JP7265310B2 - 薬物、その使用及び方法 - Google Patents
薬物、その使用及び方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP7265310B2 JP7265310B2 JP2016567851A JP2016567851A JP7265310B2 JP 7265310 B2 JP7265310 B2 JP 7265310B2 JP 2016567851 A JP2016567851 A JP 2016567851A JP 2016567851 A JP2016567851 A JP 2016567851A JP 7265310 B2 JP7265310 B2 JP 7265310B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- seq
- antibody
- cancer
- subject
- cells
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
- A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
- A61K39/39558—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against tumor tissues, cells, antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/02—Inorganic compounds
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
- A61K47/10—Alcohols; Phenols; Salts thereof, e.g. glycerol; Polyethylene glycols [PEG]; Poloxamers; PEG/POE alkyl ethers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
- A61K47/12—Carboxylic acids; Salts or anhydrides thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
- A61K47/36—Polysaccharides; Derivatives thereof, e.g. gums, starch, alginate, dextrin, hyaluronic acid, chitosan, inulin, agar or pectin
- A61K47/38—Cellulose; Derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0034—Urogenital system, e.g. vagina, uterus, cervix, penis, scrotum, urethra, bladder; Personal lubricants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0048—Eye, e.g. artificial tears
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0087—Galenical forms not covered by A61K9/02 - A61K9/7023
- A61K9/0095—Drinks; Beverages; Syrups; Compositions for reconstitution thereof, e.g. powders or tablets to be dispersed in a glass of water; Veterinary drenches
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/02—Suppositories; Bougies; Bases therefor; Ovules
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/20—Pills, tablets, discs, rods
- A61K9/2004—Excipients; Inactive ingredients
- A61K9/2013—Organic compounds, e.g. phospholipids, fats
- A61K9/2018—Sugars, or sugar alcohols, e.g. lactose, mannitol; Derivatives thereof, e.g. polysorbates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/20—Pills, tablets, discs, rods
- A61K9/2004—Excipients; Inactive ingredients
- A61K9/2022—Organic macromolecular compounds
- A61K9/2027—Organic macromolecular compounds obtained by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyvinyl pyrrolidone, poly(meth)acrylates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/20—Pills, tablets, discs, rods
- A61K9/2004—Excipients; Inactive ingredients
- A61K9/2022—Organic macromolecular compounds
- A61K9/205—Polysaccharides, e.g. alginate, gums; Cyclodextrin
- A61K9/2054—Cellulose; Cellulose derivatives, e.g. hydroxypropyl methylcellulose
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/20—Pills, tablets, discs, rods
- A61K9/2004—Excipients; Inactive ingredients
- A61K9/2022—Organic macromolecular compounds
- A61K9/205—Polysaccharides, e.g. alginate, gums; Cyclodextrin
- A61K9/2059—Starch, including chemically or physically modified derivatives; Amylose; Amylopectin; Dextrin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
- A61K9/4841—Filling excipients; Inactive ingredients
- A61K9/4858—Organic compounds
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
- A61K9/4841—Filling excipients; Inactive ingredients
- A61K9/4866—Organic macromolecular compounds
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
- C07K16/283—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against Fc-receptors, e.g. CD16, CD32, CD64
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2887—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against CD20
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2893—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against CD52
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
- A61K2039/507—Comprising a combination of two or more separate antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/55—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the host/recipient, e.g. newborn with maternal antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
- C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
- C07K2317/732—Antibody-dependent cellular cytotoxicity [ADCC]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/75—Agonist effect on antigen
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/77—Internalization into the cell
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/94—Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Ophthalmology & Optometry (AREA)
- Gynecology & Obstetrics (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Endocrinology (AREA)
Description
(i)標的細胞の細胞表面抗原に特異的に結合する抗体分子であって、FcγRIIbに結合することができるFcドメインを有する、抗体分子を、
(ii)FcγRIIbが抗体分子のFcドメインに結合することを防止または低減する薬剤と、組み合わせて含む、組成物であって、
該組成物が、対象における再発癌及び/または難治性癌の処置に使用するためのものであり、及び対象が、FcγRIIbを発現する標的細胞を有することを特徴とする、組成物を提供する。
(i)標的細胞の細胞表面抗原に特異的に結合する抗体分子であって、FcγRIIbに結合することができるFcドメインを有する、抗体分子を、
(ii)FcγRIIbが抗体分子のFcドメインに結合することを防止または低減する薬剤と、組み合わせて含む、組成物の使用であって、
該使用が、対象における再発癌及び/または難治性癌の処置に使用するための薬物の製造におけるものであり、及び対象が、FcγRIIbを発現する標的細胞を有することを特徴とする、組成物の使用を提供する。
(i)標的細胞の細胞表面抗原に特異的に結合する抗体分子であって、FcγRIIbに結合することができるFcドメインを有する、抗体分子を、
(ii)FcγRIIbが抗体分子のFcドメインに結合することを防止または低減する薬剤と、組み合わせて投与することを含み、
対象が、再発癌及び/または難治性癌を有するという基準で選択され、及び対象が、FcγRIIbを発現する標的細胞を有することを特徴とする、方法を提供する。
(i)標的細胞の細胞表面抗原に特異的に結合する抗体分子であって、FcγRIIbに結合することができるFcドメインを有する、抗体分子、
(ii)FcγRIIbが抗体分子のFcドメインに結合することを防止または低減する薬剤、
(iii)リツキシマブ、リツキシマブバイオシミラー、オファツムマブ、オビヌツズマブ、アレムツズマブ、ガリキシマブ、トシツモマブ、放射活性のあるトシツモマブ、イブリツモマブ、放射活性のあるイブリツモマブ、抗CD40抗体、抗CD19抗体、抗CD37抗体、B細胞癌の処置に使用される治療用抗体、からなる群から選択される1つ以上の物質、を含み、
該使用が、対象における再発癌及び/または難治性癌の処置のためのものであり、及び対象が、FcγRIIbを発現する標的細胞を有することを特徴とする、キットを提供する。
難治性癌とは、処置されているがその処置に応答していない、かつ/または処置されているが処置中に進行している癌である。別の言い方をすると、難治性癌とは、処置に抵抗性のある癌である。
を含む群から1つ以上を測定することによって決定される、組成物、または使用、または方法、またはキットを提供する。
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
QPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
抗体クローン:1A01
1A01-VH[配列番号3]
1A01-VL[配列番号27]
CDR領域
CDRH1:DYYMN[配列番号51]
CDRH2:LIGWDGGSTYYADSVKG[配列番号52]
CDRH3:AYSGYELDY[配列番号53]
CDRL1:SGSSSNIGNNAVN[配列番号54]
CDRL2:DNNNRPS[配列番号55]
CDRL3:AAWDDSLNASI[配列番号56]
1B07-VH[配列番号4]
1B07-VL[配列番号28]
CDR領域
CDRH1:SYGMH[配列番号57]
CDRH2:FTRYDGSNKYYADSVRG[配列番号58]
CDRH3:ENIDAFDV[配列番号59]
CDRL1:SGSSSNIGNNAVN[配列番号60]
CDRL2:DNQQRPS[配列番号61]
CDRL3:WDDRLFGPV[配列番号62]
1C04-VH[配列番号5]
1C04-VL[配列番号29]
CDR領域
CDRH1:SYAMS[配列番号63]
CDRH2:SISDSGAGRYYADSVEG[配列番号64]
CDRH3:THDSGELLDAFDI[配列番号65]
CDRL1:SGSSSNIGSNHVL[配列番号66]
CDRL2:GNSNRPS[配列番号67]
CDRL3:AAWDDSLNGWV[配列番号68]
1E05-VH[配列番号6]
1E05-VL[配列番号30]
CDR領域
CDRH1:TYAMN[配列番号69]
CDRH2:VISYDGSNKNYVDSVKG[配列番号70]
CDRH3:NFDNSGYAIPDAFDI[配列番号71]
CDRL1:TGSSSNIGAGYDVH[配列番号72]
CDRL2:DNNSRPS[配列番号73]
CDRL3:AAWDDSLGGPV[配列番号74]
2A09-VH[配列番号7]
2A09-VL[配列番号31]
CDR領域
CDRH1:NAWMS[配列番号75]
CDRH2:YISRDADITHYPASVKG[配列番号76]
CDRH3:GFDYAGDDAFDI[配列番号77]
CDRL1:SGSSSNIGSNAVN[配列番号78]
CDRL2:GNSDRPS[配列番号79]
CDRL3:AAWDDSLNGRWV[配列番号80]
2B08-VH[配列番号8]
2B08-VL[配列番号32]
CDR領域
CDRH1:DYYMS[配列番号81]
CDRH2:LIGHDGNNKYYLDSLEG[配列番号82]
CDRH3:ATDSGYDLLY[配列番号83]
CDRL1:SGSSSNIGNNAVN[配列番号84]
CDRL2:YDDLLPS[配列番号85]
CDRL3:TTWDDSLSGVV[配列番号86]
2E08-VH[配列番号9]
2E08-VL[配列番号33]
CDR領域
CDRH1:DYYMS[配列番号87]
CDRH2:AIGFSDDNTYYADSVKG[配列番号88]
CDRH3:GDGSGWSF[配列番号89]
CDRL1:SGSSSNIGNNAVN[配列番号90]
CDRL2:DNNKRPS[配列番号91]
CDRL3:ATWDDSLRGWV[配列番号92]
5C04-VH[配列番号10]
5C04-VL[配列番号34]
CDR領域
CDRH1:NYGMH[配列番号93]
CDRH2:VISYDGSNKYYADSVKG[配列番号94]
CDRH3:WRDAFDI[配列番号95]
CDRL1:TGSSSNIGAGYDVH[配列番号96]
CDRL2:SDNQRPS[配列番号97]
CDRL3:AAWDDSLSGSWV[配列番号98]
5C05-VH[配列番号11]
5C05-VL[配列番号35]
CDR領域
CDRH1:TYGMH[配列番号99]
CDRH2:VISYDGSNKYYADSVKG[配列番号100]
CDRH3:ENFDAFDV[配列番号101]
CDRL1:TGSSSNIGAGYDVH[配列番号102]
CDRL2:SNSQRPS[配列番号103]
CDRL3:AAWDDSLNGQVV[配列番号104]
5D07-VH[配列番号12]
5D07-VL[配列番号36]
CDR領域
CDRH1:TYGMH[配列番号105]
CDRH2:VIAYDGSKKDYADSVKG[配列番号106]
CDRH3:EYRDAFDI[配列番号107]
CDRL1:TGSSSNIGAGYDVH[配列番号108]
CDRL2:GNSNRPS[配列番号109]
CDRL3:AAWDDSVSGWM[配列番号110]
5E12-VH[配列番号13]
5E12-VL[配列番号37]
CDR領域
CDRH1:SYGMH[配列番号111]
CDRH2:VISYDGINKDYADSMKG[配列番号112]
CDRH3:ERKDAFDI[配列番号113]
CDRL1:TGSSSNIGAGYDVH[配列番号114]
CDRL2:SNNQRPS[配列番号115]
CDRL3:ATWDDSLNGLV[配列番号116]
5G08-VH[配列番号14]
5G08-VL[配列番号38]
CDR領域
CDRH1:NYGMH[配列番号117]
CDRH2:VISYDGSNRYYADSVKG[配列番号118]
CDRH3:DRWNGMDV[配列番号119]
CDRL1:SGSSSNIGAGYDVH[配列番号120]
CDRL2:ANNQRPS[配列番号121]
CDRL3:AAWDDSLNGPWV[配列番号122]
5H06-VH[配列番号15]
5H06-VL[配列番号39]
CDR領域
CDRH1:SYGMH[配列番号123]
CDRH2:VISYDGSDTAYADSVKG[配列番号124]
CDRH3:DHSVIGAFDI[配列番号125]
CDRL1:SGSSSNIGSNTVN[配列番号126]
CDRL2:DNNKRPS[配列番号127]
CDRL3:SSYAGSNNVV[配列番号128]
6A09-VH[配列番号16]
6A09-VL[配列番号40]
CDR領域
CDRH1:SYGMH[配列番号129]
CDRH2:VTSYDGNTKYYANSVKG[配列番号130]
CDRH3:EDCGGDCFDY[配列番号131]
CDRL1:TGSSSNIGAGYDVH[配列番号132]
CDRL2:GNSNRPS[配列番号133]
CDRL3:AAWDDSLNEGV[配列番号134]
6B01-VH[配列番号17]
6B01-VL[配列番号41]
CDR領域
CDRH1:NYGMH[配列番号135]
CDRH2:VISYDGSNKYYADSVKG[配列番号136]
CDRH3:DQLGEAFDI[配列番号137]
CDRL1:TGSSSNIGAGYDVH[配列番号138]
CDRL2:DNNKRPS[配列番号139]
CDRL3:ATWDDSLSGPV[配列番号140]
6C11-VH[配列番号18]
6C11-VL[配列番号42]
CDR領域
CDRH1:DYGMS[配列番号141]
CDRH2:AISGSGSSTYYADSVKG[配列番号142]
CDRH3:GDIDYFDY[配列番号143]
CDRL1:TGSSSNFGAGYDVH[配列番号144]
CDRL2:ENNKRPS[配列番号145]
CDRL3:AAWDDSLNGPV[配列番号146]
6C12-VH[配列番号19]
6C12-VL[配列番号43]
CDR領域
CDRH1:SYGMH[配列番号147]
CDRH2:VISYDGSNKYYADSVKG[配列番号148]
CDRH3:ERRDAFDI[配列番号149]
CDRL1:TGSSSNIGAGYDVH[配列番号150]
CDRL2:SDNQRPS[配列番号151]
CDRL3:ATWDSDTPV[配列番号152]
6D01-VH[配列番号20]
6D01-VL[配列番号44]
CDR領域
CDRH1:SYGMH[配列番号153]
CDRH2:VISYDGSNKYYADSVKG[配列番号154]
CDRH3:DHSAAGYFDY[配列番号155]
CDRL1:SGSSSNIGSNTVN[配列番号156]
CDRL2:GNSIRPS[配列番号157]
CDRL3:ASWDDSLSSPV[配列番号158]
6G03-VH[配列番号21]
6G03-VL[配列番号45]
CDR領域
CDRH1:SYGMH[配列番号159]
CDRH2:GISWDSAIIDYAGSVKG[配列番号160]
CDRH3:DEAAAGAFDI[配列番号161]
CDRL1:TGSSSNIGAGYDVH[配列番号162]
CDRL2:GNTDRPS[配列番号163]
CDRL3:AAWDDSLSGPVV[配列番号164]
6G08-VH[配列番号22]
6G08-VL[配列番号46]
CDR領域
CDRH1:SYGIS[配列番号165]
CDRH2:GISGSGGNTYYADSVKG[配列番号166]
CDRH3:SVGAYANDAFDI[配列番号167]
CDRL1:TGSSSNIGAGYDVH[配列番号168]
CDRL2:GDTNRPS[配列番号169]
CDRL3:AAWDDSLNGPV[配列番号170]
6G11-VH[配列番号23]
6G11-VL[配列番号47]
CDR領域
CDRH1:SYGMH[配列番号171]
CDRH2:VISYDGSNKYYADSVKG[配列番号172]
CDRH3:ELYDAFDI[配列番号173]
CDRL1:TGSSSNIGAGYDVH[配列番号174]
CDRL2:ADDHRPS[配列番号175]
CDRL3:ASWDDSQRAVI[配列番号176]
6H08-VH[配列番号24]
6H08-VL[配列番号48]
CDR領域
CDRH1:NYGMH[配列番号177]
CDRH2:VISYDGSNKYYAD SVKG[配列番号178]
CDRH3:EYKDAFDI[配列番号179]
CDRL1:TGSSSNIGSNTVN[配列番号180]
CDRL2:DNNKRPS[配列番号181]
CDRL3:QAWGTGIRV[配列番号182]
7C07-VH[配列番号25]
7C07-VL[配列番号49]
CDR領域
CDRH1:SYGMH[配列番号183]
CDRH2:VISYDGSNKYYADSVKG[配列番号184]
CDRH3:EFGYIILDY[配列番号185]
CDRL1:SGSSSNIGSNTVN[配列番号186]
CDRL2:RDYERPS[配列番号187]
CDRL3:MAWDDSLSGVV[配列番号188]
4B02-VH[配列番号26]
4B02-VL[配列番号50]
CDR領域
CDRH1:NHGMH[配列番号189]
CDRH2:VISYDGTNKYYADSVRG[配列番号190]
CDRH3:ETWDAFDV[配列番号191]
CDRL1:SGSSSNIGSNNAN[配列番号192]
CDRL2:DNNKRPS[配列番号193]
CDRL3:QAWDSSTVV[配列番号194]
ラフトマイクロドメイン内の抗原の存在の急速な査定として、低温におけるTriton X-100不溶性に基づくフローサイトメトリ法を用いた。手短に述べると、細胞をRPMI/1% BSAで洗浄し、2.5×106/mlで再懸濁させた。次いで、細胞を、10μg/mlのFITC抱合mAbと共に37℃で15分間インキュベートし、冷PBS/1% BSA/20mMアジ化ナトリウムで洗浄し、次いでこの試料を半分に分割した。1つの半割部を氷上に維持して100%表面抗原レベルの計算を可能にし、他方を氷上で15分間0.5%のTriton X-100で処置して、不溶性ラフト画分内に残存する抗原の割合を決定した。次いで、細胞を、アッセイの残部全体にわたって4℃に維持し、PBS/BSA/アジ化物で1回洗浄し、再懸濁させ、上に詳述したようにフローサイトメトリによって査定した。間接検出法を使用して同様の結果を得た。標的抗原のラフト結合の恒常的レベルを決定するために、細胞をまず、氷上で15分間0.5%のTriton X-100で処置し、FITC標識mAbの結合の前にPBS/BSA/アジ化物で洗浄した。さらなる架橋によってより多くの抗原がTriton X-100不溶性画分内に移動し得るかどうかを査定するために、細胞を前述同様にFITC-mAbと共にインキュベートし、洗浄し、次いで4つに分割した。これらの試料のうちの2つを、ヤギ抗マウスIg F(ab’)2断片と共に氷上で15分間インキュベートした。洗浄後、架橋試料のうちの1つ及び非架橋試料のうちの1つをTriton X-100中で溶解させ、フローサイトメトリ前に、上に詳述したように洗浄した。
モノクローナルAb(1μg/106細胞)を37℃で細胞に添加した。20分間のインキュベーション後、細胞をペレット化し、MES緩衝生理食塩水(25mM MES、pH6.5、150mM NaCl、ImMフッ化フェニルメチルスルホニル、5μg/mlアプロチニン、5μg/mlロイペプチン、lOmM EDTA)中1.0%の氷冷Triton X-100中で溶解させた。次いで、ショ糖密度勾配遠心分離によって脂質ラフト画分を調製した。手短に述べると、ライセートを溶解緩衝液中で等体積の80%ショ糖と混合し、非連続的な5~30%のショ糖密度勾配をかけ、次いで200,000×gで16時間遠心分離した。画分(0.5ml)を収集し、ウェスタンブロッティングにより分析した。各画分の15mlのアリコートを2×ローディングバッファー中で1:1に希釈し、5分間95℃に加熱し、15%のSDS-PAGEゲル上で分離させ、その後PVDF膜上に移し、一次抗体(例えばマウス抗CD20、CD20を検出するためのクローン7D1、またはラフト画分を同定するための抗Lynウサギポリ血清(polysera)(Serotec、英国))、続いてHRP抱合二次抗体(Amersham Biosciences UK Ltd)と共にインキュベートした。ECL+plus(Amersham Biosciences UK Ltd)を使用してブロットを可視化した。
(A)6~10×107個の初代患者CLL細胞を、同時に静脈内及び腹腔内に免疫不全NOD/SCIDマウスに移植した。注入4~5日後、マウスを、10mg/kgで1回もしくは2回用量のRit(Rit)またはアイソタイプ対照で処置した。2日後、マウスを屠殺し、脾臓及び腹膜内に残存するCLL細胞の数をフローサイトメトリによって査定し、その後、アイソタイプ対照を受けた試料に正規化した。このデータは、腹膜内のCLL細胞はmAbの単回投薬で効率的に欠失した(破線の棒)が、脾臓からのRit誘発性枯渇(塗りつぶされた棒)はRitの2回投薬後でも不完全であったことを示す。この図は、3~5マウス/群の平均+SEMを示す。データは、t検定によって分析した;p値は、示されるように群を比較する(**p≦0.01、****p≦0.001)。
概要
治療用抗体は、免疫系を働かせることによる新たな作用機構を明らかにし、癌治療を変容させている。残念ながら、治癒は稀にしか起こらず、患者は内因性または獲得抵抗性のいずれかを示す。ここで、免疫細胞の脱感作及び抗体薬に対する腫瘍細胞の抵抗性に関わる受容体であるヒト(h)FcγRIIBを標的とし、それを遮断する治療可能性を実証する。FcγRIIB遮断抗体は、CD20特異性抗体リツキシマブの内部移行を防止し、それにより、インビトロかつインビボで、細胞表面到達性及び免疫エフェクター細胞媒介性の抗腫瘍活性を最大にした。完全に同系のhFcγRIIB Tgマウスモデルにおいて、hFcγRIIB mAbは、リツキシマブB細胞枯渇を増強した。抵抗性易発性間質区画からのヒト慢性リンパ球性白血病(CLL)腫瘍細胞の枯渇を査定するマウスモデルでは、リツキシマブの同時投与は、再発/難治性患者からのCLL細胞を用いた実験を含め、客観的応答及び完全応答を向上させた。有力候補であるhFcγRIIB特異性抗体、6G11は、良好なオンターゲットの免疫反応性、好ましい薬物動態を有し、リツキシマブとの組み合わせにおける相加/相乗活性にインビボで有害作用を及ぼさないことが示された。これらのデータは、B細胞リンパ増殖性障害の免疫療法のための、このhFcγRIIB特異性mAbのさらなる臨床開発を支持する。
一般に生物学的療法、具体的にはモノクローナル抗体(mAb)は、拡大を続ける治療薬のクラスである1。これらは癌治療に改革をもたらし、いくつかの悪性腫瘍については従来の化学療法と並ぶ標準治療となっている。10年以上にわたり、治療用mAbの活性の大部分は、Fcγ受容体(FcγR)とのそれらの相互作用によって左右されることが知られている。具体的には、IgGの治療活性の大部分を説明するのは、FcγRの相対的な発現レベル、親和性、及び活性である(2、3にて査読)。抗体薬に対する内因性または獲得抵抗性の根底にある機構についてはそれほど知られていない。CD47などの「貪食拒否(don’t-eat-me)」シグナルは抗体媒介性エフェクター細胞の抗癌活性を制限することが示されているが4、それらの臨床的重要性の根拠は依然として初期段階にある。ますます多くの抗体療法が数種類の癌の処置のために開発されていることに伴い、これらの療法に対する癌細胞の抵抗性を理解し、それらを克服する薬を開発する必要が生じている。
動物及び細胞
ヒト(h)CD20 Tg、γ鎖-/-、及びマウス(m)FcγRIIB-/-マウスは以前に説明されており(Beers et al.,2008)、遺伝子型はPCR及び/またはフローサイトメトリによって確認されている。内務省の指針に従って、現地の施設でマウスを繁殖させ飼養した。動物実験は現地の倫理委員会の承認を得、内務省認可PPL30/1269及びM90-11の下で行った。ヒト(h)CD20 Tg、γ鎖-/-、及びFcγRIIB-/-マウスは以前に説明されており15、遺伝子型はPCR及び/またはフローサイトメトリによって確認されている。10~12週齢の雌のBALB/c及びC57BL/6マウスが、Harlan UK Limited(英国オックスフォードシャー州ブラックソーン)から供給され、現地の動物施設で飼養された。CB-17 SCIDマウスをCharles Riverから購入し、次いで現地の動物施設で繁殖させ飼養した。初代腫瘍細胞を用いた異種移植研究(以下を参照のこと)のために、6~8週齢の雌NOD SCIDマウスがTaconic(デンマーク国ボンホルト(Bomholt))から供給され、現地の施設で飼養された。
臨床試料の使用のための倫理的許可は、Southampton and South West Hampshire Research Ethics CommitteeからのSouthampton University Hospitals NHS Trust、またはEthics Committee of Skane University Hospitalによって得た。ヘルシンキ宣言に従って、インフォームドコンセントが提供された。試料は、Human Tissue Authorityに認可されたUniversity of SouthamptonのCancer Science Unit Tissue Bankから譲渡されたか、またはSkanes University Hospital(ルンド)の血液学部門及び腫瘍学部門によって得た。CLL及びMCL試料を、単離されている単一細胞懸濁液として査定し、Ficoll精製し、後続の分析のために凍結保存するか、または異種移植研究において新鮮な状態で使用した。
細胞培養を、補充RPMI(2mMのグルタミン、1mMのピルビン酸塩、100IU/mlのペニシリン及びストレプトマイシン、ならびに10%のFCS[Myoclone]を含有するRPMI)(GIBCO BRL、スコットランド国ペイズリー)中で行った。マウス脾臓B細胞を、MACS B細胞単離キット(Miltenyi Biotec、英国)を使用したネガティブセレクションによって精製し、同じ培地内で培養した。細胞株をECACCから得、抗生物質非含有の補充RPMI培地内に維持した。正常なヒト末梢B細胞を、MACS B細胞単離キット(Miltenyi Biotec、英国)を使用したネガティブセレクションによって精製した。
国立血液サービス、Southampton General Hospital(英国サウサンプトン)、またはハルムスタッドの病院もしくはSkane University Hospital(スウェーデン)内の血液センターのいずれかから得た末梢血から、ヒトMDMを分化した。手短に述べると、接着性CD14+単球を、以前に説明されているように、ペニシリン(100U/mL)、ストレプトマイシン(100μg/mL)、10%のFCS、及び25~100ng/mLの低エンドトキシン組み換えヒトマクロファージコロニー刺激因子(M-CSF;R&D Systems(米国)、またはインハウスで作製)を含有するRPMI内で培養した16。培地の半分を、採取まで2日毎に新鮮なM-CSFと交換した。冷PBSと一緒の短いインキュベーション後、培養7~10日目にMDMを採取した。
mAbは、典型的に、ハイブリドーマまたは安定にトランスフェクトされたCHO-k1細胞の培養上清から生成した。IgGは、タンパク質A上で精製し、電気泳動(Beckman EPシステム、Beckman)によって純度を査定し、凝集がないことをHPLCによって確認した。F(ab’)2断片は、以前に説明されているように生成した18。hFcγRII mAb AT10は、以前に説明された19。リツキシマブは、Southampton General Hospitalの腫瘍学薬局から寄贈されたか、またはルンド(スウェーデン)の大学病院薬局から購入した。リン酸化hFcγRIIBに対する抗体(クローンEP926Y)(Origene、米国)、及びαチューブリン(Cell Signaling、米国)を、免疫ブロッティングに使用した。AF647標識IgG1、抗CD3-PE、抗CD19-perCp-Cy5.5、及び抗CD56-AF488(BD Biosciences)を使用して、PBMCを標識した。PBMC免疫表現型決定のために、Zenon標識キット(Molecular Probes)を使用してPEで標識されたFcγRIIB mAbを、抗CD3-FITC、抗CD19-PerCP-Cy5.5、及び抗CD56-APCと併せて使用した。
蛍光抱合mAbは、BD Biosciences、eBiosciences、AbD Serotecから購入したか、またはインハウスで作製した。フローサイトメトリは以前に説明されているとおりであり20、試料はFACScan、FACSCalibur、またはFACSCanto II上で査定し、データはCellQuest ProまたはFACSDiva(全てBD Biosciences)で分析した。
hFcγRIIB mAbは、n-CoDeR(登録商標)scFvファージディスプレイライブラリをスクリーニングすることにより同定した。hFcγRIIB及びhFcγRIIAの細胞外ドメインを、それぞれ標的及び非標的として使用するためにmIgG3-Fc(hFcγRIIA/B-Fc)に融合させ、一過性にトランスフェクトされたHEK293細胞内で生成し、続いてタンパク質A上で精製した。3回の連続選択を行った。事前選択は、選択1の前に行い、また、Streptavidin Dynabeads上に乗せた、コーティングされたマウスIgG3κ及びビオチン化hFcγRIIA-Fcに対して行った。結合ファージをトリプシン消化によって溶出し、標準的手順を使用してプレート上で増幅させた21。選択1の増幅されたファージを、エッチングしたポリスチレンボール(Polysciences、米国)にコーティングされたhFcγRIIBに対する選択のために使用した。選択2のための事前選択は、コーティングされた余剰のストレプトアビジンに対して行った。選択3は、例えば、異なる濃度のビオチン化hFcγRIIBを使用して、限界希釈選択として行った。hFcγRIIAを全ての選択において競合相手として使用した。選択3からのファージミドをscFv生成フォーマットに変換し、後続のスクリーニングアッセイに使用し、可溶性または細胞結合抗原への特異的結合ならびに免疫複合体結合の抑制を査定した。hFcγRIIに対する3つの異なる市販の抗体(MCA1075XZ(AbD Serotec)、MAB1330(R&D Systems)、AF1330(R&D Systems))を、組み換え及び細胞表面結合FcγRIIBの評価に使用した。フローサイトメトリ及び蛍光マイクロアレイ技術(FMAT)による細胞表面結合FcγRIIBの評価のために、マウス抗hFcγRII-APC(BD Pharmingen)も使用した。全ての実験において、対応するアイソタイプ対照を陰性対照として含めた。細胞結合抗原の評価のために、FuGENE(Roche)を使用して、CHO-k1細胞に、FcγRIIA-pIROまたはFcγRIIB-pIROのいずれかをpIRESpuroと一緒に同時トランスフェクトした。10μg/mlのPyromycin(InvivoGen)を、トランスフェクト細胞の選択のために使用した。限界希釈法によって得た個別のクローンを、次いでhFcγRII抗体(BD Biosciences)、及び対応するアイソタイプ対照で染色し、続いてフローサイトメトリ及びFMAT分析により発現が最も高いクローンを選択し、これらをさらなる実験に使用した。scFvの一次スクリーニングのために、FcγRIIA及びFcγRIIBをトランスフェクトしたCHO-k1細胞をFMATプレートに播種した。大腸菌(E.coli)発現scFv、続いて脱グリコシルマウス抗HIS抗体(R&D Systems)及び脱グリコシル抗マウスCy5(GE Healthcare)を添加した。8200検出システム(Applied Biosystems)を使用して染色細胞を検出した。一次スクリーニングからの陽性クローンを、FcγRIIA及びFcγRIIBトランスフェクト細胞に対する結合性についてもう1回再発現及び再試験した。FcγRIIAまたはFcγRIIBに特異的に結合し、かつIC結合を抑制したScFvクローンを、標準的手順を使用してCDR H1、H2、及びH3にわたって配列決定して、ユニークなクローンを同定した。大腸菌における10mlの発現調製物からのリゾシーム(lysosyme)(Sigma)を用いた周辺質調製後、ユニークなクローンをNi-NTAスピンカラム(GE Healthcare)上で精製した。合計で17個のユニークなクローンを野生型及びN297Q hIgG1変異体に変換した。VH及びVLをPCR増幅し、それぞれ、抗体の重鎖及び軽鎖の定常領域を含む発現ベクターに挿入した。その後、懸濁液中での成長に適合されたHEK 293EBNA細胞(Life Technologies)にPEIを使用してトランスフェクトし、次いで細胞懸濁液を撹拌しながら37℃で4時間インキュベートさせ、その後、供給溶液(UltraPepSoy、Sheffield Bio-Science)で希釈し、トランスフェクション6日後に採取した。採取した培養培地を滅菌濾過し、AKTA Purifierシステムに接続されたMabSelect(GE Healthcare)が充填されたカラムに適用した。このカラムをローディングバッファーで洗浄し、低pH緩衝液で溶出させた。溶出した抗体を滅菌濾過し、Spectra/Por透析膜4(Spectrum Laboratories Inc)を使用して、適切な製剤緩衝液に透析した。透析後、この材料を滅菌濾過し、4℃で保管した。次いで、精製されたIgGを、トランスフェクトCHO-k1細胞ならびにFcγRIIBを天然に発現する細胞株及びPBMCに対する結合性について査定した。
FITCに特異的なhIgG1をFITC-BSA-ビオチンまたはFITC-BSAとモル比10:1で混合することによって、ICを形成した。この混合物を、使用前に室温で1時間プレインキュベートした。FcγRIIA及びFcγRIIBに特異的に結合した大腸菌発現ScFvクローンの上清(10μl)を、FcγRIIA及びFcγRIIBを発現するCHO-k1細胞に添加し、1時間放置して結合させた。ICを3nMで添加した。Strep Alexa Fluor(AF)-647(Life Technologies、英国)を使用し、続いてフローサイトメトリによって結合したICを検出し、遮断をAF674シグナルの損失として数量化した。
食作用アッセイ(ADCP)を、大部分は以前に詳述されているように行った23。マクロファージへの成熟化後、これらの細胞を、氷冷PBSまたはAccutase(Sigma)もしくはトリプシン/EDTA(Life Technologies、英国)のいずれかを使用して採取し、96ウェルプレート内に5×104細胞/ウェルで再度播種し、37℃で2~4時間または一晩インキュベートした。その後、CLL細胞を、37℃で15分間、5μMのカルボキシフルオセインサクシニミジルエステル(CFSE、Molecular Probes)で標識した。洗浄後、CLL細胞を、10μg/mlのオプソニン化mAb(複数可)と共に30分間インキュベートし、その後、5:1の比でマクロファージ培養物に添加した。1時間後、擦過を使用して細胞を収集し、氷上で15分間、APC標識CD206(BD Biosciences)またはhFcγRIII mAb(3G8、インハウス)で染色して、MDMを区別した。収集されるマクロファージを最低5000個として、細胞を採取し、フローサイトメトリによって分析した。二重陽性で染色された細胞の割合を、食作用可能性の尺度として決定した。食作用の確認を、共焦点顕微鏡法によって日常的に行った23。
mAbを、製造業者の指示(Life Technologies、英国)に従ってAF488で標識した。内部移行を決定するために、以前に詳述されているように消光アッセイを行った23。手短に述べると、細胞試料(2~4×105細胞/ウェル)を所与の時間にわたってAF488標識mAb(5μg/ml)と共にインキュベートし、洗浄し、再懸濁させ、4℃で30分間、抗AF488消光抗体(Life Technologies、英国)の存在下または非存在下でインキュベートした。次いで試料をフローサイトメトリによって査定した。結果は表面接触可能mAbの%として表され、これは内部移行されたmAbの量に反比例する。
ウェスタンブロッティングを、以前に説明されているように行った26。手短に述べると、2.5~5×106個の細胞を処置し、洗浄し、プロテアーゼとホスファターゼ阻害薬とのカクテルを含有するOnyx緩衝液中で溶解させた。次いで試料をSDS PAGEによって分離させ、タンパク質をPVDF膜上に直ちに移した。膜を5%の脱脂粉乳でブロッキングし、適切に希釈した一次抗体と共にインキュベートし、洗浄し、次いで西洋ワサビペルオキシダーゼ抱合抗ウサギまたは抗マウスIgG(Sigma Aldrich、英国)と共にインキュベートした。バンドは、増強化学発光(ECL、GE Healthcare、英国)を用いたインキュベーション及び感光性フィルム(Hyperfilm ECL、GE Healthcare、英国)への露出によって可視化した。製造業者の指示のとおりにImage Jソフトウェアを使用して、濃度測定を行った。
養子移入アッセイ:以前に詳述されているように(Beers et al.,2010b)、約2×107脾細胞/mlを、それぞれ5μM及び0.5μMのCFSEで標的または非標的として染色し、洗浄し、1:1比で混合し、受容マウスに静脈内注入した(約5×106細胞/マウス)。次いで、1日目及び/または2日目に、マウスに静脈内及び/または腹腔内注入し、1日後に処分して、フローサイトメトリを使用して血液及び脾臓の白血球を検査した。
hFcγRIIB+/-×mFcγRII-/-C57BL/6マウスに20mg/kgのアイソタイプ対照または野生型6G11のいずれかを注入(静脈内)した後、マウス末梢血白血球の全身枯渇をフローサイトメトリによって経時的に査定した。白血球サブセットレベルを投薬前レベルに正規化し、%として表した。
6G11(PK)及びMAHAの血清濃度を、ECLイムノアッセイを使用して決定した。ビオチン化抗6G11ポリクローナルヤギ血清及びStreptavidin-Sulfo Tag(Meso Scale Diagnostics、米国)を使用して、マウス血清中の6G11 mAbを検出した。6G11について作成された既知の標準曲線との比較によって、血清中のmAbレベルの数量化を行った。6G11 PKパラメータ(Cmax、Tmax、AUC、CL(F)、Vz(F)、Vss、及びt1/2)を、ソフトウェアアプリケーションPhoenix(商標)WinNonlin v.6.2(Pharsight Corp、米国カリフォルニア州)を使用し、ノンコンパートメントモデルを用いて評価した。Cmax及びTmaxは、血清濃度-時間プロファイルから直接得た。
単一用量PD、PK、及びMABEL:同齡かつ同性のhFcγRIIB+/-×mFcγRII-/-マウスに、1、10、または100mg/kgの単一用量の野生型6G11を注入し、静脈内及び腹腔内の投与経路の両方を10mg/kg用量において検査した(図17A)。一連の血液試料を、注入直後から終了の最大168時間前に採取した。苦痛、体重減少、毒性、または病態のあらゆる徴候について、動物を期間全体にわたって検査した。hFcγRIIB+veB細胞の枯渇(PD)及び他のパラメータ(例えば、6G11 PK及びマウス抗ヒト抗体[MAHA])を、次のように精査した。
新鮮なヘパリン処置したヒト血液をCTL培地(Cell Technology Limited、ドイツ)内で5倍に希釈し、20μg/mlのRit及び/または野生型もしくはN297Q 6G11のいずれかと共に96ウェルプレート内に播種したか、あるいは無処置(NT)で24時間放置し、その後、細胞を採取し、フローサイトメトリのために抗ヒトCD3-PerCP-Cy5.5/FITC、CD19-PE、CD14-APC、及びCD66b-FITC mAbで染色して、それぞれ、T細胞、B細胞、単球、及び好中球を同定した。CD3+細胞に対する白血球サブセットの比を計算した。
Lymphoprep(Axis-Shield、ノルウェー国オスロ)の密度遠心分離法によって、PBMCを精製した。高密度(1.5ml/ウェル)の24ウェルプレート内の血清非含有CTL培地(Cell Technology Limited、ドイツ)中で48時間、高密度培養28(1×107/ml)で細胞をプレインキュベートした。細胞をその後洗浄し、血清非含有CTL培地(1×106/ml)内に再懸濁させ、0.02もしくは1μg/mlのOKT3で事前コーティングされた96ウェルプレートに播種した(100μl/ウェル)か、または未処置(NT)で放置した。hFcγRIIB mAb(クローン6G11)またはアイソタイプを適合させた対照mAb(hIgG1)の野生型及びN297Q変異体を10μg/mlの濃度で添加し、細胞をさらに48時間インキュベートした。サイトカイン(IL-6、-10、IFN-γ、及びTNF-α)を、製造業者の指示に従ってMSD V-Plexアッセイ(Meso Scale Discovery、米国ロックビル)によって処置したPBMC上清中で数量化した。
ヒト及び他の動物組織のIHC染色を次のように行った。様々な供給源から器官を採取し、凍結させ、次いで、6G11及び7C07クローンでの免疫染色の前に切開した。過酸化水素ブロックを用いないTyramide Signal Amplification(TSA、PerkinElmer)増幅を使用して、組織反応性を検出した。いかなる非hFcγRIIB特異性結合をも同定するために、抗原陰性組織を含めた。
インビトロで実験群間の差異を比較するために、両側(two-tailed)t検定分析を行った。インビボで実験群間の生存の差異を査定するために、カプランマイヤー曲線を生成し、ログランク検定によって分析した。2つより多くの群を含むインビボ実験では、二元配置分散分析または一元配置分散分析を使用した。インビボでの客観的応答または完全応答の差異については、カイ二乗検定を使用した。統計分析は、GraphPadPrismソフトウェア(Windowsではバージョン5)を使用して行った。
hFcγRIIB2導入遺伝子を、異なるエクソン及びイントロンの接合部を標的とするプライマーを使用した重複PCR反応によって、RajiゲノムDNA及びcDNAから構築した。この発現カセットは、hFcγRIIBプロモーター22エクソン1/2、イントロン2~3、及びエクソン3~7(2.4kb)を含み、NotI部位及びXbaI部位を介してpcDNA3(Invitrogen)にまずクローン化され、ベクターのBGH polyA配列に連結された。このコンストラクト(polyA配列を含む)は3517bpの長さであり、NotI部位及びSmaI部位を介してベクターpBC-SK(Stratagene)にさらにサブクローニングされた。コンストラクトの機能発現は、AT10-FITCを使用したフローサイトメトリによって、一過性にトランスフェクトされたIIA1.6細胞内で確認した。ベクター配列を欠く精製された発現カセットを、FVB/N接合体の雄性前核内に微量注入した。Tgマウスを、PCR(耳先から抽出されたゲノムDNAからのcDNA断片のエクソン3~7の増幅)、またはAT10-FITCを使用した末梢血のフローサイトメトリのいずれかによってスクリーニングした。得られたTg陽性ファウンダーを、10超の世代のC57BL/6またはBALB/cマウスに戻し交配した。対応するマウス受容体を欠くhFcγRIIB Tgマウスを、マウスFcγRIIB-/-マウスと交雑させることにより生成した。得られたマウスを、次いでhCD20 Tgマウスと交雑させて、hCD20×hFcγRIIB+/-×mFcγRIIB-/-後代を作製した。
BIAcore T100分析機(GE Healthcare、英国)を使用して、他で説明されているようにhFcγRIIB mAbの結合親和性を決定した25。製造業者の指示に従って標準的なアミンカップリングを使用し、mAbをCM5センサーチップ(GE Healthcare、英国)上に固定化した。可溶性hFcγRIIB(0.16~100nM;R&D Systems、英国)を5分間注入し、解離を10分間監視した。対照フローセルに対する背景結合を監視し、自動的に減算した。KD値は、BIAcore T100評価ソフトウェアを使用し、1:1結合モデルから計算した。
皮下細胞株異種移植腫瘍モデル:SCIDマウス(3~6マウス/群)に、成長因子を低減させたMatrigel Matrix(BD Biosciences、英国)内の5×106個のDaudi細胞またはRaji細胞を、0日目に皮下注入し、その後、週に1回、7日目、14日目、21日目、及び28日目に治療用mAbで処置した。NOD.SCIDマウスに、10×106個のJeko-1細胞を0日目に皮下注入した。腫瘍成長を監視し、腫瘍が4×4mmに達したとき、マウスをランダム化し、週に2回10mg/kgの治療用mAbで処置した。キャリパーを使用して腫瘍成長を経時的に監視し、以下の等式を使用して腫瘍サイズを推定した:
[重量=(長さ×幅2)/2]
新鮮な血液、または(血清非含有CTL培地内で)5倍に希釈したヘパリン処置血液を、96ウェルプレート(U底)内で培養し、37℃で24時間、10μg/mlのmAbで処置し、その後、後続の分析のために上清を採取した。サイトカイン(IL-1β、-2、-4、-6、-10、IFN-γ、及びTNF-α)を、製造業者の指示に従ってMSD V-Plexアッセイ(Meso Scale Discovery、米国ロックビル)によって、処置した全血または希釈血液の上清中で数量化した。
切開のための組織を、ドライアイスの土台上のイソペンタン中に置かれたOCT培地(RA Lamb、Thermo Shandon)内で凍結させた。10μmの凍結切片をアセトン中で固定し、5%の正常なヤギ血清でブロッキングし、hFcγRII/CD32に対するmAb(クローンAT10、インハウスで作製)、mFcγRII/CD32(クローンAT130-2、インハウスで作製29)B細胞(ラット抗マウスCD45R/B220;BD Pharmingen、英国)、濾胞性樹状細胞(ラット抗マウスFDC;BD Pharmingen、英国)、及びマクロファージ(ラット抗マウスF4/80;AbD Serotec、英国)、続いてDyLight594抱合ヤギ抗hIgG(Abcam、英国ケンブリッジ)、及びAF488抱合ヤギ抗ラットIgG(Life Technologies、英国)と共にインキュベートした。切片をVectashield(Vector Laboratories、英国)内に載置し、Plan Achromat 10×0.25対物レンズを使用し、Cell Bソフトウェア下で動作するCC12カラーカメラを備えたCKX41倒立顕微鏡反射蛍光システム(全てOlympus、英国)を使用して、画像を収集した。RGB画像ファイル(TIFF)をAdobe Photoshop(CS6)に移し、赤/緑の画像オーバーレイをコントラスト拡張して、グレースケール全体を使用した。
血液試料または脾臓を、同齡かつ同性のC57BL/6マウス、mFcγRII-/-マウス、及びmFcγRII-/-×hFcγRIIb+/-マウスから採取した。脾臓を、100μmの細胞ストレーナー(BD)を通過させることによって均質化させ、次いで完全RPMI内で洗浄し、5mlのPBS中に再懸濁させ、1管当たり200μlの細胞懸濁液をフローサイトメトリに使用した。10μg/mlの抗マウスFcγRII(AT130-2 F(ab’)2-FITC)、抗ヒトFcγRII(AT10 F(ab’)2-FITC)、または無関係の対照(3G8 F(ab’)2-FITC)(全てインハウスで生成及び標識した)、加えて以下:抗マウスCD19(1D3-PE、インハウス)、抗マウスNK1.1(PK136-AlexaFluor 647)、抗マウスCD11b(M1/70-Pacific Blue)、抗マウスCD11c(N418-PE-Cy7)、抗マウスLy-6-G(1A8-APC-Cy7)、抗マウスLy-6C(HK1.4-PerCP-Cy5.5;別段の記載がない限り全てBioLegend)で、試料を染色した。細胞を4℃で30分間染色し、次いで1mlの赤血球溶解緩衝液を添加し(AbD Serotec、英国)、細胞を遠心分離し、次いで1回洗浄し、FACs Cantoで分析した。デブリ及びCD11chigh細胞を除外し、好中球はCD19-CD11b+NK1.1-Ly-6G+であった。
hFcγRIIBのFc結合ドメインに特異的なmAbの作製及び特徴付け。
I型CD20 mAbであるリツキシマブに対する抵抗性は、一部のリンパ腫患者では、部分的には腫瘍からのその内部移行によって説明され得ること、また、標的B細胞表面上の抑制性FcγRIIB/CD32Bの発現がこのプロセスを促進することが、近年報告されている13、23。この仮説と一致して、AT10とリツキシマブとのインビボの同時投与は、hCD20及びhFcγRIIBが腫瘍上で同時発現される2つの異なるリンパ腫異種移植モデルにおいて相加/相乗的な抗腫瘍応答をもたらした(図7)。
リツキシマブと一緒のhFcγRIIB+veB細胞のインキュベーションは、hFcγRIIBを介する抑制性シグナル伝達を誘発し、hFcγRIIB細胞質ITIMモチーフのリン酸化に関連する31~33。本発明者らは、この受容体の免疫抑制機能に基づいて、CD20内部移行及びhFcγRIIB活性化/リン酸化の遮断の両方を防止することができるmAbが、治療学的関心の対象となるであろうと推測した。したがって、14個のhFcγRIIB特異性mAbを、非ホジキンリンパ腫Raji B細胞内のFcγRIIBリン酸化を制御するそれらの能力についてスクリーニングした。可変ドメイン依存性様式で抗体媒介性作用を査定するために、定常Fcドメインを介してFcγRに結合することができないN297Q変異を定常領域内に保有する抗体変異体を設計した(以下を参照のこと)34。hFcγRIIB mAbを用いたRaji細胞の短期処置(30分間)は、2つの異なる応答、すなわち、hFcγRIIB ITIMの高レベルのリン酸化を誘発したmAb(例えば、クローン5C04及び6G08)、ならびに、クローン6G11及び7C07といった、作用をほとんどまたは全く及ぼさなかったmAbをもたらした(図2A)。同様の観察が、初代CLL細胞、扁桃、及び単球で見られた(図9B及び9C、データは示されていない)。これらのデータは、hFcγRIIBを活性化させることなくこの受容体に対する免疫複合体の結合を遮断することができるhFcγRIIB mAbが、成功裏に作製されたことを実証する。
一部のmAbの拮抗性作用が、賦活性FcγR発現免疫細胞と生産的に結合する野生型hIgG1フォーマット内で保持されたという所見は、これらのmAbが内因性Fc:FcγR依存性抗腫瘍活性を有し得ることを示唆した。したがって、そのような作用について本発明者らのhFcγRIIB mAbをスクリーニングした。初代NK細胞と一緒のオプソニン化標的Raji細胞のインキュベーションは、拮抗性mAb 7C07及び6G11が、リツキシマブ自体から誘起されるものよりも高い、最も高い細胞傷害活性も有したことを実証した(図10A及びB)。これら2つのクローンが、リツキシマブ内部移行の遮断及びADCCの誘起において最も高い親和性、最も強力な活性を有したことを証明したので、次に、FcγRを発現することが知られるヒト及び動物組織のパネルに対するそれらの結合性を査定した。クローン7C07及び6G11の両方が、ヒト脾臓及び扁桃内のリンパ球を特異的に染色した(図3A、データは示されていない)。7C07と6G11のいずれも、カニクイザル、ラット、ウサギ、またはマウスにおけるリンパ球と反応せず、これらのmAbが他の種におけるFcγRIIBと交差反応性でないことが示された(図3A、データは示されていない)。しかしながら、6G11ではなくクローン7C07は、ヒト及び他の種からの脾臓の類洞及びリンパ節組織を同様に染色し、望まれない交差反応性が示された(図3A及び図11A)。野生型及びN297Q mAbは同等に染色することが示され(図11B)、他のヒト組織上でさらなる予期しない交差反応性は観察されなかった(図11C)。この反応性プロファイルに基づいて、クローン6G11を本発明者らの有力臨床候補として選択した。
上で考察されたように、hFcγRIIBは、標的B細胞上(ここでそれは、細胞表面からのリツキシマブの望ましくない除去を媒介する)、及びマクロファージなどの重要な免疫エフェクター細胞上(ここでそれは、抗癌抗体応答を弱めるように機能する)の両方で発現される5~7、35。hFcγRIIBを全身的に標的とすることが関連性のあるhFcγRIIB発現細胞型に及ぼす影響を理解するために、hFcγRIIBプロモーターの制御下でhFcγRIIB遺伝子を発現するマウスを作製した(図14A及びB)。TgマウスにおけるhFcγRIIBの発現及び分配は、mFcγRIIとは異なり、好中球上ではなくBリンパ球、BMDM、及び単球上で強力に発現される、ヒト組織におけるものに酷似する(図14C~F、示されていない)。さらに、同等の発現がmFcγRII-/-背景内で維持され、内在性マウス抑制性FcγRからの合併症の非存在下でhFcγRIIBの作用を研究することが可能であった。重要なことに、6G11の拮抗性活性がこれらのマウスにおいて保持された(図14(5/5)。加えて、内皮細胞上のhFcγRIIB発現は、野生型マウスにおける発現よりも低く、ヒトにおける発現により類似した(図14(5/5)。
標的hFcγRIIB単独またはリツキシマブとの組み合わせの枯渇可能性を、hIgG1 6G11及びmIgG1 AT10の両方を使用して査定した。まず、CFSE+vehFcγRIIB+/-×mFcγRII-/-脾細胞野生型受容者に注入し、その結果、6G11(図4A及びB)またはAT10(図15A)で処置した短期養子移入アッセイ23では、移植細胞は、血液循環及び脾臓から効率的に枯渇されたことが観察された。興味深いことに、1μgと低いmAbの投与は、約50%のB細胞枯渇を誘起するのに十分であった。F(ab’)2断片及びN297Q変異体で活性が失われ、またhFcγRIIB+ve標的が賦活性FcγRを欠くγ鎖-/-マウスにおいて欠失しなかったため、枯渇は全面的にFc:賦活性FcγR相互作用に依存した(図4A及びBならびに図15A)。これらのデータは、以前に示されているように、拮抗性hFcγRII mAbが、免疫エフェクター細胞上の賦活性FcγRとの相互作用に依存して、標的細胞をインビボで欠失させることができることを裏付ける36。
6G11がII型hCD20 mAb(これは、I型CD20 mAbと同じ程度まで内部移行せず13、23、33、CLLにおける使用に近年認可された)との組み合わせにおいても効果的であったかどうかを精査するために、養子移入モデルにおける実験を行った。リツキシマブについては、GA101gly(グリコシル化オビヌツズマブ)及び6G11単独療法の両方が、脾性及び循環性の標的CFSE+vehCD20+/-×hFcγRIIB+/-×mFcγRII-/-B細胞の中程度の枯渇をもたらしたが、一方で、併用療法は、野生型及びhFcγRIIB+/-×mFcγRII-/-受容マウスにおける脾性及び循環性の標的細胞の両方の枯渇を著しく増進した(図4F及びG、データは示されていない)。これらのデータは、6G11が、直接B細胞を標的とする他のmAbと組み合わせても効果的であることを示唆する。
リツキシマブは、いくつかのB細胞悪性腫瘍の処置を改善するために成功裏に用いられてきたが、CLLの制御における活性は限定されている。血液中の初期の末梢性枯渇にもかかわらず、二次リンパ組織及びいわゆる増殖中心からの効果的な腫瘍減量はそれほど成功しない。したがって、CLL細胞に対する6G11の抗腫瘍活性をより良好に査定するために、初代ヒトCLL細胞が二次リンパ器官(脾臓及び骨髄)に帰巣し、支持性のヒトT細胞と並んでクラスター状に増殖し、それによりヒト疾患における状況を綿密に模倣する、動物モデルを開発した(図5A及びB)。このモデルにおいて、リツキシマブは腹膜腔内に存在するCLL細胞を枯渇させるのに効果的であるが、脾臓内に存在する増殖中心内のCLL細胞を枯渇させるのには完全に効果的ではない(図16)。
その後、リツキシマブの存在下または非存在下で、リツキシマブ及び/またはアレムツズマブ(hCD52 mAb)不応性患者から単離したCLL細胞を移植したマウスを処置する、6G11の能力を検査した(表4)。予想通り、リツキシマブ単独での細胞の枯渇は不十分であったが、これは6G11の存在下で著しく向上した(図5F)。さらに、併用療法を受けたより多くの難治性CLL細胞移植マウスが、この組み合わせとの部分的応答を達成した(図5G)。これらのデータは、6G11がリツキシマブ感応性患者群及び不応性患者群の両方でリツキシマブの有効性を後押しすることができるという奨励を提供する。
他の型の悪性B細胞を標的とする6G11の能力を評価するために、Jeko MCL細胞または新鮮に単離した初代MCL細胞(それぞれ図17A及びB)を移植した免疫不全マウスモデルを使用した。マウスにJeko MCL細胞を移植したとき、6G11またはリツキシマブのいずれかを用いた単独療法は長期生存をもたらさなかったが、一方で、この組み合わせは、マウスの約30%を100日まで治癒するのに効果的であった。同様に、初代CLL細胞と同じく、初代MCL細胞は併用療法に好ましく応答した(図17B)。
次に、6G11 mAb処置の安全性を確認するため、hFcγRIIB+/-×mFcγRII-/-マウスのコホートを1、10、または100mg/kgの6G11の単回注射で処置する用量漸増研究を行い、静脈内及び腹腔内の投与経路の両方を10mg/kg用量において検査した(図18A)。処置されたマウスのいずれも、急性作用、苦痛、または体重減少などの有害事象を被らなかった(図17B)。7日目の組織検査は、器官(腎臓、脳、脾臓、肝臓、肺)内のいかなる全毒性も示さなかった(データは示されていない)。hFcγRIIB+veB細胞の枯渇が、10及び100mg/kg群において同等の活性と共に、1mg/kg超の用量において血液(図6A)及び脾臓(図6B)の両方で観察され、有効性が示された。6G11は、マウスの血清中で容易に検出されるが本質的に免疫原性である完全ヒトmAbであり、そのため、その半減期及びマウス抗ヒト抗体(MAHA)応答の根拠を同時に査定した(図6C及びD)。これらのデータは、1mg/kg超の用量において、PKプロファイルに影響する標的媒介性クリアランスが克服され、10及び100mg/kg群に見られる標的結合の作用はほとんどまたは全くなかったことを示す。しかしながら、7日以内に、mAbの急速なクリアランスをもたらす著しいMAHAが観察された(10mg/kgの静脈内群において4日目から7日目に4桁増加、図6D)。投与後の著しいMAHA出現前の始めの4日に基づいて、抗体の半減期は、10及び100mg/kg用量については2~4日間の領域内であると推定する(図6C及びDならびに表3)。
近年の観察は、FcγRIIB依存性内部移行が、リツキシマブ以外のいくつかの臨床的関連性のある抗体に対する抵抗性の根底にあり得ることを示す(Vaughan et al.,2014)、(Pallasch et al.,2014)。したがって、6G11を、近年認可されたhCD20 mAbであるオビヌツズマブ(GA101)、及び臨床的に十分に検証されているhCD52特異性mAbであるアレムツズマブと組み合わせることを検査した。hCD20に対するオビヌツズマブの特異性により、同系のマウスモデルにおける作用を研究することが可能となった。GA101及び6G11単独療法の両方が、脾細胞及び循環B細胞の中程度の枯渇をもたらしたが、一方で、この組み合わせは、野生型(図5(2/2)及びhFcγRIIB+/-×mFcγRII-/-マウスにおける枯渇を著しく増進した(図6F及びS6G)。6G11をGA101と組み合わせると、CLL患者異種移植マウスモデルにおける脾臓腫瘍細胞の枯渇が著しく向上した(図5(2/2)ならびに表5及び8)。hCD52に対するアレムツズマブの特異性は同系のhCD20モデルにおける研究の妨げとなったが、CLLマウスモデルにおいて6G11とアレムツズマブとを組み合わせると治療活性が著しく向上し、併用処置マウスの90%超がCRを顕した(図5(2/2)ならびに表5及び8)。
癌細胞は高度に増殖性であり、本質的にゲノム不安定であり、高い変異の傾向を有する。これらの様相は、遺伝学的に異なる処置抵抗性のクローンが出現し、処置の失敗につながる、選択された従来の抗癌薬の下での細胞進化に最適な環境を提供する。この能力は、DNA損傷化学療法38、ならびに明確に異なるシグナル伝達経路を標的とする小分子阻害薬、例えばイマチニブ、エルロチニブ、及びイブルチニブなど39~43に対して発達する抵抗性機構において明らかに明白である。そのような機構は、標的受容体の変異または下流シグナル伝達タンパク質の代償性変化を伴う44。その他は、薬物排出ポンプの上方制御により達成される多剤抵抗性機構を伴う(45にて査読)。従来型及び標的小分子阻害薬の失敗は、これらの様態の抵抗性を克服するための手段、そしてまた免疫系を働かせる療法を含む代替的療法の探索につながっている。
1.Reichert,J.M.& Dhimolea,E.The future of antibodies as cancer drugs.Drug Discov Today 17,954-963(2012)。
2.Nimmerjahn,F.& Ravetch,J.V.FcgammaRs in health and disease.Curr Top Microbiol Immunol 350,105-125(2011)。
3.Nimmerjahn,F.& Ravetch,J.V.Fcgamma receptors as regulators of immune responses.Nature reviews 8,34-47(2008)。
4.Chao,M.P.,et al.Anti-CD47 antibody synergizes with rituximab to promote phagocytosis and eradicate non-Hodgkin lymphoma.Cell 142,699-713(2010)。
5.Clynes,R.A.,Towers,T.L.,Presta,L.G.& Ravetch,J.V.Inhibitory Fc receptors modulate in vivo cytoxicity against tumor targets.Nature medicine 6,443-446(2000)。
6.Minard-Colin,V.,et al.Lymphoma depletion during CD20 immunotherapy in mice is mediated by macrophage FcgammaRI,FcgammaRIII,and FcgammaRIV.Blood 112,1205-1213(2008)。
7.Hamaguchi,Y.,Xiu,Y.,Komura,K.,Nimmerjahn,F.& Tedder,T.F.Antibody isotype-specific engagement of Fcgamma receptors regulates B lymphocyte depletion during CD20 immunotherapy.The Journal of experimental medicine 203,743-753(2006)。
8.Beers,S.A.,et al.Antigenic modulation limits the efficacy of anti-CD20 antibodies:implications for antibody selection.Blood 115,5191-5201(2010)。
9.Dyer,M.J.,Hale,G.,Hayhoe,F.G.& Waldmann,H.Effects of CAMPATH-1 antibodies in vivo in patients with lymphoid malignancies:influence of antibody isotype.Blood 73,1431-1439(1989)。
10.Weng,W.K.& Levy,R.Two immunoglobulin G fragment C receptor polymorphisms independently predict response to rituximab in patients with follicular lymphoma.J Clin Oncol 21,3940-3947(2003)。
11.Cartron,G.,et al.Therapeutic activity of humanized anti-CD20 monoclonal antibody and polymorphism in IgG Fc receptor FcgammaRIIIa gene.Blood 99,754-758(2002)。
12.Lim,S.H.,et al.Anti-CD20 monoclonal antibodies:historical and future perspectives.Haematologica 95,135-143(2010)。
13.Lim,S.H.,et al.Fc gamma receptor IIb on target B cells promotes rituximab internalization and reduces clinical efficacy.Blood(2011)。
14.Lee,C.A.-K.,Margaret;Cogliatti,Sergio;Crowe,Susanne;Cragg,Mark S;Schmitz,Shu-Fang H;Ghielmini,Michele and Peter W Johnson.Expression of Inhibitory Fc Receptor(FcgRIIB)Is a Marker of Poor Response to Rituximab Monotherapy in Follicular Lymphoma(FL).ASH abstract 50396(2012)。
15.Beers,S.A.,et al.Type II(tositumomab)anti-CD20 monoclonal antibody out performs type I(rituximab-like)reagents in B-cell depletion regardless of complement activation.Blood 112,4170-4177(2008)。
16.Roghanian,A.,et al.Filament-associated TSGA10 protein is expressed in professional antigen presenting cells and interacts with vimentin.Cellular immunology 265,120-126(2010).
17.Williams,E.L.,et al.Immunotherapy Targeting Inhibitory Fcgamma Receptor IIB(CD32b)in the Mouse Is Limited by Monoclonal Antibody Consumption and Receptor Internalization.J Immunol 191,4130-4140(2013)。
18.Glennie,M.J.,McBride,H.M.,Worth,A.T.& Stevenson,G.T.Preparation and performance of bispecific F(ab’ gamma)2 antibody containing thioether-linked Fab’ gamma fragments.J Immunol 139,2367-2375(1987)。
19.Greenman,J.,et al.Characterization of a new monoclonal anti-Fc gamma RII antibody,AT10,and its incorporation into a bispecific F(ab’)2 derivative for recruitment of cytotoxic effectors.Mol Immunol 28,1243-1254(1991)。
20.Tutt,A.L.,et al.Monoclonal antibody therapy of B cell lymphoma:signaling activity on tumor cells appears more important than recruitment of effectors.J Immunol 161,3176-3185(1998)。
21.Olsson,N.,et al.Proteomic analysis and discovery using affinity proteomics and mass spectrometry.Mol Cell Proteomics 10,M110 003962(2011)。
22.Nishimura,T.,et al.Characterization of the human Fc gamma RIIB gene promoter:human zinc-finger proteins(ZNF140 and ZNF91)that bind to different regions function as transcription repressors.Int Immunol 13,1075-1084(2001)。
23.Beers,S.A.,et al.Antigenic modulation limits the efficacy of anti-CD20 antibodies:implications for antibody selection.Blood 115,5191-5201(2010)。
24.Binyamin,L.,et al.Blocking NK cell inhibitory self-recognition promotes antibody-dependent cellular cytotoxicity in a model of anti-lymphoma therapy.J Immunol 180,6392-6401(2008)。
25.Williams,E.L.,et al.Development and characterisation of monoclonal antibodies specific for the murine inhibitory FcgammaRIIB(CD32B).European journal of immunology(2012)。
26.Walshe,C.A.,et al.Induction of cytosolic calcium flux by CD20 is dependent upon B Cell antigen receptor signaling.The Journal of biological chemistry 283,16971-16984(2008)。
27.Beers,S.A.,Chan,C.H.,French,R.R.,Cragg,M.S.& Glennie,M.J.CD20 as a target for therapeutic type I and II monoclonal antibodies.Semin Hematol 47,107-114(2010)。
28.Romer,P.S.,et al.Preculture of PBMCs at high cell density increases sensitivity of T-cell responses,revealing cytokine release by CD28 superagonist TGN1412.Blood 118,6772-6782(2011)。
29.Williams,E.L.,et al.Development and characterisation of monoclonal antibodies specific for the murine inhibitory FcgammaRIIB(CD32B).European journal of immunology 42,2109-2120(2012)。
30.Hallborn,J.& Carlsson,R.Automated screening procedure for high-throughput generation of antibody fragments.Biotechniques Suppl,30-37(2002)。
31.Cragg MS,A.A.,O’Brien L,Tutt A,Chan HTC,Anderson VA,Glennie MJ.Opposing properties of CD20 mAb.in Leukocyte Typing VII 95-97(Oxford University Press,Oxford,2002)。
32.Lim,S.H.,et al.Fc gamma receptor IIb on target B cells promotes rituximab internalization and reduces clinical efficacy.Blood 118,2530-2540(2011)。
33.Vaughan,A.T.,et al.Inhibitory FcgammaRIIb(CD32b)becomes activated by therapeutic mAb in both cis and trans and drives internalization according to antibody specificity.Blood 123,669-677(2014)。
34.Tao,M.H.& Morrison,S.L.Studies of aglycosylated chimeric mouse-human IgG.Role of carbohydrate in the structure and effector functions mediated by the human IgG constant region.J Immunol 143,2595-2601(1989)。
35.Montalvao,F.,et al.The mechanism of anti-CD20-mediated B cell depletion revealed by intravital imaging.The Journal of clinical investigation(2013)。
36.Rankin,C.T.,et al.CD32B,the human inhibitory Fc-gamma receptor IIB,as a target for monoclonal antibody therapy of B-cell lymphoma.Blood 108,2384-2391(2006)。
37.Hu,C.Y.,et al.Treatment with CD20-specific antibody prevents and reverses autoimmune diabetes in mice.The Journal of clinical investigation 117,3857-3867(2007)。
38.Rossi,D.,et al.Clinical impact of small TP53 mutated subclones in chronic lymphocytic leukemia.Blood(2014)。
39.Zhang,J.,Yang,P.L.& Gray,N.S.Targeting cancer with small molecule kinase inhibitors.Nat Rev Cancer 9,28-39(2009)。
40.Pao,W.,et al.Acquired resistance of lung adenocarcinomas to gefitinib or erlotinib is associated with a second mutation in the EGFR kinase domain.PLoS Med 2,e73(2005)。
41.Yun,C.H.,et al.The T790M mutation in EGFR kinase causes drug resistance by increasing the affinity for ATP.Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America 105,2070-2075(2008)。
42.Shah,N.P.,et al.Multiple BCR-ABL kinase domain mutations confer polyclonal resistance to the tyrosine kinase inhibitor imatinib(STI571)in chronic phase and blast crisis chronic myeloid leukemia.Cancer Cell 2,117-125(2002)。
43.Corbin,A.S.,Buchdunger,E.,Pascal,F.& Druker,B.J.Analysis of the structural basis of specificity of inhibition of the Abl kinase by STI571.The Journal of biological chemistry 277,32214-32219(2002)。
44.Engelman,J.A.,et al.MET amplification leads to gefitinib resistance in lung cancer by activating ERBB3 signaling.Science(New York,N.Y 316,1039-1043 (2007)。
45.Cragg,M.S.,Harris,C.,Strasser,A.& Scott,C.L.Unleashing the power of inhibitors of oncogenic kinases through BH3 mimetics.Nat Rev Cancer 9,321-326(2009)。
46.Hanahan,D.& Weinberg,R.A.Hallmarks of cancer:the next generation.Cell 144,646-674(2011)。
47.Williams,E.L.,et al.Overcoming resistance to therapeutic antibodies by targeting Fc Receptors.Resistance to Immunotherapeutic Antibodies in Cancer:Strategies to Overcome Resistance.Pubs.Springer In Press(2013)。
48.Vaughan,A.T.,et al.Inhibitory FcγRIIb(CD32b)becomes activated by therapeutic mAb in both cis and trans and drives internalization according to antibody specificity.Blood(2013)。
49.Pallasch,C.P.,et al.Sensitizing protective tumor microenvironments to antibody-mediated therapy.Cell 156,590-602(2014)。
50.Veri,M.C.,et al.Monoclonal antibodies capable of discriminating the human inhibitory Fcgamma-receptor IIB(CD32B)from the activating Fcgamma-receptor IIA(CD32A):biochemical,biological and functional characterization.Immunology 121,392-404(2007)。
51.O’Brien,S.M.,et al.Rituximab dose-escalation trial in chronic lymphocytic leukemia.J Clin Oncol 19,2165-2170(2001)。
52.Coiffier,B.,et al.Safety and efficacy of ofatumumab,a fully human monoclonal anti-CD20 antibody,in patients with relapsed or refractory B-cell chronic lymphocytic leukemia:a phase 1-2 study.Blood 111,1094-1100(2008)。
53.Coiffier,B.,et al.Significant Correlation between Survival Endpoints and Exposure to Ofatumumab(HuMax-CD20)in Chronic Lymphocytic Leukemia.ASH Annual Meeting Abstracts 108,2842-(2006)。
54.Shawn Rose,Alexander Misharin,Harris Perlman,2012,A novel Ly6c/Ly6G-based strategy to analyse the mouse splenic myeloid compartment,Cytometry Part A 81(4):343-50
55.Beers,S.A.,French,R.R.,Chan,H.T.,Lim,S.H.,Jarrett,T.C.,Vidal,R.M.,Wijayaweera,S.S.,Dixon,S.V.,Kim,H.,Cox,K.L.,et al.(2010).Antigenic modulation limits the efficacy of anti-CD20 antibodies:implications for antibody selection.Blood 115,5191-5201。
56.Biburger,M.,Aschermann,S.,Schwab,I.,Lux,A.,Albert,H.,Danzer,H.,Woigk,M.,Dudziak,D.,and Nimmerjahn,F.(2011).Monocyte subsets responsible for immunoglobulin G-dependent effector functions in vivo.Immunity 35,932-944。
57.Coiffier,B.,Lepretre,S.,Pedersen,L.M.,Gadeberg,O.,Fredriksen,H.,van Oers,M.H.,Wooldridge,J.,Kloczko,J.,Holowiecki,J.,Hellmann,A.,et al.(2008).Safety and efficacy of ofatumumab,a fully human monoclonal anti-CD20 antibody,in patients with relapsed or refractory B-cell chronic lymphocytic leukemia:a phase 1-2 study.Blood 111,1094-1100。
58.Coiffier,B.,Tilly,H.,Pedersen,L.M.,Plesner,T.,Frederiksen,H.,van Oers,M.H.J.,Wooldridge,J.,Kloczko,J.S.,Holowiecki,J.,Hellmann,A.,et al.(2006).Significant Correlation between Survival Endpoints and Exposure to Ofatumumab(HuMax-CD20)in Chronic Lymphocytic Leukemia.ASH Annual Meeting Abstracts 108,2842-。
59.Cragg,M.S.,Morgan,S.M.,Chan,H.T.,Morgan,B.P.,Filatov,A.V.,Johnson,P.W.,French,R.R.,and Glennie,M.J.(2003).Complement-mediated lysis by anti-CD20 mAb correlates with segregation into lipid rafts.Blood 101,1045-1052。
60.Gul,N.,Babes,L.,Siegmund,K.,Korthouwer,R.,Bogels,M.,Braster,R.,Vidarsson,G.,Ten Hagen,T.L.,Kubes,P.,and van Egmond,M.(2014).Macrophages eliminate circulating tumor cells after monoclonal antibody therapy.The Journal of clinical investigation 124,812-823.
61.Hamaguchi,Y.,Xiu,Y.,Komura,K.,Nimmerjahn,F.,and Tedder,T.F.(2006).Antibody isotype-specific engagement of Fcgamma receptors regulates B lymphocyte depletion during CD20 immunotherapy.The Journal of experimental medicine 203,743-753。
62.Hussain,K.,Hargreaves,C.E.,Roghanian,A.,Oldham,R.J.,Chan,H.T.,Mockridge,C.I.,Chowdhury,F.,Frendeus,B.,Harper,K.S.,Strefford,J.C.,et al.(2015).Upregulation of FcgammaRIIb on monocytes is necessary to promote the superagonist activity of TGN1412.Blood 125,102-110。
63.Lim,S.H.,Vaughan,A.T.,Ashton-Key,M.,Williams,E.L.,Dixon,S.V.,Chan,H.T.,Beers,S.A.,French,R.R.,Cox,K.L.,Davies,A.J.,et al.(2011).Fc gamma receptor IIb on target B cells promotes rituximab internalization and reduces clinical efficacy.Blood 118,2530-2540。
64.O’Brien,S.M.,Kantarjian,H.,Thomas,D.A.,Giles,F.J.,Freireich,E.J.,Cortes,J.,Lerner,S.,and Keating,M.J.(2001).Rituximab dose-escalation trial in chronic lymphocytic leukemia.J Clin Oncol 19,2165-2170。
65.Pallasch,C.P.,Leskov,I.,Braun,C.J.,Vorholt,D.,Drake,A.,Soto-Feliciano,Y.M.,Bent,E.H.,Schwamb,J.,Iliopoulou,B.,Kutsch,N.,et al.(2014).Sensitizing protective tumor microenvironments to antibody-mediated therapy.Cell 156,590-602。
66.Romer,P.S.,Berr,S.,Avota,E.,Na,S.Y.,Battaglia,M.,ten Berge,I.,Einsele,H.,and Hunig,T.(2011).Preculture of PBMCs at high cell density increases sensitivity of T-cell responses,revealing cytokine release by CD28 superagonist TGN1412.Blood 118,6772-6782。
67.Vaughan,A.T.,Iriyama,C.,Beers,S.A.,Chan,C.H.,Lim,S.H.,Williams,E.L.,Shah,V.,Roghanian,A.,Frendeus,B.,Glennie,M.J.,and Cragg,M.S.(2014).Inhibitory FcgammaRIIb(CD32b)becomes activated by therapeutic mAb in both cis and trans and drives internalization according to antibody specificity.Blood 123,669-677。
本発明の組成物、及び/または抗体、及び/または薬剤、及び/または薬物は単独で投与されることが可能であるが、1つ以上の許容可能な担体と一緒に薬学的製剤としてそれを提示することが好ましい。この担体(複数可)は、本発明の組成物、及び/または抗体、及び/または薬剤、及び/または薬物と適合性があり、その受容者に有害でないという意味で「許容可能」でなければならない。典型的には、この担体は、無菌かつ発熱物質非含有である水または生理食塩水である。
実施例B:点眼液
実施例C:錠剤製剤
ポビドン溶液を用いた成分の湿式造粒、続いてステアリン酸マグネシウムの添加、及び圧縮によって、以下の製剤A及びBを調製する。
製剤A
製剤B
製剤C
ポビドン溶液を用いた成分(以下)の湿式造粒、続いてステアリン酸マグネシウムの添加、及び圧縮によって、この製剤を調製する。
薬物放出は約6~8時間の期間にわたって起こり、12時間後に完了した。
実施例D:カプセル製剤
製剤A
上記の実施例Cにおける製剤Dの成分を混加し、2部の硬ゼラチンカプセルに充填することによって、カプセル製剤を調製する。製剤B(以下参照)は、同様の様式で調製される。
製剤B
製剤C
押出機を使用して成分a、b、及びcを押し出し、続いて押出物の球形化及び乾燥によって、以下の徐放カプセル製剤を調製する。次いで、乾燥したペレットを放出制御膜(d)でコーティングし、2部の硬ゼラチンカプセルに充填する。
実施例E:注射製剤
10mlまで無菌の発熱物質非含有リン酸緩衝液(pH7.0)を添加
活性成分をリン酸緩衝液(35~40℃)の大部分に溶解させ、次いでメスアップし、滅菌マイクロプローブフィルタを通して無菌の10ml琥珀色ガラスバイアル(1型)内に濾過し、無菌の栓及びオーバーシールで密閉する。
実施例F:筋肉内注入
実施例G:シロップ懸濁液
実施例H:坐薬
Claims (73)
- (i)標的細胞の細胞表面抗原に特異的に結合する抗体分子であって、FcγRIIbに結合することができるFcドメインを有し、前記標的細胞にFcγRIIb依存性様式で内部移行することができる第一抗体分子と、
(ii)FcγRIIbに特異的に結合し、前記標的細胞上に存在するFcγRIIbが前記第一抗体分子の前記Fcドメインに結合するのを防止又は低減して、前記第一抗体分子の前記標的細胞への内部移行を防止または低減し、FcγRIIbシグナル伝達を防止又は低減する第二抗体分子
を組み合わせて含む、組成物であって、
前記第二抗体分子が、抗体、キメラ抗体、一本鎖抗体、Fab、F(ab′)2、Fv、ScFv;または、IgG2抗体;またはIgG4抗体;またはIgG2及びIgG4のキメラ分子;またはN297Q変異を含む抗体変異体であり;
前記組成物が、対象における再発癌及び/または難治性癌の処置に使用するためのものであり、かつ前記対象が、FcγRIIbを発現する標的細胞を有することを特徴とし、
前記再発癌及び/または難治性癌が、前記第一抗体分子による処置に抵抗性を有するものであり、以前に前記対象が前記第一抗体分子で処置され、以前は該処置に対して応答したが、その後再発したものであり、
前記標的細胞がB細胞であり、
前記細胞表面抗原が、CD20及びCD52からなる群より選択される、
組成物。 - 前記難治性癌が、前記対象が癌処置を受けて応答していない場合、及び/または、前記対象が癌処置を受けたが前記処置中に前記癌が前記対象において進行した場合に、難治性癌であると見なされる、請求項1に記載の組成物。
- 前記対象が、前記対象が以前に癌を処置されているが部分寛解以上を達成しない場合に、応答していないと見なされる、請求項2に記載の組成物。
- 前記再発癌が、前記対象が以前に癌を処置されており、以前に前記処置に応答しており、及び後に再発した場合に、再発癌であると見なされる、請求項1に記載の組成物。
- 前記対象が、
(i)処置後に少なくとも部分寛解を達成し、及び/または前記対象が処置後に少なくとも完全寛解を達成するが、
(ii)前記癌が前記処置の休止後に前記対象において進行した場合に、前記対象が後に再発したと見なされる、
請求項4に記載の組成物。 - 前記対象が前記処置の休止の約1ヶ月超後に再発している、請求項5に記載の組成物。
- 前記対象が前記処置の休止の約1ヶ月超後、または約2ヶ月超後、または約3ヶ月超後、または約4ヶ月超後、または約5ヶ月超後、または約6ヶ月超後、または約7ヶ月超後、または約8ヶ月超後、または約9ヶ月超後、または約10ヶ月超後、または約11ヶ月超後、または約12ヶ月超後、または約2年超後、または約3年超後、または約4年超後、または約5年超後、または約6年超後、または約7年超後、または約8年超後、または約9年超後、または約10年超後に再発している、請求項5または6に記載の組成物。
- 前記対象が、再発癌の特徴を少なくとも1回、または少なくとも2回、または少なくとも3回、または少なくとも4回、または少なくとも5回、または少なくとも6回、または少なくとも7回、または少なくとも8回、または少なくとも9回、または少なくとも10回示す、請求項4~7のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記処置が抗体治療であり、前記第二抗体分子の非存在下で投与された前記第一抗体分子による処置である、請求項2~8のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記処置が、1つ以上の治療薬を含む、請求項9に記載の組成物。
- 前記標的細胞が、上昇したレベルのFcγRIIb発現を有する、請求項1~10のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記標的細胞上の上昇したFcγRIIb発現が、対照と比較して決定される、請求項11に記載の組成物。
- 前記対照が、非難治性癌及び/または非再発癌を有する対照個体の対照細胞を含む、請求項12に記載の組成物。
- 前記上昇したFcγRIIb発現が、前記対照と比較したときに前記対象の前記標的細胞において少なくとも2倍高い、請求項12または13に記載の組成物。
- 前記標的細胞が癌細胞である、請求項1~14のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記再発癌、及び/または前記難治性癌、及び/または前記癌細胞、及び/または前記癌が、非ホジキンリンパ腫、濾胞性リンパ腫、びまん性大細胞型B細胞リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、慢性リンパ性白血病、小リンパ球性リンパ腫を含む群から選択される、請求項1~15のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記対象が応答していないこと、及び/または対象における部分寛解、及び/または対象における完全寛解、及び/または癌が対象において進行していることが、
(i)リンパ球数、及び/または
(ii)好中球数、及び/または
(iii)血小板数、及び/または
(iv)ヘモグロビン数、及び/または
(v)腫瘍細胞の割合、及び/または
(vi)骨髄リンパ球の割合、及び/または
(vii)循環リンパ球の割合、及び/または
(viii)リンパ球上のバイオマーカーの存在及び/もしくは非存在、及び/または
(ix)癌進行度分類、及び/または
(x)組織学的検査、及び/または
(xi)骨髄検査、及び/または
(xii)細胞遺伝学的検査、及び/または
(xiii)リンパ節評価、及び/または
(xiv)身体的症状、及び/または
(xv)脾臓内の癌細胞の低減
を含む群から1つ以上を測定することによって決定される、請求項2~16のいずれか一項に記載の組成物。 - 前記第二抗体分子が、エフェクター細胞を動員することができるドメインを含まない1つ以上の抗体分子である、請求項1~17のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記第二抗体分子が、モノクローナル抗体分子、ポリクローナル抗体分子、及び二重特異性抗体分子からなる群より選ばれる1つ以上の抗体分子である、請求項1~18のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記第二抗体分子が、以下の相補性決定領域(CDR):
(viii)配列番号93、及び配列番号94、及び配列番号95、または
(ix)配列番号99、及び配列番号100、及び配列番号101、または
(x)配列番号105、及び配列番号106、及び配列番号107、または
(xi)配列番号111、及び配列番号112、及び配列番号113、または
(xii)配列番号117、及び配列番号118、及び配列番号119、または
(xiii)配列番号123、及び配列番号124、及び配列番号125、または
(xiv)配列番号129、及び配列番号130、及び配列番号131、または
(xv)配列番号135、及び配列番号136、及び配列番号137、または
(xvi)配列番号141、及び配列番号142、及び配列番号143、または
(xvii)配列番号147、及び配列番号148、及び配列番号149、または
(xviii)配列番号153、及び配列番号154、及び配列番号155、または
(xix)配列番号159、及び配列番号160、及び配列番号161、または
(xx)配列番号165、及び配列番号166、及び配列番号167、または
(xxi)配列番号171、及び配列番号172、及び配列番号173、または
(xxii)配列番号177、及び配列番号178、及び配列番号179、または
(xxiii)配列番号183、及び配列番号184、及び配列番号185、または
(xxiv)配列番号189、及び配列番号190、及び配列番号191
を有する可変重鎖(VH)を含む、請求項1~19のいずれか一項に記載の組成物。 - 前記第二抗体分子が、以下のCDR:
(viii)配列番号96、及び配列番号97、及び配列番号98、または
(ix)配列番号102、及び配列番号103、及び配列番号104、または
(x)配列番号108、及び配列番号109、及び配列番号110、または
(xi)配列番号114、及び配列番号115、及び配列番号116、または
(xii)配列番号120、及び配列番号121、及び配列番号122、または
(xiii)配列番号126、及び配列番号127、及び配列番号128、または
(xiv)配列番号132、及び配列番号133、及び配列番号134、または
(xv)配列番号138、及び配列番号139、及び配列番号140、または
(xvi)配列番号144、及び配列番号145、及び配列番号146、または
(xvii)配列番号150、及び配列番号151、及び配列番号152、または
(xviii)配列番号156、及び配列番号157、及び配列番号158、または
(xix)配列番号162、及び配列番号163、及び配列番号164、または
(xx)配列番号168、及び配列番号169、及び配列番号170、または
(xxi)配列番号174、及び配列番号175、及び配列番号176、または
(xxii)配列番号180、及び配列番号181、及び配列番号182、または
(xxiii)配列番号186、及び配列番号187、及び配列番号188、または
(xxiv)配列番号192、及び配列番号193、及び配列番号194
を有する可変軽鎖(VL)を含む、請求項1~20のいずれか一項に記載の組成物。 - 前記第二抗体分子が、配列番号10、配列番号11、配列番号12、配列番号13、配列番号14、配列番号15、配列番号16、配列番号17、配列番号18、配列番号19、配列番号20、配列番号21、配列番号22、配列番号23、配列番号24、配列番号25、及び配列番号26からなる群から選択される可変重鎖(VH)アミノ酸配列を有する、請求項1~21のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記第二抗体分子が、配列番号34、配列番号35、配列番号36、配列番号37、配列番号38、配列番号39、配列番号40、配列番号41、配列番号42、配列番号43、配列番号44、配列番号45、配列番号46、配列番号47、配列番号48、配列番号49、及び配列番号50からなる群から選択される可変軽鎖(VL)アミノ酸配列を有する、請求項1~22のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記第二抗体分子が、以下のCDRアミノ酸配列:
(viii)配列番号93、及び配列番号94、及び配列番号95、及び配列番号96、及び配列番号97、及び配列番号98、または
(ix)配列番号99、及び配列番号100、及び配列番号101、及び配列番号102、及び配列番号103、及び配列番号104、または
(x)配列番号105、及び配列番号106、及び配列番号107、及び配列番号108、及び配列番号109、及び配列番号110、または
(xi)配列番号111、及び配列番号112、及び配列番号113、及び配列番号114、及び配列番号115、及び配列番号116、または
(xii)配列番号117、及び配列番号118、及び配列番号119、及び配列番号120、及び配列番号121、及び配列番号122、または
(xiii)配列番号123、及び配列番号124、及び配列番号125、及び配列番号126、及び配列番号127、及び配列番号128、または
(xiv)配列番号129、及び配列番号130、及び配列番号131、及び配列番号132、及び配列番号133、及び配列番号134、または
(xv)配列番号135、及び配列番号136、及び配列番号137、及び配列番号138、及び配列番号139、及び配列番号140、または
(xvi)配列番号141、及び配列番号142、及び配列番号143、及び配列番号144、及び配列番号145、及び配列番号146、または
(xvii)配列番号147、及び配列番号148、及び配列番号149、及び配列番号150、及び配列番号151、及び配列番号152、または
(xviii)配列番号153、及び配列番号154、及び配列番号155、及び配列番号156、及び配列番号157、及び配列番号158、または
(xix)配列番号159、及び配列番号160、及び配列番号161、及び配列番号162、及び配列番号163、及び配列番号164、または
(xx)配列番号165、及び配列番号166、及び配列番号167、及び配列番号168、及び配列番号169、及び配列番号170、または
(xxi)配列番号171、及び配列番号172、及び配列番号173、及び配列番号174、及び配列番号175、及び配列番号176、または
(xxii)配列番号177、及び配列番号178、及び配列番号179、及び配列番号180、及び配列番号181、及び配列番号182、または
(xxiii)配列番号183、及び配列番号184、及び配列番号185、及び配列番号186、及び配列番号187、及び配列番号188、または
(xxiv)配列番号189、及び配列番号190、及び配列番号191、及び配列番号192、及び配列番号193、及び配列番号194
を有する、請求項1~23のいずれか一項に記載の組成物。 - 前記第二抗体分子が、以下のアミノ酸配列:
(viii)配列番号10、及び配列番号34、または
(ix)配列番号11、及び配列番号35、または
(x)配列番号12、及び配列番号36、または
(xi)配列番号13、及び配列番号37、または
(xii)配列番号14、及び配列番号38、または
(xiii)配列番号15、及び配列番号39、または
(xiv)配列番号16、及び配列番号40、または
(xv)配列番号17、及び配列番号41、または
(xvi)配列番号18、及び配列番号42、または
(xvii)配列番号19、及び配列番号43、または
(xviii)配列番号20、及び配列番号44、または
(xix)配列番号21、及び配列番号45、または
(xx)配列番号22、及び配列番号46、または
(xxi)配列番号23、及び配列番号47、または
(xxii)配列番号24、及び配列番号48、または
(xxiii)配列番号25、及び配列番号49、または
(xxiv)配列番号26、及び配列番号50
を有する、請求項1~24のいずれか一項に記載の組成物。 - 前記第二抗体分子が、FcγRIIbが前記抗体分子の前記Fcドメインに結合することを防止または低減するために、請求項21~25に定義された第二抗体分子と競合することができる、請求項1~19のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記第一抗体分子が、CD20に特異的に結合する、請求項1~26のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記第一抗体分子が、I型CD20抗体である、請求項27に記載の組成物。
- 前記第一抗体分子が、II型CD20抗体である、請求項27に記載の組成物。
- 前記I型CD20抗体が、リツキシマブ、またはリツキシマブバイオシミラー、またはオファツムマブである、請求項28に記載の組成物。
- 前記II型CD20抗体が、オビヌツズマブまたはトシツモマブである、請求項29に記載の組成物。
- 前記第一抗体分子が、CD52抗体である、請求項1~26のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記CD52抗体がアレムツズマブである、請求項32に記載の組成物。
- 前記組成物が、1つ以上の治療薬を含む、請求項1~33のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記対象が難治性癌もしくは再発癌を有するか、または前記対象が難治性癌及び再発癌を有する、請求項1~34のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記対象が難治性慢性リンパ性白血病もしくは再発慢性リンパ性白血病を有するか、または前記対象が難治性慢性リンパ性白血病及び再発慢性リンパ性白血病を有する、請求項1~35のいずれか一項に記載の組成物。
- 対象において難治性慢性リンパ性白血病もしくは再発慢性リンパ性白血病を処置するのに用いられる医薬を製造するための、請求項1~36のいずれか一項に記載の組成物の使用。
- 対象における再発癌及び/または難治性癌の処置に使用するためのキットであって、
(i)標的細胞の細胞表面抗原に特異的に結合する抗体分子であって、FcγRIIbに結合することができるFcドメインを有し、前記標的細胞にFcγRIIb依存性様式で内部移行することができる第一抗体分子;
(ii)FcγRIIbに特異的に結合し、前記標的細胞上に存在するFcγRIIbが前記第一抗体分子の前記Fcドメインに結合するのを防止又は低減して、前記第一抗体分子の前記標的細胞への内部移行を防止または低減し、FcγRIIbシグナル伝達を防止又は低減する第二抗体分子であって、
前記第二抗体分子が、抗体、キメラ抗体、一本鎖抗体、Fab、F(ab′) 2 、Fv、ScFv;または、IgG2抗体;またはIgG4抗体;またはIgG2及びIgG4のキメラ分子;またはN297Q変異を含む抗体変異体であり;ならびに
(iii)リツキシマブ、リツキシマブバイオシミラー、オファツムマブ、オビヌツズマブ、アレムツズマブ、ガリキシマブ、トシツモマブ、放射活性のあるトシツモマブ、イブリツモマブ、放射活性のあるイブリツモマブ、抗CD40抗体、抗CD19抗体、抗CD37抗体、B細胞癌の処置に使用される治療用抗体、からなる群から選択される1つ以上の物質、を含み、
前記使用が、対象における再発癌及び/または難治性癌の処置のためのものであり、かつ前記対象が、FcγRIIbを発現する標的細胞を有することを特徴とし、
前記再発癌及び/または難治性癌が、前記第一抗体分子による処置に抵抗性を有するものであり、以前に前記対象が前記第一抗体分子で処置され、以前は該処置に対して応答したが、その後再発したものであり、
前記標的細胞がB細胞であり、
前記細胞表面抗原が、CD20及びCD52からなる群より選択される、
キット。 - 前記難治性癌が、前記対象が癌処置を受けて応答していない場合、及び/または、前記対象が癌処置を受けたが前記処置中に前記癌が前記対象において進行した場合に、難治性癌であると見なされる、請求項38に記載のキット。
- 前記対象が、前記対象が以前に癌を処置されているが部分寛解以上を達成しない場合に、応答していないと見なされる、請求項39に記載のキット。
- 前記再発癌が、前記対象が以前に癌を処置されており、以前に前記処置に応答しており、及び後に再発した場合に、再発癌であると見なされる、請求項38に記載のキット。
- 前記対象が、
(i)処置後に少なくとも部分寛解を達成し、及び/または前記対象が処置後に少なくとも完全寛解を達成するが、
(ii)前記癌が前記処置の休止後に前記対象において進行した場合に、前記対象が後に再発したと見なされる、
請求項41に記載のキット。 - 前記対象が前記処置の休止の約1ヶ月超後に再発している、請求項42に記載のキット。
- 前記対象が前記処置の休止の約1ヶ月超後、または約2ヶ月超後、または約3ヶ月超後、または約4ヶ月超後、または約5ヶ月超後、または約6ヶ月超後、または約7ヶ月超後、または約8ヶ月超後、または約9ヶ月超後、または約10ヶ月超後、または約11ヶ月超後、または約12ヶ月超後、または約2年超後、または約3年超後、または約4年超後、または約5年超後、または約6年超後、または約7年超後、または約8年超後、または約9年超後、または約10年超後に再発している、請求項42または43に記載のキット。
- 前記対象が、再発癌の特徴を少なくとも1回、または少なくとも2回、または少なくとも3回、または少なくとも4回、または少なくとも5回、または少なくとも6回、または少なくとも7回、または少なくとも8回、または少なくとも9回、または少なくとも10回示す、請求項41~44のいずれか一項に記載のキット。
- 前記処置が抗体治療であり、前記第二抗体分子の非存在下で投与された前記第一抗体分子による処置である、請求項39~45のいずれか一項に記載のキット。
- 前記処置が、1つ以上の治療薬を含む、請求項46に記載のキット。
- 前記標的細胞が、上昇したレベルのFcγRIIb発現を有する、請求項38~47のいずれか一項に記載のキット。
- 前記標的細胞上の上昇したFcγRIIb発現が、対照と比較して決定される、請求項48に記載のキット。
- 前記対照が、非難治性癌及び/または非再発癌を有する対照個体の対照細胞を含む、請求項49に記載のキット。
- 前記上昇したFcγRIIb発現が、前記対照と比較したときに前記対象の前記標的細胞において少なくとも2倍高い、請求項49または50に記載のキット。
- 前記標的細胞が癌細胞である、請求項38~51のいずれか一項に記載のキット。
- 前記再発癌、及び/または前記難治性癌、及び/または前記癌細胞、及び/または前記癌が、非ホジキンリンパ腫、濾胞性リンパ腫、びまん性大細胞型B細胞リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、慢性リンパ性白血病、小リンパ球性リンパ腫を含む群から選択される、請求項38~52のいずれか一項に記載のキット。
- 前記対象が応答していないこと、及び/または対象における部分寛解、及び/または対象における完全寛解、及び/または癌が対象において進行していることが、
(i)リンパ球数、及び/または
(ii)好中球数、及び/または
(iii)血小板数、及び/または
(iv)ヘモグロビン数、及び/または
(v)腫瘍細胞の割合、及び/または
(vi)骨髄リンパ球の割合、及び/または
(vii)循環リンパ球の割合、及び/または
(viii)リンパ球上のバイオマーカーの存在及び/もしくは非存在、及び/または
(ix)癌進行度分類、及び/または
(x)組織学的検査、及び/または
(xi)骨髄検査、及び/または
(xii)細胞遺伝学的検査、及び/または
(xiii)リンパ節評価、及び/または
(xiv)身体的症状、及び/または
(xv)脾臓内の癌細胞の低減
を含む群から1つ以上を測定することによって決定される、請求項39~53のいずれか一項に記載のキット。 - 前記第二抗体分子が、エフェクター細胞を動員することができるドメインを含まない1つ以上の抗体分子である、請求項38~54のいずれか一項に記載のキット。
- 前記第二抗体分子が、モノクローナル抗体分子、ポリクローナル抗体分子、及び二重特異性抗体分子からなる群より選ばれる1つ以上の抗体分子である、請求項38~55のいずれか一項に記載のキット。
- 前記第二抗体分子が、以下の相補性決定領域(CDR):
(viii)配列番号93、及び配列番号94、及び配列番号95、または
(ix)配列番号99、及び配列番号100、及び配列番号101、または
(x)配列番号105、及び配列番号106、及び配列番号107、または
(xi)配列番号111、及び配列番号112、及び配列番号113、または
(xii)配列番号117、及び配列番号118、及び配列番号119、または
(xiii)配列番号123、及び配列番号124、及び配列番号125、または
(xiv)配列番号129、及び配列番号130、及び配列番号131、または
(xv)配列番号135、及び配列番号136、及び配列番号137、または
(xvi)配列番号141、及び配列番号142、及び配列番号143、または
(xvii)配列番号147、及び配列番号148、及び配列番号149、または
(xviii)配列番号153、及び配列番号154、及び配列番号155、または
(xix)配列番号159、及び配列番号160、及び配列番号161、または
(xx)配列番号165、及び配列番号166、及び配列番号167、または
(xxi)配列番号171、及び配列番号172、及び配列番号173、または
(xxii)配列番号177、及び配列番号178、及び配列番号179、または
(xxiii)配列番号183、及び配列番号184、及び配列番号185、または
(xxiv)配列番号189、及び配列番号190、及び配列番号191
を有する可変重鎖(VH)を含む、請求項38~56のいずれか一項に記載のキット。 - 前記第二抗体分子が、以下のCDR:
(viii)配列番号96、及び配列番号97、及び配列番号98、または
(ix)配列番号102、及び配列番号103、及び配列番号104、または
(x)配列番号108、及び配列番号109、及び配列番号110、または
(xi)配列番号114、及び配列番号115、及び配列番号116、または
(xii)配列番号120、及び配列番号121、及び配列番号122、または
(xiii)配列番号126、及び配列番号127、及び配列番号128、または
(xiv)配列番号132、及び配列番号133、及び配列番号134、または
(xv)配列番号138、及び配列番号139、及び配列番号140、または
(xvi)配列番号144、及び配列番号145、及び配列番号146、または
(xvii)配列番号150、及び配列番号151、及び配列番号152、または
(xviii)配列番号156、及び配列番号157、及び配列番号158、または
(xix)配列番号162、及び配列番号163、及び配列番号164、または
(xx)配列番号168、及び配列番号169、及び配列番号170、または
(xxi)配列番号174、及び配列番号175、及び配列番号176、または
(xxii)配列番号180、及び配列番号181、及び配列番号182、または
(xxiii)配列番号186、及び配列番号187、及び配列番号188、または
(xxiv)配列番号192、及び配列番号193、及び配列番号194
を有する可変軽鎖(VL)を含む、請求項38~57のいずれか一項に記載のキット。 - 前記第二抗体分子が、配列番号10、配列番号11、配列番号12、配列番号13、配列番号14、配列番号15、配列番号16、配列番号17、配列番号18、配列番号19、配列番号20、配列番号21、配列番号22、配列番号23、配列番号24、配列番号25、及び配列番号26からなる群から選択される可変重鎖(VH)アミノ酸配列を有する、請求項38~58のいずれか一項に記載のキット。
- 前記第二抗体分子が、配列番号34、配列番号35、配列番号36、配列番号37、配列番号38、配列番号39、配列番号40、配列番号41、配列番号42、配列番号43、配列番号44、配列番号45、配列番号46、配列番号47、配列番号48、配列番号49、及び配列番号50からなる群から選択される可変軽鎖(VL)アミノ酸配列を有する、請求項38~59のいずれか一項に記載のキット。
- 前記第二抗体分子が、以下のCDRアミノ酸配列:
(viii)配列番号93、及び配列番号94、及び配列番号95、及び配列番号96、及び配列番号97、及び配列番号98、または
(ix)配列番号99、及び配列番号100、及び配列番号101、及び配列番号102、及び配列番号103、及び配列番号104、または
(x)配列番号105、及び配列番号106、及び配列番号107、及び配列番号108、及び配列番号109、及び配列番号110、または
(xi)配列番号111、及び配列番号112、及び配列番号113、及び配列番号114、及び配列番号115、及び配列番号116、または
(xii)配列番号117、及び配列番号118、及び配列番号119、及び配列番号120、及び配列番号121、及び配列番号122、または
(xiii)配列番号123、及び配列番号124、及び配列番号125、及び配列番号126、及び配列番号127、及び配列番号128、または
(xiv)配列番号129、及び配列番号130、及び配列番号131、及び配列番号132、及び配列番号133、及び配列番号134、または
(xv)配列番号135、及び配列番号136、及び配列番号137、及び配列番号138、及び配列番号139、及び配列番号140、または
(xvi)配列番号141、及び配列番号142、及び配列番号143、及び配列番号144、及び配列番号145、及び配列番号146、または
(xvii)配列番号147、及び配列番号148、及び配列番号149、及び配列番号150、及び配列番号151、及び配列番号152、または
(xviii)配列番号153、及び配列番号154、及び配列番号155、及び配列番号156、及び配列番号157、及び配列番号158、または
(xix)配列番号159、及び配列番号160、及び配列番号161、及び配列番号162、及び配列番号163、及び配列番号164、または
(xx)配列番号165、及び配列番号166、及び配列番号167、及び配列番号168、及び配列番号169、及び配列番号170、または
(xxi)配列番号171、及び配列番号172、及び配列番号173、及び配列番号174、及び配列番号175、及び配列番号176、または
(xxii)配列番号177、及び配列番号178、及び配列番号179、及び配列番号180、及び配列番号181、及び配列番号182、または
(xxiii)配列番号183、及び配列番号184、及び配列番号185、及び配列番号186、及び配列番号187、及び配列番号188、または
(xxiv)配列番号189、及び配列番号190、及び配列番号191、及び配列番号192、及び配列番号193、及び配列番号194
を有する、請求項38~60のいずれか一項に記載のキット。 - 前記第二抗体分子が、以下のアミノ酸配列:
(viii)配列番号10、及び配列番号34、または
(ix)配列番号11、及び配列番号35、または
(x)配列番号12、及び配列番号36、または
(xi)配列番号13、及び配列番号37、または
(xii)配列番号14、及び配列番号38、または
(xiii)配列番号15、及び配列番号39、または
(xiv)配列番号16、及び配列番号40、または
(xv)配列番号17、及び配列番号41、または
(xvi)配列番号18、及び配列番号42、または
(xvii)配列番号19、及び配列番号43、または
(xviii)配列番号20、及び配列番号44、または
(xix)配列番号21、及び配列番号45、または
(xx)配列番号22、及び配列番号46、または
(xxi)配列番号23、及び配列番号47、または
(xxii)配列番号24、及び配列番号48、または
(xxiii)配列番号25、及び配列番号49、または
(xxiv)配列番号26、及び配列番号50
を有する、請求項38~61のいずれか一項に記載のキット。 - 前記第二抗体分子が、FcγRIIbが前記抗体分子の前記Fcドメインに結合することを防止または低減するために、請求項58~62に定義された第二抗体分子と競合することができる、請求項38~56のいずれか一項に記載のキット。
- 前記第一抗体分子が、CD20に特異的に結合する、請求項38~63のいずれか一項に記載のキット。
- 前記第一抗体分子が、I型CD20抗体である、請求項64に記載のキット。
- 前記第一抗体分子が、II型CD20抗体である、請求項64に記載のキット。
- 前記I型CD20抗体が、リツキシマブ、またはリツキシマブバイオシミラー、またはオファツムマブである、請求項65に記載のキット。
- 前記II型CD20抗体が、オビヌツズマブまたはトシツモマブである、請求項66に記載のキット。
- 前記第一抗体分子が、CD52抗体である、請求項38~63のいずれか一項に記載のキット。
- 前記CD52抗体がアレムツズマブである、請求項69に記載のキット。
- 前記キットが、1つ以上の治療薬を含む、請求項38~70のいずれか一項に記載のキット。
- 前記対象が難治性癌もしくは再発癌を有するか、または前記対象が難治性癌及び再発癌を有する、請求項38~71のいずれか一項に記載のキット。
- 前記対象が難治性慢性リンパ性白血病もしくは再発慢性リンパ性白血病を有するか、または前記対象が難治性慢性リンパ性白血病及び再発慢性リンパ性白血病を有する、請求項38~72のいずれか一項に記載のキット。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2021066466A JP2021113202A (ja) | 2014-05-15 | 2021-04-09 | 薬物、その使用及び方法 |
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
GB1408673.0 | 2014-05-15 | ||
GB1408673.0A GB2526139A (en) | 2014-05-15 | 2014-05-15 | Medicaments, uses and methods |
PCT/EP2015/060744 WO2015173384A1 (en) | 2014-05-15 | 2015-05-15 | Medicaments, uses and methods |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2021066466A Division JP2021113202A (ja) | 2014-05-15 | 2021-04-09 | 薬物、その使用及び方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2017517504A JP2017517504A (ja) | 2017-06-29 |
JP7265310B2 true JP7265310B2 (ja) | 2023-04-26 |
Family
ID=51134941
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2016567851A Active JP7265310B2 (ja) | 2014-05-15 | 2015-05-15 | 薬物、その使用及び方法 |
JP2021066466A Pending JP2021113202A (ja) | 2014-05-15 | 2021-04-09 | 薬物、その使用及び方法 |
Family Applications After (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2021066466A Pending JP2021113202A (ja) | 2014-05-15 | 2021-04-09 | 薬物、その使用及び方法 |
Country Status (10)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20170107293A1 (ja) |
EP (2) | EP3142696A1 (ja) |
JP (2) | JP7265310B2 (ja) |
KR (2) | KR20170005843A (ja) |
CN (4) | CN106687477B (ja) |
AU (1) | AU2015261422B2 (ja) |
CA (1) | CA2948834A1 (ja) |
GB (1) | GB2526139A (ja) |
RU (1) | RU2712283C2 (ja) |
WO (1) | WO2015173384A1 (ja) |
Families Citing this family (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
GB201013989D0 (en) | 2010-08-20 | 2010-10-06 | Univ Southampton | Biological materials and methods of using the same |
JP2019506844A (ja) | 2015-12-18 | 2019-03-14 | ノバルティス アーゲー | CD32bを標的とする抗体およびその使用方法 |
US11879014B2 (en) | 2017-03-17 | 2024-01-23 | Tusk Therapeutics Ltd. | Method of treating cancer or depleting regulatory T cells in a subject by administering a human IGG1 anti-CD25 antibody |
WO2018229706A1 (en) | 2017-06-16 | 2018-12-20 | Novartis Ag | Combination therapy for the treatment of cancer |
WO2018229715A1 (en) | 2017-06-16 | 2018-12-20 | Novartis Ag | Compositions comprising anti-cd32b antibodies and methods of use thereof |
US20210040205A1 (en) | 2017-10-25 | 2021-02-11 | Novartis Ag | Antibodies targeting cd32b and methods of use thereof |
US20200362036A1 (en) * | 2018-01-10 | 2020-11-19 | Bioinvent International Ab | Novel combination and use of antibodies |
EP3919077A1 (en) | 2020-06-04 | 2021-12-08 | BioInvent International AB | Model for prediction of tolerability issues in connection with intravenous administration of therapeutic antibodies |
WO2021245233A1 (en) | 2020-06-04 | 2021-12-09 | Bioinvent International Ab | Improving antibody tolerabilty associated with intravenous administration |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20090191195A1 (en) | 2006-06-26 | 2009-07-30 | Macrogenics, Inc. | Combination of FcgammaRIIB-Specific Antibodies and CD20-Specific Antibodies and Methods of Use Thereof |
JP2013537547A (ja) | 2010-08-20 | 2013-10-03 | ユニバーシティ、オブ、サウサンプトン | Fcガンマriib(cd32b)特異的抗体およびcd20特異的抗体の併用使用 |
Family Cites Families (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CA2495251C (en) * | 2002-08-14 | 2018-03-06 | Macrogenics, Inc. | Fc.gamma.riib-specific antibodies and methods of use thereof |
US20090017023A1 (en) * | 2002-08-14 | 2009-01-15 | Macrogenics, Inc. | FcGammaRIIB Specific Antibodies and Methods of Use Thereof |
AU2003265522A1 (en) * | 2003-08-18 | 2005-03-10 | Macrogenics, Inc. | FCGammaRIIB-SPECIFIC ANTIBODIES AND METHODS OF USE THEREOF |
AU2005335714B2 (en) * | 2004-11-10 | 2012-07-26 | Macrogenics, Inc. | Engineering Fc antibody regions to confer effector function |
WO2008140603A2 (en) * | 2006-12-08 | 2008-11-20 | Macrogenics, Inc. | METHODS FOR THE TREATMENT OF DISEASE USING IMMUNOGLOBULINS HAVING FC REGIONS WITH ALTERED AFFINITIES FOR FCγR ACTIVATING AND FCγR INHIBITING |
US20110280913A1 (en) * | 2008-07-31 | 2011-11-17 | The Ohio State University | Methods and Compositions for Delivering Therapeutic Agents in the Treatment of B-Cell Related Disorders |
KR101725170B1 (ko) * | 2009-05-06 | 2017-04-10 | 바이오테스트 아게 | Cd138을 표적으로 하는 면역접합체의 용도 |
-
2014
- 2014-05-15 GB GB1408673.0A patent/GB2526139A/en not_active Withdrawn
-
2015
- 2015-05-15 CN CN201580037854.XA patent/CN106687477B/zh active Active
- 2015-05-15 AU AU2015261422A patent/AU2015261422B2/en active Active
- 2015-05-15 CA CA2948834A patent/CA2948834A1/en active Pending
- 2015-05-15 JP JP2016567851A patent/JP7265310B2/ja active Active
- 2015-05-15 WO PCT/EP2015/060744 patent/WO2015173384A1/en active Application Filing
- 2015-05-15 EP EP15723491.5A patent/EP3142696A1/en not_active Withdrawn
- 2015-05-15 KR KR1020167034598A patent/KR20170005843A/ko not_active IP Right Cessation
- 2015-05-15 KR KR1020237028891A patent/KR20230128410A/ko not_active Application Discontinuation
- 2015-05-15 RU RU2016149132A patent/RU2712283C2/ru active
- 2015-05-15 EP EP21208288.7A patent/EP4008352A1/en active Pending
- 2015-05-15 CN CN202210363873.3A patent/CN115025214A/zh active Pending
- 2015-05-15 US US15/311,016 patent/US20170107293A1/en active Pending
- 2015-05-15 CN CN202210363875.2A patent/CN114848811A/zh active Pending
- 2015-05-15 CN CN202210363874.8A patent/CN115025215A/zh active Pending
-
2021
- 2021-04-09 JP JP2021066466A patent/JP2021113202A/ja active Pending
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20090191195A1 (en) | 2006-06-26 | 2009-07-30 | Macrogenics, Inc. | Combination of FcgammaRIIB-Specific Antibodies and CD20-Specific Antibodies and Methods of Use Thereof |
JP2013537547A (ja) | 2010-08-20 | 2013-10-03 | ユニバーシティ、オブ、サウサンプトン | Fcガンマriib(cd32b)特異的抗体およびcd20特異的抗体の併用使用 |
Non-Patent Citations (7)
Title |
---|
Blood, 2011, Vol.118 No.9, p.2530-2540 |
Blood, 2014 Jan, Vol.123 No.5, p.669-677 |
Cancer Science., 2011, Vol.102 No.2, p.432-43 |
EMILY L WILLIAMS,OVERCOMING RESISTANCE TO THERAPEUTIC ANTIBODIES BY TARGETING FC RECEPTORS,RESISTANCE TO IMMUNOTHERAPEUTIC ANTIBODIES IN CANCER : STRATEGIES TO OVERCOME RESISTANCE,米国,SPRINGER,2013年,VOL:2,PAGE(S):49 - 71,(URL,http://dx.doi.org/10.1007/978-1-4614-7654-2_3) |
医学のあゆみ, 2009, Vol.229 No.10, p.1033-1038 |
最新医学, 2014 Mar, Vol.69 N0.3, p.379-385 |
臨床血液, 2011, Vol.52 No.8, p.618-626 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
GB201408673D0 (en) | 2014-07-02 |
RU2016149132A3 (ja) | 2018-12-26 |
EP3142696A1 (en) | 2017-03-22 |
RU2712283C2 (ru) | 2020-01-28 |
CA2948834A1 (en) | 2015-11-19 |
CN115025214A (zh) | 2022-09-09 |
WO2015173384A1 (en) | 2015-11-19 |
CN114848811A (zh) | 2022-08-05 |
EP4008352A1 (en) | 2022-06-08 |
KR20170005843A (ko) | 2017-01-16 |
AU2015261422B2 (en) | 2020-10-01 |
JP2021113202A (ja) | 2021-08-05 |
GB2526139A (en) | 2015-11-18 |
CN106687477B (zh) | 2022-04-26 |
JP2017517504A (ja) | 2017-06-29 |
RU2016149132A (ru) | 2018-06-19 |
CN115025215A (zh) | 2022-09-09 |
KR20230128410A (ko) | 2023-09-04 |
CN106687477A (zh) | 2017-05-17 |
AU2015261422A1 (en) | 2016-11-24 |
US20170107293A1 (en) | 2017-04-20 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US11623005B2 (en) | Combined use of FcγRIIb (CD32B) and CD20 specific antibodies | |
JP7265310B2 (ja) | 薬物、その使用及び方法 | |
Roghanian et al. | Antagonistic human FcγRIIB (CD32B) antibodies have anti-tumor activity and overcome resistance to antibody therapy in vivo | |
EP2178915B1 (en) | Anti cd37 antibodies | |
JP2024026237A (ja) | 抗体の新規組み合わせおよびその使用 | |
JP2022512905A (ja) | 新規アンタゴニスト抗tnfr2抗体分子 | |
RU2800035C2 (ru) | Новая комбинация антител и ее применение |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20170113 |
|
RD01 | Notification of change of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7426 Effective date: 20170113 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20180514 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20190621 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20190918 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20191024 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20200403 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20200609 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20200826 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20201210 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20210409 |
|
C60 | Trial request (containing other claim documents, opposition documents) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: C60 Effective date: 20210409 |
|
A911 | Transfer to examiner for re-examination before appeal (zenchi) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911 Effective date: 20210421 |
|
C21 | Notice of transfer of a case for reconsideration by examiners before appeal proceedings |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: C21 Effective date: 20210422 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20210506 |
|
A912 | Re-examination (zenchi) completed and case transferred to appeal board |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A912 Effective date: 20210721 |
|
C211 | Notice of termination of reconsideration by examiners before appeal proceedings |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: C211 Effective date: 20210727 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20211026 |
|
C22 | Notice of designation (change) of administrative judge |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: C22 Effective date: 20220405 |
|
C22 | Notice of designation (change) of administrative judge |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: C22 Effective date: 20220607 |
|
C13 | Notice of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: C13 Effective date: 20220830 |
|
C28A | Non-patent document cited |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: C2838 Effective date: 20220830 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20221012 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20230222 |
|
C302 | Record of communication |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: C302 Effective date: 20230306 |
|
C23 | Notice of termination of proceedings |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: C23 Effective date: 20230307 |
|
C03 | Trial/appeal decision taken |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: C03 Effective date: 20230330 |
|
C30A | Notification sent |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: C3012 Effective date: 20230330 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20230414 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 7265310 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |