JP7249696B2 - 抗ｃｌｄｎ抗体並びにその医薬組成物および検出方法 - Google Patents

抗ｃｌｄｎ抗体並びにその医薬組成物および検出方法 Download PDF

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Description

本発明は、抗ＣＬＤＮ抗体に関し、本発明は、抗ＣＬＤＮ抗体を含む医薬組成物にさらに関し、本発明は、生物学的サンプル中にＣＬＤＮが存在するかどうかを検出するための方法に関する。
タイトジャンクション（ｔｉｇｈｔ ｊｕｎｃｔｉｏｎ、ＴＪ）は、細胞間の物質の流れに重要な役割を果たし、膜タンパク質および膜脂質の放射状拡散をブロックすることにより細胞極性を維持し、さらに、細胞増殖、分化および運動を調節するシグナル分子の動員にさらに関与する。タイトジャンクションは、クローディン（Ｃｌａｕｄｉｎ、ＣＬＤＮ）によって形成され、クローディンファミリーは、２０種を超えるタンパク質分子で構成され、そのメンバーは、すべて一つの４回膜貫通するドメインおよび似ているアミノ酸配列を含むが、組織分布には一定の特異性がある。ヒトＣＬＤＮ遺伝子は、異なる染色体上にペアで分布し、これは、特定のＣＬＤＮ遺伝子が遺伝子複製に由来することを意味する。
ＣＬＤＮタンパク質の分子量は、主に２０～３４ｋＤａの範囲内であり、最大の違いは、細胞内のＣ－末端の配列およびサイズであり、当該配列は、一つのＰＤＺドメイン結合モチーフを含み、当該モチーフはＣＬＤＮタンパク質が、ＺＯ－１、ＺＯ－２、ＺＯ－３およびＭＵＰＰ１のような細胞質内のタイトジャンクション関連タンパク質と直接相互作用することができるようにする。さらに、この配列は、リン酸化部位等の転写後修飾部位を含み、タンパク質分子の位置決めおよび機能に影響を与えることができる。ＭＡＰＫ（マイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ｍｉｔｏｇｅｎ－ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ））またはＰＫＣ（プロテインキナーゼ（ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ）Ｃ）は、ＣＬＤＮ１をリン酸化することができ、ｃＡＭＰ（ｃｙｃｌｉｃ ＡＭＰ）は、ＣＬＤＮ５リン酸化を誘導し、両者は、すべてＣＬＤＮタンパク質のバリア機能を促進し、ＰＫＡが媒介したＣＬＤＮ１６リン酸化は、マグネシウムイオンの輸送を増強する。
ＣＬＤＮは、細胞バイパスの選択的浸透の調節に重要な役割を果たし、ＣＬＤＮ２およびＣＬＤＮ１５は、陽イオンチャネルおよび陽イオン細ウェルの形成に関与し、ＣＬＤＮ４／７／１０は、陰イオンチャネルおよび細ウェルの形成に関与する。特定の細胞株でｃｌａｕｄｉｎタンパク質を高度に発現することにより、膜貫通抵抗性および浸透性に影響を与える。培養された表皮由来細胞において、ＣＬＤＮ１／４／５／７は、膜貫通抵抗性を増加させることができ、ＣＬＤＮ２およびＣＬＤＮ１０は、逆になる。
ＣＬＤＮ遺伝子の突然変異は、様々な疾患に関連すると考えられる。ＣＬＤＮ１突然変異は、硬化性胆管炎（ｓｃｌｅｒｏｓｉｎｇ ｃｈｏｌａｎｇｉｔｉｓ）および魚鱗癬（ｉｃｈｔｈｙｏｓｉｓ）を引き起こすことができ、ＣＬＤＮ１６およびＣＬＤＮ１９突然変異は、低マグネシウム血症（ｈｙｐｏｍａｇｎｅｓｅｍｉａ）および高カルシウム尿症（ｈｙｐｅｒｃａｌｃｉｎｕｒｉａ）に関連すると考えられる。
ＣＬＤＮタンパク質の差次的発現は、様々な癌に関連すると考えられる。ＣＬＤＮ１およびＣＬＤＮ７は、浸潤性乳がん、前立腺がんおよび食道がんでダウンレギュレーションされ、子宮頸がん、結腸がん、食道がん、胃がん等の様々な癌でＣＬＤＮ３／４が様々な程度にアップレギュレーションすることを発見した。Ｓａｈｉｎらは、正常組織において、ＣＬＤＮ１８のアイソフォーム（ｉｓｏｆｏｒｍ）２サブタイプ（ＣＬＤＮ１８．２）が胃粘膜の分化後の表皮細胞でのみ発現することを発見し、胃幹細胞領域では発現を見られず、原発性胃がんおよびその転移で異常に高い発現が見られた。膵臓がん、食道がんおよび肺がんにおけるＣＬＤＮ１８．２の高発現の報告もある。ＣＬＤＮ１８．２は、細胞膜表面に位置するため、その生物学的機能および特徴により、ＣＬＤＮ１８．２が理想的な治療標的であることが決定され、近年、当該標的に対するモノクローナル抗体も登場し、ここで、もっとも急速に成長しているのは、Ｇａｎｙｍｅｄ社のＩＭＡＢ３６２（Ｃｌａｕｄｉｘｉｍａｂ）である。ＩＭＡＢ３６２は、腫瘍細胞の表面でＣＬＤＮ１８．２に結合し、抗体依存性細胞傷害（ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ、ＡＤＣＣ）および補体依存性細胞傷害（ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ、ＣＤＣ）を誘導することにより、腫瘍細胞を殺す。化学療法と組み合わせて使用する場合、ＩＭＡＢ３６２は、Ｔ細胞浸潤を増強し、炎症誘発性因子をアップレギュレーションすることもできる。
本発明の目的は、抗ＣＬＤＮ抗体とその医薬組成物および検出方法を提供することである。
本発明は、以下の技術的解決策を採用する。
抗ＣＬＤＮ抗体であって、
重鎖と軽鎖とを含み、
ここで、抗体の重鎖は、一つまたは一つ以上のＣＤＲを含み、重鎖のＣＤＲは、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１～ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．７またはＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１５～ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３０のいずれか一つのＣＤＲ配列との差は、三つ以下のアミノ酸であり、
抗体の軽鎖は、一つまたは一つ以上のＣＤＲを含み、軽鎖のＣＤＲは、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．８～ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１４またはＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３１～ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．４６のいずれか一つのＣＤＲ配列との差は、三つ以下のアミノ酸であることを特徴とする。
さらに、本発明の抗ＣＬＤＮ抗体は、抗体の重鎖は、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１～Ｎｏ．７のいずれか一つから選択されるという特徴をさらに有する。
さらに、本発明の抗ＣＬＤＮ抗体は、抗体の軽鎖は、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．８～ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１４またはＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３１～ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．４６のいずれか一つから選択されるという特徴をさらに有する。
さらに、本発明の抗ＣＬＤＮ抗体は、抗体の重鎖は、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１５～ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３０のいずれか一つから選択されるという特徴をさらに有する。
さらに、本発明の抗ＣＬＤＮ抗体は、抗体の軽鎖は、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３１～ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．４６のいずれか一つから選択されるという特徴をさらに有する。
さらに、本発明の抗ＣＬＤＮ抗体は、抗体の重鎖と軽鎖との組み合わせは、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１およびＳＥＱ ＩＤ Ｎ０．８、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２およびＳＥＱ ＩＤ Ｎ０．９、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３およびＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１０、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．４およびＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１１、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．５およびＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１２、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．６およびＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１３、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．７およびＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１４、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１５およびＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３１、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１６およびＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３２、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１７およびＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３３、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１８およびＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３４、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１９およびＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３５、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２０およびＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３６、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２１およびＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３７、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２２およびＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３８、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２３およびＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３９、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２４およびＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．４０、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２５およびＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．４１、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２６およびＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．４２、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２７およびＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．４３、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２８およびＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．４４、
ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２９およびＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．４５、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．３０およびＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．４６があるという特徴をさらに有する。
本発明は、上記に記載の抗体をコードするポリヌクレオチドをさらに提供する。
本発明は、上記のいずれか１項に記載の抗体を含む医薬組成物をさらに提供する。
本発明は、抗腫瘍薬の調製における上記のいずれか１項に記載の抗体の応用をさらに提供する。
本発明は、生物学的サンプルに上記のいずれか１項に記載の抗体を投与する工程、ここで、前記抗体は、検出可能なマーカーを有し、および前記検出可能なマーカーが存在するかどうかを検出するか、または前記検出可能なマーカーの含有量を検出する工程を含むことを特徴とする、生物学的サンプル中にＣＬＤＮが存在するかどうかを検出するための方法をさらに提供する。
本発明の抗ＣＬＤＮ抗体は、細胞に結合する能力がＩＭＡＢ３６２よりも強い。本発明の抗体は、インビボでの動物の効力において、ＩＭＡＢ３６２よりも腫瘍増殖を阻害するより良い効果を示す。
ＣＨＯＳ細胞に対する対照抗体ＱＰ０２４０２５の結合能力を示す。 ＣＨＯＳ細胞に対するハイブリドーマによってスクリーニングされた抗体ＱＰ１８８１８９の結合能力を示す。 ＣＨＯＳ細胞に対するハイブリドーマによってスクリーニングされた抗体ＱＰ１９０１９１の結合能力を示す。 ＣＨＯＳ細胞に対するハイブリドーマによってスクリーニングされた抗体ＱＰ１９２１９３の結合能力を示す。 ＣＨＯＳ細胞に対するハイブリドーマによってスクリーニングされた抗体ＱＰ１９６１９８の結合能力を示す。 ＣＨＯＳ細胞に対するハイブリドーマによってスクリーニングされた抗体ＱＰ１９９２００の結合能力を示す。 ＣＨＯＳ細胞に対するハイブリドーマによってスクリーニングされた抗体ＱＰ２０１２０２の結合能力を示す。 ＣＨＯＳ細胞に対するハイブリドーマによってスクリーニングされた抗体ＱＰ２０７２０８の結合能力を示す。 ＣＨＯＳ細胞に対するファージによってスクリーニングされた抗体ＱＰ１０７３１０７４の結合能力を示す。 ＣＨＯＳ細胞に対するファージによってスクリーニングされた抗体ＱＰ１０７９１０８０の結合能力を示す。 ＣＨＯＳ細胞に対するファージによってスクリーニングされた抗体ＱＰ１０８５１０８６の結合能力を示す。 ＣＨＯＳ細胞に対するファージによってスクリーニングされた抗体ＱＰ１０９１１０９２の結合能力を示す。 ＣＨＯＳ細胞に対するファージによってスクリーニングされた抗体ＱＰ１０９７１０９８の結合能力を示す。 ＣＨＯＳ細胞に対するファージによってスクリーニングされた抗体ＱＰ１０９９１１００の結合能力を示す。 ＣＨＯＳ細胞に対するファージによってスクリーニングされた抗体ＱＰ１１０５１１０６の結合能力を示す。 ＣＨＯＳ細胞に対するファージによってスクリーニングされた抗体ＱＰ１１０７１１０８の結合能力を示す。 ＣＨＯＳ細胞に対するファージによってスクリーニングされた抗体ＱＰ１１０９１１１０の結合能力を示す。 ＣＨＯＳ細胞に対するファージによってスクリーニングされた抗体ＱＰ１１１１１１１２の結合能力を示す。 ＣＨＯＳ細胞に対するファージによってスクリーニングされた抗体ＱＰ１１１３１１１４の結合能力を示す。 ＣＨＯＳ細胞に対するファージによってスクリーニングされた抗体ＱＰ１１１５１１１６の結合能力を示す。 ＣＨＯＳ細胞に対するファージによってスクリーニングされた抗体ＱＰ１１１７１１１８の結合能力を示す。 ＣＨＯＳ細胞に対するファージによってスクリーニングされた抗体ＱＰ１１０３１１０４の結合能力を示す。 ＣＨＯＳ細胞に対するファージによってスクリーニングされた抗体ＱＰ１０４５１０４６の結合能力を示す。 ＣＨＯＳ細胞に対するファージによってスクリーニングされた抗体ＱＰ１０４７１０４８の結合能力を示す。 様々な２９３Ｔ一過性細胞株に対する対照抗体ＱＰ０２４０２５の結合能力を示す。 様々な２９３Ｔ一過性細胞株に対するハイブリドーマによってスクリーニングされた抗体ＱＰ１８８１８９の結合能力を示す。 様々な２９３Ｔ一過性細胞株に対するハイブリドーマによってスクリーニングされた抗体ＱＰ１９０１９１の結合能力を示す。 様々な２９３Ｔ一過性細胞株に対するハイブリドーマによってスクリーニングされた抗体ＱＰ１９２１９３の結合能力を示す。 様々な２９３Ｔ一過性細胞株に対するハイブリドーマによってスクリーニングされた抗体ＱＰ１９６１９８の結合能力を示す。 様々な２９３Ｔ一過性細胞株に対するハイブリドーマによってスクリーニングされた抗体ＱＰ１９９２００の結合能力を示す。 様々な２９３Ｔ一過性細胞株に対するハイブリドーマによってスクリーニングされた抗体ＱＰ２０１２０２の結合能力を示す。 様々な２９３Ｔ一過性細胞株に対するハイブリドーマによってスクリーニングされた抗体ＱＰ２０７２０８の結合能力を示す。 様々な２９３Ｔ一過性細胞株に対するファージによってスクリーニングされた抗体ＱＰ１０４５１０４６の結合能力を示す。 様々な２９３Ｔ一過性細胞株に対するファージによってスクリーニングされた抗体ＱＰ１０７１１０７２の結合能力を示す。 様々な２９３Ｔ一過性細胞株に対するファージによってスクリーニングされた抗体ＱＰ１０７３１０７４の結合能力を示す。 様々な２９３Ｔ一過性細胞株に対するファージによってスクリーニングされた抗体ＱＰ１０８５１０８６の結合能力を示す。 様々な２９３Ｔ一過性細胞株に対するファージによってスクリーニングされた抗体ＱＰ１０９１１０９２の結合能力を示す。 様々な２９３Ｔ一過性細胞株に対するファージによってスクリーニングされた抗体ＱＰ１０９９１１００の結合能力を示す。 様々な２９３Ｔ一過性細胞株に対するファージによってスクリーニングされた抗体ＱＰ１１０３１１０４の結合能力を示す。 様々な２９３Ｔ一過性細胞株に対するファージによってスクリーニングされた抗体ＱＰ１１０５１１０６の結合能力を示す。 様々な２９３Ｔ一過性細胞株に対するファージによってスクリーニングされた抗体ＱＰ１１０７１１０８の結合能力を示す。 様々な２９３Ｔ一過性細胞株に対するファージによってスクリーニングされた抗体ＱＰ１１０９１１１０の結合能力を示す。 様々な２９３Ｔ一過性細胞株に対するファージによってスクリーニングされた抗体ＱＰ１１１１１１１２の結合能力を示す。 様々な２９３Ｔ一過性細胞株に対するファージによってスクリーニングされた抗体ＱＰ１１１３１１１４の結合能力を示す。 様々な２９３Ｔ一過性細胞株に対するファージによってスクリーニングされた抗体ＱＰ１１１５１１１６の結合能力を示す。 様々な２９３Ｔ一過性細胞株に対するファージによってスクリーニングされた抗体ＱＰ１１１７１１１８の結合能力を示す。 胃がんＰＤＸモデルＧＡ０００６腫瘍細胞に対する対照抗体の結合能力の実験における対照グループＩＭＡＢ３６２の曲線を示す。 胃がんＰＤＸモデルＧＡ０００６腫瘍細胞に対する抗体の結合能力の実験におけるＱＰ１９０１９１の曲線を示す。 胃がんＰＤＸモデルＧＡ０００６腫瘍細胞に対する抗体の結合能力の実験におけるＱＰ１９２１９３の曲線を示す。 胃がんＰＤＸモデルＧＡ０００６腫瘍細胞に対する抗体の結合能力の実験におけるＱＰ２０１２０２の曲線を示す。 胃がんＰＤＸモデルＧＡ０００６腫瘍細胞に対する抗体の結合能力の実験におけるＱＰ２０７２０８の曲線を示す。 胃がんＰＤＸモデルＧＡ０００６腫瘍細胞に対する抗体の結合能力の実験におけるＱＰ１１０９１１１０の曲線を示す。 胃がんＰＤＸモデルＧＡ０００６腫瘍細胞に対する抗体の結合能力の実験におけるＱＰ１１１３１１１４の曲線を示す。 胃がんＰＤＸモデルＧＡ０００６腫瘍細胞に対する抗体の結合能力の実験におけるＱＰ１１１５１１１６の曲線を示す。 胃がんＰＤＸモデルＧＡ０００６に対する抗体の効力試験を示す。 グループ化後にＰＢＳグループ（陰性対照）処理の腫瘍増殖曲線を示す。 グループ化後にＱＰ１９２１９３グループ処理の腫瘍増殖曲線を示す。 グループ化後にＱＰ２０７２０８グループ処理の腫瘍増殖曲線を示す。 グループ化後にＱＰ１１１５１１１６グループ処理の腫瘍増殖曲線を示す。 グループ化後に対照抗体ＩＭＡＢ３６２グループ処理の腫瘍増殖曲線を示す。 本発明の各抗体および対照抗体を加えたマウスの各グループにおける腫瘍Ｄ３１の重量を示す。 各実験グループの腫瘍体積の実際のショット図を示す。 マウスの各グループの体重曲線を示す。 マウスの各グループの体重変化率の曲線を示す。
以下、添付の図面を参照して、本発明の具体的な実施形態を説明する。
本発明の抗体は、ヒト抗体を含むが、これらに限定されない。本発明で提供される様々な抗体のスクリーニング方法は、通常、好ましくは、より便利なハイブリドーマによってスクリーニングされた抗体を好むが、この標的抗原（ｃｌａｕｄｉｎ１８．２）は、入手が難しいため、同時にファージライブラリーを使用して抗体をスクリーニングする。本実施形態でスクリーニングされた抗ｃｌａｕｄｉｎ１８．２抗体の配列は、次のとおりである。
ハイブリドーマによってスクリーニングされた抗体、重鎖可変領域（ＶＨ）のＣＤＲは、配列中の下線部分に示される。
＞ＱＰ１８９
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＞ＱＰ１９１
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＞ＱＤ１９３
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＞ＱＤ１９８
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＞ＱＤ２００
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＞ＱＤ２０２
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＞ＱＤ２０８
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軽鎖配列：
ここで、軽鎖可変領域（ＶＬ）のＣＤＲは、配列中の下線部分に示される。
＞ＱＤ１８８
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＞ＱＤ１９０
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＞ＱＤ１９２
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＞ＱＤ１９６
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＞ＱＤ１９９
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＞ＱＤ２０１
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＞ＱＤ２０７
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ファージライブラリーによってスクリーニングされた抗体、重鎖可変領域（ＶＨ）ＣＤＲは、配列中の下線部分に示されるとおりである。
＞ＱＤ１０４５
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＞ＱＤ１０４７
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＞ＱＤ１０７３
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＞ＱＤ１０７９
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＞ＱＤ１０８５
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＞ＱＤ１０９１
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＞ＱＤ１０９７
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＞ＱＤ１０９９
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＞ＱＤ１１０３
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＞ＱＤ１１０５
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＞ＱＤ１１０７
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＞ＱＤ１１０９
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＞ＱＤ１１１１
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＞ＱＤ１１１３
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＞ＱＤ１１１５
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＞ＱＤ１１１７
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軽鎖配列：
ここで、軽鎖可変領域（ＶＬ）のＣＤＲは、配列中の下線部分に示されるとおりである。
＞ＱＤ１０４６
ＤＩＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＰＧＥＰＡＳＩＳＣＲＳＳＱＳＬＬＨＳＮＧＹＮＹＬＤＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＬＧＳＮＲＡＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＭＱＡＬＭＴＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ
＞ＱＤ１０４８
ＤＩＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＰＧＥＰＡＳＩＳＣＲＳＳＱＳＬＬＨＳＮＧＹＮＹＬＤＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＬＧＳＮＲＡＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＭＱＤＬＷＰＲＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ
＞ＱＤ１０７４
ＤＩＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＰＧＥＰＡＳＩＳＣＲＳＳＱＳＬＬＨＳＮＧＹＮＹＬＤＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＬＧＳＮＲＡＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＭＱＡＡＱＳＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ
＞ＱＤ１０８０
ＤＩＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＰＧＥＰＡＳＩＳＣＲＳＳＱＳＬＬＨＳＮＧＹＮＹＬＤＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＬＧＳＮＲＡＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＭＱＡＬＮＴＰＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ
＞ＱＤ１０８６
ＤＩＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＰＧＥＰＡＳＩＳＣＲＳＳＱＳＬＬＨＳＮＧＹＮＹＬＤＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＬＧＳＮＲＡＳＧＶＴＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＭＱＡＬＭＴＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ
＞ＱＤ１０９２
ＤＩＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＰＧＥＰＡＳＩＳＣＲＳＳＱＳＬＬＨＳＮＧＹＮＹＬＤＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＬＧＳＮＲＡＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＭＱＧＲＱＦＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ
＞ＱＤ１０９８
ＤＩＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＰＧＥＰＡＳＩＳＣＲＳＳＱＳＬＬＨＳＮＧＹＮＹＬＤＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＬＧＳＮＲＡＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＭＱＧＬＮＴＦＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ
＞ＱＤ１１００
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＞ＱＤ１１０４
ＤＩＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＰＧＥＰＡＳＩＳＣＲＳＳＱＳＬＬＨＳＮＧＹＮＹＬＤＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＬＧＳＮＲＡＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＭＱＡＬＱＴＧＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ
＞ＱＤ１１０６
ＤＩＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＫＳＳＱＳＶＬＹＳＳＮＮＫＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＱＱＹＹＴＴＰＦＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ
＞ＱＤ１１０８
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＞ＱＤ１１１０
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＴＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＳＩＳＳＷＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＤＡＳＳＬＥＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＤＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＳＳＹＳＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ
＞ＱＤ１１１２
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＴＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＳＩＳＳＷＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＤＡＳＳＬＥＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＫＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＤＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＳＴＹＰＬＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ
＞ＱＤ１１１４
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＴＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＳＩＳＳＷＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＤＡＳＳＬＥＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＤＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＬＳＹＰＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ
＞ＱＤ１１１６
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＴＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＳＩＳＳＷＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＤＡＳＳＬＥＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＤＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＮＳＹＰＬＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ
＞ＱＤ１１１８
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抗体結合能力実験：
実験１：ＦＡＣＳの腫瘍細胞株に対する抗体の結合能力の検出
a)１．９６ウェルプレートに細胞をプレートし、ウェルあたり２×１０５細胞であり、１０００×ｒｐｍで５分間遠心分離し、１×ＰＢＳで細胞を１回洗浄し、上清から過剰な液体を吸引する。
b)３％ＢＳＡ－ＰＢＳ溶液を加えて細胞をブロックし、４℃で６０分間ブルックする。
c)被験抗体をブロッキング溶液で５ｕｇ／ｍｌに希釈し、ウェルに加え、４℃で６０分間インキュベートする。
d)抗体を吸引し、ウェルあたり２２０ｕｌの１×ＰＢＳで細胞を３回洗浄する。
e)ウェルあたり５０ｕｌのＰＥ－抗ヒト（ａｎｔｉ－ｈｕｍａｎ）ＦＣ（１：２００希釈）二次抗体を加え、暗所で４℃で４０分間インキュベートする。
f)抗体を吸引し、ウェルあたり１×ＰＢＳで細胞を４回洗浄する。
g)オンボードで検出する。
実験２：ＦＡＣＳのＰＤＸ組織腫瘍細胞に対する抗体の結合能力の検出
a)各腫瘍に一つのｇｅｎｔｌｅＭＡＣＳ＜商標＞Ｃチューブ（Ｔｕｂｅ）および３ｍｌの消化液を準備し、消化液は、腫瘍解離キット（Ｔｕｍｏｒ Ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ Ｋｉｔ）（ｍｉｌｔｅｎｙｉｂｉｏｔｅｃｈ、１３０－０９６－７３０）の取扱説明書に従って調製され、調製してすぐに使用する。
b)マウスを殺し、きれいな道具で腫瘍を取り除き、１×ＰＢＳで洗浄した後、腫瘍表面に付着した血管、脂肪、筋膜等の組織を取り除く。各消化管は、０．８ｇ以下の腫瘍組織を消化して、腫瘍組織が消化液によって完全に消化されるようにすることができる。
c)腫瘍組織を６ウェルプレートのウェルに入れ、消化液を加え、きれいな鉗子およびメスで腫瘍組織を約１ｍｍ３の小片に切る。
d)組織ブルｘ得をｇｅｎｔｌｅＭＡＣＳ＜商標＞Ｃチューブに入れ、残留消化液でウェルプレートを洗浄し、一緒に消化管に転移して、氷上に置く。
e)消化管を逆様にしてｇｅｎｔｌｅＭＡＣＳ全自動組織処理器に入れ、プログラム３７＿ｃ＿ｍ＿ＴＤＫ＿１を選択して消化する。プログラムが終了した後、消化管を取り外し、３００×ｇで一過性遠心分離して細胞および残りの組織を収集する。
f)上清を捨て、１×ＰＢＳで細胞および組織を再懸濁し、細胞懸濁液を細胞ストレーナーに加え、５０ｍｌの遠心分離管に入れ、１０ｍｌのＰＢＳを使用して懸濁液をストレーナーに通して、単一の細胞懸濁液にする。
g)３００×ｇで５分間遠心分離し、上清を除去し、５ｍｌのＰＢＳで再懸濁し、細胞をカウントし、細胞濃度をサンプルあたり１×１０６細胞に調整する。
h)各サンプルに１００ｕｌの濃度が１μｇ／ｍｌであるＭｏｕｓｅ ＢＤ Ｆｃ Ｂｌｏｃｋ（ＣＡＴ＃５５３１４１）ＰＢＳ溶液を加えて細胞を再懸濁し、２０ｕｌのヒトＦｃＲ Ｂｌｏｃｋｉｎｇ Ｒｅａｇｅｎｔを加え、均等に混合し、暗所で室温下で１０分間インキュベートする。
i)５ｕｇ／ｍｌの一次抗体を加え、暗所で４℃下で６０分間インキュベートする。
j)２ｍｌのＦＡＣＳ洗浄緩衝液（ｗａｓｈ ｂｕｆｆｅｒ）を加え、細胞を穏やかに再懸濁し、３００×ｇで５分間遠心分離し、上清を除去し、２回繰り返す。
k)ＰＥ標識のヒトＩｇＧ Ｆｃ二次抗体および染料を含む１００ｕｌのＦＡＣＳ洗浄緩衝液を加え、暗所で細胞を６０分間インキュベートする。
l)２ｍｌのＦＡＣＳ洗浄緩衝液を加え、細胞穏やかに再懸濁し、３００×ｇで５分間遠心分離し、上清を除去し、２回繰り返す。
m)細胞を２００ｕｌのＦＡＣＳ洗浄緩衝液で再懸濁し、オンボードで検出する。
実験図のＣＨＯＳシステムにおけるハイブリドーマクローン（ｈｙｂｒｉｄｏｍａ ｃｌｏｎｅ）およびＣＨＯＳシステムにおけるファージクローン（ｐｈａｇｅ ｃｌｏｎｅ）、即ち、それぞれＣＨＯＳ細胞に対するハイブリドーマおよびファージによってスクリーニングされた抗体の結合能力を指す。図において、ＣＨＯ１８．２：ＣＨＯＳ－ＣＬＤＮ１８．２で細胞を安定的にトランスフェクトし、ＣＨＯ１８．１：ＣＨＯＳ－ＣＬＤＮ１８．１で細胞を安定的にトランスフェクトし、ＣＨＯＳ：ＣＨＯＳで空のベクターをトランスフェクトする。
ＣＨＯＳは、ハムスターの卵巣細胞を不死化することによって得られた細胞株であり、ＦＡＣＳ（フローサイトメトリー）を使用して、細胞株に対する抗体の結合能力を検出する。
図１ａ～図１ｈは、ＣＨＯＳ細胞に対するハイブリドーマによってスクリーニングされた抗体の結合能力を示す。
図２ａ～図２ｈ、図３ａ～図３ｈおよび図４ａ～図４ｄは、ＣＨＯＳ細胞に対するファージによってスクリーニングされた抗体の結合能力を示す。
実験目的：ＣＨＯＳ細胞株でｃｌａｕｄｉｎ１８．１（非特異的結合）およびｃｌａｕｄｉｎ１８．２に対する抗体の結合能力を検証する。
ＣＨＯＳ細胞株の図において、各パネル（ｐａｎｅｌ）は、三つのＣＨＯＳ細胞株に対する被験抗体のＦＡＣＳ検出結果の組み合わせで構成され、ここで、
1.赤い曲線３（丸付き数字）は、空のベクターをトランスフェクトしたＣＨＯＳ細胞株（ＣＨＯＳ）に対する被験抗体の結合能力、即ち、陰性対照を示す。
2.青い曲線２（丸付き数字）は、ｃｌａｕｄｉｎ１８．１をトランスフェクトしたＣＨＯＳ細胞株（ＣＨＯ１８．１）に対する被験抗体の結合能力、即ち、非特異的結合の検出を示す。
3.黄色い曲線１（丸付き数字）は、ｃｌａｕｄｉｎ１８．２をトランスフェクトしたＣＨＯＳ細胞株（ＣＨＯ１８．２）に対する被験抗体の結合能力、即ち、標的タンパク質の結合能力の検出を示す。
図５ａ～図５ｈは、２９３Ｔ細胞に対するハイブリドーマによってスクリーニングされた抗体の結合能力を示す。
図６ａ～図６ｈおよび図７ａ～図７ｆは、ＣＨＯＳ細胞に対するファージによってスクリーニングされた抗体の結合能力を示す。
図において、２９３Ｔ－ＱＤ０１２：２９３Ｔ－ＣＬＤＮ１８．１で細胞を一過性的にトランスフェクトする
２９３Ｔ－ＱＤ０１０：２９３Ｔ－ＣＬＤＮ１８．２で細胞を一過性的にトランスフェクトする
実験目的：２９３－Ｔ細胞株でｃｌａｕｄｉｎ１８．１（非特異的結合）およびｃｌａｕｄｉｎ１８．２に対する抗体の結合能力を検証する。
２９３Ｔ－ＱＤ２１０：２９３Ｔ－ＣＬＤＮ１８．２－１８．１ＥＣＤ１で細胞を一過性的にトランスフェクトし、ＣＬＤＮ１８．２の最初の細胞外ドメインを１８．１の最初の細胞外ドメインに置き換える。
２９３Ｔ－ＱＤ２１１：２９３Ｔ－ＣＬＤＮ１８．１－１８．２ＥＣＤ１で細胞を一過性的にトランスフェクトし、ＣＬＤＮ１８．１の最初の細胞外ドメインを１８．２の最初の細胞外ドメインに置き換える。
実験目的：２９３－Ｔ細胞株において、抗体の結合領域は、ｃｌａｕｄｉｎ１８．２のエクソン（ｅｘｏｎ）－１によってコードされるドメインであることを検証する。
２９３Ｔにおけるハイブリドーマクローン（ｈｙｂｒｉｄｏｍａ ｃｌｏｎｅ）および２９３Ｔにおけるファージクローンは、同様に、それぞれ様々な２９３Ｔ一過性細胞株に対するハイブリドーマおよびファージによってスクリーニングされた抗体の結合能力を指す。
２９３Ｔでの実験目的は、ＣＨＯ細胞株と同じであり、各曲線およびその代表的な意味は、次のとおりである。
１.赤い曲線５（丸付き数字）は、空のベクターを一過性的にトランスフェクトする２９３Ｔ細胞株に対する被験抗体の結合能力、即ち、陰性対照を示す。
２.青い曲線４（丸付き数字）は、ｃｌａｕｄｉｎ１８．２を一過性的にトランスフェクトする２９３Ｔ細胞株（２９３Ｔ－ＱＤ０１０）に対する被験抗体の結合、標的タンパク質の結合能力の検出を示す。
３．オレンジ色の曲線３（丸付き数字）は、ｃｌａｕｄｉｎ１８．１を一過性的にトランスフェクトする２９３Ｔ細胞株（２９３Ｔ－ＱＤ０１２）に対する被験抗体の結合、非特異的結合の検出を示す。
４．濃い緑色の曲線２（丸付き数字）は、ｃｌａｕｄｉｎ１８．１－１８．２ＥＣＤ１（ＣＬＤＮ１８．１の最初の細胞外ドメインを１８．２の最初の細胞外ドメインに置き換え、後者は、抗体結合部位が設計される領域である）を一過性的にトランスフェクトする２９３Ｔ細胞株（２９３Ｔ－ＱＤ２１１）に対する被験抗体の結合、抗体結合部位のドメインの検証を示す。
５．薄い緑色の曲線１（丸付き数字）は、ｃｌａｕｄｉｎ１８．２－１８．１ＥＣＤ１（ＣＬＤＮ１８．２の最初の細胞外ドメインを１８．１の最初の細胞外ドメインに置き換え、前者は、抗体結合部位が設計される領域である）を一過性的にトランスフェクトする２９３Ｔ細胞株（２９３Ｔ－ＱＤ２１０）に対する被験抗体の結合、抗体結合に対する当該ドメインの必要性の検証を示す。
図８ａ～図８ｈは、抗体と胃がんＰＤＸモデルＧＡ０００６腫瘍細胞との結合能力の実験を示す。
Figure 0007249696000001
上記の実験結果によると、本発明で提供される抗体がタンパク質への結合能力がより良好で、非特異的結合の状況がより低いことを示す。
別の実施形態において、本発明は、上記に記載の抗体をコードするポリヌクレオチドをさらに提供し、本発明によって提供される抗体をコードするこれらのポリヌクレオチドがＤＮＡの形態で提供される場合、その後の転写および編集プロセスで除去される非コード配列を含み得るか、または、本発明の実施例で提供される抗体をコードする配列およびタンパク質発現に必要な配列のみを含み得る。
本発明は、上記のいずれか１項に記載の抗体を含む医薬組成物をさらに提供し、本発明で提供される医薬組成物は、実施形態で提供される抗体のうちの任意の一つまたは少なくとも二つの組成物のみを含み得る。
当業者は、医薬組成物について、医薬的に許容される賦形剤をさらに含むことは明らかであり、粉末剤または錠剤等の他の剤形を調製するのに必要な一般的な賦形剤は、すべて製薬プロセスで追加する必要のある成分として使用される必要があるはずである。
本発明は、生物学的サンプル中にＣＬＤＮが存在するかどうかを検出するための方法をさらに提供し、
生物学的サンプルに上記のいずれか１項に記載の抗体を投与する工程、ここで、前記抗体は、検出可能なマーカーを有し、および前記検出可能なマーカーが存在するかどうかを検出するか、または前記検出可能なマーカーの含有量を検出する工程を含むことを特徴とする。
動物の効力試験
a)胃がん異種移植モデルＧＡ０００６担癌マウスから腫瘍組織を収集し、直径が２～３ｍｍである腫瘍ブロックに切り、Ｂａｌｂ／ｃヌードマウスの右前肩甲骨の皮下に接種する。
b)Ｂａｌｂ／ｃヌードマウスの平均腫瘍体積が約１００ｍｍ３に達する場合、マウスをランダムに６匹のマウスずつグループ化する。すべての動物の体重を秤量し、ノギスで腫瘍体積を測定する。腫瘍体積に基づいて、ランダムグループ化法を使用してグループ化し、異なるグループ間の腫瘍体積が類似していることを確認する。各グループ内の腫瘍体積の変動係数（ＣＶ）は、式ＣＶ＝ＳＤ／ＭＴＶ×１００％で計算され、４０％未満である必要がある。ランダムグループ化は、ＳｔｕｄｙＤｉｒｅｃｔｏｒＴＭを使用して完了する。グループ化の当日はＤ０であり、当日から投与し始める。詳細な投与方法、投与量および投与経路は、以下の表を参照する。
Figure 0007249696000002
投与量は、１０μＬ／ｇである。
表１および表２の抗体番号の意味、例えば、ＱＰ１９０１９１は、一つの重鎖および一つの軽鎖の組み合わせを意味する。
c)投与開始後、週２回マウスの体重および腫瘍体積を測定する。腫瘍体積の計算式：腫瘍体積（ｍｍ３）＝１／２×（ａ×ｂ２）（ここで、ａは、長径を表し、ｂは、短径を表す）。最後の投与から１週間後に実験を終了し、マウスを殺し、腫瘍を取り出し、体重を秤量し、写真を撮る。以下の分析法を使用して、データ分析を行う。
相対的な腫瘍増殖率、Ｔ／Ｃ（％）は、即ち、特定の時点での腫瘍の体積または重量に対する治療グループおよび対照グループのパーセンテージ値である。計算式は、Ｔ／Ｃ％＝ＴＲＴＶ／ＣＲＴＶ×１００％（ＴＲＴＶ：治療グループの平均ＲＴＶ、ＣＲＴＶ：対照グループの平均ＲＴＶ、ＲＴＶ＝Ｖｔ／Ｖ０、Ｖ０は、グループ化時の当該動物の腫瘍体積であり、Ｖｔは、治療後に当該動物の腫瘍体積である）である。
相対的な腫瘍阻害率、ＴＧＩ（％）の計算式は、ＴＧＩ％＝（１－Ｔ／Ｃ）×１００％（ＴおよびＣは、特定の時点でそれぞれ治療グループおよび対照グループの相対的な腫瘍体積（ＲＴＶ）である）である。
投与後３１日目にＰＢＳ対照グループのマウスの平均腫瘍体積は、９１１．１６±１７７．８１ｍｍ３である。投与後３１日目に抗体分子ＱＰ１９２１９３（１０ｍｇ／ｋｇ）、ＱＰ２０７２０８（１０ｍｇ／ｋｇ）、およびＱＰ１１１５１１１６（１０ｍｇ／ｋｇ）のグループの平均腫瘍体積は、それぞれ５８０．９７±６７．９７ｍｍ３、６８０．２８±１９３．５０ｍｍ３、および７２２．３８±１１８．０７ｍｍ３であり、ＴＧＩは、それぞれ３６．３４％、２５．３４％、および２０．７２％であり、投与後３１日目に対照分子ＩＭＡＢ３６２（１０ｍｇ／ｋｇ）の平均腫瘍体積は、６６１．２８±１０４．４９ｍｍ３であり、ＴＧＩは、２７．４２％（以下の表を参照する）である。スクリーニングされた三つの分子は、すべてある程度で腫瘍の増殖を阻害し、統計的に有意な差はなかったが、ＱＰ１９２１９３は、対照分子ＩＭＡＢ３６２よりも優れており、ＱＰ２０７２０８およびＱＰ１１１５１１１６も、ＩＭＡＢ３６２と同じレベルの腫瘍増殖の阻害能力を示す。また、マウスの体重は、投与プロセス中に有意に減少せず、抗体分子がマウスに対して明らかな毒性副作用を有さないことを示す。
Figure 0007249696000003
腫瘍重量の分析結果は、腫瘍体積の結果と類似する。投与後３１日目にＰＢＳ対照グループのマウスの平均腫瘍重量は、７２２．５７±１７６．３２ｍｇであり、投与終了後３１日目に抗体分子ＱＰ１９２１９３、ＱＰ２０７２０８、およびＱＰ１１１５１１１６治療グループの平均腫瘍重量は、それぞれ４５５．５±４６．４２ｍｇ、３９１．９３±１１１．１５ｍｇおよび４３２．０３±６６．２５ｍｇであり、ＴＧＩは、それぞれ３６．９６％、４５．７６％および４０．２１％であり、投与後３１日目に対照分子ＩＭＡＢ３６２治療グループの平均腫瘍重量は、４３５．７８±９１ｍｇであり、ＴＧＩは、３９．６９％である。（以下の表を参照する）
Figure 0007249696000004
従って、ＰＤＸ動物効力試験を通じて、スクリーニングされた抗体分子は、対照分子ＩＭＡＢ３６２よりもインビボでの腫瘍阻害能力が優れているかまたは同じレベルであることが分かる。
実験結果は、図９～図１４に示され、ここで、胃がんＰＤＸモデルＧＡ０００６に対する抗体の効力試験の結果は、図９に示される。図１０Ａは、グループ化後にＰＢＳグループ（陰性対照）処理の腫瘍増殖曲線を示す。図１０Ｂは、グループ化後にＱＰ１９２１９３グループ処理の腫瘍増殖曲線を示す。図１０Ｃは、グループ化後にＱＰ２０７２０８グループ処理の腫瘍増殖曲線を示す。図１０Ｄは、グループ化後にＱＰ１１１５１１１６グループ処理の腫瘍増殖曲線を示す。図１０Ｅは、グループ化後に対照抗体ＩＭＡＢ３６２グループ処理の腫瘍増殖曲線を示す。図１１は、本発明の各抗体および対照抗体を加えたマウスの各グループにおける腫瘍Ｄ３１の重量を示す。図１２は、各実験グループの腫瘍体積の実際のショット図を示す。図１３は、マウスの各グループの体重曲線を示す。図１４は、マウスの各グループの体重変化率の曲線を示す。実験結果から、発明の抗体は、インビボでの動物の効力において、ＩＭＡＢ３６２よりも腫瘍増殖の阻害に対してより良い効果を有することが分かる。

Claims (7)

  1. 重鎖と軽鎖とを含む、抗ＣＬＤＮ１８．２抗体であって、
    ここで、前記抗ＣＬＤＮ１８．２抗体の前記重鎖は、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３によりそれぞれ表される３つのＣＤＲを含み、
    前記抗ＣＬＤＮ１８．２抗体の前記軽鎖は、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３によりそれぞれ表される３つのＣＤＲを含み、
    前記抗ＣＬＤＮ１８．２抗体のアミノ酸配列は、ＨＣＤＲ１がＳＹＩＭＨであり、ＨＣＤＲ２がＹＩＮＰＹＮＤＧＴＫＹＮＥＫＦＫＧであり、ＨＣＤＲ３がＬＧＦＴＴＲＮＡＭＤＹであり、ＬＣＤＲ１がＫＳＳＱＳＬＬＮＳＧＮＱＫＮＹＬＡであり、ＬＣＤＲ２がＧＡＳＴＲＥＳであり、ＬＣＤＲ３がＱＮＤＨＳＹＰであるＣＤＲの組合せを含む、抗ＣＬＤＮ１８．２抗体。
  2. 前記抗ＣＬＤＮ１８．２抗体の前記重鎖は、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．７に示され、前記軽鎖は、ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．１４に示される、
    請求項１に記載の抗ＣＬＤＮ１８．２抗体。
  3. 請求項１又は２に記載の抗ＣＬＤＮ１８．２抗体をコードするポリヌクレオチド。
  4. 請求項１又は２に記載の抗ＣＬＤＮ１８．２抗体を含む医薬組成物。
  5. 抗腫瘍薬の調製における請求項１又は２に記載の抗ＣＬＤＮ１８．２抗体の使用。
  6. 生物学的サンプル（ヒトを除く。）中にＣＬＤＮ１８．２が存在するかどうかを検出するための方法であって、
    生物学的サンプルに請求項１又は２に記載の抗ＣＬＤＮ１８．２抗体を投与する工程、ここで、前記抗ＣＬＤＮ１８．２抗体は、検出可能なマーカーを有し、及び
    前記検出可能なマーカーが存在するかどうかを検出するか、又は前記検出可能なマーカーの含有量を検出する工程、
    を含む、前記生物学的サンプル中にＣＬＤＮ１８．２が存在するかどうかを検出するための方法。
  7. 請求項１又は２に記載の抗ＣＬＤＮ１８．２抗体を投与する工程を有する対象（ヒトを除く。）の腫瘍を治療する方法。
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