JP7333854B2 - Obp促進剤 - Google Patents
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Description
(1)百合エキス、セイヨウバラエキス、および桜の花エキスから成る群より選択される物質を有効成分として含有することを特徴とする、OBP(odorant binding protein)発現促進剤。
(2)表皮細胞および/またはケラチノサイトにおけるOBPの発現を促進するために用いられる、項目1に記載のOBP発現促進剤。
(3)OBP活性が低下した皮膚におけるOBPの発現を促進するために用いられる、項目1または2に記載のOBP発現促進剤。
(4)皮膚の保湿機能および/またはバリア機能を向上させるために用いられる、項目1~3のいずれか1項に記載のOBP発現促進剤。
(5)有害物質による皮膚へのダメージを低減させるために用いられる、項目1~4のいずれか1項に記載のOBP発現促進剤。
(6)有害物質が、アルデヒド、脂肪酸、ならびに大気汚染物質から成る群より選択される、項目5に記載のOBP発現促進剤。
(7)百合エキス、セイヨウバラエキス、および桜の花エキスから成る群より選択される物質を有効成分として含有するOBP発現促進剤を適用することを含む、美容方法または非治療的方法。
(8)OBPの発現の促進における百合エキス、セイヨウバラエキス、および桜の花エキスから成る群より選択される物質の使用。
(9)百合エキス、セイヨウバラエキス、および桜の花エキスから成る群より選択される物質を有効成分として含有するOBP発現促進剤を含有する皮膚外用剤。
(10)百合エキス、セイヨウバラエキス、および桜の花エキスから成る群より選択される物質を有効成分として含有する皮膚有害物質抑制剤。
(11)OBPの発現を促進または抑制する物質のスクリーニング方法であって、細胞と該物質を接触させる工程、該細胞におけるOBP発現量を測定する工程、該物質の有無によるOBP発現量の変化を決定する工程を含む方法。
OBP(odorant binding protein;オドラント結合タンパク質)は、多くの動物や昆虫に存在することが知られており、その構造は種によって様々であるものの、3つのジスルフィド結合により結合された6つのシステインが保存されたαヘリックス構造を有する10~30kDaのタンパク質である。脊椎動物では、OBPはリポカリンファミリーの一部であり、逆平行βシートで構成されるβバレルモチーフを有する。ヒトはOBP2A、OBP2B、LCN1の3種類のOBPを有する。OBP2Aは鼻水等に存在し、脂肪酸やアルデヒドに高い親和性を有する。OBP2Bは、前立腺や乳腺に存在し、LCN1は涙に存在する。
本発明の一つの側面は、OBP(odorant binding protein)発現促進剤に関する。いくつかの実施態様において、OBP発現促進剤は、セイヨウバラエキス、桜の花エキス、および百合エキスから成る群より選択される物質を有効成分として含有することができる。OBPの発現促進とは、OBPの転写産物の量、及び/又はタンパク質の量を増加させることを指す。
本発明の一つの側面は、OBP発現促進剤を適用することを含む、美容方法または非治療的方法に関する。いくつかの実施態様において、OBP発現促進剤は、セイヨウバラエキス、桜の花エキス、および百合エキスから成る群より選択される物質を有効成分として含有することができる。かかる方法は、美容を目的とする方法であり、医師や医療従事者による治療に用いられる方法ではない。適用の対象は例えば哺乳動物、特にヒトである。適用部位は例えば、顔、首、頭皮、腕、脚などの皮膚でありうる。適用は、手や塗布具等によってする塗布など、任意の様式で行うことができる。適用の回数、頻度、量等は、所望の効果等に応じて適宜設定される。
本発明の一つの側面は、OBPの発現の促進におけるセイヨウバラエキス、桜の花エキス、および百合エキスから成る群より選択される物質の使用に関する。別の観点から言えば、本発明の一つの側面は、OBPの発現の促進に使用するための、セイヨウバラエキス、桜の花エキス、および百合エキスから成る群より選択される物質に関する。本明細書に開示のデータは、セイヨウバラエキス、桜の花エキス、および百合エキスから成る群より選択される物質がOBPの発現促進に有用であることを実証している。よって、上記の植物エキスを用いて、OBPの発現促進に使用するための組成物を調製することができる。すなわち、本発明の一つの態様は、OBPの発現を促進するための組成物(例えば、皮膚外用剤)の製造におけるセイヨウバラエキス、桜の花エキス、および百合エキスから成る群より選択される物質の使用にも関する。
本発明の一つの側面は、セイヨウバラエキス、桜の花エキス、および百合エキスから成る群より選択される物質を有効成分として含有するOBP発現促進剤を含有する皮膚外用剤に関する。
本発明の一つの側面は、セイヨウバラエキス、桜の花エキス、および百合エキスから成る群より選択される物質を有効成分として含有する皮膚有害物質抑制剤に関する。
本発明の一つの側面は、OBPの発現を促進または抑制する物質のスクリーニング方法に関する。いくつかの実施態様において、本発明に係るスクリーニング方法は、細胞と物質を接触させる工程、細胞におけるOBP発現量を測定する工程、物質の有無によるOBP発現量の変化を決定する工程を含みうる。
角化細胞ヒト表皮細胞はHumedia-KG2(クラボウ)培地にて37℃で培養することにより調製した。三次元表皮モデルの構築では、DPBSに50倍希釈したCellStart(Invitrogen LifeTechnologies)液でコーティングしたセルカルチャーインサート(φ12mm,多孔膜の平均孔径:0.4μm)にCnTPrime培地(CELLnTEC)溶液に希釈したヒト表皮細胞(2.2×105個/500μl)を播種し、CnTPrime培地(CELLnTEC)溶液1mlをインサート下に加えて37℃で3日間培養した。その後、インサート上の培地をビタミンC(50μg/ml)が加えられたCnT-PR-3D培地(CELLnTEC)で500μl、インサート下の培地を1mlに置換し、37℃で1日間培養した。1日後、インサート上の培地を吸い取り、インサート下の培地をビタミンC(50μg/ml)が加えられたCnT-PR-3D培地(CELLnTEC)500μlに置換し、37℃で1日間培養した。この作業を8日間行うことで三次元表皮モデルを構築した。
10μMのOBP2AとOBP2BのsiRNAをLipofectamine RNAiMAX Transfection Reagent(Thermo FisherScientific)とOpti-MEM I Reduced SerumMedia(Thermo FisherScientific)の混合溶液に加え、それを上記方法で培養した表皮細胞に添加し24時間培養することでOBP2A及びOBP2Bのダブルノックダウン細胞を作製した。対照細胞は、前述のノックダウン処理を行わない以外は同じ条件で培養し24時間分化させた。
Autodock(4.2.6)、Pymol(2.2.0)を用いたシミュレーションによりOBPおよび3種の物質(ノネナール、オレイン酸、パルミトレイン酸)の構造解析を行った。結果を図5~7に示す。図5~7は、これらの物質がいずれもOBPの結合ポケットに捕捉されることを示している。
いくつかの植物エキス、すなわち、セイヨウバラエキス、桜の花エキス、百合エキスについて、OBPの転写を促進する効果を細胞で調べた。
皮膚バリア機能のマーカー遺伝子として公知の遺伝子に対して、桜の花エキスが与える効果を調べた。マーカー遺伝子としては、フィラグリン(例えば、「Filaggrin and Skin Barrier Function」doi: 10.1159/000441539を参照)、カリクレイン10(例えば、「Epidermal Barriers」doi: 10.1101/cshperspect.a018218を参照)、カスパーゼ14(例えば、「Phospho-ΔNp63α regulates AQP3, ALOX12B, CASP14 and CLDN1 expression through transcription and microRNA modulation」doi: 10.1016/j.febslet.2013.09.023を参照)を選択した。
桜の花エキスに代えて百合エキスを用いて、実施例5と同様な実験を行った。結果を図12~14に示す。値は対照を1とした際の相対値を示している。
皮膚のバリア機能は、経皮水分蒸散の抑制により評価することができ、経表皮水分蒸散量(TEWL)が小さいほどバリア機能に優れるとみなすことができる。
Claims (7)
- 百合エキスを有効成分として含有することを特徴とする、OBP(odorant binding protein)発現促進剤。
- 百合エキスが百合花エキスである、請求項1に記載のOBP発現促進剤。
- 表皮細胞および/またはケラチノサイトにおけるOBPの発現を促進するために用いられる、請求項1または2に記載のOBP発現促進剤。
- OBP活性が低下した皮膚におけるOBPの発現を促進するために用いられる、請求項1または2に記載のOBP発現促進剤。
- 皮膚の保湿機能および/またはバリア機能を向上させるために用いられる、請求項1または2に記載のOBP発現促進剤。
- 有害物質による皮膚へのダメージを低減させるために用いられる、請求項1または2に記載のOBP発現促進剤。
- 有害物質が、アルデヒド、脂肪酸、ならびに大気汚染物質から成る群より選択される、請求項6に記載のOBP発現促進剤。
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皮膚に存在する嗅覚受容体に関する新知見を確認,FANCL,2021年06月16日,https://www.fancl.jp/laboratory/pdf/20210616_hihunisonzisurukyuukaijuyoutai.pdf,<研究背景・目的>,<本研究成果による製品開発> |
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