ． ２０１７ Ａｕｇ ２２；１２：１３１３－１３３０を参照されたい。抗ＶＥＧＦ療法は、ラニビズマブ（Ｌｕｃｅｎｔｉｓ、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／Ｎｏｖａｒｔｉｓによって産生）、Ａｖａｓｔｉｎ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、ベバシズマブ（認可外Ａｖａｓｔｉｎ）、およびアフリベルセプト（Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ／ＢａｙｅｒのＥｙｌｅａ（登録商標）／ＶＥＧＦ Ｔｒａｐ－Ｅｙｅ）などの剤を含んでもよい。本発明とともに使用するために適したさらなる剤または技術には、ＡＰＬ－２（Ａｐｅｌｌｉｓ）、ＡｄＰＥＤＦ（ＧｅｎＶｅｃ）、被包細胞技術（ＥＣＴ； Ｎｅｕｒｏｔｅｃｈ）、乳酸スクアラミン（ＥＶＩＺＯＮ^ＴＭ、Ｇｅｎａｅｒａ）、ＯＴ－５５１（抗酸化点眼剤、Ｏｔｈｅｒａ）、酢酸アネコルタブ（Ｒｅｔａａｎｅ（登録商標）、Ａｌｃｏｎ）、ベバシラニブ（ｓｉＲＮＡ、Ａｃｕｉｔｙ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ペガプタニブ・ナトリウム（Ｍａｃｕｇｅｎ（登録商標））、およびＡＡＶＣＡＧｓＣＤ５９（臨床試験同定子： ＮＣＴ０３１４４９９９）が含まれる。

本発明記載のポリペプチド、核酸、ベクター、細胞または組成物、および療法剤を、同時にまたは連続して投与してもよい。
同時投与は、ポリペプチド、核酸、ベクター、細胞または組成物、および療法剤の、一緒の、例えば両方の剤を含有する薬学的組成物（組み合わせ調製物）として、または互いの直後の、そして随意に、同じ投与経路を通じた、例えば同じ組織、動脈、静脈、または他の血管への投与を指す。連続投与は、ポリペプチド、核酸、ベクター、細胞または組成物、あるいは療法剤の一方の投与に続く、所定の時間間隔後の、他の剤の別個の投与を指す。２つの剤が同じ経路によって投与される必要はないが、いくつかの態様においてはこれが当てはまる。時間間隔は、任意の時間間隔であってもよい。

ポリペプチド、核酸、ベクター、細胞または組成物の多数の用量を提供してもよい。用量の１つまたはそれより多く、あるいは各々には、別の療法剤の同時または連続投与が付随してもよい。

多数の用量は、あらかじめ決定した時間間隔によって分離されていてもよく、これらは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１日、あるいは１、２、３、４、５、または６か月の１つより選択されてもよい。例えば、用量は、７、１４、２１または２８日（プラスまたはマイナス３、２、または１日）ごとに１回投与されてもよい。

検出
本発明はまた、試料において、ポリペプチドを検出する方法であって：
（ｉ）本発明のポリペプチドを含有すると推測される試料を、該ポリペプチドの検出配列のタンパク質分解的切断部位に特異的なタンパク質分解酵素と接触させ；そして
（ｉｉ）非内因性ペプチドの存在を検出する
工程を含む、前記方法も提供する。

本明細書に記載するように、被験体への本発明記載のポリペプチド、核酸、ベクター、細胞または薬学的組成物の投与後に、該方法を実行する。
試料は、被験体由来の任意の生物学的試料であってもよい。いくつかの態様において、試料は、液体生検、例えば眼液（涙液、眼房水、または硝子体液）、血液、血漿等であってもよい。いくつかの態様において、試料は、細胞学的試料または組織試料、例えば目の細胞／組織の外科的試料である。

試料を、所定の酵素のタンパク質分解活性に適した条件下（例えば温度、ｐＨ等）、および適した時間、所定のタンパク質分解酵素と接触させる。
非内因性ペプチドの検出は、任意の適切な手段によってもよく、例えば質量分析法、またはウェスタンブロット、ＥＬＩＳＡ等の特定の結合剤を使用する方法によってもよい。いくつかの態様において、方法は、試料における非内因性ペプチドの量を定量化し、そして随意に、試料におけるポリペプチドの量または濃度に対して、非内因性ペプチドの量を相関させる工程をさらに含んでもよい。

方法の例示的な態様において、アミノ酸配列、配列番号３７からなるポリペプチドを含有すると推測される試料を、ポリペプチドのトリプシン処理に適した条件下および適した時間、トリプシンと接触させ、そして続いて、ペプチド、配列番号４６および４７の一方または両方の検出によって、配列番号３７にしたがったポリペプチドの存在を確認する。

配列同一性
２つまたはそれより多いアミノ酸または核酸配列の間のパーセント同一性を決定する目的のため、対のおよび多数の配列整列を、当業者に知られる多様な方法で、例えば公的に利用可能なコンピュータソフトウェア、例えばＣｌｕｓｔａｌＯｍｅｇａ（Ｓоｅｄｉｎｇ， Ｊ． ２００５， Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ２１， ９５１－９６０）、Ｔ－ｃｏｆｆｅｅ（Ｎｏｔｒｅｄａｍｅら ２０００， Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． （２０００） ３０２， ２０５－２１７）、Ｋａｌｉｇｎ（ＬａｓｓｍａｎｎおよびＳｏｎｎｈａｍｍｅｒ ２００５， ＢＭＣ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ， ６（２９８））およびＭＡＦＦＴ（ＫａｔｏｈおよびＳｔａｎｄｌｅｙ ２０１３， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ， ３０（４） ７７２－７８０）ソフトウェアを用いて、達成してもよい。こうしたソフトウェアを用いる場合、好ましくは、例えばギャップペナルティおよび伸長ペナルティに関する、デフォルトパラメータを用いる。

配列

本発明には、こうした組み合わせが明らかに許容されえないかまたは明白に回避される場合を除いて、記載する側面および好ましい特徴の組み合わせが含まれる。
本明細書に用いるセクション見出しは、構成上の目的のためのみであり、そして記載する主題を限定するとは見なされないものとする。

付随する図を参照しながら、例として、本発明の側面および態様がここで例示される。さらなる側面および態様が当業者には明らかであろう。本文書に言及するすべての文書は、本明細書に援用される。

以下に続く請求項を含めて、本明細書全体で、文脈が別に必要としない限り、単語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、ならびに「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」および「含んでいる（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」などの変形は、言及する整数または工程、あるいは整数または工程の群の包含を示すが、いかなる他の整数または工程、あるいは整数または工程の群の排除も示さないことが理解されるであろう。

明細書および付随する請求項で用いた際、単数形「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」には、文脈が明らかに別に示さない限り、複数の参照対象が含まれることに注目しなければならない。本明細書において、「約」１つの特定の値から、そして／または「約」別の特定の値までとして範囲が示されうる。こうした範囲が示された場合、別の態様には、１つの特定の値から、そして／またはもう一方の特定の値までが含まれる。同様に、先行詞「約」の使用によって、値が近似値として示された際、特定の値は別の態様を形成することが理解されるであろう。

核酸配列が開示される場合、その逆相補体もまた、明らかに意図される。

以下の実施例において、本発明者らは、補体因子ＨのＣ３ｂ結合補因子領域および補体因子ＩのＣ３ｂ不活性化タンパク質分解領域を含む、キメラＣ３ｂ不活性化ポリペプチドの設計、ならびに脱グリコシル化されたキメラペプチドが、ブルッフ膜（ＢｒＭ）を渡って拡散し、そしてＣ３ｂをｉＣ３ｂに分解する能力を記載する。

実施例１：補体因子Ｈ補因子領域を含むキメラＣ３ｂ不活性化ポリペプチドの生成
配列番号３２、３３および３４に示すアミノ酸配列をコードするＤＮＡ挿入物を、組換えＤＮＡ技術によって調製し、そしてベクター内にクローニングして、キメラタンパク質の組換え発現のための構築物を生成した。アミノ酸配列およびその特徴を以下に示す。

図１Ａは、Ｎ末端６ｘＨｉｓタグを除去するためのＴＥＶプロテアーゼでの処理後、アミノ酸配列、配列番号３２を有するタンパク質ＦＨ－ＦＩの模式図を示す。
図１Ｂは、Ｎ末端６ｘＨｉｓタグを除去するためのＴＥＶプロテアーゼでの処理後、およびＮ－グリカンを除去するためのペプチド：Ｎ－グリコシダーゼ（ＰＮＧアーゼ）での処理後、アミノ酸配列、配列番号３２を有するタンパク質ＦＨ－ＦＩ（すなわちｄキメラ）の模式図を示す。

Ｎ末端代替グリコシル化配列、および補体因子Ｈ補因子領域のすぐ上流にフーリン・エンドプロテアーゼ切断部位をさらに含む、配列番号３４に示す配列をコードする、さらなるＦＨ－ＦＩ構築物を設計した。この構築物にコードされるＦＨ－ＦＩタンパク質の模式図を図１Ｃに示す。好適には、図１Ｃに模式的に示すポリペプチドは、フーリン・エンドプロテアーゼの内因性発現を有する細胞によって、非グリコシル化型で分泌されるであろう。したがって、このタンパク質をコードする構築物は、ｉｎ ｖｉｖｏで、例えば所望の部位で、非グリコシル化ポリペプチドを産生可能な細胞を生成するために有用である。

実施例２：キメラＣ３ｂ不活性化ポリペプチドによる、Ｃ３ｂのｉＣ３ｂへの分解
Ｃｌａｒｋら Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ （２０１４） １９３， ４９６２－４９７０に記載されるように、キメラＣ３ｂ不活性化ＦＨ－ＦＩポリペプチドをＣ３ｂに分解する能力をｉｎ ｖｉｔｒｏで調べた。簡潔には、総体積２０μｌで反応を行った。精製Ｃ３ｂ、因子Ｉおよび因子Ｈ；精製Ｃ３ｂおよびキメラＦＨ－ＦＩポリペプチド；または精製Ｃ３ｂおよび細胞培地対照をＰＢＳ中で一緒に混合して、そして３７℃で１５分間インキュベーションした。５μｌの５ｘＳＤＳ還元試料緩衝液を添加し、そして１００℃で１０分間煮沸することによって、反応を停止した。

続いて、ウェスタンブロッティングによって、Ｃ３ｂおよびｉＣ３ｂ ６８ｋＤａ ｉＣ３ｂ産物を検出した。簡潔には、いかなる近傍に移動するバンドの解像も可能にするために、試料をプレキャスト４－１２％ ＮｕＰＡＧＥ Ｂｉｓ Ｔｒｉｓ ＳＤＳゲル（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、英国オルトリナム）上で、２００Ｖで６０分間泳動し、そして次いで、トランスファー緩衝液（２５ｍＭ Ｔｒｉｓ、１９２ｍＭグリシン、１０％（ｖ／ｖ）メタノール）中、半乾燥トランスファー装置を用いて、ゲルを８０ｍＡで１．５時間、ニトロセルロース膜上にトランスファーした。膜を、ＰＢＳ、１０％（ｗ／ｖ）ミルク、０．２％（ｗ／ｖ）ＢＳＡ中で、４℃で１６時間ブロッキングした後、抗Ｃ３ｂ抗体クローン７５５（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、英国ケンブリッジ；カタログ番号２０７２）を、ＰＢＳ、０．２％（ｖ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ－２０（ＰＢＳ－Ｔ）中、０．５μｇ／ｍｌで、室温で２時間添加した。膜をＰＢＳ－Ｔで２ｘ３０分間洗浄した後、１：２０００希釈のＨＲＰコンジュゲート化二次抗体を、室温で２時間添加した。膜をＰＢＳ－Ｔで２ｘ３０分間洗浄した後、ＳｕｐｅｒＳｉｇｎａｌ Ｗｅｓｔ Ｐｉｃｏ化学発光基質（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号３４０８０）を室温で３分間添加した。Ｓｕｐｅｒ ＲＸ－Ｎ Ｘ線フィルム（富士フィルム、カタログ番号ＰＰＢ５０８０）を、処理した膜に室温で５分間曝露することによって、反応バンドを検出し、そして自動化Ｘ線フィルム現像装置上で現像した。

図２は、図１Ａに模式的に示すキメラＦＨ－ＦＩポリペプチドによる、Ｃ３ｂ分解の分析結果を示す。ｉＣ３ｂ ６８ｋＤａバンド（^＊）の検出によって示されるように、ＦＨ－ＦＩは、Ｃ３ｂをｉＣ３ｂに分解可能であることが見出された。

実施例３：キメラＣ３ｂ不活性化ポリペプチドの脱グリコシル化
３．１ キメラＣ３ｂ不活性化ポリペプチドの脱グリコシル化
以下のように、図１Ａに模式的に示すキメラＦＨ－ＦＩポリペプチドを脱グリコシル化して、Ｎ連結グリカンを除去した。

キチン結合ドメインでタグ化されたＲｅｍｏｖｅ－ｉＴ ＰＮＧアーゼ（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ、カタログ番号Ｐ０７０６Ｓ）を用いて、（Ｎ－グリカンを除去することによって）精製キメラポリペプチドを、非変性条件下で脱グリコシル化した。２μｌのＧｌｙｃｏＢｕｆｆｅｒ ２（１０ｘ）を、総体積１８μｌ中、２０μｇタンパク質に添加した。吸引によって穏やかに混合した後、５μｌのＰＮＧアーゼＦを添加し、そして吸引によって注意深く混合した。反応を、３７℃の水槽中で２４時間放置した。続いて、ＰＮＧアーゼＦの除去のため、５０μｌの磁気キチンビーズ（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ、カタログ番号Ｅ８０３６Ｓ）をＰＢＳ中で洗浄し、そして磁気エッペンドルフホルダーを用いてペレットにした。採取したビーズを脱グリコシル化反応に適用し、そして室温で１０分間インキュベーションした。磁気スタンドを用いて、磁気キチンビーズおよび会合したＰＮＧアーゼＦをペレットにし、そして脱グリコシル化タンパク質を含有する上清を収集した。ゲル電気泳動によって、脱グリコシル化タンパク質を分析した。いかなる近傍に移動するバンドの解像も可能にするために、プレキャスト４－１２％ ＮｕＰＡＧＥ Ｂｉｓ Ｔｒｉｓ ＳＤＳゲル（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、英国オルトリナム）を、２００Ｖで６０分間泳動し、そして次いで、ゲルを、Ｉｎｓｔａｎｔ Ｂｌｕｅ染色（Ｅｘｐｅｄｅｏｎ、英国ハーストン）で、室温で６０分間染色した。

図３は、図１Ａに模式的に示すキメラＦＨ－ＦＩポリペプチドの脱グリコシル化がバンドシフトを引き起こすことを示す。バンド移動の増加は、グリカンの喪失、そしてその結果の流体力学半径の減少を示す。

実施例４：ブルッフ膜を渡る、キメラＣ３ｂ不活性化ポリペプチドの拡散
４．１ 補体因子ＩおよびＨは、ブルッフ膜を渡って拡散することが不可能である
異なる補体タンパク質が、ブルッフ膜（ＢｒＭ）を渡って拡散する能力を分析した。

濃縮された（ｅｎｒｉｃｈｅｄ）黄斑ＢｒＭを通じた、可溶性タンパク質の受動拡散を、Ｃｌａｒｋら Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ （２０１４） １９３， ４９６２－４９７０に記載されるように行った。簡潔には、濃縮ＢｒＭの黄斑領域を、ＭｃＨａｒｇら， Ｊ Ｖｉｓ Ｅｘｐ （２０１５） １－７に記載されるように、ドナーの目から単離し、そしてウッシングチャンバー（Ｈａｒｖａｒｄ Ａｐｐａｒａｔｕｓ、米国ハムデン）にマウントした；ＢｒＭを除去した目の組織は、ＡＭＤの巨視的証拠を示さなかった。マウントしたら、５ｍｍ直径の黄斑領域は、２つの同一の区画間の唯一のバリアであった。ＢｒＭの両側を２ｍｌのＰＢＳで、室温で５分間洗浄した。ヒト全血清を用いた実験のため、ヒト血清（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、英国プール、カタログ番号Ｈ４５２２）をＰＢＳで、１：１で希釈して、そして２ｍｌを、試料チャンバーと称されるウッシング区画に添加した。精製補体を用いた実験のため、精製タンパク質を、１００μｇ／ｍｌで、ＰＢＳ中で試料チャンバーに添加した。１分後、第二の区画に漏洩（膜の完全性の侵害を示す）が検出されなかったら、拡散物質チャンバーと称されるウッシングチャンバーの第二の区画に、２ｍｌのＰＢＳのみを添加し、そして各区画で穏やかに攪拌しながら、室温で２４時間放置して、拡散タンパク質の勾配が生じるのを回避した。各チャンバー由来の試料を続いて、ゲル電気泳動によって分析して、そしてＩｎｓｔａｎｔ Ｂｌｕｅ染色（Ｅｘｐｅｄｅｏｎ、英国ハーストン）で、室温で６０分間染色するか、または上述のようにウェスタンブロッティングに供した。ウェスタンブロッティング実験において、以下の抗体を用いた：抗ＦＩクローン２７１２０３（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、カタログ番号ＭＡＢ３３０７）、抗ＦＤクローン２５５７０６（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、カタログ番号ＭＡＢ１８２４）；および抗ＦＢクローン３１３０１１（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、カタログ番号ＭＡＢ２７３９）、抗ＦＨクローンＯＸ２３（ＡＢｃａｍカタログ番号ａｂ１７９２８）、抗Ｃ３ｂクローン７５５（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓカタログ番号２０７２）、およびＣｌａｒｋら Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ （２０１４） １９３， ４９６２－４９７０に記載されるポリクローナル抗ＦＨＬ－１抗体。

実験結果を図４Ａ（全ヒト血清）および４Ｂ（精製補体タンパク質）に示す。補体因子Ｈ、Ｂ、ＩおよびＣ３ｂは、ＢｒＭを通じて拡散不能であることが見出され、一方、因子ＤおよびＦＨＬ－１はＢｒＭを渡って拡散可能である。

補体因子ＩがＢｒＭを渡って拡散し、そしてＣ３ｂを分解することができないことは、上記実施例２に本質的に記載するように実行したＣ３ｂ分解アッセイで確認した。ＰＢＳ中でともに混合した２μｇの精製Ｃ３ｂおよび０．１μｇのＦＨＬ－１、ならびに０．０４μｇの精製ＦＩまたはＢｒＭを渡る精製ＦＩの拡散を調べた拡散実験の拡散物質チャンバーから採取した１０μｌ試料を用いて、２０μｌの総体積中で反応を行った。

結果を図５Ａに示す。ＦＨＬ－１およびＦＩの存在下では、Ｃ３ｂのα鎖の分解の観察が可能であった。拡散物質チャンバー由来の試料にＦＨＬ－１およびＣ３ｂを添加すると、すなわちＦＩの非存在下では、Ｃ３ｂ α鎖の分解がないことが示された。精製ＦＩを同じ試料に直接添加し、そして続いてＣ３ｂ α鎖が、その構成要素である４３ｋＤａおよび６８ｋＤａ ｉＣ３ｂ分解産物に分解されることによって、アッセイの妥当性が確認された。

補体因子Ｉは、「拡散物質＋、Ｃ３ｂ＋、ＦＨＬ－１＋、補充ＦＩ－」レーン（すなわち図５Ａのゲルのレーン８）において、ｉＣ３ｂ産物が存在しないことによって立証されるように、拡散物質中には存在しないことが示された。この実験はまた、ＦＨＬ－１は、単独ではＣ３ｂを分解不能であることも示す（図５Ａのゲルのレーン７および８）。

本発明者らは次に、補体因子Ｉのグリコシル化状態が、ＢｒＭを渡って拡散する能力に重要であるかどうかを調べた。脱グリコシル化補体因子Ｉ（図５ＢにおいてｄＦＩと示される）を、上記実施例３．１に記載するように、Ｒｅｍｏｖｅ－ｉＴ ＰＮＧアーゼＦでの補体因子Ｉの処理によって調製した。脱グリコシル化は、バンドシフトと関連し；重鎖バンドは最もグリコシル化されており、そしてしたがって、最大の移動を示す（図５Ｂ）。

脱グリコシル化補体因子ＩがＢｒＭを渡って拡散し、そしてＣ３ｂを分解する能力を、上記実施例２に本質的に記載するように実行したＣ３ｂ分解アッセイで分析した。ＰＢＳ中でともに混合した２μｇの精製Ｃ３ｂおよび０．１μｇのＦＨＬ－１、ならびにＢｒＭを渡るｄＦＩの拡散を調べた拡散実験の拡散物質チャンバーから採取した１０μｌ試料を用いて、２０μｌの総体積中で反応を行った。

結果を図５Ｃに示す。脱グリコシル化補体因子Ｉは、拡散物質チャンバー中に存在することが示され、そして「拡散物質＋、Ｃ３ｂ＋、ＦＨＬ－１＋」レーン（すなわち図５Ｃのゲルのレーン７）におけるｉＣ３ｂの存在によって立証されるように、Ｃ３ｂを分解することが可能であった。

４．２ 脱グリコシル化キメラＦＨ－ＦＩ Ｃ３ｂ不活性化ポリペプチドは、ブルッフ膜を渡って拡散する
実施例３に記載するように調製した脱グリコシル化キメラＦＨ－ＦＩポリペプチドを、上記実施例４．１に記載するようなアッセイにおいて、ＢｒＭを渡って拡散する能力に関して分析した。

実験結果を図６に示す。脱グリコシル化キメラＦＨ－ＦＩポリペプチド（図６において、ｄＦＨ－ＦＩと示される）は、ＢｒＭを渡って拡散可能であることが示された。
実施例５：脱グリコシル化キメラＦＨ－ＦＩ Ｃ３ｂ不活性化ポリペプチドは、Ｃ３ｂ分解活性を保持する
上記実施例２に記載するようなアッセイにおいて、実施例３に記載するように調製した脱グリコシル化キメラＦＨ－ＦＩポリペプチドが、Ｃ３ｂをｉＣ３ｂに分解する能力に関して分析した。

実験結果を図７に示す。脱グリコシル化キメラＦＨ－ＦＩポリペプチド（図７においてｄＦＨ－ＦＩと示す）は、Ｃ３ｂからｉＣ３ｂへの分解が可能であることが示された。
実施例６：非グリコシル化キメラＦＨ－ＦＩポリペプチドを、ブルッフ膜を渡って拡散し、そしてＣ３ｂ分解活性を保持する能力に関して評価する
例えば図１Ｂに模式的に示すような、非グリコシル化キメラＦＨ－ＦＩポリペプチドを、上記の実施例４．１に記載するようなアッセイにおいて、ＢｒＭを渡って拡散する能力に関して分析する。

例えば図１Ｂに模式的に示すような、非グリコシル化キメラＦＨ－ＦＩポリペプチドを、上記実施例２に記載するようなアッセイにおいて、Ｃ３ｂをｉＣ３ｂに分解する能力に関して分析する。

実施例７：グリコシル化および脱グリコシル化キメラＦＨ－ＦＩポリペプチドは、Ｃ３ｂに対する結合アフィニティを示す
グリコシル化キメラＦＨ－ＦＩポリペプチド（例えば図１Ａに模式的に示すようなもの）および脱グリコシル化キメラＦＨ－ＦＩポリペプチド（実施例３に記載するように調製したもの）の、Ｃ３ｂに対する結合アフィニティを評価した。

バイオレイヤー干渉法を用いて、アフィニティ測定を計算した。陽性対照として、天然補体制御因子、ならびにＣ３ｂ結合ポリペプチドＦＨおよびＦＨＬ－１を含めた。
結果を図９Ａおよび９Ｂに示す。キメラＦＨ－ＦＩのグリコシル化型および脱グリコシル化型はどちらも、Ｃ３ｂに対する結合アフィニティを示した（図９Ａ）。グリコシル化キメラＦＨ－ＦＩは、ＫＤ ５．２１ｅ^－９Ｍで、Ｃ３ｂへの最強の結合を示す。脱グリコシル化キメラＦＨ－ＦＩは、ＫＤ ４．７６ｅ^－８Ｍで、より弱く結合する。どちらのキメラＦＨ－ＦＩポリペプチドも、図９Ｂに示すようにＦＨ（ＫＤ ５．８３ｅ^－７Ｍ）またはＦＨＬ－１（ＫＤ １．１７ｅ^－６Ｍ）のいずれよりもより強くＣ３ｂに結合する。

実施例８：補体受容体１補因子領域を含むキメラＣ３ｂ不活性化ポリペプチドの生成
配列番号５０、５１、５２および５３に示すアミノ酸配列をコードするＤＮＡ挿入物を設計し、そして組換えＤＮＡ技術によって産生し、そしてベクター内にクローニングして、キメラタンパク質の組換え発現のための構築物を生成する。アミノ酸配列およびその特徴を以下に示す。

図１０Ａ～１０Ｄは、Ｎ末端６ｘＨｉｓタグを除去するためにＴＥＶプロテアーゼで処理した後の、配列番号５０～５３のタンパク質の模式図を示す。
実施例９：キメラＣＲ１ａ－ＦＩおよびＣＲ１ｂ－ＦＩポリペプチドが、ブルッフ膜を渡って拡散し、そしてＣ３ｂ分解活性を保持する能力に関して評価する
図１０Ａおよび１０Ｃに模式的に示すキメラＣＲ１ａ－ＦＩおよびＣＲ１ｂ－ＦＩポリペプチドが、上記実施例２に記載するようなアッセイにおいて、Ｃ３ｂをｉＣ３ｂに分解する能力に関して分析する。

図１０Ａおよび１０Ｃに模式的に示すキメラＣＲ１ａ－ＦＩおよびＣＲ１ｂ－ＦＩポリペプチドが、上記実施例４．１に記載するようなアッセイにおいて、ＢｒＭを渡って拡散する能力に関して分析する。

上記実施例３．１に記載するように、Ｒｅｍｏｖｅ－ｉＴ ＰＮＧアーゼＦでの処理によって、図１０Ａおよび１０Ｃに模式的に示すキメラＣＲ１ａ－ＦＩおよびＣＲ１ｂ－ＦＩポリペプチドの脱グリコシル化型を調製する。脱グリコシル化キメラＣＲ１ａ－ＦＩおよびＣＲ１ｂ－ＦＩポリペプチドの図を、図１０Ｂおよび１０Ｄに示す。

キメラＣＲ１ａ－ＦＩおよびＣＲ１ｂ－ＦＩポリペプチドの脱グリコシル化型が、上記実施例４．１に記載するようなアッセイにおいて、ＢｒＭ膜を渡って拡散する能力に関して、そして上記実施例２に記載するアッセイにおいて、Ｃ３ｂをｉＣ３ｂに分解する能力に関して分析する。

実施例１０：ブルッフ膜を渡る、キメラＣ３ｂ不活性化ポリペプチドの非グリコシル化型の拡散
例えば図１０Ｂおよび１０Ｄに模式的に示すような、非グリコシル化キメラｎＣＲ１ａ－ＦＩおよびｎＣＲ１ｂ－ＦＩポリペプチドが、上記実施例４．１に記載するようなアッセイにおいて、ＢｒＭを渡って拡散する能力に関して分析する。

例えば図１０Ｃおよび１０Ｄに模式的に示すような、非グリコシル化キメラｎＣＲ１ａ－ＦＩおよびｎＣＲ１ｂ－ＦＩポリペプチドが、上記実施例２に記載するようなアッセイにおいて、Ｃ３ｂをｉＣ３ｂに分解する能力に関して分析する。
非限定的に、本発明は以下の態様を含む。
［態様１］
Ｃ３ｂ結合領域およびＣ３ｂ不活性化領域を含むポリペプチド。
［態様２］
Ｃ３ｂ不活性化領域が、Ｃ３ｂをタンパク質分解的に切断可能である、態様１記載のポリペプチド。
［態様３］
Ｃ３ｂ不活性化領域が、１３０３および／または１３２０位でＣ３ α’鎖を切断可能である、態様１または態様２記載のポリペプチド。
［態様４］
Ｃ３ｂ不活性化領域が、配列番号９のアミノ酸配列に対して少なくとも６５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたは該アミノ酸配列からなる、態様１～３のいずれか一項記載のポリペプチド。
［態様５］
Ｃ３ｂ結合領域が、補体因子Ｉの補因子によって結合される領域で、Ｃ３ｂに結合する、態様１～４のいずれか一項記載のポリペプチド。
［態様６］
Ｃ３ｂ結合領域が、補体因子Ｈ、ＣＲ１、ＣＤ４６、ＣＤ５５またはＣ４結合タンパク質の１つによって結合される領域で、Ｃ３ｂに結合する、態様１～５のいずれか一項記載のポリペプチド。
［態様７］
Ｃ３ｂ結合領域が、補体因子Ｈによって結合される領域、または補体受容体１（ＣＲ１）によって結合される領域で、Ｃ３ｂに結合する、態様１～６のいずれか一項記載のポリペプチド。
［態様８］
Ｃ３ｂ結合領域が、補体因子Ｈ補体制御タンパク質（ＣＣＰ）ドメイン１～４によって結合される領域、あるいはＣＲ１ ＣＣＰドメイン８～１０または１５～１７によって結合される領域で、Ｃ３ｂに結合する、態様１～７のいずれか一項記載のポリペプチド。
［態様９］
Ｃ３ｂ結合領域が、配列番号１１、１３または１４のアミノ酸配列に対して少なくとも６５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたは該アミノ酸配列からなる、態様１～８のいずれか一項記載のポリペプチド。
［態様１０］
ブルッフ膜（ＢｒＭ）を渡って拡散可能である、態様１～９のいずれか一項記載のポリペプチド。
［態様１１］
グリコシル化されていない、態様１～１０のいずれか一項記載のポリペプチド。
［態様１２］
Ｃ３ｂ不活性化領域が、配列番号２７のコンセンサス配列に一致するアミノ酸配列を欠く、態様１～１１のいずれか一項記載のポリペプチド。
［態様１３］
ポリペプチドが検出配列を含み、該検出配列がタンパク質分解酵素の切断部位を含むかまたは該部位からなり、そしてタンパク質分解酵素でのポリペプチドの切断が、非内因性ペプチドの産生を生じる、態様１～１２のいずれか一項記載のポリペプチド。
［態様１４］
配列番号３２、３３、３４、３５、３６、３７、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６９、７０、７１、７２または７３のアミノ酸配列に対して少なくとも６５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたは該アミノ酸配列からなる、態様１～１３のいずれか一項記載のポリペプチド。
［態様１５］
分泌経路配列をさらに含む、態様１～１４のいずれか一項記載のポリペプチド。
［態様１６］
分泌経路配列が、配列番号２７のコンセンサス配列に一致するアミノ酸配列の１つまたはそれより多いコピーを含み、そしてポリペプチドが分泌経路配列を除去するための切断配列をさらに含む、態様１５記載のポリペプチド。
［態様１７］
分泌経路配列を除去するための切断部位が、フーリン・エンドプロテアーゼ切断部位である、態様１６記載のポリペプチド。
［態様１８］
態様１～１７のいずれか一項記載のポリペプチドをコードする核酸。
［態様１９］
態様１８の核酸を含むベクター。
［態様２０］
態様１～１７のいずれか一項記載のポリペプチド、態様１８記載の核酸、または態様１９記載のベクターを含む、細胞。
［態様２１］
ポリペプチドを産生するための方法であって、細胞内に、態様１８記載の核酸または態様１９記載のベクターを導入し、そしてポリペプチドの発現に適した条件下で、該細胞を培養する工程を含む、前記方法。
［態様２２］
態様２１記載の方法によって得られるかまたは得られうる、細胞。
［態様２３］
態様１～１７のいずれか一項記載のポリペプチド、態様１８記載の核酸、態様１９記載のベクター、あるいは態様２０または態様２２記載の細胞、並びに、薬学的に許容されうるキャリアー、アジュバント、賦形剤、または希釈剤を含む、薬学的組成物。
［態様２４］
疾患または状態を治療するかまたは防止する方法における使用のための、態様１～１７のいずれか一項記載のポリペプチド、態様１８記載の核酸、態様１９記載のベクター、態様２０または態様２２記載の細胞、あるいは態様２３記載の薬学的組成物。
［態様２５］
疾患または状態を治療するかまたは防止するための医薬品の製造における、態様１～１７のいずれか一項記載のポリペプチド、態様１８記載の核酸、態様１９記載のベクター、態様２０または態様２２記載の細胞、あるいは態様２３記載の薬学的組成物の使用。
［態様２６］
態様１～１７のいずれか一項記載のポリペプチド、態様１８記載の核酸、態様１９記載のベクター、態様２０または態様２２記載の細胞、あるいは態様２３記載の薬学的組成物を、被験体に投与する工程を含む、疾患または状態を治療するかまたは防止する方法。
［態様２７］
被験体において疾患または状態を治療するかまたは防止する方法であって、態様１８記載の核酸または態様１９記載のベクターを発現するかまたは含むように、被験体の少なくとも１つの細胞を修飾する工程を含む、前記方法。
［態様２８］
疾患または状態が、Ｃ３ｂまたはＣ３ｂ含有複合体、Ｃ３ｂまたはＣ３ｂ含有複合体に関連する活性／反応、あるいはＣ３ｂまたはＣ３ｂ含有複合体に関連する活性／反応の産物が、病理学的に関与している疾患または状態である、態様２４記載の使用のための、ポリペプチド、核酸、ベクター、細胞、または薬学的組成物、態様２５記載の使用、あるいは態様２６または態様２７記載の方法。
［態様２９］
疾患または状態が、加齢黄斑変性症（ＡＭＤ）である、態様２４～２８のいずれか一項記載の使用のための、ポリペプチド、核酸、ベクター、細胞、または薬学的組成物、使用、あるいは方法。
［態様３０］
あらかじめ決定した量の態様１～１７のいずれか一項記載のポリペプチド、態様１８記載の核酸、態様１９記載のベクター、態様２０または態様２２記載の細胞、あるいは態様２３記載の薬学的組成物を含む、部品キット。
［態様３１］
試料におけるポリペプチドを検出する方法であって：
（ｉ）態様１３記載のポリペプチドを含有すると推測される試料を、検出配列のタンパク質分解的切断部位に特異的なタンパク質分解酵素と接触させ；そして
（ｉｉ）非内因性ペプチドの存在を検出する
工程を含む、前記方法。

Claims (24)

1. Ｃ３ｂに結合可能な領域およびＣ３ｂを不活性化することが可能な領域を含むポリペプチドであって、
   ここにおいて、ポリペプチドは、Ｃ３ｂに結合可能な領域およびＣ３ｂを不活性化することが可能な領域の間にリンカーを含み、
   ここにおいて、リンカーは、ＧＧＧＧＳＲ［ＧＧＧＧＳ］ｎまたはＧＧＧＧＳＫ［ＧＧＧＧＳ］ｎ、ここにおいてｎは１－８である、のアミノ酸配列を含む、
   ここにおいて、Ｃ３ｂを不活性化することが可能な領域は、補体因子Ｉのタンパク質分解ドメインを含む、
   前記ポリペプチド。
2. リンカーが、配列番号２４、４８、６７または６８のアミノ酸配列を含む、請求項１記載のポリペプチド。
3. Ｃ３ｂを不活性化することが可能な領域が、１３０３および／または１３２０位でＣ３ α’鎖を切断可能である、請求項１～２のいずれか一項記載のポリペプチド。
4. Ｃ３ｂを不活性化することが可能な領域が、配列番号９のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたは該アミノ酸配列からなる、請求項１～３のいずれか一項記載のポリペプチド。
5. 補体因子Ｈ、補体受容体１（ＣＲ１）、ＣＤ４６、ＣＤ５５またはＣ４結合タンパク質の１つによって結合されるＣ３ｂの領域中で、Ｃ３ｂに結合可能な領域がＣ３ｂに結合する、請求項１～４のいずれか一項記載のポリペプチド。
6. 補体因子Ｈ補体制御タンパク質（ＣＣＰ）ドメイン１～４によって結合されるＣ３ｂの領域中で、あるいはＣＲ１ ＣＣＰドメイン８～１０または１５～１７によって結合されるＣ３ｂの領域中で、Ｃ３ｂに結合可能な領域がＣ３ｂに結合する、請求項１～５のいずれか一項記載のポリペプチド。
7. Ｃ３ｂに結合可能な領域が、配列番号１１、１３または１４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたは該アミノ酸配列からなる、請求項１～６のいずれか一項記載のポリペプチド。
8. ブルッフ膜（ＢｒＭ）を渡って拡散可能であり、そして、グリコシル化されていない、請求項１～７のいずれか一項記載のポリペプチド。
9. Ｃ３ｂを不活性化することが可能な領域が、配列番号２７のコンセンサス配列に一致するアミノ酸配列を欠く、請求項１～８のいずれか一項記載のポリペプチド。
10. 配列番号３２、３３、３４、３５、３６、３７、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６９、７０、７１、７２または７３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたは該アミノ酸配列からなる、請求項１～９のいずれか一項記載のポリペプチド。
11. 分泌経路配列をさらに含む、請求項１～１０のいずれか一項記載のポリペプチド。
12. 分泌経路配列が、配列番号２７のコンセンサス配列に一致するアミノ酸配列の１つまたはそれより多いコピーを含み、そしてポリペプチドが分泌経路配列を除去するための切断配列をさらに含む、請求項１１記載のポリペプチド。
13. 分泌経路配列を除去するための切断部位が、フーリン・エンドプロテアーゼ切断部位である、請求項１２記載のポリペプチド。
14. 請求項１～１３のいずれか一項記載のポリペプチドをコードする核酸。
15. 請求項１４の核酸を含むベクター。
16. 請求項１～１３のいずれか一項記載のポリペプチド、請求項１４記載の核酸、または請求項１５記載のベクターを含む、細胞。
17. ポリペプチドを産生するための方法であって、細胞内に、請求項１４記載の核酸または請求項１５記載のベクターを導入し、そしてポリペプチドの発現に適した条件下で、該細胞を培養する工程を含む、前記方法。
18. 請求項１～１３のいずれか一項記載のポリペプチド、請求項１４記載の核酸、請求項１５記載のベクター、あるいは請求項１６記載の細胞、並びに、薬学的に許容されうるキャリアー、アジュバント、賦形剤、または希釈剤を含む、薬学的組成物。
19. 補体制御不全に関連する疾患または状態を治療するかまたは防止するための薬学的組成物であって、請求項１～１３のいずれか一項記載のポリペプチド、請求項１４記載の核酸、請求項１５記載のベクター、あるいは請求項１６記載の細胞を含む、前記薬学的組成物。
20. 補体制御不全に関連する疾患または状態を治療するかまたは防止するための医薬品の製造における、請求項１～１３のいずれか一項記載のポリペプチド、請求項１４記載の核酸、請求項１５記載のベクター、請求項１６記載の細胞、あるいは請求項１８記載の薬学的組成物の使用。
21. 疾患または状態が、Ｃ３ｂまたはＣ３ｂ含有複合体、Ｃ３ｂまたはＣ３ｂ含有複合体に関連する活性／反応、あるいはＣ３ｂまたはＣ３ｂ含有複合体に関連する活性／反応の産物が、病理学的に関与している疾患または状態である、請求項１９記載の薬学的組成物。
22. 疾患または状態が、Ｃ３ｂまたはＣ３ｂ含有複合体、Ｃ３ｂまたはＣ３ｂ含有複合体に関連する活性／反応、あるいはＣ３ｂまたはＣ３ｂ含有複合体に関連する活性／反応の産物が、病理学的に関与している疾患または状態である、請求項２０記載の使用。
23. 疾患または状態が、加齢黄斑変性症（ＡＭＤ）である、請求項１９または請求項２１記載の薬学的組成物。
24. 疾患または状態が、加齢黄斑変性症（ＡＭＤ）である、請求項２０または請求項２２記載の使用。