JP7312509B2 - アルコール系溶液組成物のゼリー化を用いた細胞の検査方法 - Google Patents
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Description
本発明は、検体（例えば、人体の剥離細胞（ｅｘｆｏｌｉａｔｉｖｅ ｃｅｌｌｓ））をバイアル内にゼリー化させて人間ドック・健診センターまで安全に運び、人間ドック・健診センターにおいて元の状態に戻して（例えば、液状変換）検体を検査することができる技術に関する。
さらに詳しくは、本発明は、バイアル内に収められる検体保存用の液をゼリー状態に切り換えることで、変形することなく検体を人間ドック・健診センターまで安全に搬送し、人間ドック・健診センターにおいて検体保存用の液を液状に再溶解して検体の検査を行う技術に関する。
一般に、人体から検体（剥離細胞）を取得し、次いでその剥離細胞を人間ドック・健診センターにおいて細胞診検査のスライドに塗抹し、その後に剥離細胞の状態を観察し、かつ診断することができる。
ここで、人間ドック・健診センターへの訪問が困難な患者の場合には、自ら自分の剥離細胞（検体）を採取し、その後、人間ドック・健診センターまでその剥離細胞が損なわれていない状態で搬送しなければならない。そのために、密閉容器であるバイアル内に検体の保護のための細胞固定溶液を検体とともに入れて人間ドック・健診センターまで搬送することができる。
検体の変形を防ぐために、バイアル内に充填される細胞固定溶液は、一般に、水溶液からなる。バイアルを搬送する過程において、バイアルの胴体と蓋体との間の隙間から細胞固定溶液が漏れてしまうことが頻繁に起こり、それにより、検体の変形が起きてしまう可能性がある。
このような従来の技術における不都合を解消できる技術の実現が求められている。
一方、本発明と関わる先行文献は、次の通りである。
（１）特許文献１（１９９２年１１月４日）「Ｃｅｌｌ ｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｖｅ ｓｏｌｕｔｉｏｎ」
（２）特許文献２（２００６年４月２７日）「Ｅｎｈａｎｃｅｄ ｃｅｌｌ ｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｖｅ ｓｏｌｕｔｉｏｎ ａｎｄ ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ ｕｓｉｎｇ ｓａｍｅ」
（３）特許文献３（２００５年１２月１３日）「ゲル状保存剤とその製造方法及びそれを用いた細胞の検査方法」
一方、本発明と関わる先行文献は、次の通りである。
（１）特許文献１（１９９２年１１月４日）「Ｃｅｌｌ ｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｖｅ ｓｏｌｕｔｉｏｎ」
（２）特許文献２（２００６年４月２７日）「Ｅｎｈａｎｃｅｄ ｃｅｌｌ ｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｖｅ ｓｏｌｕｔｉｏｎ ａｎｄ ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ ｕｓｉｎｇ ｓａｍｅ」
（３）特許文献３（２００５年１２月１３日）「ゲル状保存剤とその製造方法及びそれを用いた細胞の検査方法」
本発明は、前記の事情に鑑みて案出されたものであり、本発明は、検体（例えば、人体の剥離細胞）を安全に遠距離まで搬送できるようにバイアル内に収められた検体をアルコール系溶液組成物としてゼリー化し、人間ドック・健診センターにおいて細胞の検査を行う際に検体を元の状態に簡単に修復できるようにするアルコール系溶液組成物のゼリー化を用いた細胞の検査方法を提供することを目的とする。
前記の目的を達成するために、本発明の第１の実施形態に係るアルコール系溶液組成物のゼリー化を用いた細胞の検査方法は、（ａ）メタノール水溶液３０～６０重量部、ＥＤＴＡ ０．１～０．２重量部、コール酸０．０１～０．０５重量部、１Ｎの酢酸水溶液０．０５～０．１重量部を含む第１の溶液と、エタノール水溶液４０～５０重量部、ＥＤＴＡ ０．１～０．２重量部、２価アルコール類添加剤０．２～１重量部を含む第２の溶液とのうちから選ばれたどちらか一方の溶液と、ゼラチンと光硬化性タンパク質のうち少なくとも１つの物質５～２０重量部、セルロース天然高分子物質１～１００重量部、アクリルビーズ合成高分子物質１～１００重量部のうちから選ばれた少なくとも１種の物質とを１～４０℃の温度下で混合（ｍｉｘｉｎｇ）してゼリー化済みのアルコール系ゼリー化物質を生成するステップと、（ｂ）アルコール系ゼリー化物質が収められた密閉容器の内側に採取済みの検体を投入するステップと、（ｄ）密閉容器内のゼリー化済みのアルコール系ゼリー化物質を再溶解溶液に投入するステップと、（ｅ）再溶解溶液を１～４０℃の温度に維持してアルコール系ゼリー化物質を液状に再溶解するステップと、（ｆ）再溶解を経た状態のアルコール系ゼリー化物質から検体を取得して検査するステップと、を含んでいてもよい。
本発明の第２の実施形態に係るアルコール系溶液組成物のゼリー化を用いた細胞の検査方法は、（ａ）メタノール水溶液３０～６０重量部、ＥＤＴＡ ０．１～０．２重量部、コール酸０．０１～０．０５重量部、１Ｎの酢酸水溶液０．０５～０．１重量部を含む第１の溶液と、エタノール水溶液４０～５０重量部、ＥＤＴＡ ０．１～０．２重量部、２価アルコール類添加剤０．２～１重量部を含む第２の溶液とのうちから選ばれたどちらか一方の溶液（以下、「選択溶液」と称する。）を密閉容器に投入するステップと、（ｂ）選択溶液が充填された状態の密閉容器の内側に検体を投入するステップと、（ｃ）１～４０℃の温度において、ゼラチンと光硬化性タンパク質のうち少なくとも１つの物質５～２０重量部、セルロース天然高分子物質１～１００重量部、アクリルビーズ合成高分子物質１～１００重量部のうちから選ばれた少なくとも１種の物質を選択溶液と検体が投入された状態の密閉容器の内側に投入してアルコール系ゼリー化物質としてゼリー化するステップと、（ｄ）密閉容器内のゼリー化済みのアルコール系ゼリー化物質を再溶解溶液に投入するステップと、（ｅ）再溶解溶液を１～４０℃の温度に維持してゼリー化済みのアルコール系ゼリー化物質を液状物質に再溶解するステップと、（ｆ）再溶解を経た状態の液状物質から検体を取得して検査するステップと、を含んでいてもよい。
そのとき、ステップ（ｄ）は、メタノール水溶液３０～６０重量部、ＥＤＴＡ ０．１～０．２重量部、コール酸０．０１～０．０５重量部、１Ｎの酢酸水溶液０．０５～０．１重量部を含んでなる再溶解溶液を生成するステップを含んでいてもよい。
また、ステップ（ｄ）は、エタノール水溶液４０～５０重量部、ＥＤＴＡ ０．１～０．２重量部、２価アルコール類添加剤０．２～１重量部を含んでなる再溶解溶液を生成するステップを含んでいてもよい。
本発明は、選択溶液と選択物質を混合することで、バイアルの内側に充填される細胞固定溶液のゼリー化が行われることから、その細胞固定溶液のゼリー化が簡便であるというメリットを示す。
また、本発明は、細胞固定溶液のゼリー化により、遠距離搬送の際におけるバイアルからの細胞固定溶液の漏れを防ぐことができるというメリットを示す。
さらに、本発明は、ゼリー化の状態から細胞の検査のための液状への変換が簡便であるというメリットをも示す。
さらに、本発明は、ゼリー化の状態から細胞の検査のための液状への変換が簡便であるというメリットをも示す。
以下、本発明を詳しく説明する。
図１は、検体を収めて搬送する密閉容器であるバイアルの例示図である。図１を参照すると、バイアル１０は、一方の端部が開口された中空状の胴体１２と、その胴体１２の開口部を開閉する蓋体１１と、を備えていてもよい。
図１は、検体を収めて搬送する密閉容器であるバイアルの例示図である。図１を参照すると、バイアル１０は、一方の端部が開口された中空状の胴体１２と、その胴体１２の開口部を開閉する蓋体１１と、を備えていてもよい。
そのとき、バイアル１０に細胞固定溶液を収めた状態で光や酸素に晒されると、アルコール成分が酸化されてしまう現象が起こり兼ねないため、酸化防止剤入りレジンにて射出してバイアル１０を作製してもよい。また、バイアル１０に光遮断染料を加えて半透明に作製してもよい。
なお、細胞固定溶液を収める容器として不透明なポーチ状の梱包材を採用することにより、酸素や光への暴露を遮断してもよい。
一方、検体を採取した刷毛先（図示せず）をバイアル１０の内側に収める過程において、細胞固定溶液に浸されていない検体部分が損なわれてしまう虞がある。よって、バイアル１０は、刷毛先を完全に収められるほどのサイズに作製されることが好ましい。なお、検体を採取した刷毛先をバイアル１０の内側に収めた状態で、そのバイアル１０に細胞固定溶液をいっぱいに充填することが好ましい。
一方、検体を採取した刷毛先（図示せず）をバイアル１０の内側に収める過程において、細胞固定溶液に浸されていない検体部分が損なわれてしまう虞がある。よって、バイアル１０は、刷毛先を完全に収められるほどのサイズに作製されることが好ましい。なお、検体を採取した刷毛先をバイアル１０の内側に収めた状態で、そのバイアル１０に細胞固定溶液をいっぱいに充填することが好ましい。
従来には、水溶液タイプの細胞固定溶液を検体とともにバイアル１０に充填する場合、長距離搬送時の漏れに伴う検体の変形といった不都合が生じていた。本発明は、このような不都合を解消するために、その細胞固定溶液をゼリー化できる組成物を提供する。すなわち、細胞固定溶液がゼリー化されれば、漏れや蒸発の可能性が低いことから、検体の本来の状態を保持することができる。
ここで、バイアル１０に収められた細胞固定溶液をゼリーの状態で人間ドック・健診センターまで搬送するが、その搬送の過程においてバイアル１０を常温以下の低温の状態に維持することにより、そのゼリー化の状態をそのまま維持する。
図２は、ゼリー化攪拌器２０にバイアル１０を搭載した状態の例示図である。図２を参照すると、本発明に係る選択溶液と選択物質とを混合してアルコール系ゼリー化物質を生成するための手段として、ゼリー化攪拌器２０を備えていてもよい。
まず、ゼリー化攪拌器２０のテーブル部材２１にバイアル１０を据え置きする。その状態で、ゼリー化攪拌器２０を操作してテーブル部材２１を注入部材２２の下部に位置させ、注入部材２２から下の方向にゼリー組成物を投下することにより、バイアル１０内にゼリー組成物が充填される。
また、ゼリー化攪拌器２０を操作して、テーブル部材２１を図２の矢印の方向に往復運動させることにより、バイアル１０内のゼリー組成物が上手に混ざるようにしてもよい。
図３は、再溶解攪拌器３０にバイアル１０を搭載した状態の例示図である。本発明に係るアルコール系ゼリー化物質が検体とともにバイアル１０に収められた状態で人間ドック・健診センターに届くと、そのバイアル１０から検体を取り出す前にバイアル１０内のアルコール系ゼリー化物質を液状に再変換せねばならない。
図３は、再溶解攪拌器３０にバイアル１０を搭載した状態の例示図である。本発明に係るアルコール系ゼリー化物質が検体とともにバイアル１０に収められた状態で人間ドック・健診センターに届くと、そのバイアル１０から検体を取り出す前にバイアル１０内のアルコール系ゼリー化物質を液状に再変換せねばならない。
そのために、再溶解攪拌器３０のテーブル部材３１にバイアル１０を据え置きする。その状態で、再溶解攪拌器３０を操作してテーブル部材３１を注入部材３２の下部に位置させ、注入部材３２から下の方向に再溶解溶液を投下することにより、バイアル１０内のアルコール系ゼリー化物質を液状に再変換する。
そのとき、再溶解攪拌器３０を操作してテーブル部材３１を図３の矢印の方向に往復運動させることにより、バイアル１０内の再溶解溶液がゼリー組成物と上手に混ざるようにしてもよい。
本明細書において、図２のゼリー化攪拌器２０と図３の再溶解攪拌器３０は、説明のしやすさのために異なる名称で記載されているが、同一の製品を使ってもよい。なお、図２のゼリー化攪拌器２０と図３の再溶解攪拌器３０は、同様の形状で示されているが、異なる形状に実現されてもよい。
図４は、本発明の第１の実施形態に係るアルコール系溶液組成物のゼリー化を用いた細胞の検査過程を示す手順図である。
ステップ（Ｓ１１０）：まず、メタノール水溶液３０～６０重量部、ＥＤＴＡ（ｅｔｈｙｌｅｎｅｄｉａｍｉｎｅｔｅｔｒａａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ）０．１～０．２重量部、コール酸（ｃｈｏｌｉｃ ａｃｉｄ）０．０１～０．０５重量部、１Ｎの酢酸（ａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ）水溶液０．０５～０．１重量部を含む第１の溶液と、エタノール水溶液４０～５０重量部、ＥＤＴＡ ０．１～０．２重量部、２価アルコール類添加剤０．２～１重量部を含む第２の溶液とのうちのどちらか一方の溶液（以下、「選択溶液」と称する。）を選ぶ。
ステップ（Ｓ１１０）：まず、メタノール水溶液３０～６０重量部、ＥＤＴＡ（ｅｔｈｙｌｅｎｅｄｉａｍｉｎｅｔｅｔｒａａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ）０．１～０．２重量部、コール酸（ｃｈｏｌｉｃ ａｃｉｄ）０．０１～０．０５重量部、１Ｎの酢酸（ａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ）水溶液０．０５～０．１重量部を含む第１の溶液と、エタノール水溶液４０～５０重量部、ＥＤＴＡ ０．１～０．２重量部、２価アルコール類添加剤０．２～１重量部を含む第２の溶液とのうちのどちらか一方の溶液（以下、「選択溶液」と称する。）を選ぶ。
そして、ゼラチンと光硬化性タンパク質（ｇｅｌａｔｉｎ ｍｅｔｈａｃｒｙｌｏｌｙ；ＧｅｌＭＡ）のうち少なくとも１つの物質５～２０重量部、セルロース天然高分子物質１～１００重量部、アクリルビーズ合成高分子物質１～１００重量部のうちのいずれか一種の物質（以下、「選択物質」と称する。）を選ぶ。
次いで、選択溶液と選択物質をバイアル１０に入れ、その後、１～４０℃の温度下で混合することにより、ゼリー化済みのアルコール系ゼリー化物質を生成する。
そのとき、バイアル１０周辺の温度が１℃未満と低すぎる場合、ゼラチン、光硬化性タンパク質、セルロース天然高分子物質、アクリルビーズ合成高分子はバイアル１０内において溶解されないため、ゲル化もしくはゼリー化が不十分になる。
そのとき、バイアル１０周辺の温度が１℃未満と低すぎる場合、ゼラチン、光硬化性タンパク質、セルロース天然高分子物質、アクリルビーズ合成高分子はバイアル１０内において溶解されないため、ゲル化もしくはゼリー化が不十分になる。
また、バイアル１０周辺の温度が４０℃を超えて高すぎる場合、沸点の低いアルコール系成分が蒸発されるため、組成物全体の物性変化を招いて細胞固定手段の検体固定能が強すぎるか、あるいは、弱すぎる。
ステップ（Ｓ１２０）：次いで、アルコール系ゼリー化物質が収められたバイアル１０の内側に検体を投入する。そのとき、検体を採取した刷毛先（図示せず）を安全に収められるように、バイアル１０は、刷毛先を完全に収められるほどのサイズに作製されることが好ましい。
このように、検体が投入された状態のバイアル１０を人間ドック・健診センターまで搬送する。その搬送の過程において、バイアル１０を常温以下の低温の状態に維持しなければ、そのゼリー化の状態が液状に変換されてしまう現象を防ぐことができない。
検体が投入された状態のバイアル１０が搬送されれば、人間ドック・健診センターにおいては、そのバイアル１０から検体を取り出して細胞の検査を行わなければならない。そのとき、バイアル１０から検体を変形なしに安全に取り出すためには、バイアル１０内の細胞固定手段を液状に再変換せねばならない。
ステップ（Ｓ１３０、Ｓ１４０）：バイアル１０内のゼリー化済みのアルコール系ゼリー化物質を再溶解溶液に投入し、次いでその再溶解溶液を１～４０℃の温度に維持してアルコール系ゼリー化物質を液状に再溶解してもよい。
そのとき、ゼリー化物質と検体を収めているバイアル１０を、図３のように、再溶解攪拌器３０の仕掛け物に据え置きした状態で、そのバイアル１０の内部に再溶解溶液を投下する実施形態が採用可能である。なお、再溶解攪拌器３０とは別途に、そのバイアル１０を再溶解溶液に入れる実施形態もまた採用可能である。
一方、本発明の第１の実施形態において、再溶解溶液は、メタノール水溶液３０～６０重量部、ＥＤＴＡ ０．１～０．２重量部、コール酸０．０１～０．０５重量部、１Ｎの酢酸水溶液０．０５～０．１重量部を含んでいてもよい。
また、本発明の第１の実施形態において、再溶解溶液は、エタノール水溶液４０～５０重量部、ＥＤＴＡ ０．１～０．２重量部、２価アルコール類添加剤０．２～１重量部を含んでいてもよい。
ステップ（Ｓ１５０）：図３のように、バイアル１０内の物質を液状に再変換した後には、別途の装備（図示せず）を介してバイアル１０内の検体を取り出して細胞の検査を行ってもよい。
本発明の第１の実施形態においては、選択溶液が、メタノール水溶液３０～６０重量部、ＥＤＴＡ ０．１～０．２重量部、コール酸０．０１～０．０５重量部、１Ｎの酢酸水溶液０．０５～０．１重量部を含む第１の溶液と、エタノール水溶液４０～５０重量部、ＥＤＴＡ ０．１～０．２重量部、２価アルコール類添加剤０．２～１重量部を含む第２の溶液とのうちから選ばれる。なお、選択物質は、ゼラチンと光硬化性タンパク質のうち少なくとも１つの物質５～２０重量部、セルロース天然高分子物質１～１００重量部、アクリルビーズ合成高分子物質１～１００重量部のうちから選ばれる。
このような本発明の第１の実施形態に対して各構成比に応じた物性について実験を行った。その際に、個別の構成要素ごとにその混合組成比率を異ならせながら、当該構成要素が組成物全体の物性に及ぼす影響について実験を行った。
表１は、本発明の第１の実施形態に対する各構成の混合割合を固定した状態で、メタノール水溶液に対してのみその混合割合を異ならせて設定した実験条件を示すものである。
表２は、本発明の第１の実施形態に対する各構成の混合割合を固定した状態で、ＥＤＴＡに対してのみその混合割合を異ならせて設定した実験条件を示すものである。
表３は、本発明の第１の実施形態に対する各構成の混合割合を固定した状態で、コール酸に対してのみその混合割合を異ならせて設定した実験条件を示すものである。
表４は、本発明の第１の実施形態に対する各構成の混合割合を固定した状態で、１Ｎ（１ノルマル濃度）の酢酸水溶液に対してのみその混合割合を異ならせて設定した実験条件を示すものである。
表５は、本発明の第１の実施形態に対する各構成の混合割合を固定した状態で、ゼラチンに対してのみその混合割合を異ならせて設定した実験条件を示すものである。
表１～表５において、実施例（Ａ１～Ａ５、Ｂ１～Ｂ５、Ｃ１～Ｃ５）では、ゼリー化済みの細胞固定手段の固定能が良好であった。それに対し、比較例（ａ１～ａ５、ｂ１～ｂ５）では、バイアル１０の内側に検体を固定する能力が強すぎるか、あるいは弱すぎた。それにより、比較例においては、バイアル１０から検体を取り出す過程（例えば、再溶解）において不都合（例えば、検体の変形）が生じた。
本発明の第１の実施形態に関連して、表１～表５の場合よりもさらに多くの実験が行われたが、説明のしやすさのために省略した。
一方、本発明の第１の実施形態によるアルコール系ゼリー化物質において、ゼラチンと光硬化性タンパク質のうちの少なくとも１つの物質５～２０重量部に対しては、セルロース天然高分子（例えば、ｍｅｃｅｌｌｏｓｅ、ｈｅｃｅｌｌｏｓｅ）１～１００重量部またはアクリルビーズ（ａｃｒｙｌ ｂｅａｄ）合成高分子（例えば、ｍｅｔｈｙｌ ｍｅｔｈａｃｒｙｌａｔｅ－ｃｏ－ｅｔｈｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ ｄｉｍｅｔｈａｃｒｙｌａｔｅ；ＭＭＡ）１～１００重量部に置き換えてもよい。
一方、本発明の第１の実施形態によるアルコール系ゼリー化物質において、ゼラチンと光硬化性タンパク質のうちの少なくとも１つの物質５～２０重量部に対しては、セルロース天然高分子（例えば、ｍｅｃｅｌｌｏｓｅ、ｈｅｃｅｌｌｏｓｅ）１～１００重量部またはアクリルビーズ（ａｃｒｙｌ ｂｅａｄ）合成高分子（例えば、ｍｅｔｈｙｌ ｍｅｔｈａｃｒｙｌａｔｅ－ｃｏ－ｅｔｈｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ ｄｉｍｅｔｈａｃｒｙｌａｔｅ；ＭＭＡ）１～１００重量部に置き換えてもよい。
ここで、セルロース天然高分子に対しても、残りの構成の混合割合を固定した状態で、１重量部の未満範囲と１００重量部の超え範囲を比較例として実験を行ったところ、１～１００重量部から外れている領域においては、バイアル１０の内側において検体を固定する能力が良好ではなかった。
そして、アクリルビーズ合成高分子に対しても、残りの構成の混合割合を固定した状態で、１重量部の未満範囲と１００重量部の超え範囲を比較例として実験を行ったところ、１～１００重量部から外れている領域においては、バイアル１０の内側において検体を固定する能力が良好ではなかった。
一方、本発明の第１の実施形態において、ステップ（Ｓ１３０）に用いられる再溶解溶液は、メタノール水溶液３０～６０重量部、ＥＤＴＡ ０．１～０．２重量部、コール酸０．０１～０．０５重量部、１Ｎの酢酸水溶液０．０５～０．１重量部を含んでいてもよい（以下、「第１の再溶解溶液」と称する。）。
本発明の第１の実施形態では、このような第１の再溶解溶液に対して、各構成比に応じた物性の実験を行い、かつ、個別の構成要素ごとにその混合組成比率を異ならせながら、当該構成要素が組成物全体の物性に及ぼす影響について実験を行った。
表６は、本発明の第１の実施形態において、第１の再溶解溶液を用いた再溶解過程に関連して、各構成の混合割合を固定した状態で、メタノール水溶液に対してのみその混合割合を異ならせて設定した実験条件を示すものである。
表７は、本発明の第１の実施形態において、第１の再溶解溶液を用いた再溶解過程に関連して、各構成の混合割合を固定した状態で、ＥＤＴＡに対してのみその混合割合を異ならせて設定した実験条件を示すものである。
表８は、本発明の第１の実施形態において、第１の再溶解溶液を用いた再溶解過程に関連して、各構成の混合割合を固定した状態で、コール酸に対してのみその混合割合を異ならせて設定した実験条件を示すものである。
表９は、本発明の第１の実施形態において、第１の再溶解溶液を用いた再溶解過程に関連して、各構成の混合割合を固定した状態で、１Ｎの酢酸水溶液に対してのみその混合割合を異ならせて設定した実験条件を示すものである。
表６～表９において、実施例（Ａ６～Ａ９、Ｂ６～Ｂ９、Ｃ６～Ｃ９）では、バイアル１０から検体を取り出す過程（例えば、再溶解）においてこれといった不都合がなかった。それに対し、比較例（ａ６～ａ９、ｂ６～ｂ９）では、バイアル１０から検体を取り出す過程（例えば、再溶解）において不都合（例えば、検体の変形）が生じた。
他方で、本発明の第１の実施形態において、再溶解溶液は、エタノール水溶液４０～５０重量部、ＥＤＴＡ ０．１～０．２重量部、２価アルコール類添加剤０．２～１重量部を含んでいてもよい（以下、「第２の再溶解溶液」と称する。）。
本発明の第１の実施形態では、このような第２の再溶解溶液に対して、各構成比に応じた物性の実験を行い、かつ、個別の構成要素ごとにその混合組成比率を異ならせながら、当該構成要素が組成物全体の物性に及ぼす影響について実験を行った。
表１０は、本発明の第１の実施形態において、第２の再溶解溶液を用いた再溶解過程に関連して、各構成の混合割合を固定した状態で、エタノール水溶液に対してのみその混合割合を異ならせながら、組成物全体の物性を知るためのものである。
表１１は、本発明の第１の実施形態において、第２の再溶解溶液を用いた再溶解過程に関連して、各構成の混合割合を固定した状態で、ＥＤＴＡに対してのみその混合割合を異ならせて設定した実験条件を示すものである。
表１２は、本発明の第１の実施形態において、第２の再溶解溶液を用いた再溶解過程に関連して、各構成の混合割合を固定した状態で、２価アルコール類添加剤に対してのみその混合割合を異ならせて設定した実験条件を示すものである。
表１０～表１２において、実施例（Ａ１０～Ａ１２、Ｂ１０～Ｂ１２、Ｃ１０～Ｃ１２）では、バイアル１０から検体を取り出す過程（例えば、再溶解）においてこれといった不都合がなかった。それに対し、比較例（ａ１０～ａ１２、ｂ１０～ｂ１２）では、バイアル１０から検体を取り出す過程（例えば、再溶解）において不都合（例えば、検体の変形）が生じた。
図５は、本発明の第２の実施形態に係るアルコール系溶液組成物のゼリー化を用いた細胞の検査過程を示す手順図である。
ステップ（Ｓ２１０）：まず、メタノール水溶液３０～６０重量部、ＥＤＴＡ ０．１～０．２重量部、コール酸０．０１～０．０５重量部、１Ｎの酢酸水溶液０．０５～０．１重量部を含む第１の溶液と、エタノール水溶液４０～５０重量部、ＥＤＴＡ ０．１～０．２重量部、２価アルコール類添加剤０．２～１重量部を含む第２の溶液とのうちのどちらか一方の溶液（以下、「選択溶液」と称する。）を選び、その後、その選択溶液をバイアル１０に投入する。
ステップ（Ｓ２１０）：まず、メタノール水溶液３０～６０重量部、ＥＤＴＡ ０．１～０．２重量部、コール酸０．０１～０．０５重量部、１Ｎの酢酸水溶液０．０５～０．１重量部を含む第１の溶液と、エタノール水溶液４０～５０重量部、ＥＤＴＡ ０．１～０．２重量部、２価アルコール類添加剤０．２～１重量部を含む第２の溶液とのうちのどちらか一方の溶液（以下、「選択溶液」と称する。）を選び、その後、その選択溶液をバイアル１０に投入する。
ステップ（Ｓ２２０）：次いで、バイアル１０の内側に検体を投入する。そのとき、バイアル１０は、刷毛先を完全に収められるほどのサイズに作製されることが好ましい。
ステップ（Ｓ２３０）：そして、ゼラチンと光硬化性タンパク質のうち少なくとも１つの物質５～２０重量部、セルロース天然高分子物質１～１００重量部、アクリルビーズ合成高分子物質１～１００重量部のうちのいずれか一種の物質（以下、「選択物質」と称する。）を選ぶ。
ステップ（Ｓ２３０）：そして、ゼラチンと光硬化性タンパク質のうち少なくとも１つの物質５～２０重量部、セルロース天然高分子物質１～１００重量部、アクリルビーズ合成高分子物質１～１００重量部のうちのいずれか一種の物質（以下、「選択物質」と称する。）を選ぶ。
次いで、バイアル１０周辺の温度を１～４０℃の温度に維持する状態で、検体が投入された状態のバイアル１０の内側に選択物質を投入してアルコール系ゼリー化物質としてゼリー化する。
そのとき、バイアル１０周辺の温度が１℃未満と低すぎる場合、ゼラチン、光硬化性タンパク質、セルロース天然高分子物質、アクリルビーズ合成高分子はバイアル１０内において溶解されないため、ゲル化もしくはゼリー化が不十分になる。
また、バイアル１０周辺の温度が４０℃を超えて高すぎる場合、沸点の低いアルコール系成分が蒸発されるため、組成物全体の物性変化を招いて細胞固定手段の検体固定能が強過ぎるか、あるいは弱すぎることになる。
それから、検体が投入された状態のバイアル１０を人間ドック・健診センターまで搬送する。その搬送の過程において、そのゼリー化の状態が液状に変換されてしまう現象を防ぐためには、バイアル１０を常温以下の低温の状態に維持する必要がある。
検体が投入された状態のバイアル１０が搬送されれば、人間ドック・健診センターにおいては、そのバイアル１０から検体を取り出して細胞の検査を行わなければならない。そのとき、バイアル１０から検体を変形なしに安全に取り出すためには、バイアル１０内の細胞固定手段を液状に再変換せねばならない。
ステップ（Ｓ２４０、Ｓ２５０）：バイアル１０内のゼリー化済みのアルコール系ゼリー化物質を再溶解溶液に投入し、次いでその再溶解溶液を１～４０℃の温度に維持してアルコール系ゼリー化物質を液状に再溶解してもよい。
そのとき、ゼリー化物質と検体を収めているバイアル１０を、図３のように、再溶解攪拌器３０の仕掛け物に据え置きした状態で、そのバイアル１０の内部に再溶解溶液を投下する実施形態が採用可能である。なお、再溶解攪拌器３０とは別途に、そのバイアル１０を再溶解溶液に入れる実施形態もまた採用可能である。
一方、本発明の第２の実施形態において、再溶解溶液は、メタノール水溶液３０～６０重量部、ＥＤＴＡ ０．１～０．２重量部、コール酸０．０１～０．０５重量部、１Ｎの酢酸水溶液０．０５～０．１重量部を含んでいてもよい。
また、本発明の第２の実施形態において、再溶解溶液は、エタノール水溶液４０～５０重量部、ＥＤＴＡ ０．１～０．２重量部、２価アルコール類添加剤０．２～１重量部を含んでいてもよい。
ステップ（Ｓ２６０）：図３のように、バイアル１０内の物質を液状に再変換した後には、別途の装備（図示せず）を介してバイアル１０内の検体を取り出して細胞の検査を行ってもよい。
本発明の第２の実施形態においては、選択溶液がメタノール水溶液３０～６０重量部、ＥＤＴＡ ０．１～０．２重量部、コール酸０．０１～０．０５重量部、１Ｎの酢酸水溶液０．０５～０．１重量部を含む第１の溶液と、エタノール水溶液４０～５０重量部、ＥＤＴＡ ０．１～０．２重量部、２価アルコール類添加剤０．２～１重量部を含む第２の溶液とのうちから選ばれる。なお、選択物質は、ゼラチンと光硬化性タンパク質のうち少なくとも１つの物質５～２０重量部、セルロース天然高分子物質１～１００重量部、アクリルビーズ合成高分子物質１～１００重量部のうちから選ばれる。
このような本発明の第２の実施形態に対して、各構成比に応じた物性に対して実験を行った。その際に、個別の構成要素ごとにその混合組成比率を異ならせながら、当該構成要素が組成物全体の物性に及ぼす影響について実験を行った。
表１３は、本発明の第２の実施形態に対する各構成の混合割合を固定した状態で、エタノール水溶液に対してのみその混合割合を異ならせて設定した実験条件を示すものである。
表１４は、本発明の第２の実施形態に対する各構成の混合割合を固定した状態で、ＥＤＴＡに対してのみその混合割合を異ならせて設定した実験条件を示すものである。
表１５は、本発明の第２の実施形態に対する各構成の混合割合を固定した状態で、２価アルコール類添加剤に対してのみその混合割合を異ならせて設定した実験条件を示すものである。
表１６は、本発明の第２の実施形態に対する各構成の混合割合を固定した状態で、ゼラチンに対してのみその混合割合を異ならせて設定した実験条件を示すものである。
表１３～表１６において、実施例（Ａ１３～Ａ１６、Ｂ１３～Ｂ１６、Ｃ１３～Ｃ１６）では、ゼリー化済みの細胞固定手段の固定能が良好であった。それに対し、比較例（ａ１３～ａ１６、ｂ１３～ｂ１６）では、バイアル１０の内側に検体を固定する能力が強すぎるか、あるいは、弱すぎた。それにより、比較例においては、バイアル１０から検体を取り出す過程（例えば、再溶解）において不都合（例えば、検体の変形）が生じた。
本発明の第２の実施形態に関連して、表１３～表１６の場合よりもさらに多くの実験が行われたが、説明のしやすさのために省略した。
一方、本発明の第２の実施形態において、ゼラチンと光硬化性タンパク質のうちの少なくとも１つの物質５～２０重量部に対しては、セルロース天然高分子（例えば、ｍｅｃｅｌｌｏｓｅ、ｈｅｃｅｌｌｏｓｅ）１～１００重量部またはアクリルビーズ合成高分子（例えば、ｍｅｔｈｙｌ ｍｅｔｈａｃｒｙｌａｔｅ－ｃｏ－ｅｔｈｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ ｄｉｍｅｔｈａｃｒｙｌａｔｅ；ＭＭＡ）１～１００重量部に置き換えてもよい。
一方、本発明の第２の実施形態において、ゼラチンと光硬化性タンパク質のうちの少なくとも１つの物質５～２０重量部に対しては、セルロース天然高分子（例えば、ｍｅｃｅｌｌｏｓｅ、ｈｅｃｅｌｌｏｓｅ）１～１００重量部またはアクリルビーズ合成高分子（例えば、ｍｅｔｈｙｌ ｍｅｔｈａｃｒｙｌａｔｅ－ｃｏ－ｅｔｈｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ ｄｉｍｅｔｈａｃｒｙｌａｔｅ；ＭＭＡ）１～１００重量部に置き換えてもよい。
ここで、セルロース天然高分子に対しても、残りの構成の混合割合を固定した状態で、１重量部の未満範囲と１００重量部の超え範囲を比較例として実験を行ったところ、１～１００重量部から外れている領域においては、バイアル１０の内側において検体を固定する能力が良好ではなかった。
そして、アクリルビーズ合成高分子に対しても、残りの構成の混合割合を固定した状態で、１重量部の未満範囲と１００重量部の超え範囲を比較例として実験を行ったところ、１～１００重量部から外れている領域においては、バイアル１０の内側において検体を固定する能力が良好ではなかった。
一方、本発明の第２の実施形態において、ステップ（Ｓ２４０）に用いられる再溶解溶液は、メタノール水溶液３０～６０重量部、ＥＤＴＡ ０．１～０．２重量部、コール酸０．０１～０．０５重量部、１Ｎの酢酸水溶液０．０５～０．１重量部を含んでいてもよい（以下、「第３の再溶解溶液」と称する。）。
本発明の第２の実施形態では、このような第３の再溶解溶液に対して、各構成比に応じた物性の実験を行い、かつ、個別の構成要素ごとにその混合組成比率を異ならせながら、当該構成要素が組成物全体の物性に及ぼす影響について実験を行った。
表１７は、本発明の第２の実施形態において、第３の再溶解溶液を用いた再溶解過程に関連して、各構成の混合割合を固定した状態で、メタノール水溶液に対してのみその混合割合を異ならせて設定した実験条件を示すものである。
表１８は、本発明の第２の実施形態において、第３の再溶解溶液を用いた再溶解過程に関連して、各構成の混合割合を固定した状態で、ＥＤＴＡに対してのみその混合割合を異ならせて設定した実験条件を示すものである。
表１９は、本発明の第２の実施形態において、第３の再溶解溶液を用いた再溶解過程に関連して、各構成の混合割合を固定した状態で、コール酸に対してのみその混合割合を異ならせて設定した実験条件を示すものである。
表２０は、本発明の第２の実施形態において、第３の再溶解溶液を用いた再溶解過程に関連して、各構成の混合割合を固定した状態で、１Ｎの酢酸水溶液に対してのみその混合割合を異ならせて設定した実験条件を示すものである。
そのとき、表１７～表２０において、実施例（Ａ１７～Ａ２０、Ｂ１７～Ｂ２０、Ｃ１７～Ｃ２０）では、バイアル１０から検体を取り出す過程（例えば、再溶解）においてこれといった不都合がなかった。それに対し、比較例（ａ１７～ａ２０、ｂ１７～ｂ２０）では、バイアル１０から検体を取り出す過程（例えば、再溶解）において不都合（例えば、検体の変形）が生じた。
他方で、本発明の第２の実施形態において、再溶解溶液は、エタノール水溶液４０～５０重量部、ＥＤＴＡ ０．１～０．２重量部、２価アルコール類添加剤０．２～１重量部を含んでいてもよい（以下、「第４の再溶解溶液」と称する。）。
本発明の第２の実施形態では、このような第４の再溶解溶液に対して、各構成比に応じた物性の実験を行い、かつ、個別の構成要素ごとにその混合組成比率を異ならせながら、当該構成要素が組成物全体の物性に及ぼす影響について実験を行った。
表２１は、本発明の第２の実施形態において、第４の再溶解溶液を用いた再溶解過程に関連して、各構成の混合割合を固定した状態で、エタノール水溶液に対してのみその混合割合を異ならせて設定した実験条件を示すものである。
表２２は、本発明の第２の実施形態において、第４の再溶解溶液を用いた再溶解過程に関連して、各構成の混合割合を固定した状態で、ＥＤＴＡに対してのみその混合割合を異ならせて設定した実験条件を示すものである。
表２３は、本発明の第２の実施形態において、第４の再溶解溶液を用いた再溶解過程に関連して、各構成の混合割合を固定した状態で、２価アルコール類添加剤に対してのみその混合割合を異ならせて設定した実験条件を示すものである。
表２１～表２３において、実施例（Ａ２１～Ａ２３、Ｂ２１～Ｂ２３、Ｃ２１～Ｃ２３）では、バイアル１０から検体を取り出す過程（例えば、再溶解）においてこれといった不都合がなかった。それに対し、比較例（ａ２１～ａ２３、ｂ２１～ｂ２３）では、バイアル１０から検体を取り出す過程（例えば、再溶解）において不都合（例えば、検体の変形）が生じた。
Claims (4)
- （ａ）メタノール水溶液３０～６０重量部、ＥＤＴＡ ０．１～０．２重量部、コール酸０．０１～０．０５重量部、１Ｎの酢酸水溶液０．０５～０．１重量部を含む第１の溶液と、エタノール水溶液４０～５０重量部、ＥＤＴＡ ０．１～０．２重量部、２価アルコール類添加剤０．２～１重量部を含む第２の溶液とのうちから選ばれたどちらか一方の溶液と、ゼラチンと光硬化性タンパク質のうち少なくとも１つの物質５～２０重量部、セルロース天然高分子物質１～１００重量部、アクリルビーズ合成高分子物質１～１００重量部のうちから選ばれた少なくとも１種の物質とを１～４０℃の温度下で混合してゼリー化済みのアルコール系ゼリー化物質を生成するステップと、
（ｂ）前記アルコール系ゼリー化物質が収められた密閉容器の内側に採取済みの検体を投入するステップと、
（ｃ）メタノール水溶液３０～６０重量部、ＥＤＴＡ ０．１～０．２重量部、コール酸０．０１～０．０５重量部、１Ｎの酢酸水溶液０．０５～０．１重量部を含む再溶解溶液を生成するステップと、
（ｄ）前記密閉容器内の前記ゼリー化済みのアルコール系ゼリー化物質を前記再溶解溶液に投入するステップと、
（ｅ）前記再溶解溶液を１～４０℃の温度に維持して前記アルコール系ゼリー化物質を液状に再溶解するステップと、
（ｆ）前記再溶解を経た状態のアルコール系ゼリー化物質から前記検体を取得して検査するステップと、
を含んでなる、アルコール系溶液組成物のゼリー化を用いた細胞の検査方法。 - （ａ）メタノール水溶液３０～６０重量部、ＥＤＴＡ ０．１～０．２重量部、コール酸０．０１～０．０５重量部、１Ｎの酢酸水溶液０．０５～０．１重量部を含む第１の溶液と、エタノール水溶液４０～５０重量部、ＥＤＴＡ ０．１～０．２重量部、２価アルコール類添加剤０．２～１重量部を含む第２の溶液とのうちから選ばれたどちらか一方の溶液（以下、「選択溶液」と称する。）を密閉容器に投入するステップと、
（ｂ）前記選択溶液が充填された状態の前記密閉容器の内側に検体を投入するステップと、
（ｃ）１～４０℃の温度において、ゼラチンと光硬化性タンパク質のうち少なくとも１つの物質５～２０重量部、セルロース天然高分子物質１～１００重量部、アクリルビーズ合成高分子物質１～１００重量部のうちから選ばれた少なくとも１種の物質を前記選択溶液と検体が投入された状態の前記密閉容器の内側に投入してアルコール系ゼリー化物質としてゼリー化するステップと、
（ｄ）メタノール水溶液３０～６０重量部、ＥＤＴＡ ０．１～０．２重量部、コール酸０．０１～０．０５重量部、１Ｎの酢酸水溶液０．０５～０．１重量部を含む再溶解溶液を生成するステップと、
（ｅ）前記密閉容器内の前記ゼリー化済みのアルコール系ゼリー化物質を前記再溶解溶液に投入するステップと、
（ｆ）前記再溶解溶液を１～４０℃の温度に維持して前記ゼリー化済みのアルコール系ゼリー化物質を液状物質に再溶解するステップと、
（ｇ）前記再溶解を経た状態の前記液状物質から前記検体を取得して検査するステップと、
を含んでなる、アルコール系溶液組成物のゼリー化を用いた細胞の検査方法。 - （ａ）メタノール水溶液３０～６０重量部、ＥＤＴＡ ０．１～０．２重量部、コール酸０．０１～０．０５重量部、１Ｎの酢酸水溶液０．０５～０．１重量部を含む第１の溶液と、エタノール水溶液４０～５０重量部、ＥＤＴＡ ０．１～０．２重量部、２価アルコール類添加剤０．２～１重量部を含む第２の溶液とのうちから選ばれたどちらか一方の溶液と、ゼラチンと光硬化性タンパク質のうち少なくとも１つの物質５～２０重量部、セルロース天然高分子物質１～１００重量部、アクリルビーズ合成高分子物質１～１００重量部のうちから選ばれた少なくとも１種の物質とを１～４０℃の温度下で混合してゼリー化済みのアルコール系ゼリー化物質を生成するステップと、
（ｂ）前記アルコール系ゼリー化物質が収められた密閉容器の内側に採取済みの検体を投入するステップと、
（ｃ）エタノール水溶液４０～５０重量部、ＥＤＴＡ ０．１～０．２重量部、２価アルコール類添加剤０．２～１重量部を含む再溶解溶液を生成するステップと、
（ｄ）前記密閉容器内の前記ゼリー化済みのアルコール系ゼリー化物質を前記再溶解溶液に投入するステップと、
（ｅ）前記再溶解溶液を１～４０℃の温度に維持して前記アルコール系ゼリー化物質を液状に再溶解するステップと、
（ｆ）前記再溶解を経た状態のアルコール系ゼリー化物質から前記検体を取得して検査するステップと、
を含んでなる、アルコール系溶液組成物のゼリー化を用いた細胞の検査方法。 - （ａ）メタノール水溶液３０～６０重量部、ＥＤＴＡ ０．１～０．２重量部、コール酸０．０１～０．０５重量部、１Ｎの酢酸水溶液０．０５～０．１重量部を含む第１の溶液と、エタノール水溶液４０～５０重量部、ＥＤＴＡ ０．１～０．２重量部、２価アルコール類添加剤０．２～１重量部を含む第２の溶液とのうちから選ばれたどちらか一方の溶液（以下、「選択溶液」と称する。）を密閉容器に投入するステップと、
（ｂ）前記選択溶液が充填された状態の前記密閉容器の内側に検体を投入するステップと、
（ｃ）１～４０℃の温度において、ゼラチンと光硬化性タンパク質のうち少なくとも１つの物質５～２０重量部、セルロース天然高分子物質１～１００重量部、アクリルビーズ合成高分子物質１～１００重量部のうちから選ばれた少なくとも１種の物質を前記選択溶液と検体が投入された状態の前記密閉容器の内側に投入してアルコール系ゼリー化物質としてゼリー化するステップと、
（ｄ）エタノール水溶液４０～５０重量部、ＥＤＴＡ ０．１～０．２重量部、２価アルコール類添加剤０．２～１重量部を含む再溶解溶液を生成するステップと、
（ｅ）前記密閉容器内の前記ゼリー化済みのアルコール系ゼリー化物質を前記再溶解溶液に投入するステップと、
（ｆ）前記再溶解溶液を１～４０℃の温度に維持して前記ゼリー化済みのアルコール系ゼリー化物質を液状物質に再溶解するステップと、
（ｇ）前記再溶解を経た状態の前記液状物質から前記検体を取得して検査するステップと、
を含んでなる、アルコール系溶液組成物のゼリー化を用いた細胞の検査方法。
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