JP7334964B2 - Ilv3を使用した微生物の検出及び設計 - Google Patents
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Description
本発明は、真菌又は酵母が試料に存在するかどうかの検出の観点における新規標的を提供する。この標的、ILV3は、ジヒドロキシ酸デヒドラターゼをコードし、ヒトゲノムとの任意の配列同一性の欠如のため臨床診断適用において特に有用である。カンジダ属(Candida)、アスペルギルス属(Aspergillus)及びクリプトコッカス・ネオフォルマンス(Cryptococcus neoformans)の存在又は不存在が試料において決定されることを可能にする、プライマー及びプローブが提供される。真菌又は酵母の存在が決定されると、真菌又は酵母種の同一性が、例えば、治療を指示するために、有益に得られる。単一のプライマー/プローブセットを使用した全カンジダ及び全アスペルギルス検出と同様に、カンジダ属又はアスペルギルス属種が、試料において決定されるのを可能にする種特異的なプライマー対も提供される。融解曲線解析が、どの種が試料に存在するかを決定する方法として利用されてもよい。方法は、どの細菌が試料に存在するかどうかを決定し、それらの細菌をグラム陽性又はグラム陰性のいずれかにカテゴリー分けし得る方法と組み合わされてもよい。
米国疾病予防管理センターは、患者の少なくとも30%が、規定の抗生物質が不必要であると推定している(Journal of American Medical Association、2016年5月)。抗生物質耐性は、差し迫った公的な健康の脅威である。英国において毎年、44,000人の死亡をもたらす150,000ケースを超える敗血症が存在する。44,000人の死亡の多くは、抗生物質耐性の微生物感染に起因する。微生物感染の培養ベースの同定は、平均しておよそ5日かかり、その期間、抗生物質が投与される。試料において微生物感染を検出するために、より迅速な検査が開発され得るなら、非常に有益である。
血液の真菌感染(真菌血症)は、非常に危険である。本発明者らは、真菌感染を迅速に(同日の結果)同定するために精査され得る分子標的を調べた。したがって、本発明は、真菌又は酵母が試料に存在するかどうかの検出の観点における新規標的としてのILV3を提供する。ILV3は、分岐鎖アミノ酸の生合成を導く共通の経路における第3の工程を触媒するジヒドロキシ酸デヒドラターゼをコードする。本発明者らは、ILV3遺伝子が、最も臨床上関連する真菌種に存在し、真菌感染の検出及び同定を可能にするよう特異的に標的化され得ることを発見した。さらに、ILV3遺伝子標的は、ヒトゲノムとの任意の配列同一性の欠如のため臨床診断適用において特に有用である。より詳細には、Liuら、2006年は、抗真菌薬の発見のための可能性のある標的として多数の候補遺伝子を挙げている。挙げられた全ての候補のうち、ILV3のみが、タンパク質レベルでヒトとの0%同一性を有する。さらなる解析を行った後、本発明者らは、ILV3がまた、遺伝子レベルでヒト又は細菌(グラム陽性又はグラム陰性状態のもの)と相同性を有さないことを見出した。これは、Liuらにおいて開示された他の候補遺伝子と対照的であり、本発明者らが、ヒトに対する遺伝子相同性を見出した。例えば、ILV5(タンパク質レベルでヒトと2%同一性)は、ヒトゲノムとの2つのヌクレオチドアライメント(82%同一性)をもたらした。したがって、ILV3以外の候補遺伝子(リボソーム候補、例えば、18S、28S又は5.8Sを含む)は、ヒト遺伝子材料を含む試料における真菌感染の偽陽性検出及び同定をもたらし得る。したがって、その広範な態様において、本発明は、試料において真菌感染を同定するためのILV3の使用をもたらす。
i.カンジダ・アルビカンス(Candida albicans)
ii.カンジダ・ドゥブリニエンシス(Candida dubliniensis)
iii.カンジダ・トロピカリス(Candida tropicalis)
iv.カンジダ・パラプシローシス(Candida parapsilosis)
v.カンジダ・グラブラタ(Candida glabrata)
vi.カンジダ・クルセイ(Candida krusei)
vii.カンジダ・ギリエルモンジィ(Candida guilliermondii)
viii.カンジダ・アウリス(Candida auris)
のILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマーを含む、試料において酵母/真菌感染を検出するための少なくとも1つのプライマー対を提供する。
i.ヌクレオチド配列受入番号NC_032093.1の位置c1169825~1169806(カンジダ・アルビカンス)
ii.ヌクレオチド配列受入番号NC_005968.1の位置c393798~393779(カンジダ・グラブラタ)
iii.ヌクレオチド配列受入番号NW_003020040.1の位置c405996~405978(カンジダ・トロピカリス)
iv.ヌクレオチド配列受入番号NC_012864.1の位置c1218036~1218017(カンジダ・ドゥブリニエンシス)
v.ヌクレオチド配列受入番号NW_001809800.1の位置c909809~909790(カンジダ・ギリエルモンジィ)
vi.ヌクレオチド配列受入番号HE605203.1の位置c24006~23987(カンジダ・パラプシローシス)
vii.ヌクレオチド配列受入番号JQFK01000016.1の位置61666~61685(カンジダ・クルセイ)
viii.ヌクレオチド配列受入番号NW_017263971.1の位置c32324~32305(カンジダ・アウリス)
の少なくとも3、4、5、6、7つ、好ましくは、全てにハイブリダイズする。
i.ヌクレオチド配列受入番号NC_032093.1の位置1169707~1169729(カンジダ・アルビカンス)
ii.ヌクレオチド配列受入番号NC_005968.1の位置393680~393702(カンジダ・グラブラタ)
iii.ヌクレオチド配列受入番号NW_003020040.1の位置405878~405900(カンジダ・トロピカリス)
iv.ヌクレオチド配列受入番号NC_012864.1の位置1217918~1217940(カンジダ・ドゥブリニエンシス)
v.ヌクレオチド配列受入番号NW_001809800.1の位置909691~909713(カンジダ・ギリエルモンジィ)
vi.ヌクレオチド配列受入番号HE605203.1の位置23888~23910(カンジダ・パラプシローシス)
vii.ヌクレオチド配列受入番号JQFK01000016.1の位置c61784~61762(カンジダ・クルセイ)
viii.ヌクレオチド配列受入番号NW_017263971.1の位置32206~32228(カンジダ・アウリス)
の少なくとも3、4、5、6、7つ、好ましくは、全てにハイブリダイズする。
i.カンジダ・アルビカンス
ii.カンジダ・ドゥブリニエンシス
iii.カンジダ・トロピカリス
iv.カンジダ・パラプシローシス
v.カンジダ・グラブラタ
vi.カンジダ・クルセイ
vii.カンジダ・ギリエルモンジィ
viii.カンジダ・アウリス
の少なくとも3、4、5、6、7つ、好ましくは、全てのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマーは、それぞれ、配列番号1及び配列番号2のヌクレオチド配列を含むか、本質的にからなるか、又はからなる。これは、全カンジダプライマー対である。
i.アスペルギルス・フミガーツス(Aspergillus fumigatus)
ii.アスペルギルス・ニガー
iii.アスペルギルス・フラバス
のILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマーを提供する。
i.ヌクレオチド配列受入番号NC_007195.1の位置3721583~3721597(アスペルギルス・フミガーツス)
ii.ヌクレオチド配列受入番号NT_166533.1の位置c541018~541004(アスペルギルス・ニガー)
iii.ヌクレオチド配列受入番号NW_002477240.1の位置c382612~382598(アスペルギルス・フラバス)
の少なくとも2つ、好ましくは、全3つにハイブリダイズするか、
又は、フォワードプライマーは、次の標的配列:
i.ヌクレオチド配列受入番号NC_007195.1の位置3721797~3721816(アスペルギルス・フミガーツス)
ii.ヌクレオチド配列受入番号NT_166533.1の位置c540804~540785(アスペルギルス・ニガー
iii.ヌクレオチド配列受入番号NW_002477240.1の位置c382398~382379(アスペルギルス・フラバス)
の少なくとも2つ、好ましくは、全3つにハイブリダイズする。
i.ヌクレオチド配列受入番号NC_007195.1の位置c3721887~3721872(アスペルギルス・フミガーツス)
ii.ヌクレオチド配列受入番号NT_166533.1の位置540714~540729(アスペルギルス・ニガー)
iii.ヌクレオチド配列受入番号NW_002477240.1の位置382308~382323(アスペルギルス・フラバス)
の少なくとも2つ、好ましくは、全3つにハイブリダイズするか、
又はリバースプライマーは、次の標的配列:
i.ヌクレオチド配列受入番号NC_007195.1の位置c3721875~3721894(アスペルギルス・フミガーツス)
ii.ヌクレオチド配列受入番号NT_166533.1の位置540707~540726(アスペルギルス・ニガー)
iii.ヌクレオチド配列受入番号NW_002477240.1の位置382301~382320(アスペルギルス・フラバス)
の少なくとも2つ、好ましくは、全3つにハイブリダイズする。
i.アスペルギルス・フミガーツス
ii.アスペルギルス・ニガー
iii.アスペルギルス・フラバス
のILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマーは、それぞれ、配列番号70及び71又は配列番号73及び74のヌクレオチド配列を含むか、本質的にからなるか、又はからなる。したがって、配列番号70及び71は、好ましいプライマー対を形成する。配列番号73及び74は、第2のプライマー対を形成する。これらは、全アスペルギルスプライマー対である。
i.位置c1170234~1170217
ii.位置c1171213~1171192
の1つにハイブリダイズする。
i.位置1170119~1170140
ii.位置1171120~1171138
の1つにハイブリダイズする。
i.位置c1219181~1219161
ii.位置c1218505~1218486
iii.位置c1218553~1218534
の1つにハイブリダイズする。
i.位置1219103~1219124
ii.位置1218409~1218429
iii.位置1218419~1218440
の1つにハイブリダイズする。
i.位置c406146~406127
ii.位置c406142~406120
の1つにハイブリダイズする。
i.位置406047~406068
ii.位置406048~406069
の1つにハイブリダイズする。
i.位置c24951~24931
ii.位置c24881~24863
の1つにハイブリダイズする。
i.位置24843~24865
ii.位置24774~24795
の1つにハイブリダイズする。
i.位置c394191~394169
ii.位置c393535~393516
iii.位置c395076~395055
iv.位置c394884~394863
の1つにハイブリダイズする。
i.位置394080~394101
ii.位置393445~393464
iii.位置394987~395006
iv.位置394783~394803
の1つにハイブリダイズする。
i.位置61723~61744
ii.位置60940~60961
iii.位置60420~60440
iv.位置61778~61797
v.位置61940~61961
の1つにハイブリダイズする。
i.位置c61817~61796
ii.位置c61030~61011
iii.位置c60535~60513
iv.位置c61923~61902
v.位置c62015~61996
の1つにハイブリダイズする。
i.位置c909629~909608
ii.位置c911117~911098
iii.位置c911111~911090
iv.位置c910941~910920
の1つにハイブリダイズする。
i.位置909529~909550
ii.位置911002~911023
iii.位置910994~911013
iv.位置910799~910819
の1つにハイブリダイズする。
i.位置c32790~32768
ii.位置c32451~32430
iii.位置c32654~32633
iv.位置c33278~33259
v.位置c32603~32580
vi.位置c32399~32376
vii.位置c33648~33628
viii.位置c32240~32219
ix.位置c32930~32909
x.位置c33228~33206
xi.位置c32106~32085
の1つにハイブリダイズする。
i.位置32682~32703
ii.位置32368~32389
iii.位置32567~32588
iv.位置33202~33223
v.位置32512~32533
vi.位置32328~32349
vii.位置33566~33587
viii.位置32175~32195
ix.位置32826~32848
x.位置33130~33151
xi.位置32011~32033
の1つにハイブリダイズする。
i.位置3721531~3721552
ii.位置3721618~3721638
iii.位置3721616~3721638
iv.位置3721798~3721818
の1つにハイブリダイズする。
i.位置c3721653~3721675
ii.位置c3721706~3721681
iii.位置c3721898~3721878
の1つにハイブリダイズする。
i.位置c540219~540199
の1つにハイブリダイズする。
ii.位置540084~540103
の1つにハイブリダイズする。
i.位置c382604~382586
の1つにハイブリダイズする。
i.位置382519~382541
ii.位置382520~382541
の1つにハイブリダイズする。
いくつかの実施形態によると、クリプトコッカス・ネオフォルマンスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプライマー対のフォワードプライマーは、ヌクレオチド配列受入番号NC_006693.1由来の次の標的配列:
i.位置702696~702717
ii.位置702499~702520
iii.位置702736~702757
iv.位置702384~702403
v.位置701384~701406
の1つにハイブリダイズする。
i.位置c702796~702777
ii.位置c702602~702582
iii.位置c702850~702831
iv.位置c702521~702500
v.位置c701499~701479
の1つにハイブリダイズする。
i.カンジダ・アルビカンス
ii.カンジダ・ドゥブリニエンシス
iii.カンジダ・トロピカリス
iv.カンジダ・パラプシローシス
v.カンジダ・グラブラタ
vi.カンジダ・クルセイ
vii.カンジダ・ギリエルモンジィ
viii.カンジダ・アウリス
のILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブを含む、試料における酵母/真菌感染を検出するための少なくとも1つのプローブを提供する。
i.ヌクレオチド配列受入番号NC_032093.1の位置1169779~1169804(カンジダ・アルビカンス)
ii.ヌクレオチド配列受入番号NC_005968.1の位置393752~393777(カンジダ・グラブラタ)
iii.ヌクレオチド配列受入番号NW_003020040.1の位置405950~405975(カンジダ・トロピカリス)
iv.ヌクレオチド配列受入番号NC_012864.1の位置1217990~1218015(カンジダ・ドゥブリニエンシス)
v.ヌクレオチド配列受入番号NW_001809800.1の位置909763~909788(カンジダ・ギリエルモンジィ)
vi.ヌクレオチド配列受入番号HE605203.1の位置23960~23985(カンジダ・パラプシローシス)
vii.ヌクレオチド配列受入番号JQFK01000016.1の位置c61712~61687(カンジダ・クルセイ)
viii.ヌクレオチド配列受入番号NW_017263971.1の位置32278~32303(カンジダ・アウリス)
の少なくとも3、4、5、6、7つ、好ましくは、全てにハイブリダイズする。
i.カンジダ・アルビカンス
ii.カンジダ・ドゥブリニエンシス
iii.カンジダ・トロピカリス
iv.カンジダ・パラプシローシス
v.カンジダ・グラブラタ
vi.カンジダ・クルセイ
vii.カンジダ・ギリエルモンジィ
viii.カンジダ・アウリス
のILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブは、配列番号3のヌクレオチド配列を含むか、本質的にからなるか、又はからなる。
i.アスペルギルス・フミガーツス
ii.アスペルギルス・ニガー
iii.アスペルギルス・フラバス
のILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブを含む、試料における酵母/真菌感染を検出するための少なくとも1つのプローブを提供する。
i.ヌクレオチド配列受入番号NC_007195.1の位置3721790~3721814(アスペルギルス・フミガーツス)
ii.ヌクレオチド配列受入番号NT_166533.1の位置c540811~540788(アスペルギルス・ニガー)
iii.ヌクレオチド配列受入番号NW_002477240.1の位置c382405~382381(アスペルギルス・フラバス)
の少なくとも2つ、好ましくは、全3つにハイブリダイズするか、
又は少なくとも1つのプローブは、次の標的配列:
i.ヌクレオチド配列受入番号NC_007195.1の位置3721848~3721870(アスペルギルス・フミガーツス)
ii.ヌクレオチド配列受入番号NT_166533.1の位置c540753~540731(アスペルギルス・ニガー)
iii.ヌクレオチド配列受入番号NW_002477240.1の位置c382347~382325(アスペルギルス・フラバス)
の少なくとも2つ、好ましくは、全3つにハイブリダイズする。
i.アスペルギルス・フミガーツス
ii.アスペルギルス・ニガー
iii.アスペルギルス・フラバス
のILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブは、配列番号72又は75のヌクレオチド配列を含むか、本質的にからなるか、又はからなる。
i.位置c1170174~1170151
ii.位置1171165~1171192
の1つにハイブリダイズする。
i.位置1219148~1219171
ii.位置c1218439~1218416
iii.位置c1218505~1218480
の1つにハイブリダイズする。
i.位置c406111~406082
にハイブリダイズする。
i.位置c24907~24883
ii.位置c24862~24839
の1つにハイブリダイズする。
i.位置c394151~394128
ii.位置c393478~393453
iii.位置c395030~395007
iv.位置c394836~394807
の1つにハイブリダイズする。
i.位置61770~61793
ii.位置c60990~60967
iii.位置60462~60485
iv.位置61815~61838
v.位置c61970~61945
の1つにハイブリダイズする。
i.位置c909577~909552
ii.位置c911088~911065
iii.位置910878~910904
の1つにハイブリダイズする。
i.位置c32744~32721
ii.位置c32421~32398
iii.位置c32629~32605
iv.位置33233~33257
v.位置32542~32563
vi.位置32350~32373
vii.位置c33627~33606
viii.位置c32218~32196
ix.位置c32890~32864
x.位置c33259~33236
xi.位置c32061~32038
の1つにハイブリダイズする。
i.位置c3721651~3721628
ii.位置3721658~3721681
iii.位置3721848~3721870
の1つにハイブリダイズする。
i.位置c540161~540138
の1つにハイブリダイズする。
i.位置c382572~382549
の1つにハイブリダイズする。
i.位置702724~702747
ii.位置702526~702549
iii.位置702805~702829
iv.位置702423~702446
v.位置701435~701458
の1つにハイブリダイズする。
特定のプライマー及びプローブが、広く記載され、本発明の方法において有用に適用される一方、他のプライマー及びプローブが、ILV3を標的にするよう設計され、適用されてもよい。したがって、本発明は、試料における真菌/酵母感染を検出する一般的な方法であって、
a.核酸増幅反応を行って、真菌/酵母のILV3遺伝子を増幅するステップと、
b.増幅産物を検出して、試料が真菌/酵母感染を含有するかどうかを決定するステップと
を含む、方法を提供する。
i.カンジダ・アルビカンス
ii.カンジダ・ドゥブリニエンシス
iii.カンジダ・トロピカリス
iv.カンジダ・パラプシローシス
v.カンジダ・グラブラタ
vi.カンジダ・クルセイ
vii.カンジダ・ギリエルモンジィ
viii.カンジダ・アウリス
の少なくとも1、2、3、4、5、6、7種又は全8種の検出を可能にしてもよい。
i.アスペルギルス・フミガーツス
ii.アスペルギルス・ニガー
iii.アスペルギルス・フラバス
の少なくとも1、2又は全3種の検出を可能にしてもよい。
a.次の成分:
i.カンジダ属種のILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマー、任意選択でそれと共に、プライマー結合部位間でカンジダ属種のILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブ;及び
ii.アスペルギルス属種のILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマー、任意選択でそれと共に、プライマー結合部位間でアスペルギルス属種のILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブ;及び/又は
iii.クリプトコッカス・ネオフォルマンスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマー、任意選択でそれと共に、プライマー結合部位間でクリプトコッカス・ネオフォルマンスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブ
を含む核酸増幅反応を行うステップと、
b.増幅産物を検出して、試料が真菌/酵母感染を含有するかどうかを決定するステップと
を含む、方法を提供する。
i.カンジダ・アルビカンス
ii.カンジダ・ドゥブリニエンシス
iii.カンジダ・トロピカリス
iv.カンジダ・パラプシローシス
v.カンジダ・グラブラタ
vi.カンジダ・クルセイ
vii.カンジダ・ギリエルモンジィ
viii.カンジダ・アウリス
ix.アスペルギルス・フミガーツス
x.アスペルギルス・ニガー
xi.アスペルギルス・フラバス
xii.クリプトコッカス・ネオフォルマンス
の少なくとも1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11種又は全12種のILV3遺伝子を特異的な方法で増幅する能力がある核酸増幅反応を含んでもよい。
i.カンジダ・アルビカンス
ii.カンジダ・ドゥブリニエンシス
iii.カンジダ・トロピカリス
iv.カンジダ・パラプシローシス
v.カンジダ・グラブラタ
vi.カンジダ・クルセイ
vii.カンジダ・ギリエルモンジィ
viii.カンジダ・アウリス
の少なくとも2、3、4、5、6、7種、好ましくは、全てのILV3遺伝子にハイブリダイズする。
i.カンジダ・アルビカンス
ii.カンジダ・ドゥブリニエンシス
iii.カンジダ・トロピカリス
iv.カンジダ・パラプシローシス
v.カンジダ・グラブラタ
vi.カンジダ・クルセイ
vii.カンジダ・ギリエルモンジィ
viii.カンジダ・アウリス
の少なくとも2、3、4、5、6、7種、好ましくは、全てのそれぞれのILV3遺伝子にハイブリダイズする。
i.アスペルギルス・フミガーツス
ii.アスペルギルス・ニガー
iii.アスペルギルス・フラバス
の少なくとも2種、好ましくは、全3種のILV3遺伝子にハイブリダイズする。
i.アスペルギルス・フミガーツス
ii.アスペルギルス・ニガー
iii.アスペルギルス・フラバス
の少なくとも2種、好ましくは、全3種のILV3遺伝子にハイブリダイズする。
a.次の成分:
i.カンジダ属種のILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマー、任意選択でそれと共に、プライマー結合部位間でカンジダ属種のILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブ;及び
ii.アスペルギルス属種のILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマー、任意選択でそれと共に、プライマー結合部位間でアスペルギルス属種のILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブ;及び/又は
iii.クリプトコッカス・ネオフォルマンスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマー、任意選択でそれと共に、プライマー結合部位間でクリプトコッカス・ネオフォルマンスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブ
を含む核酸増幅反応を行うステップと、
b.増幅産物を検出し、識別して、真菌/酵母感染を同定するステップと
を含む、方法を提供する。
a.次の成分のセット:
i.カンジダ・アルビカンスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマー
ii.カンジダ・ドゥブリニエンシスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマー
iii.カンジダ・トロピカリスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマー
iv.カンジダ・パラプシローシスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマー
v.カンジダ・グラブラタのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマー
vi.カンジダ・クルセイのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマー
vii.カンジダ・ギリエルモンジィのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマー
viii.カンジダ・アウリスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマー
の少なくとも3、4、5、6、7つ又は全てを使用して、核酸増幅反応を行うステップと、
b.増幅産物を検出し、識別して、カンジダ感染に関与する種を同定するステップと
を含む、方法を提供する。
a.次の成分のセット:
i.アスペルギルス・フミガーツスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマー
ii.アスペルギルス・ニガーのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマー
iii.アスペルギルス・フラバスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマー
少なくとも2つ又は全てを使用して、核酸増幅反応を行うステップと、
b.増幅産物を検出し、識別して、アスペルギルス感染に関与する種を同定するステップと
を含む、方法にも関する。
a.本発明の方法を行って、カンジダ属、アスペルギルス属及び/又はクリプトコッカス・ネオフォルマンスが試料に存在するかどうかを決定するステップと、
b.カンジダ属又はアスペルギルス属種が試料に存在する場合、本発明の方法を行って、種が存在することを決定し、これにより、試料における酵母/真菌感染を検出し、同定するステップと
を含む、方法をさらに提供する。
a.次の成分:
i.グラム陽性細菌の16SrRNA遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマー、任意選択でそれと共に、プライマー結合部位間でグラム陽性細菌の16SrRNA遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブ、
ii.グラム陰性細菌の16SrRNA遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマー、任意選択でそれと共に、プライマー結合部位間でグラム陰性細菌の16SrRNA遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブ、
iii.少なくとも1つの真菌/酵母種のILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマー、任意選択でそれと共に、プライマー結合部位間で少なくとも1つの真菌/酵母種のILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブ
を含む核酸増幅反応を行うステップと、
b.増幅産物を検出し、識別して、試料がグラム陰性細菌感染、グラム陽性細菌感染及び/又は真菌/酵母感染を含有するかどうかを決定するステップと
を含む、方法をさらに提供する。
対応するキットがまた、提供される。したがって、本発明は、試料における微生物感染を識別するためのキットであって、
a.グラム陽性細菌の16SrRNA遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマー、任意選択でそれと共に、プライマー結合部位間でグラム陽性細菌の16SrRNA遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブ、
b.グラム陰性細菌の16SrRNA遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマー、任意選択でそれと共に、プライマー結合部位間でグラム陰性細菌の16SrRNA遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブ、
c.少なくとも1つの真菌/酵母種のILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマー、任意選択でそれと共に、プライマー結合部位間で少なくとも1つの真菌/酵母種のILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブ
を含む多重核酸増幅反応を行うための成分を含み、
成分a、b及びcそれぞれが、識別可能な増幅産物を産生し、これにより、試料が、グラム陰性細菌感染、グラム陽性細菌感染及び/又は真菌/酵母感染を含有するかどうかの決定を可能にする、キットを提供する。
a.核酸増幅反応を行って、真菌/酵母のILV3遺伝子を増幅するステップと、
b.増幅産物を検出して、試料が真菌/酵母感染を含有するかどうかを決定するステップと
を含む、方法。
a.次の成分:
i.カンジダ属種のILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマー、任意選択でそれと共に、プライマー結合部位間でカンジダ属種のILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブ;及び
ii.アスペルギルス属種のILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマー、任意選択でそれと共に、プライマー結合部位間でアスペルギルス属種のILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブ;及び/又は
iii.クリプトコッカス・ネオフォルマンスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマー、任意選択でそれと共に、プライマー結合部位間でクリプトコッカス・ネオフォルマンスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブ
を含む核酸増幅反応を行うステップと、
b.増幅産物を検出して、試料が真菌/酵母感染を含有するかどうかを決定するステップと
を含む、方法。
i.カンジダ・アルビカンス
ii.カンジダ・ドゥブリニエンシス
iii.カンジダ・トロピカリス
iv.カンジダ・パラプシローシス
v.カンジダ・グラブラタ
vi.カンジダ・クルセイ
vii.カンジダ・ギリエルモンジィ
viii.カンジダ・アウリス
ix.アスペルギルス・フミガーツス
x.アスペルギルス・ニガー
xi.アスペルギルス・フラバス
xii.クリプトコッカス・ネオフォルマンス
の少なくとも3、4、5、6、7、8、9、10、11種又は全12種のILV3遺伝子を増幅する、項目1又は2に記載の方法。
i.カンジダ属種のILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマーの使用;及び/又は
ii.カンジダ属種のILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブの使用
を含む、項目1~3のいずれか1つに記載の方法。
i.カンジダ・アルビカンス
ii.カンジダ・ドゥブリニエンシス
iii.カンジダ・トロピカリス
iv.カンジダ・パラプシローシス
v.カンジダ・グラブラタ
vi.カンジダ・クルセイ
vii.カンジダ・ギリエルモンジィ
viii.カンジダ・アウリス
の少なくとも3、4、5、6、7種、好ましくは、全てのILV3遺伝子にハイブリダイズする、項目1~4のいずれか1つに記載の方法。
i.ヌクレオチド配列受入番号NC_032093.1の位置c1169825~1169806(カンジダ・アルビカンス)
ii.ヌクレオチド配列受入番号NC_005968.1の位置c393798~393779(カンジダ・グラブラタ)
iii.ヌクレオチド配列受入番号NW_003020040.1の位置c405996~405978(カンジダ・トロピカリス)
iv.ヌクレオチド配列受入番号NC_012864.1の位置c1218036~1218017(カンジダ・ドゥブリニエンシス)
v.ヌクレオチド配列受入番号NW_001809800.1の位置c909809~909790(カンジダ・ギリエルモンジィ)
vi.ヌクレオチド配列受入番号HE605203.1の位置c24006~23987(カンジダ・パラプシローシス)
vii.ヌクレオチド配列受入番号JQFK01000016.1の位置61666~61685(カンジダ・クルセイ)
viii.ヌクレオチド配列受入番号NW_017263971.1の位置c32324~32305(カンジダ・アウリス)
の少なくとも3、4、5、6、7つ、好ましくは、全てにハイブリダイズする、項目5に記載の方法。
i.ヌクレオチド配列受入番号NC_032093.1の位置1169707~1169729(カンジダ・アルビカンス)
ii.ヌクレオチド配列受入番号NC_005968.1の位置393680~393702(カンジダ・グラブラタ)
iii.ヌクレオチド配列受入番号NW_003020040.1の位置405878~405900(カンジダ・トロピカリス)
iv.ヌクレオチド配列受入番号NC_012864.1の位置1217918~1217940(カンジダ・ドゥブリニエンシス)
v.ヌクレオチド配列受入番号NW_001809800.1の位置909691~909713(カンジダ・ギリエルモンジィ)
vi.ヌクレオチド配列受入番号HE605203.1の位置23888~23910(カンジダ・パラプシローシス)
vii.ヌクレオチド配列受入番号JQFK01000016.1の位置c61784~61762(カンジダ・クルセイ)
viii.ヌクレオチド配列受入番号NW_017263971.1の位置32206~32228(カンジダ・アウリス)
の少なくとも3、4、5、6、7つ、好ましくは、全てにハイブリダイズする、項目5又は6に記載の方法。
i.ヌクレオチド配列受入番号NC_032093.1の位置1169779~1169804(カンジダ・アルビカンス)
ii.ヌクレオチド配列受入番号NC_005968.1の位置393752~393777(カンジダ・グラブラタ)
iii.ヌクレオチド配列受入番号NW_003020040.1の位置405950~405975(カンジダ・トロピカリス)
iv.ヌクレオチド配列受入番号NC_012864.1の位置1217990~1218015(カンジダ・ドゥブリニエンシス)
v.ヌクレオチド配列受入番号NW_001809800.1の位置909763~909788(カンジダ・ギリエルモンジィ)
vi.ヌクレオチド配列受入番号HE605203.1の位置23960~23985(カンジダ・パラプシローシス)
vii.ヌクレオチド配列受入番号JQFK01000016.1の位置c61712~61687(カンジダ・クルセイ)
viii.ヌクレオチド配列受入番号NW_017263971.1の位置32278~32303(カンジダ・アウリス)
の少なくとも3、4、5、6、7つ、好ましくは、全てにハイブリダイズする、項目5~7のいずれか1つに記載の方法。
i.カンジダ・アルビカンス
ii.カンジダ・ドゥブリニエンシス
iii.カンジダ・トロピカリス
iv.カンジダ・パラプシローシス
v.カンジダ・グラブラタ
vi.カンジダ・クルセイ
vii.カンジダ・ギリエルモンジィ
viii.カンジダ・アウリス
の少なくとも3、4、5、6、7種、好ましくは全てのそれぞれのILV3遺伝子にハイブリダイズする、項目1~3のいずれか1つに記載の方法。
i.位置c1170234~1170217
ii.位置c1171213~1171192
の1つにハイブリダイズする、項目10に記載の方法。
i.位置1170119~1170140
ii.位置1171120~1171138
の1つにハイブリダイズする、項目10又は11に記載の方法。
i.位置c1219181~1219161
ii.位置c1218505~1218486
iii.位置c1218553~1218534
の1つにハイブリダイズする、項目10~12のいずれか1つに記載の方法。
i.位置1219103~1219124
ii.位置1218409~1218429
iii.位置1218419~1218440
の1つにハイブリダイズする、項目10~13のいずれか1つに記載の方法。
i.位置c406146~406127
ii.位置c406142~406120
の1つにハイブリダイズする、項目10~14のいずれか1つに記載の方法。
i.位置406047~406068
ii.位置406048~406069
の1つにハイブリダイズする、項目10~15のいずれか1つに記載の方法。
i.位置c24951~24931
ii.位置c24881~24863
の1つにハイブリダイズする、項目10~16のいずれか1つに記載の方法。
i.位置24843~24865
ii.位置24774~24795
の1つにハイブリダイズする、項目10~17のいずれか1つに記載の方法。
i.位置c394191~394169
ii.位置c393535~393516
iii.位置c395076~395055
iv.位置c394884~394863
の1つにハイブリダイズする、項目10~18のいずれか1つに記載の方法。
i.位置394080~394101
ii.位置393445~393464
iii.位置394987~395006
iv.位置394783~394803
の1つにハイブリダイズする、項目10~19のいずれか1つに記載の方法。
i.位置61723~61744
ii.位置60940~60961
iii.位置60420~60440
iv.位置61778~61797
v.位置61940~61961
の1つにハイブリダイズする、項目10~20のいずれか1つに記載の方法。
i.位置c61817~61796
ii.位置c61030~61011
iii.位置c60535~60513
iv.位置c61923~61902
v.位置c62015~61996
の1つにハイブリダイズする、項目10~21のいずれか1つに記載の方法。
i.位置c909629~909608
ii.位置c911117~911098
iii.位置c911111~911090
iv.位置c910941~910920
の1つにハイブリダイズする、項目10~22のいずれか1つに記載の方法。
i.位置909529~909550
ii.位置911002~911023
iii.位置910994~911013
iv.位置910799~910819
の1つにハイブリダイズする、項目10~23のいずれか1つに記載の方法。
i.位置c32790~32768
ii.位置c32451~32430
iii.位置c32654~32633
iv.位置c33278~33259
v.位置c32603~32580
vi.位置c32399~32376
vii.位置c33648~33628
viii.位置c32240~32219
ix.位置c32930~32909
x.位置c33228~33206
xi.位置c32106~32085
の1つにハイブリダイズする、項目10~24のいずれか1つに記載の方法。
i.位置32682~32703
ii.位置32368~32389
iii.位置32567~32588
iv.位置33202~33223
v.位置32512~32533
vi.位置32328~32349
vii.位置33566~33587
viii.位置32175~32195
ix.位置32826~32848
x.位置33130~33151
xi.位置32011~32033
の1つにハイブリダイズする、項目10~25のいずれか1つに記載の方法。
a.カンジダ・アルビカンスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブが、ヌクレオチド配列受入番号NC_032093.1由来の次の標的配列:
i.位置c1170174~1170151
ii.位置1171165~1171192
の1つにハイブリダイズし
b.カンジダ・ドゥブリニエンシスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブが、ヌクレオチド配列受入番号NC_012864.1由来の次の標的配列:
i.位置1219148~1219171
ii.位置c1218439~1218416
iii.位置c1218505~1218480
の1つにハイブリダイズし
c.カンジダ・トロピカリスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブが、ヌクレオチド配列受入番号NW_003020040.1由来の次の標的配列:
i.位置c406111~406082
の1つにハイブリダイズし
d.カンジダ・パラプシローシスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブは、ヌクレオチド配列受入番号HE605203.1由来の次の標的配列:
i.位置c24907~24883
ii.位置c24862~24839
の1つにハイブリダイズし
e.カンジダ・グラブラタのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブは、ヌクレオチド配列受入番号NC_005968.1由来の次の標的配列:
i.位置c394151~394128
ii.位置c393478~393453
iii.位置c395030~395007
iv.位置c394836~394807
の1つにハイブリダイズし
f.カンジダ・クルセイのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブは、ヌクレオチド配列受入番号JQFK01000016.1由来の次の標的配列:
i.位置61770~61793
ii.位置c60990~60967
iii.位置60462~60485
iv.位置61815~61838
v.位置c61970~61945
の1つにハイブリダイズし、
g.カンジダ・ギリエルモンジィのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブは、ヌクレオチド配列受入番号NW_001809800.1由来の次の標的配列:
i.位置c909577~909552
ii.位置c911088~911065
iii.位置910878~910904
の1つにハイブリダイズし;及び/又は
h.カンジダ・アウリスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブは、ヌクレオチド配列受入番号NW_017263971.1由来の次の標的配列:
i.位置c32744~32721
ii.位置c32421~32398
iii.位置c32629~32605
iv.位置33233~33257
v.位置32542~32563
vi.位置32350~32373
vii.位置c33627~33606
viii.位置c32218~32196
ix.位置c32890~32864
x.位置c33259~33236
xi.位置c32061~32038
の1つにハイブリダイズする、項目10~26のいずれか1つに記載の方法。
i.フォワードプライマーが、配列番号4又は6の配列を含み、リバースプライマーが、配列番号5又は7の配列を含み、及び/又はプローブが、カンジダ・アルビカンスを特異的に検出するための配列番号116又は117の配列を含み、
ii.フォワードプライマーが、配列番号8、10又は12の配列を含み、リバースプライマーが、配列番号9、11又は13の配列を含み、及び/又はプローブが、カンジダ・ドゥブリニエンシスを特異的に検出するための配列番号118、119又は120の配列を含み、
iii.フォワードプライマーが、配列番号14又は16の配列を含み、リバースプライマーが、配列番号15又は17の配列を含み、及び/又はプローブが、カンジダ・トロピカリスを特異的に検出するための配列番号121の配列を含み、
iv.フォワードプライマーが、配列番号18又は20の配列を含み、リバースプライマーが、配列番号19又は21の配列を含み、及び/又はプローブが、カンジダ・パラプシローシスを特異的に検出するための配列番号122又は123の配列を含み、
v.フォワードプライマーが、配列番号22、24、26又は28の配列を含み、リバースプライマーが、配列番号23、25、27又は29の配列を含み、及び/又はプローブが、カンジダ・グラブラタを特異的に検出するための配列番号124、125、126又は127の配列を含み、
vi.フォワードプライマーが、配列番号30、32、34、36又は38の配列を含み、リバースプライマーが、配列番号31、33、35、37又は39の配列を含み、及び/又はプローブが、カンジダ・クルセイを特異的に検出するための配列番号128、129、130、131又は132の配列を含み、
vii.フォワードプライマーが、配列番号40、42、44又は46の配列を含み、リバースプライマーが、配列番号41、43、45又は47の配列を含み、及び/又はプローブが、カンジダ・ギリエルモンジィを特異的に検出するための配列番号133、134又は135の配列を含み、
viii.フォワードプライマーが、配列番号48、50、52、54、56、58、60、62、64、66又は68の配列を含み、リバースプライマーが、配列番号49、51、53、55、57、59、61、63、65、67又は69の配列を含み、及び/又はプローブが、カンジダ・アウリスを特異的に検出するための配列番号136、137、138、139、140、141、142、143、144、145又は146の配列を含む、項目10~27のいずれか1つに記載の方法。
i.アスペルギルス属種のILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマーの使用;及び/又は
ii.アスペルギルス属種のILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブの使用
を含む、項目1~28のいずれか1つに記載の方法。
i.アスペルギルス・フミガーツス
ii.アスペルギルス・ニガー
iii.アスペルギルス・フラバス
の少なくとも2種、好ましくは、全3種のILV3遺伝子にハイブリダイズする、項目29に記載の方法。
i.ヌクレオチド配列受入番号NC_007195.1の位置3721583~3721597(アスペルギルス・フミガーツス)
ii.ヌクレオチド配列受入番号NT_166533.1の位置c541018~541004(アスペルギルス・ニガー)
iii.ヌクレオチド配列受入番号NW_002477240.1の位置c382612~382598(アスペルギルス・フラバス)
の少なくとも2つ、好ましくは、全3つとハイブリダイズするか、
又は共通のフォワードプライマーが、次の標的配列:
i.ヌクレオチド配列受入番号NC_007195.1の位置3721797~3721816(アスペルギルス・フミガーツス)
ii.ヌクレオチド配列受入番号NT_166533.1の位置c540804~540785(アスペルギルス・ニガー
iii.ヌクレオチド配列受入番号NW_002477240.1の位置c382398~382379(アスペルギルス・フラバス)
の少なくとも2つ、好ましくは、全3つとハイブリダイズする、項目30に記載の方法。
i.ヌクレオチド配列受入番号NC_007195.1の位置c3721887~3721872(アスペルギルス・フミガーツス)
ii.ヌクレオチド配列受入番号NT_166533.1の位置540714~540729(アスペルギルス・ニガー)
iii.ヌクレオチド配列受入番号NW_002477240.1の位置382308~382323(アスペルギルス・フラバス)
の少なくとも2つ、好ましくは、全3つにハイブリダイズするか、
又は共通のリバースプライマーが、次の標的配列:
i.ヌクレオチド配列受入番号NC_007195.1の位置c3721875~3721894(アスペルギルス・フミガーツス)
ii.ヌクレオチド配列受入番号NT_166533.1の位置540707~540726(アスペルギルス・ニガー)
iii.ヌクレオチド配列受入番号NW_002477240.1の位置382301~382320(アスペルギルス・フラバス)
の少なくとも2つ、好ましくは、全3つにハイブリダイズする、項目30又は31に記載の方法。
i.ヌクレオチド配列受入番号NC_007195.1の位置3721790~3721814(アスペルギルス・フミガーツス)
ii.ヌクレオチド配列受入番号NT_166533.1の位置c540811~540788(アスペルギルス・ニガー)
iii.ヌクレオチド配列受入番号NW_002477240.1の位置c382405~382381(アスペルギルス・フラバス)
の少なくとも2つ、好ましくは、全3つにハイブリダイズするか、
又は共通のプローブが、次の標的配列:
iv.ヌクレオチド配列受入番号NC_007195.1の位置3721848~3721870(アスペルギルス・フミガーツス)
v.ヌクレオチド配列受入番号NT_166533.1の位置c540753~540731(アスペルギルス・ニガー)
vi.ヌクレオチド配列受入番号NW_002477240.1の位置c382347~382325(アスペルギルス・フラバス)
の少なくとも2つ、好ましくは、全3つにハイブリダイズする、項目30~32のいずれか1つに記載の方法。
i.アスペルギルス・フミガーツス
ii.アスペルギルス・ニガー
iii.アスペルギルス・フラバス
の少なくとも2種、好ましくは、全3種のそれぞれのILV3遺伝子にハイブリダイズする、項目1~34のいずれか1つに記載の方法。
i.位置3721531~3721552
ii.位置3721618~3721638
iii.位置3721616~3721638
iv.位置3721798~3721818
の1つにハイブリダイズする、項目35に記載の方法。
i.位置c3721653~3721675
ii.位置c3721706~3721681
iii.位置c3721898~3721878
の1つにハイブリダイズする、項目35又は36に記載の方法。
i.位置c540219~540199
の1つにハイブリダイズする、項目35~37のいずれか1つに記載の方法。
i.位置540084~540103
の1つにハイブリダイズする、項目35~38のいずれか1つに記載の方法。
i.位置c382604~382586
の1つにハイブリダイズする、項目35~39のいずれか1つに記載の方法。
i.位置382519~382541
ii.位置382520~382541
の1つにハイブリダイズする、項目35~40のいずれか1つに記載の方法。
a.アスペルギルス・フミガーツスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブが、ヌクレオチド配列受入番号NC_007195.1由来の次の標的配列:
i.位置c3721651~3721628
ii.位置3721658~3721681
iii.位置3721848~3721870
の1つにハイブリダイズし、
b.アスペルギルス・ニガーのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブが、ヌクレオチド配列受入番号NT_166533.1由来の次の標的配列:
i.位置c540161~540138
の1つにハイブリダイズし;及び/又は
c.アスペルギルス・フラバスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブが、ヌクレオチド配列受入番号NW_002477240.1由来の次の標的配列:
i.位置c382572~382549
の1つにハイブリダイズする、項目35~41のいずれか1つに記載の方法。
i.フォワードプライマーが、配列番号76、79、82又は83の配列を含み、リバースプライマーが、配列番号77、80又は84の配列を含み、及び/又はプローブが、アスペルギルス・フミガーツスを特異的に検出するための配列番号78、81又は85の配列を含み、
ii.フォワードプライマーが、配列番号87の配列を含み、リバースプライマーが、配列番号86の配列を含み、及び/又はプローブが、アスペルギルス・ニガーを特異的に検出するための配列番号88の配列を含み、
iii.フォワードプライマーが、配列番号90の配列を含み、リバースプライマーが、配列番号89又は92の配列を含み、及び/又はプローブが、アスペルギルス・フラバスを特異的に検出するための配列番号91の配列を含む、項目35~42のいずれか1つに記載の方法。
i.クリプトコッカス・ネオフォルマンスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマーの使用;及び/又は
ii.クリプトコッカス・ネオフォルマンスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブの使用
を含む、項目1~43のいずれか1つに記載の方法。
i.位置702696~702717
ii.位置702499~702520
iii.位置702736~702757
iv.位置702384~702403
v.位置701384~701406
の1つにハイブリダイズする、項目44に記載の方法。
i.位置c702796~702777
ii.位置c702602~702582
iii.位置c702850~702831
iv.位置c702521~702500
v.位置c701499~701479
の1つにハイブリダイズする、項目44又は45に記載の方法。
i.位置702724~702747
ii.位置702526~702549
iii.位置702805~702829
iv.位置702423~702446
v.位置701435~701458
の1つにハイブリダイズする、項目44~46のいずれか1つに記載の方法。
a.次の成分:
i.カンジダ属種のILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマー、任意選択でそれと共に、プライマー結合部位間でカンジダ属種のILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブ;及び
ii.アスペルギルス属種のILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマー、任意選択でそれと共に、プライマー結合部位間でアスペルギルス属種のILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブ;及び/又は
iii.クリプトコッカス・ネオフォルマンスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマー、任意選択でそれと共に、プライマー結合部位間でクリプトコッカス・ネオフォルマンスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブ
を含む核酸増幅反応を行うステップと、
b.増幅産物を検出し、識別して、真菌/酵母感染を同定するステップと
を含む、方法。
i.融解曲線解析
ii.差別的に標識されたプライマー及び/又はプローブの使用;又は
iii.増幅産物のサイズを決定すること
を含む、項目49~52のいずれか1つに記載の方法。
a.次のカンジダ属種
i.カンジダ・アルビカンス
ii.カンジダ・ドゥブリニエンシス
iii.カンジダ・トロピカリス
iv.カンジダ・パラプシローシス
v.カンジダ・グラブラタ
vi.カンジダ・クルセイ
vii.カンジダ・ギリエルモンジィ
viii.カンジダ・アウリス
のILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマー
b.次のアスペルギルス属種
i.アスペルギルス・フミガーツス
ii.アスペルギルス・ニガー
iii.アスペルギルス・フラバス
のILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマー
c.カンジダ・アルビカンスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマー
d.カンジダ・ドゥブリニエンシスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマー
e.カンジダ・トロピカリスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマー
f.カンジダ・パラプシローシスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマー
g.カンジダ・グラブラタのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマー
h.カンジダ・クルセイのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマー
i.カンジダ・ギリエルモンジィのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマー
j.カンジダ・アウリスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマー
k.アスペルギルス・フミガーツスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマー
l.アスペルギルス・ニガーのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマー
m.アスペルギルス・フラバスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマー;及び/又は
n.クリプトコッカス・ネオフォルマンスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマー
を含む、試料における酵母/真菌感染を検出するための少なくとも1つのプライマー対。
i.ヌクレオチド配列受入番号NC_032093.1の位置c1169825~1169806(カンジダ・アルビカンス)
ii.ヌクレオチド配列受入番号NC_005968.1の位置c393798~393779(カンジダ・グラブラタ)
iii.ヌクレオチド配列受入番号NW_003020040.1の位置c405996~405978(カンジダ・トロピカリス)
iv.ヌクレオチド配列受入番号NC_012864.1の位置c1218036~1218017(カンジダ・ドゥブリニエンシス)
v.ヌクレオチド配列受入番号NW_001809800.1の位置c909809~909790(カンジダ・ギリエルモンジィ)
vi.ヌクレオチド配列受入番号HE605203.1の位置c24006~23987(カンジダ・パラプシローシス)
vii.ヌクレオチド配列受入番号JQFK01000016.1の位置61666~61685(カンジダ・クルセイ)
viii.ヌクレオチド配列受入番号NW_017263971.1の位置c32324~32305(カンジダ・アウリス)
の少なくとも3、4、5、6、7つ、好ましくは、全てにハイブリダイズする、項目57に記載の少なくとも1つのプライマー対。
i.ヌクレオチド配列受入番号NC_032093.1の位置1169707~1169729(カンジダ・アルビカンス)
ii.ヌクレオチド配列受入番号NC_005968.1の位置393680~393702(カンジダ・グラブラタ)
iii.ヌクレオチド配列受入番号NW_003020040.1の位置405878~405900(カンジダ・トロピカリス)
iv.ヌクレオチド配列受入番号NC_012864.1の位置1217918~1217940(カンジダ・ドゥブリニエンシス)
v.ヌクレオチド配列受入番号NW_001809800.1の位置909691~909713(カンジダ・ギリエルモンジィ)
vi.ヌクレオチド配列受入番号HE605203.1の位置23888~23910(カンジダ・パラプシローシス)
vii.ヌクレオチド配列受入番号JQFK01000016.1の位置c61784~61762(カンジダ・クルセイ)
viii.ヌクレオチド配列受入番号NW_017263971.1の位置32206~32228(カンジダ・アウリス)
の少なくとも3、4、5、6、7つ、好ましくは、全てにハイブリダイズする、項目57又は58に記載の少なくとも1つのプライマー対。
i.ヌクレオチド配列受入番号NC_007195.1の位置3721583~3721597(アスペルギルス・フミガーツス)
ii.ヌクレオチド配列受入番号NT_166533.1の位置c541018~541004(アスペルギルス・ニガー)
iii.ヌクレオチド配列受入番号NW_002477240.1の位置c382612~382598(アスペルギルス・フラバス)
の少なくとも2つ、好ましくは、全3つにハイブリダイズするか、
又は、フォワードプライマーが、次の標的配列:
iv.ヌクレオチド配列受入番号NC_007195.1の位置3721797~3721816(アスペルギルス・フミガーツス)
v.ヌクレオチド配列受入番号NT_166533.1の位置c540804~540785(アスペルギルス・ニガー)
vi.ヌクレオチド配列受入番号NW_002477240.1の位置c382398~382379(アスペルギルス・フラバス)
の少なくとも2つ、好ましくは、全3つにハイブリダイズする、項目57~59のいずれか1つに記載の少なくとも1つのプライマー対。
i.ヌクレオチド配列受入番号NC_007195.1の位置c3721887~3721872(アスペルギルス・フミガーツス)
ii.ヌクレオチド配列受入番号NT_166533.1の位置540714~540729(アスペルギルス・ニガー)
iii.ヌクレオチド配列受入番号NW_002477240.1の位置382308~382323(アスペルギルス・フラバス)
の少なくとも2つ、好ましくは、全3つにハイブリダイズするか、
又はリバースプライマーは、次の標的配列:
iv.ヌクレオチド配列受入番号NC_007195.1の位置c3721875~3721894(アスペルギルス・フミガーツス)
v.ヌクレオチド配列受入番号NT_166533.1の位置540707~540726(アスペルギルス・ニガー)
vi.ヌクレオチド配列受入番号NW_002477240.1の位置382301~382320(アスペルギルス・フラバス)
の少なくとも2つ、好ましくは、全3つにハイブリダイズする、項目57~60のいずれか1つに記載の少なくとも1つのプライマー対。
i.位置c1170234~1170217
ii.位置c1171213~1171192
の1つにハイブリダイズする、項目57~61のいずれか1つに記載の少なくとも1つのプライマー対。
i.位置1170119~1170140
ii.位置1171120~1171138
の1つにハイブリダイズする、項目57~62のいずれか1つに記載の少なくとも1つのプライマー対。
i.位置c1219181~1219161
ii.位置c1218505~1218486
iii.位置c1218553~1218534
の1つにハイブリダイズする、項目57~63のいずれか1つに記載の少なくとも1つのプライマー対。
i.位置1219103~1219124
ii.位置1218409~1218429
iii.位置1218419~1218440
の1つにハイブリダイズする、項目57~64のいずれか1つに記載の少なくとも1つのプライマー対。
i.位置c406146~406127
ii.位置c406142~406120
の1つにハイブリダイズする、項目57~65のいずれか1つに記載の少なくとも1つのプライマー対。
i.位置406047~406068
ii.位置406048~406069
の1つにハイブリダイズする、項目57~66のいずれか1つに記載の少なくとも1つのプライマー対。
i.位置c24951~24931
ii.位置c24881~24863
の1つにハイブリダイズする、項目57~67のいずれか1つに記載の少なくとも1つのプライマー対。
i.位置24843~24865
ii.位置24774~24795
の1つにハイブリダイズする、項目57~68のいずれか1つに記載の少なくとも1つのプライマー対。
i.位置c394191~394169
ii.位置c393535~393516
iii.位置c395076~395055
iv.位置c394884~394863
の1つにハイブリダイズする、項目57~69のいずれか1つに記載の少なくとも1つのプライマー対。
i.位置394080~394101
ii.位置393445~393464
iii.位置394987~395006
iv.位置394783~394803
の1つにハイブリダイズする、項目57~70のいずれか1つに記載の少なくとも1つのプライマー対。
i.位置61723~61744
ii.位置60940~60961
iii.位置60420~60440
iv.位置61778~61797
v.位置61940~61961
の1つにハイブリダイズする、項目57~71のいずれか1つに記載の少なくとも1つのプライマー対。
i.位置c61817~61796
ii.位置c61030~61011
iii.位置c60535~60513
iv.位置c61923~61902
v.位置c62015~61996
の1つにハイブリダイズする、項目57~72のいずれか1つに記載の少なくとも1つのプライマー対。
i.位置c909629~909608
ii.位置c911117~911098
iii.位置c911111~911090
iv.位置c910941~910920
の1つにハイブリダイズする、項目57~73のいずれか1つに記載の少なくとも1つのプライマー対。
i.位置909529~909550
ii.位置911002~911023
iii.位置910994~911013
iv.位置910799~910819
の1つにハイブリダイズする、項目57~74のいずれか1つに記載の少なくとも1つのプライマー対。
i.位置c32790~32768
ii.位置c32451~32430
iii.位置c32654~32633
iv.位置c33278~33259
v.位置c32603~32580
vi.位置c32399~32376
vii.位置c33648~33628
viii.位置c32240~32219
ix.位置c32930~32909
x.位置c33228~33206
xi.位置c32106~32085
の1つにハイブリダイズする、項目57~75のいずれか1つに記載の少なくとも1つのプライマー対。
i.位置32682~32703
ii.位置32368~32389
iii.位置32567~32588
iv.位置33202~33223
v.位置32512~32533
vi.位置32328~32349
vii.位置33566~33587
viii.位置32175~32195
ix.位置32826~32848
x.位置33130~33151
xi.位置32011~32033
の1つにハイブリダイズする、項目57~76のいずれか1つに記載の少なくとも1つのプライマー対。
i.位置3721531~3721552
ii.位置3721618~3721638
iii.位置3721616~3721638
iv.位置3721798~3721818
の1つにハイブリダイズする、項目57~77のいずれか1つに記載の少なくとも1つのプライマー対。
i.位置c3721653~3721675
ii.位置c3721706~3721681
iii.位置c3721898~3721878
の1つにハイブリダイズする、項目57~78のいずれか1つに記載の少なくとも1つのプライマー対。
i.位置c540219~540199
の1つにハイブリダイズする、項目57~79のいずれか1つに記載の少なくとも1つのプライマー対。
i.位置540084~540103
の1つにハイブリダイズする、項目57~80のいずれか1つに記載の少なくとも1つのプライマー対。
i.位置c382604~382586
の1つにハイブリダイズする、項目57~81のいずれか1つに記載の少なくとも1つのプライマー対。
i.位置382519~382541
ii.位置382520~382541
の1つにハイブリダイズする、項目57~82のいずれか1つに記載の少なくとも1つのプライマー対。
i.位置702696~702717
ii.位置702499~702520
iii.位置702736~702757
iv.位置702384~702403
v.位置701384~701406
の1つにハイブリダイズする、項目57~83のいずれか1つに記載の少なくとも1つのプライマー対。
i.位置c702796~702777
ii.位置c702602~702582
iii.位置c702850~702831
iv.位置c702521~702500
v.位置c701499~701479
の1つにハイブリダイズする、項目57~84のいずれか1つに記載の少なくとも1つのプライマー対。
a.次のカンジダ属種
i.カンジダ・アルビカンス
ii.カンジダ・ドゥブリニエンシス
iii.カンジダ・トロピカリス
iv.カンジダ・パラプシローシス
v.カンジダ・グラブラタ
vi.カンジダ・クルセイ
vii.カンジダ・ギリエルモンジィ
viii.カンジダ・アウリス
のILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマーが、
それぞれ、配列番号1及び配列番号2のヌクレオチド配列を含むか、本質的にからなるか、又はからなり
b.次のアスペルギルス属種
i.アスペルギルス・フミガーツス
ii.アスペルギルス・ニガー
iii.アスペルギルス・フラバス
のILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマーが、
それぞれ、配列番号70及び71又は配列番号73及び74のヌクレオチド配列を含むか、本質的にからなるか、又はからなり
c.カンジダ・アルビカンスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマーが、それぞれ、配列番号4及び5又は配列番号6及び7のヌクレオチド配列を含むか、本質的にからなるか、又はからなり
d.カンジダ・ドゥブリニエンシスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマーが、それぞれ、配列番号8及び9、配列番号10及び11又は配列番号12及び13のヌクレオチド配列を含むか、本質的にからなるか、又はからなり
e.カンジダ・トロピカリスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマーが、それぞれ、配列番号14及び15又は配列番号16及び17のヌクレオチド配列を含むか、本質的にからなるか、又はからなり
f.カンジダ・パラプシローシスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマーが、それぞれ、配列番号18及び19又は配列番号20及び21のヌクレオチド配列を含むか、本質的にからなるか、又はからなり
g.カンジダ・グラブラタのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマーが、それぞれ、配列番号22及び23、配列番号24及び25、配列番号26及び27又は配列番号28及び29のヌクレオチド配列を含むか、本質的にからなるか、又はからなり
h.カンジダ・クルセイのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマーが、それぞれ、配列番号30及び31、配列番号32及び33、配列番号34及び35、配列番号36及び37又は配列番号38及び39のヌクレオチド配列を含むか、本質的にからなるか、又はからなり
i.カンジダ・ギリエルモンジィのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマーが、それぞれ、配列番号40及び41、配列番号42及び43、配列番号44及び45又は配列番号46及び47のヌクレオチド配列を含むか、本質的にからなるか、又はからなり
j.カンジダ・アウリスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマーが、それぞれ、配列番号48及び49、配列番号50及び51、配列番号52及び53、配列番号54及び55、配列番号56及び57、配列番号58及び59、配列番号60及び61、配列番号62及び63、配列番号64及び65、配列番号66及び67又は配列番号68及び69のヌクレオチド配列を含むか、本質的にからなるか、又はからなり
k.アスペルギルス・フミガーツスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマーは、それぞれ、配列番号76及び77、配列番号79及び80、配列番号82及び80又は配列番号83及び84のヌクレオチド配列を含むか、本質的にからなるか、又はからなり
l.アスペルギルス・ニガーのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマーが、配列番号87及び86のヌクレオチド配列を含むか、本質的にからなるか、又はからなり
m.アスペルギルス・フラバスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマーが、それぞれ、配列番号90及び89又は配列番号90及び92のヌクレオチド配列を含むか、本質的にからなるか、又はからなり;及び/又は
n.クリプトコッカス・ネオフォルマンスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマーが、それぞれ、配列番号93及び94、配列番号96及び97、配列番号99及び100、配列番号102及び103又は配列番号105及び106のヌクレオチド配列を含むか、本質的にからなるか、又はからなる、項目57~85のいずれか1つに記載の少なくとも1つのプライマー対。
a.次のカンジダ属種
i.カンジダ・アルビカンス
ii.カンジダ・ドゥブリニエンシス
iii.カンジダ・トロピカリス
iv.カンジダ・パラプシローシス
v.カンジダ・グラブラタ
vi.カンジダ・クルセイ
vii.カンジダ・ギリエルモンジィ
viii.カンジダ・アウリス
のILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブ
b.次のアスペルギルス属種
i.アスペルギルス・フミガーツス
ii.アスペルギルス・ニガー
iii.アスペルギルス・フラバス
のILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブ
c.カンジダ・アルビカンスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブ
d.カンジダ・ドゥブリニエンシスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブ
e.カンジダ・トロピカリスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブ
f.カンジダ・パラプシローシスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブ
g.カンジダ・グラブラタのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブ
h.カンジダ・クルセイのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブ
i.カンジダ・ギリエルモンジィのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブ
j.カンジダ・アウリスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブ
k.アスペルギルス・フミガーツスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブ
l.アスペルギルス・ニガーのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブ
m.アスペルギルス・フラバスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブ;及び/又は
n.クリプトコッカス・ネオフォルマンスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブ
を含む、試料における酵母/真菌感染を検出するための少なくとも1つのプローブ。
i.ヌクレオチド配列受入番号NC_032093.1の位置1169779~1169804(カンジダ・アルビカンス)
ii.ヌクレオチド配列受入番号NC_005968.1の位置393752~393777(カンジダ・グラブラタ)
iii.ヌクレオチド配列受入番号NW_003020040.1の位置405950~405975(カンジダ・トロピカリス)
iv.ヌクレオチド配列受入番号NC_012864.1の位置1217990~1218015(カンジダ・ドゥブリニエンシス)
v.ヌクレオチド配列受入番号NW_001809800.1の位置909763~909788(カンジダ・ギリエルモンジィ)
vi.ヌクレオチド配列受入番号HE605203.1の位置23960~23985(カンジダ・パラプシローシス)
vii.ヌクレオチド配列受入番号JQFK01000016.1の位置c61712~61687(カンジダ・クルセイ)
viii.ヌクレオチド配列受入番号NW_017263971.1の位置32278~32303(カンジダ・アウリス)
の少なくとも3、4、5、6、7つ、好ましくは、全てにハイブリダイズする、項目88に記載の少なくとも1つのプローブ。
a.カンジダ・アルビカンスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブが、ヌクレオチド配列受入番号NC_032093.1由来の次の標的配列:
i.位置c1170174~1170151
ii.位置1171165~1171192
の1つにハイブリダイズし
b.カンジダ・ドゥブリニエンシスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブが、ヌクレオチド配列受入番号NC_012864.1由来の次の標的配列:
i.位置1219148~1219171
ii.位置c1218439~1218416
iii.位置c1218505~1218480
の1つにハイブリダイズし
c.カンジダ・トロピカリスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブが、ヌクレオチド配列受入番号NW_003020040.1由来の次の標的配列:
i.位置c406111~406082
の1つにハイブリダイズし
d.カンジダ・パラプシローシスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブは、ヌクレオチド配列受入番号HE605203.1由来の次の標的配列:
i.位置c24907~24883
ii.位置c24862~24839
の1つにハイブリダイズし
e.カンジダ・グラブラタのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブは、ヌクレオチド配列受入番号NC_005968.1由来の次の標的配列:
i.位置c394151~394128
ii.位置c393478~393453
iii.位置c395030~395007
iv.位置c394836~394807
の1つにハイブリダイズし
f.カンジダ・クルセイのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブは、ヌクレオチド配列受入番号JQFK01000016.1由来の次の標的配列:
i.位置61770~61793
ii.位置c60990~60967
iii.位置60462~60485
iv.位置61815~61838
v.位置c61970~61945
の1つにハイブリダイズし、
g.カンジダ・ギリエルモンジィのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブは、ヌクレオチド配列受入番号NW_001809800.1由来の次の標的配列:
i.位置c909577~909552
ii.位置c911088~911065
iii.位置910878~910904
の1つにハイブリダイズし;及び/又は
h.カンジダ・アウリスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブは、ヌクレオチド配列受入番号NW_017263971.1由来の次の標的配列:
i.位置c32744~32721
ii.位置c32421~32398
iii.位置c32629~32605
iv.位置33233~33257
v.位置32542~32563
vi.位置32350~32373
vii.位置c33627~33606
viii.位置c32218~32196
ix.位置c32890~32864
x.位置c33259~33236
xi.位置c32061~32038
の1つにハイブリダイズする、項目88又は89に記載の少なくとも1つのプローブ。
i.ヌクレオチド配列受入番号NC_007195.1の位置3721790~3721814(アスペルギルス・フミガーツス)
ii.ヌクレオチド配列受入番号NT_166533.1の位置c540811~540788(アスペルギルス・ニガー)
iii.ヌクレオチド配列受入番号NW_002477240.1の位置c382405~382381(アスペルギルス・フラバス)
の少なくとも2つ、好ましくは、全3つにハイブリダイズするか、
又は共通のプローブが、次の標的配列:
iv.ヌクレオチド配列受入番号NC_007195.1の位置3721848~3721870(アスペルギルス・フミガーツス)
v.ヌクレオチド配列受入番号NT_166533.1の位置c540753~540731(アスペルギルス・ニガー)
vi.ヌクレオチド配列受入番号NW_002477240.1の位置c382347~382325(アスペルギルス・フラバス)
の少なくとも2つ、好ましくは、全3つとハイブリダイズする、項目88~90のいずれか1つに記載の少なくとも1種のプローブ。
a.アスペルギルス・フミガーツスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブが、ヌクレオチド配列受入番号NC_007195.1由来の次の標的配列:
i.位置c3721651~3721628
ii.位置3721658~3721681
iii.位置3721848~3721870
の1つにハイブリダイズし、
i.アスペルギルス・ニガーのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブが、ヌクレオチド配列受入番号NT_166533.1由来の次の標的配列:
i.位置c540161~540138
の1つにハイブリダイズし;及び/又は
j.アスペルギルス・フラバスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブが、ヌクレオチド配列受入番号NW_002477240.1由来の次の標的配列:
i.位置c382572~382549
の1つにハイブリダイズする、項目88~91のいずれか1つに記載の少なくとも1つのプローブ。
i.位置702724~702747
ii.位置702526~702549
iii.位置702805~702829
iv.位置702423~702446
v.位置701435~701458
の1つにハイブリダイズする、項目88~92のいずれか1つに記載の少なくとも1つのプローブ。
a.次のカンジダ属種
i.カンジダ・アルビカンス
ii.カンジダ・ドゥブリニエンシス
iii.カンジダ・トロピカリス
iv.カンジダ・パラプシローシス
v.カンジダ・グラブラタ
vi.カンジダ・クルセイ
vii.カンジダ・ギリエルモンジィ
viii.カンジダ・アウリス
のILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブが、
配列番号3のヌクレオチド配列を含むか、本質的にからなるか、又はからなり
b.カンジダ・アルビカンスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブが、配列番号116又は117のヌクレオチド配列を含むか、本質的にからなるか、又はからなり
c.カンジダ・ドゥブリニエンシスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブが、配列番号118、119又は120のヌクレオチド配列を含むか、本質的にからなるか、又はからなり
d.カンジダ・トロピカリスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブが、配列番号121のヌクレオチド配列を含むか、本質的にからなるか、又はからなり
e.カンジダ・パラプシローシスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブは、配列番号122又は123のヌクレオチド配列を含むか、本質的にからなるか、又はからなり
f.カンジダ・グラブラタのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブが、配列番号124、125、126又は127のヌクレオチド配列を含むか、本質的にからなるか、又はからなり
g.カンジダ・クルセイのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブが、配列番号128、129、130、131又は132のヌクレオチド配列を含むか、本質的にからなるか、又はからなり
h.カンジダ・ギリエルモンジィのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブは、配列番号133、134又は135のヌクレオチド配列を含むか、本質的にからなるか、又はからなり
i.カンジダ・アウリスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブが、配列番号136、137、138、139、140、141、142、143、144、145又は146のヌクレオチド配列を含むか、本質的にからなるか、又はからなり
j.次のアスペルギルス属種
i.アスペルギルス・フミガーツス
ii.アスペルギルス・ニガー
iii.アスペルギルス・フラバス
のILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブが、
配列番号72又は75のヌクレオチド配列を含むか、本質的にからなるか、又はからなり
k.アスペルギルス・フミガーツスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブが、配列番号78、81又は85のヌクレオチド配列を含むか、本質的にからなるか、又はからなり
l.アスペルギルス・ニガーのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブは、配列番号88のヌクレオチド配列を含むか、本質的にからなるか、又はからなり
m.アスペルギルス・フラバスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブは、配列番号91のヌクレオチド配列を含むか、本質的にからなるか、又はからなり;及び/又は
n.クリプトコッカス・ネオフォルマンスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブは、配列番号95、98、101、104又は107のヌクレオチド配列を含むか、本質的にからなるか、又はからなる、項目88~93のいずれか1つに記載の少なくとも1つのプローブ。
a.次の成分:
i.グラム陽性細菌の16SrRNA遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマー、任意選択でそれと共に、プライマー結合部位間でグラム陽性細菌の16SrRNA遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブ、
ii.グラム陰性細菌の16SrRNA遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマー、任意選択でそれと共に、プライマー結合部位間でグラム陰性細菌の16SrRNA遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブ、
iii.少なくとも1つの真菌/酵母種のILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマー、任意選択でそれと共に、プライマー結合部位間で少なくとも1つの真菌/酵母種のILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブ
を含む核酸増幅反応を行うステップと、
b.増幅産物を検出し、識別して、試料がグラム陰性細菌感染、グラム陽性細菌感染及び/又は真菌/酵母感染を含有するかどうかを決定するステップと
を含む、方法。
a.グラム陽性細菌の16SrRNA遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマー、任意選択でそれと共に、プライマー結合部位間でグラム陽性細菌の16SrRNA遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブ、
b.グラム陰性細菌の16SrRNA遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマー、任意選択でそれと共に、プライマー結合部位間でグラム陰性細菌の16SrRNA遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブ、
c.少なくとも1つの真菌/酵母種のILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマー、任意選択でそれと共に、プライマー結合部位間で少なくとも1つの真菌/酵母種のILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブ
を含む多重核酸増幅反応を行うための成分を含み、
成分a、b及びcそれぞれが、識別可能な増幅産物を産生し、これにより、試料が、グラム陰性細菌感染、グラム陽性細菌感染及び/又は真菌/酵母感染を含有するかどうかの決定を可能にする、キット。
a.次の成分のセット:
i.カンジダ・アルビカンスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマー
ii.カンジダ・ドゥブリニエンシスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマー
iii.カンジダ・トロピカリスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマー
iv.カンジダ・パラプシローシスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマー
v.カンジダ・グラブラタのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマー
vi.カンジダ・クルセイのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマー
vii.カンジダ・ギリエルモンジィのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマー
viii.カンジダ・アウリスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマー
の少なくとも3、4、5、6、7つ又は全てを使用して、核酸増幅反応を行うステップと、
b.増幅産物を検出し、識別して、カンジダ感染に関与する種を同定するステップと
を含む、方法。
i.位置c1170234~1170217
ii.位置c1171213~1171192
の1つにハイブリダイズする、項目110~113のいずれか1つに記載の方法。
i.位置1170119~1170140
ii.位置1171120~1171138
の1つにハイブリダイズする、項目110~114のいずれか1つに記載の方法。
i.位置c1219181~1219161
ii.位置c1218505~1218486
iii.位置c1218553~1218534
の1つにハイブリダイズする、項目110~115のいずれか1つに記載の方法。
i.位置1219103~1219124
ii.位置1218409~1218429
iii.位置1218419~1218440
の1つにハイブリダイズする、項目110~116のいずれか1つに記載の方法。
i.位置c406146~406127
ii.位置c406142~406120
の1つにハイブリダイズする、項目110~117のいずれか1つに記載の方法。
i.位置406047~406068
ii.位置406048~406069
の1つにハイブリダイズする、項目110~118のいずれか1つに記載の方法。
i.位置c24951~24931
ii.位置c24881~24863
の1つにハイブリダイズする、項目110~119のいずれか1つに記載の方法。
i.位置24843~24865
ii.位置24774~24795
の1つにハイブリダイズする、項目110~120のいずれか1つに記載の方法。
i.位置c394191~394169
ii.位置c393535~393516
iii.位置c395076~395055
iv.位置c394884~394863
の1つにハイブリダイズする、項目110~121のいずれか1つに記載の方法。
i.位置394080~394101
ii.位置393445~393464
iii.位置394987~395006
iv.位置394783~394803
の1つにハイブリダイズする、項目110~122のいずれか1つに記載の方法。
i.位置61723~61744
ii.位置60940~60961
iii.位置60420~60440
iv.位置61778~61797
v.位置61940~61961
の1つにハイブリダイズする、項目110~123のいずれか1つに記載の方法。
i.位置c61817~61796
ii.位置c61030~61011
iii.位置c60535~60513
iv.位置c61923~61902
v.位置c62015~61996
の1つにハイブリダイズする、項目110~124のいずれか1つに記載の方法。
i.位置c909629~909608
ii.位置c911117~911098
iii.位置c911111~911090
iv.位置c910941~910920
の1つにハイブリダイズする、項目110~125のいずれか1つに記載の方法。
i.位置909529~909550
ii.位置911002~911023
iii.位置910994~911013
iv.位置910799~910819
の1つにハイブリダイズする、項目110~126のいずれか1つに記載の方法。
i.位置c32790~32768
ii.位置c32451~32430
iii.位置c32654~32633
iv.位置c33278~33259
v.位置c32603~32580
vi.位置c32399~32376
vii.位置c33648~33628
viii.位置c32240~32219
ix.位置c32930~32909
x.位置c33228~33206
xi.位置c32106~32085
の1つにハイブリダイズする、項目110~127のいずれか1つに記載の方法。
i.位置32682~32703
ii.位置32368~32389
iii.位置32567~32588
iv.位置33202~33223
v.位置32512~32533
vi.位置32328~32349
vii.位置33566~33587
viii.位置32175~32195
ix.位置32826~32848
x.位置33130~33151
xi.位置32011~32033
の1つにハイブリダイズする、項目110~128のいずれか1つに記載の方法。
a.カンジダ・アルビカンスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマーが、それぞれ、配列番号4及び5又は配列番号6及び7のヌクレオチド配列を含むか、本質的にからなるか、又はからなり;
b.カンジダ・ドゥブリニエンシスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマーが、それぞれ、配列番号8及び9、配列番号10及び11又は配列番号12及び13のヌクレオチド配列を含むか、本質的にからなるか、又はからなり;
c.カンジダ・トロピカリスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマーが、それぞれ、配列番号14及び15又は配列番号16及び17のヌクレオチド配列を含むか、本質的にからなるか、又はからなり;
d.カンジダ・パラプシローシスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマーが、それぞれ、配列番号18及び19又は配列番号20及び21のヌクレオチド配列を含むか、本質的にからなるか、又はからなり;
e.カンジダ・グラブラタのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマーが、それぞれ、配列番号22及び23、配列番号24及び25、配列番号26及び27又は配列番号28及び29のヌクレオチド配列を含むか、本質的にからなるか、又はからなり;
f.カンジダ・クルセイのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマーが、それぞれ、配列番号30及び31、配列番号32及び33、配列番号34及び35、配列番号36及び37又は配列番号38及び39のヌクレオチド配列を含むか、本質的にからなるか、又はからなり;
g.カンジダ・グラブラタのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマーが、それぞれ、配列番号40及び41、配列番号42及び43、配列番号44及び45又は配列番号46及び47のヌクレオチド配列を含むか、本質的にからなるか、又はからなり;
h.カンジダ・アウリスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマーが、それぞれ、配列番号48及び49、配列番号50及び51、配列番号52及び53、配列番号54及び55、配列番号56及び57、配列番号58及び59、配列番号60及び61、配列番号62及び63、配列番号64及び65、配列番号66及び67又は配列番号68及び69のヌクレオチド配列を含むか、本質的にからなるか、又はからなる、項目110~129のいずれか1つに記載の方法。
a.次の成分のセット:
i.アスペルギルス・フミガーツスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマー
ii.アスペルギルス・ニガーのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマー
iii.アスペルギルス・フラバスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマー
の少なくとも2つ又は全3つを使用して、核酸増幅反応を行うステップと、
b.増幅産物を検出し、識別して、アスペルギルス感染に関与する種を同定するステップと
を含む、方法。
i.位置3721531~3721552
ii.位置3721618~3721638
iii.位置3721616~3721638
iv.位置3721798~3721818
の1つにハイブリダイズする、項目131~134のいずれか1つに記載の方法。
i.位置c3721653~3721675
ii.位置c3721706~3721681
iii.位置c3721898~3721878
の1つにハイブリダイズする、項目131~135のいずれか1つに記載の方法。
i.位置c540219~540199
の1つにハイブリダイズする、項目131~136のいずれか1つに記載の方法。
i.位置540084~540103
の1つにハイブリダイズする、項目131~137のいずれか1つに記載の方法。
i.位置c382604~382586
の1つにハイブリダイズする、項目131~138のいずれか1つに記載の方法。
i.位置382519~382541
ii.位置382520~382541
の1つにハイブリダイズする、項目131~139のいずれか1つに記載の方法。
a.アスペルギルス・フミガーツスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマーが、それぞれ、配列番号76及び77、配列番号79及び80、配列番号82及び80又は配列番号83及び84のヌクレオチド配列を含むか、本質的にからなるか、又はからなり;
b.アスペルギルス・ニガーのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマーが、配列番号87及び86のヌクレオチド配列を含むか、本質的にからなるか、又はからなり;
c.アスペルギルス・フラバスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマーが、それぞれ、配列番号90及び89又は配列番号90及び92のヌクレオチド配列を含むか、本質的にからなるか、又はからなる、項目131~140のいずれか1つに記載の方法。
a.カンジダ・アルビカンスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブが、ヌクレオチド配列受入番号NC_032093.1由来の次の標的配列:
i.位置c1170174~1170151
ii.位置1171165~1171192
の1つにハイブリダイズし
b.カンジダ・ドゥブリニエンシスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブが、ヌクレオチド配列受入番号NC_012864.1由来の次の標的配列:
i.位置1219148~1219171
ii.位置c1218439~1218416
iii.位置c1218505~1218480
の1つにハイブリダイズし
c.カンジダ・トロピカリスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブが、ヌクレオチド配列受入番号NW_003020040.1由来の次の標的配列:
i.位置c406111~406082
の1つにハイブリダイズし
d.カンジダ・パラプシローシスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブは、ヌクレオチド配列受入番号HE605203.1由来の次の標的配列:
i.位置c24907~24883
ii.位置c24862~24839
の1つにハイブリダイズし
e.カンジダ・グラブラタのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブは、ヌクレオチド配列受入番号NC_005968.1由来の次の標的配列:
i.位置c394151~394128
ii.位置c393478~393453
iii.位置c395030~395007
iv.位置c394836~394807
の1つにハイブリダイズし
f.カンジダ・クルセイのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブは、ヌクレオチド配列受入番号JQFK01000016.1由来の次の標的配列:
i.位置61770~61793
ii.位置c60990~60967
iii.位置60462~60485
iv.位置61815~61838
v.位置c61970~61945
の1つにハイブリダイズし、
g.カンジダ・ギリエルモンジィのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブは、ヌクレオチド配列受入番号NW_001809800.1由来の次の標的配列:
i.位置c909577~909552
ii.位置c911088~911065
iii.位置910878~910904
の1つにハイブリダイズし;及び/又は
h.カンジダ・アウリスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブは、ヌクレオチド配列受入番号NW_017263971.1由来の次の標的配列:
i.位置c32744~32721
ii.位置c32421~32398
iii.位置c32629~32605
iv.位置33233~33257
v.位置32542~32563
vi.位置32350~32373
vii.位置c33627~33606
viii.位置c32218~32196
ix.位置c32890~32864
x.位置c33259~33236
xi.位置c32061~32038
の1つにハイブリダイズする、項目142又は143に記載の方法。
a.カンジダ・アルビカンスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブが、配列番号116又は117のヌクレオチド配列を含むか、本質的にからなるか、又はからなり
b.カンジダ・ドゥブリニエンシスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブが、配列番号118、119又は120のヌクレオチド配列を含むか、本質的にからなるか、又はからなり
c.カンジダ・トロピカリスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブが、配列番号121のヌクレオチド配列を含むか、本質的にからなるか、又はからなり
d.カンジダ・パラプシローシスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブが、配列番号122又は123のヌクレオチド配列を含むか、本質的にからなるか、又はからなり
e.カンジダ・グラブラタのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブが、配列番号124、125、126又は127のヌクレオチド配列を含むか、本質的にからなるか、又はからなり
f.カンジダ・クルセイのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブが、配列番号128、129、130、131又は132のヌクレオチド配列を含むか、本質的にからなるか、又はからなり
g.カンジダ・ギリエルモンジィのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブが、配列番号133、134又は135のヌクレオチド配列を含むか、本質的にからなるか、又はからなり;及び/又は
h.カンジダ・アウリスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブが、配列番号136、137、138、139、140、141、142、143、144、145又は146のヌクレオチド配列を含むか、本質的にからなるか、又はからなる、項目142~144のいずれか1つに記載の方法。
a.アスペルギルス・フミガーツスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブが、ヌクレオチド配列受入番号NC_007195.1由来の次の標的配列:
i.位置c3721651~3721628
ii.位置3721658~3721681
iii.位置3721848~3721870
の1つにハイブリダイズし、
d.アスペルギルス・ニガーのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブが、ヌクレオチド配列受入番号NT_166533.1由来の次の標的配列:
i.位置c540161~540138
の1つにハイブリダイズし;及び/又は
e.アスペルギルス・フラバスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブが、ヌクレオチド配列受入番号NW_002477240.1由来の次の標的配列:
i.位置c382572~382549
の1つにハイブリダイズする、項目142~145のいずれか1つに記載の方法。
a.アスペルギルス・フミガーツスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブが、配列番号78、81又は85のヌクレオチド配列を含むか、本質的にからなるか、又はからなり;
b.アスペルギルス・ニガーのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブが、配列番号88のヌクレオチド配列を含むか、本質的にからなるか、又はからなり;
c.アスペルギルス・フラバスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブが、配列番号91のヌクレオチド配列を含むか、本質的にからなるか、又はからなる、項目142~146のいずれか1つに記載の方法。
a.項目1~56のいずれか1つに記載の方法を行って、カンジダ属、アスペルギルス属及び/又はクリプトコッカス・ネオフォルマンスが試料に存在するかどうかを決定するステップと、
b.カンジダ属又はアスペルギルス属種が試料に存在する場合、項目110~147のいずれか1つに記載の方法を行って、種が存在することを決定し、これにより、試料における酵母/真菌感染を検出し、同定するステップと
を含む、方法。
ILV3遺伝子は、カンジダ属並びに他の真菌生物(アスペルギルス属種及びクリプトコッカス・ネオフォルマンスを含む)の検出のための新規遺伝子を表す。ジヒドロキシ酸デヒドラターゼをコードするILV3遺伝子は、分岐鎖アミノ酸の生合成を導く共通の経路における第3のステップを触媒する酵素であり、任意のヒトDNAに対して0%(ゼロ)の相同性を有する酵母/真菌に特異的な遺伝子である(Liuら、2006年)。現在の真菌検出方法は、リボソームDNA(18S、内部転写スペーサー(5.8S)又は28SrRNAのいずれか)に焦点を当て、ヒトにおいて見出だされた相当な遺伝子に対する巨大な領域の相同性を有する(Khotら、2009年;及びKan、1992年を参照)。プライマーとプローブのセットは、ヒトDNAに対する特異的なプライマー及び検出プローブの交差反応性についてのチェックを必要とするため、このような高レベルの相同性は、特異的なプライマー及び検出プローブの作製を、困難で且つ時間を浪費するものにしている。また、ヒト血液試料からもたらされた試験試料溶解物として頻繁に使用する本発明の製品及び方法を考慮すると、相補性を有するヒトDNA配列の可能性を増大させ得、これにより、リボソームrRNAベースの真菌プライマーセットに対する交差反応性を増大させ得る任意の残りのヒトDNAが無作為に共有される。ILV3ベースのプライマーとプローブセットの使用と対照的に、このスクリーニングプロセスは必要とされず、ヒトDNAに対する交差反応性のリスクが取り除かれる。ILV3の標的化と並行して、試料検出のため加水分解(「タックマン(TAQMAN)」)プローブを利用することも決定された。タックマンプローブにより、優れた感度、特異性及びqPCR性能が達成されることが可能になる。しかしながら、他の実施形態において、代替のプローブタイプが使用されてもよい。例えば、モレキュラービーコン(MOLECULAR BEACON)又はスコーピオン(SCORPION)を使用して、酵母及び真菌の検出のためILV3を標的化してもよい。
・Kan, V. L. (1993). Polymerase ChainReaction for the Diagnosis of Candidemia. J. Infect. Dis. 168(3), 779-783.
・Khot, P. D., Ko, D. L. & Fredricks, D.N. (2009). Sequencing and Analysis of Fungal rRNA Operons for Development ofBroad-Range Fungal PCR Assays. Appl. Environ. Microbiol. 75(6), 1559-1565.
・Liu, M., Healy, M. D., Dougherty, B. A.,Esposito, K. M., Maurice, T. C., Mazzucco, C. E., Bruccoleri, R. E., Davison,D. B., Frosco, M., Barrett, J. F. & Wang, Y.-K. (2006). Conserved FungalGenes as Potential Targets for Broad-Spectrum Antifungal Drug Discovery.Eukaryot. Cell. 5(4), 638-649.
・Public Health England (2015). Surveillanceof candidaemia in England, Wales and Northern Ireland, 2014. Vol. 9, No. 33; 18September 2015.
・Public Health England (2016).www.gov.uk/government/publications/candida-auris-emergence-in-england.Published 1 July 2016.
・Trick, W. E., Fridkin, S. K., Edwards, J.R., Hajjeh, R. A., Gaynes, R. P., National Nosocomial Infections SurveillanceSystem Hospitals (2002). Secular trend of hospital-acquired candidemia amongintensive care unit patients in the United States during 1989-1999. Clin.Infect. Dis. 35(5), 627-630.
・Wisplinghoff, H., Ebbers, J., Geurtz, L.,Stefanik, D., Major, Y., Edmond, M. B., Wenzel, R. P., Seifert, H. (2014).Nosocomial bloodstream infections due to Candida spp. in the USA: speciesdistribution, clinical features and antifungal susceptibilities. Int. J. Antimicrob.Agents. 43(1), 78-81.
・Van Burik JA, Myerson D, Schreckhise RW,Bowden RA (1998). Panfungal PCR assay for detection of fungal infection inhuman blood specimens. J Clin Microbiol. 1998 May;36(5):1169-75. 36(5):1169-75.
Claims (31)
- 試料における真菌/酵母感染を検出する方法であって、
a.核酸増幅反応を行って、真菌/酵母のILV3遺伝子を増幅し、増幅産物を生成するステップと、
b.前記増幅産物を検出して、前記試料が真菌/酵母感染を含有するかどうかを同定するステップとを含み、
前記試料が、ヒト対象から得られた臨床試料を含む、方法。 - 前記核酸増幅反応が、次の成分:
i.カンジダ属種のILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマー;及び
ii.アスペルギルス属種のILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマー;及び/又は
iii.クリプトコッカス・ネオフォルマンスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマー
を含む、請求項1に記載の方法。 - 前記核酸増幅反応が、次の成分:
i.カンジダ属種のILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマー、それと共に、プライマー結合部位間でカンジダ属種のILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブ;及び
ii.アスペルギルス属種のILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマー、それと共に、プライマー結合部位間でアスペルギルス属種のILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブ;及び/又は
iii.クリプトコッカス・ネオフォルマンスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマー、それと共に、プライマー結合部位間でクリプトコッカス・ネオフォルマンスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブ
を含む、請求項1に記載の方法。 - 前記核酸増幅反応が、次の種:
i.カンジダ・アルビカンス
ii.カンジダ・ドゥブリニエンシス
iii.カンジダ・トロピカリス
iv.カンジダ・パラプシローシス
v.カンジダ・グラブラタ
vi.カンジダ・クルセイ
vii.カンジダ・ギリエルモンジィ
viii.カンジダ・アウリス
ix.アスペルギルス・フミガーツス
x.アスペルギルス・ニガー
xi.アスペルギルス・フラバス
xii.クリプトコッカス・ネオフォルマンス
の少なくとも3、4、5、6、7、8、9、10、11種又は全12種のILV3遺伝子
を増幅する、請求項1~3のいずれか一項に記載の方法。 - ステップが、
i.カンジダ属種、アスペルギルス属種及び/又はクリプトコッカス・ネオフォルマンスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマーの使用;及び/又は
ii.カンジダ属種、アスペルギルス属種及び/又はクリプトコッカス・ネオフォルマンスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブの使用
を含む、請求項1~4のいずれか一項に記載の方法。 - 共通のフォワード及びリバースプライマー並びに/又は共通のプローブが、次のカンジダ属種:
i.カンジダ・アルビカンス
ii.カンジダ・ドゥブリニエンシス
iii.カンジダ・トロピカリス
iv.カンジダ・パラプシローシス
v.カンジダ・グラブラタ
vi.カンジダ・クルセイ
vii.カンジダ・ギリエルモンジィ
viii.カンジダ・アウリス
の少なくとも3、4、5、6、7種、又は、全種のILV3遺伝子にハイブリダイズし;
及び/又は共通のフォワード及びリバースプライマー並びに/又はプローブが、次のアスペルギルス属種:
i.アスペルギルス・フミガーツス
ii.アスペルギルス・ニガー
iii.アスペルギルス・フラバス
の少なくとも2種、又は、全3種のILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズする、請求項1~5のいずれか一項に記載の方法。 - 別個のフォワード及びリバースプライマー並びに/又はプローブが、次のカンジダ属種:
i.カンジダ・アルビカンス
ii.カンジダ・ドゥブリニエンシス
iii.カンジダ・トロピカリス
iv.カンジダ・パラプシローシス
v.カンジダ・グラブラタ
vi.カンジダ・クルセイ
vii.カンジダ・ギリエルモンジィ
viii.カンジダ・アウリス
の少なくとも3、4、5、6、7種、又は、全種のそれぞれのILV3遺伝子にハイブリダイズし;
及び/又は別個のフォワード及びリバースプライマー並びに/又はプローブが、次のアスペルギルス属種:
i.アスペルギルス・フミガーツス
ii.アスペルギルス・ニガー
iii.アスペルギルス・フラバス
の少なくとも2種、又は、全3種のそれぞれのILV3遺伝子にハイブリダイズする、請求項1~3のいずれか一項に記載の方法。 - ステップbが、増幅産物を識別して、感染に関与する属及び/又は種を同定するステップを含む、請求項1~7のいずれか一項に記載の方法。
- 識別するステップが、
i.融解曲線解析
ii.差別的に標識されたプライマー及び/又はプローブの使用;又は
iii.前記増幅産物のサイズを決定すること
を含む、請求項8に記載の方法。 - 識別するステップが、差別的に標識されたプライマー及び/又はプローブの使用を含み、
a)少なくとも1つのプライマー及び/又はプローブを属に従い差別的に標識して、前記試料における真菌/酵母の同定を可能にする工程;若しくは
b)少なくとも1つのプライマー及び/又はプローブをカンジダ属及び/又はアスペルギルス属種に従い差別的に標識して、前記試料におけるカンジダ属及び/又はアスペルギルス属種の同定を可能にする工程;
を含む、請求項9に記載の方法。 - 試料における酵母/真菌感染を検出するためのプライマー対のコレクションであって、
前記試料が、ヒト対象から得られた臨床試料を含み、
A)a.次のカンジダ属種
i.カンジダ・アルビカンス
ii.カンジダ・ドゥブリニエンシス
iii.カンジダ・トロピカリス
iv.カンジダ・パラプシローシス
v.カンジダ・グラブラタ
vi.カンジダ・クルセイ
vii.カンジダ・ギリエルモンジィ
viii.カンジダ・アウリス
のILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマー
b.次のアスペルギルス属種
i.アスペルギルス・フミガーツス
ii.アスペルギルス・ニガー
iii.アスペルギルス・フラバス
のILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマー;又は
B)a.カンジダ・アルビカンスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマー
b.カンジダ・ドゥブリニエンシスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマー
c.カンジダ・トロピカリスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマー
d.カンジダ・パラプシローシスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマー
e.カンジダ・グラブラタのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマー
f.カンジダ・クルセイのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマー
g.カンジダ・ギリエルモンジィのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマー
h.カンジダ・アウリスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマー
i.アスペルギルス・フミガーツスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマー
j.アスペルギルス・ニガーのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマー
k.アスペルギルス・フラバスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマー;
を含む、プライマー対のコレクション。 - クリプトコッカス・ネオフォルマンスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマーを更に含む、請求項11に記載のプライマー対のコレクション。
- それぞれのプライマー対における少なくとも1つのプライマーが、他のプライマー対と比較して差別的に標識される、請求項11又は12に記載のプライマー対のコレクション。
- 試料における酵母/真菌感染を検出するためのプローブのコレクションであって、
前記試料が、ヒト対象から得られた臨床試料を含み、
A)a.次のカンジダ属種
i.カンジダ・アルビカンス
ii.カンジダ・ドゥブリニエンシス
iii.カンジダ・トロピカリス
iv.カンジダ・パラプシローシス
v.カンジダ・グラブラタ
vi.カンジダ・クルセイ
vii.カンジダ・ギリエルモンジィ
viii.カンジダ・アウリス
のILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブ
b.次のアスペルギルス属種
i.アスペルギルス・フミガーツス
ii.アスペルギルス・ニガー
iii.アスペルギルス・フラバス
のILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブ;又は
B)a.カンジダ・アルビカンスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブ
b.カンジダ・ドゥブリニエンシスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブ
c.カンジダ・トロピカリスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブ
d.カンジダ・パラプシローシスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブ
e.カンジダ・グラブラタのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブ
f.カンジダ・クルセイのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブ
g.カンジダ・ギリエルモンジィのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブ
h.カンジダ・アウリスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブ
i.アスペルギルス・フミガーツスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブ
j.アスペルギルス・ニガーのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブ
k.アスペルギルス・フラバスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブ;
を含む、プローブのコレクション。 - クリプトコッカス・ネオフォルマンスのILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブを更に含む、請求項14に記載のプローブのコレクション。
- 前記プローブのコレクションが、それぞれのプローブが差別的に標識されている少なくとも2つのプローブを含む、請求項14又は15に記載のプローブのコレクション。
- 請求項11~13のいずれか一項に記載のプライマー対のコレクション及び/又は請求項14~16のいずれか一項に記載のプローブのコレクションを使用して行われる、請求項1~10のいずれか一項に記載の方法。
- 試料における酵母/真菌感染を検出するためのキットであって、請求項11~13のいずれか一項に記載のプライマー対のコレクション及び/又は請求項14~16のいずれか一項に記載のプローブのコレクションを含む、キット。
- カンジダ属、アスペルギルス属及びクリプトコッカス・ネオフォルマンスの検出を可能にする組合せでプライマー対を含み;及び/又は、カンジダ属、アスペルギルス属及びクリプトコッカス・ネオフォルマンスの検出を可能にするプローブを更に含む、請求項18に記載のキット。
- 血液試料からDNAを抽出するための試薬をさらに含む、請求項18又は19に記載のキット。
- 試料における微生物感染を検出し、同定する方法であって、
a.次の成分:
i.グラム陽性細菌の16SrRNA遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマー、
ii.グラム陰性細菌の16SrRNA遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマー、
iii.少なくとも1つの真菌/酵母種のILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマー
を含む核酸増幅反応を行い、増幅産物を生成するステップと、
b.前記増幅産物を検出し、識別して、前記試料がグラム陰性細菌感染、グラム陽性細菌感染及び/又は真菌/酵母感染を含有するかどうかを同定するステップと
を含み;
前記試料が、ヒト対象から得られた臨床試料を含む、
方法。 - i.グラム陽性細菌の16SrRNA遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマー、それと共に、プライマー結合部位間でグラム陽性細菌の16SrRNA遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブ、
ii.グラム陰性細菌の16SrRNA遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマー、それと共に、プライマー結合部位間でグラム陰性細菌の16SrRNA遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブ、
iii.少なくとも1つの真菌/酵母種のILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマー、それと共に、プライマー結合部位間で少なくとも1つの真菌/酵母種のILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブ
を含む核酸増幅反応を行う、請求項21に記載の方法。 - 前記ILV3遺伝子の前記増幅が、請求項1~10のいずれか一項に記載の方法に従い行われ、及び/又は請求項11~13のいずれか一項に記載のプライマー対のコレクションを使用して行われ、及び/又は請求項14~16のいずれか一項に記載のプローブのコレクションを使用して行わる、請求項21又は22に記載の方法。
- 試料における微生物感染を識別するためのキットであって、
a.グラム陽性細菌の16SrRNA遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマー、
b.グラム陰性細菌の16SrRNA遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマー;及び
c.少なくとも1つの真菌/酵母種のILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマー
を含む多重核酸増幅反応を行うための成分を含み、
成分a、b及びcそれぞれが、識別可能な増幅産物を産生し、これにより、前記試料が、グラム陰性細菌感染、グラム陽性細菌感染及び/又は真菌/酵母感染を含有するかどうかの決定を可能にする、キット。 - a.グラム陽性細菌の16SrRNA遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマー、それと共に、プライマー結合部位間でグラム陽性細菌の16SrRNA遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブ、
b.グラム陰性細菌の16SrRNA遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマー、それと共に、プライマー結合部位間でグラム陰性細菌の16SrRNA遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブ;及び
c.少なくとも1つの真菌/酵母種のILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするフォワード及びリバースプライマー、それと共に、プライマー結合部位間で少なくとも1つの真菌/酵母種のILV3遺伝子に特異的にハイブリダイズするプローブ
を含む多重核酸増幅反応を行うための成分を含む、
請求項24に記載のキット。 - 請求項11~13のいずれか一項に記載のプライマー対のコレクション及び/又は請求項14~16のいずれか一項に記載のプローブのコレクション及び/又は請求項18~20のいずれか一項に記載のキットを含む、請求項24又は25に記載のキット。
- 多重核酸増幅反応として行われる、請求項1~10のいずれか一項に記載の方法。
- 前記試料が血液試料を含む、請求項1~10、17、21~23、27のいずれか一項に記載の方法。
- 前記試料が血液試料を含む、請求項11~13のいずれか一項に記載のプライマー対のコレクション。
- 前記試料が血液試料を含む、請求項14~16のいずれか一項に記載のプローブのコレクション。
- 前記試料が血液試料を含む、請求項18~20、24~26のいずれか一項に記載のキット。
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