JP7224304B2 - 生物医薬組成物および関連の方法 - Google Patents
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Description
開示の分野
本開示は、インターロイキン５（ＩＬ－５）介在疾患を処置するための組成物、および関連の方法に関する。
本開示は、インターロイキン５（ＩＬ－５）介在疾患を処置するための組成物、および関連の方法に関する。
開示の背景
ＩＬ－５は、分泌型タンパク質である。ＩＬ－５は、喘息、軽症喘息、中等症喘息、重症喘息、軽症好酸球性喘息、中等症好酸球性喘息、重症好酸球性喘息、管理不良好酸球性喘息、好酸球性喘息、準好酸球性喘息(sub-eosinophilic asthma)、慢性閉塞性肺疾患、好酸球性多発血管炎性肉芽腫症、好酸球増加症候群、鼻ポリープ、水疱性類天疱瘡、好酸球性食道炎、アトピー性皮膚炎、中等症アトピー性皮膚炎および重症アトピー性皮膚炎などの多数の異なる疾患に役割を果たす。これらの重篤な疾患は、世界の何億人をも侵している。
ＩＬ－５は、分泌型タンパク質である。ＩＬ－５は、喘息、軽症喘息、中等症喘息、重症喘息、軽症好酸球性喘息、中等症好酸球性喘息、重症好酸球性喘息、管理不良好酸球性喘息、好酸球性喘息、準好酸球性喘息(sub-eosinophilic asthma)、慢性閉塞性肺疾患、好酸球性多発血管炎性肉芽腫症、好酸球増加症候群、鼻ポリープ、水疱性類天疱瘡、好酸球性食道炎、アトピー性皮膚炎、中等症アトピー性皮膚炎および重症アトピー性皮膚炎などの多数の異なる疾患に役割を果たす。これらの重篤な疾患は、世界の何億人をも侵している。
このことはＩＬ－５介在疾患の処置に好適な組成物の存在の必要を意味する。このような組成物および関連の方法が本開示によって提供される。
開示の概要
本開示の１つの側面は、配列番号５に示されるＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号６に示されるＣＤＲＨ２アミノ酸配列、および配列番号７に示されるＣＤＲＨ３アミノ酸配列を有する重鎖可変領域と；配列番号８に示されるＣＤＲＬ１アミノ酸配列、配列番号９に示されるＣＤＲＬ２アミノ酸配列、および配列番号１０に示されるＣＤＲＬ３アミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含んでなる抗原結合タンパク質である。
本開示の１つの側面は、配列番号５に示されるＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号６に示されるＣＤＲＨ２アミノ酸配列、および配列番号７に示されるＣＤＲＨ３アミノ酸配列を有する重鎖可変領域と；配列番号８に示されるＣＤＲＬ１アミノ酸配列、配列番号９に示されるＣＤＲＬ２アミノ酸配列、および配列番号１０に示されるＣＤＲＬ３アミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含んでなる抗原結合タンパク質である。
本開示の別の側面は、配列番号３に示されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域配列と；配列番号４に示されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域配列とを含んでなる抗原結合タンパク質である。
本開示の別の側面は、重鎖と軽鎖を含んでなり、ａ）前記重鎖が、配列番号５に示されるＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号６に示されるＣＤＲＨ２アミノ酸配列、および配列番号７に示されるＣＤＲＨ３アミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含んでなり；かつｂ）前記軽鎖が、配列番号８に示されるＣＤＲＬ１アミノ酸配列、配列番号９に示されるＣＤＲＬ２アミノ酸配列、および配列番号１０に示されるＣＤＲＬ３アミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含んでなる抗体である。
本開示の別の側面は、重鎖と軽鎖を含んでなり、ａ）前記重鎖が、配列番号３に示されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域配列を含んでなり；かつｂ）前記軽鎖が、配列番号４に示されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域配列を含んでなる抗体である。
本開示の別の側面は、配列番号１に示されるアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号２に示されるアミノ酸配列を有する軽鎖とを含んでなる抗体である。
本開示の別の側面は、配列番号３に示されるアミノ酸配列を含んでなるペプチド鎖である。
本開示の別の側面は、配列番号１に示されるアミノ酸配列を含んでなるペプチド鎖である。
本開示の別の側面は、配列番号３に示されるアミノ酸配列をコードする核酸と、配列番号４に示されるアミノ酸配列をコードする核酸とを含んでなる組成物である。
本開示の別の側面は、配列番号１に示されるアミノ酸配列をコードする核酸と、配列番号２に示されるアミノ酸配列をコードする核酸とを含んでなる組成物である。
本開示の別の側面は、配列番号３に示されるアミノ酸配列をコードする核酸を含んでなる組成物である。
本開示の別の側面は、配列番号１に示されるアミノ酸配列をコードする核酸を含んでなる組成物である。
本開示の別の側面は、配列番号１５に示される配列を有する核酸と、配列番号１６に示される配列を有する核酸とを含んでなる組成物である。
本開示の別の側面は、配列番号１７に示される配列を有する核酸と、配列番号１８に示されるアミノ酸配列を有する核酸とを含んでなる組成物である。
本開示の別の側面は、配列番号１３に示される配列を有する核酸と、配列番号１４に示されるアミノ酸配列を有する核酸とを含んでなる組成物である。
本開示の別の側面は、配列番号１５に示される配列を有する核酸を含んでなる組成物である。
本開示の別の側面は、配列番号１７に示される配列を有する核酸を含んでなる組成物である。
本開示の別の側面は、配列番号１３に示される配列を有する核酸を含んでなる組成物である。
本開示の別の側面は、配列番号３に示されるアミノ酸配列を含んでなるペプチド鎖の生産のための方法であって、前記方法は、配列番号３に示されるアミノ酸配列をコードする核酸を含んでなる組換え宿主細胞を培養する工程；および前記ペプチド鎖を回収する工程を含んでなる方法である。
本開示の別の側面は、抗体の生産のための方法であって、ａ）配列番号１７に示される配列を有する核酸と配列番号１８に示される配列を有する核酸とを含んでなる発現ベクターを含んでなる組換え宿主細胞を培養する工程；およびｂ）前記抗体を回収する工程を含んでなり；それにより抗体が生産される方法である。
本開示の別の側面は、ａ）配列番号５に示されるＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号６に示されるＣＤＲＨ２アミノ酸配列、および配列番号７に示されるＣＤＲＨ３アミノ酸配列を有する重鎖可変領域と；配列番号８に示されるＣＤＲＬ１アミノ酸配列、配列番号９に示されるＣＤＲＬ２アミノ酸配列、および配列番号１０に示されるＣＤＲＬ３アミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含んでなる抗原結合タンパク質；ならびにｂ）薬学的に許容可能な担体を含んでなる医薬組成物である。
本開示の別の側面は、ａ）配列番号５に示されるＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号６に示されるＣＤＲＨ２アミノ酸配列、および配列番号７に示されるＣＤＲＨ３アミノ酸配列を有する重鎖可変領域と；配列番号８に示されるＣＤＲＬ１アミノ酸配列、配列番号９に示されるＣＤＲＬ２アミノ酸配列、および配列番号１０に示されるＣＤＲＬ３アミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含んでなる抗体；ならびにｂ）薬学的に許容可能な担体を含んでなる医薬組成物である。
本開示の別の側面は、ａ）重鎖と軽鎖を含んでなり、前記重鎖が、配列番号３に示されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域配列を含んでなり；かつ、前記軽鎖が、配列番号４に示されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域配列を含んでなる抗体；およびｂ）薬学的に許容可能な担体を含んでなる医薬組成物である。
本開示の別の側面は、ａ）配列番号１に示されるアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号２に示されるアミノ酸配列を有する軽鎖とを含んでなる抗体；およびｂ）薬学的に許容可能な担体を含んでなる医薬組成物である。
本開示の別の側面は、対象において軽症～中等症喘息を処置する方法であって、ａ）軽症喘息～中等症喘息診断を有する対象を特定する工程；ならびにｂ）前記対象に、配列番号５に示されるＣＤＲアミノ酸配列、配列番号６に示されるＣＤＲアミノ酸配列、および配列番号７に示されるＣＤＲアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と；配列番号８に示されるＣＤＲアミノ酸配列、配列番号９に示されるＣＤＲアミノ酸配列、および配列番号１０に示されるＣＤＲアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含んでなる抗体の治療上有効な量を投与する工程を含んでなり；それにより、前記対象における軽症～中等症喘息が処置される方法である。
本開示の別の側面は、対象において軽症～中等症喘息を処置する方法であって、ａ）軽症喘息～中等症喘息診断を有する対象を特定する工程；およびｂ）前記対象に、配列番号１に示されるアミノ酸配列を有する重鎖と配列番号１に示されるアミノ酸配列を有する軽鎖とを含んでなる抗体の治療上有効な量を投与する工程を含んでなり；それにより、前記対象における軽症～中等症喘息が処置される方法である。
本開示の別の側面は、対象において軽症～中等症喘息を処置する方法であって、ａ）軽症喘息～中等症喘息診断を有する対象を特定する工程；ならびにｂ）前記対象に、配列番号１に示されるアミノ酸配列を有する重鎖と配列番号１に示されるアミノ酸配列を有する軽鎖とを含んでなる抗体および薬学的に有効な担体を含んでなる医薬組成物の治療上有効な量を投与する工程を含んでなり；それにより、前記対象における軽症～中等症喘息が処置される方法である。
本開示の別の側面は、対象において重症喘息を処置する方法であって、ａ）重症喘息診断を有する対象を特定する工程；ならびにｂ）前記対象に、配列番号５に示されるＣＤＲアミノ酸配列、配列番号６に示されるＣＤＲアミノ酸配列、および配列番号７に示されるＣＤＲアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と；配列番号８に示されるＣＤＲアミノ酸配列、配列番号９に示されるＣＤＲアミノ酸配列、および配列番号１０に示されるＣＤＲアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含んでなる抗体の治療上有効な量を投与することを含んでなり；それにより、前記対象における重症喘息が処置される方法である。
本開示の別の側面は、対象において重症喘息を処置する方法であって、ａ）重症喘息診断を有する対象を特定する工程；ならびにｂ）前記対象に、配列番号１に示されるアミノ酸配列を有する重鎖と配列番号２に示されるアミノ酸配列を有する軽鎖とを含んでなる抗体の治療上有効な量を投与する工程を含んでなり；それにより、前記対象における重症喘息が処置される方法である。
本開示の別の側面は、対象において重症喘息を処置する方法であって、ａ）重症喘息診断を有する対象を特定する工程；ならびにｂ）前記対象に、配列番号１に示されるアミノ酸配列を有する重鎖と配列番号２に示されるアミノ酸配列を有する軽鎖とを含んでなる抗体および薬学的に有効な担体を含んでなる医薬組成物の治療上有効な量を投与する工程を含んでなり；それにより、前記対象における重症喘息が処置される方法である。
本開示の別の側面は、必要とする対象において中等症～重症アトピー性皮膚炎を処置する方法であって、ａ）ｉ）ＨａｎｉｆｉｎおよびＲａｊｋａのＥｉｃｈｅｎｆｉｅｌｄ改訂診断基準によるアトピー性皮膚炎診断；ｉｉ）処置前約２年以上のアトピー性皮膚炎の事前診断；ｉｉｉ）医療専門家の総合評価スコアが約３以上；ｉｖ）アトピー性皮膚炎関与が身体の表面積の約１０％以上；ｖ）湿疹面積および重症度指数スコアが１６以上；ｖｉ）血中好酸球の絶対数(an absolute blood eosinophil count)が１５０細胞／μＬ以上、２００細胞／μＬ以上、３００細胞／μＬ以上、または３５０細胞／μＬ以上；ならびにｖｉｉ）１）アトピー性皮膚炎の外用薬に対する６か月以上の不十分な応答；２）アトピー性皮膚炎の外用薬の不十分な免疫寛容；３）アトピー性皮膚炎の外用薬からの副作用；および４）アトピー性皮膚炎の非薬理学的処置に対する不十分な応答からなる群から選択される、処置前の少なくとも１つの状態からなる群から選択される少なくとも１つを有する対象を特定する工程；ならびにｂ）前記対象に、配列番号５に示されるＣＤＲアミノ酸配列、配列番号６に示されるＣＤＲアミノ酸配列、および配列番号７に示されるＣＤＲアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と；配列番号８に示されるＣＤＲアミノ酸配列、配列番号９に示されるＣＤＲアミノ酸配列、および配列番号１０に示されるＣＤＲアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含んでなる抗体の治療上有効な量を投与する工程を含んでなり；それにより、前記対象におけるアトピー性皮膚炎が処置される方法である。
本開示の別の側面は、必要とする対象において中等症～重症アトピー性皮膚炎を処置する方法であって、ｉ）ＨａｎｉｆｉｎおよびＲａｊｋａのＥｉｃｈｅｎｆｉｅｌｄ改訂診断基準によるアトピー性皮膚炎診断；ｉｉ）処置前約２年以上のアトピー性皮膚炎の事前診断；ｉｉｉ）医療専門家の総合評価スコアが約３以上；ｉｖ）アトピー性皮膚炎関与が身体の表面積の約１０％以上；ｖ）湿疹面積および重症度指数スコアが１６以上；ｖｉ）血中好酸球の絶対数が１５０細胞／μＬ以上、２００細胞／μＬ以上、および３５０細胞／μＬ以上(an absolute blood eosinophil count of of greater than or equal to 150 cells per μL of greater than or equal to 200 cells per μL and greater than or equal to 350 cells per μL)；ならびにｖｉｉ）１）アトピー性皮膚炎の外用薬に対して６か月以上の不十分な応答；２）アトピー性皮膚炎の外用薬の不十分な免疫寛容；３）アトピー性皮膚炎の外用薬からの副作用；および４）アトピー性皮膚炎の非薬理学的処置に対する不十分な応答からなる群から選択される、処置前の少なくとも１つの状態からなる群から選択される少なくとも１つを有する対象を特定する工程；ならびにｂ）前記対象に、配列番号１に示されるアミノ酸配列を有する重鎖と配列番号１に示されるアミノ酸配列を有する軽鎖とを含んでなる抗体の治療上有効な量を投与する工程を含んでなり；それにより、前記対象におけるアトピー性皮膚炎が処置される方法である。
本開示の別の側面は、対象において中等症～重症アトピー性皮膚炎を処置する方法であって、ａ）ｉ）ＨａｎｉｆｉｎおよびＲａｊｋａのＥｉｃｈｅｎｆｉｅｌｄ改訂診断基準によるアトピー性皮膚炎診断；ｉｉ）処置前約２年以上のアトピー性皮膚炎の事前診断；ｉｉｉ）医療専門家の総合評価スコアが約３以上；ｉｖ）アトピー性皮膚炎関与が身体の表面積の約１０％以上；ｖ）湿疹面積および重症度指数スコアが１６以上；ｖｉ）血中好酸球の絶対数が１５０細胞／μＬ以上、２００細胞／μＬ以上、および３５０細胞／μＬ以上(an absolute blood eosinophil count of of greater than or equal to 150 cells per μL of greater than or equal to 200 cells per μL and greater than or equal to 350 cells per μL)；ならびにｖｉｉ）１）アトピー性皮膚炎の外用薬に対して６か月以上の不十分な応答；２）アトピー性皮膚炎の外用薬の不十分な免疫寛容；３）アトピー性皮膚炎の外用薬からの副作用；および４）アトピー性皮膚炎の非薬理学的処置に対する不十分な応答からなる群から選択される、処置前の少なくとも１つの状態からなる群から選択される少なくとも１つを有する対象を特定する工程；ならびにｂ）前記対象に、配列番号１に示されるアミノ酸配列を有する重鎖と配列番号１に示されるアミノ酸配列を有する軽鎖とを含んでなる抗体および薬学的に有効な担体を含んでなる医薬組成物の治療上有効な量を投与する工程を含んでなり；それにより、前記対象におけるアトピー性皮膚炎が処置される方法である。
本開示の別の側面は、対象において血中好酸球の絶対数を低減する方法であって、ａ）喘息、軽症喘息、中等症喘息、重症喘息、軽症好酸球性喘息、中等症好酸球性喘息、重症好酸球性喘息、管理不良好酸球性喘息、好酸球性喘息、準好酸球性喘息、慢性閉塞性肺疾患、好酸球性多発血管炎性肉芽腫症、好酸球増加症候群、鼻ポリープ、水疱性類天疱瘡、好酸球性食道炎およびアトピー性皮膚炎からなる群から選択される病態を有する対象を特定する工程；ならびにｂ）前記対象に、配列番号５に示されるＣＤＲアミノ酸配列、配列番号６に示されるＣＤＲアミノ酸配列、および配列番号７に示されるＣＤＲアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と；配列番号８に示されるＣＤＲアミノ酸配列、配列番号９に示されるＣＤＲアミノ酸配列、および配列番号１０に示されるＣＤＲアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含んでなる抗体の治療上有効な量を投与する工程を含んでなり；それにより、対象における血中好酸球の絶対数が低減される方法である。
本開示の別の側面は、対象において血中好酸球の絶対数を低減する方法であって、喘息、軽症喘息、中等症喘息、重症喘息、軽症好酸球性喘息、中等症好酸球性喘息、重症好酸球性喘息、管理不良好酸球性喘息、好酸球性喘息、準好酸球性喘息、慢性閉塞性肺疾患、好酸球性多発血管炎性肉芽腫症、好酸球増加症候群、鼻ポリープ、水疱性類天疱瘡、好酸球性食道炎、アトピー性皮膚炎、中等症アトピー性皮膚炎および重症アトピー性皮膚炎からなる群から選択される病態を有する対象を特定する工程；ならびにｂ）前記対象に、配列番号１に示されるアミノ酸配列を有する重鎖と配列番号１に示されるアミノ酸配列を有する軽鎖とを含んでなる抗体の治療上有効な量を投与する工程を含んでなり；それにより、前記対象におけるアトピー性皮膚炎が処置される方法である。
本開示の別の側面は、対象において血中好酸球の絶対数を低減する方法であって、ａ）喘息、軽症喘息、中等症喘息、重症喘息、軽症好酸球性喘息、中等症好酸球性喘息、重症好酸球性喘息、管理不良好酸球性喘息、好酸球性喘息、準好酸球性喘息、慢性閉塞性肺疾患、好酸球性多発血管炎性肉芽腫症、好酸球増加症候群、鼻ポリープ、水疱性類天疱瘡、好酸球性食道炎、アトピー性皮膚炎、中等症アトピー性皮膚炎および重症アトピー性皮膚炎からなる群から選択される病態を有する対象を特定する工程；ならびにｂ）前記対象に、配列番号１に示されるアミノ酸配列を有する重鎖と配列番号１に示されるアミノ酸配列を有する軽鎖とを含んでなる抗体および薬学的に有効な担体を含んでなる医薬組成物の治療上有効な量を投与する工程を含んでなり;それにより、対象における血中好酸球の絶対数が低減される方法である。
開示の詳細な説明
本開示は、インターロイキン５（ＩＬ－５）介在疾患を処置するための組成物、および関連の主題を提供する。
本開示は、インターロイキン５（ＩＬ－５）介在疾患を処置するための組成物、および関連の主題を提供する。
用語「喘息」は、本明細書で使用する場合、可逆的気流閉塞および気管支痙攣を特徴とする気道の炎症性疾患を意味する。一般的な症状としては、喘鳴音、咳嗽、胸部圧迫、および息切れが含まれる。喘息は、通常、慢性気道炎症を特徴とする不均質な疾患である。喘息は、変動性の呼気気量の制限を伴い、時間によって、また強度的に異なる喘鳴、息切れ、胸部圧迫および咳嗽などの呼吸器系症状の病歴によって定義される。
本開示の方法では、対象における喘息の診断は、the Global Initiative for Asthma (GINA) the Global Strategy for Asthma Management and Prevention（２０１６年更新）の文書により提供されるガイドラインに従って行うことができる。当業者には、以下に示される臨床実施に関するＧＩＮＡ診断フローチャート（図８）および成人、青年および６～１１歳の小児における喘息の診断基準（表１）ならびにガイドラインの他の態様（例えば、妊婦用など）が知られている。表２および表３も参照。
本開示の方法において、「喘息」は、「軽症喘息」、「中等症喘息」または「重症喘息」であり得る。本開示の方法において、喘息の重症度は、ＧＩＮＡガイダンスに従って評価することができる。特に、喘息の重症度は、症状および増悪を管理するために必要とされる処置のレベルから後ろ向きに評価することができる。例えば、喘息の重症度は、患者に数か月間、長期管理薬処置を行い、適当であれば、患者の処置の最小有効レベルを見出すために処置のステップダウンを試みたところで評価することができる。喘息の重症度は、静的な特徴ではなく、数ヶ月または数年の変化であり得る。
喘息の重症度は、患者に数ヶ月、定期的な長期管理薬処置を行った際に評価することができる：
・「軽症喘息」は、ステップ１またはステップ２の処置で（図９；ボックス３－５参照）、すなわち、必要に応じた発作時治療薬のみで、または低用量ＩＣＳ、ロイコトリエン受容体拮抗薬またはクロモンなどの低強度長期管理薬処置で十分に管理される喘息である。
・「軽症喘息」は、ステップ１またはステップ２の処置で（図９；ボックス３－５参照）、すなわち、必要に応じた発作時治療薬のみで、または低用量ＩＣＳ、ロイコトリエン受容体拮抗薬またはクロモンなどの低強度長期管理薬処置で十分に管理される喘息である。
・「中等症喘息」は、ステップ３の処置（図９；ボックス３－５参照）、例えば、低用量ＩＣＳ／ＬＡＢＡで十分に管理される喘息である。
・「重症喘息」は、「管理不良」とならないようにするためにステップ４または５の処置（図９；ボックス３－５参照）、例えば、高用量ＩＣＳ／ＬＡＢＡを必要とする喘息、またはこの処置にもかかわらず依然として「管理不良」の喘息である。管理不良喘息を有する多くの患者は、不十分なもしくは不適当な処置、または持続的なアドヒアランスの問題、または慢性副鼻腔炎もしくは肥満などの併存症のために治療が困難であり得るが、ヨーロッパ呼吸器学会(European Respiratory Society)／米国胸部学会重症喘息タスクフォース(American Thoracic Society Task Force on Severe Asthma)は、難治性喘息患者および併存症の処置に対する応答が不完全な患者に関しては「重症喘息」の定義は保留されるべきであると考えている。表４もまた喘息重症度の評価の際に参照することができる。
本開示の方法において「喘息」は、「軽症好酸球性喘息」、「中等症好酸球性喘息」、または「重症好酸球性喘息」であり得る。
「軽症好酸球性喘息」は、好酸球性表現型を有する軽症喘息である。例えば、軽症好酸球性喘息を有する対象は、軽症喘息および過去１２か月に血液１μＬ当たり１５０個以上の血中好酸球、過去１２か月に血液１μＬ当たり２００個以上、過去１２か月に血液１μＬ当たり３００個以上または過去１２か月に血液１μＬ当たり３５０個以上の血中好酸球を有し得る。
「中等症好酸球性喘息」は、好酸球性表現型を有する中等症喘息である。例えば、中等症好酸球性喘息を有する対象は、中等症喘息および過去１２か月に血液１μＬ当たり１５０個以上、過去１２か月に血液１μＬ当たり２００個以上、過去１２か月に血液１μＬ当たり３００個以上または過去１２か月に血液１μＬ当たり３５０個以上の血中好酸球を有し得る。
「重症好酸球性喘息」は、好酸球性表現型を有する重症喘息である。例えば、重症好酸球性喘息を有する対象は、重症喘息および過去１２か月に血液１μＬ当たり１５０個以上、過去１２か月に血液１μＬ当たり２００個以上、（好ましくは）過去１２か月に血液１μＬ当たり３００個以上または過去１２か月に血液１μＬ当たり３５０個以上の血中好酸球を有し得る。
重症好酸球性喘息を有する対象はまた、表５に記載される判定基準のうち１以上を満たし得る。
重要なこととして、これらの診断基準に従う重症好酸球性喘息を有する対象は、処置の開始時に血液１μＬ当たり１５０個未満の好酸球を有し得る。
２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１は、配列番号１に示される重鎖アミノ酸配列と配列番号２に示される軽鎖アミノ酸配列とを含んでなるモノクローナル抗体である。本開示の２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１および２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１の重鎖ＣＤＲと軽鎖ＣＤＲとを含んでなる抗原結合タンパク質、特に、抗体分子は、本開示の方法に従って重症好酸球性喘息を処置するために使用され得る。例えば、本開示の２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１または抗原結合タンパク質は、患者において過去１２か月に３００細胞／μＬ以上の血中好酸球および／または処置の開始時に１５０細胞／μＬ以上の血中好酸球および／または処置の開始時に１５０細胞／μＬ未満の血中好酸球により特定される重症好酸球性喘息の追加維持処置が適応となり得る。あるいは、本開示の２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１、または抗原結合タンパク質は、患者において過去１２か月に３００細胞／μＬ以上の血中好酸球および／または処置の開始時に１５０細胞／μＬ以上の血中好酸球により特定される重症好酸球性喘息の追加維持処置が適応となり得る。本開示の２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１または抗原結合タンパク質は、患者において過去１２か月に３００細胞／μＬ以上の血中好酸球および／または処置の開始時に１５０細胞／μＬ未満の血中好酸球により特定される重症好酸球性喘息の追加維持処置が適応となり得る。このような患者は１２歳以上であり得る。本開示の２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１または抗原結合タンパク質による処置は、患者（例えば、増悪歴を有する患者）において喘息の増悪を低減し得る。本開示の方法は、本開示の２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１または抗原結合タンパク質による処置が適当となる場合に使用され得る（すなわち、そのような２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１による処置が本開示の方法と組み合わせ可能である）。本開示の２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１および抗原結合タンパク質による処置は下記のことが可能である：
ａ）増悪頻度に低減をもたらすこと。プラセボに比べて、本開示の２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１または抗原結合タンパク質による処置は、１）臨床上有意な増悪、２）入院またはＥＤ来院を必要とする増悪、および３）入院を必要とする増悪の割合を減らし得る。この利益は、罹患および喘息による致命的な事象に低減を潜在的にもたらし得る。
ｂ）ＯＣＳの一日用量に低減をもたらすこと：本開示の２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１または抗原結合タンパク質による処置は、対象が喘息管理の低下を受けることなく並行コルチコステロイドの一日用量を低減することを可能とし得る。本開示の２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１または抗原結合組成物で処置した対象は、プラセボで処置した対象に比べて、経口コルチコステロイド（ＯＣＳ）一日用量におけるベースラインからの低減パーセンテージの中央値を達成し得る。加えて、本開示の２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１または抗原結合組成物で処置した対象は、プラセボで処置した対象の３２％に比べ、ＯＣＳ用量の低減を達成し得る。
ｃ）肺機能に改善をもたらすこと：プラセボに比べ、本開示の２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１または抗原結合タンパク質による処置により、気管支拡張薬前と後のＦＥＶ１の臨床的に関連する変化が示され得る。肺機能の改善は、ほとんどが高用量ＩＣＳ（吸入コルチコステロイド）および／またはＯＣＳと長期管理薬を含む最大喘息療法であるので、この対象集団において特に臨床上重要なものである。
ｄ）喘息管理に改善をもたらすこと：プラセボに比べて本開示の２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１または抗原結合タンパク質を用いたＡＣＱ－５で統計的に有意であり、かつ、臨床的に関連する改善が見られ得るが、このことは、既存の喘息処置への本開示の２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１または抗原結合タンパク質の付加で対象が喘息管理を達成し得ることを示す。
ｅ）生活の質に改善をもたらすこと：プラセボに比べて本開示の２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１または抗原結合タンパク質で、ＳＧＲＱスコアにおける統計的に有意であり、かつ、臨床的に関連する変化が示され得る。対象は、喘息症状および日常活動実行能に顕著な改善を経験し得る。
ｆ）有効性および薬力学的効果の持続をもたらすこと：３２週および／または５２週の処置期間にわたって、免疫寛容の発生を伴わずに、喘息増悪および血中好酸球の持続的低減、ならびに肺機能、喘息管理、および生活の質の改善が見られ得る。
および
ｇ）血中好酸球に低減をもたらすこと。本開示の２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１または抗原結合タンパク質を含んでなる組成物による処置は、対象において血中好酸球の急速な低減をもたらし得る。
ｂ）ＯＣＳの一日用量に低減をもたらすこと：本開示の２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１または抗原結合タンパク質による処置は、対象が喘息管理の低下を受けることなく並行コルチコステロイドの一日用量を低減することを可能とし得る。本開示の２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１または抗原結合組成物で処置した対象は、プラセボで処置した対象に比べて、経口コルチコステロイド（ＯＣＳ）一日用量におけるベースラインからの低減パーセンテージの中央値を達成し得る。加えて、本開示の２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１または抗原結合組成物で処置した対象は、プラセボで処置した対象の３２％に比べ、ＯＣＳ用量の低減を達成し得る。
ｃ）肺機能に改善をもたらすこと：プラセボに比べ、本開示の２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１または抗原結合タンパク質による処置により、気管支拡張薬前と後のＦＥＶ１の臨床的に関連する変化が示され得る。肺機能の改善は、ほとんどが高用量ＩＣＳ（吸入コルチコステロイド）および／またはＯＣＳと長期管理薬を含む最大喘息療法であるので、この対象集団において特に臨床上重要なものである。
ｄ）喘息管理に改善をもたらすこと：プラセボに比べて本開示の２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１または抗原結合タンパク質を用いたＡＣＱ－５で統計的に有意であり、かつ、臨床的に関連する改善が見られ得るが、このことは、既存の喘息処置への本開示の２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１または抗原結合タンパク質の付加で対象が喘息管理を達成し得ることを示す。
ｅ）生活の質に改善をもたらすこと：プラセボに比べて本開示の２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１または抗原結合タンパク質で、ＳＧＲＱスコアにおける統計的に有意であり、かつ、臨床的に関連する変化が示され得る。対象は、喘息症状および日常活動実行能に顕著な改善を経験し得る。
ｆ）有効性および薬力学的効果の持続をもたらすこと：３２週および／または５２週の処置期間にわたって、免疫寛容の発生を伴わずに、喘息増悪および血中好酸球の持続的低減、ならびに肺機能、喘息管理、および生活の質の改善が見られ得る。
および
ｇ）血中好酸球に低減をもたらすこと。本開示の２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１または抗原結合タンパク質を含んでなる組成物による処置は、対象において血中好酸球の急速な低減をもたらし得る。
本開示の方法において「喘息」は、「重症喘息」であり得る。本開示の方法において「喘息」はまた、上述のように「軽症喘息」、「中等症喘息」、「重症喘息」、「軽症好酸球性喘息」、「中等症好酸球性喘息」または「重症好酸球性喘息」であり得る。本開示の２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１または抗原結合タンパク質を含んでなる組成物による処置は、本開示の方法に従ってこれらの病態を処置するために使用され得る。
本開示の方法において「喘息」は、「管理不良好酸球性喘息」であり得る。管理不良好酸球性喘息を有する対象は、表６に記載の判定基準を満たす。
本開示の２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１または抗原結合タンパク質を含んでなる組成物による処置は、本開示の方法に従って管理不良好酸球性喘息を処置するために使用され得る。
本開示の方法において「喘息」は、「好酸球性喘息」であり得る。好酸球性喘息を有する対象は、表７に記載される判定基準を満たす。
本開示の方法において「喘息」は、「準好酸球性喘息」であり得る。準好酸球性喘息を有する対象は、表８に記載される判定基準を満たす。
本開示の２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１または抗原結合タンパク質を含んでなる組成物による処置は、本開示の方法に従って、好酸球性喘息を処置するために使用され得、また、準好酸球性喘息を処置するためにも使用され得る。
用語「水疱性類天疱瘡」（ＢＰ）は、本明細書で使用する場合、皮膚層の表皮および真皮の間の空間における疱疹（より適切には水疱として知られる）の形成を含む急性または慢性自己免疫性の皮膚疾患を意味する。ＢＰは、最も多い自己免疫性の水疱形成皮膚疾患である。ＢＰは、特徴的には、１００万人に５～３５人の年間罹患率で高齢者（＞７０歳）に影響を及ぼす。ＢＰの罹患率は、年に平均１７％で劇的に増加している。ＢＰは、多くの場合、小胞および疱疹が生じる前に湿疹またはじんま疹に似た極めて痒みのある皮膚病変で始まる。患者の１０～３０％で、ＢＰは口腔粘膜も含む。疾患の重症度は、関与する面積ならびに疾患の活動を評価する自己免疫性水疱性皮膚障害強度スコア(autoimmune bullous skin disorder intensity score)（ＡＢＳＩＳ）の手段によって決定することができる。この疾患は、接合接着複合体の構造要素に対する自己免疫応答によるものであり、表皮下疱疹形成を伴う皮膚－表皮接合の傷害をもたらす。具体的には、ヘミデスモソーム抗原ＢＰ１８０およびＢＰ２３０に対する自己反応性Ｂ細胞およびＴ細胞応答が確認されている。ＢＰ１８０に対する自己抗体の血清レベルは、疾患の重症度および活動を反映する。Ｔ細胞は、Ｔｈ１およびＴｈ２サイトカインの両方、主としてＩＬ－４、ＩＬ－５およびＩＬ－１３を産生する記憶ＣＤ４＋細胞である。ＩＬ－５ならびにエオタキシンは、水疱液中に豊富に見られる。ＩＬ－５の産生は、実際に、血中好酸球増加症およびＢＰ患者の皮膚における有意な好酸球浸潤に関連している。好酸球は、毒性の顆粒タンパク質（ＥＳＰ、ＭＢＰ）およびタンパク質分解酵素を放出することにより疱疹形成に決定的に関連していると考えられる。
用語「好酸球性食道炎」（ＥｏＥ）は、本明細書で使用する場合、好酸球を伴う食道のアレルギー性の炎症状態を意味する。症状は嚥下困難、食物嵌入、および胸やけである。ＥｏＥは、食道の上皮内面への好酸球種の白血球細胞を伴う粘稠な浸潤物を特徴とする。ＥｏＥは、好酸球がアレルギー反応に果たす重要な役割に基づけば、摂取した食物に対するアレルギー反応であると考えられる。ＥｏＥを診断するためにＥｏＥ診断パネルを使用することができる。ＥｏＥはまた、胃食道逆流が１日２回、高用量プロトンポンプ阻害剤（ＰＰＩ）の６週間の試験に応答しない場合、または陰性の外来ｐＨ試験が胃食道逆流疾患（ＧＥＲＤ）を除外した場合にも診断され得る。内視鏡により、隆起、溝、または輪が食道壁に見られ得る。時として、複数の輪が食道に見られ、「波形食道(corrugated esophagus)」またはそれらの輪がネコの食道に似ているために「ネコ食道(feline esophagus)」という用語につながる。食道に白い浸出物が存在することも診断を示唆する。内視鏡時に採取された生検では、表在上皮に多くの好酸球が一般に見られる。診断を行うためには、高倍率の一視野当たり最低１５個の好酸球が必要とされる。好酸球性炎症は食道だけに限定されず、消化管全体に及ぶ。顕著には、微小膿瘍および基底の腫脹層同様に脱顆粒好酸球も存在し得る。放射線学的に、用語「輪状食道」は、食道還流とともに見られることがある一過性の横ひだの出現（「ネコ食道」と呼ばれる）と対比して、バリウム嚥下検査における好酸球性食道炎の出現に関して使用されてきた。
本開示の２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１または抗原結合タンパク質を含んでなる組成物による処置は、本開示の方法に従ってＣＯＰＤを処置するために使用され得る。
「慢性閉塞性肺疾患」（ＣＯＰＤ）を有する対象は、以下の判定基準のうち１以上を満たし得る：ａ）過去のＣＯＰＤ診断：米国胸部学会／ヨーロッパ呼吸器学会による定義に従った臨床的に文書で示された少なくとも１年間のＣＯＰＤ病歴を有する対象；ｂ）ＣＯＰＤの重症度：対象は以下を呈し得る：ＣＯＰＤの診断を確定するためには、測定されたサルブタモールの前と後の努力性呼気１秒量／努力性肺活量（ＦＥＶ１／ＦＶＣ）比が＜０．７０；測定されたサルブタモール後ＦＥＶ１＞２０パーセントおよび米国国民健康栄養調査(National Health and Nutrition Examination Survey)（ＮＨＡＮＥＳ）ＩＩＩ参照式を用いて計算された予測正常値が＜＝８０パーセント；ｃ）増悪歴：１２か月に文書で示された十分な病歴（医療記録の検証など）：少なくとも２回の中等症ＣＯＰＤ増悪。中等症が、全身コルチコステロイド（ＩＭ、静脈内、または経口）の使用および／または抗生物質による処置、または少なくとも１回の重症ＣＯＰＤ増悪として定義される。重症は、入院の必要を有するものとして定義される。注：少なくとも１回の増悪は、対象が吸入コルチコステロイド（ＩＣＳ）と長時間作用型β２作動薬（ＬＡＢＡ）と長時間作用型ムスカリン性拮抗薬（ＬＡＭＡ）を服用したにもかかかわらずに発生したものでなければならない。注：抗生物質単独の先使用は、その使用が特にＣＯＰＤの症状の増悪の処置を目的とするものでなければ、中等度の増悪として適格でない；およびｄ）並行ＣＯＰＤ療法：過去１２か月間にＩＣＳと２種の付加的ＣＯＰＤ薬（すなわち、三剤療法）を含み、以下の診断基準：医療従事者への来院の直前に、最低３か月の吸入コルチコステロイドの使用（＞＝５００マイクログラム（ｍｃｇ）用量／毎日プロピオン酸フルチカゾンの同等用量追加）；またはＬＡＢＡおよびＬＡＭＡを満たす、文書で示された至適化標準治療（ＳｏＣ）バックグラウンドセラピーの十分な必要。
本開示の２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１または抗原結合タンパク質を含んでなる組成物による処置は、本開示の方法に従ってＣＯＰＤを処置するために使用され得る。
用語「好酸球性多発血管炎性肉芽腫症」（ＥＧＰＡ）は、本明細書で使用する場合、気道アレルギー過敏症（アトピー）の病歴を有する者における小型および中型の大きさの血管の炎症（血管炎）を生じる自己免疫病態を意味する。ＥＧＰＡはまた、チャーグ－ストラウス症候群（ＣＳＳ）またはアレルギー肉芽腫症とも呼称される場合がある。ＥＧＰＡは通常、三段階で顕在化する。初期（前駆期）は、気道炎症を特徴とし；ほとんど総ての患者が喘息および／またはアレルギー性鼻炎を経験する。第二段階は、異常に多数の好酸球（高好酸球増加症）を特徴とし、これが最も一般的には肺および消化管に対する組織傷害を生じる。第三段階は血管炎からなり、やがて細胞死をもたらすことがあり、命を脅かすい場合もある。
ＥＧＰＡを有する対象は、以下の診断基準のうち１以上を満たし得る：ａ）喘息；ｂ）白血球百分率が１０％を超える血中好酸球レベル；ｃ）単神経障害または多発神経障害の存在；ｄ）不安定な肺浸潤物；ｅ）副鼻腔異常の存在；およびｅ）管外好酸球組織学的証拠。分類の目的で、患者は、前述の６つの診断基準のうち少なくとも４つが陽性である場合にＥＧＰＡを有するとされるべきである。
本開示の２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１または抗原結合タンパク質を含んでなる組成物による処置は、本開示の方法に従ってＥＧＰＡを処置するために使用され得る。本開示の組成物は、４週間に１回、３００ｍｇの量でＥＧＰＡ患者に投与され得る。
用語「好酸球増加症候群」（ＨＥＳ）は、本明細書で使用する場合、心臓、神経系、または骨髄のいずれかの関与で、認識可能な原因なく、少なくとも６か月間、血中の好酸球数（≧１５００好酸球／ｍｍ３）の持続的上昇を特徴とする疾患を意味する。
好酸球増加症候群を有する対象は、以下の診断基準のうち１以上を満たし得る：ａ）文書で示された好酸球増加症候群の病歴；ｂ）６か月間、１５００細胞を超える血中好酸球数；ｃ）器官系の関与の徴候および症状；ならびにｄ）包括的評価の後の好酸球増加症の寄生虫、アレルギーまたは他の原因の証拠がない。
本開示の２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１または抗原結合タンパク質を含んでなる組成物による処置は、本開示の方法に従って好酸球増加症候群を処置するために使用され得る。
用語「鼻ポリープ」は、本明細書で使用する場合、鼻腔のポリープの存在を特徴とする疾患を意味する。このようなポリープは、上鼻腔内にあり得、および／または中鼻道自然口ルート(ostiomeatal complex)内に起源し得る。
鼻ポリープを有する対象は、以下の診断基準のうち１以上を満たし得る：ａ）文書で示された鼻ポリープの病歴；またはｂ）検査で明らかな鼻ポリープ（例えば、内視鏡検査）。
本開示の２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１または抗原結合タンパク質を含んでなる組成物による処置は、本開示の方法に従って鼻ポリープを処置するために使用され得る。
用語「アトピー性皮膚炎」は、本明細書で使用する場合、慢性そう痒症、苔癬化、乾燥症、紅斑性丘疹および斑を特徴とする炎症性皮膚病態を意味する。
本開示の方法において「アトピー性皮膚炎」は、「中等症～重症アトピー性皮膚炎」であり得る。中等症～重症アトピー性皮膚炎を有する対象は、表９に記載される判定基準のうち１以上を満たし得る。
中等症～重症アトピー性皮膚炎を有する対象は、１８歳未満の小児、少なくとも１８歳以上の成人、または１８～７０歳（含む）の成人であり得る。対象は、男性または女性であり得る。処置されるのに好ましい女性対象は、妊娠中でなく、授乳中でなく、かつ／または妊娠の可能性がない対象である。
アトピー性皮膚炎の診断は、ＨａｎｉｆｉｎおよびＲａｊｋａのＨａｎｉｆｉｎおよびＲａｊｋａ Ｅｉｃｈｅｎｆｉｅｌｄ改訂診断基準のＥｉｃｈｅｎｆｉｅｌｄ改訂診断基準に基づく。表１０およびEichenfield et al., 70 J Am Acad Dermatol 338 (2014)参照。
医療専門家の全般的評価（ＨＧＡ）は、対象のアトピー性皮膚炎の現状／重症度を評価するための臨床ツールである。Rehal et al, 6 PLos ONE e17520 (2011)および表１１参照。それは、紅斑、浸潤、丘疹、毛細血管性出血、および痂皮形成の臨床特徴をガイドラインとして用いて、訓練を受けた医療専門家により決定された総合疾患重症度の静的５点形態学的評価である。ＨＧＡは、過去のスコアを参照せずに行われる。各評価は評価の時点での全罹患面積の重症度の視覚的「平均」としてなされなければならない。
身体表面積のパーセンテージ（％ＢＳＡ）の評価は、アトピー性皮膚炎を伴う全関与皮膚のパーセンテージの推定値である。表１２参照。％ＢＳＡ評価は、頭頸部、上肢、胴および下肢の４つの各身体表面領域からそれぞれ炎症面積を見つけることによって行うことができ、これらの身体領域のそれぞれは可能性として１００％までの関与を有し得る。評価者（例えば、医療専門家）は、％ＢＳＡ面積スコアに関してこれらの各領域の関与皮膚のパーセンテージを推定し、次にこれに適当な比率性乗数を掛けて％ＢＳＡ領域関与値を求める（≧８歳の対象については、頭部は０．１、上肢は０．２、胴は０．３および下肢は０．４）。領域％ＢＳＡ関与値を合計して総関与％ＢＳＡを出す。領域％ＢＳＡ面積スコアはまた、ＥＡＳＩスコアを計算するためのマトリックスの一部としても使用される。
ＥＡＳＩスコアリングシステムは、関与する％身体表面積（％ＢＳＡ）の総程度ならびに臨床徴候：紅斑、硬結／丘疹、擦過創、および苔癬化のそれぞれに関する重症度スコアを考慮するアトピー性皮膚炎の評価の標準臨床ツールである。Hanifin et al., 10 Exp Dermatol 11 (2001); Rullo et al., 36 Allergol et Immunopathol 201 (2008)および表１３参照。％ＢＳＡ評価からの％ＢＳＡ面積スコアは、ＥＡＳＩスコアを計算するためのマトリックスの一部として使用される。臨床徴候（紅斑、硬結／丘疹、擦過創、および苔癬化）のそれぞれの重症度スコアは、４つの身体領域（頭頸部、上肢、下肢、および胴）のそれぞれに関して４点スコア（０～３）で等級づけをする。これらの徴候のそれぞれに関する重症度スコアを各領域で合計し、％ＢＳＡ面積スコアと適当な比率性乗数（≧８歳の対象については、頭部は０．１、上肢は０．２、胴は０．３および下肢は０．４）を掛け、領域ＥＡＳＩスコアを出す。次に、領域ＥＡＳＩスコアを合計して最終ＥＡＳＩスコアを求める。ＥＡＳＩスコアは、過去のスコアを参照することなく行われる静的評価である。
本開示の２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１または抗原結合タンパク質の治療上有効な量を用いて、アトピー性皮膚炎患者を処置する、またはそのような患者の絶対血中好酸球数を低減することができる。このようなアトピー性皮膚炎は、中等症アトピー性皮膚炎または重症アトピー性皮膚炎であり得る。
本開示の２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１または抗原結合タンパク質による中等症アトピー性皮膚炎または重症アトピー性皮膚炎などのアトピー性皮膚炎の処置は、本開示の方法に従って、以下からなる群から選択される少なくとも１つの結果をもたらし得る：
ａ）０または１のＨＧＡスコアおよびＨＧＡにおける少なくとも２グレードの改善（例えば、開始ＨＧＡスコアに比べて）；
ｂ）湿疹面積および重症度指数（ＥＡＳＩ）スコアの低減（例えば、開始ＥＡＳＩスコアに比べて）；
ｃ）罹患総身体表面積パーセント（％ＢＳＡ）の低減（例えば、開始％ＢＳＡに比べて）；ならびに／または
ｄ）ＨａｎｉｆｉｎおよびＲａｊｋａのＥｉｃｈｅｎｆｉｅｌｄ改訂診断基準(Eichenfield et al., 70 J Am Acad Dermatol 338 (2014)に従ってアトピー性皮膚炎を有さないという医療専門家による判断。
ａ）０または１のＨＧＡスコアおよびＨＧＡにおける少なくとも２グレードの改善（例えば、開始ＨＧＡスコアに比べて）；
ｂ）湿疹面積および重症度指数（ＥＡＳＩ）スコアの低減（例えば、開始ＥＡＳＩスコアに比べて）；
ｃ）罹患総身体表面積パーセント（％ＢＳＡ）の低減（例えば、開始％ＢＳＡに比べて）；ならびに／または
ｄ）ＨａｎｉｆｉｎおよびＲａｊｋａのＥｉｃｈｅｎｆｉｅｌｄ改訂診断基準(Eichenfield et al., 70 J Am Acad Dermatol 338 (2014)に従ってアトピー性皮膚炎を有さないという医療専門家による判断。
本開示の方法に従った処置後のＥＡＳＩスコアは、１６未満、例えば、約０～１６未満であり得る。処置後のＥＡＳＩスコアはまた、約０～約１５、約０～約１４、約０～約１３、約０～約１２、約０～約１１、約０～約１０、約０～約９、約０～約８、約０～約７、約０～約６、約０～約５、約０～約４、約０～約３、約０～約２、約０～約１、約１～１６未満、約２～１６未満、約３～１６未満、約４～１６未満、約５～１６未満、約６～１６未満、約７～１６未満、約８～１６未満、約９～１６未満、約１０～１６未満、約１１～１６未満、約１２～１６未満、約１３～１６未満、約１４～１６未満、約１５～１６未満、約２～約１５、約３～約１４、約４～約１３、約５～約１２、約６～約１１、約７～約１０、約８～約９、約０～約８、約８～１６未満、約０～約４、約４～約８、約８～約１２および約１２～１６未満であり得る。
本開示の方法に従った処置後の％ＢＳＡは、約１０％未満、例えば、約０％～１０％未満であり得る。処置後の％ＢＳＡはまた、約１％～１０％未満、約２％～１０％未満、約３％～１０％未満、約４％～１０％未満、約５％～１０％未満、約６％～１０％未満、約７％～１０％未満、約８％～１０％未満、約９％～１０％未満、約０％～約９％、約０％～約８％、約０％～約７％、約０％～約６％、約０％～約５％、約０％～約４％、約０％～約３％、約０％～約３％、約０％～約２％、約０％～約１％、約０％～約５％、約５％～１０％未満、約０％～約２．５％、約２．５％～約５％、約５％～約７．５％および約７．５％～１０％未満であり得る。
用語「抗原結合タンパク質」は、本明細書で使用する場合、単離された抗体、抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂなど）およびヒトＩＬ－５（配列番号１１）に結合し得るその他の抗体由来タンパク質構築物、例えば、抗体ドメイン（例えば、ドメイン抗体など）を含んでなるものを意味する。
用語「抗体」は、本明細書で使用する場合、免疫グロブリン様ドメイン（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤまたはＩｇＥ）を有する分子を意味し、このタイプのモノクローナル、組換え、ポリクローナル、モノクローナル、組換え、ポリクローナル、キメラ、ヒト、およびヒト化分子を含む。モノクローナル抗体は、抗体を発現する真核細胞クローンによって産生され得る。モノクローナル抗体はまた、細胞に導入されたこれらをコードする核酸配列を有するために、抗体の重鎖および軽鎖を組換え発現することができる真核細胞株によっても産生され得る。チャイニーズハムスター卵巣細胞、ハイブリドーマまたは動物（例えばヒト）に由来する不死化抗体細胞などの種々の真核細胞株から抗体を産生する方法は周知である。
抗体は、ラット、マウス、霊長類（例えば、カニクイザル、旧世界ザルまたは大型類人猿）、ヒトまたは分子生物学的技術を用いて作製される、抗体分子をコードする核酸などの他の供給源に由来し得る。
抗体は、定常領域を含んでなり得、これはいずれのアイソタイプまたはサブクラスであってもよい。定常領域は、ＩｇＧアイソタイプ、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４またはその変異体のものであり得る。抗原結合タンパク質定常領域はＩｇＧ１であり得る。
抗原結合タンパク質は、抗体が増強されたエフェクター機能／ＡＤＣＣおよび／または補体活性化を有するように、変異された定常ドメインから選択される１以上の改変を含んでなり得る。
抗体は、標的抗原に結合し得る。このような標的抗原の例としては、配列番号１１に示されるアミノ酸配列を含んでなるヒトＩＬ－５が含まれる。
配列番号１に示される重鎖アミノ酸配列と配列番号２に示される軽鎖アミノ酸配列とを含んでなる２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１が抗体の一例である。本開示の２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１または抗原結合タンパク質は、ヒトＩＬ－５と結合し、その活性に拮抗する。
２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１は、組換えヒト化モノクローナル抗体（ＩｇＧ１、Ｋａｐｐａ）であり、２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１は、２つの軽鎖と２つの重鎖を有する。
２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１重鎖は、配列番号１５に示される核酸配列によりコードされる。２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１軽鎖は、配列番号１６に示される核酸配列によりコードされる。
２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１重鎖および軽鎖は、単一のジスルフィド結合により共有結合され、重鎖は２つのジスルフィド結合により互いに連結され典型的なＩｇＧ分子を生じる。
本開示の２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１または抗原結合タンパク質は、薬学的に許容可能な担体（例えば、無菌水）で再構成可能な、抗体および賦形剤を含有する凍結乾燥粉末として提供することができる。この再構成医薬組成物は次に、皮下または静脈内のいずれかで（例えば、さらなる希釈剤とともに）投与することができる。本開示の２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１または抗原結合タンパク質は、抗体、賦形剤および薬学的に許容可能な担体を含有する液体製剤として提供することができる。この液体医薬組成物は、皮下または静脈内のいずれかで（例えば、さらなる希釈剤とともに）投与することができる。
用語「抗体変異体」は、本明細書で使用する場合、少なくとも１個のアミノ酸修飾（例えば、異なるアミノ酸側鎖を有することによる）、翻訳後修飾または親抗体に対する構造変化（例えば、異なるアミノ酸側鎖、異なる翻訳後修飾または他の修飾）を生じる、少なくとも１つの重鎖、軽鎖、またはこれらの組合せにおける他の修飾のために親抗体とは異なる抗体を意味する。２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１は、このような親抗体の一例である。構造変化は、直接的にはＬＣ－ＭＳ、直接配列決定などの当技術分野で周知の様々な方法によって、または間接的には等電点電気泳動などの方法によって決定することができる。このような方法は当業者に周知である。
用語「ＩＬ－５」は、本明細書で使用する場合、配列番号１１に示されるアミノ酸配列を含んでなるヒトＩＬ－５を意味する。
用語「特異的に結合する」は、抗原結合タンパク質に関して本明細書で使用する場合、抗原結合タンパク質が他の（例えば、無関連の）タンパク質とは全くまたは有意には結合せずに、標的抗原、ならびに標的抗原内の不連続のドメイン、または不連続のアミノ酸配列に結合することを意味する。しかしながら、この用語は、抗原結合タンパク質はまた近縁分子（例えば、高度の配列同一性を有するものまたは他の属もしくは種に由来するもの）と交差反応し得るという事実を排除するものではない。本明細書に記載の抗原結合タンパク質は、近縁分子との結合の少なくとも２、５、１０、５０、１００、または１０００倍高い親和性でヒトＩＬ－５またはヒトＩＬ－５受容体と結合し得る。
抗原結合タンパク質－標的抗原の相互作用の結合親和性（ＫＤ）は、１ｍＭ以下、１００ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、２ｎＭ以下または１ｎＭ以下であり得る。あるいは、ＫＤは、５～１０ｎＭ；または１～２ｎＭであり得る。ＫＤは、１ｐＭ～５００ｐＭ；または５００ｐＭ～１ｎＭであり得る。抗原結合タンパク質の結合親和性は、会合定数（Ｋａ）および解離定数（Ｋｄ）（ＫＤ＝Ｋｄ／Ｋａ）により決定される。結合親和性は、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）、例えば、プロテインＡコーティングセンサー表面に試験抗体を捕捉し、この表面に標的抗原を流すことによって測定され得る。あるいは、結合親和性は、例えば、プロテインＡコーティングニードル上に試験抗体受容体を捕捉し、この表面に標的抗原を流すＦＯＲＴＥＢＩＯによって測定することができる。
Ｋｄは、１×１０－３Ｍｓ－１以下、１×１０－４Ｍｓ－１以下、または１×１０－５Ｍｓ－１以下であり得る。Ｋｄは、１×１０－５Ｍｓ－１～１×１０－４Ｍｓ－１；または１×１０－４Ｍｓ－１～１×１０－３Ｍｓ－１であり得る。遅いＫｄは、抗原結合タンパク質－標的抗原複合体の遅い解離および標的抗原の中和の改善をもたらし得る。
用語「特異的抗原結合活性」は、本明細書で使用する場合、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）により測定されるような抗原結合活性を意味する。ＩＬ－５特異的結合活性は、例えば、結合モードで作動するＢＩＡＣＯＲＥ（商標）装置を用いたＳＰＲにより決定され得る。前記結合活性は、結合活性をサンプル中の総タンパク質（例えば、２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１）含量で割った商である。
用語「ＦｃＲｎ結合活性」は、本明細書で使用する場合、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）により測定されるような新生児Ｆｃ（ＦｃＲｎ）受容体結合活性を意味する。ＦｃＲｎ結合は、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）装置を用いて決定され得る。前記結合活性は、ＦｃＲｎ受容体に対する結合活性をサンプルの総タンパク質濃度で割った商である。
特異的抗原結合およびＦｃＲｎ結合に関するＳＰＲ法は、２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１の参照標準を使用する。２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１参照標準は、方法が適宜実行中であることを保証する目的で系の適合性およびサンプル比較可能性データを得るためにアッセイで使用することである。参照標準は検量線の確立を可能とし、その曲線からサンプルの濃度が外挿される。
「単離された」とは、抗原結合タンパク質または核酸などの分子が本来見られる得る環境から取り出されていることが意図される。例えば、分子は、通常、本来一緒に存在する物質から精製されていてよい。例えば、サンプル中の分子の質量は、総質量の９５％であり得る。本開示はまた、配列番号１３、１４、１５、１６、１７および／または１８およびそれらの一部ならびにこれらの組成物を含んでなる単離された核酸も提供する。重要なこととして、本開示の核酸は一般に、本開示の核酸、バッファー、残留バッファー、塩、対イオン、水、アルコールまたはベクターなどの任意の組合せを含んでなり得る組成物として提供される。あるいは、本開示の組成物は、本開示の核酸のみを含んでなることもできる。
用語「ＶＨ」および「ＶＬ」は、本明細書では、抗原結合タンパク質のそれぞれ重鎖可変領域および軽鎖可変領域を表して使用される。
「ＣＤＲ」は、抗原結合タンパク質の相補性決定領域アミノ酸配列として定義される。これらは、免疫グロブリン重鎖および軽鎖の超可変領域である。免疫グロブリンの可変部分には３つの重鎖ＣＤＲと３つの軽鎖ＣＤＲ（またはＣＤＲ領域）が存在する。よって、「ＣＤＲ」は、本明細書で使用する場合、３つ総ての重鎖ＣＤＲ、３つ総ての軽鎖ＣＤＲ、総ての重鎖ＣＤＲおよび軽鎖ＣＤＲ、または少なくとも１つのＣＤＲを意味し、ここで、少なくとも１つのＣＤＲはＣＤＲＨ３である。これらのＣＤＲ領域のそれぞれの後にフレームワーク領域が続く。許容可能な重鎖可変領域および軽鎖可変領域フレームワーク１、フレームワーク２およびフレームワーク３領域は、当業者により容易に認識される。許容可能な重鎖定常領域（ヒンジ領域を含む）および軽鎖定常領域もまた、当業者により容易に認識される。許容可能な抗体アイソタイプも同様に、当業者により容易に認識される。
本明細書を通じ、可変ドメイン配列および全長抗体配列中のアミノ酸残基は、Ｋａｂａｔナンバリング規則に従って符番される。同様に、本明細書で使用される用語「ＣＤＲ」、「ＣＤＲＬ１」、「ＣＤＲＬ２」、「ＣＤＲＬ３」、「ＣＤＲＨ１」、「ＣＤＲＨ２」、「ＣＤＲＨ３」も、Ｋａｂａｔナンバリング規則に従う。
可変ドメイン配列および全長抗体配列中のアミノ酸残基には別のナンバリング規則も存在することが当業者には自明であろう。ＣＤＲ配列にも、例えば、Ｃｈｏｔｈｉａナンバリング規則に従って設定されるものなど、別のナンバリング規則が存在する。抗体の構造およびタンパク質折り畳みは、他の残基も考えられるＣＤＲ配列の部分であることを意味し得るが、当業者ならばそうであることは理解される。
当業者に利用可能なＣＤＲ配列の他のナンバリング規則としては、「ＡｂＭ」（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｂａｔｈ）および「ｃｏｎｔａｃｔ」（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｃｏｌｌｅｇｅ Ｌｏｎｄｏｎ）法が含まれる。「最小結合単位」を提供するために、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｃｈｉａ、ＡｂＭおよび接ｃｏｎｔａｃｔ法のうち少なくとも２つを用いた最小オーバーラッピング領域を決定することができる。最小結合単位は、ＣＤＲの一部であり得る。
以下の表１４は、各ＣＤＲまたは結合単位の各ナンバリング規則を用いた１つの定義を表す。表１４では可変ドメインアミノ酸配列を符番するためにＫａｂａｔナンバリングスキームが使用される。ＣＤＲ定義には使用する個々の公表によって変動がある場合があることに留意されたい。
クエリー核酸配列とサブジェクト核酸配列の間の「同一性パーセント」は、ペアワイズＢＬＡＳＴＮアラインメントが実行された後にサブジェクト核酸配列がクエリー核酸配列と１００％のクエリーカバー率を有する場合にＢＬＡＳＴＮアルゴリズムによって計算される、パーセンテージとして表される「同一性」の値である。クエリー核酸配列とサブジェクト核酸配列の間のこのようなペアワイズＢＬＡＳＴＮアラインメントは、National Center for Biotechnology Instituteのウェブサイトで利用可能なＢＬＡＳＴＮアルゴリズムのデフォルト設定を、低複雑性領域のフィルターをオフにして使用することによって実行される。重要なこととして、クエリー配列は、本明細書の１以上の請求項で特定される核酸配列によって記載され得る。
本開示の組成物および関連の方法において有用であり得、本開示の組成物および関連の方法に含まれ得る核酸配列は、本開示で特定される核酸配列（例えば、抗体重鎖または抗体軽鎖をコードする核酸）と約８５％～約１００％、約９０％～約１００％、約９５％～約１００％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％および約１００％の同一性を有し得る。本開示では、記載される核酸配列間の同一性パーセントは、上記に列挙された同一性(identiy)パーセント範囲の不連続のいずれの部分範囲も（例えば、特定の範囲内の整数値または特定の範囲内の不連続の部分値のいずれの範囲も）含み得る。
クエリーアミノ酸配列とサブジェクトアミノ酸配列の間の「同一性パーセント」は、ペアワイズＢＬＡＳＴＰアラインメントが実行された後にサブジェクトアミノ酸配列がクエリーアミノ酸配列と１００％のクエリーカバー率を有する場合にＢＬＡＳＴＰアルゴリズムによって計算される、パーセンテージとして表される「同一性」の値である。クエリーアミノ酸配列およびとサブジェクトアミノ酸配列の間のこのようなペアワイズＢＬＡＳＴＰアラインメントは、National Center for Biotechnology Instituteのウェブサイトで利用可能なＢＬＡＳＴＰアルゴリズムのデフォルト設定を、低複雑性領域のフィルターをオフにして使用することによって実行される。重要なこととして、クエリー配列は、本明細書の１以上の請求項で特定されるアミノ酸配列によって記載され得る。
本開示の組成物および関連の方法において有用であり得、本開示の組成物および関連の方法に含まれ得るアミノ酸配列は、本開示で特定されるアミノ酸配列（例えば、抗体重鎖または抗体軽鎖）と約８５％～約１００％、約９０％～約１００％、約９５％～約１００％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％および約１００％の同一性を有し得る。本開示では、記載されるアミノ酸配列間の同一性パーセントは、上記に列挙された同一性(identiy)パーセント範囲の不連続のいずれの部分範囲も（例えば、特定の範囲内の整数値または特定の範囲内の不連続の部分値のいずれの範囲も）含み得る。
用語「ペプチド」、「ポリペプチド」、「タンパク質」および「ペプチド鎖」はそれぞれ、２個以上のアミノ酸残基を含んでなる分子を意味する。ペプチドはモノマーまたはポリマーであり得る。
特定のアミノ酸置換は「保存的」であると見なされることは当技術分野で十分に認識されている。アミノ酸は、共通の側鎖特性に基づいてグループに分けられ、抗原結合タンパク質の結合親和性の総てまたは実質的に総てを維持するグループ内の置換は保存的置換と見なされる。表１５参照。本明細書に開示される抗原結合タンパク質は、このような「保存的」アミノ酸置換を含んでなり得る。
用語「医薬組成物」は、本明細書で使用する場合、患者への投与に好適な組成物を意味する。
本明細書に記載の医薬組成物は、本明細書に記載されるような抗体の精製調製物を含んでなり得る。
例えば、医薬製剤は、本明細書に記載されるような抗体の精製調製物を薬学的に許容可能な担体と組み合わせて含んでなり得る。
一般に、このような医薬組成物は、許容可能な製薬実務によって知られ、呼称されるような薬学的に許容可能な担体を含んでなる。このような担体の例としては、場合により５～８の範囲内のｐＨに好適なバッファーで緩衝されてもよい生理食塩水、リンゲル溶液、またはデキストロース溶液などの無菌担体が含まれる。
医薬組成物は、注射または注入（例えば、静脈内、腹腔内、皮内、皮下、筋肉内、または門脈内）により投与され得る。このような組成物は好適には目に見える粒状物がない。医薬組成物は、１ｍｇ～１０ｇの抗原結合タンパク質、例えば、５ｍｇ～１ｇの抗原結合タンパク質を含んでなり得る。あるいは、組成物は、５ｍｇ～５００ｍｇ、例えば、５ｍｇ～５０ｍｇの抗原結合タンパク質を含んでなり得る。
このような医薬組成物の調製方法は、当業者に周知である。医薬組成物は、単位投与形中に１ｍｇ～１０ｇの抗原結合タンパク質を、場合により使用説明書とともに含んでなり得る。医薬組成物は、投与前に当業者に周知または自明の方法に従って再構成するために凍結乾燥（フリーズドライ）されてもよい。抗体がＩｇＧ１アイソタイプを有する場合、このアイソタイプの抗体の銅により媒介される分解の程度を軽減するために医薬組成物にクエン酸塩（例えば、クエン酸ナトリウム）またはＥＤＴＡまたはヒスチジンなどの銅のキレーターを加えてもよい。医薬組成物はまた、アルギニンなどの可溶化剤、ポリソルベート８０などの界面活性剤／抗凝集剤、およびバイアルのヘッドスペース酸素を置換するための窒素などの不活性ガスも含んでなり得る。
用語「治療上有効な量」は、本明細書で使用する場合、処置される病態（例えば、喘息、軽症喘息、中等症喘息、重症喘息、軽症好酸球性喘息、中等症好酸球性喘息、重症好酸球性喘息、管理不良好酸球性喘息、好酸球性喘息、準好酸球性喘息、慢性閉塞性肺疾患、好酸球性多発血管炎性肉芽腫症、好酸球増加症候群、鼻ポリープ、水疱性類天疱瘡、好酸球性食道炎、アトピー性皮膚炎、中等症アトピー性皮膚炎および重症アトピー性皮膚炎）の１以上の症状の処置または管理に治療利益を提供する薬剤（例えば、抗体または医薬組成物）の量を意味する。喘息、軽症喘息、中等症喘息、重症喘息、軽症好酸球性喘息、中等症好酸球性喘息、重症好酸球性喘息、管理不良好酸球性喘息、好酸球性喘息および準好酸球性喘息を含む喘息の１以上の症状のこのような処置または管理の例としては、１）喘息の増悪(exacerabations)の頻度の低減；２）経口または全身コルチコステロイド、入院、および／または救急診療部（ＥＤ）来院を必要とする最初の臨床的に重要な増悪までの時間の短縮(reduction)；３）入院（挿管および集中治療室への収容を含む）またはＥＤ来院を必要とする増悪の頻度の低減；４）入院またはＥＤ来院を必要とする最初の増悪までの時間の短縮；５）臨床的気管支拡張薬前のＦＥＶ１のベースラインからの変化；６）臨床的気管支拡張薬後のＦＥＶ１のベースラインからの変化；７）喘息コントロール質問票（ＡＣＱ）スコアのベースラインからの変化；８）肺活量計により測定される肺機能（例えば、肺活量（ＶＣ）、努力性肺活量（ＦＶＣ）、０．５、１．０（ＦＥＶ１）、２．０、および３．０秒の時間間隔の努力性呼気肺活量（ＦＥＶ）、努力性呼気流量２５～７５％（ＦＥＦ２５～７５）ならびに最大随意換気（ＭＶＶ）全肺活量、一回換気量(idal volume)、残気量、呼気予備量、吸気予備量、吸気量、吸気肺活量、肺活量、機能的残気量、全肺活量のパーセントとして表される残気量、肺胞ガス量、誘導気道の容積を含む肺の実容積、努力性肺活量など）の改善；ならびに９）管理にステロイド（例えば、任意の経路により投与される経口ステロイドまたはステロイド様プレドニゾン、プレドニゾロンなど）を必要とする喘息増悪の低減が含まれる。このような管理にステロイドを必要とする喘息増悪の低減は、ステロイド（例えば、経口ステロイド）を必要とする増悪におけるおよそ５０％の低減であり得る。
治療上有効な量および処置計画は一般に経験的に決定され、患者の年齢、体重、および健康状態、ならびに処置される疾患または障害などの因子によって異なり得る。このような因子は、担当の医師の範囲内にある。
対象に投与される抗原結合タンパク質の用量は一般に、１μｇ／ｋｇ～１５０ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ～１００ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ～５０ｍｇ／ｋｇ、１～２５ｍｇ／ｋｇ、約０．３ｍｇ／ｋｇ～約３ｍｇ／ｋｇまたは１～１０ｍｇ／ｋｇ対象の体重である。例えば、用量は、１０ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、または６０ｍｇ／ｋｇであり得る。用量はまた、１０ｍｇ／ｋｇ～１１０ｍｇ／ｍｇ １５ｍｇ／ｋｇ～２５ｍｇ／ｋｇまたは１５ｍｇ／ｋｇ～１００ｍｇ／ｋｇであり得る。抗原結合タンパク質は、例えば、非経口、皮下、静脈内、または筋肉内投与され得る。用量はまた、対象につき約２０ｍｇ～対象につき約７５０ｍｇ、対象につき約７５ｍｇ～対象につき約７５０ｍｇ、対象につき約２０ｍｇ～対象につき約２００ｍｇなどとして対象につき投与され得る。用量は、これらの投与範囲のいずれの不連続の部分範囲であってもよい。例えば、用量は、対象につき約１００ｍｇ（例えば、４週間毎に１回）、または対象につき３００ｍｇとして対象につき皮下投与され得る（または静脈内投与とほぼ同じ、または匹敵するバイオアベイラビリティが達成される限り、他の用量、例えば、対象につき３００ｍｇの総皮下投与用量を達成するために対象につき３用量の１００ｍｇが皮下投与されてもよい(or other doses administered may be)）。
本明細書で提供されるいずれの種類の範囲も、記載される特定の範囲内の総ての値および特定の範囲に対する終点付近の値を含む。
所望であれば、本開示の抗体または抗原結合タンパク質（例えば、医薬組成物として）の有効一日用量は、その日の間に適当な間隔で個別投与される２、３、４、５、６またはそれを超える用量として、場合により単位投与形で投与され得る。
用量の投与は、２～２４時間、例えば、２～１２時間、または２～６時間の期間にわたる緩慢な連続注入によってもよい。このような投与は副作用の軽減をもたらし得る。
用量の投与は、必要に応じて１回以上、例えば、１日３回、１日毎に１回、２日毎に１回、１週間に１回、１４日毎に１回、１か月に１回、３か月毎に１回、４か月毎に１回、６か月毎に１回、または１２か月毎に１回反復され得る。抗原結合タンパク質は、維持療法、例えば、６か月以上の期間１週間に１回投与され得る。抗原結合タンパク質は、間欠療法により、例えば、１サイクルとして、３～６か月の期間、次いで、３～６か月間は投与せず、その後、３～６か月間再び抗原結合タンパク質を投与するなどで投与されてよい。
例えば、用量は、１４日または２８日毎に１回、毎日複数用量の投与形態で皮下に投与され得る。一つの実施態様では、組成物の用量は、４週間（２８日）毎に１回、１００ｍｇである。
抗原結合タンパク質は、療法を特定の部位へ標的化するように対象に投与され得る。
本開示の方法において抗原結合タンパク質は、抗体または小分子阻害剤などの１以上の他の治療上有効な薬剤と併用され得る。
用語「処置する」およびその文法的変形は、本明細書で使用する場合、治療的療法を意味する。特定の病態に関して、処置は、（１）その病態の生物学的発現のうち１以上の状態を改善すること、（２）（ａ）その病態につながるもしくはその病態の原因である生物学的カスケードの１以上の点、または（ｂ）その病態の生物学的発現の１以上に干渉すること、（３）その病態もしくはその処置に関連する症状、効果もしくは副作用の１以上を緩和すること、（４）その病態もしくはその病態の生物学的発現の１以上の進行を遅らせること、または（５）その病態の生物学的発現の１以上の発症を防ぐことを意味する。予防的療法もまた企図される療法である。当業者は、「予防」は絶対的な用語でないことを認識するであろう。医学では、「予防」は、ある病態もしくはその生物学的発現の可能性もしくは重症度を実質的に小さくするため、またはそのような病態もしくはその生物学的発現の発症を遅延させるための薬物の予防的投与を意味すると理解される。
用語「個体」、「対象」および「患者」は、本明細書では互換的に使用される。対象は一般にヒトである。対象はまた、マウス、ラット、または霊長類（例えば、マーモセットまたはサル）などの哺乳動物であってもよい。対象は、非ヒト動物であり得る。本開示の抗原結合タンパク質、組成物および方法はまた獣医学的使用も有する。処置される対象は、農用動物、例えば、乳牛もしくは雄牛、ヒツジ、ブタ、去勢牛、ヤギまたはウマであってよく、あるいはイヌもしくはネコなどの飼育動物であってもよい。動物はいずれの齢でもよく、または成熟した成体動物でもよい。
処置は、治療的、予防的または防止的であり得る。対象はそれを必要とする対象である。処置を必要とする対象としては、今後、特定の医学的疾患を発症する可能性のある個体に加え、その疾患にすでに罹患している個体も含み得る。
よって、本明細書に記載される本開示の方法、抗原結合タンパク質および組成物は、指定された場合、予防的処置または防止的処置のために使用することができる。この場合、本開示の方法、抗原結合タンパク質および組成物は、疾患の１以上の側面または症状の発症を予防するまたは遅延させるために使用することができる。対象は無症候性であり得る。対象は、その疾患に遺伝的素因を有し得る。抗原結合タンパク質の予防上有効な量がこのような個体に投与される。予防上有効な量は、本明細書に記載の疾患の１以上の側面または症状の発症を予防するまたは遅延させる量である。
本開示の方法、抗原結合タンパク質および組成物は、実行可能な治療的処置を構成するためにその疾患の総ての症状または発現の完全な治癒または根絶を果たす必要はない。当技術分野で認識されるように、処置方法において治療薬として使用される薬物は、所与の病状の重症度を軽減し得るが、有用な治療薬として見なされるためにその疾患の総ての発現を排除する必要はない。同様に、予防的に投与される処置は、実行可能な予防薬を構成するために疾患の発症の予防に完全に有効である必要はない。単に、疾患の影響の軽減（例えば、症状の数もしくは重症度の低減によるか、または別の処置の有効性の増強によるか、または別の有益な効果の生成による）、あるいは対象において疾患が生じるまたは増悪する見込みの低減（例えば、疾患の発症を遅延させることによる）で十分である。
本開示の１つの側面は、配列番号５に示されるＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号６に示されるＣＤＲＨ２アミノ酸配列、および配列番号７に示されるＣＤＲＨ３アミノ酸配列を有する重鎖可変領域と；配列番号８に示されるＣＤＲＬ１アミノ酸配列、配列番号９に示されるＣＤＲＬ２アミノ酸配列、および配列番号１０に示されるＣＤＲＬ３アミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含んでなる抗原結合タンパク質である。
本開示の抗原結合タンパク質の一つの実施態様では、重鎖可変領域は、配列番号２１に示される重鎖ＦＲ４アミノ酸配列をさらに含んでなる。
一つの実施態様では、本開示の抗原結合タンパク質は、２５２番目にチロシン残基、２５４番目にトレオニン残基および２５６番目にグルタミン酸残基を有する重鎖Ｆｃドメインを含んでなり、前記重鎖Ｆｃドメインのアミノ末端は、前記重鎖可変領域のカルボキシ末端に連結されている。
本開示の別の側面は、配列番号３に示されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域配列と；配列番号４に示されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域配列とを含んでなる抗原結合タンパク質である。
本開示の別の側面は、重鎖と軽鎖を含んでなり、ａ）前記重鎖が、配列番号５に示されるＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号６に示されるＣＤＲＨ２アミノ酸配列、および配列番号７に示されるＣＤＲＨ３アミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含んでなり；かつｂ）前記軽鎖が、配列番号８に示されるＣＤＲＬ１アミノ酸配列、配列番号９に示されるＣＤＲＬ２アミノ酸配列、および配列番号１０に示されるＣＤＲＬ３アミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含んでなる抗体である。
本開示の抗体の一つの実施態様では、重鎖可変領域は、配列番号２１に示される重鎖ＦＲ４アミノ酸配列をさらに含んでなる。
本開示の抗体の一つの実施態様では、重鎖は、２５２番目にチロシン残基、２５４番目にトレオニン残基および２５６番目にグルタミン酸残基を有する重鎖Ｆｃドメインを含んでなる。
本開示の別の側面は、重鎖と軽鎖を含んでなり、ａ）前記重鎖が、配列番号３に示されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域配列を含んでなり；かつｂ）前記軽鎖が、配列番号４に示されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域配列を含んでなる抗体である。
本開示の抗体の一つの実施態様では、重鎖は、２５２番目にチロシン残基、２５４番目にトレオニン残基および２５６番目にグルタミン酸残基を有する重鎖Ｆｃドメインを含んでなる。
本開示の別の側面は、配列番号１に示されるアミノ酸配列を有する重鎖と配列番号２に示されるアミノ酸配列を有する軽鎖とを含んでなる抗体である。
本開示の別の側面は、配列番号３に示されるアミノ酸配列を含んでなるペプチド鎖である。
本開示の別の側面は、配列番号１に示されるアミノ酸配列を含んでなるペプチド鎖である。
一つの実施態様では、本開示の組成物は、本開示の重鎖可変領域をコードする核酸と本開示の抗原結合タンパク質の軽鎖可変領域をコードする核酸とを含んでなる。
一つの実施態様では、本開示の組成物は、本開示の重鎖可変領域をコードする核酸と本開示の軽鎖可変領域をコードする核酸とを含んでなる。
一つの実施態様では、本開示の組成物は、本開示の重鎖可変領域のカルボキシ末端に連結された重鎖Ｆｃドメインをコードする核酸と、本開示の軽鎖可変領域をコードする核酸とを含んでなる。
本開示の別の側面は、配列番号３に示されるアミノ酸配列をコードする核酸と配列番号４に示されるアミノ酸配列をコードする核酸とを含んでなる組成物である。
本開示の別の側面は、配列番号１に示されるアミノ酸配列をコードする核酸と配列番号２に示されるアミノ酸配列をコードする核酸とを含んでなる組成物である。
本開示の別の側面は、配列番号３に示されるアミノ酸配列をコードする核酸を含んでなる組成物である。
本開示の別の側面は、配列番号１に示されるアミノ酸配列をコードする核酸を含んでなる組成物である。
本開示の別の側面は、配列番号１５に示される配列を有する核酸と配列番号１６に示される配列を有する核酸とを含んでなる組成物である。
本開示の別の側面は、配列番号１７に示される配列を有する核酸と配列番号１８に示されるアミノ酸配列を有する核酸とを含んでなる組成物である。
本開示の別の側面は、配列番号１３に示される配列を有する核酸と配列番号１４に示されるアミノ酸配列を有する核酸とを含んでなる組成物である。
本開示の別の側面は、配列番号１５に示される配列を有する核酸を含んでなる組成物である。
本開示の別の側面は、配列番号１７に示される配列を有する核酸を含んでなる組成物である。
本開示の別の側面は、配列番号１３に示される配列を有する核酸を含んでなる組成物である。
一つの実施態様では、本開示の組成物は、本開示の重鎖可変領域をコードする核酸を含んでなる。
一つの実施態様では、本開示の組成物は、本開示の重鎖可変領域をコードする核酸を含んでなる。
一つの実施態様では、本開示の組成物は、本開示の重鎖可変領域カルボキシ末端に連結された重鎖Ｆｃドメインをコードする核酸を含んでなる。
一つの実施態様では、本開示の発現ベクターは、本開示の組成物を含んでなる。
一つの実施態様では、本開示の組換え宿主細胞は、本開示の組成物を含んでなる発現ベクターを含んでなる。別の実施態様では、組換え宿主細胞は、本開示の、第１の抗原結合タンパク質ペプチド鎖（例えば、抗体重鎖）をコードする第１の発現ベクターと第２の抗原結合ペプチド鎖（例えば、抗体軽鎖）をコードする第２の発現ベクターとを含んでなる。
本開示の別の側面は、配列番号３に示されるアミノ酸配列を含んでなるペプチド鎖の生産のための方法であり、前記方法は、配列番号３に示されるアミノ酸配列をコードする核酸を含んでなる組換え宿主細胞を培養する工程；および前記ペプチド鎖を回収する工程を含んでなる。
本開示の方法の一つの実施態様では、核酸は、配列番号１５に示される配列を含んでなる。
本開示の方法の一つの実施態様では、核酸は、配列番号１３に示される配列を含んでなる。
本開示の方法の一つの実施態様では、核酸は、配列番号１７に示される配列を含んでなる。
本開示の一つの実施態様は、抗原結合タンパク質の生産のための方法であって、ａ）本開示の組成物を含んでなる発現ベクターを含んでなる組換え宿主細胞を培養する工程；およびｂ）抗原結合タンパク質を回収する工程を含んでなり、それにより抗原結合タンパク質が生産される方法である。
本開示の一つの実施態様では、抗原結合タンパク質は、開示の方法によって生産される。
本開示の一つの実施態様は、抗体の生産のための方法であって、ａ）本開示の組成物を含んでなる発現ベクターを含んでなる組換え宿主細胞を培養する工程；およびｂ）前記抗体を回収する工程を含んでなり；それにより、抗体が生産される方法である。
本開示の一つの実施態様は、本開示の方法により生産される抗体である。
本開示の別の側面は、抗体の生産のための方法であって、ａ）配列番号１７に示される配列を有する核酸と配列番号１８に示される配列を有する核酸とを含んでなる発現ベクターを含んでなる組換え宿主細胞を培養する工程；およびｂ）前記抗体を回収する工程を含んでなり；それにより、抗体が生産される方法である。
本開示の別の側面は、ａ）配列番号５に示されるＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号６に示されるＣＤＲＨ２アミノ酸配列、および配列番号７に示されるＣＤＲＨ３アミノ酸配列を有する重鎖可変領域と；配列番号８に示されるＣＤＲＬ１アミノ酸配列、配列番号９に示されるＣＤＲＬ２アミノ酸配列、および配列番号１０に示されるＣＤＲＬ３アミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含んでなる抗原結合タンパク質；ならびにｂ）薬学的に許容可能な担体を含んでなる医薬組成物である。
本開示の医薬組成物の一つの実施態様では、重鎖可変領域は、配列番号２１に示される重鎖ＦＲ４アミノ酸配列をさらに含んでなる。
一つの実施態様では、本開示の医薬組成物は、２５２番目にチロシン残基、２５４番目にトレオニン残基および２５６番目にグルタミン酸残基を有する重鎖Ｆｃドメインを含んでなり、前記重鎖Ｆｃドメインのアミノ末端は、前記重鎖可変領域のカルボキシ末端に連結されている。
本開示の医薬組成物の一つの実施態様では、抗原結合タンパク質は、約７５ｍｇ／ｍｌ～約１５０ｍｇ／ｍｌの濃度である。
本開示の医薬組成物の一つの実施態様では、薬学的に有効な担体は、約４０ｍＭのヒスチジン、約１８０ｍＭのトレハロース、約１００ｍＭのアルギニン、約８ｍＭのメチオニン、約０．０２重量／容量％のポリソルベート８０および約０．０５ｍＭのＥＤＴＡを含有する、約ｐＨ５．５～約ｐＨ６．０の水性液体処方物を含んでなる。
本開示の医薬組成物の一つの実施態様では、ｐＨは約６．０であり、かつ、抗原結合タンパク質は約１５０ｍｇ／ｍｌの濃度である。
本開示の別の側面は、ａ）配列番号５に示されるＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号６に示されるＣＤＲＨ２アミノ酸配列、および配列番号７に示されるＣＤＲＨ３アミノ酸配列を有する重鎖可変領域と；配列番号８に示されるＣＤＲＬ１アミノ酸配列、配列番号９に示されるＣＤＲＬ２アミノ酸配列、および配列番号１０に示されるＣＤＲＬ３アミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含んでなる抗体；ならびにｂ）薬学的に許容可能な担体を含んでなる医薬組成物である。
５８．抗体が約７５ｍｇ／ｍｌ～約１５０ｍｇ／ｍｌの濃度である、請求項５７の医薬組成物。
本開示の医薬組成物の一つの実施態様では、薬学的に有効な担体は、約４０ｍＭのヒスチジン、約１８０ｍＭのトレハロース、約１００ｍＭのアルギニン、約８ｍＭのメチオニン、約０．０２重量／容量％のポリソルベート８０および約０．０５ｍＭのＥＤＴＡを含有する、約ｐＨ５．５～約ｐＨ６．０の水性液体処方物を含んでなる。
本開示の医薬組成物の一つの実施態様では、ｐＨは約６．０であり、かつ、抗体は約１５０ｍｇ／ｍｌの濃度である。
本開示の別の側面は、ａ）重鎖と軽鎖を含んでなり、前記重鎖が、配列番号３に示されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域配列を含んでなり；かつ前記軽鎖が、配列番号４に示されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域配列を含んでなる抗体；およびｂ）薬学的に許容可能な担体を含んでなる医薬組成物である。
本開示の別の側面は、ａ）配列番号１に示されるアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号２に示されるアミノ酸配列を有する軽鎖とを含んでなる抗体；およびｂ）薬学的に許容可能な担体を含んでなる医薬組成物である。
本開示の一つの実施態様は、対象において疾患を処置する方法であって、ａ）喘息、軽症喘息、中等症喘息、重症喘息、軽症好酸球性喘息、中等症好酸球性喘息、重症好酸球性喘息、管理不良好酸球性喘息、好酸球性喘息、準好酸球性喘息、慢性閉塞性肺疾患、好酸球性多発血管炎性肉芽腫症、好酸球増加症候群、鼻ポリープ、水疱性類天疱瘡、好酸球性食道炎、アトピー性皮膚炎、中等症アトピー性皮膚炎および重症アトピー性皮膚炎からなる群から選択される疾患を有する対象を特定する工程；ならびにｂ）前記対象に本開示による抗原結合タンパク質の治療上有効な量を投与する工程を含んでなり；それにより、前記対象における疾患が処置される方法である。
本開示の方法の一つの実施態様では、抗原結合タンパク質の量は、約２ｍｇ～約６００ｍｇである。例えば、抗原結合タンパク質（例えば、抗体）の量は、２ｍｇ、１０ｍｇ、３０ｍｇ、１００ｍｇ、３００ｍｇまたは６００ｍｇ用量であり得る。
本開示の方法の一つの実施態様では、抗原結合タンパク質は、３か月毎に１回または６か月毎に１回投与される。
本開示の方法の一つの実施態様では、対象は、２００細胞／μＬ以上および３５０細胞／μＬ以上からなる群から選択される絶対血中好酸球数を有する。
本開示の一つの実施態様は、対象において疾患を処置する方法であって、ａ）喘息、軽症喘息、中等症喘息、重症喘息、軽症好酸球性喘息、中等症好酸球性喘息、重症好酸球性喘息、管理不良好酸球性喘息、好酸球性喘息、準好酸球性喘息、慢性閉塞性肺疾患、好酸球性多発血管炎性肉芽腫症、好酸球増加症候群、鼻ポリープ、水疱性類天疱瘡、好酸球性食道炎、アトピー性皮膚炎、中等症アトピー性皮膚炎および重症アトピー性皮膚炎からなる群から選択される疾患を有する対象を特定する工程；ならびにｂ）前記対象に本開示による抗体の治療上有効な量を投与する工程を含んでなり；それにより、前記対象における疾患が処置される方法である。
本開示の一つの実施態様は、対象において疾患を処置する方法であって、ａ）喘息、軽症喘息、中等症喘息、重症喘息、軽症好酸球性喘息、中等症好酸球性喘息、重症好酸球性喘息、管理不良好酸球性喘息、好酸球性喘息、準好酸球性喘息、慢性閉塞性肺疾患、好酸球性多発血管炎性肉芽腫症、好酸球増加症候群、鼻ポリープ、水疱性類天疱瘡、好酸球性食道炎、アトピー性皮膚炎、中等症アトピー性皮膚炎および重症アトピー性皮膚炎からなる群から選択される疾患を有する対象を特定する工程；ならびにｂ）前記対象に本開示による組成物の治療上有効な量を投与する工程を含んでなり；それにより、前記対象における疾患が処置される方法である。
本開示の別の側面は、対象において軽症～中等症喘息を処置する方法であって、ａ）軽症喘息～中等症喘息診断を有する対象を特定する工程；ならびにｂ）前記対象に、配列番号５に示されるＣＤＲアミノ酸配列、配列番号６に示されるＣＤＲアミノ酸配列、および配列番号７に示されるＣＤＲアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と；配列番号８に示されるＣＤＲアミノ酸配列、配列番号９に示されるＣＤＲアミノ酸配列、および配列番号１０に示されるＣＤＲアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含んでなる抗体の治療上有効な量を投与する工程を含んでなり；それにより、前記対象における軽症～中等症喘息が処置される方法である。
一つの実施態様は、重鎖可変領域が配列番号２１に示される重鎖ＦＲ４アミノ酸配列をさらに含んでなる本開示の方法である。
一つの実施態様は、抗体が２５２番目にチロシン残基、２５４番目にトレオニン残基および２５６番目にグルタミン酸残基を有する重鎖Ｆｃドメインを含んでなり、かつ、前記重鎖Ｆｃドメインのアミノ末端が前記重鎖可変領域のカルボキシ末端に連結されている本開示の方法である。
一つの実施態様は、抗体が配列番号３に示されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域配列と；配列番号４に示されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域配列とを含んでなる本開示の方法である。
一つの実施態様は、抗体が皮下投与される本開示の方法である。
本開示の別の側面は、対象において対象軽症～中等症喘息を処置する方法であって、ａ）軽症喘息～中等症喘息診断を有する対象を特定する工程；ならびにｂ）前記対象に、配列番号１に示されるアミノ酸配列を有する重鎖と配列番号１に示されるアミノ酸配列を有する軽鎖とを含んでなる抗体の治療上有効な量を投与する工程を含んでなり；それにより、前記対象における軽症～中等症喘息が処置される方法である。
本開示の別の側面は、対象において軽症～中等症喘息を処置する方法であって、ａ）軽症喘息～中等症喘息診断を有する対象を特定する工程；ならびにｂ）前記対象に、配列番号１に示されるアミノ酸配列を有する重鎖と配列番号１に示されるアミノ酸配列を有する軽鎖とを含んでなる抗体および薬学的に有効な担体を含んでなる医薬組成物の治療上有効な量を投与する工程を含んでなり；それにより、前記対象における軽症～中等症喘息が処置される方法である。
一つの実施態様は、薬学的に有効な担体が約４０ｍＭのヒスチジン、約１８０ｍＭのトレハロース、約１００ｍＭのアルギニン、約８ｍＭのメチオニン、約０．０２重量／容量％のポリソルベート８０および約０．０５ｍＭのＥＤＴＡを含有する、約ｐＨ５．５～約ｐＨ６．０の水性液体処方物を含んでなる本開示の方法である。
本開示の別の側面は、対象において重症喘息を処置する方法であって、ａ）重症喘息診断を有する対象を特定する工程；ならびにｂ）前記対象に、配列番号５に示されるＣＤＲアミノ酸配列、配列番号６に示されるＣＤＲアミノ酸配列、および配列番号７に示されるＣＤＲアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と；配列番号８に示されるＣＤＲアミノ酸配列、配列番号９に示されるＣＤＲアミノ酸配列、および配列番号１０に示されるＣＤＲアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含んでなる抗体の治療上有効な量を投与する工程を含んでなり；それにより、前記対象における重症喘息が処置される方法である。
本開示の別の側面は、対象において重症喘息を処置する方法であって、ａ）重症喘息診断を有する対象を特定する工程；およびｂ）前記対象に、配列番号１に示されるアミノ酸配列を有する重鎖と配列番号１に示されるアミノ酸配列を有する軽鎖とを含んでなる抗体の治療上有効な量を投与する工程を含んでなり；それにより、前記対象における重症喘息が処置される方法である。
本開示の別の側面は、対象において重症喘息を処置する方法であって、ａ）重症喘息診断を有する対象を特定する工程；およびｂ）前記対象に、配列番号１に示されるアミノ酸配列を有する重鎖と配列番号１に示されるアミノ酸配列を有する軽鎖とを含んでなる抗体および薬学的に有効な担体を含んでなる医薬組成物の治療上有効な量を投与する工程を含んでなり；それにより、前記対象における重症喘息が処置される方法である。
本開示の別の側面は、必要とする対象において中等症～重症アトピー性皮膚炎を処置する方法であって、ａ）ｉ）ＨａｎｉｆｉｎおよびＲａｊｋａのＥｉｃｈｅｎｆｉｅｌｄ改訂診断基準によるアトピー性皮膚炎診断；ｉｉ）処置前約２年以上のアトピー性皮膚炎の事前診断；ｉｉｉ）医療専門家の全般的評価スコアが約３以上；ｉｖ）アトピー性皮膚炎関与が身体の表面積の約１０％以上；ｖ）湿疹面積および重症度指数スコアが１６以上；ｖｉ）絶対血中好酸球数が１５０細胞／μＬ以上、２００細胞／μＬ以上、３００細胞／μＬ以上、または３５０細胞／μＬ以上；ならびにｖｉｉ）１）アトピー性皮膚炎の外用薬に対する６か月以上の応答不良；２）アトピー性皮膚炎に対する外用薬の免疫寛容不良；３）アトピー性皮膚炎の外用薬からの副作用；および４）アトピー性皮膚炎の非薬理学的処置に対する応答不良からなる群から選択される、処置前の少なくとも１つの状態からなる群から選択される少なくとも１つを有する対象を特定する工程；ならびにｂ）前記対象に、配列番号５に示されるＣＤＲアミノ酸配列、配列番号６に示されるＣＤＲアミノ酸配列、および配列番号７に示されるＣＤＲアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と；配列番号８に示されるＣＤＲアミノ酸配列、配列番号９に示されるＣＤＲアミノ酸配列、および配列番号１０に示されるＣＤＲアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含んでなる抗体の治療上有効な量を投与する工程を含んでなり；それにより、前記対象におけるアトピー性皮膚炎が処置される方法である。
一つの実施態様は、抗体が静脈内投与される本開示の方法である。
本開示の別の側面は、必要とする対象において中等症～重症アトピー性皮膚炎を処置する方法であって、ｉ）ＨａｎｉｆｉｎおよびＲａｊｋａのＥｉｃｈｅｎｆｉｅｌｄ改訂診断基準によるアトピー性皮膚炎診断；ｉｉ）処置前約２年以上のアトピー性皮膚炎の事前診断；ｉｉｉ）医療専門家の全般的評価スコアが約３以上；ｉｖ）アトピー性皮膚炎関与が身体の表面積の約１０％以上；ｖ）湿疹面積および重症度指数スコアが１６以上；ｖｉ）血中好酸球の絶対数が１５０細胞／μＬ以上、２００細胞／μＬ以上、３００細胞／μＬ以上、または３５０細胞／μＬ以上；ならびにｖｉｉ）１）アトピー性皮膚炎の外用薬に対して６か月以上の不十分な応答；２）アトピー性皮膚炎に対する外用薬の免疫寛容不良；３）アトピー性皮膚炎の外用薬からの副作用；および４）アトピー性皮膚炎の非薬理学的処置に対する応答不良からなる群から選択される、処置前の少なくとも１つの状態からなる群から選択される少なくとも１つを有する対象を特定する工程；ならびにｂ）前記対象に、配列番号１に示されるアミノ酸配列を有する重鎖と配列番号１に示されるアミノ酸配列を有する軽鎖とを含んでなる抗体の治療上有効な量を投与する工程を含んでなり；それにより、前記対象におけるアトピー性皮膚炎が処置される方法である。
本開示の別の側面は、対象において中等症～重症アトピー性皮膚炎を処置する方法であって、ａ）ｉ）ＨａｎｉｆｉｎおよびＲａｊｋａのＥｉｃｈｅｎｆｉｅｌｄ改訂診断基準によるアトピー性皮膚炎診断；ｉｉ）処置前約２年以上のアトピー性皮膚炎の事前診断；ｉｉｉ）医療専門家の全般的評価スコアが約３以上；ｖ）アトピー性皮膚炎関与が身体の表面積の約１０％以上；ｖ）湿疹面積および重症度指数スコアが１６以上；ｖｉ）血中好酸球の絶対数が１５０細胞／μＬ以上、２００細胞／μＬ以上、３００細胞／μＬ以上、または３５０細胞／μＬ以上；ならびにｖｉｉ）１）アトピー性皮膚炎の外用薬に対して６か月以上の応答不良；２）アトピー性皮膚炎に対する外用薬の免疫寛容不良；３）アトピー性皮膚炎の外用薬からの副作用；および４）アトピー性皮膚炎の非薬理学的処置に対する応答不良からなる群から選択される、処置前の少なくとも１つの状態からなる群から選択される少なくとも１つを有する対象を特定する工程からなる群から選択される少なくとも１つを有する対象を特定する工程；ならびにｂ）前記対象に、配列番号１に示されるアミノ酸配列を有する重鎖と配列番号１に示されるアミノ酸配列を有する軽鎖とを含んでなる抗体および薬学的に有効な担体を含んでなる医薬組成物の治療上有効な量を投与する工程を含んでなり；それにより、前記対象におけるアトピー性皮膚炎が処置される方法である。
本開示の別の側面は、対象において血中好酸球の絶対数を低減する方法であって、ａ）喘息、軽症喘息、中等症喘息、重症喘息、軽症好酸球性喘息、中等症好酸球性喘息、重症好酸球性喘息、管理不良好酸球性喘息、好酸球性喘息、準好酸球性喘息、慢性閉塞性肺疾患、好酸球性多発血管炎性肉芽腫症、好酸球増加症候群、鼻ポリープ、水疱性類天疱瘡、好酸球性食道炎およびアトピー性皮膚炎からなる群から選択される病態を有する対象を特定する工程；ならびにｂ）前記対象に、配列番号５に示されるＣＤＲアミノ酸配列、配列番号６に示されるＣＤＲアミノ酸配列、および配列番号７に示されるＣＤＲアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と；配列番号８に示されるＣＤＲアミノ酸配列、配列番号９に示されるＣＤＲアミノ酸配列、および配列番号１０に示されるＣＤＲアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含んでなる抗体の治療上有効な量を投与する工程を含んでなり；それにより、対象における血中好酸球の絶対数が低減される方法である。
本開示の方法の一つの実施態様は、ａ）前記対象において血中好酸球の絶対数の第１の測定値を得る工程(making a first measurement of an absolute blood eosinophil count in the subject)；ｂ）前記対象に治療上有効な量の抗原結合タンパク質を投与した後に、前記対象における血中好酸球の絶対数の第２の測定値を得る工程；およびｃ）第１の測定値と第２の測定値を比較する工程をさらに含んでなる。
本開示の方法の一つの実施態様は、ａ）前記対象において血中好酸球の絶対数の第１の測定値を得る工程；ｂ）前記対象に治療上有効な量の抗原結合タンパク質を投与した後に、前記対象において血中好酸球の絶対数の第２の測定値を得る工程；およびｃ）第１の測定値と第２の測定値を比較する工程をさらに含んでなり；かつ、前記対象は、２００細胞／μＬ以上および３５０細胞／μＬ以上からなる群から選択される血中好酸球の絶対数を有する。
本開示の別の側面は、対象において血中好酸球の絶対数を低減する方法であって、ａ）喘息、軽症喘息、中等症喘息、重症喘息、軽症好酸球性喘息、中等症好酸球性喘息、重症好酸球性喘息、管理不良好酸球性喘息、好酸球性喘息、準好酸球性喘息、慢性閉塞性肺疾患、好酸球性多発血管炎性肉芽腫症、好酸球増加症候群、鼻ポリープ、水疱性類天疱瘡、好酸球性食道炎、アトピー性皮膚炎、中等症アトピー性皮膚炎および重症アトピー性皮膚炎からなる群から選択される病態を有する対象を特定する工程；ならびにｂ）前記対象に、配列番号１に示されるアミノ酸配列を有する重鎖と配列番号１に示されるアミノ酸配列を有する軽鎖とを含んでなる抗体の治療上有効な量を投与する工程を含んでなり；それにより、前記対象におけるアトピー性皮膚炎が処置される方法である。
本開示の別の側面は、対象において血中好酸球の絶対数を低減する方法であって、ａ）喘息、軽症喘息、中等症喘息、重症喘息、軽症好酸球性喘息、中等症好酸球性喘息、重症好酸球性喘息、管理不良好酸球性喘息、好酸球性喘息、準好酸球性喘息、慢性閉塞性肺疾患、好酸球性多発血管炎性肉芽腫症、好酸球増加症候群、鼻ポリープ、水疱性類天疱瘡、好酸球性食道炎、アトピー性皮膚炎、中等症アトピー性皮膚炎および重症アトピー性皮膚炎からなる群から選択される病態を有する対象を特定する工程；ならびにｂ）前記対象に、配列番号１に示されるアミノ酸配列を有する重鎖と配列番号１に示されるアミノ酸配列を有する軽鎖とを含んでなる抗体および薬学的に有効な担体を含んでなる医薬組成物の治療上有効な量を投与する工程を含んでなり；それにより、前記対象における血中好酸球の絶対数が低減される方法である。
本開示の一つの実施態様は、療法に使用するための本開示による組成物である。
本開示の一つの実施態様は、喘息、軽症喘息、中等症喘息、重症喘息、軽症好酸球性喘息、中等症好酸球性喘息、重症好酸球性喘息、管理不良好酸球性喘息、好酸球性喘息、準好酸球性喘息、慢性閉塞性肺疾患、好酸球性多発血管炎性肉芽腫症、好酸球増加症候群、鼻ポリープ、水疱性類天疱瘡、好酸球性食道炎、アトピー性皮膚炎、中等症アトピー性皮膚炎および重症アトピー性皮膚炎の処置に使用するための本開示による組成物である。
本開示の組成物は、６．８～７．２のｐＨまたはｐＨ６．２～ｐＨ６．６のｐＨ（６．３のｐＨ値が好ましい）を提供する第二リン酸ナトリウム七水和物、リン酸塩、クエン酸、クエン酸塩、リン酸ナトリウム、リン酸カリウム、クエン酸ナトリウム、およびヒスチジンからなる群から選択される緩衝剤をさらに含んでなり得る。本開示の組成物中のバッファーは、約１０～３０ｍＭ、約１０～２０ｍＭの範囲、約２０ｍＭまたは約１５．５ｍＭで存在し得る。例えば、本開示の組成物中のバッファーは、約２０ｍＭ、または約１５．５ｍＭの第二リン酸ナトリウム七水和物である。
本開示の組成物は、６．２～６．６（含む）のｐＨ（６．３のｐＨ値が好ましい）を提供する第二リン酸ナトリウム七水和物およびクエン酸緩衝剤を含んでなり得る。第二リン酸ナトリウム七水和物緩衝剤は、約１５～１６．４ｍＭの範囲で存在してよく、クエン酸緩衝剤は、約３．８～４．９ｍＭの範囲で存在してよい。例えば、本開示の組成物は、約１５．５ｍＭの第二リン酸ナトリウム七水和物および約４．５ｍＭのクエン酸一水和物を含んでなり得る。
本開示の組成物は、糖をさらに含んでなり得る。本開示の組成物は、スクロースをさらに含んでなり得る。スクロースは、本開示の組成物は、約５～２０％；約１０～１５％、約１１～１３％の範囲または約１２重量／容量％で存在し得る。
本開示の組成物は、ポリソルベート８０をさらに含んでなり得る。ポリソルベート８０は、約０．０１～０．１重量／容量％の範囲で存在し得る。例えば、ポリソルベート８０は、本開示の組成物中に約０．０２重量／容量％、または約０．０５重量／容量％で存在し得る。
本開示の組成物は、ＥＤＴＡをさらに含んでなり得る。ＥＤＴＡは、約０．０１～０．１ｍＭの範囲で存在し得る。例えば、ＥＤＴＡは、約０．０５ｍＭで存在し得る。
一つの実施態様では、本開示の組成物は、２０ｍＭの第二リン酸ナトリウム七水和物、１２重量／容量％のスクロースおよび０．０５重量／容量％のポリソルベート８０をさらに含んでなる。
別の実施態様では、本開示の組成物は、１５．５ｍＭの第二リン酸ナトリウム、３．９ｍＭのクエン酸一水和物、１２重量／容量％のスクロース、０．０２重量／容量％のポリソルベート８０および０．０５ｍＭのＥＤＴＡをさらに含んでなる。
本開示の組成物は、１６．１ｍＭの第二リン酸ナトリウム七水和物、３．９ｍＭのクエン酸一水和物、１２重量／容量％のスクロース、０．０２重量／容量％のポリソルベート８０および０．０５ｍＭのＥＤＴＡを含有する、ｐＨ６．２の水性液体処方物を含んでなり得る。
本開示の組成物は、１５．２ｍＭの第二リン酸ナトリウム七水和物、４．８ｍＭのクエン酸一水和物、１２重量／容量％のスクロース、０．０２重量／容量％のポリソルベート８０および０．０５ｍＭのＥＤＴＡを含有する、ｐＨ６．２の水性液体処方物を含んでなり得る。
本開示の組成物は、１５．８ｍＭの第二リン酸ナトリウム七水和物、４．２ｍＭのクエン酸一水和物、１２重量／容量％のスクロース、０．０２重量／容量％のポリソルベート８０および０．０５ｍＭのＥＤＴＡを含有する、ｐＨ６．４の水性液体処方物を含んでなり得る。
本開示の組成物は、１６．３ｍＭの第二リン酸ナトリウム七水和物、３．７ｍＭのクエン酸一水和物、１２重量／容量％のスクロース、０．０２重量／容量％のポリソルベート８０および０．０５ｍＭのＥＤＴＡを含有する、ｐＨ６．６の水性液体処方物を含んでなり得る。
本開示の組成物は、１５．５ｍＭの第二リン酸ナトリウム七水和物、４．５ｍＭのクエン酸一水和物、１２重量／容量％のスクロース、０．０２重量／容量％のポリソルベート８０および０．０５ｍＭのＥＤＴＡを含有する、ｐＨ６．３の水性液体処方物を含んでなり得る。重要なこととして、以下の実施例１のタンジェンシャル濾過および限外濾過交換工程は、１５．５ｍＭの第二リン酸ナトリウム七水和物、４．５ｍＭのクエンクエン酸(citric citric acid)一水和物、１２重量／容量％のスクロース、０．０２重量／容量％のポリソルベート８０、０．０５ｍＭのＥＤＴＡを含んでなるｐＨ６．３の本開示の組成物または他のこのような液体処方物などの本開示の組成物を作製するために調整することができる。
本開示の組成物は、モノクローナル抗体の精製調製物および緩衝剤を含んでなり得、この組成物は６．８～７．２のｐＨであり、緩衝剤は、ヒスチジン、リン酸塩、クエン酸、クエン酸塩またはその塩である。
本開示の組成物において、緩衝剤は、第二リン酸ナトリウム七水和物、リン酸塩、クエン酸およびクエン酸塩からなる群から選択される少なくとも１つであり得る。
本開示の組成物において、緩衝剤は、リン酸ナトリウム、リン酸カリウム、またはクエン酸ナトリウムであり得る。
本開示の組成物は、糖、炭水化物および／または塩を含んでなり得る。
本開示の組成物はまた、スクロースまたはトレハロースも含んでなり得る。
本開示の組成物はまた、モノクローナル抗体の精製調製物および緩衝剤も含んでなり得、この組成物は６．８～７．２のｐＨであり、緩衝剤はリン酸塩またはその塩である。
本開示の組成物はまた、２０ｍＭの第二リン酸ナトリウム七水和物、１２重量／容量％のスクロースおよび０．０５重量／容量％のポリソルベート８０の第１の処方物；ならびに１５．５ｍＭの第二リン酸ナトリウム七水和物、３．９ｍＭのクエン酸一水和物、１２重量／容量％のスクロース、０．０２重量／容量％のポリソルベート８０および０．０５ｍＭのＥＤＴＡの第２の処方物；ならびに２６ｍＭの第二リン酸ナトリウム七水和物、１５重量／容量％のスクロースおよび０．０６５重量／容量％のポリソルベート８０の第３の処方物から選択されるものを含んでなり得る。この組成物は、約６．８～約７．２、約６．１～約６．５または約６～約６．６のｐＨであり得る。
本明細書に記載の組成物は、任意の数の従来技術によって生産され得る。例えば、これらの組成物は、組換え発現系で発現され、それから精製され得る。一つの実施態様では、この組成物は、配列番号１および配列番号２を含んでなるポリペプチドの発現に好適な条件下で宿主細胞を培養する方法によって生産され、この組成物は、発現され、場合により精製され、場合により医薬組成物内に処方される。
いくつかの異なる発現系および精製計画が、これらの組成物を生産するために使用できる。一般に、宿主細胞は、抗体をコードする組換え発現ベクターで形質転換される。哺乳動物起源の真核細胞系統（例えば、ＣＨＯ、Ｐｅｒｃ６、ＨＥＫ２９３、ＨｅＬａ、ＮＳ０）を含む広範囲の宿主細胞が使用可能である。好適な宿主細胞としては、ＣＨＯ（例えば、ＣＨＯＫ１およびＣＨＯ－ＤＧ４４）などの哺乳動物細胞が含まれる。
宿主細胞は、単離された宿主細胞であり得る。宿主細胞は通常、多細胞生物（例えば、植物または動物）の一部ではない。宿主細胞は、非ヒト宿主細胞であり得る。
真核生物または哺乳動物細胞宿主とともに使用するために適当なクローニングおよび発現ベクターならびにクローニングの方法は当技術分野で公知である。
細胞は、抗体の発現を促進する条件化で培養することができる。例えば、細胞を培養するために生産バイオリアクターが使用される。生産バイオリアクター容積は、（ｉ）約２０，０００リットル、約１０，０００リットル；約５，０００リットル；約２，０００リットル；約１，０００リットル；または約５００リットル；または（ｉｉ）５００～２０，０００リットル；５００～１０，０００リットル；５００～５，０００リットル；１，０００～１０，０００リットル、または２，０００～１０，０００リットルであり得る。例えば、細胞は、生産バイオリアクターにて約６．７５～ｐＨ７．００のｐＨで培養することができる。あるいは、細胞は、生産バイオリアクターにて約１２～約１８日間培養することができる。あるいは、細胞は、生産バイオリアクターにてｐＨ約６．７５～ｐＨ７．００で、約１２～約１８日間培養することができる。この培養工程は、脱アミド化抗体変異体のレベルを制御する、例えば、脱アミド化抗体変異体のレベルを低減する助けとなり得る。
この組成物は、従来のタンパク質精製手順によって回収および精製され得る。例えば、この組成物は、培養培地から直接採取され得る。細胞培養培地の採取は、例えば、遠心分離および／または深層濾過によるなど、清澄化によるものであり得る。組成物の回収の後に、十分な純度を確保するために精製が行われる。
精製には１以上のクロマトグラフィー工程、例えば、１以上のクロマトグラフィー樹脂；および／または１以上の濾過工程が使用され得る。組成物を精製するために例えば、プロテインＡ、Ｇ、またはＬなどの樹脂を用いたアフィニティークロマトグラフィーが使用され得る。その代わりに、またはそれに加えて、組成物を精製するために陽イオン交換などのイオン交換樹脂が使用され得る。その代わりに、またはそれに加えて、組成物を精製するために疎水性相互作用クロマトグラフィー樹脂が使用され得る。あるいは、精製工程は、アフィニティークロマトグラフィー樹脂工程、その後の陽イオン交換樹脂工程、その後の疎水性相互作用クロマトグラフィー樹脂工程を含んでなる。
例えば、採取物をプロテインＡ樹脂と接触させて置く。組成物を含んでなる溶液は、プロテインＡ樹脂から溶出させ、ｐＨ３．３～３．７で１５～２４０分間処理することができる。このプロテインＡ樹脂工程は、凝集抗体変異体のレベルを制御する、例えば、凝集抗体変異体のレベルを低減する助けとなり得る。
組成物を含んでなる溶液は次に、深層濾過および／または二重層濾過によりさらに清澄化され得る。
その代わりに、またはそれに加えて、陰イオン交換樹脂が使用され得る。組成物を含んでなる溶液を、８．３～８．７のロードｐＨで陰イオン交換樹脂（例えば、Ｑ－ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（商標）Ｆａｓｔ Ｆｌｏｗ陰イオン交換クロマトグラフィー）と接触させて置くことができる。組成物を含んでなる溶液を陰イオン交換樹脂から溶出させ、９６時間以下の間保持され得る。この陰イオン交換樹脂工程は、脱アミド化抗体変異体のレベルを制御する、例えば、脱アミド化抗体変異体のレベルを低減する助けとなり得る。
場合により、硫酸グアニジンおよび／または硫酸アンモニウムを、組成物を含んでなる溶液に加え、１５～２４０分間保持してもよい。
その代わりに、またはそれに加えて、疎水性相互作用クロマトグラフィー樹脂が使用され得る。組成物を含んでなる溶液を１２～２７ｇタンパク質／Ｌ樹脂のロード比で疎水性相互作用クロマトグラフィー樹脂（例えば、フェニルＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（商標）ファストフロークロマトグラフィー）と接触させて置くことができる。例えば、組成物を含んでなる溶液を、約９～約１１の溶出勾配容量（ベッドボリューム；ＢＶ）を用いて溶出させてよい。疎水性相互作用クロマトグラフィー樹脂からの溶出の際には、約１７～約２３の溶出ピークカットストップ（最大ピーク高さに対する％）が使用され得る。この疎水性相互作用クロマトグラフィー樹脂工程は、凝集抗体変異体のレベルを制御する、例えば、凝集抗体変異体のレベルを低減する助けとなり得る。
組成物を含んでなる溶液は、次に、ウイルスを除去するために濾過され得る。組成物を含んでなる溶液は、次に、約７６ｇタンパク質／Ｌ～約８２ｇタンパク質／Ｌ、または約１００ｇタンパク質／Ｌの抗体濃度で処方され得る。組成物を含んでなる溶液は、容器に充填し、凍結させてよい。組成物を含んでなる溶液のアリコートを凍結乾燥してもよい。凍結乾燥物は、７５ｍｇ／Ｌのタンパク質、モノクローナル抗ＩＬ－５抗体および２０ｍＭの第二リン酸ナトリウム七水和物、１２重量／容量％のスクロースおよび０．０５重量／容量％のポリソルベート８０を含んでなる組成物を約６．８～約７．２のｐＨで生産するために水の添加によって再構成することができる。
要約すると、本開示には以下が含まれる：
１．配列番号５に示されるＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号６に示されるＣＤＲＨ２アミノ酸配列、および配列番号７に示されるＣＤＲＨ３アミノ酸配列を有する重鎖可変領域と；配列番号８に示されるＣＤＲＬ１アミノ酸配列、配列番号９に示されるＣＤＲＬ２アミノ酸配列、および配列番号１０に示されるＣＤＲＬ３アミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含んでなる抗原結合タンパク質。
１．配列番号５に示されるＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号６に示されるＣＤＲＨ２アミノ酸配列、および配列番号７に示されるＣＤＲＨ３アミノ酸配列を有する重鎖可変領域と；配列番号８に示されるＣＤＲＬ１アミノ酸配列、配列番号９に示されるＣＤＲＬ２アミノ酸配列、および配列番号１０に示されるＣＤＲＬ３アミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含んでなる抗原結合タンパク質。
２．前記重鎖可変領域が配列番号２１に示される重鎖ＦＲ４アミノ酸配列をさらに含んでなる、１の抗原結合タンパク質。
３．２５２番目にチロシン残基、２５４番目にトレオニン残基および２５６番目にグルタミン酸残基を有する重鎖Ｆｃドメインを含んでなり、前記重鎖Ｆｃドメインのアミノ末端が前記重鎖可変領域のカルボキシ末端に連結されている、２の抗原結合タンパク質。
４．配列番号３に示されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域配列と；配列番号４に示されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域配列とを含んでなる抗原結合タンパク質。
５．２５２番目にチロシン残基、２５４番目にトレオニン残基および２５６番目にグルタミン酸残基を有する重鎖Ｆｃドメインを含んでなり、前記重鎖Ｆｃドメインのアミノ末端が前記重鎖可変領域のカルボキシ末端に連結されている、４の抗原結合タンパク質。
６．重鎖と軽鎖を含んでなり、
ａ）前記重鎖が、配列番号５に示されるＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号６に示されるＣＤＲＨ２アミノ酸配列、および配列番号７に示されるＣＤＲＨ３アミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含んでなり；かつ
ｂ）前記軽鎖が、配列番号８に示されるＣＤＲＬ１アミノ酸配列、配列番号９に示されるＣＤＲＬ２アミノ酸配列、および配列番号１０に示されるＣＤＲＬ３アミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含んでなる、
抗体。
ａ）前記重鎖が、配列番号５に示されるＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号６に示されるＣＤＲＨ２アミノ酸配列、および配列番号７に示されるＣＤＲＨ３アミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含んでなり；かつ
ｂ）前記軽鎖が、配列番号８に示されるＣＤＲＬ１アミノ酸配列、配列番号９に示されるＣＤＲＬ２アミノ酸配列、および配列番号１０に示されるＣＤＲＬ３アミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含んでなる、
抗体。
７．前記重鎖可変領域が、配列番号２１に示される重鎖ＦＲ４アミノ酸配列をさらに含んでなる、６の抗体。
８．前記重鎖が、２５２番目にチロシン残基、２５４番目にトレオニン残基および２５６番目にグルタミン酸残基を有する重鎖Ｆｃドメインを含んでなる、７の抗体。
９．重鎖と軽鎖を含んでなり、
ａ）前記重鎖が、配列番号３に示されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域配列を含んでなり；かつ
ｂ）前記軽鎖が、配列番号４に示されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域配列を含んでなる、
抗体。
ａ）前記重鎖が、配列番号３に示されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域配列を含んでなり；かつ
ｂ）前記軽鎖が、配列番号４に示されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域配列を含んでなる、
抗体。
１０．前記重鎖が、２５２番目にチロシン残基、２５４番目にトレオニン残基および２５６番目にグルタミン酸残基を有する重鎖Ｆｃドメインを含んでなる、９の抗体。
１１．配列番号１に示されるアミノ酸配列を有する重鎖と配列番号２に示されるアミノ酸配列を有する軽鎖とを含んでなる抗体。
１２．配列番号３に示されるアミノ酸配列を含んでなるペプチド鎖。
１３．配列番号１に示されるアミノ酸配列を含んでなるペプチド鎖。
１４．１の重鎖可変領域をコードする核酸と１の抗原結合タンパク質の軽鎖可変領域をコードする核酸とを含んでなる組成物。
１５．２の重鎖可変領域をコードする核酸と２の軽鎖可変領域をコードする核酸とを含んでなる組成物。
１６．３の重鎖可変領域のカルボキシ末端に連結された重鎖Ｆｃドメインをコードする核酸と３の軽鎖可変領域をコードする核酸とを含んでなる組成物。
１７．６の重鎖可変領域をコードする核酸と６の抗原結合タンパク質の軽鎖可変領域をコードする核酸とを含んでなる組成物。
１８．７の重鎖可変領域をコードする核酸と７の軽鎖可変領域をコードする核酸とを含んでなる組成物。
１９．８の重鎖可変領域のカルボキシ末端に連結された重鎖Ｆｃドメインをコードする核酸と８の軽鎖可変領域をコードする核酸とを含んでなる組成物。
２０．配列番号３に示されるアミノ酸配列をコードする核酸と配列番号４に示されるアミノ酸配列をコードする核酸とを含んでなる組成物。
２１．配列番号１に示されるアミノ酸配列をコードする核酸と配列番号２に示されるアミノ酸配列をコードする核酸とを含んでなる組成物。
２２．配列番号３に示されるアミノ酸配列をコードする核酸を含んでなる組成物。
２３．配列番号１に示されるアミノ酸配列をコードする核酸を含んでなる組成物。
２４．配列番号１５に示される配列を有する核酸と配列番号１６に示される配列を有する核酸とを含んでなる組成物。
２５．配列番号１７に示される配列を有する核酸と配列番号１８に示されるアミノ酸配列を有する核酸とを含んでなる組成物。
２６．配列番号１３に示される配列を有する核酸と配列番号１４に示されるアミノ酸配列を有する核酸とを含んでなる組成物。
２７．配列番号１５に示される配列を有する核酸を含んでなる組成物。
２８．配列番号１７に示される配列を有する核酸を含んでなる組成物。
２９．配列番号１３に示される配列を有する核酸を含んでなる組成物。
３０．１の重鎖可変領域をコードする核酸を含んでなる組成物。
３１．２の重鎖可変領域をコードする核酸を含んでなる組成物。
３２．３のような重鎖可変領域のカルボキシ末端に連結された重鎖Ｆｃドメインをコードする核酸を含んでなる組成物。
３３．１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１または３２の組成物を含んでなる発現ベクター。
３４．１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１または３２の組成物を含んでなる発現ベクターを含んでなる組換え宿主細胞。
３５．配列番号３に示されるアミノ酸配列を含んでなるペプチド鎖の生産のための方法であって、配列番号３に示されるアミノ酸配列をコードする核酸を含んでなる組換え宿主細胞を培養する工程；および前記ペプチド鎖を回収する工程を含んでなる、方法。
３６．前記核酸が配列番号１５に示される配列を含んでなる、３５の方法。
３７．前記核酸が配列番号１３に示される配列を含んでなる、３５の方法。
３８．前記核酸が配列番号１７に示される配列を含んでなる、３５の方法。
３９．抗原結合タンパク質の生産のための方法であって、
ａ）１４、１５または１６の組成物を含んでなる発現ベクターを含んでなる組換え宿主細胞を培養する工程；および
ｂ）前記抗原結合タンパク質を回収する工程
を含んでなり；
それにより、前記抗原結合タンパク質が生産される、方法。
ａ）１４、１５または１６の組成物を含んでなる発現ベクターを含んでなる組換え宿主細胞を培養する工程；および
ｂ）前記抗原結合タンパク質を回収する工程
を含んでなり；
それにより、前記抗原結合タンパク質が生産される、方法。
４０．３９に方法により生産される抗原結合タンパク質。
４１．抗体の生産のための方法であって、
ａ）１７、１８または１９の組成物を含んでなる発現ベクターを含んでなる組換え宿主細胞を培養する工程；および
ｂ）前記抗体を回収する工程
を含んでなり；
それにより、前記抗体が生産される、方法。
ａ）１７、１８または１９の組成物を含んでなる発現ベクターを含んでなる組換え宿主細胞を培養する工程；および
ｂ）前記抗体を回収する工程
を含んでなり；
それにより、前記抗体が生産される、方法。
４２．４１の方法により生産される抗体。
４３．抗体の生産のための方法であって、
ａ）２０または２２の組成物を含んでなる発現ベクターを含んでなる組換え宿主細胞を培養する工程；および
ｂ）前記抗体を回収する工程
を含んでなり；
それにより、前記抗体が生産される、方法。
ａ）２０または２２の組成物を含んでなる発現ベクターを含んでなる組換え宿主細胞を培養する工程；および
ｂ）前記抗体を回収する工程
を含んでなり；
それにより、前記抗体が生産される、方法。
４４．４３の方法により生産される抗体。
４５．抗体の生産のための方法であって、
ａ）２４、２６または２７の組成物を含んでなる発現ベクターを含んでなる組換え宿主細胞を培養する工程；および
ｂ）前記抗体を回収する工程
を含んでなり；
それにより、前記抗体が生産される、方法。
ａ）２４、２６または２７の組成物を含んでなる発現ベクターを含んでなる組換え宿主細胞を培養する工程；および
ｂ）前記抗体を回収する工程
を含んでなり；
それにより、前記抗体が生産される、方法。
４６．４５の方法により生産される抗体。
４７．抗体の生産のための方法であって、
ａ）配列番号１７に示される配列を有する核酸と配列番号１８に示される配列を有する核酸とを含んでなる発現ベクターを含んでなる組換え宿主細胞を培養する工程；および
ｂ）前記抗体を回収する工程
を含んでなり；
それにより、前記抗体が生産される、方法。
ａ）配列番号１７に示される配列を有する核酸と配列番号１８に示される配列を有する核酸とを含んでなる発現ベクターを含んでなる組換え宿主細胞を培養する工程；および
ｂ）前記抗体を回収する工程
を含んでなり；
それにより、前記抗体が生産される、方法。
４８．４７の方法により生産される抗体。
４９．
ａ）配列番号５に示されるＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号６に示されるＣＤＲＨ２アミノ酸配列、および配列番号７に示されるＣＤＲＨ３アミノ酸配列を有する重鎖可変領域と；配列番号８に示されるＣＤＲＬ１アミノ酸配列、配列番号９に示されるＣＤＲＬ２アミノ酸配列、および配列番号１０に示されるＣＤＲＬ３アミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含んでなる抗原結合タンパク質；ならびに
ｂ）薬学的に許容可能な担体
を含んでなる医薬組成物。
ａ）配列番号５に示されるＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号６に示されるＣＤＲＨ２アミノ酸配列、および配列番号７に示されるＣＤＲＨ３アミノ酸配列を有する重鎖可変領域と；配列番号８に示されるＣＤＲＬ１アミノ酸配列、配列番号９に示されるＣＤＲＬ２アミノ酸配列、および配列番号１０に示されるＣＤＲＬ３アミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含んでなる抗原結合タンパク質；ならびに
ｂ）薬学的に許容可能な担体
を含んでなる医薬組成物。
５０．前記重鎖可変領域が、配列番号２１に示される重鎖ＦＲ４アミノ酸配列をさらに含んでなる、４９の医薬組成物。
５１．２５２番目にチロシン残基、２５４番目にトレオニン残基および２５６番目にグルタミン酸残基を有する重鎖Ｆｃドメインを含んでなり、前記重鎖Ｆｃドメインのアミノ末端が前記重鎖可変領域のカルボキシ末端に連結されている、５０の医薬組成物。
５２．前記抗原結合タンパク質が約７５ｍｇ／ｍｌ～約１５０ｍｇ／ｍｌの濃度である、５１の医薬組成物。
５３．前記薬学的に有効な担体が、約４０ｍＭのヒスチジン、約１８０ｍＭのトレハロース、約１００ｍＭのアルギニン、約８ｍＭのメチオニン、約０．０２重量／容量％のポリソルベート８０および約０．０５ｍＭのＥＤＴＡを含有する、約ｐＨ５．５～約ｐＨ６．０の水性液体処方物を含んでなる、４９、５０、５１または５２の医薬組成物。
５４．ｐＨが約６．０であり、かつ、前記抗原結合タンパク質が約１５０ｍｇ／ｍｌの濃度である、５３の医薬組成物。
５５．
ａ）配列番号５に示されるＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号６に示されるＣＤＲＨ２アミノ酸配列、および配列番号７に示されるＣＤＲＨ３アミノ酸配列を有する重鎖可変領域と；配列番号８に示されるＣＤＲＬ１アミノ酸配列、配列番号９に示されるＣＤＲＬ２アミノ酸配列、および配列番号１０に示されるＣＤＲＬ３アミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含んでなる抗体；ならびに
ｂ）薬学的に許容可能な担体
を含んでなる医薬組成物。
ａ）配列番号５に示されるＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号６に示されるＣＤＲＨ２アミノ酸配列、および配列番号７に示されるＣＤＲＨ３アミノ酸配列を有する重鎖可変領域と；配列番号８に示されるＣＤＲＬ１アミノ酸配列、配列番号９に示されるＣＤＲＬ２アミノ酸配列、および配列番号１０に示されるＣＤＲＬ３アミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含んでなる抗体；ならびに
ｂ）薬学的に許容可能な担体
を含んでなる医薬組成物。
５６．前記重鎖可変領域が、配列番号２１に示される重鎖ＦＲ４アミノ酸配列をさらに含んでなる、５５の医薬組成物。
５７．２５２番目にチロシン残基、２５４番目にトレオニン残基および２５６番目にグルタミン酸残基を有する重鎖Ｆｃドメインを含んでなり、前記重鎖Ｆｃドメインのアミノ末端が前記重鎖可変領域のカルボキシ末端に連結されている、５６の医薬組成物。
５８．前記抗体が約７５ｍｇ／ｍｌ～約１５０ｍｇ／ｍｌの濃度である、５７の医薬組成物。
５９．前記薬学的に有効な担体が、約４０ｍＭのヒスチジン、約１８０ｍＭのトレハロース、約１００ｍＭのアルギニン、約８ｍＭのメチオニン、約０．０２重量／容量％のポリソルベート８０および約０．０５ｍＭのＥＤＴＡを含有する、約ｐＨ５．５～約ｐＨ６．０の水性液体処方物を含んでなる、５５、５６、５７または５８の医薬組成物。
６０．ｐＨが約６．０であり、かつ、前記抗体が約１５０ｍｇ／ｍｌの濃度である、５９の医薬組成物。
６１．
ａ）重鎖と軽鎖を含んでなり、前記重鎖が、配列番号３に示されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域配列を含んでなり；かつ前記軽鎖が、配列番号４に示されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域配列を含んでなる抗体；および
ｂ）薬学的に許容可能な担体
を含んでなる医薬組成物。
ａ）重鎖と軽鎖を含んでなり、前記重鎖が、配列番号３に示されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域配列を含んでなり；かつ前記軽鎖が、配列番号４に示されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域配列を含んでなる抗体；および
ｂ）薬学的に許容可能な担体
を含んでなる医薬組成物。
６２．２５２番目にチロシン残基、２５４番目にトレオニン残基および２５６番目にグルタミン酸残基を有する重鎖Ｆｃドメインを含んでなり、前記重鎖Ｆｃドメインのアミノ末端が前記重鎖可変領域のカルボキシ末端に連結されている、６１の医薬組成物。
６３．前記抗体が約７５ｍｇ／ｍｌ～約１５０ｍｇ／ｍｌの濃度である、６２の医薬組成物。
６４．前記薬学的に有効な担体が、約４０ｍＭのヒスチジン、約１８０ｍＭのトレハロース、約１００ｍＭのアルギニン、約８ｍＭのメチオニン、約０．０２重量／容量％のポリソルベート８０および約０．０５ｍＭのＥＤＴＡを含有する、約ｐＨ５．５～約ｐＨ６．０の水性液体処方物を含んでなる、６１、６２または６３の医薬組成物。
６５．ｐＨが約６．０であり、かつ、前記抗体が約１５０ｍｇ／ｍｌの濃度である、６４の医薬組成物。
６６．
ａ）配列番号１に示されるアミノ酸配列を有する重鎖と配列番号２に示されるアミノ酸配列を有する軽鎖とを含んでなる抗体；および
ｂ）薬学的に許容可能な担体
を含んでなる医薬組成物。
ａ）配列番号１に示されるアミノ酸配列を有する重鎖と配列番号２に示されるアミノ酸配列を有する軽鎖とを含んでなる抗体；および
ｂ）薬学的に許容可能な担体
を含んでなる医薬組成物。
６７．前記抗原結合タンパク質が約７５ｍｇ／ｍｌ～約１５０ｍｇ／ｍｌの濃度である、６６の医薬組成物。
６８．前記薬学的に有効な担体が、約４０ｍＭのヒスチジン、約１８０ｍＭのトレハロース、約１００ｍＭのアルギニン、約８ｍＭのメチオニン、約０．０２重量／容量％のポリソルベート８０および約０．０５ｍＭのＥＤＴＡを含有する、約ｐＨ５．５～約ｐＨ６．０の水性液体処方物を含んでなる、６７の医薬組成物。
６９．ｐＨが約６．０であり、かつ、前記抗原結合タンパク質が約１５０ｍｇ／ｍｌの濃度である、６８の医薬組成物。
７０．対象において疾患を処置する方法であって、
ａ）喘息、軽症喘息、中等症喘息、重症喘息、軽症好酸球性喘息、中等症好酸球性喘息、重症好酸球性喘息、管理不良好酸球性喘息、好酸球性喘息、準好酸球性喘息、慢性閉塞性肺疾患、好酸球性多発血管炎性肉芽腫症、好酸球増加症候群、鼻ポリープ、水疱性類天疱瘡、好酸球性食道炎、アトピー性皮膚炎、中等症アトピー性皮膚炎および重症アトピー性皮膚炎からなる群から選択される疾患を有する対象を特定する工程；ならびに
ｂ）前記対象に１、２、３、４、５または４０による抗原結合タンパク質の治療上有効な量を投与する工程
を含んでなり；
それにより、前記対象における疾患が処置される、方法。
ａ）喘息、軽症喘息、中等症喘息、重症喘息、軽症好酸球性喘息、中等症好酸球性喘息、重症好酸球性喘息、管理不良好酸球性喘息、好酸球性喘息、準好酸球性喘息、慢性閉塞性肺疾患、好酸球性多発血管炎性肉芽腫症、好酸球増加症候群、鼻ポリープ、水疱性類天疱瘡、好酸球性食道炎、アトピー性皮膚炎、中等症アトピー性皮膚炎および重症アトピー性皮膚炎からなる群から選択される疾患を有する対象を特定する工程；ならびに
ｂ）前記対象に１、２、３、４、５または４０による抗原結合タンパク質の治療上有効な量を投与する工程
を含んでなり；
それにより、前記対象における疾患が処置される、方法。
７１．抗原結合タンパク質の量が約２ｍｇ～約６００ｍｇである、７０の方法。
７２．前記抗原結合タンパク質が３か月毎に１回または６か月毎に１回投与される、７１の方法。
７３．前記対象が２００細胞／μＬ以上および３５０細胞／μＬ以上からなる群から選択される血中好酸球の絶対数を有する、７０、７１または７２の方法。
７４．対象において疾患を処置する方法であって、
ａ）喘息、軽症喘息、中等症喘息、重症喘息、軽症好酸球性喘息、中等症好酸球性喘息、重症好酸球性喘息、管理不良好酸球性喘息、好酸球性喘息、準好酸球性喘息、慢性閉塞性肺疾患、好酸球性多発血管炎性肉芽腫症、好酸球増加症候群、鼻ポリープ、水疱性類天疱瘡、好酸球性食道炎、アトピー性皮膚炎、中等症アトピー性皮膚炎および重症アトピー性皮膚炎からなる群から選択される疾患を有する対象を特定する工程；ならびに
ｂ）前記対象に６、７、８、９、１０、１１、４２、４４、４６および４８による抗体の治療上有効な量を投与する工程
を含んでなり；
それにより、前記対象における疾患が処置される、方法。
ａ）喘息、軽症喘息、中等症喘息、重症喘息、軽症好酸球性喘息、中等症好酸球性喘息、重症好酸球性喘息、管理不良好酸球性喘息、好酸球性喘息、準好酸球性喘息、慢性閉塞性肺疾患、好酸球性多発血管炎性肉芽腫症、好酸球増加症候群、鼻ポリープ、水疱性類天疱瘡、好酸球性食道炎、アトピー性皮膚炎、中等症アトピー性皮膚炎および重症アトピー性皮膚炎からなる群から選択される疾患を有する対象を特定する工程；ならびに
ｂ）前記対象に６、７、８、９、１０、１１、４２、４４、４６および４８による抗体の治療上有効な量を投与する工程
を含んでなり；
それにより、前記対象における疾患が処置される、方法。
７５．抗体の量が約２ｍｇ～約６００ｍｇである、７４の方法。
７６．前記抗体が３か月毎に１回または６か月毎に１回投与される、７５の方法。
７７．前記対象が２００細胞／μＬ以上および３５０細胞／μＬ以上からなる群から選択される血中好酸球の絶対数を有する、７４、７５または７６の方法。
７８．対象において疾患を処置する方法であって、
ａ）喘息、軽症喘息、中等症喘息、重症喘息、軽症好酸球性喘息、中等症好酸球性喘息、重症好酸球性喘息、管理不良好酸球性喘息、好酸球性喘息、準好酸球性喘息、慢性閉塞性肺疾患、好酸球性多発血管炎性肉芽腫症、好酸球増加症候群、鼻ポリープ、水疱性類天疱瘡、好酸球性食道炎、アトピー性皮膚炎、中等症アトピー性皮膚炎および重症アトピー性皮膚炎からなる群から選択される疾患を有する対象を特定する工程；ならびに
ｂ）前記対象に４９、５０、５１、５２、５３または５４による組成物の治療上有効な量を投与する工程
を含んでなり；
それにより、前記対象における疾患が処置される、方法。
ａ）喘息、軽症喘息、中等症喘息、重症喘息、軽症好酸球性喘息、中等症好酸球性喘息、重症好酸球性喘息、管理不良好酸球性喘息、好酸球性喘息、準好酸球性喘息、慢性閉塞性肺疾患、好酸球性多発血管炎性肉芽腫症、好酸球増加症候群、鼻ポリープ、水疱性類天疱瘡、好酸球性食道炎、アトピー性皮膚炎、中等症アトピー性皮膚炎および重症アトピー性皮膚炎からなる群から選択される疾患を有する対象を特定する工程；ならびに
ｂ）前記対象に４９、５０、５１、５２、５３または５４による組成物の治療上有効な量を投与する工程
を含んでなり；
それにより、前記対象における疾患が処置される、方法。
７９．前記組成物の量が約２ｍｇ～約６００ｍｇの抗原結合タンパク質用量を提供する、７８の方法。
８０．前記組成物が３か月毎に１回または６か月毎に１回投与される、７９の方法。
８１．前記対象が２００細胞／μＬ以上および３５０細胞／μＬ以上からなる群から選択される血中好酸球の絶対数を有する、７８、７９または８０の方法。
８２．対象において疾患を処置する方法であって、
ａ）喘息、軽症喘息、中等症喘息、重症喘息、軽症好酸球性喘息、中等症好酸球性喘息、重症好酸球性喘息、管理不良好酸球性喘息、好酸球性喘息、準好酸球性喘息、慢性閉塞性肺疾患、好酸球性多発血管炎性肉芽腫症、好酸球増加症候群、鼻ポリープ、水疱性類天疱瘡、好酸球性食道炎、アトピー性皮膚炎、中等症アトピー性皮膚炎および重症アトピー性皮膚炎からなる群から選択される疾患を有する対象を特定する工程；ならびに
ｂ）前記対象に、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６５、６５、６６、６７、６８または６９による組成物の治療上有効な量を投与する工程
を含んでなり；
それにより、前記対象における疾患が処置される、方法。
ａ）喘息、軽症喘息、中等症喘息、重症喘息、軽症好酸球性喘息、中等症好酸球性喘息、重症好酸球性喘息、管理不良好酸球性喘息、好酸球性喘息、準好酸球性喘息、慢性閉塞性肺疾患、好酸球性多発血管炎性肉芽腫症、好酸球増加症候群、鼻ポリープ、水疱性類天疱瘡、好酸球性食道炎、アトピー性皮膚炎、中等症アトピー性皮膚炎および重症アトピー性皮膚炎からなる群から選択される疾患を有する対象を特定する工程；ならびに
ｂ）前記対象に、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６５、６５、６６、６７、６８または６９による組成物の治療上有効な量を投与する工程
を含んでなり；
それにより、前記対象における疾患が処置される、方法。
８３．前記組成物の量が約２ｍｇ～約６００ｍｇの抗原結合タンパク質用量を提供する、８２の方法。
８４．前記抗体が３か月毎に１回または６か月毎に１回投与される、８３の方法。
８５．前記対象が２００細胞／μＬ以上および３５０細胞／μＬ以上からなる群から選択される血中好酸球の絶対数を有する、８２、８３または８４の方法。
８６．対象において軽症～中等症喘息を処置する方法であって、
ａ）軽症喘息～中等症喘息診断を有する対象を特定する工程；ならびに
ｂ）前記対象に、配列番号５に示されるＣＤＲアミノ酸配列、配列番号６に示されるＣＤＲアミノ酸配列、および配列番号７に示されるＣＤＲアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と；配列番号８に示されるＣＤＲアミノ酸配列、配列番号９に示されるＣＤＲアミノ酸配列、および配列番号１０に示されるＣＤＲアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含んでなる抗体の治療上有効な量を投与する工程
を含んでなり；
それにより、前記対象における軽症～中等症喘息が処置される、方法。
ａ）軽症喘息～中等症喘息診断を有する対象を特定する工程；ならびに
ｂ）前記対象に、配列番号５に示されるＣＤＲアミノ酸配列、配列番号６に示されるＣＤＲアミノ酸配列、および配列番号７に示されるＣＤＲアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と；配列番号８に示されるＣＤＲアミノ酸配列、配列番号９に示されるＣＤＲアミノ酸配列、および配列番号１０に示されるＣＤＲアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含んでなる抗体の治療上有効な量を投与する工程
を含んでなり；
それにより、前記対象における軽症～中等症喘息が処置される、方法。
８７．前記重鎖可変領域が配列番号２１に示される重鎖ＦＲ４アミノ酸配列をさらに含んでなる、８６の方法。
８８．前記抗体が、２５２番目にチロシン残基、２５４番目にトレオニン残基および２５６番目にグルタミン酸残基を有する重鎖Ｆｃドメインを含んでなり、前記重鎖Ｆｃドメインのアミノ末端が前記重鎖可変領域のカルボキシ末端に連結されている、８７の方法。
８９．前記抗体が配列番号３に示されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域配列と配列番号４に示されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域配列とを含んでなる、８８の方法。
９０．前記抗体用量が約２ｍｇ～約６００ｍｇである、８９の方法。
９１．前記抗体が３か月毎に１回または６か月毎に１回投与される、９０の方法。
９２．前記抗体が皮下投与される、９０の方法。
９３．前記対象が２００細胞／μＬ以上および３５０細胞／μＬ以上からなる群から選択される血中好酸球の絶対数を有する、８６、８７、８８、８９、９０、９１または９２の方法。
９４．対象において軽症～中等症喘息を処置する方法であって、
ａ）軽症喘息～中等症喘息診断を有する対象を特定する工程；および
ｂ）前記対象に、配列番号１に示されるアミノ酸配列を有する重鎖と配列番号２に示されるアミノ酸配列を有する軽鎖とを含んでなる抗体の治療上有効な量を投与する工程
を含んでなり；
それにより、前記対象における軽症～中等症喘息が処置される、方法。
ａ）軽症喘息～中等症喘息診断を有する対象を特定する工程；および
ｂ）前記対象に、配列番号１に示されるアミノ酸配列を有する重鎖と配列番号２に示されるアミノ酸配列を有する軽鎖とを含んでなる抗体の治療上有効な量を投与する工程
を含んでなり；
それにより、前記対象における軽症～中等症喘息が処置される、方法。
９５．前記抗体用量が約２ｍｇ～約６００ｍｇである、９４の方法。
９６．前記抗体が３か月毎に１回または６か月毎に１回投与される、９５の方法。
９７．前記抗体が皮下投与される、９６の方法。
９８．前記対象が２００細胞／μＬ以上および３５０細胞／μＬ以上からなる群から選択される血中好酸球の絶対数を有する、９４、９５、９６または９７の方法。
９９．対象において軽症～中等症喘息を処置する方法であって、
ａ）軽症喘息～中等症喘息診断を有する対象を特定する工程；ならびに
ｂ）前記対象に、配列番号１に示されるアミノ酸配列を有する重鎖と配列番号２に示されるアミノ酸配列を有する軽鎖とを含んでなる抗体および薬学的に有効な担体を含んでなる医薬組成物の治療上有効な量を投与する工程
を含んでなり；
それにより、前記対象における軽症～中等症喘息が処置される、方法。
ａ）軽症喘息～中等症喘息診断を有する対象を特定する工程；ならびに
ｂ）前記対象に、配列番号１に示されるアミノ酸配列を有する重鎖と配列番号２に示されるアミノ酸配列を有する軽鎖とを含んでなる抗体および薬学的に有効な担体を含んでなる医薬組成物の治療上有効な量を投与する工程
を含んでなり；
それにより、前記対象における軽症～中等症喘息が処置される、方法。
１００．前記薬学的に有効な担体が、約４０ｍＭのヒスチジン、約１８０ｍＭのトレハロース、約１００ｍＭのアルギニン、約８ｍＭのメチオニン、約０．０２重量／容量％のポリソルベート８０および約０．０５ｍＭのＥＤＴＡを含有する、約ｐＨ５．５～約ｐＨ６．０の水性液体処方物を含んでなる、９２の方法。
１０１．前記抗体用量が約２ｍｇ～約６００ｍｇである、１００の方法。
１０２．前記医薬組成物が３か月毎に１回または６か月毎に１回投与される、１０１の方法。
１０３．前記医薬組成物が皮下投与される、１０２の方法。
１０４．前記対象が２００細胞／μＬ以上および３５０細胞／μＬ以上からなる群から選択される血中好酸球の絶対数を有する、９９、１００、１０１、１０２または１０３の方法。
１０５．対象において重症喘息を処置する方法であって、
ａ）重症喘息診断を有する対象を特定する工程；ならびに
ｂ）前記対象に、配列番号５に示されるＣＤＲアミノ酸配列、配列番号６に示されるＣＤＲアミノ酸配列、および配列番号７に示されるＣＤＲアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と；配列番号８に示されるＣＤＲアミノ酸配列、配列番号９に示されるＣＤＲアミノ酸配列、および配列番号１０に示されるＣＤＲアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含んでなる抗体の治療上有効な量を投与する工程
を含んでなり；
それにより、前記対象における重症喘息が処置される、方法。
ａ）重症喘息診断を有する対象を特定する工程；ならびに
ｂ）前記対象に、配列番号５に示されるＣＤＲアミノ酸配列、配列番号６に示されるＣＤＲアミノ酸配列、および配列番号７に示されるＣＤＲアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と；配列番号８に示されるＣＤＲアミノ酸配列、配列番号９に示されるＣＤＲアミノ酸配列、および配列番号１０に示されるＣＤＲアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含んでなる抗体の治療上有効な量を投与する工程
を含んでなり；
それにより、前記対象における重症喘息が処置される、方法。
１０６．前記重鎖可変領域が配列番号２１に示される重鎖ＦＲ４アミノ酸配列をさらに含んでなる、１０５の方法。
１０７．前記抗体が、２５２番目にチロシン残基、２５４番目にトレオニン残基および２５６番目にグルタミン酸残基を有する重鎖Ｆｃドメインを含んでなり、前記重鎖Ｆｃドメインのアミノ末端が前記重鎖可変領域のカルボキシ末端に連結されている、１０６の方法。
１０８．前記抗体が、配列番号３に示されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域配列と；配列番号４に示されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域配列とを含んでなる、１０７の方法。
１０９．前記抗体用量が約２ｍｇ～約６００ｍｇである、１０８の方法。
１１０．前記抗体が３か月毎に１回または６か月毎に１回投与される、１０９の方法。
１１１．前記抗体が皮下投与される、１１０の方法。
１１２．前記対象が２００細胞／μＬ以上および３５０細胞／μＬ以上からなる群から選択される血中好酸球の絶対数を有する、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０または１１１の方法。
１１３．対象において重症喘息を処置する方法であって、
ａ）重症喘息診断を有する対象を特定する工程；および
ｂ）前記対象に、配列番号１に示されるアミノ酸配列を有する重鎖と配列番号１に示されるアミノ酸配列を有する軽鎖とを含んでなる抗体の治療上有効な量を投与する工程
を含んでなり；
それにより、前記対象における重症喘息が処置される、方法。
ａ）重症喘息診断を有する対象を特定する工程；および
ｂ）前記対象に、配列番号１に示されるアミノ酸配列を有する重鎖と配列番号１に示されるアミノ酸配列を有する軽鎖とを含んでなる抗体の治療上有効な量を投与する工程
を含んでなり；
それにより、前記対象における重症喘息が処置される、方法。
１１４．前記抗体用量が約２ｍｇ～約６００ｍｇである、１１３の方法。
１１５．前記抗体が３か月毎に１回または６か月毎に１回投与される、１１４の方法。
１１６．前記抗体が皮下投与される、１１５の方法。
１１７．前記対象が２００細胞／μＬ以上および３５０細胞／μＬ以上からなる群から選択される血中好酸球の絶対数を有する、１１３、１１４、１１５または１１６の方法。
１１８．対象において重症喘息を処置する方法であって、
ａ）重症喘息診断を有する対象を特定する工程；ならびに
ｂ）前記対象に、配列番号１に示されるアミノ酸配列を有する重鎖と配列番号１に示されるアミノ酸配列を有する軽鎖とを含んでなる抗体および薬学的に有効な担体を含んでなる医薬組成物の治療上有効な量を投与する工程
を含んでなり；
それにより、前記対象における重症喘息が処置される、方法。
ａ）重症喘息診断を有する対象を特定する工程；ならびに
ｂ）前記対象に、配列番号１に示されるアミノ酸配列を有する重鎖と配列番号１に示されるアミノ酸配列を有する軽鎖とを含んでなる抗体および薬学的に有効な担体を含んでなる医薬組成物の治療上有効な量を投与する工程
を含んでなり；
それにより、前記対象における重症喘息が処置される、方法。
１１９．前記薬学的に有効な担体が、約４０ｍＭのヒスチジン、約１８０ｍＭのトレハロース、約１００ｍＭのアルギニン、約８ｍＭのメチオニン、約０．０２重量／容量％のポリソルベート８０および約０．０５ｍＭのＥＤＴＡを含有する、約ｐＨ５．５～約ｐＨ６．０の水性液体処方物を含んでなる、１１８の方法。
１２０．前記抗体用量が約２ｍｇ～約６００ｍｇである、１１９の方法。
１２１．前記医薬組成物が３か月毎に１回または６か月毎に１回投与される、１２０の方法。
１２２．前記医薬組成物が皮下投与される、１２１の方法。
１２３．前記対象が２００細胞／μＬ以上および３５０細胞／μＬ以上からなる群から選択される血中好酸球の絶対数を有する、１１８、１１９、１２０、１２１または１２２の方法。
１２４．必要とする対象において中等症～重症アトピー性皮膚炎を処置する方法であって、
ａ）
ｉ）ＨａｎｉｆｉｎおよびＲａｊｋａのＥｉｃｈｅｎｆｉｅｌｄ改訂診断基準によるアトピー性皮膚炎診断；
ｉｉ）処置前約２年以上のアトピー性皮膚炎の事前診断；
ｉｉｉ）医療専門家の全般的評価スコアが約３以上；
ｉｖ）アトピー性皮膚炎関与が身体の表面積の約１０％以上；
ｖ）湿疹面積および重症度指数スコアが１６以上；
ｖｉ）血中好酸球の絶対数が１５０細胞／μＬ以上、２００細胞／μＬ以上、および３５０細胞／μＬ以上(an absolute blood eosinophil count of of greater than or equal to 150 cells per μL of greater than or equal to 200 cells per μL and greater than or equal to 350 cells per μL)；ならびに
ｖｉｉ）１）アトピー性皮膚炎の外用薬に対する６か月以上の応答不良；２）アトピー性皮膚炎に対する外用薬の免疫寛容不良；３）アトピー性皮膚炎の外用薬からの副作用；および４）アトピー性皮膚炎の非薬理学的処置に対する応答不良からなる群から選択される、処置前の少なくとも１つの状態からなる群から選択される少なくとも１つを有する対象を特定する工程；ならびに
ｂ）前記対象に、配列番号５に示されるＣＤＲアミノ酸配列、配列番号６に示されるＣＤＲアミノ酸配列、および配列番号７に示されるＣＤＲアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と；配列番号８に示されるＣＤＲアミノ酸配列、配列番号９に示されるＣＤＲアミノ酸配列、および配列番号１０に示されるＣＤＲアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含んでなる抗体の治療上有効な量を投与する工程を含んでなり；それにより、前記対象におけるアトピー性皮膚炎が処置される方法。
ａ）
ｉ）ＨａｎｉｆｉｎおよびＲａｊｋａのＥｉｃｈｅｎｆｉｅｌｄ改訂診断基準によるアトピー性皮膚炎診断；
ｉｉ）処置前約２年以上のアトピー性皮膚炎の事前診断；
ｉｉｉ）医療専門家の全般的評価スコアが約３以上；
ｉｖ）アトピー性皮膚炎関与が身体の表面積の約１０％以上；
ｖ）湿疹面積および重症度指数スコアが１６以上；
ｖｉ）血中好酸球の絶対数が１５０細胞／μＬ以上、２００細胞／μＬ以上、および３５０細胞／μＬ以上(an absolute blood eosinophil count of of greater than or equal to 150 cells per μL of greater than or equal to 200 cells per μL and greater than or equal to 350 cells per μL)；ならびに
ｖｉｉ）１）アトピー性皮膚炎の外用薬に対する６か月以上の応答不良；２）アトピー性皮膚炎に対する外用薬の免疫寛容不良；３）アトピー性皮膚炎の外用薬からの副作用；および４）アトピー性皮膚炎の非薬理学的処置に対する応答不良からなる群から選択される、処置前の少なくとも１つの状態からなる群から選択される少なくとも１つを有する対象を特定する工程；ならびに
ｂ）前記対象に、配列番号５に示されるＣＤＲアミノ酸配列、配列番号６に示されるＣＤＲアミノ酸配列、および配列番号７に示されるＣＤＲアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と；配列番号８に示されるＣＤＲアミノ酸配列、配列番号９に示されるＣＤＲアミノ酸配列、および配列番号１０に示されるＣＤＲアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含んでなる抗体の治療上有効な量を投与する工程を含んでなり；それにより、前記対象におけるアトピー性皮膚炎が処置される方法。
１２５．前記重鎖可変領域が配列番号２１に示される重鎖ＦＲ４アミノ酸配列をさらに含んでなる、１２４の方法。
１２６．前記抗体が、２５２番目にチロシン残基、２５４番目にトレオニン残基および２５６番目にグルタミン酸残基を有する重鎖Ｆｃドメインを含んでなり、前記重鎖Ｆｃドメインのアミノ末端が、前記重鎖可変領域のカルボキシ末端に連結されている、１２５の方法。
１２７．前記抗体が配列番号３に示されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域配列と；配列番号４に示されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域配列とを含んでなる、１２６の方法。
１２８．前記抗体用量が約２ｍｇ～約６００ｍｇである、１２７の方法。
１２９．前記医薬組成物が３か月毎に１回または６か月毎に１回投与される、１２８の方法。
１３０．前記抗体が皮下投与される、１２８の方法。
１３１．前記抗体が静脈内投与される、１２８の方法。
１３２．必要とする対象において中等症～重症アトピー性皮膚炎を処置する方法であって、
ａ）
ｉ）ＨａｎｉｆｉｎおよびＲａｊｋａのＥｉｃｈｅｎｆｉｅｌｄ改訂診断基準によるアトピー性皮膚炎診断；
ｉｉ）処置前約２年以上のアトピー性皮膚炎の事前診断；
ｉｉｉ）医療専門家の全般的評価スコアが約３以上；
ｉｖ）アトピー性皮膚炎関与が身体の表面積の約１０％以上；
ｖ）湿疹面積および重症度指数スコアが１６以上；
ｖｉ）血中好酸球の絶対数が１５０細胞／μＬ以上、２００細胞／μＬ以上、および３５０細胞／μＬ以上(an absolute blood eosinophil count of of greater than or equal to 150 cells per μL of greater than or equal to 200 cells per μL and greater than or equal to 350 cells per μL)；ならびに
ｖｉｉ）１）アトピー性皮膚炎の外用薬に対する６か月以上の応答不良；２）アトピー性皮膚炎に対する外用薬の免疫寛容不良；３）アトピー性皮膚炎の外用薬からの副作用；および４）アトピー性皮膚炎の非薬理学的処置に対する応答不良からなる群から選択される、処置前の少なくとも１つの状態からなる群から選択される少なくとも１つを有する対象を特定する工程；ならびに
ｂ）前記対象に、配列番号１に示されるアミノ酸配列を有する重鎖と配列番号１に示されるアミノ酸配列を有する軽鎖とを含んでなる抗体の治療上有効な量を投与する工程
を含んでなり；
それにより、前記対象におけるアトピー性皮膚炎が処置される、方法。
ａ）
ｉ）ＨａｎｉｆｉｎおよびＲａｊｋａのＥｉｃｈｅｎｆｉｅｌｄ改訂診断基準によるアトピー性皮膚炎診断；
ｉｉ）処置前約２年以上のアトピー性皮膚炎の事前診断；
ｉｉｉ）医療専門家の全般的評価スコアが約３以上；
ｉｖ）アトピー性皮膚炎関与が身体の表面積の約１０％以上；
ｖ）湿疹面積および重症度指数スコアが１６以上；
ｖｉ）血中好酸球の絶対数が１５０細胞／μＬ以上、２００細胞／μＬ以上、および３５０細胞／μＬ以上(an absolute blood eosinophil count of of greater than or equal to 150 cells per μL of greater than or equal to 200 cells per μL and greater than or equal to 350 cells per μL)；ならびに
ｖｉｉ）１）アトピー性皮膚炎の外用薬に対する６か月以上の応答不良；２）アトピー性皮膚炎に対する外用薬の免疫寛容不良；３）アトピー性皮膚炎の外用薬からの副作用；および４）アトピー性皮膚炎の非薬理学的処置に対する応答不良からなる群から選択される、処置前の少なくとも１つの状態からなる群から選択される少なくとも１つを有する対象を特定する工程；ならびに
ｂ）前記対象に、配列番号１に示されるアミノ酸配列を有する重鎖と配列番号１に示されるアミノ酸配列を有する軽鎖とを含んでなる抗体の治療上有効な量を投与する工程
を含んでなり；
それにより、前記対象におけるアトピー性皮膚炎が処置される、方法。
１３３．前記抗体用量が約２ｍｇ～約６００ｍｇである、１３２の方法。
１３４．前記抗体が３か月毎に１回または６か月毎に１回投与される、１３３の方法。
１３５．前記抗体が皮下投与される、１３４の方法。
１３６．前記対象が２００細胞／μＬ以上および１５０細胞／μＬ以上、２００細胞／μＬ以上および３５０細胞／μＬ以上からなる群から選択される血中好酸球の絶対数を有する、１３２、１３３、１３４または１３５の方法。
１３７．対象において中等症～重症アトピー性皮膚炎を処置する方法であって、
ａ）
ｉ）ＨａｎｉｆｉｎおよびＲａｊｋａのＥｉｃｈｅｎｆｉｅｌｄ改訂診断基準によるアトピー性皮膚炎診断；
ｉｉ）処置前約２年以上のアトピー性皮膚炎の事前診断；
ｉｉｉ）医療専門家の全般的評価スコアが約３以上；
ｉｖ）アトピー性皮膚炎関与が身体の表面積の約１０％以上；
ｖ）湿疹面積および重症度指数スコアが１６以上；
ｖｉ）血中好酸球の絶対数が１５０細胞／μＬ以上、２００細胞／μＬ以上、および３５０細胞／μＬ以上(an absolute blood eosinophil count of of greater than or equal to 150 cells per μL of greater than or equal to 200 cells per μL and greater than or equal to 350 cells per μL)；ならびに
ｖｉｉ）１）アトピー性皮膚炎の外用薬に対する６か月以上の応答不良；２）アトピー性皮膚炎に対する外用薬の免疫寛容不良；３）アトピー性皮膚炎の外用薬からの副作用；および４）アトピー性皮膚炎の非薬理学的処置に対する応答不良からなる群から選択される、処置前の少なくとも１つの状態からなる群から選択される少なくとも１つを有する対象を特定する工程；ならびに
ｂ）前記対象に、配列番号１に示されるアミノ酸配列を有する重鎖と配列番号１に示されるアミノ酸配列を有する軽鎖とを含んでなる抗体および薬学的に有効な担体を含んでなる医薬組成物の治療上有効な量を投与する工程
を含んでなり；
それにより、前記対象におけるアトピー性皮膚炎が処置される、方法。
ａ）
ｉ）ＨａｎｉｆｉｎおよびＲａｊｋａのＥｉｃｈｅｎｆｉｅｌｄ改訂診断基準によるアトピー性皮膚炎診断；
ｉｉ）処置前約２年以上のアトピー性皮膚炎の事前診断；
ｉｉｉ）医療専門家の全般的評価スコアが約３以上；
ｉｖ）アトピー性皮膚炎関与が身体の表面積の約１０％以上；
ｖ）湿疹面積および重症度指数スコアが１６以上；
ｖｉ）血中好酸球の絶対数が１５０細胞／μＬ以上、２００細胞／μＬ以上、および３５０細胞／μＬ以上(an absolute blood eosinophil count of of greater than or equal to 150 cells per μL of greater than or equal to 200 cells per μL and greater than or equal to 350 cells per μL)；ならびに
ｖｉｉ）１）アトピー性皮膚炎の外用薬に対する６か月以上の応答不良；２）アトピー性皮膚炎に対する外用薬の免疫寛容不良；３）アトピー性皮膚炎の外用薬からの副作用；および４）アトピー性皮膚炎の非薬理学的処置に対する応答不良からなる群から選択される、処置前の少なくとも１つの状態からなる群から選択される少なくとも１つを有する対象を特定する工程；ならびに
ｂ）前記対象に、配列番号１に示されるアミノ酸配列を有する重鎖と配列番号１に示されるアミノ酸配列を有する軽鎖とを含んでなる抗体および薬学的に有効な担体を含んでなる医薬組成物の治療上有効な量を投与する工程
を含んでなり；
それにより、前記対象におけるアトピー性皮膚炎が処置される、方法。
１３８．前記薬学的に有効な担体が、約４０ｍＭのヒスチジン、約１８０ｍＭのトレハロース、約１００ｍＭのアルギニン、約８ｍＭのメチオニン、約０．０２重量／容量％のポリソルベート８０および約０．０５ｍＭのＥＤＴＡを含有する、約ｐＨ５．５～約ｐＨ６．０の水性液体処方物を含んでなる、１３７の方法。
１３９．前記抗体用量が約２ｍｇ～約６００ｍｇである、１３８の方法。
１４０．前記医薬組成物が３か月毎に１回または６か月毎に１回投与される、１３９に記載の方法。
１４１．前記医薬組成物が皮下投与される、１４０の方法。
１４２．前記対象が２００細胞／μＬ以上および３５０細胞／μＬ以上からなる群から選択される血中好酸球の絶対数を有する、１３７、１３８、１３９、１４０または１４１の方法。
１４３．対象において血中好酸球の絶対数を低減する方法であって、
ａ）喘息、軽症喘息、中等症喘息、重症喘息、軽症好酸球性喘息、中等症好酸球性喘息、重症好酸球性喘息、管理不良好酸球性喘息、好酸球性喘息、準好酸球性喘息、慢性閉塞性肺疾患、好酸球性多発血管炎性肉芽腫症、好酸球増加症候群、鼻ポリープ、水疱性類天疱瘡、好酸球性食道炎およびアトピー性皮膚炎からなる群から選択される病態を有する対象を特定する工程；ならびに
ｂ）前記対象に。配列番号５に示されるＣＤＲアミノ酸配列、配列番号６に示されるＣＤＲアミノ酸配列、および配列番号７に示されるＣＤＲアミノ酸配列鎖可変領域と；配列番号８に示されるＣＤＲアミノを有する重酸配列、配列番号９に示されるＣＤＲアミノ酸配列、および配列番号１０に示されるＣＤＲアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含んでなる抗体の治療上有効な量を投与する工程
を含んでなり；
それにより、対象における血中好酸球の絶対数が低減される、方法。
ａ）喘息、軽症喘息、中等症喘息、重症喘息、軽症好酸球性喘息、中等症好酸球性喘息、重症好酸球性喘息、管理不良好酸球性喘息、好酸球性喘息、準好酸球性喘息、慢性閉塞性肺疾患、好酸球性多発血管炎性肉芽腫症、好酸球増加症候群、鼻ポリープ、水疱性類天疱瘡、好酸球性食道炎およびアトピー性皮膚炎からなる群から選択される病態を有する対象を特定する工程；ならびに
ｂ）前記対象に。配列番号５に示されるＣＤＲアミノ酸配列、配列番号６に示されるＣＤＲアミノ酸配列、および配列番号７に示されるＣＤＲアミノ酸配列鎖可変領域と；配列番号８に示されるＣＤＲアミノを有する重酸配列、配列番号９に示されるＣＤＲアミノ酸配列、および配列番号１０に示されるＣＤＲアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含んでなる抗体の治療上有効な量を投与する工程
を含んでなり；
それにより、対象における血中好酸球の絶対数が低減される、方法。
１４４．前記重鎖可変領域が配列番号２１に示される重鎖ＦＲ４アミノ酸配列をさらに含んでなる、１４３の方法。
１４５．前記抗体が、２５２番目にチロシン残基、２５４番目にトレオニン残基および２５６番目にグルタミン酸残基を有する重鎖Ｆｃドメインを含んでなり、前記重鎖Ｆｃドメインのアミノ末端が前記重鎖可変領域のカルボキシ末端に連結されている、１４４の方法。
１４６．前記抗体が配列番号３に示されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域配列と；配列番号４に示されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域配列とを含んでなる、１４５の方法。
１４７．前記抗体用量が約２ｍｇ～約６００ｍｇである、１４６の方法。
１４８．前記抗体が３か月毎に１回または６か月毎に１回投与される、１４７の方法。
１４９．前記抗体が皮下投与される、１４８の方法。
１５０．前記対象が２００細胞／μＬ以上および３５０細胞／μＬ以上からなる群から選択される血中好酸球の絶対数を有する、１４２、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８または１４９の方法。
１５１．さらに、
ａ）前記対象において血中好酸球の絶対数の第１の測定値を得る工程；
ｂ）前記対象に治療上有効な量の抗原結合タンパク質を投与した後に対象において血中好酸球の絶対数の第２の測定値を得る工程；および
ｃ）第１の測定値と第２の測定値を比較する工程
を含んでなる、１４２、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８または１４９の方法。
ａ）前記対象において血中好酸球の絶対数の第１の測定値を得る工程；
ｂ）前記対象に治療上有効な量の抗原結合タンパク質を投与した後に対象において血中好酸球の絶対数の第２の測定値を得る工程；および
ｃ）第１の測定値と第２の測定値を比較する工程
を含んでなる、１４２、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８または１４９の方法。
１５２．さらに、
ａ）前記対象において血中好酸球の絶対数の第１の測定値を得る工程；
ｂ）前記対象に治療上有効な量の抗原結合タンパク質を投与した後に対象において血中好酸球の絶対数の第２の測定値を得る工程；および
ｃ）第１の測定値と第２の測定値を比較する工程
を含んでなり；前記対象は、２００細胞／μＬ以上および３５０細胞／μＬ以上からなる群から選択される血中好酸球の絶対数を有する、１４２、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８または１４９の方法。
ａ）前記対象において血中好酸球の絶対数の第１の測定値を得る工程；
ｂ）前記対象に治療上有効な量の抗原結合タンパク質を投与した後に対象において血中好酸球の絶対数の第２の測定値を得る工程；および
ｃ）第１の測定値と第２の測定値を比較する工程
を含んでなり；前記対象は、２００細胞／μＬ以上および３５０細胞／μＬ以上からなる群から選択される血中好酸球の絶対数を有する、１４２、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８または１４９の方法。
１５３．対象において血中好酸球の絶対数を低減する方法であって、
ａ）喘息、軽症喘息、中等症喘息、重症喘息、軽症好酸球性喘息、中等症好酸球性喘息、重症好酸球性喘息、管理不良好酸球性喘息、好酸球性喘息、準好酸球性喘息、慢性閉塞性肺疾患、好酸球性多発血管炎性肉芽腫症、好酸球増加症候群、鼻ポリープ、水疱性類天疱瘡、好酸球性食道炎、アトピー性皮膚炎、中等症アトピー性皮膚炎および重症アトピー性皮膚炎からなる群から選択される病態を有する対象を特定する工程；および
ｂ）前記対象に、配列番号１に示されるアミノ酸配列を有する重鎖と配列番号１に示されるアミノ酸配列を有する軽鎖とを含んでなる抗体の治療上有効な量を投与する工程
を含んでなり；
それにより、前記対象におけるアトピー性皮膚炎が処置される、方法。
ａ）喘息、軽症喘息、中等症喘息、重症喘息、軽症好酸球性喘息、中等症好酸球性喘息、重症好酸球性喘息、管理不良好酸球性喘息、好酸球性喘息、準好酸球性喘息、慢性閉塞性肺疾患、好酸球性多発血管炎性肉芽腫症、好酸球増加症候群、鼻ポリープ、水疱性類天疱瘡、好酸球性食道炎、アトピー性皮膚炎、中等症アトピー性皮膚炎および重症アトピー性皮膚炎からなる群から選択される病態を有する対象を特定する工程；および
ｂ）前記対象に、配列番号１に示されるアミノ酸配列を有する重鎖と配列番号１に示されるアミノ酸配列を有する軽鎖とを含んでなる抗体の治療上有効な量を投与する工程
を含んでなり；
それにより、前記対象におけるアトピー性皮膚炎が処置される、方法。
１５４．前記抗体用量が約２ｍｇ～約６００ｍｇである、１５３の方法。
１５５．前記抗体が３か月毎に１回または６か月毎に１回投与される、１５４の方法。
１５６．前記抗体が皮下投与される、１５５の方法。
１５７．前記対象が２００細胞／μＬ以上および３５０細胞／μＬ以上からなる群から選択される血中好酸球の絶対数を有する、１５４、１５５、１５６または１５７の方法。
１５８．前記対象が２００細胞／μＬ以上および３５０細胞／μＬ以上からなる群から選択される血中好酸球の絶対数を有する、１５４、１５５、１５６または１５７の方法。
１５９．さらに、
ａ）前記対象において血中好酸球の絶対数の第１の測定値を得る工程；
ｂ）前記対象に治療上有効な量の抗原結合タンパク質を投与した後に対象において血中好酸球の絶対数の第２の測定値を得る工程；および
ｃ）第１の測定値と第２の測定値を比較する工程
を含んでなる、１５４、１５５、１５６または１５７の方法。
ａ）前記対象において血中好酸球の絶対数の第１の測定値を得る工程；
ｂ）前記対象に治療上有効な量の抗原結合タンパク質を投与した後に対象において血中好酸球の絶対数の第２の測定値を得る工程；および
ｃ）第１の測定値と第２の測定値を比較する工程
を含んでなる、１５４、１５５、１５６または１５７の方法。
１６０．さらに、
ａ）前記対象において血中好酸球の絶対数の第１の測定値を得る工程；
ｂ）前記対象に治療上有効な量の抗原結合タンパク質を投与した後に対象において血中好酸球の絶対数の第２の測定値を得る工程；および
ｃ）第１の測定値と第２の測定値を比較する工程
を含んでなり；前記対象は、２００細胞／μＬ以上および３５０細胞／μＬ以上からなる群から選択される血中好酸球の絶対数を有する、１５４、１５５、１５６または１５７の方法。
ａ）前記対象において血中好酸球の絶対数の第１の測定値を得る工程；
ｂ）前記対象に治療上有効な量の抗原結合タンパク質を投与した後に対象において血中好酸球の絶対数の第２の測定値を得る工程；および
ｃ）第１の測定値と第２の測定値を比較する工程
を含んでなり；前記対象は、２００細胞／μＬ以上および３５０細胞／μＬ以上からなる群から選択される血中好酸球の絶対数を有する、１５４、１５５、１５６または１５７の方法。
１６１．対象において血中好酸球の絶対数を低減する方法であって、
ａ）喘息、軽症喘息、中等症喘息、重症喘息、軽症好酸球性喘息、中等症好酸球性喘息、重症好酸球性喘息、管理不良好酸球性喘息、好酸球性喘息、準好酸球性喘息、慢性閉塞性肺疾患、好酸球性多発血管炎性肉芽腫症、好酸球増加症候群、鼻ポリープ、水疱性類天疱瘡、好酸球性食道炎、アトピー性皮膚炎、中等症アトピー性皮膚炎および重症アトピー性皮膚炎からなる群から選択される病態を有する対象を特定する工程；ならびに
ｂ）前記対象に、配列番号１に示されるアミノ酸配列を有する重鎖と配列番号１に示されるアミノ酸配列を有する軽鎖とを含んでなる抗体および薬学的に有効な担体を含んでなる医薬組成物の治療上有効な量を投与する工程
を含んでなり；
それにより、対象における血中好酸球の絶対数が低減される、方法。
ａ）喘息、軽症喘息、中等症喘息、重症喘息、軽症好酸球性喘息、中等症好酸球性喘息、重症好酸球性喘息、管理不良好酸球性喘息、好酸球性喘息、準好酸球性喘息、慢性閉塞性肺疾患、好酸球性多発血管炎性肉芽腫症、好酸球増加症候群、鼻ポリープ、水疱性類天疱瘡、好酸球性食道炎、アトピー性皮膚炎、中等症アトピー性皮膚炎および重症アトピー性皮膚炎からなる群から選択される病態を有する対象を特定する工程；ならびに
ｂ）前記対象に、配列番号１に示されるアミノ酸配列を有する重鎖と配列番号１に示されるアミノ酸配列を有する軽鎖とを含んでなる抗体および薬学的に有効な担体を含んでなる医薬組成物の治療上有効な量を投与する工程
を含んでなり；
それにより、対象における血中好酸球の絶対数が低減される、方法。
１６２．前記薬学的に有効な担体が、約４０ｍＭのヒスチジン、約１８０ｍＭのトレハロース、約１００ｍＭのアルギニン、約８ｍＭのメチオニン、約０．０２重量／容量％のポリソルベート８０および約０．０５ｍＭのＥＤＴＡを含有する、約ｐＨ５．５～約ｐＨ６．０の水性液体処方物を含んでなる、１６１の方法。
１６３．前記抗体用量が約２ｍｇ～約６００ｍｇである、１６２の方法。
１６４．前記医薬組成物が３か月毎に１回または６か月毎に１回投与される、１６３に記載の方法。
１６５．前記医薬組成物が皮下投与される、１６４の方法。
１６６．前記対象が２００細胞／μＬ以上および３５０細胞／μＬ以上からなる群から選択される血中好酸球の絶対数を有する、１６２、１６３、１６４、１６５または１６６の方法。
１６７．さらに、
ａ）前記対象において血中好酸球の絶対数の第１の測定値を得る工程；
ｂ）前記対象に治療上有効な量の抗原結合タンパク質を投与した後に対象において血中好酸球の絶対数の第２の測定値を得る工程；および
ｃ）第１の測定値と第２の測定値を比較する工程
を含んでなる、１６２、１６３、１６４、１６５または１６６の方法。
ａ）前記対象において血中好酸球の絶対数の第１の測定値を得る工程；
ｂ）前記対象に治療上有効な量の抗原結合タンパク質を投与した後に対象において血中好酸球の絶対数の第２の測定値を得る工程；および
ｃ）第１の測定値と第２の測定値を比較する工程
を含んでなる、１６２、１６３、１６４、１６５または１６６の方法。
１６８．さらに、
ａ）前記対象において血中好酸球の絶対数の第１の測定値を得る工程；
ｂ）前記対象に治療上有効な量の抗原結合タンパク質を投与した後に対象において血中好酸球の絶対数の第２の測定値を得る工程；および
ｃ）第１の測定値と第２の測定値を比較する工程
を含んでなり；前記対象は、２００細胞／μＬ以上および３５０細胞／μＬ以上からなる群から選択される血中好酸球の絶対数を有する、１６２、１６３、１６４、１６５または１６６の方法。
ａ）前記対象において血中好酸球の絶対数の第１の測定値を得る工程；
ｂ）前記対象に治療上有効な量の抗原結合タンパク質を投与した後に対象において血中好酸球の絶対数の第２の測定値を得る工程；および
ｃ）第１の測定値と第２の測定値を比較する工程
を含んでなり；前記対象は、２００細胞／μＬ以上および３５０細胞／μＬ以上からなる群から選択される血中好酸球の絶対数を有する、１６２、１６３、１６４、１６５または１６６の方法。
１６９．療法において使用するための、１～１１、４０、４２、４４、４６、４７または４９～６９のいずれか１つに記載の組成物。
１７０．喘息、軽症喘息、中等症喘息、重症喘息、軽症好酸球性喘息、中等症好酸球性喘息、重症好酸球性喘息、管理不良好酸球性喘息、好酸球性喘息、準好酸球性喘息、慢性閉塞性肺疾患、好酸球性多発血管炎性肉芽腫症、好酸球増加症候群、鼻ポリープ、水疱性類天疱瘡、好酸球性食道炎、アトピー性皮膚炎、中等症アトピー性皮膚炎および重症アトピー性皮膚炎の処置において使用するための、１～１１、４０、４２、４４、４６、４７または４９～６９いずれか１つに記載の組成物。
実施例１
２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１の動態分析
２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１、メポリズマブ、およびＧＳＫ３５５９０９０Ａ（コンパレーターＩｇＧ１抗ＩＬ－５ ｍＡｂ分子に基づく）を比較するために動態分析を行った。結果を以下の表１６にまとめる。２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１の高親和性のために、２５℃でＢｉａｃｏｒｅ ４０００により解離速度を正確に決定することはできず、従って、ＫＩＮＥＸＡ分析を用いて２５℃でヒトＩＬ－５への２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１の結合の正確な親和性を計算した。２５℃でのＫＩＮＥＸＡ液相親和性分析によるヒトＩＬ－５に対する２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１の親和性は１０．４７ｐＭ（９５％信頼範囲 ０．８８ｐＭ～３１．９７ｐＭ）であった。これは、ヒトＩＬ－５へのメポリズマブの結合の親和性１２２．８ｐＭ（２５℃でＢＩＡＣＯＲＥ ４０００により決定）に匹敵した。
２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１の動態分析
２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１、メポリズマブ、およびＧＳＫ３５５９０９０Ａ（コンパレーターＩｇＧ１抗ＩＬ－５ ｍＡｂ分子に基づく）を比較するために動態分析を行った。結果を以下の表１６にまとめる。２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１の高親和性のために、２５℃でＢｉａｃｏｒｅ ４０００により解離速度を正確に決定することはできず、従って、ＫＩＮＥＸＡ分析を用いて２５℃でヒトＩＬ－５への２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１の結合の正確な親和性を計算した。２５℃でのＫＩＮＥＸＡ液相親和性分析によるヒトＩＬ－５に対する２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１の親和性は１０．４７ｐＭ（９５％信頼範囲 ０．８８ｐＭ～３１．９７ｐＭ）であった。これは、ヒトＩＬ－５へのメポリズマブの結合の親和性１２２．８ｐＭ（２５℃でＢＩＡＣＯＲＥ ４０００により決定）に匹敵した。
コンパレーター抗体ＧＳＫ３５５９０９０Ａは、２５℃でヒトＩＬ－５への結合に関してＢＩＡＣＯＲＥ ４０００により分析し、１６．４ｐＭの親和性（ＫＤ）値が得られた。ＧＳＫ３５５９０９０Ａは、主として、メポリズマブに比べてＧＳＫ３５５９０９０Ａの２０倍速い会合速度（ｋａ）の結果として、ヒトＩＬ－５に対してメポリズマブの１０倍高いＫＤを有する。
３７℃でのヒトおよびカニクイザルＩＬ－５に対する２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１の親和性は、ＢＩＡＣＯＲＥ Ｔ２００を用いて決定した。温度が高いほど２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１の解離速度（ｋｄ）は増し、結果として、それは装置の範囲内であった。３７℃でのヒトおよびカニクイザルＩＬ－５に対する２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１の親和性は、それぞれ３９．１３ｐＭおよび２３．９３ｐＭである。
ＦＯＲＴＥＢＩＯ ＯＣＴＥＴ ＲＥＤ３８４ ＢＬＩ装置で行った競合アッセイは、２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１がヒトＩＬ－５との結合に関してメポリズマブと競合することを示した。表１６ 凡例／説明：動態ＫＤデータの概要（Ｎ．Ｄ．決定されず）。
ヒトＦｃ受容体への結合
２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１は、ｐＨ６．０においてメポリズマブに比べてヒトＦｃＲｎに対する親和性におよそ１３倍の増加を有し（それぞれ１５７ｎＭおよび２０８２ｎＭ）、また、ｐＨ７．４でも低い親和性で結合し、親和性はｐＨ７で１６μＭである。３７℃でＢＩＡＣＯＲＥ Ｔ２００により決定されたＫＤ値を表１７に示す。表１７ 凡例／説明：ｐＨ６．０およびｐＨ７．４におけるヒトＦｃＲｎに対する２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１とメポリズマブの結合親和性の比較
２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１は、ｐＨ６．０においてメポリズマブに比べてヒトＦｃＲｎに対する親和性におよそ１３倍の増加を有し（それぞれ１５７ｎＭおよび２０８２ｎＭ）、また、ｐＨ７．４でも低い親和性で結合し、親和性はｐＨ７で１６μＭである。３７℃でＢＩＡＣＯＲＥ Ｔ２００により決定されたＫＤ値を表１７に示す。表１７ 凡例／説明：ｐＨ６．０およびｐＨ７．４におけるヒトＦｃＲｎに対する２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１とメポリズマブの結合親和性の比較
ＰＲＯＴＥＯＮ ＸＰＲ３６によるヒトＦｃγ受容体（ＦｃγＲ）に対する２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１の結合の分析は、対照抗体を含有するＹＴＥとの比較可能性を示した。これらのＹＴＥを含有するｍＡｂのＦｃγＲに対する結合親和性は、ヒトＩｇＧ１野生型対照の結合親和性のおよそ１．５分の１であった。２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１はまた、補体成分Ｃ１ｑに対してヒトＩｇＧ１野生型対照よりも低い親和性を有していた（それぞれ７５０ｎＭおよび４６５ｎＭ）。
別の実験では、２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１は、ｐＨ６．０でヒト新生児受容体に対する親和性にヒトＩｇＧ１野生型対照に比べておよそ３倍の増加を示し（それぞれ１３０ｎＭおよび３５９ｎＭ）、また、ｐＨ７．４でも低い親和性で結合するが（２６５０ｎＭ）、野生型対照はこのｐＨではＦｃＲｎと結合しない（表１８）。これはこの試験で使用したＹＴＥ対照に匹敵する。表１８ 凡例／説明：ＰＲＯＴＥＯＮを用いた組換えヒト新生児受容体（ＦｃＲｎ）に対する２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１の結合。野生型アイソタイプ対照およびＦｃ傷害アイソタイプ対照は、元々はＦ９凝固因子ＩＸに対する非機能的（ＣＤＲ結合に関して）抗体に由来する。Ｆｃ傷害アイソタイプ対照は、Ｆｃγ受容体との相互作用を低下させるＦｃ領域に２つの点突然変異（Ｌ２３５およびＧ２３７、両方ともアラニンへの変異）を含む。
ＴＦ－１機能的細胞アッセイ
ヒトＩＬ－５により媒介されるＴＦ－１細胞の増殖を用量依存的に阻害する２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１の能力を評価した。ＴＦ－１細胞は、ヒトおよびカニクイザルＩＬ－５刺激に応答して増殖するように操作された赤白血病細胞株である。
ヒトＩＬ－５により媒介されるＴＦ－１細胞の増殖を用量依存的に阻害する２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１の能力を評価した。ＴＦ－１細胞は、ヒトおよびカニクイザルＩＬ－５刺激に応答して増殖するように操作された赤白血病細胞株である。
ＴＦ－１細胞増殖アッセイにおける２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１の効果の分析は、それがＩＬ－５により媒介されるＴＦ－１細胞の増殖の強力な阻害剤であることを示した。２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１およびメポリズマブは両方とも、１ｎＭ～０．０４２ｐＭの濃度範囲で試験した場合に、ヒトＩＬ－５により誘導されるＴＦ－１細胞の増殖の用量依存的阻害を生じた（それぞれ４ｐＭおよび１０５ｐＭのＩＣ５０、図１）。これは、２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１の細胞アッセイ効力にメポリズマブに比べておよそ３０倍の改善を示す。
２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１およびメポリズマブは両方とも、１ｎＭ～０．０４２ｐＭの濃度範囲で試験した場合に、ヒトＩＬ－５により誘導されるＴＦ－１細胞増殖の用量依存的阻害を生じた（それぞれ０．００４ｎＭおよび０．１０５ｎＭのＩＣ５０）。
酢酸またはリン酸バッファーのいずれか中で４０℃にて１週間インキュベートすることによって分子を熱ストレスに曝した後に、２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１のさらなる分析を行った。これらの条件で、ＴＦ－１細胞アッセイにおける２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１のＩＣ５０値は４ｐＭ～５ｐＭの範囲であり、「非ストレス」対照条件に曝した２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１と同等の値を示す。
好酸球の形状変化アッセイおよび内因性ＩＬ－５に対する結合
ヒト全血中でＩＬ－５により媒介される好酸球の形状変化を阻害する２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１の能力を評価した。メポリズマブおよび２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１（１０μｇ／ｍｌ）は両方とも組換えＩＬ－５（１０ｎｇ／ｍｌ）により媒介される好酸球の形状変化の阻害を示したが、対照抗体パスコリズマブおよび抗ＲＳＶ（Ｆｃ傷害）は、ＩＬ－５により媒介される好酸球の形状変化を防ぐことができなかった（図２）。
ヒト全血中でＩＬ－５により媒介される好酸球の形状変化を阻害する２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１の能力を評価した。メポリズマブおよび２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１（１０μｇ／ｍｌ）は両方とも組換えＩＬ－５（１０ｎｇ／ｍｌ）により媒介される好酸球の形状変化の阻害を示したが、対照抗体パスコリズマブおよび抗ＲＳＶ（Ｆｃ傷害）は、ＩＬ－５により媒介される好酸球の形状変化を防ぐことができなかった（図２）。
ＥＬＩＳＡにより、ＣＤ３／ＣＤ２８により刺激された末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）の上清に由来する天然ＩＬ－５に結合する２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１およびメポリズマブ（両方とも１μｇ／ｍｌ）の能力を評価した。２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１およびメポリズマブは天然ＩＬ－５に結合したが、対照抗体パスコリズマブは結合しなかった。このアッセイは天然ＩＬ－５との結合を示したが、正確なＥＣ５０値を決定するためにこれをさらに最適化することはしなかった（図３）。
イムノアッセイによるヒトおよびカニクイザル血清における２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１のｉｎ ｖｉｔｒｏ安定性
プールした対照ヒトまたはカニクイザル血清中、３７℃で６週間のインキュベーションの後に、組換えＩＬ－５と結合する２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１の能力を評価した（図４）。インキュベーション後、サンプルをＭＳＤイムノアッセイで試験したが、そこでは、残留する活性２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１を、固定化したビオチン化ＩＬ－５を用いて捕捉し、その後、直接標識した抗ヒトＦｃモノクローナル試薬を用いて検出した。ヒト血清およびカニクイザル血清の両方で、活性２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１の回収は、経時的な段階的低下を示し、６週間後にＴ０濃度のそれぞれ７３．１％および７７．１％に達した。これはメポリズマブ（５１．０％［ヒト］および６４．２％［カニクイザル］）およびこのアッセイで低い安定性を有することが知られているＩＬ－１３に特異的な対照抗体（２７．９％［ヒト］および２４．９％［カニクイザル］）に関して得られた履歴データに匹敵する。この試験からの結果は、２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１のｉｎ ｖｉｔｒｏヒトおよびカニクイザル血清安定性は好都合にもメポリズマブに関して得られた履歴値に匹敵したことを示し、２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１が典型的なモノクローナル抗体に関する予想と一致して挙動することを示唆する。
プールした対照ヒトまたはカニクイザル血清中、３７℃で６週間のインキュベーションの後に、組換えＩＬ－５と結合する２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１の能力を評価した（図４）。インキュベーション後、サンプルをＭＳＤイムノアッセイで試験したが、そこでは、残留する活性２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１を、固定化したビオチン化ＩＬ－５を用いて捕捉し、その後、直接標識した抗ヒトＦｃモノクローナル試薬を用いて検出した。ヒト血清およびカニクイザル血清の両方で、活性２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１の回収は、経時的な段階的低下を示し、６週間後にＴ０濃度のそれぞれ７３．１％および７７．１％に達した。これはメポリズマブ（５１．０％［ヒト］および６４．２％［カニクイザル］）およびこのアッセイで低い安定性を有することが知られているＩＬ－１３に特異的な対照抗体（２７．９％［ヒト］および２４．９％［カニクイザル］）に関して得られた履歴データに匹敵する。この試験からの結果は、２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１のｉｎ ｖｉｔｒｏヒトおよびカニクイザル血清安定性は好都合にもメポリズマブに関して得られた履歴値に匹敵したことを示し、２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１が典型的なモノクローナル抗体に関する予想と一致して挙動することを示唆する。
カニクイザルにおける２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１ ＰＫ／ＰＤの決定
４群のカニクイザル(Macaca fascicularis）、各群２個体の雄と２個体の雌からなるを含んでなる９か月非ＧＬＰ ｉｎ ｖｉｖｏ薬物動態／薬力学的（ＰＫ／ＰＤ）試験を行った。動物に１日目に静脈内ボーラス注射によって２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１（０．０５ｍｇ／ｋｇまたは１ｍｇ／ｋｇ）、メポリズマブ（１ｍｇ／ｋｇ）、またはビヒクルのいずれかを投与した。注射した抗体のＰＫパラメーターの決定に加え、ｉｎ ｖｉｖｏにおいて２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１とメポリズマブの活性を比較するために、ａ）好酸球抑制のレベルおよび持続期間；ｂ）総ＩＬ－５血清濃度のレベルおよび持続期間の２つのＰＤパラメーターを評価した。
４群のカニクイザル(Macaca fascicularis）、各群２個体の雄と２個体の雌からなるを含んでなる９か月非ＧＬＰ ｉｎ ｖｉｖｏ薬物動態／薬力学的（ＰＫ／ＰＤ）試験を行った。動物に１日目に静脈内ボーラス注射によって２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１（０．０５ｍｇ／ｋｇまたは１ｍｇ／ｋｇ）、メポリズマブ（１ｍｇ／ｋｇ）、またはビヒクルのいずれかを投与した。注射した抗体のＰＫパラメーターの決定に加え、ｉｎ ｖｉｖｏにおいて２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１とメポリズマブの活性を比較するために、ａ）好酸球抑制のレベルおよび持続期間；ｂ）総ＩＬ－５血清濃度のレベルおよび持続期間の２つのＰＤパラメーターを評価した。
２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１のＰＫ評価
カニクイザル血清サンプルに対して最大５３７６時間（３２週）、ＰＫ評価を行った。分析により、２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１はメポリズマブに比べて血清クリアランス速度に１．８倍の低下（それぞれ０．１０５ｍｌ／ｈｒ／ｋｇと０．１８５ｍｌ／ｈｒ／ｋｇ）およびメポリズマブの１１．５日に比べて２４．５日という半減期の改善を有することが明らかになった（表１９）。表１９ 凡例／説明：カニクイザルＰＫ試験から決定された薬物動態パラメーター（＊中央値）。
カニクイザル血清サンプルに対して最大５３７６時間（３２週）、ＰＫ評価を行った。分析により、２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１はメポリズマブに比べて血清クリアランス速度に１．８倍の低下（それぞれ０．１０５ｍｌ／ｈｒ／ｋｇと０．１８５ｍｌ／ｈｒ／ｋｇ）およびメポリズマブの１１．５日に比べて２４．５日という半減期の改善を有することが明らかになった（表１９）。表１９ 凡例／説明：カニクイザルＰＫ試験から決定された薬物動態パラメーター（＊中央値）。
２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１により媒介される好酸球抑制
好酸球数の低減を２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１により媒介されるＩＬ－５中和活性のバイオマーカーとして使用した。ｉｎ ｖｉｖｏで、カニクイザルにおいて、２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１は、メポリズマブに比べて好酸球抑制の期間の延長を示す（図５）。２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１は、メポリズマブの１／２０用量で投与した場合、同等かまたは若干優れた好酸球抑制を示し、ｉｎ ｖｉｖｏにおいて２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１はメポリズマブの少なくとも２０倍の活性を有することを示唆する。血中好酸球数は、１ｍｇ／ｋｇで投与した場合、メポリズマブの４～７週間に比べて、２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１では投与後最大２４週間、投与前値の≦５０％であった。血中好酸球数は、２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１では７週前後、メポリズマブでは４週前後で回復を示し始めた。これらのデータは、ヒトにおいて３か月毎の投与が達成可能であること、および６か月毎の投与も遂行可能でアルことを示す。
好酸球数の低減を２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１により媒介されるＩＬ－５中和活性のバイオマーカーとして使用した。ｉｎ ｖｉｖｏで、カニクイザルにおいて、２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１は、メポリズマブに比べて好酸球抑制の期間の延長を示す（図５）。２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１は、メポリズマブの１／２０用量で投与した場合、同等かまたは若干優れた好酸球抑制を示し、ｉｎ ｖｉｖｏにおいて２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１はメポリズマブの少なくとも２０倍の活性を有することを示唆する。血中好酸球数は、１ｍｇ／ｋｇで投与した場合、メポリズマブの４～７週間に比べて、２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１では投与後最大２４週間、投与前値の≦５０％であった。血中好酸球数は、２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１では７週前後、メポリズマブでは４週前後で回復を示し始めた。これらのデータは、ヒトにおいて３か月毎の投与が達成可能であること、および６か月毎の投与も遂行可能でアルことを示す。
血清中の総ＩＬ－５レベル
総ＩＬ－５（ほぼ例外なく２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１またはメポリズマブのいずれかと複合体を形成したＩＬ－５）のレベルは投与後に上昇することが認められ、メポリズマブ群に比べて、２つの２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１投与群では顕著な持続性を示し、ＩＬ－５複合体はもっと早期に低下し始めた（図６）。１ｍｇ／ｋｇメポリズマブ投与群は、試験２９日（６７２時間）の後に低下し始め、０．０５ｍｇ／ｋｇ ２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１群は、試験８５日（２０１６時間）の後に低下し始め、１ｍｇ／ｋｇ ２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１は、試験１１３日（２６８８時間）の後に低下し始めた。これはより長期間ＩＬ－５との複合体を維持し続ける２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１に比べてＩＬ－５に関して、より低い親和性ならびにより短いメポリズマブの半減期を表す。
総ＩＬ－５（ほぼ例外なく２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１またはメポリズマブのいずれかと複合体を形成したＩＬ－５）のレベルは投与後に上昇することが認められ、メポリズマブ群に比べて、２つの２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１投与群では顕著な持続性を示し、ＩＬ－５複合体はもっと早期に低下し始めた（図６）。１ｍｇ／ｋｇメポリズマブ投与群は、試験２９日（６７２時間）の後に低下し始め、０．０５ｍｇ／ｋｇ ２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１群は、試験８５日（２０１６時間）の後に低下し始め、１ｍｇ／ｋｇ ２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１は、試験１１３日（２６８８時間）の後に低下し始めた。これはより長期間ＩＬ－５との複合体を維持し続ける２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１に比べてＩＬ－５に関して、より低い親和性ならびにより短いメポリズマブの半減期を表す。
また、単回の静脈内投与および単回の皮下投与によって送達された２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１に関して、ノンコンパートメント薬物動態分析も行った。静脈内に投与したＧＳＫ３５１１２９４は、メポリズマブに比べて血清半減期の延長（１１．５日に対して２４日）、および１．８倍の血清クリアランスの低減を示した（図４）。
方法：ＴＦ－１機能的細胞アッセイ
初期スクリーニングのために、抗体サンプルおよび対照を９６ウェルポリプロピレンプレート内に調製した。抗体を細胞培養培地で希釈して最終アッセイ濃度２００ｎＭとした後、フィルタープレート（Ｐａｌｌ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎマルチウェルプレート、ＡＣＲＯ ＰＲＥＰ ９６フィルタープレート、３．０μｍガラス繊維媒体／０．２μｍ ＢＩＯ－ＩＮＥＲＴメンブレン、＃５０５３）を用いて濾過除菌した。このプレートにサンプルの１：４連続希釈を行って（２００ｎＭ～７．６３ｐＭ）の濃度範囲で１０点系を作製した。この目的は、これらの変異体についてＩＣ５０値の初期評価を行うための単一の用量反応曲線を作成することであった。細胞の刺激のためのヒトＩＬ－５サイトカイン（ホモ二量体の分子量２８．５ＫＤａ）を細胞培養培地で希釈し、このアッセイにおけるヒトＩＬ－５刺激に関するＥＣ８０である１７．５ｐＭ（０．５ｎｇ／ｍｌ）の最終アッセイ濃度で調製した。ヒトＩＬ－５を抗体希釈系含有プレートに加え、室温で１時間インキュベートした。細胞増殖に用いられる増殖因子ＧＭＣＳＦ（顆粒球マクロファージコロニー刺激因子）の十分な除去を保証するために、ＴＦ１細胞をＰＢＳで３回洗浄した。これらの細胞を９６ウェル一体型白色底組織培養プレートに０．２×１０６細胞／ウェルの密度で播種した。プレインキュベートした抗体およびサイトカインを次に細胞に加え、３７℃、５％ＣＯ２で３日間さらにインキュベートした。これらのプレートをインキュベーターから取り出し、１００μｌのＣＥＬＬ ＴＩＴＥＲ－ＧＬＯ発光試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｇ７５７１）をプレートのウェルに加え、プレートシェーカー上で、室温で１時間インキュベートした。次に、これらのプレートを、ＥＮＶＩＳＩＯＮ発光プレートリーダー（Ｂｉｏｍａｘ ５０１５１０）にて読み取った．
初期スクリーニングのために、抗体サンプルおよび対照を９６ウェルポリプロピレンプレート内に調製した。抗体を細胞培養培地で希釈して最終アッセイ濃度２００ｎＭとした後、フィルタープレート（Ｐａｌｌ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎマルチウェルプレート、ＡＣＲＯ ＰＲＥＰ ９６フィルタープレート、３．０μｍガラス繊維媒体／０．２μｍ ＢＩＯ－ＩＮＥＲＴメンブレン、＃５０５３）を用いて濾過除菌した。このプレートにサンプルの１：４連続希釈を行って（２００ｎＭ～７．６３ｐＭ）の濃度範囲で１０点系を作製した。この目的は、これらの変異体についてＩＣ５０値の初期評価を行うための単一の用量反応曲線を作成することであった。細胞の刺激のためのヒトＩＬ－５サイトカイン（ホモ二量体の分子量２８．５ＫＤａ）を細胞培養培地で希釈し、このアッセイにおけるヒトＩＬ－５刺激に関するＥＣ８０である１７．５ｐＭ（０．５ｎｇ／ｍｌ）の最終アッセイ濃度で調製した。ヒトＩＬ－５を抗体希釈系含有プレートに加え、室温で１時間インキュベートした。細胞増殖に用いられる増殖因子ＧＭＣＳＦ（顆粒球マクロファージコロニー刺激因子）の十分な除去を保証するために、ＴＦ１細胞をＰＢＳで３回洗浄した。これらの細胞を９６ウェル一体型白色底組織培養プレートに０．２×１０６細胞／ウェルの密度で播種した。プレインキュベートした抗体およびサイトカインを次に細胞に加え、３７℃、５％ＣＯ２で３日間さらにインキュベートした。これらのプレートをインキュベーターから取り出し、１００μｌのＣＥＬＬ ＴＩＴＥＲ－ＧＬＯ発光試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｇ７５７１）をプレートのウェルに加え、プレートシェーカー上で、室温で１時間インキュベートした。次に、これらのプレートを、ＥＮＶＩＳＩＯＮ発光プレートリーダー（Ｂｉｏｍａｘ ５０１５１０）にて読み取った．
あるいは、ＩＣ５０値のより詳細な評価のために、上記の方法と比較して以下の変法を使用した。抗体および対照の希釈系は９６ウェルポリプロピレンプレートで調製した。これらの抗体を希釈して細胞培養培地中、最終アッセイ濃度１ｎＭとし、（１ｎＭ～０．０００４１８ｐＭ）の濃度範囲となるようにプレートに１：１．７連続希釈を行った。細胞の刺激のためのヒトＩＬ－５サイトカインは細胞培養培地で希釈し、最終アッセイ濃度３ｐＭで調製した。
方法：ＢＩＡＣＯＲＥ
ヒトＩＬ－５に対する結合の測定は、ＢＩＡＣＯＲＥ ４０００（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いて行った。一貫して使用したサンプル流速は、結合および再生に関しては１０μｌ／分であり、動態決定に関しては３０μｌ／分を使用した。プロテインＡをＳｅｒｉｅｓ Ｓ ＣＭ５チップ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、ＢＲ－１００５－３０）上に第一級アミンカップリング（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、ＢＲ－１０００－５０）により固定化した。次に、この表面を、スポット１および５に抗ＩＬ－５抗体を捕捉するために使用し、一方、スポット２および４は参照のために使用した。次に、組換えヒトＩＬ－５を１００ｎＭでこれらの捕捉された抗体に通した。３０分の解離時間を使用したが、これは従前の実験でメポリズマブの解離速度を正確に決定するために必要であると見出されたためであった。結合曲線はバッファー注入（すなわち、０ｎＭ）を二重参照とし、ＢＩＡＣＯＲＥ ４０００評価ソフトウエアで１：１モデルを用いてデータのフィッティングを行った。測定は２５℃で、ランニングバッファーとしてＨＢＳ－ＥＰ（Ｔｅｋｎｏｖａ、Ｈ８０２２）および再生溶液として５０ｍＭのＮａＯＨを用いて行った。
ヒトＩＬ－５に対する結合の測定は、ＢＩＡＣＯＲＥ ４０００（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いて行った。一貫して使用したサンプル流速は、結合および再生に関しては１０μｌ／分であり、動態決定に関しては３０μｌ／分を使用した。プロテインＡをＳｅｒｉｅｓ Ｓ ＣＭ５チップ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、ＢＲ－１００５－３０）上に第一級アミンカップリング（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、ＢＲ－１０００－５０）により固定化した。次に、この表面を、スポット１および５に抗ＩＬ－５抗体を捕捉するために使用し、一方、スポット２および４は参照のために使用した。次に、組換えヒトＩＬ－５を１００ｎＭでこれらの捕捉された抗体に通した。３０分の解離時間を使用したが、これは従前の実験でメポリズマブの解離速度を正確に決定するために必要であると見出されたためであった。結合曲線はバッファー注入（すなわち、０ｎＭ）を二重参照とし、ＢＩＡＣＯＲＥ ４０００評価ソフトウエアで１：１モデルを用いてデータのフィッティングを行った。測定は２５℃で、ランニングバッファーとしてＨＢＳ－ＥＰ（Ｔｅｋｎｏｖａ、Ｈ８０２２）および再生溶液として５０ｍＭのＮａＯＨを用いて行った。
データの解析から、これらの抗体の解離速度はＢＩＡＣＯＲＥ ４０００装置の感度限界であったことが判明し、従って、２５℃で正確な解離速度を計算することはできなかった。よって、解離速度を高めるために３７℃で測定を繰り返し、それにより、これらの抗体の正確な解離速度を計算することが可能となった。
方法：ＭＳＤ－ＳＥＴ分析
２５℃でＢＩＡＣＯＲＥによって測定するには解離速度が遅すぎたため、この温度でヒトＩＬ－５に対するこれらの抗体の親和性を決定するためにＭＳＤ－ＳＥＴ(MSD solution equilibrium titration)分析を使用した。ＭＳＤ－ＳＥＴは、抗体の液相での平衡親和性を決定する。この方法は、抗体濃度の漸減系で、平衡状態の遊離抗原の検出によるものである。
２５℃でＢＩＡＣＯＲＥによって測定するには解離速度が遅すぎたため、この温度でヒトＩＬ－５に対するこれらの抗体の親和性を決定するためにＭＳＤ－ＳＥＴ(MSD solution equilibrium titration)分析を使用した。ＭＳＤ－ＳＥＴは、抗体の液相での平衡親和性を決定する。この方法は、抗体濃度の漸減系で、平衡状態の遊離抗原の検出によるものである。
ビオチン化ヒトＩＬ－５は３０ｐＭの一定濃度で使用し、一方、抗体サンプルは、９６ウェルポリプロピレンプレートで２．５ｎＭから０．５ｐＭへの１：３漸減とした（最終１：１０希釈サンプル ０．０５ｐＭ）。漸減抗体およびＩＬ－５を室温で２４時間インキュベートした。２４時間後、抗体（ＰＢＳ中２０ｎＭ）を室温で３０分間、標準結合ＭＳＤプレート（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ、Ｌ１５ＸＡ）にコーティングした。次に、プレートをＳＴＡＲＴＩＮＧ ＢＬＯＣＫ遮断バッファー（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、＃３７５４２）で、７００ｒｐｍで振盪しながら３０分間遮断し、その後、洗浄バッファーで３回洗浄した。これらのインキュベート溶液を、７００ｒｐｍで振盪しながら１５０秒間、ＭＳＤプレートに加え、その後、１回洗浄した。プレートに捕捉された抗原を、プレート上で３分間インキュベートすることによってＳＵＬＦＯＴＡＧ標識ストレプトアビジン（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ、Ｒ３２ＡＤ－１）で検出した。これらのプレートを洗浄バッファーで３回洗浄した後、ＭＳＤ ＳＥＣＴＯＲ ＩＭＡＧＥＲ装置にて界面活性剤含有１×リードバッファーＴ（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ、Ｒ９２ＴＣ－１）を用いて読み取った。ＧＲＡＰＨＰＡＤ ＰＲＩＳＭソフトウエアを用いて、遊離抗原のパーセントを漸減抗体の関数としてプロットし、二次方程式に当てはめた。
また、２５℃でのカニクイザルＩＬ－５に対する親和性もＭＳＤ－ＳＥＴ分析を用いて決定した。使用した方法は、６２．５ｐＭのカニクイザルＩＬ－５濃度を用いたこと以外は上記と同様とした。
方法：２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１のＫＩＮＥＸＡ分析
２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１に関して得られた９５％信頼区間はこのモデルに対するデータのフィッティングが不十分であることを示したことから、２５℃でヒトＩＬ－５への２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１の結合に関して正確な親和性の決定を行うために、ＭＳＤ－ＳＥＴ分析の代わりにＫＩＮＥＸＡ（結合平衡除外法(kinetic exclusion assay)）を使用した。
２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１に関して得られた９５％信頼区間はこのモデルに対するデータのフィッティングが不十分であることを示したことから、２５℃でヒトＩＬ－５への２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１の結合に関して正確な親和性の決定を行うために、ＭＳＤ－ＳＥＴ分析の代わりにＫＩＮＥＸＡ（結合平衡除外法(kinetic exclusion assay)）を使用した。
液相親和性測定値は、ＳａｐｉｄｙｎｅのＫＩＮＥＸＡ ３２００装置を用いて得た。この方法は、抗原濃縮物の漸減系での平衡状態の遊離抗体の検出によるものである。検出のために、ヒトＩＬ－５でコーティングしたＮＨＳ活性化ＳＥＰＨＥＲＯＳＥビーズ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、１７－０９０６－０１）を用いてビーズマトリックスを作出した。親和性決定のために、固定濃度の抗体をヒトＩＬ－５濃縮物の希釈系とともにインキュベートし、サンプルをＫＩＮＥＸＡ ３２００装置に流す前に結合を平衡に到達させた。各溶液を抗原ビーズのアリコートに通し、ここで、遊離抗体は抗原でコーティングされたビーズに結合し、抗ヒトＩｇＧ抗体（ＤＹＬＩＧＨＴ ６４９－ＡＦＦＩＮＩＰＵＲＥ Ｆ（ａｂ’）２フラグメントヤギ抗ヒトＩｇＧ；Ｊａｃｋｏｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ、１０９－４９６－１７０）を用いて検出し、各サンプルを測定するために新しい抗原ビーズを用いた。データはＫＩＮＥＸＡ機に固有のソフトウエアを用いて解析し、相互作用の予想親和性より上および下、すなわち、３００ｐＭおよび５０ｐＭ（それぞれ濃度による相互作用および親和性による相互作用）の種々の開始濃度の抗体を用いて複数回の測定を行い、抗原の濃度範囲は、利用可能な抗体の総てが飽和してほぼ１００％が結合せずに残り得る単回のアッセイ内であった（濃度による曲線では１０ｎＭ～４．８８ｐＭ、親和性による曲線では１ｎＭ～０．４９ｐＭ）。これらの複数回の測定からのデータを、ＫＤおよび９５％信頼区間を決定するために、ＫＩＮＥＸＡ機に固有の「ｎ－ｐｌｏｔ」分析ソフトウエアを用いて合わせて解析した。
方法：メポリズマブとの競合における２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１のＩＬ－５結合
２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１がヒトＩＬ－５上でメポリズマブと同じエピトープに結合することを決定するために、ＦＯＲＴＥＢＩＯ ＯＣＴＥＴ ＲＥＤ３８４ ｂｉｏｌａｙｅｒ ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｍｅｔｒｙ ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ（ＢＬＩ）を用いて競合アッセイを行った。ヒトＩＬ－５は二量体であるので、ＰＢＳＦバッファー中５μｇ／ｍＬのビオチン化ヒトＩＬ－５をストレプトアビジン表面（ＦＯＲＴＥＢＩＯ、１８－５０１９）に捕捉させたタンデムアッセイ形式を使用した。この表面をＰＢＳＦ中１００ｎＭのメポリズマブ、次いで、１００ｎＭの２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１で飽和させた。このプロセスを、ＩＬ－５表面を飽和する２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１で繰り返し、その後、メポリズマブおよび自己ビニング対照も含めた。分析は２５℃にて、プレートシェーカー速度１０００ｒｐｍで行った。データは、この装置野ＦＯＲＴＥＢＩＯデータ解析を用いて解析した。
２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１がヒトＩＬ－５上でメポリズマブと同じエピトープに結合することを決定するために、ＦＯＲＴＥＢＩＯ ＯＣＴＥＴ ＲＥＤ３８４ ｂｉｏｌａｙｅｒ ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｍｅｔｒｙ ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ（ＢＬＩ）を用いて競合アッセイを行った。ヒトＩＬ－５は二量体であるので、ＰＢＳＦバッファー中５μｇ／ｍＬのビオチン化ヒトＩＬ－５をストレプトアビジン表面（ＦＯＲＴＥＢＩＯ、１８－５０１９）に捕捉させたタンデムアッセイ形式を使用した。この表面をＰＢＳＦ中１００ｎＭのメポリズマブ、次いで、１００ｎＭの２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１で飽和させた。このプロセスを、ＩＬ－５表面を飽和する２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１で繰り返し、その後、メポリズマブおよび自己ビニング対照も含めた。分析は２５℃にて、プレートシェーカー速度１０００ｒｐｍで行った。データは、この装置野ＦＯＲＴＥＢＩＯデータ解析を用いて解析した。
方法：ＳＥＣ分析
分子の純度（％単量体）および保持時間を評価するために、分析的サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）を行った。遅い保持時間は、分子の潜在的な現像問題を示し得る。ＳＥＣは、ＡＧＩＬＥＮＴ １１００ ＨＰＬＣシステムにてＴＳＫ Ｇ３０００ＳＷＸＬ、２５０Ａ、５μｍ、３０ｃｍ×７．８ｍｍカラムを用いて行った。ランニング条件は、２００ｍＭのＮａＨ２ＰＯ４、２５０ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ６．０、流速０．５ｍｌ／分であった。ロードは、１サンプルにつき２０μｇとし、測定時間は３０分であった。結果は、ＣＨＥＭＳＴＡＴＩＯＮのピーク統合ソフトウエアを用いて解析した。
分子の純度（％単量体）および保持時間を評価するために、分析的サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）を行った。遅い保持時間は、分子の潜在的な現像問題を示し得る。ＳＥＣは、ＡＧＩＬＥＮＴ １１００ ＨＰＬＣシステムにてＴＳＫ Ｇ３０００ＳＷＸＬ、２５０Ａ、５μｍ、３０ｃｍ×７．８ｍｍカラムを用いて行った。ランニング条件は、２００ｍＭのＮａＨ２ＰＯ４、２５０ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ６．０、流速０．５ｍｌ／分であった。ロードは、１サンプルにつき２０μｇとし、測定時間は３０分であった。結果は、ＣＨＥＭＳＴＡＴＩＯＮのピーク統合ソフトウエアを用いて解析した。
方法：ＰＲＯＴＥＯＮにより評価されるヒトＦｃ受容体に対する２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１の結合
組換え可溶型ヒトＦｃγ受容体（ＦｃγＲ）に対する２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１の結合を、ＰＲＯＴＥＯＮ ＸＰＲ３６（ＢＩＯＲＡＤ）バイオセンサー装置を用いて評価した。抗体を、野生型ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域を含有する陽性対照抗体およびＦｃγ受容体との相互作用を低下させるＦｃ領域における２つの点突然変異（Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３７Ａ）を含有する陰性対照抗体に対して分析した。Ｆｃ領域にＹＴＥ突然変異を含有するさらなる対照抗体も含めた（２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１もまたＹＴＥ突然変異を含有する）。
組換え可溶型ヒトＦｃγ受容体（ＦｃγＲ）に対する２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１の結合を、ＰＲＯＴＥＯＮ ＸＰＲ３６（ＢＩＯＲＡＤ）バイオセンサー装置を用いて評価した。抗体を、野生型ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域を含有する陽性対照抗体およびＦｃγ受容体との相互作用を低下させるＦｃ領域における２つの点突然変異（Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３７Ａ）を含有する陰性対照抗体に対して分析した。Ｆｃ領域にＹＴＥ突然変異を含有するさらなる対照抗体も含めた（２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１もまたＹＴＥ突然変異を含有する）。
マウス抗ポリ－ヒスチジンＩｇＧ（ＡＮＴＩ－ＴＥＴＲＡ－ＨＩＳ；Ｑｉａｇｅｎ、３４６７０）を、第一級アミンカップリング（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、ＢＲ－１０００－５０）によりＧＬＭバイオセンサーチップ（Ｂｉｏ－Ｒａｄ、１７６－５０１２）に固定化した。この表面をポリ－ヒスチジンタグ付きヒトＦｃγ受容体（総て所内生成試薬［ＣＤ６４－Ｆｃ；Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、１２５７－ＦＣ以外］）のための捕捉表面として使用した。供試抗体をアナライトとして用い、１０２４ｎＭ、２５６ｎＭ、６４ｎＭ、１６ｎＭおよび４ｎＭで通し、０ｎＭ注入（すなわち、バッファー単独）を結合曲線の二重参照として使用した。相互作用間でマウス抗ポリ－ヒスチジンＩｇＧ表面を１００ｍＭのリン酸で再生した。測定は、２５℃にてＨＢＳ－ＥＰ（Ｔｅｋｎｏｖａ、Ｈ８０２２）をランニングバッファーとして用いて行った。データは、全般的Ｒ－マックスを設定し、ＰＲＯＴＥＯＮの解析ソフトウエアに固有の平衡モデルを用いて、各受容体で個別に解析した。
方法：ＰＲＯＴＥＯＮにより評価されるヒト補体Ｃ１ｑに対する２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１の結合
ヒト組換え可溶型補体Ｃ１ｑに対する２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１の結合は、ＰＲＯＴＥＯｎ ＸＰＲ３６（ＢｉｏＲａｄ（商標））バイオセンサー装置を用いて評価した。Ｆｃ領域にＹＴＥ変化を含有する対照抗体を対照として含めた。
ヒト組換え可溶型補体Ｃ１ｑに対する２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１の結合は、ＰＲＯＴＥＯｎ ＸＰＲ３６（ＢｉｏＲａｄ（商標））バイオセンサー装置を用いて評価した。Ｆｃ領域にＹＴＥ変化を含有する対照抗体を対照として含めた。
供試抗体を、第一級アミンカップリング（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、ＢＲ－１０００－５０）によりＧＬＣチップ（Ｂｉｏ－Ｒａｄ、１７６－５０１１）に固定化した。組換えＣ１ｑ（Ｓｉｇｍａ、Ｃ１７４０）を５１２ｎＭ、１２８ｎＭ、３２ｎＭ、８ｎＭ、２ｎＭおよび０ｎＭ（すなわち、バッファー単独）でこれらの固定化抗体に流し、ブランク活性化および不活性化フローセスを結合曲線の二重参照として使用した。結合分析のランニングバッファーは、１０ｍＭのＣａＣｌ２を含むＨＢＳ－ＥＰ（ｐＨ７．４、Ｔｅｋｎｏｖａ、Ｈ８０２２）であった。データは、全般的Ｒ－マックス値を用い、ＰＲＯＴＥＯＮ ＸＰＲ３６（ＢｉｏＲａｄ（商標））解析ソフトウエアに固有の平衡モデルに当てはめた。
方法：ＦｃＲｎ結合
ｐＨ６．０およびｐＨ７．４でのヒトＦｃＲｎに対する２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１およびメポリズマブの結合親和性を、３７℃でＢＩＡＣＯＲＥ Ｔ２００装置を用いて評価した。ヒト組換えＩＬ－５を酢酸バッファーｐＨ５．０で希釈し、アミンカップリングにより、ＣＭ５チップ（ＧＥ、ＢＲ１００５３０）に５３５ＲＵのレベルまで固定化した。２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１またはメポリズマブをチップ表面に２４秒間、ＨＢＳ－ＥＰ（Ｔｅｋｎｏｖａ、Ｈ８０２２）バッファー中いずれかのｍＡｂの１００ｎＭ溶液を流す（５μｌ／分）ことによって捕捉させた。固定化されたＩＬ－５による抗体の捕捉の後に、
変動濃度（０．５μＭ～３２μＭ）のヒトＦｃＲｎのサイクルを１２０秒の接触時間、５μｌ／分でチップ表面に流し、次いで、各サイクルで８０秒解離させた。各サイクルの完了時に、１０ｍＭのグリシンｐＨ１．５、５秒間５０μｌ／分、次いで、１０ｍＭのＮａＯＨ、５秒間５０μｌ／分を用いてチップ表面を再生した。ＦｃＲｎサイクルは各濃度についてｐＨ６．０（ＨＢＳ－ＥＰ＋、Ｔｅｋｎｏｖａ、Ｃａｔ：Ｈ８０２２、ｐＨ６．０）およびｐＨ７．４（ＨＢＳ－ＥＰ）で行った。計算にはヒトＦｃＲｎの分子量４２９２９Ｄａを用いた。
ｐＨ６．０およびｐＨ７．４でのヒトＦｃＲｎに対する２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１およびメポリズマブの結合親和性を、３７℃でＢＩＡＣＯＲＥ Ｔ２００装置を用いて評価した。ヒト組換えＩＬ－５を酢酸バッファーｐＨ５．０で希釈し、アミンカップリングにより、ＣＭ５チップ（ＧＥ、ＢＲ１００５３０）に５３５ＲＵのレベルまで固定化した。２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１またはメポリズマブをチップ表面に２４秒間、ＨＢＳ－ＥＰ（Ｔｅｋｎｏｖａ、Ｈ８０２２）バッファー中いずれかのｍＡｂの１００ｎＭ溶液を流す（５μｌ／分）ことによって捕捉させた。固定化されたＩＬ－５による抗体の捕捉の後に、
変動濃度（０．５μＭ～３２μＭ）のヒトＦｃＲｎのサイクルを１２０秒の接触時間、５μｌ／分でチップ表面に流し、次いで、各サイクルで８０秒解離させた。各サイクルの完了時に、１０ｍＭのグリシンｐＨ１．５、５秒間５０μｌ／分、次いで、１０ｍＭのＮａＯＨ、５秒間５０μｌ／分を用いてチップ表面を再生した。ＦｃＲｎサイクルは各濃度についてｐＨ６．０（ＨＢＳ－ＥＰ＋、Ｔｅｋｎｏｖａ、Ｃａｔ：Ｈ８０２２、ｐＨ６．０）およびｐＨ７．４（ＨＢＳ－ＥＰ）で行った。計算にはヒトＦｃＲｎの分子量４２９２９Ｄａを用いた。
方法：天然ＩＬ－５に対する結合
天然ＩＬ－５と結合する２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１、メポリズマブおよび陰性対照抗体（パスコリズマブおよび抗ＲＳＶ）の能力を決定した。２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１、メポリズマブまたは対照抗体を、ＰＢＳで１μｇ／ｍｌ／２００μｌ／ウェルの濃度に希釈し、ＭＡＸＩＳＯＲＰ ＥＬＩＳＡプレート（Ｎｕｎｃ、１０３９４７５１）上で４℃にて一晩インキュベートし、その後、洗浄した（総ての洗浄工程は、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０を添加したＰＢＳ ２００μｌ／ウェルを使用した）。プレートを、１％ＢＳＡ（Ｓｉｇｍａ、Ａ９５７６）を添加したＰＢＳ ３００μｌ／ウェルで遮断した。２時間前に、４ｎｇ／ｍｌの天然ＩＬ－５を含有する培養上清の１：２漸減液をプレートに加えた。上清を抗体とともに室温で１時間インキュベートし、洗浄し、次いで、０．５％ＢＳＡを添加したＰＢＳで希釈した１μｇ／ｍｌビオチン化抗ＩＬ－５抗体（Ｆｉｓｈｅｒ、ＭＭ５５０ＣＢ）を１００μｌ／ウェルでプレートに室温で１時間加えた。ストレプトアビジン－ＨＲＰ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、ＲＰＮ４４０１Ｖ）を検出に使用し、０．５％ＢＳＡを添加したＰＢＳで１：５５００希釈し（１００μｌ／ウェル）、室温で２０分間インキュベートした後、１００μｌ／ウェルのＴＭＢ基質を５分間添加し、その後、１００μｌ／ウェルの１Ｍ Ｈ２ＳＯ４を用いて反応を停止させた。吸光度をスペクトルＭＡＸプレートリーダー（Ｂｉｏｍａｘ、０８８２６１；全点を二反復で行った）を用いて４５０ｎｍで読み取った。ＩＬ－５を欠くまたは捕捉抗体（２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１、メポリズマブおよび陰性対照抗体）不在の培養上清を用いた対照条件も評価した。
天然ＩＬ－５と結合する２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１、メポリズマブおよび陰性対照抗体（パスコリズマブおよび抗ＲＳＶ）の能力を決定した。２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１、メポリズマブまたは対照抗体を、ＰＢＳで１μｇ／ｍｌ／２００μｌ／ウェルの濃度に希釈し、ＭＡＸＩＳＯＲＰ ＥＬＩＳＡプレート（Ｎｕｎｃ、１０３９４７５１）上で４℃にて一晩インキュベートし、その後、洗浄した（総ての洗浄工程は、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０を添加したＰＢＳ ２００μｌ／ウェルを使用した）。プレートを、１％ＢＳＡ（Ｓｉｇｍａ、Ａ９５７６）を添加したＰＢＳ ３００μｌ／ウェルで遮断した。２時間前に、４ｎｇ／ｍｌの天然ＩＬ－５を含有する培養上清の１：２漸減液をプレートに加えた。上清を抗体とともに室温で１時間インキュベートし、洗浄し、次いで、０．５％ＢＳＡを添加したＰＢＳで希釈した１μｇ／ｍｌビオチン化抗ＩＬ－５抗体（Ｆｉｓｈｅｒ、ＭＭ５５０ＣＢ）を１００μｌ／ウェルでプレートに室温で１時間加えた。ストレプトアビジン－ＨＲＰ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、ＲＰＮ４４０１Ｖ）を検出に使用し、０．５％ＢＳＡを添加したＰＢＳで１：５５００希釈し（１００μｌ／ウェル）、室温で２０分間インキュベートした後、１００μｌ／ウェルのＴＭＢ基質を５分間添加し、その後、１００μｌ／ウェルの１Ｍ Ｈ２ＳＯ４を用いて反応を停止させた。吸光度をスペクトルＭＡＸプレートリーダー（Ｂｉｏｍａｘ、０８８２６１；全点を二反復で行った）を用いて４５０ｎｍで読み取った。ＩＬ－５を欠くまたは捕捉抗体（２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１、メポリズマブおよび陰性対照抗体）不在の培養上清を用いた対照条件も評価した。
天然ＩＬ－５は、ヒト単離ＰＢＭＣを抗ＣＤ３抗体および抗ＣＤ２８抗体で刺激することによって作製した。健常なボランティアドナー（ヒト）からの血液（１００ｍｌ）をナトリウムヘパリン（１０００ＩＵ／１００ｍｌ）中に入手した。血液をＲＰＭＩ（Ｇｉｂｃｏ、３１８７００７４）で１：１希釈した後に、製造者のガイドラインに従ってＨＩＳＴＯＰＡＱＵＥフィコールおよびＬＥＵＣＯＳＥＰチューブ（Ｇｒｅｉｎｅｒ、２２７２９０）を用い、ＰＢＭＣの単離のための密度勾配遠心分離により分離した。単離後、ＰＢＭＣをＲＰＭＩで２回洗浄した（１２００ｒｐｍで２×５分回転）。２回目の洗浄の後、細胞を５０ｍｌのＲＰＭＩ（１０％ウシ胎仔血清、ペニシリン／ストレプトマイシンおよびＬ－グルタミンを添加）に再懸濁させ、そこから５００μｌのサンプルを取り、ＴＲＹＰＬＥ ＥＸＰＲＥＳＳ（Ｇｉｂｃｏ、１２６０４－０２１）と１：１混合し、ＶＩＣＥＬＬに流して細胞総数を得た。プレートを１μｇ／ｍｌの抗ＣＤ３（ＯＫＴ３、所内）および３μｇ／ｍｌの抗ＣＤ２８（所内）で３７℃にて６０分間プレコーティングし、その後、ウェルをＰＢＳで１回洗浄した。細胞を１×１０６／ｍｌに希釈し、２００μｌ／ウェル（２×１０５細胞）を抗ＣＤ３／ＣＤ２８プレコーティングウェルに加え、３７℃、５％ＣＯ２で４日間インキュベートした。刺激後、細胞上清を５０ｍｌファルコンチューブにプールし、回転させた（５分、１２００ｒｐｍ）。上清（４５ｍｌ）を新しいファルコンチューブに戻し、細胞ペレットを廃棄した。ＢＳＡ（６６７μｌ Ｓｉｇｍａから、Ａ９５７６）を４０ｍｌの上清に加え（終濃度０．５％）、２本のＶＩＶＡＳＰＩＮ ２０カラム（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ、ＶＳ０１１２）に等分し、３６００ｇ（４５００ｒｐｍ）で２×１０分遠心分離して上清を濃縮した。濃縮した上清画分をプールして４℃で保存した。アッセイ対照として、回転させなかったまたはＢＳＡを添加しなかった５ｍｌの元の上清も４℃で保存した。ＩＬ－５を欠く対照上清を得るために、無刺激上清サンプルを上記と同様に回転させ、４℃で保存した。ＩＬ－５の濃度をＱＵＡＮＴＩＫＩＮＥ ＥＬＩＳＡキット（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｄ５０００Ｂ）を用いて定量した。
方法：フローサイトメトリーによりアッセイされるＩＬ－５に媒介される好酸球の形状変化の阻害
このアッセイは、ヒト全血における２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１またはメポリズマブによる組換えＩＬ－５により媒介される好酸球の形状変化の阻害を測定するために使用した（全点を二反復で行った）。ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ Ｓｔｅｖｅｎａｇｅ献血部門から、健常なボランティアドナー（ヒト；適当な応諾を伴う）からの血液をナトリウムヘパリン（１０００ＩＵ／１００ｍｌ）に入手した(Blood from healthy volunteer donors (human; with associated appropriate consent) was obtained in sodium heparin (1000 IU/100 ml) from the GlaxoSmithKline Stevenage Blood Donation Unit.)。２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１、メポリズマブおよび対照抗体パスコリズマブおよび抗ＲＳＶをそれぞれ希釈して最終アッセイ濃度１０μｇ／ｍｌとした。抗体を最終１０ｎｇ／ｍｌの等容量の組換えＩＬ－５（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｌｏｔ＃０９１２３１２０２）とともに３７℃で１時間インキュベートした。インキュベーション後、各２０μｌの抗体／ＩＬ－５複合体サンプルを９６ディープウェルポリプロピレンプレート（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、１０００７６２１）にて、６名のドナーのうち１名からの全血８０μｌに加えた。このプレートを３７℃で３０分間インキュベートし、その後、それを氷上に置き、１：９：３０ ＣＥＬＬ ＦＩＸ：水：ＰＢＳ（この比率は好酸球の健全性に害のない条件を提供するという製造者の推奨のさらに４倍希釈である）希釈したＣＥＬＬ ＦＩＸ（ＢＤ、３４０１８１）を用い、２分間、２５０μｌ／ウェルで固定した。次に、細胞を製造者のプロトコールに従い、１ｍｌ／ウェルの氷冷ＰＨＡＲＭ ＬＹＳＥ（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ、ＲＢＣ溶解バッファー、４２０３０１）で溶解させた。サンプルを回転させ、上清を除去した後、ＦＡＣＳバッファーに再懸濁させ、ＰＥチャネルにおいてそれらの自己蛍光により好酸球にゲートを設定するＣＡＮＴＯ ＩＩでテータを取得した。ＩＬ－５の不在下での２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１、メポリズマブ、パスコリズマブおよび抗ＲＳＶの効果もまた、ＰＢＳ単独を用いて試験した。また、好酸球の形状変化に対するＩＬ－５の効果も、ＰＢＳ単独を用いて抗体の不在下で試験した。
このアッセイは、ヒト全血における２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１またはメポリズマブによる組換えＩＬ－５により媒介される好酸球の形状変化の阻害を測定するために使用した（全点を二反復で行った）。ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ Ｓｔｅｖｅｎａｇｅ献血部門から、健常なボランティアドナー（ヒト；適当な応諾を伴う）からの血液をナトリウムヘパリン（１０００ＩＵ／１００ｍｌ）に入手した(Blood from healthy volunteer donors (human; with associated appropriate consent) was obtained in sodium heparin (1000 IU/100 ml) from the GlaxoSmithKline Stevenage Blood Donation Unit.)。２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１、メポリズマブおよび対照抗体パスコリズマブおよび抗ＲＳＶをそれぞれ希釈して最終アッセイ濃度１０μｇ／ｍｌとした。抗体を最終１０ｎｇ／ｍｌの等容量の組換えＩＬ－５（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｌｏｔ＃０９１２３１２０２）とともに３７℃で１時間インキュベートした。インキュベーション後、各２０μｌの抗体／ＩＬ－５複合体サンプルを９６ディープウェルポリプロピレンプレート（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、１０００７６２１）にて、６名のドナーのうち１名からの全血８０μｌに加えた。このプレートを３７℃で３０分間インキュベートし、その後、それを氷上に置き、１：９：３０ ＣＥＬＬ ＦＩＸ：水：ＰＢＳ（この比率は好酸球の健全性に害のない条件を提供するという製造者の推奨のさらに４倍希釈である）希釈したＣＥＬＬ ＦＩＸ（ＢＤ、３４０１８１）を用い、２分間、２５０μｌ／ウェルで固定した。次に、細胞を製造者のプロトコールに従い、１ｍｌ／ウェルの氷冷ＰＨＡＲＭ ＬＹＳＥ（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ、ＲＢＣ溶解バッファー、４２０３０１）で溶解させた。サンプルを回転させ、上清を除去した後、ＦＡＣＳバッファーに再懸濁させ、ＰＥチャネルにおいてそれらの自己蛍光により好酸球にゲートを設定するＣＡＮＴＯ ＩＩでテータを取得した。ＩＬ－５の不在下での２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１、メポリズマブ、パスコリズマブおよび抗ＲＳＶの効果もまた、ＰＢＳ単独を用いて試験した。また、好酸球の形状変化に対するＩＬ－５の効果も、ＰＢＳ単独を用いて抗体の不在下で試験した。
方法：血清安定性試験
２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１を、そのままプールした無菌のヒト血清（ＧＳＫ Ｓｔｅｖｅｎａｇｅ献血部門）またはそのままプールした無菌のカニクイザル血清（ＳｅｒａＬａｂｓから）のいずれかに希釈して、それぞれ目的濃度１２０μｇ／ｍｌで２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１を含有する４ｍｌとした。次に、各血清サンプル（ヒトまたはカニクイザル）を無菌の２ｍｌマイクロ遠沈管にて５×７５０μｌアリコートに分割し、堅く蓋を閉めた。次に、各血清種のアリコートをすぐにドライアイス上に置き、凍結させてＴ０サンプルとし、その後、保存のために－８０℃に移した。残りのアリコートを３７℃、５％ＣＯ２に設定した加湿組織培養インキュベーターに置いた。１、２、４および６週間後、各血清種の１アリコートを取り出し、前の通りにドライアイス上で凍結させた後、保存のために－８０℃に移した。ｉｎ ｖｉｔｒｏ安定性試験は、６週サンプルの取り出しと保存時に完了した。
２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１を、そのままプールした無菌のヒト血清（ＧＳＫ Ｓｔｅｖｅｎａｇｅ献血部門）またはそのままプールした無菌のカニクイザル血清（ＳｅｒａＬａｂｓから）のいずれかに希釈して、それぞれ目的濃度１２０μｇ／ｍｌで２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１を含有する４ｍｌとした。次に、各血清サンプル（ヒトまたはカニクイザル）を無菌の２ｍｌマイクロ遠沈管にて５×７５０μｌアリコートに分割し、堅く蓋を閉めた。次に、各血清種のアリコートをすぐにドライアイス上に置き、凍結させてＴ０サンプルとし、その後、保存のために－８０℃に移した。残りのアリコートを３７℃、５％ＣＯ２に設定した加湿組織培養インキュベーターに置いた。１、２、４および６週間後、各血清種の１アリコートを取り出し、前の通りにドライアイス上で凍結させた後、保存のために－８０℃に移した。ｉｎ ｖｉｔｒｏ安定性試験は、６週サンプルの取り出しと保存時に完了した。
血清インキュベーションの経時的推移にわたって２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１を定量するために、ｉｎ ｖｉｔｒｏ血清安定性試験から得られたサンプルをＭＳＤ（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ）ＩＬ－５捕捉イムノアッセイで試験した。捕捉試薬としてビオチン化ＩＬ－５を使用したために、ＩＬ－５に対して活性を有する分子のみが捕捉され、次いで、検出され、従って、経時的に検出された再生の変化は、活性のある２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１の減少を表した。６週のインキュベーションの完了後に、総てのサンプルを単一のアッセイで一緒に試験した。
ＩＬ－５捕捉イムノアッセイは、組織培養グレードＰＢＳ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、＃Ｄ８５３７）で希釈した２μｇ／ｍｌの５０μｌのＮＥＵＴＲアビジン（Ｔｈｅｒｍｏ－Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、＃３１０００）でコーティングした９６ウェル標準結合ＭＳＤプレート（ＭＳＤ、＃Ｌ１５ＸＡ－６）を用いて行った。プレートを一晩＋４℃で置いた。コーティングプレートは自動プレート洗浄機（Ｂｉｏｔｅｋ ＥＬｘ４０５）を用いて洗浄し、各ウェルを３００μｌのＰＢＳ＋０．１％ＴＷＥＥＮ－２０で３回洗浄した。洗浄後、残留する液体を除去するためにプレートをペーパータオルに打ち付けた。次に、総てのプレートを１５０μｌのアッセイバッファー（ＰＢＳ＋５％ＢＳＡ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、＃Ａ７０３０）＋１％ＴＷＥＥＮ－２０（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、＃ＢＰ３３７））で遮断した。プレートをおよそ７５０ｒｐｍに設定したプレートロッカー（Ｈｅｉｄｏｌｐｈ ＴＩＴＲＡＭＡＸ １０００）（一貫して使用）にて室温で１時間インキュベートした後、前述のように洗浄した。ビオチン化ヒトＩＬ－５（ＧＳＫ試薬）をアッセイバッファーで１００ｎｇ／ｍｌに希釈し、この２５μｌを遮断および洗浄したプレートの総てのウェルに加えた。次に、プレートをプレートロッカーにて室温で少なくとも１時間インキュベートし、その後、従前に記載したように洗浄した。ビオチン化ＩＬ５とのインキュベーションの際に、２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１標準曲線および試験サンプルを作製した。２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１標準曲線は、アッセイバッファーで２５０ｎｇ／ｍｌの最高濃度に希釈することにより作製した。次に、１１希釈点の総てで希釈倍率２．５を用いてこれを連続希釈し、１２点目はアッセイブランクとしてアッセイバッファー単独とした。総ての試験血清安定性サンプルを、アッセイバッファーで２０００、２０，０００および２００，０００の希釈倍率を用いて希釈した。そのままの各サンプルを、希釈間で最小２０μｌを用い、希釈倍率１０以下の連続希釈を使用することにより希釈した（すなわち、希釈倍率２０００は、３連続の１０倍希釈の後に２倍希釈を行うことによって達成された）。ビオチン化ＩＬ－５とのインキュベーションが完了し、プレートが洗浄されたところで、２５μｌの２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１標準曲線を三反復で加えた後、２５μｌの各試験サンプルを各希釈で、二反復で加えた。次に、プレートをプレートロッカーにて室温で少なくとも１時間インキュベートし、その後、前述のように洗浄した。結合した２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１を検出するために、マウスモノクローナル抗ヒトＦｃ ＳＵＫＦＯＴＡＧ（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ、＃９０４０－０１からの非標識抗体を用いて標識）をアッセイバッファーで５００ｎｇ／ｍｌに希釈し、２５μｌを総てのウェルに加えた。次に、プレートをプレートロッカーにて室温で少なくとも１時間インキュベートし、その後、前述のように洗浄した。界面活性剤を含むＭＳＤリードバッファーＴを蒸留Ｈ２Ｏで１×検量線用溶液に希釈し、次いで、１５０μｌを総てのウェルに加えた。その後、ＳＥＣＴＯＲ ６０００ ＭＳＤイメジャーを用いてプレートを読み取った。次に、ヒト血清またはカニクイザル血清のいずれかで測定された２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１の平均濃度を、
Ｔ０％＝［試験サンプル中の濃度／Ｔ０サンプル中の濃度］＊１００
を用いて、Ｔ０サンプルにおいて決定された濃度の％に対して正規化した。
Ｔ０％＝［試験サンプル中の濃度／Ｔ０サンプル中の濃度］＊１００
を用いて、Ｔ０サンプルにおいて決定された濃度の％に対して正規化した。
２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１に関して得られた血清安定性データを関連付けて示すために、これをＩＬ－１３特異的対照抗体に関して履歴的に得られたデータと一緒にプロットした。これらの分子に使用した血清安定性設定は、使用した時点が０、２、４および６週間であったこと、および使用したヒトおよびカニクイザル血清のバッチが異なっていたこと以外は上記と同一であった。メポリズマブサンプルの分析は、５００ｎｇ／ｍｌから始まるメポリズマブ標準曲線を使用したこと、およびサンプルが希釈倍率１０００のみを用いて試験されたこと以外は、上記と同様であった。ＩＬ－１３特異的対照抗体サンプルの分析は、抗体標準曲線が５００ｎｇ／ｍｌから始まったこと、サンプルが希釈倍率１０００のみを用いて試験されたこと、およびここに報告されるデータに関して、ＩＬ－１３捕捉アッセイが使用され、ここでは、アッセイバッファー中１００ｎｇ／ｍｌのビオチン化ＩＬ－１３（ＧＳＫ内部試薬）がビオチン化ＩＬ－５の代わりに使用されたこと以外は、上記と同様であった。データは、上記のようにＴ０の値に対して正規化した。
方法：カニクイザルｉｎ ｖｉｖｏ ＰＫ／ＰＤ
この試験は、４群のカニクイザル（Macaca fascicularis、２～５歳、体重２～６ｋｇ、モーリシャス起源の研究目的繁殖(purpose bred)の純血種）を含んでなり、各群は２個体の雄と２個体の雌からなった。カニクイザルは各檻に同性の４個体を、社会的相互作用、遊びおよび探究を促すように高密度環境で収容した。試験の際、各動物は、試験を通して平均２００ｇ／日の標準比率（ＰＭＩ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｒｔｉｆｉｅｄ霊長類餌Ｎｏ．５Ｓ４８（２５％タンパク質）およびＳｐｅｃｉａｌ Ｄｉｅｔｓ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ （ＳＤＳ） Ｍａｚｕｒｉ Ｅｘｐａｎｄｅｄ Ｓｈｏｒｔ（ＭＰ（Ｅ） ｓｈｏｒｔ ＳＱＣ））餌および自由に水を摂取した。好酸球数を含む完全な血液細胞数を投与前とその後は投与後１または２週間毎に決定した（６か月間）。１日目に動物に静脈内ボーラス注射によって２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１（０．０５ｍｇ／ｋｇまたは１ｍｇ／ｋｇ）、メポリズマブ（１ｍｇ／ｋｇ）、またはビヒクルのいずれかを投与した。血液細胞数に加え、試験物質ＰＫおよび総ＩＬ－５測定を行った。
この試験は、４群のカニクイザル（Macaca fascicularis、２～５歳、体重２～６ｋｇ、モーリシャス起源の研究目的繁殖(purpose bred)の純血種）を含んでなり、各群は２個体の雄と２個体の雌からなった。カニクイザルは各檻に同性の４個体を、社会的相互作用、遊びおよび探究を促すように高密度環境で収容した。試験の際、各動物は、試験を通して平均２００ｇ／日の標準比率（ＰＭＩ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｒｔｉｆｉｅｄ霊長類餌Ｎｏ．５Ｓ４８（２５％タンパク質）およびＳｐｅｃｉａｌ Ｄｉｅｔｓ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ （ＳＤＳ） Ｍａｚｕｒｉ Ｅｘｐａｎｄｅｄ Ｓｈｏｒｔ（ＭＰ（Ｅ） ｓｈｏｒｔ ＳＱＣ））餌および自由に水を摂取した。好酸球数を含む完全な血液細胞数を投与前とその後は投与後１または２週間毎に決定した（６か月間）。１日目に動物に静脈内ボーラス注射によって２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１（０．０５ｍｇ／ｋｇまたは１ｍｇ／ｋｇ）、メポリズマブ（１ｍｇ／ｋｇ）、またはビヒクルのいずれかを投与した。血液細胞数に加え、試験物質ＰＫおよび総ＩＬ－５測定を行った。
方法：ＰＫデータ
１日目に動物に試験物質を投与し、抗凝固剤を添加せずに大腿静脈から採血することによりサンプルを採取した（表２０および表２１参照）。サンプル採取は、血液学的（好酸球）採血スケジュールと合わせるために午後のできるだけ遅くに（１～３ｐｍ）行った。サンプルを周囲温度で少なくとも１時間凝固させた後、４℃にて２５００ｇで１０分間遠心分離した。得られた血清を分離し、独自にラベルを付けたＳｔａｎｄａｒｄ Ｓａｒｓｔｅｄｔチューブに移し、すぐにドライアイス上で凍結させ、その後、－８０℃で保存した。
１日目に動物に試験物質を投与し、抗凝固剤を添加せずに大腿静脈から採血することによりサンプルを採取した（表２０および表２１参照）。サンプル採取は、血液学的（好酸球）採血スケジュールと合わせるために午後のできるだけ遅くに（１～３ｐｍ）行った。サンプルを周囲温度で少なくとも１時間凝固させた後、４℃にて２５００ｇで１０分間遠心分離した。得られた血清を分離し、独自にラベルを付けたＳｔａｎｄａｒｄ Ｓａｒｓｔｅｄｔチューブに移し、すぐにドライアイス上で凍結させ、その後、－８０℃で保存した。
カニクイザル血清サンプルからの２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１およびメポリズマブの濃度は、ＧＹＲＯＬＡＢ Ｗｏｒｋ Ｓｔａｔｉｏｎ（Ｇｙｒｏｓ、Ｐ０００４９４３）プラットフォームを用いたイムノアッセイにより決定した。ビオチン化組換えヒトＩＬ－５捕捉（所内試薬）および２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１標準（カニクイザル血清中）をＲＥＸＸＩＰ Ａバッファー（Ｇｙｒｏｓ、Ｐ０００４８２０）で希釈し、ＡＬＥＸＡ－６４７標識抗ヒトＩｇＧ検出（クローンＪＤＣ－１０）はＲＥＸＸＩＰ Ｆバッファー（Ｇｙｒｏｓ、Ｐ０００４８２５）で希釈した。このアッセイは、ＢＩＯＡＦＦＹ １０００ ＣＤ（Ｇｙｒｏｓ、Ｐ０００４２５３）にて、２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１は３０～１０，０００ｎｇ／ｍｌの範囲、メポリズマブは１００～１０，０００ｎｇ／ｍｌの範囲でバリデートされた。２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１の血清濃度値は、予想される範囲内であった。表２０ 凡例／説明：ＰＫおよび総ＩＬ－５アッセイのためのカニクイザル血液サンプル採取スケジュール。採血容量は０．７ｍｌ（＊は０．５ｍｌ）であった。表２１ 凡例／説明：血液学的サンプル収集スケジュール。
方法：総ＩＬ－５データ
動物に、ＰＫデータ収集に関して記載したように投与、血液サンプル採取および処理を行った。カニクイザルＩＬ－５の標準曲線（終濃度２．４４～１０，０００ｐｇ／ｍｌ）をプールしたカニクイザル血清（ＳｅｒａＬａｂ、Ｓ－１１８－Ｄ）で１：４連続希釈する終濃度の２倍で作製した。また、４種類のＱＣスパイクＩＬ ５対照も、プールしたカニクイザル血清を用いて必要とされる終濃度（５０００、５００、５０および０ｐｇ／ｍｌ ＩＬ－５）の２倍で作製した（抗体カクテルでは１：２希釈からなるように）。次に、各標準／ＱＣスパイク対照／血清試験サンプルを新しい９６ウェルポリプロピレンプレートに移した（５０μｌ）。捕捉ｍＡｂとして終濃度０．５μｇ／ｍｌの抗ヒトＩＬ－５－ビオチンコンジュゲートｍＡｂ（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ、１０１１８－０８）および検出ｍＡｂとして終濃度０．５μｇ／ｍｌでラット抗ヒトＩＬ－５スルホタグ付きｍＡｂ（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ、１０１１８－１４（所内ＭＳＤスルホタグ付き））を用いて、捕捉抗体カクテルおよび検出抗体カクテルを作製した。捕捉抗体および検出抗体は両方とも、アッセイバッファー（ＲＫ／ＣＩバッファー：［６．４ｍＭのＥＤＴＡ、５．１ｍＭのＥＧＴＡ、５０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１４９．２ｍＭのＮａＣｌ、１％トリトンＸ－１００、１％ＢＳＡ、ｐＨ７．４］）中に、標準／サンプル／対照中１：２希釈からなるように終濃度の２倍で作製した。抗体カクテル（５０μｌ）を各標準／ＱＣスパイク対照／試験血清サンプルに加え、暗所で振盪しながら（６００ｒｐｍ）、室温で３時間インキュベートした。ストレプトアビジンゴールドＭＳＤプレート（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ、Ｌ１５ＳＡ－１）を１５０μｌ／ウェルのＭＳＤ遮断バッファー（ＰＢＳ中３％ＭＳＤブロッカーＡ（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ、Ｒ９３ＢＡ－１））で遮断し、振盪しながら（６００ｒｐｍ）室温で１時間インキュベートした。抗体カクテルおよび標準／ＱＣスパイク対照／試験血清サンプルの３時間のインキュベーション後に、２５μｌ／ウェルを二反復（またはＱＣスパイク対照の場合は三反復）で、遮断および洗浄した（ＳＫＡＮ ＷＡＨＥＲ ３００、Ｓｋａｔｒｏｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）ＭＳＤストレプトアビジンゴールドプレートに移した。次に、このプレートを振盪しながら（６００ｒｐｍ）室温で１時間インキュベートした。このインキュベーション後に、次に、プレートを洗浄した（ＳＫＡＮ ＷＡＳＨＥＲ ３００、Ｓｋａｔｒｏｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）。リードバッファーＴ（２倍）を作製し、１５０μｌ／ウェルをＭＳＤストレプトアビジンゴールドプレートの各ウェルに加えた。その後、電気化学発光を、ＭＳＤ Ｓｅｃｔｏｒ Ｓ ６００（モデル１２０１）を用いて１５分以内に定量した。
動物に、ＰＫデータ収集に関して記載したように投与、血液サンプル採取および処理を行った。カニクイザルＩＬ－５の標準曲線（終濃度２．４４～１０，０００ｐｇ／ｍｌ）をプールしたカニクイザル血清（ＳｅｒａＬａｂ、Ｓ－１１８－Ｄ）で１：４連続希釈する終濃度の２倍で作製した。また、４種類のＱＣスパイクＩＬ ５対照も、プールしたカニクイザル血清を用いて必要とされる終濃度（５０００、５００、５０および０ｐｇ／ｍｌ ＩＬ－５）の２倍で作製した（抗体カクテルでは１：２希釈からなるように）。次に、各標準／ＱＣスパイク対照／血清試験サンプルを新しい９６ウェルポリプロピレンプレートに移した（５０μｌ）。捕捉ｍＡｂとして終濃度０．５μｇ／ｍｌの抗ヒトＩＬ－５－ビオチンコンジュゲートｍＡｂ（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ、１０１１８－０８）および検出ｍＡｂとして終濃度０．５μｇ／ｍｌでラット抗ヒトＩＬ－５スルホタグ付きｍＡｂ（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ、１０１１８－１４（所内ＭＳＤスルホタグ付き））を用いて、捕捉抗体カクテルおよび検出抗体カクテルを作製した。捕捉抗体および検出抗体は両方とも、アッセイバッファー（ＲＫ／ＣＩバッファー：［６．４ｍＭのＥＤＴＡ、５．１ｍＭのＥＧＴＡ、５０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１４９．２ｍＭのＮａＣｌ、１％トリトンＸ－１００、１％ＢＳＡ、ｐＨ７．４］）中に、標準／サンプル／対照中１：２希釈からなるように終濃度の２倍で作製した。抗体カクテル（５０μｌ）を各標準／ＱＣスパイク対照／試験血清サンプルに加え、暗所で振盪しながら（６００ｒｐｍ）、室温で３時間インキュベートした。ストレプトアビジンゴールドＭＳＤプレート（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ、Ｌ１５ＳＡ－１）を１５０μｌ／ウェルのＭＳＤ遮断バッファー（ＰＢＳ中３％ＭＳＤブロッカーＡ（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ、Ｒ９３ＢＡ－１））で遮断し、振盪しながら（６００ｒｐｍ）室温で１時間インキュベートした。抗体カクテルおよび標準／ＱＣスパイク対照／試験血清サンプルの３時間のインキュベーション後に、２５μｌ／ウェルを二反復（またはＱＣスパイク対照の場合は三反復）で、遮断および洗浄した（ＳＫＡＮ ＷＡＨＥＲ ３００、Ｓｋａｔｒｏｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）ＭＳＤストレプトアビジンゴールドプレートに移した。次に、このプレートを振盪しながら（６００ｒｐｍ）室温で１時間インキュベートした。このインキュベーション後に、次に、プレートを洗浄した（ＳＫＡＮ ＷＡＳＨＥＲ ３００、Ｓｋａｔｒｏｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）。リードバッファーＴ（２倍）を作製し、１５０μｌ／ウェルをＭＳＤストレプトアビジンゴールドプレートの各ウェルに加えた。その後、電気化学発光を、ＭＳＤ Ｓｅｃｔｏｒ Ｓ ６００（モデル１２０１）を用いて１５分以内に定量した。
方法：好酸球数
２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１により媒介されるＩＬ－５中和活性のバイオマーカーとして好酸球数の減少を使用した。試験物質の投与前に、３９個体の動物のパネルに好酸球レベルに関してプレスクリーニングを行い（－５１および－４４日）、好酸球レベル（≧１８０好酸球／μＬ）を有する動物を試験に移行するために選択した。より高い好酸球数を有する動物は、それらが好酸球抑制のレベルを測定するためにより大きなアッセイウインドウを提供するであろうという仮定に基づいて選択した。動物が飼育下繁殖し、クリーンルーム条件で生きているために、それらが野生動物よりも少ないベースライン好酸球数を持っており、これらのより少ない好酸球値は、薬物によって抑制された場合に定量下限を下回るほど減少する可能性があるという懸念があった。また、一部の動物は好酸球数に広い変動を示したこともプレスクリーニング期に明らかとなった。この変動の原因は不明であるが、環境、ストレス、またはホルモン変化などの複数の因子に帰すことができる。
２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１により媒介されるＩＬ－５中和活性のバイオマーカーとして好酸球数の減少を使用した。試験物質の投与前に、３９個体の動物のパネルに好酸球レベルに関してプレスクリーニングを行い（－５１および－４４日）、好酸球レベル（≧１８０好酸球／μＬ）を有する動物を試験に移行するために選択した。より高い好酸球数を有する動物は、それらが好酸球抑制のレベルを測定するためにより大きなアッセイウインドウを提供するであろうという仮定に基づいて選択した。動物が飼育下繁殖し、クリーンルーム条件で生きているために、それらが野生動物よりも少ないベースライン好酸球数を持っており、これらのより少ない好酸球値は、薬物によって抑制された場合に定量下限を下回るほど減少する可能性があるという懸念があった。また、一部の動物は好酸球数に広い変動を示したこともプレスクリーニング期に明らかとなった。この変動の原因は不明であるが、環境、ストレス、またはホルモン変化などの複数の因子に帰すことができる。
試験のために１６個体の動物が選択されたところで、それらを試験檻に再収容し（各檻に同性４個体）、新しい環境に馴化させた。馴化期間中、３回の投与前血液学的計数を行った（－２１、－１４、および－７日）。１日目に動物に試験物質を投与し、抗凝固剤としてＥＤＴＡを用い、大腿静脈から０．５ｍｌの血液を採取することによってサンプリングした。血中好酸球レベルの日中変動を制御するために、サンプリングは午後のできるだけ遅く（１～３ｐｍ）に行った。収集後、サンプルは各時点で６０分の最終サンプル収集の範囲内で処理し、ＡＤＶＩＡ １２０血液分析装置（Ｓｉｅｍｅｎｓ）を用い、ペルオキシダーゼ法および好塩基球／小葉性法を用いて定量的に測定した。
実施例２
２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１はまた、４週単一用量および２６週反復用量ＧＬＰ毒性（１０および１００ｍｇ／ｋｇ／週）試験でも評価した。これらの試験では、２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１をカニクイザルの皮下に投与した。２６週試験の投与中止期間が進行中であり（２０１７年５月）、従って、投与期間の終了までの前処置中に作成したデータを示す中間報告をここに報告する。この試験で達成された全身曝露は表２２に示す。これらの試験および関連の分析を行うために標準的な方法を使用した。表２２ 凡例／説明：カニクイザルにおける２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１の皮下投与後の平均全身曝露の比較評価。表２３ 凡例／説明：カニクイザルにおける単回ＩＶまたはＳＣ注射後の２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１の平均薬物動態パラメーター。表２４ 凡例／説明：カニクイザルＮＯＡＥＬデータを皮下投与される用量で予測されるヒトデータと比較した場合の安全域（「安全カバー」）。
２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１はまた、４週単一用量および２６週反復用量ＧＬＰ毒性（１０および１００ｍｇ／ｋｇ／週）試験でも評価した。これらの試験では、２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１をカニクイザルの皮下に投与した。２６週試験の投与中止期間が進行中であり（２０１７年５月）、従って、投与期間の終了までの前処置中に作成したデータを示す中間報告をここに報告する。この試験で達成された全身曝露は表２２に示す。これらの試験および関連の分析を行うために標準的な方法を使用した。表２２ 凡例／説明：カニクイザルにおける２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１の皮下投与後の平均全身曝露の比較評価。表２３ 凡例／説明：カニクイザルにおける単回ＩＶまたはＳＣ注射後の２８Ｙ０４２－７Ｆ１１－１の平均薬物動態パラメーター。表２４ 凡例／説明：カニクイザルＮＯＡＥＬデータを皮下投与される用量で予測されるヒトデータと比較した場合の安全域（「安全カバー」）。
実施例３
非公式配列表
以下の下線は、抗体の重鎖可変部分および軽鎖可変部分における、ＣＤＲのＫａｂａｔ定義に従うＣＤＲ配列、これらのＣＤＲ配列をコードする核酸配列を特定する。例えば、配列番号１では、示された配列のフレームワークおよびＣＤＲは、アミノ近位部分からカルボキシ末端部分の順に、プレーンテキストフレームワーク１、下線のＣＤＲ１、プレーンテキストフレームワーク２、下線のＣＤＲ２、プレーンテキストフレームワーク３、下線のＣＤＲ３およびプレーンテキストフレームワーク４として表される。このスキームは、例えば、配列番号１～４で使用される。これらの配列中に示されるアミノ末端メチオニン残基は切断され得る。よって、ここでアミノ末端メチオニン残基を示す配列は、このようなアミノ末端メチオニン残基を欠くこれらのタンパク質の切断型を開示することも考慮されるべきである。核酸配列はＤＮＡ核酸配列として表され、「ｔ」核酸残基を含み、対応するＲＮＡ配列は、「ｔ」核酸残基が「ｕ」核酸残基を開示するとも見なされ得るように開示されることも考慮されるべきである。加えて、５’近位の「ａｔｇ」開始コドンおよび３’近位の「ｔａａ」、「ｔａｇ」および「ｔｇａ」終止コドンは、以下のｃＤＮＡ核酸配列からは省略されている。
非公式配列表
以下の下線は、抗体の重鎖可変部分および軽鎖可変部分における、ＣＤＲのＫａｂａｔ定義に従うＣＤＲ配列、これらのＣＤＲ配列をコードする核酸配列を特定する。例えば、配列番号１では、示された配列のフレームワークおよびＣＤＲは、アミノ近位部分からカルボキシ末端部分の順に、プレーンテキストフレームワーク１、下線のＣＤＲ１、プレーンテキストフレームワーク２、下線のＣＤＲ２、プレーンテキストフレームワーク３、下線のＣＤＲ３およびプレーンテキストフレームワーク４として表される。このスキームは、例えば、配列番号１～４で使用される。これらの配列中に示されるアミノ末端メチオニン残基は切断され得る。よって、ここでアミノ末端メチオニン残基を示す配列は、このようなアミノ末端メチオニン残基を欠くこれらのタンパク質の切断型を開示することも考慮されるべきである。核酸配列はＤＮＡ核酸配列として表され、「ｔ」核酸残基を含み、対応するＲＮＡ配列は、「ｔ」核酸残基が「ｕ」核酸残基を開示するとも見なされ得るように開示されることも考慮されるべきである。加えて、５’近位の「ａｔｇ」開始コドンおよび３’近位の「ｔａａ」、「ｔａｇ」および「ｔｇａ」終止コドンは、以下のｃＤＮＡ核酸配列からは省略されている。
本発明はここに十分に記載されており、添付の特許請求の範囲の趣旨または範囲から逸脱することなく、これに多くの変更および修飾を行えることが当業者には自明である。
２０１７年５月２６日に作成され、２１，８５１バイトのサイズの「PU66209P_US_SeqList [,]」の名称のＡＳＣＩＩテキストファイルの資料は、引用することによりその全内容が本明細書の一部とされる。
Claims (18)
- 配列番号３に示されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域配列と；配列番号４に示されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域配列とを含んでなる、抗原結合タンパク質。
- ２５２番目にチロシン残基、２５４番目にトレオニン残基および２５６番目にグルタミン酸残基を有する重鎖Ｆｃドメインを含んでなり、配列番号１に示されるように前記重鎖Ｆｃドメインのアミノ末端が前記重鎖可変領域のカルボキシ末端に連結されている、請求項１に記載の抗原結合タンパク質。
- 抗体である、請求項１または２に記載の抗原結合タンパク質。
- 配列番号１に示されるアミノ酸配列を有する重鎖と配列番号２に示されるアミノ酸配列を有する軽鎖とを含んでなる、請求項３に記載の抗体。
- 以下から選択される組成物：（ｉ）請求項１に記載の重鎖可変領域および請求項１に記載の抗原結合タンパク質の軽鎖可変領域をコードする核酸を含んでなる組成物、および（ｉｉ）請求項１に記載の重鎖可変領域のカルボキシ末端に連結された重鎖Ｆｃドメインおよび請求項１に記載の軽鎖可変領域をコードする核酸を含んでなる組成物。
- （ｉ）配列番号３に示されるアミノ酸配列をコードする核酸および配列番号４に示されるアミノ酸配列をコードする核酸、または（ｉｉ）配列番号１に示されるアミノ酸配列をコードする核酸および配列番号２に示されるアミノ酸配列をコードする核酸
を含んでなる、発現ベクター。 - 請求項６に記載の発現ベクターを含んでなる、宿主細胞。
- 配列番号１５および配列番号１６で示される単離された核酸配列を含んでなる、発現ベクター。
- 配列番号１７および配列番号１８に示される単離された核酸配列を含んでなる、発現ベクター。
- 請求項９に記載の発現ベクターを含んでなる、宿主細胞。
- ａ）請求項７または１０に記載の宿主細胞を培養する工程、およびｂ）産生される前記結合タンパク質または抗体を回収する工程を含む、請求項１～４のいずれか一項に記載の結合タンパク質または抗体を製造する方法。
- 請求項１１に記載の方法により得られる、結合タンパク質または抗体。
- 請求項１～４および１２のいずれか一項に記載の抗原結合タンパク質または抗体を含んでなる、医薬組成物。
- 皮下または静脈内投与のための、請求項１３に記載の医薬組成物。
- 療法に使用するための、請求項１～４および１２に記載のタンパク質もしくは抗体、または請求項１３または１４に記載の医薬組成物。
- 請求項１５に記載の使用のための医薬組成物であって、喘息、軽症喘息、中等症喘息、重症喘息、軽症好酸球性喘息、中等症好酸球性喘息、重症好酸球性喘息、管理不良好酸球性喘息、好酸球性喘息、準好酸球性喘息、慢性閉塞性肺疾患、好酸球性多発血管炎性肉芽腫症、好酸球増加症候群、鼻ポリープ、水疱性類天疱瘡、好酸球性食道炎、アトピー性皮膚炎、中等症アトピー性皮膚炎および重症アトピー性皮膚炎からなる群から選択される疾患の処置に使用するための医薬組成物。
- 前記使用が、患者が重症喘息および過去１２か月に血液１μＬ当たり１５０個以上の血中好酸球を有する重症好酸球性喘息を治療することである、請求項１６に記載の使用のためのタンパク質、抗体または医薬組成物。
- ３か月毎に１回または６か月毎に１回投与するための、請求項１６に記載の医薬組成物。
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