JP7249669B2 - 細胞培養装置 - Google Patents
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Description
細胞培養容器の中空な空間部内に配置された皿状体を、細胞培養容器の下部近傍に位置させた。細胞培養容器の上端の開口部から、細胞培養容器の空間部へ足場、培地、及び、培養対象である細胞を入れた。細胞は5.0×107個の脂肪由来間葉系幹細胞(ADSC)であった。足場はCESCO社のBioNOC IIマトリックスを5,000枚使用した(3D培養)。環状体の上下移動のストローク長さは60mm、環状体の上方向又は下方向への移動速度は1.0mm/秒とした。環状体の上下移動の周期は1.0回/時間とした。培養日数は8日であった。
実施例1では細胞はADSCであったが、実施例2では骨髄由来間葉系幹細胞(BMSC)の培養を試みる。
滑膜由来間葉系幹細胞は非常に高い軟骨分化能及び増殖能を有するため、軟骨や半月板の再生に有用である。実施例3では滑膜由来間葉系幹細胞の培養を試みる。
大量培養後の滑膜由来間葉系幹細胞における幹細胞性質の保持及び多分化能を確認するため、実施例3による大量培養及び回収後の滑膜由来間葉系幹細胞を用いて、脂肪細胞、軟骨細胞、骨細胞への分化誘導を実施した。分化誘導にはR&D System社のHuman Mesenchymal Stem Cell Functional Identification Kitを用いた。24ウエル培養プレートにそれぞれ104個の細胞を接着させた後、脂肪細胞への分化誘導には、キット付属のAdipogenic SupplementとITS SupplementをDMEM基礎培地50mlに添加した分化培地を用いて14日間の培養を行った。軟骨細胞への分化誘導には、キット付属のChondrogenic SupplementとITS SupplementをDMEM基礎培地50mlに添加した分化培地を用いて21日間の培養を行った。骨細胞への分化誘導には、キット付属のOsteogenic SupplementとITS SupplementをDMEM基礎培地50mlに添加した分化培地を用いて21日間の培養を行った。分化誘導後の脂肪細胞、軟骨細胞、骨細胞を同定するため、4%パラフォルムアルデヒド固定後にOilRed-O、Alcian Blue、Alizarin Red染色を実施した。図10は、本発明の細胞培養装置を使用して大量培養した細胞が多分化可能であることを示す写真図であり、そのうち(A)は軟骨細胞への分化を示す図であり、(B)は脂肪細胞への分化を示す図であり、(C)は骨細胞への分化を示す図である。(A)はAlcian Blueによる染色であり、(B)はOil Red Oによる染色であり、(C)はAlizarin Redによる染色である。図10の通り、大量培養後の滑膜由来間葉系幹細胞は、幹細胞性質及び多分化能を保持しており、脂肪細胞、軟骨細胞、骨細胞へと分化した。
120:底部
125:底部凸部
126:底部凹部
130:空間部
200:皿状体
220:貫通孔
230:皿凹部
210:磁着体
300:環状体
310:磁着体
320:昇降装置
700:振動装置
710:振動部
900:細胞培養装置
Claims (5)
- 細胞を培養するための足場と、
下端に平坦な底部を有し、前記足場が充填される中空な空間部を備える略円柱体である細胞培養容器と、
磁石又は強磁性体からなる複数の磁着体を周辺部に等間隔で備え、前記細胞培養容器の中空な空間部内に前記細胞培養容器の内壁と非接触状態で水平に配置される、前記細胞培養容器の略円柱体の直径よりも微小な直径の略円盤状の皿状体と、
前記皿状体の各々の磁着体を磁力により引き付けるように、前記皿状体の各々の磁着体と対応する磁石からなる複数の磁着体を備え、前記細胞培養容器の外側に位置して環内部に前記細胞培養容器を位置させ、上方向に移動することで磁力により連動して前記皿状体を上方向に移動させて前記細胞培養容器の中空な空間部内に充填された足場を下方から押し上げ、下方向に移動することで磁力により連動して前記皿状体を下方向に移動させ、前記細胞培養容器の中空な空間部内に充填された足場を重力落下させる、上下方向に移動する略リング状の環状体と、を有することを特徴とする細胞培養装置。 - 前記皿状体の各々の磁着体は磁石であり、各々の磁石は一方の極を容器外側方向へ向けて前記皿状体に配置されており、
前記環状体の各々の磁石は前記皿状体の磁石と対応するように、他方の極を容器内側方向へ向けて前記環状体に配置されている、ことを特徴とする請求項1に記載の細胞培養装置。 - 前記細胞培養容器は、その底部の中央部に上方へ突出する内部が空間部である底部凸部を有するとともに、培養された細胞に上下方向の振動を加える振動装置の振動部がはめ込まれる前記底部凸部に対応する形状の底部凹部を前記底部の中央部に有し、
前記皿状体は、前記細胞培養容器の底部凸部がはめ込まれる皿凹部をその下面の中央部に備える、ことを特徴とする請求項1又は2に記載の細胞培養装置。 - 前記細胞培養容器内に充填される足場は、複数の細胞支持小片の集合体である、ことを特徴とする請求項1乃至3の何れか1項に記載の細胞培養装置。
- 前記培養される細胞は間葉系幹細胞である、ことを特徴とする請求項1乃至4の何れか1項に記載の細胞培養装置。
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