JP7282899B2 - 線維芽細胞成長因子21変異体、その融合タンパク質とその使用 - Google Patents
線維芽細胞成長因子21変異体、その融合タンパク質とその使用 Download PDFInfo
- Publication number
- JP7282899B2 JP7282899B2 JP2021544582A JP2021544582A JP7282899B2 JP 7282899 B2 JP7282899 B2 JP 7282899B2 JP 2021544582 A JP2021544582 A JP 2021544582A JP 2021544582 A JP2021544582 A JP 2021544582A JP 7282899 B2 JP7282899 B2 JP 7282899B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- fusion protein
- expression construct
- variant
- growth factor
- acid sequence
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 title claims description 50
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 title claims description 49
- 102000003973 Fibroblast growth factor 21 Human genes 0.000 title claims description 38
- 108090000376 Fibroblast growth factor 21 Proteins 0.000 title claims description 38
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 44
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 40
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 29
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 15
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 15
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 12
- DTHNMHAUYICORS-KTKZVXAJSA-N Glucagon-like peptide 1 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC=1N=CNC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C(C)C)C1=CC=CC=C1 DTHNMHAUYICORS-KTKZVXAJSA-N 0.000 claims description 11
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 11
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims description 10
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 9
- 208000031226 Hyperlipidaemia Diseases 0.000 claims description 7
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 claims description 7
- 208000008589 Obesity Diseases 0.000 claims description 6
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims description 6
- 230000004927 fusion Effects 0.000 claims description 6
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 claims description 6
- 235000020824 obesity Nutrition 0.000 claims description 6
- 230000009465 prokaryotic expression Effects 0.000 claims description 6
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 5
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 claims description 4
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 claims description 4
- 238000010367 cloning Methods 0.000 claims description 3
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 claims description 3
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims description 2
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 claims description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 2
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 claims description 2
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 claims description 2
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 claims description 2
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 5
- 102100025101 GATA-type zinc finger protein 1 Human genes 0.000 claims 1
- 101710198884 GATA-type zinc finger protein 1 Proteins 0.000 claims 1
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 claims 1
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 claims 1
- 102000018071 Immunoglobulin Fc Fragments Human genes 0.000 claims 1
- 108010091135 Immunoglobulin Fc Fragments Proteins 0.000 claims 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 34
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 29
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 26
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 15
- 102100036009 5'-AMP-activated protein kinase catalytic subunit alpha-2 Human genes 0.000 description 11
- 101000783681 Homo sapiens 5'-AMP-activated protein kinase catalytic subunit alpha-2 Proteins 0.000 description 11
- 102100040918 Pro-glucagon Human genes 0.000 description 11
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 10
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 10
- 101800000224 Glucagon-like peptide 1 Proteins 0.000 description 9
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 9
- UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N triformin Chemical compound O=COCC(OC=O)COC=O UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 8
- 102100020683 Beta-klotho Human genes 0.000 description 7
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 7
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 6
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 6
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 6
- 101710104526 Beta-klotho Proteins 0.000 description 5
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 5
- 108010007622 LDL Lipoproteins Proteins 0.000 description 5
- 102000007330 LDL Lipoproteins Human genes 0.000 description 5
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- 235000012631 food intake Nutrition 0.000 description 5
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 5
- 101100346152 Drosophila melanogaster modSP gene Proteins 0.000 description 4
- 101150013552 LDLR gene Proteins 0.000 description 4
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 4
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 4
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 4
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 4
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 4
- 229960005175 dulaglutide Drugs 0.000 description 4
- 108010005794 dulaglutide Proteins 0.000 description 4
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 4
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 4
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 4
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 4
- 108091008794 FGF receptors Proteins 0.000 description 3
- 102000018233 Fibroblast Growth Factor Human genes 0.000 description 3
- 108050007372 Fibroblast Growth Factor Proteins 0.000 description 3
- 102000044168 Fibroblast Growth Factor Receptor Human genes 0.000 description 3
- 102000007446 Glucagon-Like Peptide-1 Receptor Human genes 0.000 description 3
- 108010086246 Glucagon-Like Peptide-1 Receptor Proteins 0.000 description 3
- 108010028554 LDL Cholesterol Proteins 0.000 description 3
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 3
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 3
- 230000037149 energy metabolism Effects 0.000 description 3
- 229940126864 fibroblast growth factor Drugs 0.000 description 3
- 230000037406 food intake Effects 0.000 description 3
- 208000030159 metabolic disease Diseases 0.000 description 3
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 3
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 208000001072 type 2 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 3
- 229940089838 Glucagon-like peptide 1 receptor agonist Drugs 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- 108091016366 Histone-lysine N-methyltransferase EHMT1 Proteins 0.000 description 2
- 101000846529 Homo sapiens Fibroblast growth factor 21 Proteins 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 108010021466 Mutant Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000008300 Mutant Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010076504 Protein Sorting Signals Chemical group 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 2
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229910000397 disodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000019800 disodium phosphate Nutrition 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 235000009200 high fat diet Nutrition 0.000 description 2
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 2
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 2
- 102000056713 human FGF21 Human genes 0.000 description 2
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 2
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 2
- 235000019799 monosodium phosphate Nutrition 0.000 description 2
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 2
- YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N phenylmethanesulfonyl fluoride Chemical compound FS(=O)(=O)CC1=CC=CC=C1 YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 2
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 2
- AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M sodium dihydrogen phosphate Chemical compound [Na+].OP(O)([O-])=O AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 235000019786 weight gain Nutrition 0.000 description 2
- HVCOBJNICQPDBP-UHFFFAOYSA-N 3-[3-[3,5-dihydroxy-6-methyl-4-(3,4,5-trihydroxy-6-methyloxan-2-yl)oxyoxan-2-yl]oxydecanoyloxy]decanoic acid;hydrate Chemical compound O.OC1C(OC(CC(=O)OC(CCCCCCC)CC(O)=O)CCCCCCC)OC(C)C(O)C1OC1C(O)C(O)C(O)C(C)O1 HVCOBJNICQPDBP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- 241000702421 Dependoparvovirus Species 0.000 description 1
- 108010011459 Exenatide Proteins 0.000 description 1
- 208000004930 Fatty Liver Diseases 0.000 description 1
- 102000003688 G-Protein-Coupled Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108090000045 G-Protein-Coupled Receptors Proteins 0.000 description 1
- 108060003199 Glucagon Proteins 0.000 description 1
- 101800004295 Glucagon-like peptide 1(7-36) Proteins 0.000 description 1
- 102400000325 Glucagon-like peptide 1(7-36) Human genes 0.000 description 1
- 101800004266 Glucagon-like peptide 1(7-37) Proteins 0.000 description 1
- 102400000324 Glucagon-like peptide 1(7-37) Human genes 0.000 description 1
- 229930186217 Glycolipid Natural products 0.000 description 1
- 101710088172 HTH-type transcriptional regulator RipA Proteins 0.000 description 1
- 206010019708 Hepatic steatosis Diseases 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101000684208 Homo sapiens Prolyl endopeptidase FAP Proteins 0.000 description 1
- 206010022489 Insulin Resistance Diseases 0.000 description 1
- 102000015834 Klotho Human genes 0.000 description 1
- 108050004036 Klotho Proteins 0.000 description 1
- 108010019598 Liraglutide Proteins 0.000 description 1
- YSDQQAXHVYUZIW-QCIJIYAXSA-N Liraglutide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCNC(=O)CC[C@H](NC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC=1NC=NC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C(C)C)C1=CC=C(O)C=C1 YSDQQAXHVYUZIW-QCIJIYAXSA-N 0.000 description 1
- 239000012515 MabSelect SuRe Substances 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 101100280998 Mus musculus Fgf21 gene Proteins 0.000 description 1
- 102100031455 NAD-dependent protein deacetylase sirtuin-1 Human genes 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- 102000004022 Protein-Tyrosine Kinases Human genes 0.000 description 1
- 108090000412 Protein-Tyrosine Kinases Proteins 0.000 description 1
- 108700008625 Reporter Genes Proteins 0.000 description 1
- 108010041191 Sirtuin 1 Proteins 0.000 description 1
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 230000036528 appetite Effects 0.000 description 1
- 235000019789 appetite Nutrition 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 229960000074 biopharmaceutical Drugs 0.000 description 1
- 210000005252 bulbus oculi Anatomy 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 235000019577 caloric intake Nutrition 0.000 description 1
- 230000005754 cellular signaling Effects 0.000 description 1
- 208000026106 cerebrovascular disease Diseases 0.000 description 1
- JUFFVKRROAPVBI-PVOYSMBESA-N chembl1210015 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(=O)N[C@H]1[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO[C@]3(O[C@@H](C[C@H](O)[C@H](O)CO)[C@H](NC(C)=O)[C@@H](O)C3)C(O)=O)O2)O)[C@@H](CO)O1)NC(C)=O)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CO)C(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CC=1NC=NC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C(C)C)C1=CC=CC=C1 JUFFVKRROAPVBI-PVOYSMBESA-N 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 1
- 229940069078 citric acid / sodium citrate Drugs 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000002526 effect on cardiovascular system Effects 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 239000006167 equilibration buffer Substances 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 229960001519 exenatide Drugs 0.000 description 1
- 208000010706 fatty liver disease Diseases 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 230000006377 glucose transport Effects 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000001421 hyperglycemia Diseases 0.000 description 1
- 238000003119 immunoblot Methods 0.000 description 1
- 239000000859 incretin Substances 0.000 description 1
- MGXWVYUBJRZYPE-YUGYIWNOSA-N incretin Chemical class C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC(O)=CC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 MGXWVYUBJRZYPE-YUGYIWNOSA-N 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000037356 lipid metabolism Effects 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 229960002701 liraglutide Drugs 0.000 description 1
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 239000002547 new drug Substances 0.000 description 1
- 208000008338 non-alcoholic fatty liver disease Diseases 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 210000004923 pancreatic tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000035479 physiological effects, processes and functions Effects 0.000 description 1
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- GCYXWQUSHADNBF-AAEALURTSA-N preproglucagon 78-108 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC=1N=CNC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C(C)C)C1=CC=CC=C1 GCYXWQUSHADNBF-AAEALURTSA-N 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 239000012521 purified sample Substances 0.000 description 1
- 238000010814 radioimmunoprecipitation assay Methods 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 1
- 230000000276 sedentary effect Effects 0.000 description 1
- 231100000240 steatosis hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 102000027257 transmembrane receptors Human genes 0.000 description 1
- 108091008578 transmembrane receptors Proteins 0.000 description 1
- 150000003626 triacylglycerols Chemical class 0.000 description 1
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 1
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 1
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 1
- 230000004584 weight gain Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/18—Growth factors; Growth regulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/18—Growth factors; Growth regulators
- A61K38/1825—Fibroblast growth factor [FGF]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/06—Antihyperlipidemics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
- A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/475—Growth factors; Growth regulators
- C07K14/50—Fibroblast growth factor [FGF]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K19/00—Hybrid peptides, i.e. peptides covalently bound to nucleic acids, or non-covalently bound protein-protein complexes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/62—DNA sequences coding for fusion proteins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/10—Cells modified by introduction of foreign genetic material
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2217/00—Genetically modified animals
- A01K2217/07—Animals genetically altered by homologous recombination
- A01K2217/075—Animals genetically altered by homologous recombination inducing loss of function, i.e. knock out
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2227/00—Animals characterised by species
- A01K2227/10—Mammal
- A01K2227/105—Murine
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Obesity (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Child & Adolescent Psychology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
Description
本発明はバイオ医薬品の分野に属する。具体的には、本発明は、線維芽細胞成長因子21変異体に関する。更具体的には、本発明はまた、線維芽細胞成長因子21変異体、GLP-1変異体とFC配列が含まれる融合タンパク質とその使用に関する。
〔背景技術〕
現代人の長期の座りがちな生活と過剰なカロリー摂取は、肥満、非アルコール性脂肪肝と2型糖尿病の世界的な蔓延を悪化させている。エネルギー代謝におけるこれらの欠陥は、さらに深刻な心血管疾患、さらには腫瘍を引き起こす可能性がある。現在、肥満やそれに関連する合併症の効果的な治療法は限られており、副作用が少なく、エネルギー代謝の不均衡を是正できる新薬を見つけることが急務となっている。
〔発明の概要〕
そこで、本発明の目的は、先行技術の欠点を考慮して、GLP-1およびFGF21活性の両方を有する融合タンパク質を提供することであり、本発明はまた、タンパク質の調製方法およびその使用を提供する。本発明によって提供されるタンパク質は、肥満、高脂血症、糖尿病、ならびに心血管および脳血管疾患を含む代謝性疾患の治療または予防に使用される。従来技術と比較して、本発明によって提供される融合タンパク質は、高い活性、長い半減期、新しい構造を有し、血糖、血中脂肪、体重を有意に減少させ、脂肪代謝を改善することができる。
一般式I
DSSPLLQFGGQVRQX15YLYTDDAQQTEAHLEIREDGTVGGAADQSPESLLQLKALKPGVIQILGVKTSRFLCQRPDGALYGSLHFDPEACSFREX94LLEDGYNVYQSEAHGLPLHX114PGNKSPHRDPAPRGPX130RFLPLPGLPPALPEPPGILAPQPPDVGSSDPLSMVGGSQGRSPSYX176S
ここで、X15がArgまたはValであり、X94がLeuまたはArgであり、X114がLeuまたはCysであり、X130がAlaまたはCysであり、X176がAlaまたはGluであり、
さらに、X94とX114の1つだけのサイトがLeuであり、X130とX176の多くても1つのサイトがAlaであり、
好ましくは、そのアミノ酸配列が配列番号1~4のいずれか1つに示される。
好ましくは、FCは、IgG4FCフラグメントを表す。より好ましくは、前記FCは、配列番号17で示されるアミノ酸配列を含む。
4)工程3)で発現したタンパク質を精製する。
DSSPLLQFGGQVRQRYLYTDDAQQTEAHLEIREDGTVGGAADQSPESLLQLKALKPGVIQILGVKTSRFLCQRPDGALYGSLHFDPEACSFRELLLEDGYNVYQSEAHGLPLHCPGNKSPHRDPAPRGPCRFLPLPGLPPALPEPPGILAPQPPDVGSSDPLSMVGGSQGRSPSYAS
Fv3配列番号2
DSSPLLQFGGQVRQVYLYTDDAQQTEAHLEIREDGTVGGAADQSPESLLQLKALKPGVIQILGVKTSRFLCQRPDGALYGSLHFDPEACSFRELLLEDGYNVYQSEAHGLPLHCPGNKSPHRDPAPRGPCRFLPLPGLPPALPEPPGILAPQPPDVGSSDPLSMVGGSQGRSPSYAS
Fv4配列番号3
DSSPLLQFGGQVRQVYLYTDDAQQTEAHLEIREDGTVGGAADQSPESLLQLKALKPGVIQILGVKTSRFLCQRPDGALYGSLHFDPEACSFRERLLEDGYNVYQSEAHGLPLHLPGNKSPHRDPAPRGPARFLPLPGLPPALPEPPGILAPQPPDVGSSDPLSMVGGSQGRSPSYES
Fv5配列番号4
DSSPLLQFGGQVRQVYLYTDDAQQTEAHLEIREDGTVGGAADQSPESLLQLKALKPGVIQILGVKTSRFLCQRPDGALYGSLHFDPEACSFRELLLEDGYNVYQSEAHGLPLHCPGNKSPHRDPAPRGPCRFLPLPGLPPALPEPPGILAPQPPDVGSSDPLSMVGGSQGRSPSYES
本発明のヒト化FGF21の変異体(FGF21v)Fv2、Fv3、Fv4とFv5のヌクレオチド配列が配列番号20、21、22と23に示される通りである。
本発明の実施形態では、低密度リポタンパク質欠損マウスの正常なマウスグルコース負荷モデルを用いて、陽性対照薬としてデュラグルチドを使用して、本発明の融合タンパク質の活性を評価した。結果は、本発明の融合タンパク質が高脂血症の治療に対して良好な治療効果を有し、そしてその利点がより明白であることを示している。
〔図面の簡単な説明〕
以下、本発明の実施形態について、添付の図面を参照して詳細に説明する。
〔発明を実施するための形態〕
以下、本発明は、好ましい実施形態および実施例を通じてさらに詳細に説明される。これらの説明を通じて、本発明の特徴および利点がより明確になるであろう。
前記融合タンパク質は、本発明の従来の技術的手段を使用して調製され、具体的には、以下の工程を含む。pcDNA3.4-TOPO TA cloning kit(Invitech(Shanghai)Trading Co., Ltd.ら購入)を用いて融合タンパク質を含むpcDNA3.4プラスミドを構築し、プラスミドマップが図1に示される。該プラスミドを使用してExpiCHO-S細胞をトランスフェクトし、ExpiCHO発現システム(Invitech(Shanghai)Trading Co., Ltd.ら購入)によりタンパク質を発現させた。
そのヌクレオチド配列が配列番号15に示されている。
実施例2 HepG2細胞のAMPKシグナル経路に対する本発明の融合タンパク質の影響
10%FBSを含むDMEM培地でHepG2細胞(軍事医学科学院より贈与)を90%を超えるコンフルエンシーまで培養し、細胞を消化して再懸濁し、ウェルあたり2.5×105個の細胞を6ウェルプレートに接種し、10%FBSを含む2mLのDMEM培地を各ウェルに加え、37°C、5%CO2飽和湿度で70%-80%飽和まで一晩インキュベートした。元の培地は廃棄され、新しい予熱された無血清DMEM培地と交換された。6時間培養した後、100nM精製された野生型融合タンパク質G-L-Fc-L-F(GF)と4種類の変異体G-L-Fc-L-Fv2(GFv2)、G-L-Fc-L-Fv3(GFv3)、G-L-Fc-L-Fv4(GFv4)、G-L-Fc-L-Fv5(GFv5)を添加し、細胞を24時間処理した後、培養上清を捨て、細胞を消化して収集し、予冷したPBSで細胞を1回洗浄し、1%PMSFを含むRIPA溶解バッファーで(Beijing Kangwei Century Biotechnology Co., Ltd. から購入)細胞を溶解して、取引書に従って総細胞タンパク質を抽出した。15μLの総タンパク質を採取して、イムノブロッティングにより細胞内の総AMPK(AMPKα抗体)とリン酸化AMPK(pAMPK、phospho-AMPKα(Thr172)抗体)(抗体はすべてCell Signaling Technologies社から購入)の発現レベルを検出した。
GLP1RとFGF21コレセプター(β-klotho)およびCRE-ルシフェラーゼ誘導性発現システムを発現するHEK293細胞(HEK293-GLP1R/β-klotho/CRE-ルシフェラーゼ)を、10%FBSを含むDMEM培地で90%を超えるコンフルエンシーまで培養し、細胞を消化して再懸濁し、ウェルあたり4×104個の細胞を96ウェルプレートに接種し、10%FBSを含む100mLのDMEM培地を各ウェルに加え、37°C、5%CO2飽和湿度で一晩インキュベートした。2日目に、異なる濃度勾配(0、0.001、0.01、0.1、1、10、100nM)の野生型融合タンパク質G-L-Fc-L-F(GF)と4種類の変異体G-L-Fc-L-Fv2(GFv2)、G-L-Fc-L-Fv3(GFv3)、G-L-Fc-L-Fv4(GFv4)、G-L-Fc-L-Fv5(GFv5)を加え、細胞を6~8時間処理した後、培養上清を廃棄し、PBSで細胞を2回洗浄し、取引書に従って細胞を溶解し、ルシフェラーゼの発現を検出した(単一のルシフェラーゼレポーター遺伝子検出キット、Beijing Yuanpinghao Biotechnology Co., Ltd. から購入)。Graphpad Prismソフトウェアを使用してデータを分析して、GFタンパク質のEC50値を表1に示している。結果から、4つの変異体のEC50値がすべて野生型融合タンパク質GFよりも低いことを示し、2つの受容体を同時に活性化するのにより効果的であることを示している。その中で、変異体GFv5のEC50値が最も小さく、その活性が最も高いことを示している。
4種類のGF変異体に基づいて、新しい構造融合タンパク質GGFv2、GGFv3、GGFv4、GGFv5を発現して構築する。
ここで、G-L-G-L-Fc-L-Fv3アミノ酸配列は配列番号25に示されている。
ここで、G-L-G-L-Fc-L-Fv4アミノ酸配列は配列番号26に示されている。
G-L-G-L-Fc-L-Fv5アミノ酸配列は配列番号18に示されている。
ここで、G-L-G-L-Fc-L-Fv2ヌクレオチド配列が配列番号27に示されている。G-L-G-L-Fc-L-Fv3ヌクレオチド配列が配列番号28に示されている。G-L-G-L-Fc-L-Fv4ヌクレオチド配列が配列番号29に示されている。G-L-G-L-Fc-L-Fv5ヌクレオチド配列が配列番号19に示されている。
4~8週齢の24匹の低密度リポタンパク質欠損マウス(Ldlr-/-マウス)(Jiangsu Jicui Yaokang Biotechnology Co., Ltd.から購入)に対して、高脂肪食(60%脂肪を含む、Beijing Boao Biological Technology Co., Ltd.から購入)で2週間飼育した後、高脂血症モデルマウスを作成した。マウスは、ランダムな体重に応じて4つのグループに分けられた:対照群(con、生理食塩水)、G群(デュラグルチド)、GFv5群(GFv5タンパク質)、GGFv5群(GGFv5タンパク質)、各グループに6匹のマウスであった。各群の投与方法は皮下注射であり、投与量は週2回20nmol/kgであった。毎週マウスのランダムな体重を量り、記録した。4週間の治療後、血清生化学的指標をテストした。マウスの眼球から採血し、3000rpmで10分間遠心分離して血清を分離し、サンプルは、Beijing North Biomedical Technology Co., Ltd.に送られ、トリグリセリド(TG)、総コレステロール(TG)、高密度リポタンパク質(HDL)、低密度リポタンパク質(LDL)インジケーターの検出を行った。
Claims (10)
- アミノ酸配列が配列番号1~4のいずれか1つで示されるものであることを特徴とするヒト化線維芽細胞成長因子21の変異体。
- 以下の一般式で示される融合タンパク質であって、
G-L-Fc-L-F、または
G-L-G-L-Fc-L-F;
ここで、Fは、請求項1に記載のヒト化線維芽細胞成長因子21の変異体を表し、
Gは、GLP-1変異体を表し、そのアミノ酸配列が配列番号5に示され、
Lは、リンカー配列を表し、
Fcは、ヒトの免疫グロブリンまたはヒトのアルブミンを表すことを特徴とする融合タンパク質。 - 前記Lの一般式が(GGGGS)nであり、ここで、nが3であり、
前記Fcは、IgG4のFcフラグメントを表し、前記Fcのアミノ酸配列は、配列番号17で示されるアミノ酸配列を含み、
アミノ酸配列が配列番号6~9、18または24~26のいずれか1つで示されるものであることを特徴とする請求項2に記載の融合タンパク質。 - 請求項1に記載のヒト化線維芽細胞成長因子21の変異体、または請求項2または3に記載の融合タンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む融合遺伝子であって、
前記線維芽細胞成長因子21の変異体をコードするヌクレオチド配列は、配列番号20~23のいずれか1つで示されるものであり、
前記融合タンパク質をコードするヌクレオチド配列は、配列番号10~13、19または27~29のいずれか1つで示されるものであることを特徴とする融合遺伝子。 - 請求項1に記載のヒト化線維芽細胞成長因子21の変異体、または請求項2または3に記載の融合タンパク質をコードするヌクレオチド配列を含むことを特徴とする発現コンストラクト。
- 前記発現コンストラクトは、原核生物の発現コンストラクトまたは真核生物の発現コンストラクトであり、
前記原核生物の発現コンストラクトがpETベクターシリーズであり、
前記真核生物の発現コンストラクトがプラスミドDNAベクター、組換えウィルスベクター、またはレトロウイルスベクターであることを特徴とする請求項5に記載の発現コンストラクト。 - 請求項5または6に記載の発現コンストラクトを含む宿主細胞であって、
前記発現コンストラクトが原核生物の発現コンストラクトである場合、前記宿主細胞は、細菌細胞であり、或いは
前記発現コンストラクトが真核生物の発現コンストラクトである場合、前記宿主細胞は、哺乳動物細胞であることを特徴とする宿主細胞。 - 請求項1に記載のヒト化線維芽細胞成長因子21の変異体または請求項2または3に記載の融合タンパク質を含む医薬組成物。
- 融合タンパク質を調製するための方法であって、請求項1に記載のヒト化線維芽細胞成長因子21の変異体、または請求項2または3に記載の融合タンパク質をコードするヌクレオチド配列を発現ベクターにクローニングする工程を含み、かつ、
以下の1)~3)の工程を含む方法:
1)請求項1に記載のヒト化線維芽細胞成長因子21の変異体或いは請求項2または3に記載の融合タンパク質をコードする核酸配列を構築する工程、
2)工程1)の核酸配列を含む発現ベクターを構築する工程、及び
3)工程2)の発現ベクターを宿主細胞のトランスフェクションまたは形質転換に用い、当該宿主細胞で前記核酸配列を発現させる工程、
ここで、工程3)における前記宿主細胞がCHO-S細胞である。 - 請求項1に記載のヒト化線維芽細胞成長因子21の変異体、または請求項2または3に記載の融合タンパク質、請求項4に記載の融合遺伝子、請求項5または6に記載の発現コンストラクト、請求項7に記載の宿主細胞または請求項8に記載の医薬組成物の、糖尿病、肥満、高血脂症および心血管疾患のための医薬の調製における使用。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201910093697.4 | 2019-01-30 | ||
CN201910093697.4A CN109836486B (zh) | 2019-01-30 | 2019-01-30 | 成纤维生长因子21变体、其融合蛋白及其用途 |
PCT/CN2019/120357 WO2020155807A1 (zh) | 2019-01-30 | 2019-11-22 | 成纤维生长因子21变体、其融合蛋白及其用途 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2022518850A JP2022518850A (ja) | 2022-03-16 |
JP7282899B2 true JP7282899B2 (ja) | 2023-05-29 |
Family
ID=66884429
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2021544582A Active JP7282899B2 (ja) | 2019-01-30 | 2019-11-22 | 線維芽細胞成長因子21変異体、その融合タンパク質とその使用 |
Country Status (4)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20220096598A1 (ja) |
JP (1) | JP7282899B2 (ja) |
CN (1) | CN109836486B (ja) |
WO (1) | WO2020155807A1 (ja) |
Families Citing this family (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN109836486B (zh) * | 2019-01-30 | 2020-09-08 | 北京双因生物科技有限公司 | 成纤维生长因子21变体、其融合蛋白及其用途 |
CN115322794A (zh) | 2020-01-11 | 2022-11-11 | 北京质肽生物医药科技有限公司 | Glp-1和fgf21的融合蛋白的缀合物 |
CN112516168B (zh) * | 2020-12-11 | 2022-07-26 | 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 | 用于干预应激性认知障碍的间充质干细胞 |
Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20100285131A1 (en) | 2009-05-05 | 2010-11-11 | Amgen Inc. | Fgf21 mutants and uses thereof |
JP2014530220A (ja) | 2011-10-04 | 2014-11-17 | イーライ リリー アンド カンパニー | 線維芽細胞増殖因子21変異体 |
JP2016531156A (ja) | 2013-09-13 | 2016-10-06 | ザ カリフォルニア インスティテュート フォー バイオメディカル リサーチ | 修飾された治療剤、及びその組成物 |
JP2017509628A5 (ja) | 2015-03-09 | 2018-04-05 | ||
WO2018166461A1 (en) | 2017-03-14 | 2018-09-20 | Sunshine Lake Pharma Co., Ltd. | Dual-target fusion proteins comprising the fc portion of an immunoglobulin |
JP2019500013A (ja) | 2015-10-28 | 2019-01-10 | ユーハン・コーポレイションYUHAN Corporation | デュアル機能タンパク質およびそれを含む医薬組成物 |
Family Cites Families (14)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
AU2004251145C1 (en) * | 2003-06-12 | 2011-04-14 | Eli Lilly And Company | GLP-1 analog fusion proteins |
JP4477013B2 (ja) * | 2003-12-10 | 2010-06-09 | イーライ リリー アンド カンパニー | 線維芽細胞成長因子21の突然変異タンパク質 |
AU2016202945A1 (en) * | 2011-09-26 | 2016-05-26 | Irm Llc | Dual function proteins for treating metabolic disorders |
TW201315742A (zh) * | 2011-09-26 | 2013-04-16 | Novartis Ag | 治療代謝病症之雙功能蛋白質 |
KR20150043505A (ko) * | 2012-09-07 | 2015-04-22 | 사노피 | 대사 증후군의 치료용 융합 단백질 |
JP6712230B2 (ja) * | 2014-03-11 | 2020-06-17 | ノバルティス アーゲー | リポジストロフィーおよびインスリン産生の欠損またはインスリンシグナル伝達の欠損と関連する代謝性障害を処置する方法 |
WO2016108586A1 (ko) * | 2014-12-30 | 2016-07-07 | 한미약품 주식회사 | 안정성이 증가된 글루카곤 유도체 |
KR102668200B1 (ko) * | 2015-10-28 | 2024-05-23 | 주식회사유한양행 | 지속형 fgf21 융합 단백질 및 이를 포함하는 약학적 조성물 |
TW201731867A (zh) * | 2015-12-02 | 2017-09-16 | 賽諾菲公司 | Fgf21變異體 |
WO2017102010A1 (en) * | 2015-12-17 | 2017-06-22 | Biontech Rna Pharmaceuticals Gmbh | Novel cytokine fusion proteins |
CN108603572A (zh) * | 2015-12-23 | 2018-09-28 | 艾晓林 | 具有平顺模式切换的多模式机电无级变速器装置及其控制方法 |
WO2017116207A1 (ko) * | 2015-12-31 | 2017-07-06 | 한미약품 주식회사 | Fgf21 아날로그, fgf21 결합체, 및 이의 용도 |
CN108440668A (zh) * | 2017-02-16 | 2018-08-24 | 瑞阳(苏州)生物科技有限公司 | Fgf21与igf-1的融合蛋白及其应用 |
CN109836486B (zh) * | 2019-01-30 | 2020-09-08 | 北京双因生物科技有限公司 | 成纤维生长因子21变体、其融合蛋白及其用途 |
-
2019
- 2019-01-30 CN CN201910093697.4A patent/CN109836486B/zh active Active
- 2019-11-22 US US17/310,377 patent/US20220096598A1/en active Pending
- 2019-11-22 WO PCT/CN2019/120357 patent/WO2020155807A1/zh active Application Filing
- 2019-11-22 JP JP2021544582A patent/JP7282899B2/ja active Active
Patent Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20100285131A1 (en) | 2009-05-05 | 2010-11-11 | Amgen Inc. | Fgf21 mutants and uses thereof |
JP2014530220A (ja) | 2011-10-04 | 2014-11-17 | イーライ リリー アンド カンパニー | 線維芽細胞増殖因子21変異体 |
JP2016531156A (ja) | 2013-09-13 | 2016-10-06 | ザ カリフォルニア インスティテュート フォー バイオメディカル リサーチ | 修飾された治療剤、及びその組成物 |
JP2017509628A5 (ja) | 2015-03-09 | 2018-04-05 | ||
JP2019500013A (ja) | 2015-10-28 | 2019-01-10 | ユーハン・コーポレイションYUHAN Corporation | デュアル機能タンパク質およびそれを含む医薬組成物 |
WO2018166461A1 (en) | 2017-03-14 | 2018-09-20 | Sunshine Lake Pharma Co., Ltd. | Dual-target fusion proteins comprising the fc portion of an immunoglobulin |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
Glyco-engineered Long Acting FGF21 Variant with Optimal Pharmaceutical and Pharmacokinetic Properties to Enable Weekly to Twice Monthly Subcutaneous Dosing,SCIENTIFIC REPORTS,2018年,Volume 8,4241 |
Rational Design of a Fibroblast Growth Factor 21-Based Clinical Candidate, LY2405319,PLOS ONE,2013年,Volume 8, Issue 3,e58575 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
WO2020155807A1 (zh) | 2020-08-06 |
CN109836486B (zh) | 2020-09-08 |
CN109836486A (zh) | 2019-06-04 |
US20220096598A1 (en) | 2022-03-31 |
JP2022518850A (ja) | 2022-03-16 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP7282899B2 (ja) | 線維芽細胞成長因子21変異体、その融合タンパク質とその使用 | |
RU2741345C2 (ru) | Белки с двойной функцией и содержащая их фармацевтическая композиция | |
US8889619B2 (en) | Fusion protein of Exendin-4 and its analog, preparation method and use thereof | |
JP7268202B2 (ja) | 代謝性疾患を治療するための融合タンパク質 | |
AU2016346864A1 (en) | Long-acting FGF21 fusion proteins and pharmaceutical composition comprising same | |
US10538586B2 (en) | Compositions and methods for treating fatty tissue buildup | |
CN109836504B (zh) | 一种治疗代谢疾病的多结构域活性蛋白 | |
US20210388326A1 (en) | Sphingosine kinase 1 and fusion protein comprising the same and use thereof | |
AU2017358289A1 (en) | Pharmaceutical composition for preventing or treating hepatitis, hepatic fibrosis, and hepatic cirrhosis comprising fusion proteins | |
US11400135B2 (en) | Compositions and methods for treating obesity and hyperphagia | |
JP2023538013A (ja) | 異所性骨形成副作用の軽減で治療効果が増進した骨形成タンパク質-9、10の変異体及びこれを含む薬学的組成物 | |
JP2015524432A (ja) | アポリポタンパク質aivを用いて高血糖障害を治療する方法 | |
Bobrov et al. | Copurification of a recombinant modified glucagon-like and glucose-dependent insulinotropic peptide to create a two-component drug for the treatment of type 2 diabetes mellitus and obesity | |
Wan et al. | Efficient expression of stable recombinant human insulin-like growth factor-1 fusion with human serum albumin in Chinese hamster ovary cells | |
WO2022121666A1 (zh) | 一种高效降糖的蛋白质药物 | |
AU2020275797B2 (en) | Fusion protein for treatment of metabolic disease | |
WO2021083306A1 (zh) | Glp-1/gcg双受体激动剂多肽 | |
US20240076345A1 (en) | Human glp-1 polypeptide variant and use thereof | |
KR20090014856A (ko) | 카스파제-7 절단에서 유래하는 세포사멸과 관련된폴리뉴클레오티드 서열, 세포사멸의 억제, 유도 인자 및이의 스크리닝 방법 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20210730 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20220705 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20221005 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20221206 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20230306 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20230509 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20230517 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 7282899 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |