KR20220010002A - 항-cldn 항체 및 이의 약학적 조성물과 검출 방법 - Google Patents

항-cldn 항체 및 이의 약학적 조성물과 검출 방법 Download PDF

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Abstract

본 발명은 항-CLDN18.2 항체 및 이의 약학적 조성물과 검출 방법을 제공하고, 항체의 중쇄는 SEQ ID No:1-7 또는 SEQ ID No:15-30 중 어느 하나로부터 선택되며, 경쇄는 SEQ ID No:8-14 또는 SEQ ID No:31-46 중 어느 하나로부터 선택된다. 항체가 세포주 및 종양 조직 세포와 결합되는 능력은 기존의 항체 IMAB362보다 강하고, 항종양 효과도 기존의 항체 IMAB362보다 강하다.

Description

항-CLDN 항체 및 이의 약학적 조성물과 검출 방법
본 발명은 항-CLDN 항체에 관한 것이고, 본 발명은 항-CLDN 항체를 포함하는 약학적 조성물에 관한 것이며, 본 발명은 생물학적 샘플에 CLDN의 존재 여부를 검출하는 방법에 관한 것이다.
밀착연접(tight junction, TJ)은 세포 간의 물질 유동에서 중요한 작용을 하고, 막단백질 및 막지질이 직경의 방사확산을 차단하여 세포 극성을 유지하며, 이외에도 세포의 증식, 분화 및 이동을 조절하는 신호 분자 모집에 참여한다. 밀착연접은 클라우딘(Claudin, CLDN)으로 형성되고, 클라우딘 패밀리는 20여가지의 단백질 분자로 구성되며, 그 구성원에는 모두 하나의 네 차례 막관통 도메인 및 유사한 아미노산 서열이 함유되지만, 조직 분포는 일정한 특이성을 포함한다. 인간 CLDN 유전자는 짝을 이루어 상이한 염색체에 분포되는데, 이는 일부 CLDN 유전자는 유전자 복제에서 유래되는 것을 암시한다.
CLDN단백질 분자량은 대부분 20 ~ 34 kDa 범위 내이고, 가장 큰 구별점은 세포내 C-말단의 서열 및 크기이며, 해당 서열은 하나의 PDZ 도메인 결합 모티프를 포함하고, 상기 모티프는 CLDN 단백질이 직접 세포질 내의 ZO-1, ZO-2, ZO-3 및 MUPP1과 같은 밀착연접 관련 단백질과 상호 작용할 수 있도록 한다. 이 밖에, 해당 서열 종류에는 인산화 위치 등 전사 후 변형 위치가 함유되고, 단백질 분자의 위치 및 기능에 영향을 줄 수 있다. MAPK(mitogen-activated protein kinase) 또는 PKC(protein kinase C)는 CLDN1을 인산화시킬 수 있으며, cAMP(cyclic AMP)는 CLDN5의 인산화를 유도하고, 모두 CLDN 단백질의 장벽 기능을 촉진할 수 있으며, PKA에 의해 매개되는 CLDN16 인산화는 마그네슘 이온의 수송을 강화시킬 수 있다.
CLDN은 세포 바이패스의 선택적 삼투의 조절에서 중요한 작용을 하고, CLDN2 및 CLDN15는 양이온 채널 및 양이온 공극 형성에 참여하며, CLDN4/7/10은 음이온 채널 및 공극 구성에 참여한다. 일부 세포주에서 claudin 단백질은 높게 발현됨으로써, 막관통 저항성 및 삼투성에 영향을 준다. 배양된 표피 유래 세포에서, CLDN1/4/5/7은 막관통 저항성을 높일 수 있지만, CLDN2 및 CLDN10은 반대이다.
CLDN 유전자 돌연변이는 다양한 질환과 관련되는 것으로 인식된다. CLDN1 돌연변이는 경화성 담관염(sclerosing cholangitis) 및 어린선(ichthyosis)을 유발할 수 있고, CLDN16 및 CLDN19 돌연변이는 저마그네슘혈증(hypomagnesemia) 및 칼슘과잉뇨증(hypercalcinuria)과 관련되는 것으로 인식된다.
CLDN 단백질의 차등 발현은 다양한 암과 관련되는 것으로 인식된다. CLDN1 및 CLDN7은 침습성 유선암, 전립선암 및 식도암에서 하향 조절되고, 자궁경부암, 결장암, 식도암, 위암 등 다양한 암에서 CLDN3/4는 상이한 정도로 상향 조절되는 것이 발견되었다. Sahin 등은 정상 조직에서, CLDN18의 isoform 2 아형(CLDN18.2)은 위점막의 분화 후 표피 세포에서만 발현되며, 위 줄기세포 영역에서는 발현되지 않지만, 원발성 위암 및 그 전이조에서는 모두 비정상적으로 높게 발현됨음 발견하였다. 췌장암, 식도암 및 폐암에서도 CLDN18.2이 높게 발현된 것이 보도되었다. CLDN18.2는 세포막 표면에 위치하기에, 그 생물학적 기능 및 특징은 이가 이상적인 치료 표적임을 결정하였으며, 근래에 이러한 표적에 대한 단클론 항체도 등장하였는데, 그 중 발전이 가장 빠른 것은 Ganymed사의 IMAB362 (Claudiximab)이다. IMAB362는 종양 세포 표면에서 CLDN18.2와 결합하여, 항체 의존 세포 독성(antibody-dependent cytotoxicity, ADCC) 및 보체 의존 세포 독성(complement dependent cytotoxicity, CDC)을 유도하여 종양 세포를 살상한다. 화학 치료와 결합하여 사용할 경우, IMAB362는 T세포 침윤을 향상시키고 염증 촉진 인자를 상향 조절할 수도 있다.
본 발명의 목적은 항-CLDN 항체를 포함하는 약학적 조성물을 제공하는 것으로, 이 조성물로 항종양의 효과 및 이를 포함하는 약물을 제조할 수 있다. 나아가, 이 항체를 이용하여 생물학적 샘플에 CLDN의 존재 여부를 검출할 수 있다.
본 발명은 아래와 같은 기술적 해결수단을 사용한다.
항-CLDN 항체는, 중쇄 및 경쇄를 포함하고;
여기서, 항체의 중쇄는 하나 이상의 CDR을 포함하며, 중쇄의 CDR은 SEQ ID No.1 내지 SEQ ID No.7 또는 SEQ ID No.15 내지 SEQ ID No.30 중 어느 하나의 CDR서열과 비교하여, 세 개 이하의 아미노산의 차이가 있고,
항체의 경쇄는 하나 이상의 CDR을 포함하며, 경쇄의 CDR은 SEQ ID No.8 내지 SEQ ID No.14 또는 SEQ ID No.31 내지 SEQ ID No.46 중 어느 하나의 CDR서열과 비교하여, 세 개 이하의 아미노산의 차이가 있는 것을 특징으로 한다.
또한, 본 발명의 항-CLDN 항체에 있어서, 항체의 중쇄는 SEQ ID No.1 내지 No.7 중 어느 하나로부터 선택되는 것을 특징으로 한다.
또한, 본 발명의 항-CLDN 항체에 있어서, 항체의 경쇄는 SEQ ID No.8 내지 SEQ ID No.14 또는 SEQ ID No.31 내지 SEQ ID No.46 중 어느 하나로부터 선택되는 것을 특징으로 한다.
또한, 본 발명의 항-CLDN 항체에 있어서, 항체의 중쇄는 SEQ ID No.15 내지 SEQ ID No.30 중 어느 하나로부터 선택되는 것을 특징으로 한다.
또한, 본 발명의 항-CLDN 항체에 있어서, 항체의 경쇄는 SEQ ID No.31 내지 SEQ ID No.46 중 어느 하나로부터 선택되는 것을 특징으로 한다.
또한, 본 발명의 항-CLDN 항체에 있어서, 항체의 중쇄와 경쇄의 조합으로는,
SEQ ID No.1과 SEQ ID N0.8, SEQ ID No.2와 SEQ ID N0.9, SEQ ID No.3과 SEQ ID No.10,
SEQ ID No.4와 SEQ ID No.11, SEQ ID No.5와 SEQ ID No.12, SEQ ID No.6과 SEQ ID No.13,
SEQ ID No.7과 SEQ ID No.14, SEQ ID No.15와 SEQ ID No.31, SEQ ID No.16과 SEQ ID No.32,
SEQ ID No.17과 SEQ ID No.33, SEQ ID No.18과 SEQ ID No.34, SEQ ID No.19와 SEQ ID No.35,
SEQ ID No.20과 SEQ ID No.36, SEQ ID No.21과 SEQ ID No.37, SEQ ID No.22와 SEQ ID No.38,
SEQ ID No.23과 SEQ ID No.39, SEQ ID No.24와 SEQ ID No.40, SEQ ID No.25와 SEQ ID No.41,
SEQ ID No.26과 SEQ ID No.42, SEQ ID No.27과 SEQ ID No.43, SEQ ID No.28과 SEQ ID No.44,
SEQ ID No.29와 SEQ ID No.45, SEQ ID No.30과 SEQ ID No.46인 것을 특징으로 한다.
본 발명은 상술한 바에 따른 항체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 더 제공한다.
본 발명은 상술한 어느 한 항에 따른 항체를 포함하는 약학적 조성물을 더 제공한다.
본 발명은 항종양 약물의 제조에서 상술한 어느 한 항에 따른 항체의 응용을 제공한다.
본 발명은, 생물학적 샘플에 상술한 어느 한 항에 따른 항체를 투여하되, 상기 항체에는 검출 가능한 표지물이 구비되는 단계; 및 상기 검출 가능한 표지물의 존재 여부를 검출하거나, 상기 검출 가능한 표지물의 함량을 검출하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 생물학적 샘플에 CLDN의 존재 여부를 검출하는 방법을 더 제공한다.
본 발명의 항-CLDN 항체의 세포와 결합되는 능력은 IMAB362보다 강하다. 또한 본 발명의 항체는 IMAB362에 비해 체내 동물의 약효에서 더 우수한 종양 성장 억제 효과를 나타낸다
도 1a는 대조 항체 QP024025의 CHOS 세포에 대한 결합 능력을 나타낸다.
도 1b는 혼성세포에 의해 선별된 항체 QP188189의 CHOS 세포에 대한 결합 능력을 나타낸다.
도 1c는 혼성세포에 의해 선별된 항체 QP190191의 CHOS 세포에 대한 결합 능력을 나타낸다.
도 1d는 혼성세포에 의해 선별된 항체 QP192193의 CHOS 세포에 대한 결합 능력을 나타낸다.
도 1e는 혼성세포에 의해 선별된 항체 QP196198의 CHOS 세포에 대한 결합 능력을 나타낸다.
도 1f는 혼성세포에 의해 선별된 항체 QP199200의 CHOS 세포에 대한 결합 능력이다
도 1g는 혼성세포에 의해 선별된 항체 QP201202의 CHOS 세포에 대한 결합 능력이다
도 1h는 혼성세포에 의해 선별된 항체 QP207208의 CHOS 세포에 대한 결합 능력이다
도 2a는 파아지에 의해 선별된 항체 QP10731074의 CHOS 세포에 대한 결합 능력을 나타낸다.
도 2b는 파아지에 의해 선별된 항체 QP10791080의 CHOS 세포에 대한 결합 능력을 나타낸다.
도 2c는 파아지에 의해 선별된 항체 QP10851086의 CHOS 세포에 대한 결합 능력을 나타낸다.
도 2d는 파아지에 의해 선별된 항체 QP10911092의 CHOS 세포에 대한 결합 능력을 나타낸다.
도 2e는 파아지에 의해 선별된 항체 QP10971098의 CHOS 세포에 대한 결합 능력을 나타낸다.
도 2f는 파아지에 의해 선별된 항체 QP10991100의 CHOS 세포에 대한 결합 능력을 나타낸다.
도 3a는 파아지에 의해 선별된 항체 QP11051106의 CHOS 세포에 대한 결합 능력을 나타낸다.
도 3b는 파아지에 의해 선별된 항체 QP11071108의 CHOS 세포에 대한 결합 능력을 나타낸다.
도 3c는 파아지에 의해 선별된 항체 QP11091110의 CHOS 세포에 대한 결합 능력을 나타낸다.
도 3d는 파아지에 의해 선별된 항체 QP11111112의 CHOS 세포에 대한 결합 능력을 나타낸다.
도 3e는 파아지에 의해 선별된 항체 QP11131114의 CHOS 세포에 대한 결합 능력을 나타낸다.
도 3f는 파아지에 의해 선별된 항체 QP11151116의 CHOS 세포에 대한 결합 능력을 나타낸다.
도 4a는 파아지에 의해 선별된 항체 QP11171118의 CHOS 세포에 대한 결합 능력을 나타낸다.
도 4b는 파아지에 의해 선별된 항체 QP11031104의 CHOS 세포에 대한 결합 능력을 나타낸다.
도 4c는 파아지에 의해 선별된 항체 QP10451046의 CHOS 세포에 대한 결합 능력을 나타낸다.
도 4d는 파아지에 의해 선별된 항체 QP10471048의 CHOS 세포에 대한 결합 능력을 나타낸다.
도 5a는 대조 항체 QP024025의 상이한 293T 일시적 형질감염 세포주에 대한 결합 능력을 나타낸다.
도 5b는 혼성세포에 의해 선별된 항체 QP188189의 상이한 293T 일시적 형질감염 세포주에 대한 결합 능력을 나타낸다.
도 5c는 혼성세포에 의해 선별된 항체 QP190191의 상이한 293T 일시적 형질감염 세포주에 대한 결합 능력을 나타낸다.
도 5d는 혼성세포에 의해 선별된 항체 QP192193의 상이한 293T 일시적 형질감염 세포주에 대한 결합 능력을 나타낸다.
도 5e는 혼성세포에 의해 선별된 항체 QP196198의 상이한 293T 일시적 형질감염 세포주에 대한 결합 능력을 나타낸다.
도 5f는 혼성세포에 의해 선별된 항체 QP199200의 상이한 293T 일시적 형질감염 세포주에 대한 결합 능력을 나타낸다.
도 5g는 혼성세포에 의해 선별된 항체 QP201202의 상이한 293T 일시적 형질감염 세포주에 대한 결합 능력을 나타낸다.
도 5h는 혼성세포에 의해 선별된 항체 QP207208의 상이한 293T 일시적 형질감염 세포주에 대한 결합 능력을 나타낸다.
도 6a는 파아지에 의해 선별된 항체 QP10451046의 상이한 293T 일시적 형질감염 세포주에 대한 결합 능력을 나타낸다.
도 6b는 파아지에 의해 선별된 항체 QP10711072의 상이한 293T 일시적 형질감염 세포주에 대한 결합 능력을 나타낸다.
도 6c는 파아지에 의해 선별된 항체 QP10731074의 상이한 293T 일시적 형질감염 세포주에 대한 결합 능력을 나타낸다.
도 6d는 파아지에 의해 선별된 항체 QP10851086의 상이한 293T 일시적 형질감염 세포주에 대한 결합 능력을 나타낸다.
도 6e는 파아지에 의해 선별된 항체 QP10911092의 상이한 293T 일시적 형질감염 세포주에 대한 결합 능력을 나타낸다.
도 6f는 파아지에 의해 선별된 항체 QP10991100의 상이한 293T 일시적 형질감염 세포주에 대한 결합 능력을 나타낸다.
도 6g는 파아지에 의해 선별된 항체 QP11031104의 상이한 293T 일시적 형질감염 세포주에 대한 결합 능력을 나타낸다.
도 6h는 파아지에 의해 선별된 항체 QP11051106의 상이한 293T 일시적 형질감염 세포주에 대한 결합 능력을 나타낸다.
도 7a는 파아지에 의해 선별된 항체 QP11071108의 상이한 293T 일시적 형질감염 세포주에 대한 결합 능력을 나타낸다.
도 7b는 파아지에 의해 선별된 항체 QP11091110의 상이한 293T 일시적 형질감염 세포주에 대한 결합 능력을 나타낸다.
도 7c는 파아지에 의해 선별된 항체 QP11111112의 상이한 293T 일시적 형질감염 세포주에 대한 결합 능력을 나타낸다.
도 7d는 파아지에 의해 선별된 항체 QP11131114의 상이한 293T 일시적 형질감염 세포주에 대한 결합 능력을 나타낸다.
도 7e는 파아지에 의해 선별된 항체 QP11151116의 상이한 293T 일시적 형질감염 세포주에 대한 결합 능력을 나타낸다.
도 7f는 파아지에 의해 선별된 항체 QP11171118의 상이한 293T 일시적 형질감염 세포주에 대한 결합 능력을 나타낸다.
도 8a는 대조 항체와 위암 PDX 모델 GA0006 종양 세포의 결합 능력 실험에서, 대조군 IMAB362의 곡선이다.
도 8b는 항체와 위암 PDX 모델 GA0006 종양 세포의 결합 능력 실험에서 QP190191의 곡선이다.
도 8c는 항체와 위암 PDX 모델 GA0006 종양 세포의 결합 능력 실험에서 QP192193의 곡선이다.
도 8d는 항체와 위암 PDX 모델 GA0006 종양 세포의 결합 능력 실험에서 QP201202의 곡선이다.
도 8e는 항체와 위암 PDX 모델 GA0006 종양 세포의 결합 능력 실험에서 QP207208의 곡선이다.
도 8f는 항체와 위암 PDX 모델 GA0006 종양 세포의 결합 능력 실험에서 QP11091110의 곡선이다.
도 8g는 항체와 위암 PDX 모델 GA0006 종양 세포의 결합 능력 실험에서 QP11131114의 곡선이다.
도 8h는 항체와 위암 PDX 모델 GA0006 종양 세포의 결합 능력 실험에서 QP11151116의 곡선이다.
도 9는 항체의 위암 PDX 모델 GA0006에 대한 약효 시험을 나타낸다.
도 10A는 그룹화 후에 처리된 PBS군(음성 대조)의 종양 성장 곡선이다.
도 10B는 그룹화 후에 처리된 QP192193군의 종양 성장 곡선이다.
도 10C는 그룹화 후에 처리된 QP207208군의 종양 성장 곡선이다.
도 10D는 그룹화 후에 처리된 QP11151116군의 종양 성장 곡선이다.
도 10E는 그룹화 후에 처리된 대조 항체 IMAB362군의 종양 성장 곡선이다.
도 11은 본 발명의 각 항체 및 대조 항체의 투입에 의한 각 그룹의 마우스 종양 D31의 무게를 나타낸다.
도 12는 각 실험군의 종양 부피 실사진이다.
도 13은 각 그룹 마우스의 체중 곡선이다.
도 14는 각 그룹 마우스의 체중 변화율 곡선이다.
아래 도면을 결합하여 본 발명의 구체적인 실시형태를 설명한다.
본 발명의 항체는, 인간화 항체를 포함하나 이에 한정되는 것은 아니다. 본 발명에서 제공되는 다양한 항체의 선별 방법에 있어서, 일반적으로 비교적 편리한 혼성세포 선별 항체를 먼저 사용하지만, 이 표적의 항원(claudin18.2)은 얻기 어렵기에, 동시에 파아지 라이브러리 선별 항체도 사용하였다. 본 실시형태에서 선별하여 얻어지는 항-claudin18.2 항체 서열은 아래와 같다.
혼성세포에 의해 선별된 항체의 중쇄 가변 영역(VH) CDR은 서열 중 밑줄 친 부분에 표시된 바와 같다.
>QP189
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경쇄 서열:
여기서, 경쇄 가변 영역(VL) CDR은 서열 중 밑줄 친 부분에 표시된 바와 같다.
>QD188
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>QD207
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파아지 라이브러리에 의해 선별된 항체의 중쇄 가변 영역(VH) CDR은 서열 중 밑줄 친 부분에 표시된 바와 같다.
>QD1045
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>QD1097
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>QD1099
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>QD1113
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>QD1115
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>QD1117
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경쇄 서열:
여기서, 경쇄 가변 영역(VL) CDR은 서열 중 밑줄 친 부분에 표시된 바와 같다.
>QD1046
DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALMTPTFGQGTKVEIK
>QD1048
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>QD1086
DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVTDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALMTPTFGQGTKVEIK
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>QD1098
DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQGLNTFTFGQGTKVEIK
>QD1100
DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQWDTFGQGTKVEIK
>QD1104
DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTGTFGQGTKVEIK
>QD1106
DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNNKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYTTPFTFGQGTKVEIK
>QD1108
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>QD1110
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>QD1112
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>QD1114
DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYDASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYLSYPPTFGQGTKVEIK
>QD1116
DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYDASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYNSYPLTFGQGTKVEIK
>QD1118
DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYDASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQQYSTYPLTFGQGTKVEVK
항체 결합 능력 실험:
실험 1: FACS에 의한 항체의 종양 세포주에 대한 결합 능력 측정
a) 1.96 웰 플레이트의 각 웰에 2Х105개의 세포를 플랭킹하고, 1000Хrpm로 5분간 원심 분리하며, 1ХPBS로 세포를 한 번 세척하고, 나머지 상청액을 흡인하여 제거하였다.
b) 3 %의 BSA-PBS 용액을 넣어 세포를 차단하고, 4 ℃에서 60분간 차단하였다.
c) 차단 용액으로 측정할 항체를 5 μg/ml까지 희석하고, 웰에 넣으며, 4 ℃에서 60분간 배양하였다.
d) 항체를 흡인하여 제거하고, 웰 당 220 μl의 1ХPBS로 세포를 세 번 세척하였다.
e) 각 웰에 50 μl의 PE-anti-human FC(1:200로 희석) 이차 항체를 넣고, 4 ℃에서 40분간 빛을 피해 배양하였다.
f) 항체를 흡인하여 제거하고, 웰 당 1ХPBS로 세포를 네 번 세척하였다.
g) 기계로 측정하였다.
실험 2: FACS에 의한 항체의 PDX 조직 종양 세포에 대한 결합 능력 측정
a) 종양 당 하나의 gentleMACS?? C Tube 및 3 ml의 소화액을 준비하고, 소화액은 Tumor Dissociation Kit(miltenyibiotech, 130-096-730) 설명서에 따라 조제하며, 조제 즉시 사용하였다.
b) 마우스를 희생시키고, 깨끗한 도구로 종양을 적출하며, 1ХPBS로 세척한 후 종양 표면에 부착된 혈관, 지방, 근막 등 조직을 제거하였다. 종양 조직이 소화액에 의해 완전히 소화되도록 보장하기 위해 각 소화관이 0.8 g 이하의 종양 조직을 소화할 수 있도록 한다.
c) 종양 조직을 6웰 플레이트의 웰에 넣고, 소화액을 넣으며, 깨끗한 핀셋 및 메스로 종양 조직을 약 1 mm3의 작은 조작으로 절단하였다.
d) 조직을 gentleMACS?? C Tube에 넣고, 남은 소화액을 사용하여 웰 플레이트를 세척하며 소화관에 함께 옮기고, 얼음 위에 방치하였다.
e) 소화관을 gentleMACS전자동 조직 처리 장치에 거꾸로 넣고, 프로그램 37_c_m_TDK_1을 선택하여 소화시켰다. 프로그램 종료 후, 소화관을 제거하고, 300Хg로 순간적 원심 분리하여 세포 및 나머지 조직을 수집하였다.
f) 상청액을 버리고, 1ХPBS로 세포 및 조직을 재현탁하며, 세포 현탁액을 세포 여과망에 넣고, 50 ml의 원심 분리관에 넣으며, 10 ml의 PBS로 현탁액이 여과망을 통과하여 단세포 현탁액이 되도록 하였다.
g) 300Хg로 5분간 원심 분리하고, 상청액을 버리며, 5 ml의 PBS로 재현탁하고, 세포를 계수하고 세포의 농도를 샘플 당 1Х106개의 세포로 조절하였다.
h) 각 샘플에 100 μl의 농도가 1 μg/ml인 Mouse BD Fc Block(CAT#553141) PBS 용액을 넣어 세포를 재현탁하고, 20 μl의 human FcR Blocking Reagent를 넣어 균일하게 혼합하며, 실온에서 10분간 빛을 피해 배양하였다.
i) 5 μg/ml의 일차 항체를 넣고, 4 ℃에서 60분간 빛을 피해 배양하였다.
j) 2 ml의 FACS wash buffer을 넣고, 세포를 부드럽게 재현탁하며, 300Хg로 5분간 원심 분리하고, 상청액을 버리되, 두 번 반복하였다.
k) PE로 표지된 human IgG Fc이차 항체 및 염료를 함유하는 100 μl의 FACS wash buffer을 넣고 60분간 빛을 피해 배양하였다.
l) 2 ml의 FACS wash buffer을 넣고, 세포를 부드럽게 재현탁하며, 300Хg 로 5분간 원심 분리하고, 상청액을 버리되, 두 번 반복하였다.
m) 200 μl의 FACS wash buffer로 세포를 재현탁하고, 기계로 측정하였다.
실험 도면에서 hybridoma clone in CHOS system 및 phage clone in CHOS system은 즉 각각 혼성세포 및 파아지에 의해 선별된 항체의 CHOS 세포에 대한 결합 능력을 가리킨다. 도면에서 CHO18.2는 CHOS-CLDN18.2 안정적 형질감염 세포이고, CHO18.1는 CHOS-CLDN18.1 안정적 형질감염 세포이며, CHOS는 CHOS 형질감염 엠프티 벡터이다.
CHOS는 햄스터 난소 세포 불멸화에 의해 얻어지는 세포주이고, FACS(유세포 형광 선별 기술)를 사용하여 항체의 세포주에 대한 결합 능력을 측정하였다.
도 1a 내지 도 1h는 혼성세포에 의해 선별된 항체의 CHOS 세포에 대한 결합 능력을 나타낸다.
도 2a 내지 도 2h, 도 3a 내지 도 3h 및 도 4a 내지 도 4d는 파아지에 의해 선별된 항체가 CHOS 세포에 대한 결합 능력을 나타낸다.
실험 목적은 CHOS 세포주에서 항체와 claudin18.1(비특이적 결합) 및 claudin18.2의 결합 능력을 검증하는 것이다.
CHOS 세포주에 대한 도면에서, 각각의 panel은 측정할 항체의 세 가지 CHOS 세포주에 대한 FACS 측정 결과를 조합하여 형성된다.
1. 붉은색 곡선 ③은 측정할 항체의 엠프티 벡터로 형질감염된 CHOS 세포주(CHOS)에 대한 결합 능력을 나타내고, 즉 음성 대조이다.
2. 파란색 곡선 ②은 측정할 항체의 claudin18.1로 형질감염된 CHOS 세포주(CHO18.1)에 대한 결합 능력을 나타내고, 즉 비특이적 결합을 측정한 것이다.
3. 노란색 곡선 ①은 측정할 항체의 claudin18.2로 형질감염된 CHOS 세포주 (CHO18.2)에 대한 결합 능력을 나타내고, 즉 표적 단백질의 결합 능력을 측정한 것이다.
도 5a 내지 도 5h는 혼성세포에 의해 선별된 항체의 293T세포에 대한 결합 능력을 나타낸다.
도 6a 내지 도 6h 및 도 7a 내지 도 7f는 파아지에 의해 선별된 항체의 CHOS 세포에 대한 결합 능력을 나타낸다.
도면에서, 293T-QD012는 293T-CLDN18.1 일시적 형질감염 세포이고,
293T-QD010은 293T-CLDN18.2 일시적 형질감염 세포이다.
실험 목적은 293-T 세포주에서 항체와 claudin18.1(비특이적 결합) 및 claudin18.2의 결합 능력을 검증하는 것이다.
293T-QD210은 293T-CLDN18.2-18.1ECD1일시적 형질감염 세포이고; CLDN18.2의 첫 번째 세포외 도메인은 18.1의 첫 번째 세포외 도메인으로 대체된다.
293T-QD211은 293T-CLDN18.1-18.2ECD1일시적 형질감염 세포이고; CLDN18.1의 첫 번째 세포외 도메인은 18.2의 첫 번째 세포외 도메인으로 대체된다.
실험 목적은 293-T 세포주에서 항체 결합 영역이 claudin18.2의 exon-1에 의해 코딩되는 도메인인 것을 검증하는 것이다.
hybridom clone in 293T 및 phage clone in 293T는 마찬가지로 각각 혼성세포 및 파아지에 의해 선별된 항체의 상이한 293T 일시적 형질감염 세포주에 대한 결합 능력을 가리킨다.
293T에서의 실험 목적은 CHO 세포주에서와 동일하고, 각각의 곡선이 대표하는 의미 해석은 아래와 같다.
1. 붉은색 곡선 ⑤는 측정할 항체의 엠프티 벡터로 일시적 형질감염된 293T 세포주에 대한 결합 능력을 나타내고, 즉 음성 대조이다.
2. 파란색 곡선 ④는 측정할 항체의 claudin18.2로 일시적 형질감염된 293T 세포주 (293T-QD010)에 대한 결합을 나타내고, 표적 단백질의 결합 능력을 측정한 것이다.
3. 주황색 곡선 ③은 측정할 항체의 claudin18.1로 일시적 형질감염된 293T 세포주(293T-QD012)에 대한 결합을 나타내고, 비특이적 결합을 측정한 것이다.
4. 짙은 녹색 곡선 ②는 측정할 항체의 claudin18.1-18.2ECD1(CLDN18.1의 첫 번째 세포외 도메인은 18.2의 첫 번째 세포외 도메인으로 대체되고, 후자는 항체 결합 위치의 영역을 설계한 것임)로 일시적 형질감염된 293T 세포주(293T-QD211)에 대한 결합을 나타내고, 항체 결합 위치의 도메인을 검증한 것이다.
5. 연녹색 곡선 ①은 측정할 항체의 claudin18.2-18.1ECD1(CLDN18.2의 첫 번째 세포외 도메인은 18.1의 첫 번째 세포외 도메인으로 대체되고, 전자는 항체 결합 위치의 영역을 설계한 것임)로 일시적 형질감염된 293T 세포주(293T-QD210)에 대한 결합을 나타내고, 상기 도메인이 항체에 대한 결합의 피요성을 검증한 것이다.
도 8a 내지 도 8h는 항체와 위암 PDX 모델 GA0006 종양 세포의 결합 능력 실험을 나타낸다.
항체와 위암 PDX 모델 GA0006 종양 세포의 결합 비율
항체 번호 항체와 세포 결합 비율
IMBA362 85.56 %
QP190191 91.55 %
QP192193 92.37 %
QP201202 89.95 %
QP207208 91.66 %
QP11091110 92.37 %
QP11131114 90.31 %
QP11151116 91.66 %
위의 실험 결과는, 본 발명에서 제공되는 항체는 단백질과의 결합 능력이 더 우수하고, 비특이적 결합 상황이 비교적 낮은 것을 나타낸다. 다른 실시형태에서, 본 발명은 상술한 바에 따른 항체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 더 제공하고, 본 발명에서 제공되는 항체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드가 DNA의 형태로 제공될 경우, 이는 후속의 전사 및 편집 과정에서 제거되는 비코딩 서열을 포함할 수 있고, 본 발명의 실시예에서 제공되는 항체의 코딩에 대응되는 서열 및 단백질 발현 시 필요되는 서열만 포함할 수 있다.
본 발명은 상술한 어느 한 항에 따른 항체를 포함하는 약학적 조성물을 더 제공하고, 본 발명에서 제공되는 약학적 조성물은, 오직 실시형태에서 제공되는 항체 중 어느 하나 또는 적어도 두 가지의 조성물만 포함할 수 있다.
본 기술분야의 통상의 기술자는, 약학적 조성물은 약학적으로 허용 가능한 부형제를 더 포함하고, 분말제 또는 정제 등 다른 제형의 제조에 필요되는 통상적인 부형제는 모두 제약 과정에서 첨가되어야 하는 성분임을 이해해야 한다.
본 발명은, 생물학적 샘플에 상술한 어느 한 항에 따른 항체를 투여하되, 상기 항체에는 검출 가능한 표지물이 구비되는 단계; 및 상기 검출 가능한 표지물의 존재 여부를 검출하거나, 상기 검출 가능한 표지물의 함량을 검출하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 생물학적 샘플에 CLDN의 존재 여부를 검출하는 방법을 더 제공한다.
동물 약효 시험
a) 위암 이종 이식 모델 GA0006종양 포함 마우스에서 종양 조직을 취하고, 직경이 2 ~ 3 mm인 종양 조각으로 절단하여 Balb/c 누드 마우스의 오른쪽 앞 견갑부 피하에 접종하였다.
b) Balb/c 누드 마우스의 평균 종양 부피가 약 100 mm3에 도달할 경우, 마우스를 랜덤으로 각 그룹에 6마리씩 그룹을 나누었다. 모든 동물의 체중을 측정하고, 버니어 캘리퍼스로 종양 부피를 측정하였다. 종양 부피에 따라, 랜덤으로 그룹을 나누는 방법을 사용하여 그룹을 나누고, 상이한 그룹 간의 종양 부피가 비슷하도록을 보장하였다. 각 그룹 내의 종양 부피의 변이 계수(CV)는 공식 CV= SD/MTVХ100 %로 계산하고, 40 %보다 작아야 한다. 랜덤 그룹화는 StudyDirectorTM으로 완성하였다. 그룹을 나누는 당일이 D0이고, 당일부터 투여하였다. 상세한 투여 방법, 투여 용량 및 투여 경로는 아래 표와 같다.
동물 약효 시험의 투여 파라미터
그룹 동물 수 투여 그룹 용량(mg/kg) 투여 방식 투여 주기
1 6 Vehicle control -- i.p. BIW×4주
2 6 QP192193 10 i.p. BIW×4주
3 6 QP207208 10 i.p. BIW×4주
4 6 QP11151116 10 i.p. BIW×4주
5 6 IMAB362 10 i.p. BIW×4주
투여 부피는 10 μL/g이다.표 1 및 표 2 중의 항체 번호의 의미에 있어서, 예를 들어 QP190191은, 하나의 중쇄 및 하나의 경쇄의 조합을 나타낸다.
c) 투여 시작 후, 매주에 두 번 마우스의 체중 및 종양 부피를 측정하였다. 종양 부피 계산 공식은 종양 부피(mm3)= 1/2 Х(a Х b2)(여기서, a는 긴 지름을 나타내고, b는 짧은 지름을 나타냄)이다. 마지막 투여 1주 후 실험을 멈추고, 마우스를 희생시키며, 종양을 취하여 무게를 측정하고, 사진을 촬영하였다. 아래의 분석 방법을 선택하여 데이터 분석을 진행하였다.
상대 종양 증식율, T/C(%)는, 즉 어느 시점에서, 치료군 및 대조군의 상대 종양 부피 또는 종양 무게의 백분율이다. 계산 공식은 T/C % = TRTV/CRTVХ100 %(TRTV: 치료군 평균 RTV; CRTV: 대조군 평균 RTV; RTV=Vt/V0, V0은 그룹 나눌 시 해당 동물의 종양 부피이고, Vt는 치료 후 해당 동물의 종양 부피임)이고;
상대 종양 억제율, TGI(%)의 계산 공식은 TGI % =(1-T/C)Х 100 %(T 및 C는 각각 치료군 및 대조군이 어느 특정 시점에서의 상대되는 종양 부피(RTV)임)이다.
PBS대조군 마우스의 투여 후 31일째의 평균 종양 부피는 911.16±177.81 mm3이다. 항체 분자 QP192193(10 mg/kg), QP207208(10 mg/kg), 및 QP11151116(10 mg/kg)군의 투여 후 31일째의 평균 종양 부피는 580.97±67.97 mm3, 680.28±193.50 mm3, 및 722.38±118.07 mm3이고, TGI는 각각 36.34 %, 25.34 %, 및 20.72 %이며, 대조 분자 IMAB362(10 mg/kg)의 투여 후 31일째의 평균 종양 부피는 661.28±104.49 mm3이고, TGI는 27.42 %(아래 표 참조)이다. 세 개의 선별되는 분자는 모두 일정한 정도에서 종양의 성장을 억제하였고, 비록 통계학적으로 유의적인 차이는 없지만, QP192193은 대조 분자 IMAB362의 추세보다 우수함을 보이며, QP207208 및 QP11151116도 IMAB362와 비슷한 수준의 종양 성장을 억제하는 능력을 보였다. 마우스 체중은 투여 과정에서 현저한 감량이 없었는데, 이는 항체 분자가 마우스에 대해 현저한 독부작용이 없음을 설명한다.
Figure pct00001
종양 무게의 분석 결과는 종양 부피의 결과와 비슷하다. PBS대조군 마우스의 투여 후 31일째의 평균 종양 무게는 722.57±176.32 mg이고, 항체 분자 QP192193, QP207208, 및 QP11151116치료군은 투여 종료 후 31일째의 평균 종양 무게는 각각 455.5±46.42 mg, 391.93±111.15 mg 및 432.03±66.25 mg이며, TGI는 각각 36.96 %, 45.76 % 및 40.21 %이고; 대조 분자 IMAB362치료군의 투여 후 31일째의 평균 종양 무게는 435.78±91 mg이고, TGI는 39.69 %이다. (아래 표 참조)
Figure pct00002
따라서, PDX동물 약효 시험을 통해, 선별된 항체 분자는 대조 분자 IMAB362보다 더 우수하거나 비슷한 수준의 체내 종양 억제 능력이 가짐을 발견하였다. 실험 결과는 도 9 내지 도 14에 도시된 바와 같고, 항체의 위암 PDX 모델 GA0006에 대한 약효 시험의 결과는 도 9에 도시된 바와 같다. 도 10A는 그룹화 후에 처리된 PBS군(음성 대조)의 종양 성장 곡선이다. 도 10B는 그룹화 후에 처리된 QP192193군의 종양 성장 곡선이다. 도 10C는 그룹화 후에 처리된 QP207208군의 종양 성장 곡선이다. 도 10D는 그룹화 후에 처리된 QP11151116군의 종양 성장 곡선이다. 도 10E는 그룹화 후에 처리된 대조 항체 IMAB362군의 종양 성장 곡선이다. 도 11은 본 발명의 각 항체 및 대조 항체의 투입에 의한 각 그룹의 마우스 종양 D31의 무게를 나타낸다.도 12는 각 실험군의 종양 부피 실사진이다. 도 13은 각 그룹 마우스의 체중 곡선이다. 도 14는 각 그룹 마우스의 체중 변화율 곡선이다. 실험 결과로부터 보다시피, 본 발명의 항체는 IMAB362보다 체내 동물 약효에서 더 우수한 종양 성장을 억제하는 효과를 나타낸다.
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20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Tyr Tyr Tyr Tyr Phe Trp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 26 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> heavy chain variable region <400> 26 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr Trp Phe 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Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Ser Ala Ala Tyr Tyr Tyr Phe Trp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 29 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> heavy chain variable region <400> 29 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Ser Tyr Tyr Tyr Tyr Phe Trp Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 30 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> heavy chain variable region <400> 30 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Ala Ile Asp Tyr Tyr Thr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 31 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> light chain variable region <400> 31 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser 20 25 30 Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ala 85 90 95 Leu Met Thr Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 32 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> light chain variable region <400> 32 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser 20 25 30 Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Asp 85 90 95 Leu Trp Pro Arg Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 33 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> light chain variable region <400> 33 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser 20 25 30 Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ala 85 90 95 Ala Gln Ser Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 34 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> light chain variable region <400> 34 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser 20 25 30 Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ala 85 90 95 Leu Asn Thr Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 35 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> light chain variable region <400> 35 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser 20 25 30 Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Thr 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ala 85 90 95 Leu Met Thr Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 36 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> light chain variable region <400> 36 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser 20 25 30 Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Gly 85 90 95 Arg Gln Phe Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 37 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> light chain variable region <400> 37 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser 20 25 30 Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Gly 85 90 95 Leu Asn Thr Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 38 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> light chain variable region <400> 38 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser 20 25 30 Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ala 85 90 95 Leu Gln Trp Asp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 39 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> light chain variable region <400> 39 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser 20 25 30 Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ala 85 90 95 Leu Gln Thr Gly Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 40 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> light chain variable region <400> 40 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser 20 25 30 Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln 85 90 95 Tyr Tyr Thr Thr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile 100 105 110 Lys <210> 41 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> light chain variable region <400> 41 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Ser Thr 85 90 95 Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 42 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> light chain variable region <400> 42 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Ser Tyr Ser Pro 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 43 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> light chain variable region <400> 43 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Lys Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Thr Tyr Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 44 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> light chain variable region <400> 44 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 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Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Thr Tyr Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Val Lys 100 105

Claims (10)

  1. 항-CLDN 항체로서,
    중쇄 및 경쇄를 포함하고;
    상기 항체의 중쇄는 하나 이상의 CDR을 포함하며, 중쇄의 CDR은 SEQ ID No.1 내지 SEQ ID No.7 또는 SEQ ID No.15 내지 SEQ ID No.30 중 어느 하나의 CDR 서열과 비교하여, 세 개 이하의 아미노산의 차이가 있고,
    상기 항체의 경쇄는 하나 이상의 CDR을 포함하며, 경쇄의 CDR은 SEQ ID No.8 내지 SEQ ID No.14 또는 SEQ ID No.31 내지 SEQ ID No.46 중 어느 하나의 CDR서열과 비교하여, 세 개 이하의 아미노산의 차이가 있는 것을 특징으로 하는 항-CLDN 항체.
  2. 제1항에 있어서,
    항체의 중쇄는 SEQ ID No.1 내지 No.7 중 어느 하나로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 항-CLDN 항체.
  3. 제2항에 있어서,
    항체의 경쇄는 SEQ ID No.8 내지 SEQ ID No.14 또는 SEQ ID No.31 내지 SEQ ID No.46 중 어느 하나로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 항-CLDN 항체.
  4. 제1항에 있어서,
    항체의 중쇄는 SEQ ID No.15 내지 SEQ ID No.30 중 어느 하나로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 항-CLDN 항체.
  5. 제4항에 있어서,
    항체의 경쇄는 SEQ ID No.31 내지 SEQ ID No.46 중 어느 하나로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 항-CLDN 항체.
  6. 제1항에 있어서,
    항체의 중쇄와 경쇄의 조합으로는,
    SEQ ID No.1과 SEQ ID N0.8,
    SEQ ID No.2와 SEQ ID N0.9,
    SEQ ID No.3과 SEQ ID No.10,
    SEQ ID No.4와 SEQ ID No.11,
    SEQ ID No.5와 SEQ ID No.12,
    SEQ ID No.6과 SEQ ID No.13,
    SEQ ID No.7과 SEQ ID No.14,
    SEQ ID No.15와 SEQ ID No.31,
    SEQ ID No.16과 SEQ ID No.32,
    SEQ ID No.17과 SEQ ID No.33,
    SEQ ID No.18과 SEQ ID No.34,
    SEQ ID No.19와 SEQ ID No.35,
    SEQ ID No.20과 SEQ ID No.36,
    SEQ ID No.21과 SEQ ID No.37,
    SEQ ID No.22와 SEQ ID No.38,
    SEQ ID No.23과 SEQ ID No.39,
    SEQ ID No.24와 SEQ ID No.40,
    SEQ ID No.25와 SEQ ID No.41,
    SEQ ID No.26과 SEQ ID No.42,
    SEQ ID No.27과 SEQ ID No.43,
    SEQ ID No.28과 SEQ ID No.44,
    SEQ ID No.29와 SEQ ID No.45,
    SEQ ID No.30과 SEQ ID No.46인 것을 특징으로 하는 항-CLDN 항체.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 따른 항체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드.
  8. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 따른 항체를 포함하는 약학적 조성물.
  9. 항종양 약물의 제조에서 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 따른 항체의 응용.
  10. 생물학적 샘플에 CLDN의 존재 여부를 검출하는 방법으로서,
    생물학적 샘플에 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 따른 항체를 투여하되, 상기 항체에는 검출 가능한 표지물이 구비되는 단계; 및
    상기 검출 가능한 표지물의 존재 여부를 검출하거나, 상기 검출 가능한 표지물의 함량을 검출하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 생물학적 샘플에 CLDN의 존재 여부를 검출하는 방법.
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