CN117018190A - 生物制药组合物和相关方法 - Google Patents

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Abstract

本公开涉及用于治疗白介素5(IL‑5)介导的疾病的抗原结合组合物，包括抗体，以及相关方法。IL‑5是一种分泌蛋白。IL‑5在多种不同疾病中起作用，例如哮喘、轻度哮喘、中度哮喘、重度哮喘、轻度嗜酸性哮喘、中度嗜酸性哮喘、重度嗜酸性哮喘、不受控制的嗜酸性哮喘、嗜酸性哮喘、亚嗜酸性哮喘、慢性阻塞性肺疾病、嗜酸性肉芽肿伴多血管炎、高嗜酸性粒细胞增多综合征、鼻息肉病、大疱性类天疱疮、嗜酸性食管炎、特应性皮炎、中度特应性皮炎和重度特应性皮炎。公开的组合物适合于治疗这些严重的IL‑5介导的疾病。

Description

生物制药组合物和相关方法
本申请是基于申请日为2018年5月24日，优先权日为2017年5月26日，申请号为201880046323.0，发明名称为“生物制药组合物和相关方法”的专利申请的分案申请。
发明领域
本公开涉及用于治疗白介素5(IL-5)介导的疾病的组合物和相关方法。
发明背景
IL-5是一种分泌蛋白。IL-5在多种不同疾病中起作用，例如哮喘、轻度哮喘、中度哮喘、重度哮喘、轻度嗜酸性哮喘、中度嗜酸性哮喘、重度嗜酸性哮喘、不受控制的嗜酸性哮喘、嗜酸性哮喘、亚嗜酸性哮喘、慢性阻塞性肺疾病、嗜酸性肉芽肿伴多血管炎、高嗜酸性粒细胞增多综合征、鼻息肉病、大疱性类天疱疮、嗜酸性食管炎、特应性皮炎、中度特应性皮炎和重度特应性皮炎。这些严重的疾病影响着全世界亿万人民。
这意味着需要适合于治疗IL-5介导的疾病的组合物。本公开提供了此类组合物和相关方法。
发明概述
本公开的一方面是抗原结合蛋白，其包含重链可变区，所述重链可变区具有SEQID NO:5中所示的CDRH1氨基酸序列，SEQ ID NO:6中所示的CDRH2氨基酸序列和SEQ ID NO:7中所示的CDRH3氨基酸序列；以及轻链可变区，所述轻链可变区具有SEQ ID NO:8中所示的CDRL1氨基酸序列，SEQ ID NO:9中所示的CDRL2氨基酸序列和SEQ ID NO:10中所示的CDRL3氨基酸序列。
本公开的另一方面是抗原结合蛋白，其包含具有SEQ ID NO:3中所示的氨基酸序列的重链可变区序列；以及具有SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列的轻链可变区序列。
本公开的另一方面是抗体，其包含重链和轻链，其中a)重链包含重链可变区，所述重链可变区具有SEQ ID NO:5中所示的CDRH1氨基酸序列，SEQ ID NO:6中所示的CDRH2氨基酸序列和SEQ ID NO:7中所示的CDRH3氨基酸序列；并且b)轻链包含轻链可变区，所述轻链可变区具有SEQ ID NO:8中所示的CDRL1氨基酸序列，SEQ ID NO:9中所示的CDRL2氨基酸序列和SEQ ID NO:10中所示的CDRL3氨基酸序列。
本公开的另一方面是抗体，其包含重链和轻链，其中a)重链包含具有SEQ ID NO:3中所示的氨基酸序列的重链可变区序列；并且b)轻链包含具有SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列的轻链可变区序列。
本公开的另一方面是抗体，其包含具有SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列的轻链。
本公开的另一方面是肽链，其包含SEQ ID NO:3中所示的氨基酸序列。
本公开的另一方面是肽链，其包含SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列。
本公开的另一方面是组合物，其包含编码SEQ ID NO:3中所示的氨基酸序列的核酸和编码SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列的核酸。
本公开的另一方面是组合物，其包含编码SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列的核酸和编码SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列的核酸。
本公开的另一方面是组合物，其包含编码SEQ ID NO:3中所示的氨基酸序列的核酸。
本公开的另一方面是组合物，其包含编码SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列的核酸。
本公开的另一方面是组合物，其包含具有SEQ ID NO:15中所示的序列的核酸和具有SEQ ID NO:16中所示的序列的核酸。
本公开的另一方面是组合物，其包含具有SEQ ID NO:17中所示的序列的核酸和具有SEQ ID NO:18中所示的氨基酸序列的核酸。
本公开的另一方面是组合物，其包含具有SEQ ID NO:13中所示的序列的核酸和具有SEQ ID NO:14中所示的氨基酸序列的核酸。
本公开的另一方面是组合物，其包含具有SEQ ID NO:15中所示的序列的核酸。
本公开的另一方面是组合物，其包含具有SEQ ID NO:17中所示的序列的核酸。
本公开的另一方面是组合物，其包含具有SEQ ID NO:13中所示的序列的核酸。
本公开的另一方面是用于产生包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列的肽链的方法，所述方法包括以下步骤：培养包含编码SEQ ID NO:3中所示的氨基酸序列的核酸的重组宿主细胞；以及回收肽链。
本公开的另一方面是用于产生抗体的方法，其包括以下步骤：a)培养包含表达载体的重组宿主细胞，所述表达载体包含具有SEQ ID NO:17中所示的序列的核酸和具有SEQID NO:18中所示的序列的核酸；以及b)回收抗体；由此产生抗体。
本公开的另一方面是药物组合物，其包含：a)抗原结合蛋白，其包含重链可变区，所述重链可变区具有SEQ ID NO:5中所示的CDRH1氨基酸序列，SEQ ID NO:6中所示的CDRH2氨基酸序列和SEQ ID NO:7中所示的CDRH3氨基酸序列；以及轻链可变区，所述轻链可变区具有SEQ ID NO:8中所示的CDRL1氨基酸序列，SEQ ID NO:9中所示的CDRL2氨基酸序列和SEQ ID NO:10中所示的CDRL3氨基酸序列；和b)药学上可接受的载体。
本公开的另一方面是药物组合物，其包含：a)抗体，其包含重链可变区，所述重链可变区具有SEQ ID NO:5中所示的CDRH1氨基酸序列，SEQ ID NO:6中所示的CDRH2氨基酸序列和SEQ ID NO:7中所示的CDRH3氨基酸序列；以及轻链可变区，所述轻链可变区具有SEQID NO:8中所示的CDRL1氨基酸序列，SEQ ID NO:9中所示的CDRL2氨基酸序列和SEQ ID NO:10中所示的CDRL3氨基酸序列；和b)药学上可接受的载体。
本公开的另一方面是药物组合物，其包含：a)抗体，其包含重链和轻链，其中重链包含具有SEQ ID NO:3中所示的氨基酸序列的重链可变区序列；并且轻链包含具有SEQ IDNO:4中所示的氨基酸序列的轻链可变区序列；和b)药学上可接受的载体。
本公开的另一方面是药物组合物，其包含：a)抗体，其包含具有SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列的轻链；和b)药学上可接受的载体。
本公开的另一方面是治疗受试者中轻度至中度哮喘的方法，其包括以下步骤：(a)鉴定具有轻度哮喘至中度哮喘诊断的受试者；和(b)向受试者施用治疗有效量的抗体，所述抗体包含重链可变区，所述重链可变区具有如SEQ ID NO:5中所示的CDR氨基酸序列，如SEQID NO:6中所示的CDR氨基酸序列和如SEQ ID NO:7中所示的CDR氨基酸序列；以及轻链可变区，所述轻链可变区具有如SEQ ID NO:8中所示的CDR氨基酸序列，如SEQ ID NO:9中所示的CDR氨基酸序列和如SEQ ID NO:10中所示的CDR氨基酸序列；由此治疗受试者中轻度至中度哮喘。
本公开的另一方面是治疗受试者中轻度至中度哮喘的方法，其包括以下步骤：(a)鉴定具有轻度哮喘至中度哮喘诊断的受试者；和(b)向受试者施用治疗有效量的抗体，所述抗体包含具有如SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列的重链和具有如SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列的轻链；由此治疗受试者中轻度至中度哮喘。
本公开的另一方面是治疗受试者中轻度至中度哮喘的方法，其包括以下步骤：(a)鉴定具有轻度哮喘至中度哮喘诊断的受试者；和(b)向受试者施用治疗有效量的药物组合物，所述药物组合物包含抗体和药学上有效的载体，所述抗体包含具有如SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列的重链和具有如SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列的轻链；由此治疗受试者中轻度至中度哮喘。
本公开的另一方面是治疗受试者中重度哮喘的方法，其包括以下步骤：(a)鉴定具有重度哮喘诊断的受试者；和(b)向受试者施用治疗有效量的抗体，所述抗体包含重链可变区，所述重链可变区具有如SEQ ID NO:5中所示的CDR氨基酸序列，如SEQ ID NO:6中所示的CDR氨基酸序列和如SEQ ID NO:7中所示的CDR氨基酸序列；以及轻链可变区，所述轻链可变区具有如SEQ ID NO:8中所示的CDR氨基酸序列，如SEQ ID NO:9中所示的CDR氨基酸序列和如SEQ ID NO:10中所示的CDR氨基酸序列；由此治疗受试者中重度哮喘。
本公开的另一方面是治疗受试者中重度哮喘的方法，其包括以下步骤：(a)鉴定具有重度哮喘诊断的受试者；和(b)向受试者施用治疗有效量的抗体，所述抗体包含具有如SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列的重链和具有如SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列的轻链；由此治疗受试者中重度哮喘。
本公开的另一方面是治疗受试者中重度哮喘的方法，其包括以下步骤：(a)鉴定具有重度哮喘诊断的受试者；和(b)向受试者施用治疗有效量的药物组合物，所述药物组合物包含抗体和药学上有效的载体，所述抗体包含具有如SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列的重链和具有如SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列的轻链；
由此治疗受试者中重度哮喘。
本公开的另一方面是治疗有此需要的受试者中中度至重度特应性皮炎的方法，其包括以下步骤：a)鉴定具有选自下组的至少一种的受试者：i)根据Eichenfield修订的Hanifin和Rajka标准的特应性皮炎诊断；ii)治疗前大于或等于约两年的特应性皮炎的事先诊断；iii)大于或等于约3的医疗保健专业人员的整体评价得分；iv)大于或等于约10％的体表面积的特应性皮炎受累；v)大于或等于16的湿疹面积和严重性指数得分；vi)每μL大于或等于150个细胞、每μL大于或等于200个细胞、每μL大于或等于300个细胞或每μL大于或等于350个细胞的绝对血液嗜酸性粒细胞计数；和vii)治疗前选自下组的至少一种状况：1)大于或等于六个月的对特应性皮炎的局部用药反应不足；2)对特应性皮炎的局部用药耐受性差；3)来自对特应性皮炎的局部用药的副作用；和4)对特应性皮炎的非药理治疗反应不足；和b)向受试者施用治疗有效量的抗体，所述抗体包含重链可变区，所述重链可变区具有如SEQ ID NO:5中所示的CDR氨基酸序列，如SEQ ID NO:6中所示的CDR氨基酸序列和如SEQID NO:7中所示的CDR氨基酸序列；以及轻链可变区，所述轻链可变区具有如SEQ ID NO:8中所示的CDR氨基酸序列，如SEQ ID NO:9中所示的CDR氨基酸序列和如SEQ ID NO:10中所示的CDR氨基酸序列；由此治疗受试者中特应性皮炎。
本公开的另一方面是治疗有此需要的受试者中中度至重度特应性皮炎的方法，其包括以下步骤：a)鉴定具有选自下组的至少一种的受试者：i)根据Eichenfield修订的Hanifin和Rajka标准的特应性皮炎诊断；ii)治疗前大于或等于约两年的特应性皮炎的事先诊断；iii)大于或等于约3的医疗保健专业人员的整体评价得分；iv)大于或等于约10％的体表面积的特应性皮炎受累；v)大于或等于16的湿疹面积和严重性指数得分；vi)每μL大于或等于150个细胞、每μL大于或等于200个细胞以及每μL大于或等于350个细胞的绝对血液嗜酸性粒细胞计数；和vii)治疗前选自下组的至少一种状况：1)大于或等于六个月的对特应性皮炎的局部用药反应不足；2)对特应性皮炎的局部用药耐受性差；3)来自对特应性皮炎的局部用药的副作用；和4)对特应性皮炎的非药理治疗反应不足；和b)向受试者施用治疗有效量的抗体，所述抗体包含具有如SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列的重链和具有如SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列的轻链；由此治疗受试者中特应性皮炎。
本公开的另一方面是治疗受试者中中度至重度特应性皮炎的方法，其包括以下步骤：a)鉴定具有选自下组的至少一种的受试者：i)根据Eichenfield修订的Hanifin和Rajka标准的特应性皮炎诊断；ii)治疗前大于或等于约两年的特应性皮炎的事先诊断；iii)大于或等于约3的医疗保健专业人员的整体评价得分；iv)大于或等于约10％的体表面积的特应性皮炎受累；v)大于或等于16的湿疹面积和严重性指数得分；vi)每μL大于或等于150个细胞、每μL大于或等于200个细胞以及每μL大于或等于350个细胞的绝对血液嗜酸性粒细胞计数；和vii)治疗前选自下组的至少一种状况：1)大于或等于六个月的对特应性皮炎的局部用药反应不足；2)对特应性皮炎的局部用药耐受性差；3)来自对特应性皮炎的局部用药的副作用；和4)对特应性皮炎的非药理治疗反应不足；和b)向受试者施用治疗有效量的药物组合物，所述药物组合物包含抗体和药学上有效的载体，所述抗体包含具有如SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列的重链和具有如SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列的轻链；由此治疗受试者中特应性皮炎。
本公开的另一方面是降低受试者中绝对血液嗜酸性粒细胞计数的方法，其包括以下步骤：(a)鉴定具有选自下组的状况的受试者：哮喘、轻度哮喘、中度哮喘、重度哮喘、轻度嗜酸性哮喘、中度嗜酸性哮喘、重度嗜酸性哮喘、不受控制的嗜酸性哮喘、嗜酸性哮喘、亚嗜酸性哮喘、慢性阻塞性肺疾病、嗜酸性肉芽肿伴多血管炎、高嗜酸性粒细胞增多综合征、鼻息肉病、大疱性类天疱疮、嗜酸性食管炎和特应性皮炎；和(b)向所述受试者施用治疗有效量的抗体，所述抗体包含重链可变区，所述重链可变区具有如SEQ ID NO:5中所示的CDR氨基酸序列，如SEQ ID NO:6中所示的CDR氨基酸序列和如SEQ ID NO:7中所示的CDR氨基酸序列；以及轻链可变区，所述轻链可变区具有如SEQ ID NO:8中所示的CDR氨基酸序列，如SEQID NO:9中所示的CDR氨基酸序列和如SEQ ID NO:10中所示的CDR氨基酸序列；由此降低受试者中绝对血液嗜酸性粒细胞计数。
本公开的另一方面是降低受试者中绝对血液嗜酸性粒细胞计数的方法，其包括以下步骤：(a)鉴定具有选自下组的状况的受试者：哮喘、轻度哮喘、中度哮喘、重度哮喘、轻度嗜酸性哮喘、中度嗜酸性哮喘、重度嗜酸性哮喘、不受控制的嗜酸性哮喘、嗜酸性哮喘、亚嗜酸性哮喘、慢性阻塞性肺疾病、嗜酸性肉芽肿伴多血管炎、高嗜酸性粒细胞增多综合征、鼻息肉病、大疱性类天疱疮、嗜酸性食管炎、特应性皮炎、中度特应性皮炎和重度特应性皮炎；和(b)向受试者施用治疗有效量的抗体，所述抗体包含具有如SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列的重链和具有如SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列的轻链；由此治疗受试者中特应性皮炎。
本公开的另一方面是降低受试者中绝对血液嗜酸性粒细胞计数的方法，其包括以下步骤：(a)鉴定具有选自下组的状况的受试者：哮喘、轻度哮喘、中度哮喘、重度哮喘、轻度嗜酸性哮喘、中度嗜酸性哮喘、重度嗜酸性哮喘、不受控制的嗜酸性哮喘、嗜酸性哮喘、亚嗜酸性哮喘、慢性阻塞性肺疾病、嗜酸性肉芽肿伴多血管炎、高嗜酸性粒细胞增多综合征、鼻息肉病、大疱性类天疱疮、嗜酸性食管炎、特应性皮炎、中度特应性皮炎和重度特应性皮炎；和(b)向受试者施用治疗有效量的药物组合物，所述药物组合物包含抗体和药学上有效的载体，所述抗体包含具有如SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列的重链和具有如SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列的轻链；由此降低受试者中绝对血液嗜酸性粒细胞计数。
本发明包括以下实施方案：
实施方案1.抗原结合蛋白，其包含重链可变区，所述重链可变区具有SEQ ID NO:5中所示的CDRH1氨基酸序列，SEQ ID NO:6中所示的CDRH2氨基酸序列和SEQ ID NO:7中所示的CDRH3氨基酸序列；以及轻链可变区，所述轻链可变区具有SEQ ID NO:8中所示的CDRL1氨基酸序列，SEQ ID NO:9中所示的CDRL2氨基酸序列和SEQ ID NO:10中所示的CDRL3氨基酸序列。
实施方案2.实施方案1的抗原结合蛋白，其中所述重链可变区进一步包含如SEQID NO:21中所示的重链FR4氨基酸序列。
实施方案3.实施方案2的抗原结合蛋白，其包含重链Fc结构域，所述重链Fc结构域具有位置252处的酪氨酸残基，位置254处的苏氨酸残基和位置256处的谷氨酸残基，并且其中所述重链Fc结构域的氨基末端与所述重链可变区的羧基末端连接。
实施方案4.抗原结合蛋白，其包含具有SEQ ID NO:3中所示的氨基酸序列的重链可变区序列；以及具有SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列的轻链可变区序列。
实施方案5.实施方案4的抗原结合蛋白，其包含重链Fc结构域，所述重链Fc结构域具有位置252处的酪氨酸残基，位置254处的苏氨酸残基和位置256处的谷氨酸残基，并且其中所述重链Fc结构域的氨基末端与所述重链可变区的羧基末端连接。
实施方案6.抗体，其包含重链和轻链，其中
a)所述重链包含重链可变区，所述重链可变区具有SEQ ID NO:5中所示的CDRH1氨基酸序列，SEQ ID NO:6中所示的CDRH2氨基酸序列和SEQ ID NO:7中所示的CDRH3氨基酸序列；并且
b)所述轻链包含轻链可变区，所述轻链可变区具有SEQ ID NO:8中所示的CDRL1氨基酸序列，SEQ ID NO:9中所示的CDRL2氨基酸序列和SEQ ID NO:10中所示的CDRL3氨基酸序列。
实施方案7.实施方案6的抗体，其中所述重链可变区进一步包含如SEQ ID NO:21中所示的重链FR4氨基酸序列。
实施方案8.实施方案7的抗体，其中所述重链包含重链Fc结构域，所述重链Fc结构域具有位置252处的酪氨酸残基，位置254处的苏氨酸残基和位置256处的谷氨酸残基。
实施方案9.抗体，其包含重链和轻链，其中
a)所述重链包含具有SEQ ID NO:3中所示的氨基酸序列的重链可变区序列；并且
b)所述轻链包含具有SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列的轻链可变区序列。
实施方案10.实施方案9的抗体，其中所述重链包含重链Fc结构域，所述重链Fc结构域具有位置252处的酪氨酸残基，位置254处的苏氨酸残基和位置256处的谷氨酸残基。
实施方案11.抗体，其包含具有SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列的轻链。
实施方案12.肽链，其包含SEQ ID NO:3中所示的氨基酸序列。
实施方案13.肽链，其包含SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列。
实施方案14.组合物，其包含编码实施方案1的重链可变区的核酸和编码实施方案1的抗原结合蛋白的轻链可变区的核酸。
实施方案15.组合物，其包含编码实施方案2的重链可变区的核酸和编码实施方案2的轻链可变区的核酸。
实施方案16.组合物，其包含编码实施方案3的与重链可变区的羧基末端连接的重链Fc结构域的核酸和编码实施方案3的轻链可变区的核酸。
实施方案17.组合物，其包含编码实施方案6的重链可变区的核酸和编码实施方案6的抗原结合蛋白的轻链可变区的核酸。
实施方案18.组合物，其包含编码实施方案7的重链可变区的核酸和编码实施方案7的轻链可变区的核酸。
实施方案19.组合物，其包含编码实施方案8的与重链可变区的羧基末端连接的重链Fc结构域的核酸和编码实施方案8的轻链可变区的核酸。
实施方案20.组合物，其包含编码SEQ ID NO:3中所示的氨基酸序列的核酸和编码SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列的核酸。
实施方案21.组合物，其包含编码SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列的核酸和编码SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列的核酸。
实施方案22.组合物，其包含编码SEQ ID NO:3中所示的氨基酸序列的核酸。
实施方案23.组合物，其包含编码SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列的核酸。
实施方案24.组合物，其包含具有SEQ ID NO:15中所示的序列的核酸和具有SEQID NO:16中所示的序列的核酸。
实施方案25.组合物，其包含具有SEQ ID NO:17中所示的序列的核酸和具有SEQID NO:18中所示的序列的核酸。
实施方案26.组合物，其包含具有SEQ ID NO:13中所示的序列的核酸和具有SEQID NO:14中所示的序列的核酸。
实施方案27.组合物，其包含具有SEQ ID NO:15中所示的序列的核酸。
实施方案28.组合物，其包含具有SEQ ID NO:17中所示的序列的核酸。
实施方案29.组合物，其包含具有SEQ ID NO:13中所示的序列的核酸。
实施方案30.组合物，其包含选自下组的至少一项：a)编码实施方案1的重链可变区的核酸；b)编码实施方案2的重链可变区的核酸；和c)编码如实施方案3中与重链可变区的羧基末端连接的重链Fc结构域的核酸。
附图简述
图1.在1nM-0.042pM浓度范围内测试时，28Y042-7F11-1和美泊利珠单抗(mepolizumab)两者均引起对人IL-5诱导的TF-1细胞增殖的剂量依赖性抑制(IC50分别为4pM和105pM)。
图2.28Y042-7F11-1和美泊利珠单抗在人全血中对重组IL-5介导的嗜酸性粒细胞形状变化的抑制。显示的数据代表6个供体。
图3.通过ELISA测定天然IL-5与28Y042-7F11-1和美泊利珠单抗的结合。
图4.在汇集的人或食蟹猴血清中于37℃温育6周的28Y042-7F11-1的稳定性比较。与美泊利珠单抗和IL-13特异性对照抗体获得的先前结果进行比较绘制的数据。
图5.相对于平均给药前嗜酸性粒细胞反应的比例动物变化图。动物嗜酸性粒细胞反应相对于其给药前值(第-12天至-26天)的几何平均值的比率。逐个动物计算的值，其中将总体几何平均分组值添加为水平条。水平实线对应于动物原始嗜酸性粒细胞计数的20％。每组n＝4[2♀&2♂]；在研究第1天单次iv(静脉内)施用药物。
图6.对于用28Y042-7F11-1、美泊利珠单抗或媒介物治疗的动物，来自9个月PK/PD研究(数据至第267天/第38周)的食蟹猴中的血清总IL-5水平。28Y042-7F11-1证明了血清中总IL-5:抗体复合物的持续时间延长且幅度增加。食蟹猴IL-5的最低定量水平(LLOQ)为9.77pg/ml。
图7.单次静脉内(IV)或皮下(SC)注射后食蟹猴中28Y042-7F11-1和美泊利珠单抗(SB-240563)的平均血清浓度(ng/ml)。
图8.框1-1。临床实践的诊断流程图-初次就诊。
图9.框3-5。逐步控制症状并最小化未来风险的方法。
发明详述
本公开提供了用于治疗白介素5(IL-5)介导的疾病的组合物，以及相关主题。
如本文所用，术语“哮喘”意指特征在于可逆性气流阻塞和支气管痉挛的气道的炎性疾病。常见症状包括喘息、咳嗽、胸闷和呼吸急促。哮喘是一种异质性疾病，特征通常在于慢性气道炎症。它由呼吸症状史定义，例如随时间和强度变化的喘息、呼吸急促、胸闷和咳嗽，以及可变的呼气气流限制。
在本公开的方法中，可以根据全球哮喘防治倡议(Global Initiative forAsthma，GINA)全球哮喘管理和预防策略(2016更新)文件提供的指南进行受试者中哮喘的诊断。本领域普通技术人员将熟悉下面所示的GINA临床实践诊断流程图(图8)和成人、青少年和6-11岁儿童中哮喘的诊断标准(表1)以及指南的其他方面(例如，针对孕妇等)。还参见表2和表3。
表1.
表2.
表3.
在本公开的方法中，“哮喘”可以是“轻度哮喘”、“中度哮喘”或“重度哮喘”。在本公开的方法中，可以根据GINA指南评价哮喘严重性。特别的是，哮喘严重性可以从控制症状和急性发作所需的治疗的水平进行回顾性评价。例如，一旦患者已接受控制物治疗数月就可以对其进行评价，并且在适当的情况下，尝试减缓治疗以找到患者的最低有效治疗水平。哮喘严重性并非静态特征，而可能在数月或数年后发生变化。
当患者已接受常规控制物治疗数月时，可以对哮喘严重性进行评价：
·“轻度哮喘”是用步骤1或步骤2治疗控制得很好的哮喘(参见图9；框3-5)，所述治疗即用单独的按需缓解药物，或用低强度控制物治疗，例如低剂量ICS、白三烯受体拮抗剂或色酮。
·“中度哮喘”是用步骤3治疗控制得很好的哮喘(参见图9；框3-5)，所述治疗例如低剂量ICS/LABA。
·“重度哮喘”是需要步骤4或步骤5治疗的哮喘(参见图9；框3-5)，所述治疗例如高剂量ICS/LABA，以防止其变得“不受控制”，或尽管进行了这种治疗仍保持“不受控制”的哮喘。尽管许多患有不受控制的哮喘的患者可能由于不充分或不适当的治疗，或者持续的依从性或合并症(例如慢性鼻鼻窦炎或肥胖)问题而难以治疗，但欧洲呼吸协会(EuropeanRespiratory Society)/美国胸科协会重症哮喘特别工作组(American Thoracic SocietyTask Force on Severe Asthma)认为“重度哮喘”的定义应为患有难治性哮喘的患者和对合并症的治疗的反应不完全的患者保留。在评价哮喘严重性期间也可以参考表4。
表4.
在本公开的方法中，“哮喘”可以是“轻度嗜酸性哮喘”、“中度嗜酸性哮喘”或“重度嗜酸性哮喘”。
“轻度嗜酸性哮喘”是具有嗜酸性表型的轻度哮喘。例如，患有轻度嗜酸性哮喘的受试者可以具有轻度哮喘和以下血液嗜酸性粒细胞：在过去12个月中每μL血液大于或等于150个嗜酸性粒细胞，在过去12个月中每μL血液大于或等于200个嗜酸性粒细胞，在过去12个月中每μL血液大于或等于300个嗜酸性粒细胞或者在过去12个月中每μL血液大于或等于350个嗜酸性粒细胞。
“中度嗜酸性哮喘”是具有嗜酸性表型的中度哮喘。例如，患有中度嗜酸性哮喘的受试者可以具有中度哮喘和以下血液嗜酸性粒细胞：在过去12个月中每μL血液大于或等于150个嗜酸性粒细胞，在过去12个月中每μL血液大于或等于200个嗜酸性粒细胞，在过去12个月中每μL血液大于或等于300个嗜酸性粒细胞或者在过去12个月中每μL血液大于或等于350个嗜酸性粒细胞。
“重度嗜酸性哮喘”是具有嗜酸性表型的重度哮喘。例如，患有重度嗜酸性哮喘的受试者可以具有重度哮喘和以下血液嗜酸性粒细胞：在过去12个月中每μL血液大于或等于150个嗜酸性粒细胞，在过去12个月中每μL血液大于或等于200个嗜酸性粒细胞，在过去12个月中每μL血液大于或等于300个嗜酸性粒细胞(优选)或者在过去12个月中每μL血液大于或等于350个嗜酸性粒细胞。
患有重度嗜酸性哮喘的受试者也可以满足表5中所述的一项或多项标准。
表5.
重要的是，根据这些标准，患有重度嗜酸性哮喘的受试者在开始治疗时可以具有每μL血液小于150个嗜酸性粒细胞。
28Y042-7F11-1是包含SEQ ID NO:1中所示的重链氨基酸序列和SEQ ID NO:2中所示的轻链氨基酸序列的单克隆抗体。根据本公开的方法，28Y042-7F11-1和本公开的包含28Y042-7F11-1的重链CDR和轻链CDR的抗原结合蛋白(特别是抗体分子)可以用于治疗重度嗜酸性哮喘。例如，28Y042-7F11-1或本公开的抗原结合蛋白可以被指示用于重度嗜酸性哮喘的附加维持治疗，如通过以下所鉴定的：在患者中血液嗜酸性粒细胞在过去12个月中大于或等于300个细胞/μL和/或血液嗜酸性粒细胞在开始治疗时大于或等于150个细胞/μL和/或血液嗜酸性粒细胞在开始治疗时小于150个细胞/μL。或者，28Y042-7F11-1或本公开的抗原结合蛋白可以被指示用于重度嗜酸性哮喘的附加维持治疗，如通过以下所鉴定的：在患者中血液嗜酸性粒细胞在过去12个月中大于或等于300个细胞/μL和/或血液嗜酸性粒细胞在开始治疗时大于或等于150个细胞/μL。28Y042-7F11-1或本公开的抗原结合蛋白可以被指示用于重度嗜酸性哮喘的附加维持治疗，如通过以下所鉴定的：在患者中血液嗜酸性粒细胞在过去12个月中大于或等于300个细胞/μL和/或血液嗜酸性粒细胞在开始治疗时小于150个细胞/μL。此类患者可以年龄在12岁以上。用28Y042-7F11-1或本公开的抗原结合蛋白治疗可以减少患者(例如，具有急性发作史的患者)中哮喘的急性发作。当指示用28Y042-7F11-1或本公开的抗原结合蛋白治疗时，可以使用本发明的方法(即，可以将用28Y042-7F11-1的此类治疗与本公开的方法组合)。用28Y042-7F11-1和本公开的抗原结合蛋白治疗可以：
a)产生急性发作频率的降低。与安慰剂相比，用28Y042-7F11-1或本公开的抗原结合蛋白治疗可以降低以下的比率1)临床上显著急性发作，2)需要住院或ED就诊的急性发作，以及3)需要住院的急性发作。该益处可以潜在地导致哮喘引起的发病率和致命事件的减少。
b)产生每日OCS剂量的降低：用28Y042-7F11-1或本公开内容的抗原结合蛋白治疗可以允许受试者减少其每日伴随服用的皮质类固醇剂量，而不丧失对哮喘的控制。与用安慰剂治疗的受试者相比，用28Y042-7F11-1或本公开的抗原结合组合物治疗的受试者可以实现每日口服皮质类固醇(OCS)剂量从基线的中位数百分比减少。另外，与用安慰剂治疗的受试者的32％相比，用28Y042-7F11-1或本公开的抗原结合组合物治疗的受试者可以实现OCS剂量的减少。
c)产生肺功能的改进：与安慰剂相比，可以通过用28Y042-7F11-1或本公开的抗原结合蛋白治疗来证明支气管扩张剂之前和之后FEV1的临床相关变化。在该受试者的群体中肺功能的任何改进都具有特别重要的临床意义，因为大多数受试者都在最大程度的哮喘疗法中，包括高剂量ICS(吸入皮质类固醇)和/或OCS加控制物用药。
d)产生哮喘控制的改进：与安慰剂相比，用28Y042-7F11-1或本公开的抗原结合蛋白可以在ACQ-5中观察到统计学上显著且临床相关的改进，表明受试者可以用将28Y042-7F11-1或本公开的抗原结合蛋白添加到其现有的哮喘治疗来实现哮喘控制。
e)产生生活质量的改进：与安慰剂相比，用28Y042-7F11-1或本公开的抗原结合蛋白可以证明SGRQ得分中统计学上显著且临床相关的变化。受试者在哮喘症状和进行日常活动的能力中可以经历明显改进。
f)产生功效和药效作用的持久性：在32周和/或52周治疗持续时间的时段，可以观察到哮喘急性发作和血液嗜酸性粒细胞的持续减少，以及肺功能、哮喘控制和生活质量的改进，其中没有耐受性的发展。
以及
g)产生血液嗜酸性粒细胞的减少。用包含28Y042-7F11-1或本公开的抗原结合蛋白的组合物治疗可以导致受试者中血液嗜酸性粒细胞的快速减少。
在本公开的方法中，“哮喘”可以是“重度哮喘”。在本公开的方法中，“哮喘”也可以是如上所讨论的“轻度哮喘”、“中度哮喘”、“重度哮喘”、“轻度嗜酸性哮喘”、“中度嗜酸性哮喘”或“重度嗜酸性哮喘”。根据本公开的方法，用包含28Y042-7F11-1或本公开的抗原结合蛋白的组合物的治疗可以用于治疗这些状况。
在本公开的方法中，“哮喘”可以是“不受控制的嗜酸性哮喘”。患有不受控制的嗜酸性哮喘的受试者满足表6中所述的标准。
表6.
根据本公开的方法，用包含28Y042-7F11-1或本公开的抗原结合蛋白的组合物的治疗可以用于治疗不受控制的嗜酸性哮喘。
在本公开的方法中，“哮喘”可以是“嗜酸性哮喘”。患有嗜酸性哮喘的受试者满足表7中所述的标准。
表7.
在本公开的方法中，“哮喘”可以是“亚嗜酸性哮喘”。患有亚嗜酸性哮喘的受试者满足表8中所述的标准。
表8.
根据本公开的方法，用包含28Y042-7F11-1或本公开的抗原结合蛋白的组合物的治疗可以用于治疗嗜酸性哮喘并且也可以用于治疗亚嗜酸性哮喘。
如本文所用，术语“大疱性类天疱疮”(BP)意指急性或慢性自身免疫性皮肤病，涉及在皮肤层表皮和真皮之间的空间处形成水疱，更恰当地称为大疱。BP是最常见的自身免疫性水疱性皮肤病。它的特征是影响老年人(>70岁)，其中年发生率为每百万5至35。BP的发生率以每年平均17％急剧增加。BP通常始于囊泡和水疱出现之前的极度瘙痒的皮肤损伤，类似于湿疹或荨麻疹。在10-30％的患者中，BP也涉及口腔粘膜。疾病严重性可以通过自身免疫性大疱性皮肤病症强度得分(ABSIS)来确定，所述ABSIS评估受累面积以及疾病活动性。疾病归因于对接合粘附复合物的结构组分的自身免疫反应，导致真皮-表皮接合处的损害伴表皮下水疱形成。具体而言，已经鉴定出针对半桥粒抗原BP180和BP230的自身反应性B和T细胞应答。针对BP180的血清自身抗体的水平反映了疾病严重性和活动性。T细胞是记忆性CD4+细胞，其产生Th1和Th2细胞因子两者，主要是IL-4、IL-5和IL-13。在水疱液中大量发现了IL-5和嗜酸性粒细胞趋化因子(eotaxin)。IL-5的产生确实与血液嗜酸性粒细胞增多(blood eosinophilia)和BP患者的皮肤中显著嗜酸性粒细胞浸润有关。据认为，嗜酸性粒细胞通过释放有毒的颗粒蛋白(ESP，MBP)和蛋白水解酶而与水疱的形成密切相关。
如本文所用，术语“嗜酸性食管炎”(EoE)意指涉及嗜酸性粒细胞的食管的过敏性炎性状况。症状为吞咽困难、食物嵌塞和胃灼热。EoE的特征是嗜酸性粒细胞型的白细胞致密浸润到食管的上皮内层中。基于嗜酸性粒细胞在过敏反应中的重要作用，据信EoE是对摄取的食物的过敏反应。EoE诊断面板可以用于诊断EoE。如果胃食管反流对一天两次高剂量质子泵抑制剂(PPI)的6周的试验没有反应，或者如果阴性动态pH研究排除了胃食管反流病(GERD)，则也可以诊断为EoE。在内窥镜下，在食管壁上可以看到脊、沟或环。有时，食道中可能出现多个环，导致术语“波纹状食管(corrugated esophagus)”或“猫食管”(由于环与猫食管的相似性)。食管中白色渗出液的存在也暗示该诊断。在内窥镜检查时进行活检，通常在浅表上皮中可以见到许多嗜酸性粒细胞。每高倍视野至少需要15个嗜酸性粒细胞才能进行诊断。嗜酸性炎症不仅限于食管，而且延伸到整个胃肠道。也可能存在深度脱粒的嗜酸性粒细胞，如微脓肿(microabcesses)和基底层的扩张。在放射学上，术语“环状食管”已用于钡吞咽研究中嗜酸性粒细胞性食管炎的出现，以与有时伴食管反流出现的短暂性横向褶皱(称为“猫食管”)形成对比。
根据本公开的方法，用包含28Y042-7F11-1或本公开的抗原结合蛋白的组合物的治疗可以用于治疗COPD。
患有“慢性阻塞性肺疾病”(COPD)的受试者可以满足以下一项或多项标准：a)先前的COPD诊断：根据美国胸科协会/欧洲呼吸协会的定义，具有临床上记录的COPD病史至少一年的受试者；b)COPD的严重性：受试者可能出现以下情况：<0.70的沙丁胺醇之前和之后测量的一秒用力呼气量/用力肺活量(FEV1/FVC)比率以确认COPD的诊断；沙丁胺醇之后测量的FEV1>百分之20且<＝百分之80的使用国家卫生和营养检查调查(National Health andNutrition Examination Survey，NHANES)III参考方程式计算的预测正常值；c)急性发作史：在12个月中至少两次中度COPD急性发作的充分记录的病史(如病历验证)。中度定义为使用系统性皮质类固醇(IM、静脉内或口服)和/或用抗生素治疗，或至少一种严重的COPD急性发作。重度定义为需要住院。注意：受试者服用吸入皮质类固醇(ICS)加长效beta2激动剂(LABA)加长效毒蕈碱拮抗剂(LAMA)时，必须至少发生一次急性发作。注意：除非先前单独使用抗生素是专门用于治疗COPD加重的症状，否则该使用不符合中度急性发作。d)伴随的COPD疗法：充分记录的对优化的护理标准(SoC)背景疗法的需要，其包括在之前的12个月的ICS加2种另外的COPD药物(即三联疗法)，并且满足以下标准：即将在医疗保健提供者就诊前，最少3个月使用吸入皮质类固醇(以剂量>＝500微克(mcg)/天丙酸氟替卡松等效剂量加)；或LABA和LAMA。
根据本公开的方法，用包含28Y042-7F11-1或本公开的抗原结合蛋白的组合物的治疗可以用于治疗COPD。
如本文所用，术语“嗜酸性肉芽肿伴多血管炎”(EGPA)意指自身免疫性状况，其在具有气道过敏性超敏反应(特应性)史的人中引起小型和中型血管的炎症(血管炎)。EGPA也可以称为Churg-Strauss综合征(CSS)或过敏性肉芽肿。EGPA通常表现为三个阶段。早期(前驱)阶段以气道炎症为特征；几乎所有患者都经历哮喘和/或过敏性鼻炎。第二阶段的特征是异常高的嗜酸性粒细胞数(高嗜酸性粒细胞增多综合征)，其引起组织损害，最常见的是对肺和消化道的损害。第三阶段是血管炎，其最终可以导致细胞死亡并可以危及生命。
患有EGPA的受试者可以满足以下一项或多项标准：a)哮喘；b)血液嗜酸性粒细胞水平大于白细胞分类计数的10％；c)存在单神经病变或多神经病变；d)未固定的肺浸润；e)存在鼻旁窦异常；e)血管外嗜酸性粒细胞的组织学证据。出于分类目的，如果上述六个标准的至少四个为阳性，则应称患者患有EGPA。
根据本公开的方法，用包含28Y042-7F11-1或本公开的抗原结合蛋白的组合物的治疗可以用于治疗EGPA。本公开的组合物可以每4周一次以300mg的量施用于EGPA患者。
如本文所用，“高嗜酸性粒细胞增多综合征”(HES)意指一种疾病，其特征在于血液中嗜酸性粒细胞计数持续升高(≥1500个嗜酸性粒细胞/mm3)至少六个月而无任何可辨认的原因，伴心脏、神经系统或骨髓的受累。
患有高嗜酸性粒细胞增多综合征的受试者可以满足以下一项或多项标准：a)记录的高嗜酸性粒细胞增多综合征的病史；b)血液嗜酸性粒细胞计数大于1500个细胞6个月；c)器官系统受累的体征和症状；和d)综合评估后，没有嗜酸性粒细胞增多的寄生、过敏或其他原因的证据。
根据本公开的方法，用包含28Y042-7F11-1或本公开的抗原结合蛋白的组合物的治疗可以用于治疗高嗜酸性粒细胞增多综合征。
如本文所用，术语“鼻息肉病”意指一种疾病，其特征在于息肉鼻腔的存在。此类息肉可以在上鼻腔中和/或可以起源于窦口鼻道复合体内。
患有鼻息肉病的患者可以满足以下一项或多项标准：a)记录的鼻息肉病的病史；或b)检查时(例如内窥镜检查)明显的鼻息肉。
根据本公开的方法，用包含28Y042-7F11-1或本公开的抗原结合蛋白的组合物的治疗可以用于治疗鼻息肉病。
如本文所用，术语“特应性皮炎”意指一种炎性皮肤状况，其特征在于慢性瘙痒、苔藓样硬化、干燥症、红斑丘疹和斑块。
在本公开的方法中，“特异性皮炎”可以是“中度至重度特应性皮炎”。患有中度至重度特应性皮炎的受试者可以满足表9中所述的一项或多项标准。
表9.
患有中度至重度特应性皮炎的受试者可以是18岁以下的儿童、至少18岁或以上的成人或18和70岁(含)之间的成人。受试者可以是男性或女性。优选待治疗的女性受试者没有怀孕、没有哺乳和/或不太可能怀孕。
特应性皮炎的诊断基于Eichenfield修订的Hanifin和Rajka标准。参见表10和Eichenfield et al.,70J Am Acad Dermatol 338(2014)。
表10.
医疗保健专业人员的整体评价(HGA)是用于评价受试者的特应性皮炎的当前状态/严重性的临床工具。参见Rehal et al,6PLos ONE e17520(2011)和表11。其是对总体疾病严重性的静态5点形态学评价，如由经过培训的医疗保健专业人员使用红斑、浸润、丘疹形成、渗出和痂皮的临床特征为准则所确定的。HGA没有参考以前的得分。每次评价都应作为评价时所有受影响区域的严重性的视觉“平均值”。
表11.
体表面积的百分比(％BSA)的评价是总受累特应性皮炎的皮肤的百分比的估算。参见表12。可以通过分别查看从四个体表部位中的每一个(头部和颈部、上肢、躯干和下肢)内的发炎区域来进行％BSA评价，并且这些身体部位的每一个可以潜在地具有高达100％受累。为了％BSA面积得分，评价者(例如，医疗保健专业人员)将估算每个区域的受累皮肤的百分比，然后将其乘以适当的比例乘数以得出％BSA区域性受累值(对于≥8岁的受试者，头部0.1，上肢0.2，躯干0.3，下肢0.4)。对区域性％BSA受累值求和以得出总受累％BSA。区域性％BSA面积得分也将用作矩阵的一部分，以计算EASI得分。
表12.
EASI评分系统是用于评价特应性皮炎的标准化临床工具，其考虑了受累％体表面积(％BSA)的总体范围以及每种临床体征的严重性得分：红斑、硬结/丘疹形成、表皮脱落和苔藓样硬化。参见Hanifin et al.,10Exp Dermatol 11(2001)；Rullo et al.,36Allergolet Immunopathol 201(2008)和表13。来自％BSA评价的％BSA面积得分将用作矩阵的一部分以计算EASI得分。临床体征(红斑、硬结/丘疹形成、表皮脱落和苔藓样硬化)的每一个的严重性得分针对4个身体部位(头部和颈部、上肢、下肢和躯干)的每一个以4分制(0至3)分级。将每个部位的体征的每一个的严重性得分相加，然后乘以％BSA面积得分并乘以适当的比例乘数(对于≥8岁的受试者，头部0.1，上肢0.2，躯干0.3，下肢0.4)以得出区域性EASI得分。然后将区域性EASI得分相加以得出最终EASI得分。EASI得分是静态评价，未参考以前的得分。
表13.
治疗有效量的28Y042-7F11-1或本公开的抗原结合蛋白可以用于治疗患有特应性皮炎的患者或减少此类患者中的绝对血液嗜酸性粒细胞计数。此类特应性皮炎可以是中度特应性皮炎或重度特应性皮炎。
根据本发明的方法，用28Y042-7F11-1或本发明的抗原结合蛋白治疗特应性皮炎，例如中度特应性皮炎或重度特应性皮炎，可以产生至少一种选自下组的结果：
a)HGA得分为0或1，并且HGA至少提高了2级(例如，相对于起始HGA得分)；
b)湿疹面积和严重性指数(EASI)得分降低(例如，相对于起始EASI得分)；
c)受影响的总体表面积的百分比(％BSA)降低(例如，相对于起始％BSA)；和/或
d)医疗保健专业人员根据Eichenfield修订的Hanifin和Rajka标准(Eichenfieldet al.,70J Am Acad Dermatol 338(2014))确定受试者未患有特应性皮炎。
根据本公开的方法治疗后的EASI得分可以小于16，如例如从约0至小于16。治疗后的EASI得分也可以从约0至约15、约0至约14、约0至约13、约0至约12、约0至约11、约0至约10、约0至约9、约0至约8、约0至约7、约0至约6、约0至约5、约0至约4、约0至约3、约0至约2、约0至约1、从约1至小于16、从约2至小于16、从约3至小于16、从约4至小于16、从约5至小于16、从约6至小于16、从约7至小于16、从约8至小于16、从约9至小于16、从约10至小于16、从约11至小于16、从约12至小于16、从约13至小于16、从约14至小于16、从约15至小于16、从约2至约15、从约3至约14、从约4至约13、从约5至约12、从约6至约11、从约7至约10、从约8至约9、从约0至约8、从约8至小于16、从约0至约4、从约4至约8、从约8至约12以及从约12至小于16。
根据本公开的方法治疗后的％BSA可以小于约10％，如例如从约0％至小于10％。治疗后的％BSA也可以从约1％至小于10％、从约2％至小于10％、从约3％至小于10％、从约4％至小于10％、从约5％至小于10％、从约6％至小于10％、从约7％至小于10％、从约8％至小于10％、从约9％至小于10％、从约0％至约9％、从约0％至约8％、从约0％至约7％、从约0％至约6％、从约0％至约5％、从约0％至约4％、从约0％至约3％、从约0％至约3％、从约0％至约2％、从约0％至约1％、从约0％至约5％、从约5％至小于10％、从约0％至约2.5％、从约2.5％至约5％、从约5％至约7.5％以及从约7.5％至小于10％。
如本文所用，术语“抗原结合蛋白”是指分离的抗体、抗体片段(例如Fab等)和其他抗体衍生的蛋白质构建体(例如包含抗体结构域的那些(例如结构域抗体等))，其能够与人IL-5结合(SEQ ID NO:11)。
如本文所用，术语“抗体”是指具有免疫球蛋白样结构域的分子(例如IgG、IgM、IgA、IgD或IgE)，并且包括该类型的单克隆、重组、多克隆、单克隆、重组、多克隆、嵌合、人和人源化分子。单克隆抗体可以由表达抗体的真核细胞克隆产生。单克隆抗体也可以由真核细胞系产生，所述真核细胞系可以凭借将编码抗体的重链和轻链的核酸序列引入到细胞中而重组表达抗体的重链和轻链。从不同的真核细胞系例如中国仓鼠卵巢细胞、杂交瘤或衍生自动物(例如人)的永生化抗体细胞产生抗体的方法是公知的。
抗体可以衍生自大鼠、小鼠、灵长类动物(例如食蟹猴，旧大陆猴或类人猿)、人或其他来源(例如使用分子生物学技术生成的编码抗体分子的核酸)。
抗体可以包含恒定区，其可以是任何同种型或亚类。恒定区可以是IgG同种型，例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4或其变体。抗原结合蛋白恒定区可以是IgG1。
抗原结合蛋白可以包含选自突变的恒定结构域的一种或多种修饰，使得抗体具有增强的效应功能/ADCC和/或补体激活。
抗体可以能够与靶抗原结合。此类靶抗原的实例包括人IL-5，其包含SEQ ID NO:11中所示的氨基酸序列。
包含SEQ ID NO:1中所示的重链氨基酸序列和SEQ ID NO:2中所示的轻链氨基酸序列的28Y042-7F11-1是抗体的一个实例。28Y042-7F11-1或本公开的抗原结合蛋白结合人IL-5并拮抗其活性。
28Y042-7F11-1是重组人源化单克隆抗体(IgG1，Kappa)。28Y042-7F11-1具有两条轻链和两条重链。
28Y042-7F11-1重链由SEQ ID NO:15中所示的核酸序列编码。28Y042-7F11-1轻链由SEQ ID NO:16中所示的核酸序列编码。
28Y042-7F11-1重链和轻链通过单个二硫键共价连接，并且重链通过两个二硫键相互连接，形成典型的IgG分子。
28Y042-7F11-1或本公开的抗原结合蛋白可以作为冻干粉末提供，所述冻干粉末含有可以用药学上可接受的载体(例如无菌水)重构的抗体和赋形剂。然后可以皮下或静脉内(例如，进一步稀释)施用该重构的药物组合物。28Y042-7F11-1或本公开的抗原结合蛋白还可以作为液体配制剂提供，所述液体配制剂含有抗体、赋形剂和药学上可接受的载体。然后可以皮下或静脉内(例如，进一步稀释)施用该液体药物组合物。
如本文所用，术语“抗体变体”意指凭借至少一个氨基酸修饰(例如，通过具有不同的氨基酸侧链)、翻译后修饰或在至少一条重链、轻链中的其他修饰或这些的组合(其导致相对于亲本抗体的结构变化(例如，不同的氨基酸侧链、不同的翻译后修饰或其他修饰))而与亲本抗体不同的抗体。28Y042-7F11-1是此类亲本抗体的一个实例。结构变化可以通过本领域公知的多种方法(例如LC-MS、直接测序)直接确定，或者经由方法如等电聚焦等间接确定。此类方法是本领域普通技术人员公知的。
如本文所用，术语“IL-5”意指包含SEQ ID NO:11中所示的氨基酸序列的人IL-5。
如本文所用，与抗原结合蛋白有关的术语“特异性结合”意指抗原结合蛋白与靶抗原以及靶抗原内的离散结构域或离散氨基酸序列结合，而与其他(例如无关的)蛋白质没有结合或微不足道的结合。然而，该术语不排除以下事实：抗原结合蛋白也可以与紧密相关的分子(例如，具有高度序列一致性或来自另一个属或种的分子)交叉反应。本文所述的抗原结合蛋白可以以比它们结合紧密相关的分子大至少2、5、10、50、100或1000倍的亲和力结合人IL-5或人IL-5受体。
抗原结合蛋白-靶抗原相互作用的结合亲和力(KD)可以是1mM或更小、100nM或更小、10nM或更小、2nM或更小或1nM或更小。或者，KD可以是5和10nM之间；或1和2nM之间。KD可以是1pM和500pM之间；或500pM和1nM之间。抗原结合蛋白的结合亲和力由缔合常数(Ka)和解离常数(Kd)确定(KD＝Kd/Ka)。可以通过BIACORETM测量结合亲和力，例如，通过将测试抗体捕获到蛋白A包被的传感器表面上并使靶抗原流过该表面。或者，可以通过FORTEBIO测量结合亲和力，例如，将测试抗体受体捕获到蛋白A包被的针上，并使靶抗原流过该表面。
Kd可以是1x10-3 Ms-1或更小、1x10-4 Ms-1或更小或1x10-5 Ms-1或更小。Kd可以是1x10-5 Ms-1和1x10-4 Ms-1之间；或1x10-4 Ms-1和1x10-3 Ms-1之间。
如本文所用，术语“特异性抗原结合活性”意指如通过表面等离子体共振(SPR)测量的抗原结合活性。IL-5特异性结合活性可以使用BIACORETM仪器通过SPR确定，例如以结合模式进行。它是结合活性除以样品中总蛋白质(例如28Y042-7F11-1)含量。
如本文所用，术语“FcRn结合活性”意指如通过表面等离子体共振(SPR)测量的新生儿Fc(FcRn)受体结合活性。FcRn结合可以使用BIACORETM仪器确定。它是与FcRn受体的结合活性除以样品的总蛋白质浓度。
用于特异性抗原结合和FcRn结合的SPR方法使用28Y042-7F11-1的参考标准。28Y042-7F11-1参考标准品可以用于测定中以获得系统适用性和样品可比性数据，以确保方法适当地进行。参考标准品可以允许建立校准曲线，并从曲线内插样品的浓度。
“分离的”意指将分子例如抗原结合蛋白或核酸从可能在自然界中发现它的环境中除去。例如，可以将分子从它在自然界中通常存在的物质中纯化出来。例如，样品中分子的质量可以是总质量的95％。本公开还提供了包含SEQ ID NO:13、14、15、16、17和/或18的分离的核酸及其部分，以及这些的组合物。重要的是，本公开的核酸通常作为组合物提供，其可以包含本公开的核酸、缓冲液、残留缓冲液、盐、反荷离子、水、醇或载体等的任意组合。或者，本发明的组合物可以仅包含本公开的核酸。
本文使用的术语“VH”和“VL”分别是指抗原结合蛋白的重链可变区和轻链可变区。
“CDR”定义为抗原结合蛋白的互补决定区氨基酸序列。这些是免疫球蛋白重链和轻链的高变区。在免疫球蛋白的可变部分中有三个重链和三个轻链CDR(或CDR区)。因此，如本文所用，“CDR”是指所有三个重链CDR、所有三个轻链CDR、所有重链和轻链CDR或至少一个CDR，并且其中至少一个CDR是CDRH3。框架区跟随这些CDR区的每一个。可接受的重链可变区和轻链可变区框架1、框架2和框架3区域是本领域普通技术人员容易识别的。可接受的重链恒定区(包括铰链区)和轻链恒定区也是本领域普通技术人员容易识别的。可接受的抗体同种型类似地是本领域普通技术人员容易识别的。
在整个说明书中，可变结构域序列和全长抗体序列中的氨基酸残基根据Kabat编号惯例编号。类似地，说明书中使用的术语“CDR”、“CDRL1”、“CDRL2”、“CDRL3”、“CDRH1”、“CDRH2”、“CDRH3”遵循Kabat编号惯例。
对于本领域技术人员显而易见的是，对于可变结构域序列和全长抗体序列中的氨基酸残基，存在替代的编号惯例。CDR序列也有替代的编号惯例，例如根据Chothia编号惯例列出的那些。抗体的结构和蛋白质折叠可以意味着其他残基被认为是CDR序列的一部分，并且技术人员应理解为如此。
技术人员可获得的CDR序列的其他编号惯例包括“AbM”(University of Bath)和“contact”(University College London)方法。可以确定使用Kabat、Chothia、AbM和contact方法的至少两种的最小重叠区域以提供“最小结合单元”。最小结合单元可以是CDR的子部分。
下面表14表示使用针对每个CDR或结合单元的每种编号惯例的一个定义。表14中使用Kabat编号方案来编号可变结构域氨基酸序列。应该注意的是，一些CDR定义可能会根据所使用的个别出版物而有所不同。
表14.
Kabat CDR Chothia CDR AbM CDR Contact CDR 最小结合单元
H1 31-35/35A/35B 26-32/33/34 26-35/35A/35B 30-35/35A/35B 31-32
H2 50-65 52-56 50-58 47-58 52-56
H3 95-102 95-102 95-102 93-101 95-101
L1 24-34 24-34 24-34 30-36 30-34
L2 50-56 50-56 50-56 46-55 50-55
L3 89-97 89-97 89-97 89-96 89-96
查询核酸序列和主题核酸序列之间的百分比一致性是“一致性(Identities)”值，以百分比表示，其在进行成对BLASTN比对之后当主题核酸序列与查询核酸序列具有100％查询覆盖率时，通过BLASTN算法计算。查询核酸序列和主题核酸序列之间的此类成对BLASTN比对通过使用国家生物技术研究所中心(National Center for BiotechnologyInstitute)的网站上可用的BLASTN算法的默认设置来进行，其中低复杂度区域的过滤器得以关闭。重要的是，查询序列可以通过本文的一个或多个权利要求中鉴定的核酸序列来描述。
在本公开的组合物和相关方法中可能有用并包括的核酸序列可以与本公开中鉴定的核酸序列(例如，编码抗体重链或抗体轻链的核酸)具有约85％至约100％之间、约90％至约100％、约95％至约100％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％和约100％的一致性。在本公开中，所述的核酸序列之间的百分比一致性可以包括上述百分比一致性范围的任何离散的子范围(例如，特定范围内的整数值的任何范围或特定范围内的离散子值)。
查询氨基酸序列和主题氨基酸序列之间的百分比一致性是“一致性”值，以百分比表示，其在进行成对BLASTP比对之后当主题氨基酸序列与查询氨基酸序列具有100％查询覆盖率时，通过BLASTP算法计算。查询氨基酸序列和主题氨基酸序列之间的此类成对BLASTP比对通过使用国家生物技术研究所中心(National Center for BiotechnologyInstitute)的网站上可用的BLASTP算法的默认设置来进行，其中低复杂度区域的过滤器得以关闭。重要的是，查询序列可以通过本文的一个或多个权利要求中鉴定的氨基酸序列来描述。
在本公开的组合物和相关方法中可能有用并包括的氨基酸序列可以与本公开中鉴定的氨基酸序列(例如，抗体重链或抗体轻链)具有约85％至约100％之间、约90％至约100％、约95％至约100％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％和约100％的一致性。在本公开中，所述的氨基酸序列之间的百分比一致性可以包括上述百分比一致性范围的任何离散的子范围(例如，特定范围内的整数值的任何范围或特定范围内的离散子值)。
术语“肽”、“多肽”、“蛋白质”和“肽链”各自是指包含两个或更多个氨基酸残基的分子。肽可以是单体的或聚合的。
本领域众所周知，某些氨基酸取代被认为是“保守的”。基于共同的侧链特性将氨基酸分为几组，并且将维持抗原结合蛋白的所有或基本上所有结合亲和力的组内的取代视为保守取代。参见表15。本文公开的抗原结合蛋白可以包含此类“保守”氨基酸取代。
表15.
如本文所用，术语“药物组合物”意指适于施用于患者的组合物。
本文所述的药物组合物可以包含如本文所述的抗体的经纯化的制剂。
例如，药物制剂可以包含与药学上可接受的载体组合的如本文所述的抗体的经纯化的制剂。
通常，此类药物组合物包含药学上可接受的载体，如可接受的药学实践所已知和要求的。此类的载体的实例包括经灭菌的载体，例如盐水、林格氏溶液或右旋糖溶液，任选地用合适的缓冲液缓冲至5至8的范围内的pH。
药物组合物可以通过注射或输注(例如静脉内、腹膜内、皮内、皮下、肌内或门静脉内)施用。此类组合物适当地不含可见的微粒物质。药物组合物可以包含1mg至10g之间的抗原结合蛋白，例如5mg和1g之间的抗原结合蛋白。或者，组合物可以包含5mg和500mg之间的抗原结合蛋白，例如5mg和50mg之间。
用于制备此类药物组合物的方法是本领域技术人员公知的。药物组合物可以以单位剂量形式包含1mg至10g之间的抗原结合蛋白，任选地连同使用说明书一起。药物组合物可以根据本领域技术人员公知或显而易见的方法进行冻干(冷冻干燥)以在施用之前重构。在抗体具有IgG1同种型的情况下，可以将铜的螯合剂如柠檬酸盐(例如柠檬酸钠)或EDTA或组氨酸添加至药物组合物以降低铜介导的该同种型的抗体的降解的程度。药物组合物还可以包含增溶剂如精氨酸、表面活性剂/抗聚集剂如聚山梨酯80和惰性气体如氮气以替换小瓶顶部空间的氧气。
如本文所用，术语“治疗有效量”意指在治疗或管理待治疗的状况(例如哮喘、轻度哮喘、中度哮喘、重度哮喘、轻度嗜酸性哮喘、中度嗜酸性哮喘、重度嗜酸性哮喘、不受控制的嗜酸性哮喘、嗜酸性哮喘、亚嗜酸性哮喘、慢性阻塞性肺疾病、嗜酸性肉芽肿伴多血管炎、高嗜酸性粒细胞增多综合征、鼻息肉病、大疱性类天疱疮、嗜酸性食管炎、特应性皮炎、中度特应性皮炎和重度特应性皮炎)的一种或多种症状中提供治疗益处的药剂(例如抗体或药物组合物)的量。此类对哮喘的一种或多种症状(包括哮喘、轻度哮喘、中度哮喘、重度哮喘、轻度嗜酸性哮喘、中度嗜酸性哮喘、重度嗜酸性哮喘、不受控制的嗜酸性哮喘、嗜酸性哮喘和亚嗜酸性哮喘)进行治疗或管理的实例包括1)减少哮喘急性发作的频率；2)减少首次临床显著急性发作的时间，所述急性发作需要口服或系统性皮质类固醇、住院和/或急诊科(ED)就诊；3)减少需要住院(包括插管和进入重症监护室)或ED就诊的急性发作的频率；4)减少需要住院或ED就诊的首次急性发作时间；5)临床支气管扩张剂前FEV1从基线的变化；6)临床支气管扩张剂后FEV1从基线的变化；7)哮喘控制问卷(ACQ)得分从基线的变化；8)改进的肺功能，如通过肺活量测定法(例如，肺活量(VC)，用力肺活量(FVC)，以0.5、1.0(FEV1)、2.0和3.0秒的定时间隔进行的用力呼气量(FEV)，用力呼气流量25-75％(FEF 25-75)和最大自主通气(MVV)总肺活量，潮气量，残气量，补呼气量，补吸气量，深吸气量，吸气肺活量，肺活量，功能残气量，以肺总量的百分比表示的残气量，肺泡气量，包括传导气道的容量的实际肺容量，用力肺活量等)所评价的；9)减少需要用于控制的类固醇(例如通过任何途径施用的口服类固醇或类固醇，如泼尼松，泼尼松龙等)的哮喘急性发作。此类对需要用于控制的类固醇的哮喘急性发作的减少可以是大约50％的需要类固醇(例如口服类固醇)的急性发作的减少。
治疗有效量和治疗方案通常是凭经验确定的，并且可能取决于因素如患者的年龄、体重和健康状况以及待治疗的疾病或病症。此类因素在主治医师的权限范围内。
施用于受试者的抗原结合蛋白的剂量通常是1μg/kg至150mg/kg之间、0.1mg/kg和100mg/kg之间、0.5mg/kg和50mg/kg之间、1和25mg/kg之间、约0.3mg/kg和约3mg/kg之间或1和10mg/kg之间的该受试者的体重。例如，剂量可以是10mg/kg、30mg/kg或60mg/kg。剂量也可以是从10mg/kg至110mg/mg、15mg/kg至25mg/kg或15mg/kg至100mg/kg。抗原结合蛋白可以例如肠胃外、皮下、静脉内或肌内施用。剂量也可以基于每个受试者施用，例如每受试者约20mg至每受试者约750mg、每受试者约75mg至每受试者约750mg、每受试者约20mg至每受试者约200mg。剂量可以是具有这些剂量范围的任何离散的子范围。例如，剂量可以基于每个受试者皮下施用，例如每受试者约100mg(例如，每四周一次)或每受试者300mg(或者其他施用的剂量可以是皮下的，只要实现与静脉内施用大致相同或相当的生物利用度—例如，每受试者三剂的100mg以实现每受试者皮下施用300mg的总剂量)。
任何类型的本文提供的范围包括所述的特定范围内的所有值以及关于特定范围的端点的值。
如果需要，本公开的抗体或抗原结合蛋白(例如，作为药物组合物)的有效日剂量可以在一天中的适当间隔作为分开施用的两次、三次、四次、五次、六次或更多次的剂量(任选地，以单位剂型)施用。
剂量的施用可以通过在2至24小时，例如2至12小时，或2至6小时的时段内缓慢连续输注。此类施用可以导致副作用减少。
剂量的施用可以根据需要重复一次或多次，例如每天三次、每天一次、每2天一次、每周一次、每周一次、每14天一次、每月一次、每3个月一次、每4个月一次、每6个月一次或每12个月一次。抗原结合蛋白可以通过维持疗法施用，例如每周一次，持续6个月或更长的时段。抗原结合蛋白可以通过间歇疗法施用，例如，在一个周期中，持续3至6个月的时段，然后持续3至6个月无剂量，随后再次施用抗原结合蛋白3至6个月，依此类推。
例如，剂量可以皮下施用，每14或28天一次，在施用的每一天以多次剂量的形式。在一个实施方案中，组合物的剂量是每4周(28天)一次100mg。
抗原结合蛋白可以以针对特定位点的靶向疗法的方式施用于受试者。
本公开的方法中的抗原结合蛋白可以与一种或多种其他治疗活性剂例如抗体或小分子抑制剂组合使用。
如本文所用，术语“治疗”及其语法变化意指治疗性疗法。提及具体的状况时，治疗意指：(1)改善状况或状况的一种或多种生物学表现，(2)干扰a)导致状况或对其负责的生物学级联中的一个或多个点或(b)状况的一种或多种生物学表现，(3)减轻与状况或其治疗相关的一种或多种症状、作用或副作用，或(4)减缓状况的进展或状况的一种或多种生物学表现，或(5)预防状况的一种或多种生物学表现的发作。由此也考虑了防病性(prophylactic)疗法。技术人员将领会到“预防”不是绝对的术语。在医学中，“预防”应理解为指防病性施用药物以实质上降低状况或其生物学表现的可能性或严重性，或延迟此类状况或其生物学表现的发作。
术语“个体”、“受试者”和“患者”在本文中可互换使用。受试者通常是人。受试者也可以是哺乳动物，例如小鼠、大鼠或灵长类动物(例如狨猴或猴)。受试者可以是非人动物。本公开的抗原结合蛋白、组合物和方法也具有兽医用途。待治疗的受试者可以是农场动物，例如母牛或公牛、绵羊、猪、牛、山羊或马，或者可以是家养动物，例如狗或猫。动物可以是任何年龄的，或成熟的成年动物。
治疗可以是治疗性，防病性或预防性的。受试者将是有此需要的人。除了将来可能发展该疾病的人之外，需要治疗的人可能还包括已经遭受特定医学疾病的个体。
因此，如果指定的话，本文所述的本公开的方法、抗原结合蛋白和组合物可以用于防病性治疗或预防性治疗。在这种情况下，本公开的方法、抗原结合蛋白和组合物可以用于预防或延迟疾病的一个或多个方面或症状的发作。受试者可以是无症状的。受试者可以对疾病具有遗传易感性。将防病有效量的抗原结合蛋白施用于此类个体。防病有效量是预防或延迟本文所述的疾病的一个或多个方面或症状发作的量。
本公开的方法、抗原结合蛋白和组合物无需影响完全治愈或根除疾病的每种症状或表现即构成可行的治疗性治疗。如本领域所认知的，在治疗方法中用作治疗剂的药物可以降低给定疾病状态的严重性，但是无需消除疾病的每种表现即视为有用的治疗剂。类似地，防病性施用的治疗无需完全有效地预防疾病的发作以构成可行的防病剂。简单地减少疾病的影响(例如，通过减少其症状的数量或严重性，或通过增加另一种治疗的有效性，或通过产生另一种有益效果)，或降低受试者中疾病将发生(例如，通过延迟疾病的发作)或加重的可能性就足够了。
本公开的一方面是抗原结合蛋白，其包含重链可变区，所述重链可变区具有SEQID NO:5中所示的CDRH1氨基酸序列，SEQ ID NO:6中所示的CDRH2氨基酸序列和SEQ ID NO:7中所示的CDRH3氨基酸序列；以及轻链可变区，所述轻链可变区具有SEQ ID NO:8中所示的CDRL1氨基酸序列，SEQ ID NO:9中所示的CDRL2氨基酸序列和SEQ ID NO:10中所示的CDRL3氨基酸序列。
在本公开的抗原结合蛋白的一个实施方案中，重链可变区进一步包含如SEQ IDNO:21中所示的重链FR4氨基酸序列。
在一个实施方案中，本公开的抗原结合蛋白包含重链Fc结构域，所述重链Fc结构域具有位置252处的酪氨酸残基，位置254处的苏氨酸残基和位置256处的谷氨酸残基，并且其中重链Fc结构域的氨基末端与重链可变区的羧基末端连接。
本公开的另一方面是抗原结合蛋白，其包含具有SEQ ID NO:3中所示的氨基酸序列的重链可变区序列；以及具有SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列的轻链可变区序列。
本公开的另一方面是抗体，其包含重链和轻链，其中a)重链包含重链可变区，所述重链可变区具有SEQ ID NO:5中所示的CDRH1氨基酸序列，SEQ ID NO:6中所示的CDRH2氨基酸序列和SEQ ID NO:7中所示的CDRH3氨基酸序列；并且b)轻链包含轻链可变区，所述轻链可变区具有SEQ ID NO:8中所示的CDRL1氨基酸序列，SEQ ID NO:9中所示的CDRL2氨基酸序列和SEQ ID NO:10中所示的CDRL3氨基酸序列。
在本公开的抗体的一个实施方案中，重链可变区进一步包含如SEQ ID NO:21中所示的重链FR4氨基酸序列。
在本公开的抗体的一个实施方案中，重链包含重链Fc结构域，所述重链Fc结构域具有位置252处的酪氨酸残基，位置254处的苏氨酸残基和位置256处的谷氨酸残基。
本公开的另一方面是抗体，其包含重链和轻链，其中a)重链包含具有SEQ ID NO:3中所示的氨基酸序列的重链可变区序列；并且b)轻链包含具有SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列的轻链可变区序列。
在本公开的抗体的一个实施方案中，重链包含重链Fc结构域，所述重链Fc结构域具有位置252处的酪氨酸残基，位置254处的苏氨酸残基和位置256处的谷氨酸残基。
本公开的另一方面是抗体，其包含具有SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列的轻链。
本公开的另一方面是肽链，其包含SEQ ID NO:3中所示的氨基酸序列。
本公开的另一方面是肽链，其包含SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列。
在一个实施方案中，本公开的组合物包含编码本公开的重链可变区的核酸和编码本公开的抗原结合蛋白的轻链可变区的核酸。
在一个实施方案中，本公开的组合物包含编码本公开的重链可变区的核酸和编码本公开的轻链可变区的核酸。
在一个实施方案中，本公开的组合物包含编码本公开的与重链可变区的羧基末端连接的重链Fc结构域的核酸和编码本公开的轻链可变区的核酸。
本公开的另一方面是组合物，其包含编码SEQ ID NO:3中所示的氨基酸序列的核酸和编码SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列的核酸。
本公开的另一方面是组合物，其包含编码SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列的核酸和编码SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列的核酸。
本公开的另一方面是组合物，其包含编码SEQ ID NO:3中所示的氨基酸序列的核酸。
本公开的另一方面是组合物，其包含编码SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列的核酸。
本公开的另一方面是组合物，其包含具有SEQ ID NO:15中所示的序列的核酸和具有SEQ ID NO:16中所示的序列的核酸。
本公开的另一方面是组合物，其包含具有SEQ ID NO:17中所示的序列的核酸和具有SEQ ID NO:18中所示的氨基酸序列的核酸。
本公开的另一方面是组合物，其包含具有SEQ ID NO:13中所示的序列的核酸和具有SEQ ID NO:14中所示的氨基酸序列的核酸。
本公开的另一方面是组合物，其包含具有SEQ ID NO:15中所示的序列的核酸。
本公开的另一方面是组合物，其包含具有SEQ ID NO:17中所示的序列的核酸。
本公开的另一方面是组合物，其包含具有SEQ ID NO:13中所示的序列的核酸。
在一个实施方案中，本公开的组合物包含编码本公开的重链可变区的核酸。
在一个实施方案中，本公开的组合物包含编码本公开的重链可变区的核酸。
在一个实施方案中，本公开的组合物包含编码本公开的与重链可变区的羧基末端连接的重链Fc结构域的核酸。
在一个实施方案中，本公开的表达载体包含本公开的组合物。
在一个实施方案中，本公开的重组宿主细胞包含表达载体，其包含本公开的组合物。在替代实施方案中，重组宿主细胞可以包含编码第一抗原结合蛋白肽链(例如，抗体重链)的第一表达载体和编码本公开的第二抗原结合肽链(例如，抗体轻链)的第二表达载体。
本公开的另一方面是用于产生包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列的肽链的方法，所述方法包括以下步骤：培养包含编码SEQ ID NO:3中所示的氨基酸序列的核酸的重组宿主细胞；以及回收肽链。
在本公开的方法的一个实施方案中，核酸包含SEQ ID NO:15中所示的序列。
在本公开的方法的一个实施方案中，核酸包含SEQ ID NO:13中所示的序列。
在本公开的方法的一个实施方案中，核酸包含SEQ ID NO:17中所示的序列。
本公开的一个实施方案是用于产生抗原结合蛋白的方法，其包括以下步骤：a)培养包含表达载体的重组宿主细胞，所述表达载体包含本公开的组合物；以及b)回收抗原结合蛋白；由此产生抗原结合蛋白。
在本公开的一个实施方案中，由本公开的方法产生抗原结合蛋白。
本公开的一个实施方案是用于产生抗体的方法，其包括以下步骤：a)培养包含表达载体的重组宿主细胞，所述表达载体包含本公开的组合物；以及b)回收抗体；由此产生抗体。
本公开的一个实施方案是由本公开的方法产生的抗体。
本公开的另一方面是用于产生抗体的方法，其包括以下步骤：a)培养包含表达载体的重组宿主细胞，所述表达载体包含具有SEQ ID NO:17中所示的序列的核酸和具有SEQID NO:18中所示的序列的核酸；以及b)回收抗体；由此产生抗体。
本公开的另一方面是药物组合物，其包含：a)抗原结合蛋白，其包含重链可变区，所述重链可变区具有SEQ ID NO:5中所示的CDRH1氨基酸序列，SEQ ID NO:6中所示的CDRH2氨基酸序列和SEQ ID NO:7中所示的CDRH3氨基酸序列；以及轻链可变区，所述轻链可变区具有SEQ ID NO:8中所示的CDRL1氨基酸序列，SEQ ID NO:9中所示的CDRL2氨基酸序列和SEQ ID NO:10中所示的CDRL3氨基酸序列；和b)药学上可接受的载体。
在本公开的药物组合物的一个实施方案中，重链可变区进一步包含如SEQ ID NO:21中所示的重链FR4氨基酸序列。
在一个实施方案中，本公开的药物组合物包含重链Fc结构域，所述重链Fc结构域具有位置252处的酪氨酸残基，位置254处的苏氨酸残基和位置256处的谷氨酸残基，并且其中重链Fc结构域的氨基末端与重链可变区的羧基末端连接。
在本公开的药物组合物的一个实施方案中，抗原结合蛋白处于约75mg/ml至约150mg/ml之间的浓度。
在本公开的药物组合物的一个实施方案中，药学上有效的载体包含处于约pH 5.5至约pH 6.0的水性液体配制剂，其含有约40mM组氨酸、约180mM海藻糖、约100mM精氨酸、约8mM甲硫氨酸、比体积约0.02％重量的聚山梨酯80和约0.05mM EDTA。
在本公开的药物组合物的一个实施方案中，pH为约6.0，并且抗原结合蛋白处于约150mg/ml的浓度。
本公开的另一方面是药物组合物，其包含：a)抗体，其包含重链可变区，所述重链可变区具有SEQ ID NO:5中所示的CDRH1氨基酸序列，SEQ ID NO:6中所示的CDRH2氨基酸序列和SEQ ID NO:7中所示的CDRH3氨基酸序列；以及轻链可变区，所述轻链可变区具有SEQID NO:8中所示的CDRL1氨基酸序列，SEQ ID NO:9中所示的CDRL2氨基酸序列和SEQ ID NO:10中所示的CDRL3氨基酸序列；和b)药学上可接受的载体。
58.权利要求57的药物组合物，其中所述抗体处于约75mg/ml至约150mg/ml之间的浓度。
在本公开的药物组合物的一个实施方案中，药学上有效的载体包含处于约pH 5.5至约pH 6.0的水性液体配制剂，其含有约40mM组氨酸、约180mM海藻糖、约100mM精氨酸、约8mM甲硫氨酸、比体积约0.02％重量的聚山梨酯80和约0.05mM EDTA。
在本公开的药物组合物的一个实施方案中，pH为约6.0，并且抗体处于约150mg/ml的浓度。
本公开的另一方面是药物组合物，其包含：a)抗体，其包含重链和轻链，其中重链包含具有SEQ ID NO:3中所示的氨基酸序列的重链可变区序列；并且轻链包含具有SEQ IDNO:4中所示的氨基酸序列的轻链可变区序列；和b)药学上可接受的载体。
本公开的另一方面是药物组合物，其包含：a)抗体，其包含具有SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列的轻链；和b)药学上可接受的载体。
本公开的一个实施方案是治疗受试者中疾病的方法，其包括以下步骤：a)鉴定患有选自下组的疾病的受试者：哮喘、轻度哮喘、中度哮喘、重度哮喘、轻度嗜酸性哮喘、中度嗜酸性哮喘、重度嗜酸性哮喘、不受控制的嗜酸性哮喘、嗜酸性哮喘、亚嗜酸性哮喘、慢性阻塞性肺疾病、嗜酸性肉芽肿伴多血管炎、高嗜酸性粒细胞增多综合征、鼻息肉病、大疱性类天疱疮、嗜酸性食管炎、特应性皮炎、中度特应性皮炎和重度特应性皮炎；和(b)向受试者施用治疗有效量的根据本公开的抗原结合蛋白；由此治疗受试者中的疾病。
在本公开的方法的一个实施方案中，抗原结合蛋白的量为约2mg至约600mg。例如，抗原结合蛋白(例如抗体)的量可以是2mg、10mg、30mg、100mg、300mg或600mg剂量。
本公开的方法的一个实施方案中，每3个月一次或每6个月一次施用抗原结合蛋白。
在本公开的方法的一个实施方案中，受试者具有选自下组的绝对血液嗜酸性粒细胞计数：大于或等于每μL 200个细胞和大于或等于每μL 350个细胞。
本公开的一个实施方案是治疗受试者中疾病的方法，其包括以下步骤：a)鉴定患有选自下组的疾病的受试者：哮喘、轻度哮喘、中度哮喘、重度哮喘、轻度嗜酸性哮喘、中度嗜酸性哮喘、重度嗜酸性哮喘、不受控制的嗜酸性哮喘、嗜酸性哮喘、亚嗜酸性哮喘、慢性阻塞性肺疾病、嗜酸性肉芽肿伴多血管炎、高嗜酸性粒细胞增多综合征、鼻息肉病、大疱性类天疱疮、嗜酸性食管炎、特应性皮炎、中度特应性皮炎和重度特应性皮炎；和(b)向受试者施用治疗有效量的根据本公开的抗体；由此治疗受试者中的疾病。
本公开的一个实施方案是治疗受试者中疾病的方法，其包括以下步骤：a)鉴定患有选自下组的疾病的受试者：哮喘、轻度哮喘、中度哮喘、重度哮喘、轻度嗜酸性哮喘、中度嗜酸性哮喘、重度嗜酸性哮喘、不受控制的嗜酸性哮喘、嗜酸性哮喘、亚嗜酸性哮喘、慢性阻塞性肺疾病、嗜酸性肉芽肿伴多血管炎、高嗜酸性粒细胞增多综合征、鼻息肉病、大疱性类天疱疮、嗜酸性食管炎、特应性皮炎、中度特应性皮炎和重度特应性皮炎；和(b)向受试者施用治疗有效量的根据本公开的组合物；由此治疗受试者中的疾病。
本公开的另一方面是治疗受试者中轻度至中度哮喘的方法，其包括以下步骤：(a)鉴定具有轻度哮喘至中度哮喘诊断的受试者；和(b)向受试者施用治疗有效量的抗体，所述抗体包含重链可变区，所述重链可变区具有如SEQ ID NO:5中所示的CDR氨基酸序列，如SEQID NO:6中所示的CDR氨基酸序列和如SEQ ID NO:7中所示的CDR氨基酸序列；以及轻链可变区，所述轻链可变区具有如SEQ ID NO:8中所示的CDR氨基酸序列，如SEQ ID NO:9中所示的CDR氨基酸序列和如SEQ ID NO:10中所示的CDR氨基酸序列；由此治疗受试者中轻度至中度哮喘。
一个实施方案是本公开的方法，其中重链可变区进一步包含如SEQ ID NO:21中所示的重链FR4氨基酸序列。
一个实施方案是本公开的方法，其中抗体包含重链Fc结构域，所述重链Fc结构域具有位置252处的酪氨酸残基，位置254处的苏氨酸残基和位置256处的谷氨酸残基，并且其中重链Fc结构域的氨基末端与重链可变区的羧基末端连接。
一个实施方案是本公开的方法，其中抗体包含具有SEQ ID NO:3中所示的氨基酸序列的重链可变区序列；以及具有SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列的轻链可变区序列。
一个实施方案是本公开的方法，其中皮下施用抗体。
本公开的另一方面是治疗受试者中轻度至中度哮喘的方法，其包括以下步骤：(a)鉴定具有轻度哮喘至中度哮喘诊断的受试者；和(b)向受试者施用治疗有效量的抗体，所述抗体包含具有如SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列的重链和具有如SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列的轻链；由此治疗受试者中轻度至中度哮喘。
本公开的另一方面是治疗受试者中轻度至中度哮喘的方法，其包括以下步骤：(a)鉴定具有轻度哮喘至中度哮喘诊断的受试者；和(b)向受试者施用治疗有效量的药物组合物，所述药物组合物包含抗体和药学上有效的载体，所述抗体包含具有如SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列的重链和具有如SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列的轻链；由此治疗受试者中轻度至中度哮喘。
一个实施方案是本公开的方法，其中药学上有效的载体包含处于约pH5.5至约pH6.0的水性液体配制剂，其含有约40mM组氨酸、约180mM海藻糖、约100mM精氨酸、约8mM甲硫氨酸、比体积约0.02％重量的聚山梨酯80和约0.05mM EDTA。
本公开的另一方面是治疗受试者中重度哮喘的方法，其包括以下步骤：(a)鉴定具有重度哮喘诊断的受试者；和(b)向受试者施用治疗有效量的抗体，所述抗体包含重链可变区，所述重链可变区具有如SEQ ID NO:5中所示的CDR氨基酸序列，如SEQ ID NO:6中所示的CDR氨基酸序列和如SEQ ID NO:7中所示的CDR氨基酸序列；以及轻链可变区，所述轻链可变区具有如SEQ ID NO:8中所示的CDR氨基酸序列，如SEQ ID NO:9中所示的CDR氨基酸序列和如SEQ ID NO:10中所示的CDR氨基酸序列；由此治疗受试者中重度哮喘。
本公开的另一方面是治疗受试者中重度哮喘的方法，其包括以下步骤：(a)鉴定具有重度哮喘诊断的受试者；和(b)向受试者施用治疗有效量的抗体，所述抗体包含具有如SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列的重链和具有如SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列的轻链；由此治疗受试者中重度哮喘。
本公开的另一方面是治疗受试者中重度哮喘的方法，其包括以下步骤：(a)鉴定具有重度哮喘诊断的受试者；和(b)向受试者施用治疗有效量的药物组合物，所述药物组合物包含抗体和药学上有效的载体，所述抗体包含具有如SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列的重链和具有如SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列的轻链；由此治疗受试者中重度哮喘。
本公开的另一方面是治疗有此需要的受试者中中度至重度特应性皮炎的方法，其包括以下步骤：a)鉴定具有选自下组的至少一种的受试者：i)根据Eichenfield修订的Hanifin和Rajka标准的特应性皮炎诊断；ii)治疗前大于或等于约两年的特应性皮炎的事先诊断；iii)大于或等于约3的医疗保健专业人员的整体评价得分；iv)大于或等于约10％的体表面积的特应性皮炎受累；v)大于或等于16的湿疹面积和严重性指数得分；vi)每μL大于或等于150个细胞、每μL大于或等于200个细胞、每μL大于或等于300个细胞或每μL大于或等于350个细胞的绝对血液嗜酸性粒细胞计数；和vii)治疗前选自下组的至少一种状况：1)大于或等于六个月的对特应性皮炎的局部用药反应不足；2)对特应性皮炎的局部用药耐受性差；3)来自对特应性皮炎的局部用药的副作用；和4)对特应性皮炎的非药理治疗反应不足；和b)向受试者施用治疗有效量的抗体，所述抗体包含重链可变区，所述重链可变区具有如SEQ ID NO:5中所示的CDR氨基酸序列，如SEQ ID NO:6中所示的CDR氨基酸序列和如SEQID NO:7中所示的CDR氨基酸序列；以及轻链可变区，所述轻链可变区具有如SEQ ID NO:8中所示的CDR氨基酸序列，如SEQ ID NO:9中所示的CDR氨基酸序列和如SEQ ID NO:10中所示的CDR氨基酸序列；由此治疗受试者中特应性皮炎。
一个实施方案是本公开的方法，其中静脉内施用抗体。
本公开的另一方面是治疗有此需要的受试者中中度至重度特应性皮炎的方法，其包括以下步骤：a)鉴定具有选自下组的至少一种的受试者：i)根据Eichenfield修订的Hanifin和Rajka标准的特应性皮炎诊断；ii)治疗前大于或等于约两年的特应性皮炎的事先诊断；iii)大于或等于约3的医疗保健专业人员的整体评价得分；iv)大于或等于约10％的体表面积的特应性皮炎受累；v)大于或等于16的湿疹面积和严重性指数得分；vi)每μL大于或等于150个细胞、每μL大于或等于200个细胞、每μL大于或等于300个细胞以及每μL大于或等于350个细胞的绝对血液嗜酸性粒细胞计数；和vii)治疗前选自下组的至少一种状况：1)大于或等于六个月的对特应性皮炎的局部用药反应不足；2)对特应性皮炎的局部用药耐受性差；3)来自对特应性皮炎的局部用药的副作用；和4)对特应性皮炎的非药理治疗反应不足；和b)向受试者施用治疗有效量的抗体，所述抗体包含具有如SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列的重链和具有如SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列的轻链；由此治疗受试者中特应性皮炎。
本公开的另一方面是治疗受试者中中度至重度特应性皮炎的方法，其包括以下步骤：a)鉴定具有选自下组的至少一种的受试者：i)根据Eichenfield修订的Hanifin和Rajka标准的特应性皮炎诊断；ii)治疗前大于或等于约两年的特应性皮炎的事先诊断；iii)大于或等于约3的医疗保健专业人员的整体评价得分；iv)大于或等于约10％的体表面积的特应性皮炎受累；v)大于或等于16的湿疹面积和严重性指数得分；vi)每μL大于或等于150个细胞、每μL大于或等于200个细胞、每μL大于或等于300个细胞以及每μL大于或等于350个细胞的绝对血液嗜酸性粒细胞计数；和vii)治疗前选自下组的至少一种状况：1)大于或等于六个月的对特应性皮炎的局部用药反应不足；2)对特应性皮炎的局部用药耐受性差；3)来自对特应性皮炎的局部用药的副作用；和4)对特应性皮炎的非药理治疗反应不足；和b)向受试者施用治疗有效量的药物组合物，所述药物组合物包含抗体和药学上有效的载体，所述抗体包含具有如SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列的重链和具有如SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列的轻链；由此治疗受试者中特应性皮炎。
本公开的另一方面是降低受试者中绝对血液嗜酸性粒细胞计数的方法，其包括以下步骤：(a)鉴定具有选自下组的状况的受试者：哮喘、轻度哮喘、中度哮喘、重度哮喘、轻度嗜酸性哮喘、中度嗜酸性哮喘、重度嗜酸性哮喘、不受控制的嗜酸性哮喘、嗜酸性哮喘、亚嗜酸性哮喘、慢性阻塞性肺疾病、嗜酸性肉芽肿伴多血管炎、高嗜酸性粒细胞增多综合征、鼻息肉病、大疱性类天疱疮、嗜酸性食管炎和特应性皮炎；和(b)向所述受试者施用治疗有效量的抗体，所述抗体包含重链可变区，所述重链可变区具有如SEQ ID NO:5中所示的CDR氨基酸序列，如SEQ ID NO:6中所示的CDR氨基酸序列和如SEQ ID NO:7中所示的CDR氨基酸序列；以及轻链可变区，所述轻链可变区具有如SEQ ID NO:8中所示的CDR氨基酸序列，如SEQID NO:9中所示的CDR氨基酸序列和如SEQ ID NO:10中所示的CDR氨基酸序列；由此降低受试者中绝对血液嗜酸性粒细胞计数。
本公开的方法的一个实施方案进一步包括以下步骤：a)进行受试者中绝对血液嗜酸性粒细胞计数的第一测量；b)在向受试者施用治疗有效量的抗原结合蛋白后进行受试者中绝对血液嗜酸性粒细胞计数的第二测量；和c)比较该第一测量和第二测量。
本公开的方法的一个实施方案进一步包括以下步骤：a)进行受试者中绝对血液嗜酸性粒细胞计数的第一测量；b)在向受试者施用治疗有效量的抗原结合蛋白后进行受试者中绝对血液嗜酸性粒细胞计数的第二测量；和c)比较该第一测量和第二测量；并且其中受试者具有选自下组的绝对血液嗜酸性粒细胞计数：大于或等于每μL 200个细胞和大于或等于每μL 350个细胞。
本公开的另一方面是降低受试者中绝对血液嗜酸性粒细胞计数的方法，其包括以下步骤：(a)鉴定具有选自下组的状况的受试者：哮喘、轻度哮喘、中度哮喘、重度哮喘、轻度嗜酸性哮喘、中度嗜酸性哮喘、重度嗜酸性哮喘、不受控制的嗜酸性哮喘、嗜酸性哮喘、亚嗜酸性哮喘、慢性阻塞性肺疾病、嗜酸性肉芽肿伴多血管炎、高嗜酸性粒细胞增多综合征、鼻息肉病、大疱性类天疱疮、嗜酸性食管炎、特应性皮炎、中度特应性皮炎和重度特应性皮炎；和(b)向受试者施用治疗有效量的抗体，所述抗体包含具有如SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列的重链和具有如SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列的轻链；由此治疗受试者中特应性皮炎。
本公开的另一方面是降低受试者中绝对血液嗜酸性粒细胞计数的方法，其包括以下步骤：(a)鉴定具有选自下组的状况的受试者：哮喘、轻度哮喘、中度哮喘、重度哮喘、轻度嗜酸性哮喘、中度嗜酸性哮喘、重度嗜酸性哮喘、不受控制的嗜酸性哮喘、嗜酸性哮喘、亚嗜酸性哮喘、慢性阻塞性肺疾病、嗜酸性肉芽肿伴多血管炎、高嗜酸性粒细胞增多综合征、鼻息肉病、大疱性类天疱疮、嗜酸性食管炎、特应性皮炎、中度特应性皮炎和重度特应性皮炎；和(b)向受试者施用治疗有效量的药物组合物，所述药物组合物包含抗体和药学上有效的载体，所述抗体包含具有如SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列的重链和具有如SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列的轻链；由此降低受试者中绝对血液嗜酸性粒细胞计数。
本公开的一个实施方案是根据本公开的组合物，其用于疗法中。
本公开的一个实施方案是根据本公开的组合物，其用于治疗哮喘、轻度哮喘、中度哮喘、重度哮喘、轻度嗜酸性哮喘、中度嗜酸性哮喘、重度嗜酸性哮喘、不受控制的嗜酸性哮喘、嗜酸性哮喘、亚嗜酸性哮喘、慢性阻塞性肺疾病、嗜酸性肉芽肿伴多血管炎、高嗜酸性粒细胞增多综合征、鼻息肉病、大疱性类天疱疮、嗜酸性食管炎、特应性皮炎、中度特应性皮炎和重度特应性皮炎。
本公开的组合物可以进一步包含选自下组的缓冲剂：磷酸氢二钠七水合物、磷酸盐、柠檬酸、柠檬酸盐、磷酸钠、磷酸钾、柠檬酸钠和组氨酸，条件为6.8和7.2之间的pH，或从pH 6.2至pH 6.6的pH，其中优选6.3的pH值。本公开的组合物中的缓冲液可以以约10-30mM、约10-20mM、约20mM或约15.5mM的范围存在。例如，本公开的组合物中的缓冲液以约20mM或以约15.5mM磷酸氢二钠七水合物存在。
本公开的组合物可以包含磷酸氢二钠七水合物和柠檬酸缓冲剂，条件是从6.2至6.6(含)的pH，其中优选6.3的pH值。磷酸氢二碱七水合物缓冲剂可以以从约15-16.4mM的范围存在，并且柠檬酸缓冲剂可以以从约3.8-4.9mM的范围存在。例如，本公开的组合物可以包含约15.5mM磷酸氢二钠七水合物和约4.5mM柠檬酸一水合物。
本公开的组合物可以进一步包含糖。本公开的组合物可以进一步包含蔗糖。蔗糖可以在本公开的组合物中以从约5-20％；约10-15％、约11-13％或以约12％容量计重的范围存在。
本公开的组合物可以进一步包含聚山梨酯80。聚山梨酯80可以以从约0.01-0.1％重量(以体积计)的范围存在。例如，聚山梨酯80可以在本公开的组合物中以约0.02％容量计重或以约0.05％容量计重存在。
本公开的组合物可以进一步包含EDTA。EDTA可以以从约0.01-0.1mM的范围存在。例如，EDTA可以以约0.05mM存在。
在一个实施方案中，本公开的组合物进一步包含20mM磷酸氢二钠七水合物，比体积12％重量的蔗糖和比体积0.05％重量的聚山梨酯80。
在另一个实施方案中，本公开的组合物进一步包含15.5mM磷酸氢二钠、3.9mM柠檬酸一水合物、比体积12％重量的蔗糖、比体积0.02％重量的聚山梨酯80和0.05mM EDTA。
本公开的组合物可以包含处于pH 6.2的水性液体配制剂，其含有16.1mM磷酸氢二钠七水合物、3.9mM柠檬酸一水合物、比体积12％重量的蔗糖、比体积0.02％重量的聚山梨酯80和0.05mM EDTA。
本公开的组合物可以包含处于pH 6.2的水性液体配制剂，其含有15.2mM磷酸氢二钠七水合物、4.8mM柠檬酸一水合物、比体积12％重量的蔗糖、比体积0.02％重量的聚山梨酯80和0.05mM EDTA。
本公开的组合物可以包含处于pH 6.4的水性液体配制剂，其含有15.8mM磷酸氢二钠七水合物、4.2mM柠檬酸一水合物、比体积12％重量的蔗糖、比体积0.02％重量的聚山梨酯80和0.05mM EDTA。
本公开的组合物可以包含处于pH 6.6的水性液体配制剂，其含有16.3mM磷酸氢二钠七水合物、3.7mM柠檬酸一水合物、比体积12％重量的蔗糖、比体积0.02％重量的聚山梨酯80和0.05mM EDTA。
本公开的组合物可以包含处于pH 6.3的水性液体配制剂，其含有15.5mM磷酸氢二钠七水合物、4.5mM柠檬酸一水合物、比体积12％重量的蔗糖、比体积0.02％重量的聚山梨酯80和0.05mM EDTA。重要的是，可以调整以下实施例1的切向过滤和超滤交换步骤以产生本公开的组合物，例如包含以下的本公开的组合物：处于6.3的pH的15.5mM磷酸氢二钠七水合物、4.5mM柠檬酸一水合物，12％重量比体积的蔗糖、0.02％重量比体积的聚山梨酯80、0.05mM EDTA-或其他此类液体配制剂。
本公开的组合物可以包含单克隆抗体和缓冲剂的经纯化的制剂，其中组合物处于从6.8至7.2的pH，其中缓冲剂为组氨酸、磷酸盐、柠檬酸、柠檬酸盐或其盐。
在本公开的组合物中，缓冲剂可以是选自下组的至少一种：磷酸氢二钠七水合物、磷酸盐、柠檬酸和柠檬酸盐。
在本公开的组合物中，缓冲剂可以是磷酸钠、磷酸钾或柠檬酸钠。
本公开的组合物可以包含糖、碳水化合物和/或盐。
本公开的组合物还可以包含蔗糖或海藻糖。
本公开的组合物还可以包含单克隆抗体和缓冲剂的经纯化的制剂，其中组合物处于从6.8至7.2的pH，其中缓冲剂为磷酸盐或其盐。
本公开的组合物还可以包含选自以下的一个：第一配制剂：20mM磷酸氢二钠七水合物、比体积12％重量的蔗糖和比体积0.05％重量的聚山梨酯80；第二配制剂：15.5mM磷酸氢二钠七水合物、3.9mM柠檬酸一水合物、比体积12％重量的蔗糖和比体积0.02％重量的聚山梨酯80和0.05mM EDTA；以及第三配制剂：26mM磷酸氢二钠七水合物、比体积15％重量的蔗糖和比体积0.065％重量的聚山梨酯80。组合物可以处于约6.8至约7.2、约6.1至约6.5或约6至约6.6之间的pH。
本文所述的组合物可以通过许多常规技术产生。例如，组合物可以在重组表达系统中表达并从重组表达系统中纯化。在一个实施方案中，通过在适合表达包含SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2的多肽的条件下培养宿主细胞的方法产生组合物，其中组合物得以表达，和任选地纯化，和任选地在药物组合物内配制。
可以使用许多不同的表达系统和纯化方案来产生组合物。通常，用编码抗体的重组表达载体转化宿主细胞。可以采用范围广泛的宿主细胞，包括哺乳动物来源的真核细胞系(例如，CHO、Perc6、HEK293、HeLa、NS0)。合适的宿主细胞包括哺乳动物细胞，例如CHO(例如CHOK1和CHO-DG44)。
宿主细胞可以是分离的宿主细胞。宿主细胞通常不是多细胞生物(例如，植物或动物)的一部分。宿主细胞可以是非人宿主细胞。
与真核或哺乳动物细胞宿主一起使用的适当的克隆和表达载体以及克隆的方法是本领域已知的。
可以在促进抗体表达的条件下培养细胞。例如，生产生物反应器用于培养细胞。生产生物反应器体积可以是(i)约20,000升、约10,000升；约5,000升；约2,000升；约1,000升；或约500升；或者(ii)500和20,000升之间；500和10,000升之间；500和5,000升之间；1,000和10,000升之间或2,000和10,000升之间。例如，可以在处于约6.75至pH 7.00的pH的生产生物反应器中培养细胞。或者，可以在生产生物反应器中培养细胞约12至约18天。或者，可以在处于约6.75至pH 7.00的pH的生产生物反应器中培养细胞约12至约18天。该培养步骤可以帮助控制脱酰胺的抗体变体的水平，例如降低脱酰胺的抗体变体的水平。
可以通过常规蛋白质纯化规程回收和纯化组合物。例如，可以直接从培养基中收获组合物。细胞培养基的收获可以经由澄清，例如通过离心和/或深度过滤。组合物的回收随后是纯化以确保足够的纯度。
纯化中可以使用一种或多种色谱步骤，例如一种或多种色谱树脂；和/或一个或多个过滤步骤。例如，使用树脂如蛋白A、G或L的亲和色谱法可以用于纯化组合物。替代地，或除此之外，离子交换树脂如阳离子交换可以用于纯化组合物。替代地，或除此之外，疏水相互作用色谱树脂可以用于纯化组合物。或者，纯化步骤包括：亲和色谱树脂步骤，随后是阳离子交换树脂步骤，随后是疏水相互作用色谱树脂步骤。
例如，将收获物置于与蛋白A树脂接触。包含组合物的溶液可以从蛋白A树脂上洗脱并于pH 3.3至3.7处理15至240分钟。该蛋白A树脂步骤可以帮助控制聚集的抗体变体的水平，例如降低聚集的抗体变体的水平。
然后可以通过深度过滤和/或双层过滤进一步澄清包含组合物的溶液。
替代地，或除此之外，可以使用阴离子交换树脂。可以将包含组合物的溶液于8.3至8.7的负载pH置于与阴离子交换树脂(例如Q-SEPHAROSETM快速流动阴离子交换色谱)接触。包含组织物的溶液可以从阴离子交换树脂上洗脱并保持96小时或更短。该阴离子交换树脂步骤可以帮助控制脱酰胺的抗体变体的水平，例如降低脱酰胺的抗体变体的水平。
任选地，可以将胍和/或硫酸铵添加到包含组合物的溶液并保持15至240分钟。
替代地，或除此之外，可以使用疏水相互作用色谱树脂。可以将包含组合物的溶液于12至27g蛋白质/L树脂的负载比与疏水相互作用色谱树脂(例如苯基SEPHAROSETM快速流动色谱)接触。例如，可以使用约9至约11的洗脱梯度体积(床体积；BV)洗脱包含组合物的溶液。在从疏水相互作用色谱树脂洗脱期间可以使用约17至约23的洗脱峰切停(最大峰高的％)。该疏水相互作用色谱树脂步骤可以帮助控制聚集的抗体变体的水平，例如降低聚集的抗体变体的水平。
然后可以过滤包含组合物的溶液以除去病毒。然后可以将包含组合物的溶液以约76g蛋白质/L至约82g蛋白质/L，或约100g蛋白质/L的抗体浓度配制。可以将包含组合物的溶液填充到容器中并冷冻。可以将包含组合物的溶液的等分试样冻干。可以通过添加水来重构冻干物以产生组合物，所述组合物处于约6.8至约7.2的pH，包含75mg/L的蛋白质、单克隆抗IL-5抗体和20mM磷酸氢二钠七水合物、比体积12％重量的蔗糖和比体积0.05％重量的聚山梨酯80。
总的来说，本公开包括：
1.抗原结合蛋白，其包含重链可变区，所述重链可变区具有SEQ ID NO:5中所示的CDRH1氨基酸序列，SEQ ID NO:6中所示的CDRH2氨基酸序列和SEQ ID NO:7中所示的CDRH3氨基酸序列；以及轻链可变区，所述轻链可变区具有SEQ ID NO:8中所示的CDRL1氨基酸序列，SEQ ID NO:9中所示的CDRL2氨基酸序列和SEQ ID NO:10中所示的CDRL3氨基酸序列。
2.1的抗原结合蛋白，其中重链可变区进一步包含如SEQ ID NO:21中所示的重链FR4氨基酸序列。
3.2的抗原结合蛋白，其包含重链Fc结构域，所述重链Fc结构域具有位置252处的酪氨酸残基，位置254处的苏氨酸残基和位置256处的谷氨酸残基，并且其中重链Fc结构域的氨基末端与重链可变区的羧基末端连接。
4.抗原结合蛋白，其包含具有SEQ ID NO:3中所示的氨基酸序列的重链可变区序列；以及具有SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列的轻链可变区序列。
5.4的抗原结合蛋白，其包含重链Fc结构域，所述重链Fc结构域具有位置252处的酪氨酸残基，位置254处的苏氨酸残基和位置256处的谷氨酸残基，并且其中重链Fc结构域的氨基末端与重链可变区的羧基末端连接。
6.抗体，其包含重链和轻链，其中
a)重链包含重链可变区，所述重链可变区具有SEQ ID NO:5中所示的CDRH1氨基酸序列，SEQ ID NO:6中所示的CDRH2氨基酸序列和SEQ ID NO:7中所示的CDRH3氨基酸序列；并且
b)轻链包含轻链可变区，所述轻链可变区具有SEQ ID NO:8中所示的CDRL1氨基酸序列，SEQ ID NO:9中所示的CDRL2氨基酸序列和SEQ ID NO:10中所示的CDRL3氨基酸序列。
7.6的抗体，其中重链可变区进一步包含如SEQ ID NO:21中所示的重链FR4氨基酸序列。
8.7的抗体，其中重链包含重链Fc结构域，所述重链Fc结构域具有位置252处的酪氨酸残基，位置254处的苏氨酸残基和位置256处的谷氨酸残基。
9.抗体，其包含重链和轻链，其中
a)重链包含具有SEQ ID NO:3中所示的氨基酸序列的重链可变区序列；并且
b)轻链包含具有SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列的轻链可变区序列。
10.9的抗体，其中重链包含重链Fc结构域，所述重链Fc结构域具有位置252处的酪氨酸残基，位置254处的苏氨酸残基和位置256处的谷氨酸残基。
11.抗体，其包含具有SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列的轻链。
12.肽链，其包含SEQ ID NO:3中所示的氨基酸序列。
13.肽链，其包含SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列。
14.组合物，其包含编码1的重链可变区的核酸和编码1的抗原结合蛋白的轻链可变区的核酸。
15.组合物，其包含编码2的重链可变区的核酸和编码2的轻链可变区的核酸。
16.组合物，其包含编码3的与重链可变区的羧基末端连接的重链Fc结构域的核酸和编码3的轻链可变区的核酸。
17.组合物，其包含编码6的重链可变区的核酸和编码6的抗原结合蛋白的轻链可变区的核酸。
18.组合物，其包含编码7的重链可变区的核酸和编码7的轻链可变区的核酸。
19.组合物，其包含编码8的与重链可变区的羧基末端连接的重链Fc结构域的核酸和编码8的轻链可变区的核酸。
20.组合物，其包含编码SEQ ID NO:3中所示的氨基酸序列的核酸和编码SEQ IDNO:4中所示的氨基酸序列的核酸。
21.组合物，其包含编码SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列的核酸和编码SEQ IDNO:2中所示的氨基酸序列的核酸。
22.组合物，其包含编码SEQ ID NO:3中所示的氨基酸序列的核酸。
23.组合物，其包含编码SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列的核酸。
24.组合物，其包含具有SEQ ID NO:15中所示的序列的核酸和具有SEQ ID NO:16中所示的序列的核酸。
25.组合物，其包含具有SEQ ID NO:17中所示的序列的核酸和具有SEQ ID NO:18中所示的氨基酸序列的核酸。
26.组合物，其包含具有SEQ ID NO:13中所示的序列的核酸和具有SEQ ID NO:14中所示的氨基酸序列的核酸。
27.组合物，其包含具有SEQ ID NO:15中所示的序列的核酸。
28.组合物，其包含具有SEQ ID NO:17中所示的序列的核酸。
29.组合物，其包含具有SEQ ID NO:13中所示的序列的核酸。
30.组合物，其包含编码1的重链可变区的核酸。
31.组合物，其包含编码2的重链可变区的核酸。
32.组合物，其包含编码3中的与重链可变区的羧基末端连接的重链Fc结构域的核酸。
33.表达载体，其包含14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31或32的组合物。
34.重组宿主细胞，其包含表达载体，所述表达载体包含14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31或32的组合物。
35.用于产生包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列的肽链的方法，所述方法包括以下步骤：培养包含编码SEQ ID NO:3中所示的氨基酸序列的核酸的重组宿主细胞；以及回收肽链。
36.35的方法，其中核酸包含SEQ ID NO:15中所示的序列。
37.35的方法，其中核酸包含SEQ ID NO:13中所示的序列。
38.35的方法，其中核酸包含SEQ ID NO:17中所示的序列。
39.用于产生抗原结合蛋白的方法，其包括以下步骤：
a)培养包含表达载体的重组宿主细胞，所述表达载体包含14、15或16的组合物；
以及b)回收抗原结合蛋白；
由此产生抗原结合蛋白。
40.抗原结合蛋白，其由39的方法产生。
41.用于产生抗体的方法，其包括以下步骤：
a)培养包含表达载体的重组宿主细胞，所述表达载体包含17、18或19的组合物；以及
b)回收抗体；
由此产生抗体。
42.抗体，其由41的方法产生。
43.用于产生抗体的方法，其包括以下步骤：
a)培养包含表达载体的重组宿主细胞，所述表达载体包含20或22的组合物；以及
b)回收抗体；
由此产生抗体。
44.抗体，其由43的方法产生。
45.用于产生抗体的方法，其包括以下步骤：
a)培养包含表达载体的重组宿主细胞，所述表达载体包含24、26或27的组合物；以及
b)回收抗体；
由此产生抗体。
46.抗体，其由45的方法产生。
47.用于产生抗体的方法，其包括以下步骤：
a)培养包含表达载体的重组宿主细胞，所述表达载体包含具有SEQ ID NO:17中所示的序列的核酸和具有SEQ ID NO:18中所示的序列的核酸；以及
b)回收抗体；
由此产生抗体。
48.抗体，其由47的方法产生。
49.药物组合物，其包含：
a)抗原结合蛋白，其包含重链可变区，所述重链可变区具有SEQ ID NO:5中所示的CDRH1氨基酸序列，SEQ ID NO:6中所示的CDRH2氨基酸序列和SEQ ID NO:7中所示的CDRH3氨基酸序列；以及轻链可变区，所述轻链可变区具有SEQ ID NO:8中所示的CDRL1氨基酸序列，SEQ ID NO:9中所示的CDRL2氨基酸序列和SEQ ID NO:10中所示的CDRL3氨基酸序列；和
b)药学上可接受的载体。
50.49的药物组合物，其中重链可变区进一步包含如SEQ ID NO:21中所示的重链FR4氨基酸序列。
51.50的药物组合物，其包含重链Fc结构域，所述重链Fc结构域具有位置252处的酪氨酸残基，位置254处的苏氨酸残基和位置256处的谷氨酸残基，并且其中重链Fc结构域的氨基末端与重链可变区的羧基末端连接。
52.51的药物组合物，其中抗原结合蛋白处于约75mg/ml至约150mg/ml之间的浓度。
53.49、50、51或52的药物组合物，其中药学上有效的载体包含处于约pH5.5至约pH6.0的水性液体配制剂，其含有约40mM组氨酸、约180mM海藻糖、约100mM精氨酸、约8mM甲硫氨酸、比体积约0.02％重量的聚山梨酯80和约0.05mM EDTA。
54.53的药物组合物，其中pH为约6.0，并且抗原结合蛋白处于约150mg/ml的浓度。
55.药物组合物，其包含：
a)抗体，其包含重链可变区，所述重链可变区具有SEQ ID NO:5中所示的CDRH1氨基酸序列，SEQ ID NO:6中所示的CDRH2氨基酸序列和SEQ ID NO:7中所示的CDRH3氨基酸序列；以及轻链可变区，所述轻链可变区具有SEQ ID NO:8中所示的CDRL1氨基酸序列，SEQ IDNO:9中所示的CDRL2氨基酸序列和SEQ ID NO:10中所示的CDRL3氨基酸序列；和
b)药学上可接受的载体。
56.55的药物组合物，其中重链可变区进一步包含如SEQ ID NO:21中所示的重链FR4氨基酸序列。
57.56的药物组合物，其包含重链Fc结构域，所述重链Fc结构域具有位置252处的酪氨酸残基，位置254处的苏氨酸残基和位置256处的谷氨酸残基，并且其中重链Fc结构域的氨基末端与重链可变区的羧基末端连接。
58.57的药物组合物，其中所述抗体处于约75mg/ml至约150mg/ml之间的浓度。
59.55、56、57或58的药物组合物，其中药学上有效的载体包含处于约pH5.5至约pH6.0的水性液体配制剂，其含有约40mM组氨酸、约180mM海藻糖、约100mM精氨酸、约8mM甲硫氨酸、比体积约0.02％重量的聚山梨酯80和约0.05mM EDTA。
60.59的药物组合物，其中pH为约6.0，并且抗体处于约150mg/ml的浓度。
61.药物组合物，其包含：
a)抗体，其包含重链和轻链，其中重链包含具有SEQ ID NO:3中所示的氨基酸序列的重链可变区序列；并且轻链包含具有SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列的轻链可变区序列；和
b)药学上可接受的载体。
62.61的药物组合物，其包含重链Fc结构域，所述重链Fc结构域具有位置252处的酪氨酸残基，位置254处的苏氨酸残基和位置256处的谷氨酸残基，并且其中重链Fc结构域的氨基末端与重链可变区的羧基末端连接。
63.62的药物组合物，其中所述抗体处于约75mg/ml至约150mg/ml之间的浓度。
64.61、62或63的药物组合物，其中药学上有效的载体包含处于约pH 5.5至约pH6.0的水性液体配制剂，其含有约40mM组氨酸、约180mM海藻糖、约100mM精氨酸、约8mM甲硫氨酸、比体积约0.02％重量的聚山梨酯80和约0.05mM EDTA。
65.64的药物组合物，其中pH为约6.0，并且抗体处于约150mg/ml的浓度。
66.药物组合物，其包含：
a)抗体，其包含具有SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列的重链和具有SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列的轻链；和
b)药学上可接受的载体。
67.66的药物组合物，其中抗原结合蛋白处于约75mg/ml至约150mg/ml之间的浓度。
68.67的药物组合物，其中药学上有效的载体包含处于约pH 5.5至约pH6.0的水性液体配制剂，其含有约40mM组氨酸、约180mM海藻糖、约100mM精氨酸、约8mM甲硫氨酸、比体积约0.02％重量的聚山梨酯80和约0.05mM EDTA。
69.68的药物组合物，其中pH为约6.0，并且抗原结合蛋白处于约150mg/ml的浓度。
70.治疗受试者中疾病的方法，其包括以下步骤：
a)鉴定患有选自下组的疾病的受试者：哮喘、轻度哮喘、中度哮喘、重度哮喘、轻度嗜酸性哮喘、中度嗜酸性哮喘、重度嗜酸性哮喘、不受控制的嗜酸性哮喘、嗜酸性哮喘、亚嗜酸性哮喘、慢性阻塞性肺疾病、嗜酸性肉芽肿伴多血管炎、高嗜酸性粒细胞增多综合征、鼻息肉病、大疱性类天疱疮、嗜酸性食管炎、特应性皮炎、中度特应性皮炎和重度特应性皮炎；和
(b)向受试者施用治疗有效量的根据1、2、3、4、5或40的抗原结合蛋白；
由此治疗受试者中的疾病。
71.70的方法，其中抗原结合蛋白的量为约2mg至约600mg。
72.71的方法，其中每3个月一次或每6个月一次施用抗原结合蛋白。
73.70、71或72的方法，其中受试者具有选自下组的绝对血液嗜酸性粒细胞计数：大于或等于每μL 200个细胞和大于或等于每μL 350个细胞。
74.治疗受试者中疾病的方法，其包括以下步骤：
a)鉴定患有选自下组的疾病的受试者：哮喘、轻度哮喘、中度哮喘、重度哮喘、轻度嗜酸性哮喘、中度嗜酸性哮喘、重度嗜酸性哮喘、不受控制的嗜酸性哮喘、嗜酸性哮喘、亚嗜酸性哮喘、慢性阻塞性肺疾病、嗜酸性肉芽肿伴多血管炎、高嗜酸性粒细胞增多综合征、鼻息肉病、大疱性类天疱疮、嗜酸性食管炎、特应性皮炎、中度特应性皮炎和重度特应性皮炎；和
(b)向受试者施用治疗有效量的根据6、7、8、9、10、11、42、44、46和48的抗体；
由此治疗受试者中的疾病。
75.74的方法，其中抗体的量为约2mg至约600mg。
76.75的方法，其中每3个月一次或每6个月一次施用抗体。
77.74、75或76的方法，其中受试者具有选自下组的绝对血液嗜酸性粒细胞计数：大于或等于每μL 200个细胞和大于或等于每μL 350个细胞。
78.治疗受试者中疾病的方法，其包括以下步骤：
a)鉴定患有选自下组的疾病的受试者：哮喘、轻度哮喘、中度哮喘、重度哮喘、轻度嗜酸性哮喘、中度嗜酸性哮喘、重度嗜酸性哮喘、不受控制的嗜酸性哮喘、嗜酸性哮喘、亚嗜酸性哮喘、慢性阻塞性肺疾病、嗜酸性肉芽肿伴多血管炎、高嗜酸性粒细胞增多综合征、鼻息肉病、大疱性类天疱疮、嗜酸性食管炎、特应性皮炎、中度特应性皮炎和重度特应性皮炎；和
(b)向受试者施用治疗有效量的根据49、50、51、52、53或54的组合物；
由此治疗受试者中的疾病。
79.78的方法，其中组合物的量提供约2mg至约600mg的抗原结合蛋白剂量。
80.79的方法，其中每3个月一次或每6个月一次施用组合物。
81.78、79或80的方法，其中受试者具有选自下组的绝对血液嗜酸性粒细胞计数：大于或等于每μL 200个细胞和大于或等于每μL 350个细胞。
82.治疗受试者中疾病的方法，其包括以下步骤：
a)鉴定患有选自下组的疾病的受试者：哮喘、轻度哮喘、中度哮喘、重度哮喘、轻度嗜酸性哮喘、中度嗜酸性哮喘、重度嗜酸性哮喘、不受控制的嗜酸性哮喘、嗜酸性哮喘、亚嗜酸性哮喘、慢性阻塞性肺疾病、嗜酸性肉芽肿伴多血管炎、高嗜酸性粒细胞增多综合征、鼻息肉病、大疱性类天疱疮、嗜酸性食管炎、特应性皮炎、中度特应性皮炎和重度特应性皮炎；和
(b)向受试者施用治疗有效量的根据55、56、57、58、59、60、61、62、63、65、66、67、68或69的组合物；
由此治疗受试者中的疾病。
83.82的方法，其中组合物的量提供约2mg至约600mg的抗原结合蛋白剂量。
84.83的方法，其中每3个月一次或每6个月一次施用抗体。
85.82、83或84的方法，其中受试者具有选自下组的绝对血液嗜酸性粒细胞计数：大于或等于每μL 200个细胞和大于或等于每μL 350个细胞。
86.治疗受试者中轻度至中度哮喘的方法，其包括以下步骤：
(a)鉴定具有轻度哮喘至中度哮喘诊断的受试者；和
(b)向受试者施用治疗有效量的抗体，所述抗体包含重链可变区，所述重链可变区具有如SEQ ID NO:5中所示的CDR氨基酸序列，如SEQ ID NO:6中所示的CDR氨基酸序列和如SEQ ID NO:7中所示的CDR氨基酸序列；以及轻链可变区，所述轻链可变区具有如SEQ IDNO:8中所示的CDR氨基酸序列，如SEQ ID NO:9中所示的CDR氨基酸序列和如SEQ ID NO:10中所示的CDR氨基酸序列；
由此治疗受试者中轻度至中度哮喘。
87.86的方法，其中重链可变区进一步包含如SEQ ID NO:21中所示的重链FR4氨基酸序列。
88.87的方法，其中抗体包含重链Fc结构域，所述重链Fc结构域具有位置252处的酪氨酸残基，位置254处的苏氨酸残基和位置256处的谷氨酸残基，并且其中重链Fc结构域的氨基末端与重链可变区的羧基末端连接。
89.88的方法，其中抗体包含具有SEQ ID NO:3中所示的氨基酸序列的重链可变区序列；以及具有SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列的轻链可变区序列。
90.89的方法，其中抗体剂量为约2mg至约600mg。
91.90的方法，其中每3个月一次或每6个月一次施用抗体。
92.90的方法，其中皮下施用抗体。
93.86、87、88、89、90、91或92的方法，其中受试者具有选自下组的绝对血液嗜酸性粒细胞计数：大于或等于每μL 200个细胞和大于或等于每μL350个细胞。
94.治疗受试者中轻度至中度哮喘的方法，其包括以下步骤：
(a)鉴定具有轻度哮喘至中度哮喘诊断的受试者；和
(b)向受试者施用治疗有效量的抗体，所述抗体包含具有如SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列的重链和具有如SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列的轻链；
由此治疗受试者中轻度至中度哮喘。
95.94的方法，其中抗体剂量为约2mg至约600mg。
96.95的方法，其中每3个月一次或每6个月一次施用抗体。
97.96的方法，其中皮下施用抗体。
98.94、95、96或97的方法，其中受试者具有选自下组的绝对血液嗜酸性粒细胞计数：大于或等于每μL 200个细胞和大于或等于每μL 350个细胞。
99.治疗受试者中轻度至中度哮喘的方法，其包括以下步骤：
(a)鉴定具有轻度哮喘至中度哮喘诊断的受试者；和
(b)向受试者施用治疗有效量的药物组合物，所述药物组合物包含抗体和药学上有效的载体，所述抗体包含具有如SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列的重链和具有如SEQID NO:2中所示的氨基酸序列的轻链；
由此治疗受试者中轻度至中度哮喘。
100.92的方法，其中药学上有效的载体包含处于约pH 5.5至约pH 6.0的水性液体配制剂，其含有约40mM组氨酸、约180mM海藻糖、约100mM精氨酸、约8mM甲硫氨酸、比体积约0.02％重量的聚山梨酯80和约0.05mM EDTA。
101.100的方法，其中抗体剂量为约2mg至约600mg。
102.101的方法，其中每3个月一次或每6个月一次施用药物组合物。
103.102的方法，其中皮下施用药物组合物。
104.99、100、101、102或103的方法，其中受试者具有选自下组的绝对血液嗜酸性粒细胞计数：大于或等于每μL 200个细胞和大于或等于每μL 350个细胞。
105.治疗受试者中重度哮喘的方法，其包括以下步骤：
(a)鉴定具有重度哮喘诊断的受试者；和
(b)向受试者施用治疗有效量的抗体，所述抗体包含重链可变区，所述重链可变区具有如SEQ ID NO:5中所示的CDR氨基酸序列，如SEQ ID NO:6中所示的CDR氨基酸序列和如SEQ ID NO:7中所示的CDR氨基酸序列；以及轻链可变区，所述轻链可变区具有如SEQ IDNO:8中所示的CDR氨基酸序列，如SEQ ID NO:9中所示的CDR氨基酸序列和如SEQ ID NO:10中所示的CDR氨基酸序列；
由此治疗受试者中重度哮喘。
106.105的方法，其中重链可变区进一步包含如SEQ ID NO:21中所示的重链FR4氨基酸序列。
107.106的方法，其中抗体包含重链Fc结构域，所述重链Fc结构域具有位置252处的酪氨酸残基，位置254处的苏氨酸残基和位置256处的谷氨酸残基，并且其中重链Fc结构域的氨基末端与重链可变区的羧基末端连接。
108.107的方法，其中抗体包含具有SEQ ID NO:3中所示的氨基酸序列的重链可变区序列；以及具有SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列的轻链可变区序列。
109.108的方法，其中抗体剂量为约2mg至约600mg。
110.109的方法，其中每3个月一次或每6个月一次施用抗体。
111.110的方法，其中皮下施用抗体。
112.105、106、107、108、109、110或111的方法，其中受试者具有选自下组的绝对血液嗜酸性粒细胞计数：大于或等于每μL 200个细胞和大于或等于每μL 350个细胞。
113.治疗受试者中重度哮喘的方法，其包括以下步骤：
(a)鉴定具有重度哮喘诊断的受试者；和
(b)向受试者施用治疗有效量的抗体，所述抗体包含具有如SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列的重链和具有如SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列的轻链；
由此治疗受试者中重度哮喘。
114.113的方法，其中抗体剂量为约2mg至约600mg。
115.114的方法，其中每3个月一次或每6个月一次施用抗体。
116.115的方法，其中皮下施用抗体。
117.113、114、115或116的方法，其中受试者具有选自下组的绝对血液嗜酸性粒细胞计数：大于或等于每μL 200个细胞和大于或等于每μL 350个细胞。
118.治疗受试者中重度哮喘的方法，其包括以下步骤：
(a)鉴定具有重度哮喘诊断的受试者；和
(b)向受试者施用治疗有效量的药物组合物，所述药物组合物包含抗体和药学上有效的载体，所述抗体包含具有如SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列的重链和具有如SEQID NO:2中所示的氨基酸序列的轻链；
由此治疗受试者中重度哮喘。
119.118的方法，其中药学上有效的载体包含处于约pH 5.5至约pH 6.0的水性液体配制剂，其含有约40mM组氨酸、约180mM海藻糖、约100mM精氨酸、约8mM甲硫氨酸、比体积约0.02％重量的聚山梨酯80和约0.05mM EDTA。
120.119的方法，其中抗体剂量为约2mg至约600mg。
121.120的方法，其中每3个月一次或每6个月一次施用药物组合物。
122.121的方法，其中皮下施用药物组合物。
123.118、119、120、121或122的方法，其中受试者具有选自下组的绝对血液嗜酸性粒细胞计数：大于或等于每μL 200个细胞和大于或等于每μL 350个细胞。
124.治疗有此需要的受试者中中度至重度特应性皮炎的方法，其包括以下步骤：
a)鉴定具有选自下组的至少一种的受试者：
i)根据Eichenfield修订的Hanifin和Rajka标准的特应性皮炎诊断；
ii)治疗前大于或等于约两年的特应性皮炎的事先诊断；
iii)大于或等于约3的医疗保健专业人员的整体评价得分；
iv)大于或等于约10％的体表面积的特应性皮炎受累；
v)大于或等于16的湿疹面积和严重性指数得分；
vi)每μL大于或等于150个细胞、每μL大于或等于200个细胞和每μL大于或等于350个细胞的绝对血液嗜酸性粒细胞计数；
和vii)治疗前选自下组的至少一种状况：1)大于或等于六个月的对特应性皮炎的局部用药反应不足；2)对特应性皮炎的局部用药耐受性差；3)来自对特应性皮炎的局部用药的副作用；和4)对特应性皮炎的非药理治疗反应不足；和
b)向受试者施用治疗有效量的抗体，所述抗体包含重链可变区，所述重链可变区具有如SEQ ID NO:5中所示的CDR氨基酸序列，如SEQ ID NO:6中所示的CDR氨基酸序列和如SEQ ID NO:7中所示的CDR氨基酸序列；以及轻链可变区，所述轻链可变区具有如SEQ IDNO:8中所示的CDR氨基酸序列，如SEQ ID NO:9中所示的CDR氨基酸序列和如SEQ ID NO:10中所示的CDR氨基酸序列；
由此治疗受试者中特应性皮炎。
125.124的方法，其中重链可变区进一步包含如SEQ ID NO:21中所示的重链FR4氨基酸序列。
126.125的方法，其中抗体包含重链Fc结构域，所述重链Fc结构域具有位置252处的酪氨酸残基，位置254处的苏氨酸残基和位置256处的谷氨酸残基，并且其中重链Fc结构域的氨基末端与重链可变区的羧基末端连接。
127.126的方法，其中抗体包含具有SEQ ID NO:3中所示的氨基酸序列的重链可变区序列；以及具有SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列的轻链可变区序列。
128.127的方法，其中抗体剂量为约2mg至约600mg。
129.128的方法，其中每3个月一次或每6个月一次施用抗体。
130.128的方法，其中皮下施用抗体。
131.128的方法，其中静脉内施用抗体。
132.治疗有此需要的受试者中中度至重度特应性皮炎的方法，其包括以下步骤：
a)鉴定具有选自下组的至少一种的受试者：
i)根据Eichenfield修订的Hanifin和Rajka标准的特应性皮炎诊断；
ii)治疗前大于或等于约两年的特应性皮炎的事先诊断；
iii)大于或等于约3的医疗保健专业人员的整体评价得分；
iv)大于或等于约10％的体表面积的特应性皮炎受累；
v)大于或等于16的湿疹面积和严重性指数得分；
vi)每μL大于或等于150个细胞、每μL大于或等于200个细胞和每μL大于或等于350个细胞的绝对血液嗜酸性粒细胞计数；
和vii)治疗前选自下组的至少一种状况：1)大于或等于六个月的对特应性皮炎的局部用药反应不足；2)对特应性皮炎的局部用药耐受性差；3)来自对特应性皮炎的局部用药的副作用；和4)对特应性皮炎的非药理治疗反应不足；和
b)向受试者施用治疗有效量的抗体，所述抗体包含具有如SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列的重链和具有如SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列的轻链；
由此治疗受试者中特应性皮炎。
133.132的方法，其中抗体剂量为约2mg至约600mg。
134.133的方法，其中每3个月一次或每6个月一次施用抗体。
135.134的方法，其中皮下施用抗体。
136.132、133、134或135的方法，其中受试者具有选自下组的绝对血液嗜酸性粒细胞计数：大于或等于每μL 200个细胞和大于或等于每μL 150个细胞、大于或等于每μL 200个细胞和大于或等于每μL 350个细胞。
137.治疗受试者中中度至重度特应性皮炎的方法，其包括以下步骤：
a)鉴定具有选自下组的至少一种的受试者：
i)根据Eichenfield修订的Hanifin和Rajka标准的特应性皮炎诊断；
ii)治疗前大于或等于约两年的特应性皮炎的事先诊断；
iii)大于或等于约3的医疗保健专业人员的整体评价得分；
iv)大于或等于约10％的体表面积的特应性皮炎受累；
v)大于或等于16的湿疹面积和严重性指数得分；
vi)每μL大于或等于150个细胞、每μL大于或等于200个细胞和每μL大于或等于350个细胞的绝对血液嗜酸性粒细胞计数；
和vii)治疗前选自下组的至少一种状况：1)大于或等于六个月的对特应性皮炎的局部用药反应不足；2)对特应性皮炎的局部用药耐受性差；3)来自对特应性皮炎的局部用药的副作用；和4)对特应性皮炎的非药理治疗反应不足；和
b)向受试者施用治疗有效量的药物组合物，所述药物组合物包含抗体和药学上有效的载体，所述抗体包含具有如SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列的重链和具有如SEQ IDNO:2中所示的氨基酸序列的轻链；
由此治疗受试者中特应性皮炎。
138.137的方法，其中药学上有效的载体包含处于约pH 5.5至约pH 6.0的水性液体配制剂，其含有约40mM组氨酸、约180mM海藻糖、约100mM精氨酸、约8mM甲硫氨酸、比体积约0.02％重量的聚山梨酯80和约0.05mM EDTA。
139.138的方法，其中抗体剂量为约2mg至约600mg。
140.139的方法，其中每3个月一次或每6个月一次施用药物组合物。
141.140的方法，其中皮下施用药物组合物。
142.137、138、139、140或141的方法，其中受试者具有选自下组的绝对血液嗜酸性粒细胞计数：大于或等于每μL 200个细胞和大于或等于每μL 350个细胞。
143.降低受试者中绝对血液嗜酸性粒细胞计数的方法，其包括以下步骤：
(a)鉴定具有选自下组的状况的受试者：哮喘、轻度哮喘、中度哮喘、重度哮喘、轻度嗜酸性哮喘、中度嗜酸性哮喘、重度嗜酸性哮喘、不受控制的嗜酸性哮喘、嗜酸性哮喘、亚嗜酸性哮喘、慢性阻塞性肺疾病、嗜酸性肉芽肿伴多血管炎、高嗜酸性粒细胞增多综合征、鼻息肉病、大疱性类天疱疮、嗜酸性食管炎和特应性皮炎；和
(b)向所述受试者施用治疗有效量的抗体，所述抗体包含重链可变区，所述重链可变区具有如SEQ ID NO:5中所示的CDR氨基酸序列，如SEQ ID NO:6中所示的CDR氨基酸序列和如SEQ ID NO:7中所示的CDR氨基酸序列；以及轻链可变区，所述轻链可变区具有如SEQID NO:8中所示的CDR氨基酸序列，如SEQ ID NO:9中所示的CDR氨基酸序列和如SEQ ID NO:10中所示的CDR氨基酸序列；
由此降低受试者中绝对血液嗜酸性粒细胞计数。
144.143的方法，其中重链可变区进一步包含如SEQ ID NO:21中所示的重链FR4氨基酸序列。
145.144的方法，其中抗体包含重链Fc结构域，所述重链Fc结构域具有位置252处的酪氨酸残基，位置254处的苏氨酸残基和位置256处的谷氨酸残基，并且其中重链Fc结构域的氨基末端与重链可变区的羧基末端连接。
146.145的方法，其中抗体包含具有SEQ ID NO:3中所示的氨基酸序列的重链可变区序列；以及具有SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列的轻链可变区序列。
147.146的方法，其中抗体剂量为约2mg至约600mg。
148.147的方法，其中每3个月一次或每6个月一次施用抗体。
149.148的方法，其中皮下施用抗体。
150.142、144、145、146、147、148或149的方法，其中受试者具有选自下组的绝对血液嗜酸性粒细胞计数：大于或等于每μL 200个细胞和大于或等于每μL 350个细胞。
151.142、144、145、146、147、148或149的方法，其进一步包括以下步骤：
a)进行受试者中绝对血液嗜酸性粒细胞计数的第一测量；
b)在向受试者施用治疗有效量的抗原结合蛋白后进行受试者中绝对血液嗜酸性粒细胞计数的第二测量；和
c)比较该第一测量和第二测量。
152.142、144、145、146、147、148或149的方法，其进一步包括以下步骤：
a)进行受试者中绝对血液嗜酸性粒细胞计数的第一测量；
b)在向受试者施用治疗有效量的抗原结合蛋白后进行受试者中绝对血液嗜酸性粒细胞计数的第二测量；和
c)比较该第一测量和第二测量；并且其中受试者具有选自下组的绝对血液嗜酸性粒细胞计数：大于或等于每μL 200个细胞和大于或等于每μL 350个细胞。
153.降低受试者中绝对血液嗜酸性粒细胞计数的方法，其包括以下步骤：
(a)鉴定具有选自下组的状况的受试者：哮喘、轻度哮喘、中度哮喘、重度哮喘、轻度嗜酸性哮喘、中度嗜酸性哮喘、重度嗜酸性哮喘、不受控制的嗜酸性哮喘、嗜酸性哮喘、亚嗜酸性哮喘、慢性阻塞性肺疾病、嗜酸性肉芽肿伴多血管炎、高嗜酸性粒细胞增多综合征、鼻息肉病、大疱性类天疱疮、嗜酸性食管炎、特应性皮炎、中度特应性皮炎和重度特应性皮炎；和
(b)向受试者施用治疗有效量的抗体，所述抗体包含具有如SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列的重链和具有如SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列的轻链；
由此治疗受试者中特应性皮炎。
154.153的方法，其中抗体剂量为约2mg至约600mg。
155.154的方法，其中每3个月一次或每6个月一次施用抗体。
156.155的方法，其中皮下施用抗体。
157.154、155、156或157的方法，其中受试者具有选自下组的绝对血液嗜酸性粒细胞计数：大于或等于每μL 200个细胞和大于或等于每μL 350个细胞。
158.154、155、156或157的方法，其中受试者具有选自下组的绝对血液嗜酸性粒细胞计数：大于或等于每μL 200个细胞和大于或等于每μL 350个细胞。
159.154、155、156或157的方法，其进一步包括以下步骤：
a)进行受试者中绝对血液嗜酸性粒细胞计数的第一测量；
b)在向受试者施用治疗有效量的抗原结合蛋白后进行受试者中绝对血液嗜酸性粒细胞计数的第二测量；和
c)比较该第一测量和第二测量。
160.154、155、156或157的方法，其进一步包括以下步骤：
a)进行受试者中绝对血液嗜酸性粒细胞计数的第一测量；
b)在向受试者施用治疗有效量的抗原结合蛋白后进行受试者中绝对血液嗜酸性粒细胞计数的第二测量；和
c)比较该第一测量和第二测量；并且其中受试者具有选自下组的绝对血液嗜酸性粒细胞计数：大于或等于每μL 200个细胞和大于或等于每μL 350个细胞。
161.降低受试者中绝对血液嗜酸性粒细胞计数的方法，其包括以下步骤：
(a)鉴定具有选自下组的状况的受试者：哮喘、轻度哮喘、中度哮喘、重度哮喘、轻度嗜酸性哮喘、中度嗜酸性哮喘、重度嗜酸性哮喘、不受控制的嗜酸性哮喘、嗜酸性哮喘、亚嗜酸性哮喘、慢性阻塞性肺疾病、嗜酸性肉芽肿伴多血管炎、高嗜酸性粒细胞增多综合征、鼻息肉病、大疱性类天疱疮、嗜酸性食管炎、特应性皮炎、中度特应性皮炎和重度特应性皮炎；和
(b)向受试者施用治疗有效量的药物组合物，所述药物组合物包含抗体和药学上有效的载体，所述抗体包含具有如SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列的重链和具有如SEQID NO:2中所示的氨基酸序列的轻链；
由此降低受试者中绝对血液嗜酸性粒细胞计数。
162.161的方法，其中药学上有效的载体包含处于约pH 5.5至约pH 6.0的水性液体配制剂，其含有约40mM组氨酸、约180mM海藻糖、约100mM精氨酸、约8mM甲硫氨酸、比体积约0.02％重量的聚山梨酯80和约0.05mM EDTA。
163.162的方法，其中抗体剂量为约2mg至约600mg。
164.163的方法，其中每3个月一次或每6个月一次施用药物组合物。
165.164的方法，其中皮下施用药物组合物。
166.162、163、164、165或166的方法，其中受试者具有选自下组的绝对血液嗜酸性粒细胞计数：大于或等于每μL 200个细胞和大于或等于每μL 350个细胞。
167.162、163、164、165或166的方法，其进一步包括以下步骤：
a)进行受试者中绝对血液嗜酸性粒细胞计数的第一测量；
b)在向受试者施用治疗有效量的抗原结合蛋白后进行受试者中绝对血液嗜酸性粒细胞计数的第二测量；和
c)比较该第一测量和第二测量。
168.162、163、164、165或166的方法，其进一步包括以下步骤：
a)进行受试者中绝对血液嗜酸性粒细胞计数的第一测量；
b)在向受试者施用治疗有效量的抗原结合蛋白后进行受试者中绝对血液嗜酸性粒细胞计数的第二测量；和
c)比较该第一测量和第二测量；并且其中受试者具有选自下组的绝对血液嗜酸性粒细胞计数：大于或等于每μL 200个细胞和大于或等于每μL 350个细胞。
169.根据1-11、40、42、44、46、47或49-69中任一项的组合物，其用于疗法中。
170.根据1-11、40、42、44、46、47或49-69中任一项的组合物，其用于治疗哮喘、轻度哮喘、中度哮喘、重度哮喘、轻度嗜酸性哮喘、中度嗜酸性哮喘、重度嗜酸性哮喘、不受控制的嗜酸性哮喘、嗜酸性哮喘、亚嗜酸性哮喘、慢性阻塞性肺疾病、嗜酸性肉芽肿伴多血管炎、高嗜酸性粒细胞增多综合征、鼻息肉病、大疱性类天疱疮、嗜酸性食管炎、特应性皮炎、中度特应性皮炎和重度特应性皮炎。
实施例
实施例1
28Y042-7F11-1的动力学分析
进行动力学分析以比较28Y042-7F11-1、美泊利珠单抗和GSK3559090A(基于IgG1抗IL-5mAb分子的比较物)。结果总结在下表16中。由于28Y042-7F11-1的高亲和力，因此无法于25℃通过Biacore 4000准确测定解离速率；因此，使用KINEXA分析计算28Y042-7F11-1于25℃与人IL-5结合的准确亲和力。通过KINEXA溶液相亲和力分析，28Y042-7F11-1于25℃对人IL-5的亲和力为10.47pM(95％置信范围0.88pM-31.97pM)。相比之下，美泊利珠单抗与人IL-5结合的亲和力为122.8pM(由BIACORE 4000于25℃测定)。
通过BIACORE 4000分析了比较物抗体GSK3559090A于25℃与人IL-5的结合，给出16.4pM亲的和力(KD)值。GSK3559090A对人IL-5具有比美泊利珠单抗高10倍的KD，这主要是因为GSK3559090A的缔合速率(ka)相比于美泊利珠单抗快20倍。
使用BIACORE T200于37℃测定28Y042-7F11-1对人和食蟹猴IL-5的亲和力。较高的温度增加了28Y042-7F11-1的解离速率(kd)，使得其在仪器的范围内。28Y042-7F11-1于37℃对人和食蟹猴IL-5的亲和力分别为39.13pM和23.93pM。
在FORTEBIO OCTET RED384 BLI仪器上进行的竞争测定法表明28Y042-7F11-1与美泊利珠单抗竞争与人IL-5的结合。表16说明/描述：动力学KD数据的总结。(N.D.未测定)
表16.
与人Fc受体结合
pH 6.0下28Y042-7F11-1与美泊利珠单抗相比对人FcRn的亲和力增加约13倍(分别为157nM和2082nM)，并且于pH 7.4以低亲和力结合；于pH 7亲和力为16μM。BIACORE T200于37℃测定的KD值显示于表17中。表17说明/描述：28Y042-7F11-1和美泊利珠单抗于pH6.0和pH 7.4对人FcRn的结合亲和力的比较。
表17.
通过PROTEON XPR36对28Y042-7F11-1与人Fc gamma受体(FcγR)的结合的分析证明与含YTE的对照抗体的可比性。这些含YTE的mAb与FcγR的结合亲和力比人IgG1野生型对照低约1.5倍。28Y042-7F11-1对补体组分C1q的亲和力也低于人IgG1野生型对照(分别为750nM和465nM)。
在另一个实验中，在pH 6.0下28Y042-7F11-1与人IgG1野生型对照相比对人新生儿受体的亲和力展示出约3倍的增加(分别为130nM和359nM)，并且于pH 7.4以低亲和力结合(2650nM)，而野生型对照于此pH不与FcRn结合(表18)。这与实验中使用的YTE对照相当。表18说明/描述：使用PROTEON的28Y042-7F11-1与重组人新生儿受体(FcRn)的结合。野生型同种型对照和Fc失能的同种型对照衍生自最初针对F9凝血因子IX产生的非功能性(对于CDR结合)抗体。Fc失能的同种型对照在Fc区中含有两个点突变(L235和G237，两者都突变为丙氨酸)，其减少了与Fc gamma受体的相互作用。
表18.
TF-1功能性细胞测定法
评价了28Y042-7F11-1以剂量依赖性方式抑制人IL-5介导的TF-1细胞的增殖的能力。TF-1细胞是一种红白血病细胞系，其经工程化改造以响应于人和食蟹猴IL-5刺激而增殖。
在TF-1细胞增殖测定法中对28Y042-7F11-1的作用的分析表明，它是IL-5介导的TF-1细胞增殖的有效力的抑制剂。当在1nM-0.042pM浓度范围进行测试时，28Y042-7F11-1和美泊利珠单抗两者均引起剂量依赖性抑制人IL-5诱导的TF-1细胞增殖(IC50分别为4pM和105pM，图1)。这表明与美泊利珠单抗相比，28Y042-7F11-1的细胞测定效力大约提高了30倍。
当在1nM-0.042pM浓度范围下进行测试时，28Y042-7F11-1和美泊利珠单抗两者均引起剂量依赖性抑制人IL-5诱导的TF-1细胞增殖(IC50分别为0.004nM和0.105nM)。
通过在乙酸盐或磷酸盐缓冲液中于40℃温育1周使分子暴露于热应力后，对28Y042-7F11-1进行进一步分析。在这些条件下，TF-1细胞测定法中28Y042-7F11-1的IC50值在4pM-5pM的范围内，显示与暴露于“无应力的”对照条件下的28Y042-7F11-1相似的值。
嗜酸性粒细胞形状变化测定法及与内源性IL-5的结合
评价了28Y042-7F11-1抑制人全血中IL-5介导的嗜酸性粒细胞形状变化的能力。美泊利珠单抗和28Y042-7F11-1(10μg/ml)两者均显示出对重组IL-5(10ng/ml)介导的嗜酸性粒细胞形状变化的抑制，而对照抗体帕考利珠单抗(pascolizumab)和抗RSV(Fc失能)未能预防IL-5介导的嗜酸性粒细胞形状变化(图2)。
通过ELISA评价了28Y042-7F11-1和美泊利珠单抗(两者均为1μg/ml)结合来自CD3/CD28刺激的外周血单核细胞(PBMC)的上清液中的天然IL-5的能力。28Y042-7F11-1和美泊利珠单抗结合天然IL-5，而对照抗体帕考利珠单抗不结合。尽管测定法证明了与天然IL-5结合，但其未进一步优化以测定准确的EC50值(图3)。
通过免疫测定法测定的28Y042-7F11-1在人和食蟹猴血清中的体外稳定性
在汇集的对照人或食蟹猴血清中于37℃温育6周后，评价了28Y042-7F11-1结合重组IL-5的能力(图4)。温育后，样品在MSD免疫测定法中进行测试，其中使用固定化的生物素化的IL-5捕获剩余的活性28Y042-7F11-1，然后使用直接标记的抗人Fc单克隆试剂进行检测。在人和食蟹猴血清两者中，活性28Y042-7F11-1的回收率显示随时间的逐渐下降，在6周后分别达到73.1％和77.1％的T0浓度。将其与美泊利珠单抗(51.0％[人]和64.2％[食蟹猴])和已知在该测定法中具有较差稳定性的对IL-13具有特异性的对照抗体(27.9％[人]和24.9％[食蟹猴])的历史数据相比较。该研究的结果证明28Y042-7F11-1的体外人和食蟹猴血清稳定性与美泊利珠单抗获得的历史值相比是有利的，并表明28Y042-7F11-1的行为符合对典型单克隆抗体的预期。
食蟹猴中28Y042-7F11-1 PK/PD测定
进行了9个月的非GLP体内药代动力学/药效学(PK/PD)研究，包含4组食蟹猴(食蟹猕猴(Macaca fascicularis))，每组由2只雄性和2只雌性动物组成。在第1天通过静脉内推注向动物施用28Y042-7F11-1(0.05mg/kg或1mg/kg)、美泊利珠单抗(1mg/kg)或媒介物。除了测定注射抗体的PK参数外，还评价了两个PD参数以将体内28Y042-7F11-1的活性与美泊利珠单抗相比较：a)嗜酸性粒细胞抑制的水平和持续时间；b)总IL-5血清浓度的水平和持续时间。
28Y042-7F11-1的PK评价
对食蟹猴血清样品进行长达5376小时(第32周)的PK评价。分析显示，28Y042-7F11-1具有与美泊利珠单抗相比降低了1.8倍的血清清除率(分别为0.105ml/hr/kg对0.185ml/hr/kg)，并且具有与美泊利珠单抗的11.5天相比，24.5天的改进的半衰期(表19)。表19说明/描述：从食蟹猴PK研究测定的药代动力学参数(*中值)。
表19.
28Y042-7F11-1介导的嗜酸性粒细胞抑制
嗜酸性粒细胞计数的减少用作28Y042-7F11-1介导的IL-5中和活性的生物标志物。在体内，与食蟹猴中的美泊利珠单抗相比，28Y042-7F11-1展示出延长的嗜酸性粒细胞抑制的持续时间(图5)。28Y042-7F11-1以美泊利珠单抗剂量的1/20给药时，显示出对嗜酸性粒细胞的等同或略胜一筹的抑制，表明在体内28Y042-7F11-1具有比美泊利珠单抗至少高20倍的活性。当以1mg/kg给药时，对于28Y042-7F11-1，血液嗜酸性粒细胞数量在给药后长达24周具有≤50％的给药前值，相比之下美泊利珠单抗则为4-7周。血液嗜酸性粒细胞数量在28Y042-7F11-1的约第7周和美泊利珠单抗的第4周开始显示出恢复。这些数据证明，在人中可实现每月3次给药，并且也可达到每月6次给药。
血清中总IL-5水平
观察到总IL-5的水平(与28Y042-7F11-1或美泊利珠单抗几乎排他复合的IL-5)在给药后增加，并且两个28Y042-7F11-1给药组与美泊利珠单抗组(其中IL-5复合物早得多就开始下降)相比显示出显著的持久性(图6)。在研究第29天(672小时)后1mg/kg美泊利珠单抗给药组开始下降，在研究第85天(2016小时)后0.05mg/kg 28Y042-7F11-1组开始下降，而研究第113天(2688小时)后1mg/kg28Y042-7F11-1开始下降。这反映出与28Y042-7F11-1(其继续维持与IL-5的复合物更长的持续时间)相比，美泊利珠单抗对IL-5的亲和力较低且半衰期较短。
还通过单次静脉内施用和通过单次皮下施用对递送的28Y042-7F11-1进行了非房室药代动力学分析。静脉内施用的GSK3511294与美泊利珠单抗相比显示出增加的血清半衰期(24天对11.5天)和1.8倍的血清清除率的降低(图4)。方法：TF-1功能性细胞测定法
在96孔聚丙烯板中制备抗体样品和对照，用于初步筛选。将抗体在细胞培养基中稀释至200nM的最终测定浓度，然后使用滤板(Pall Corporation多孔板，ACRO PREP 96滤板，3.0μm玻璃纤维介质/0.2μm BIO-INERT膜，#5053)进行无菌过滤。将样品在平板上按1/4进行系列稀释以产生浓度范围为(200nM-7.63pM)的10点系列。目的是生成单个剂量响应曲线以提供变化的IC50值的早期估计。在细胞培养基中稀释用于刺激细胞的人IL-5细胞因子(同源二聚体的分子量，28.5KDa)，并以17.5pM(0.5ng/ml)的最终测定浓度(测定法中人IL-5刺激的EC80)制备。将人IL-5添加到含有抗体稀释系列的平板中，并于室温温育1小时。将TF1细胞用PBS洗涤3次以确保成功去除用于细胞繁殖的生长因子GMCSF(粒细胞巨噬细胞集落刺激因子)。将细胞以0.2x 106个细胞/孔的密度接种在96孔实心白色平底组织培养板中。随后将预温育的抗体和细胞因子添加到细胞中，并于37℃，5％ CO2进一步温育3天。从培养箱中取出平板，并将100μl的CELLTITER-GLO发光试剂(Promega，G7571)添加到平板的孔中，并且于室温在平板摇床上温育1小时。随后在ENVISION发光读板器(Biomax501510)上读取平板。
或者，为了更详细地评价IC50值，与上述方法相比使用以下变化。在96孔聚丙烯板中制备抗体和对照的稀释系列。在细胞培养基中将抗体稀释至1nM的最终测定浓度，并在平板上按1/1.7进行系列稀释以产生(1nM–0.000418pM)的浓度范围。在细胞培养基中稀释用于刺激细胞的人IL-5细胞因子，并以3pM的最终测定浓度制备。
方法：BIACORE
与人IL-5的结合的测量使用BIACORE 4000(GE Healthcare)完成。自始至终使用的样品流速为10μl/min用于偶联和再生，以及30μl/min用于动力学测定。通过伯胺偶联(GEHealthcare，BR-1000-50)将蛋白A固定化在Series S CM5芯片(GE Healthcare，BR-1005-30)上。然后将该表面用于捕获斑点1和5上的抗IL-5抗体，而斑点2和4用于参考。然后将重组人IL-5以100nM通过捕获的抗体。使用30分钟的解离时间，因为在先前的实验中发现这对于准确测定美泊利珠单抗的脱离速率(off-rate)是必要的。结合曲线用缓冲液注射(即0nM)进行两次参考，并使用1:1模型将数据与BIACORE 4000评估软件进行拟合。使用HBS-EP(Teknova，H8022)作为运行缓冲液以及50mM NaOH作为再生溶液于25℃进行运行。
数据分析发现，抗体的脱离速率处于BIACORE 4000仪器的灵敏度极限，并因此无法计算于25℃准确的解离速率。因此于37℃重复运行以增加解离速率，从而使得有可能计算出抗体的准确解离速率。
方法：MSD-SET分析
使用MSD-SET(MSD溶液平衡滴定)分析来测定这些抗体于25℃对人IL-5的亲和力，因为在此温度下解离速率太慢以致无法通过BIACORE进行测量。MSD-SET确定溶液相，抗体的平衡亲和力。该方法依赖于检测在滴定系列的抗体浓度中处于平衡的游离抗原。
于30pM的恒定浓度使用生物素化的人IL-5，而抗体样品从2.5nM至0.5pM按1/3进行滴定，其中在96孔聚丙烯板上以0.05pM按1/10对样品进行最终稀释。将滴定的抗体和IL-5于室温温育24小时。24小时后，将抗体(PBS中20nM)于室温包被到标准结合MSD平板(MesoScale Discovery，L15XA)上30分钟。然后用STARTING BLOCK封闭缓冲液(ThermoScientific，#37542)将板封闭30分钟，同时以700rpm摇动，随后用洗涤缓冲液洗涤3次。将温育的溶液添加到MSD板上150秒，同时以700rpm摇动，然后进行一次洗涤。通过在平板上温育3分钟，用SULFOTAG标记的链霉亲和素(Meso Scale Discovery，R32AD-1)检测平板上捕获的抗原。将平板用洗涤缓冲液洗涤3次，然后在使用具有表面活性剂的1x读取缓冲液T的MSD SECTOR IMAGER仪器上(Meso Scale Discovery，R92TC-1)读取。使用GRAPHPAD PRISM软件将百分比游离抗原绘制为滴定抗体的函数，并拟合为二次方程。
还使用MSD-SET分析测定于25℃对食蟹猴IL-5的亲和力。所使用的方法与上述相同，但使用62.5pM的食蟹猴IL-5浓度。
方法：28Y042-7F11-1的KINEXA分析
为了产生28Y042-7F11-1于25℃与人IL-5结合的准确亲和力测定，将KINEXA(动力学排斥测定法)用作MSD-SET分析的替代品，因为对于28Y042-7F11-1生成的95％置信区间显示数据与模型的拟合度差。
使用Sapidyne的KINEXA3200仪器进行溶液相亲和力测量。该方法依赖于检测在滴定系列的抗原浓度中处于平衡的游离抗体。对于检测，使用包被有人IL-5的NHS激活的SEPHEROSE珠(GE Healthcare，17-0906-01)创建珠基质。对于亲和力测定，将固定浓度的抗体与人IL-5浓度的稀释系列温育，并在样品在KINEXA3200仪器上运行之前允许结合达到平衡。将每种溶液通过抗原珠的等分试样，其中游离抗体与抗原包被的珠结合，并使用抗人IgG抗体(DYLIGHT 649-AFFINIPURE F(ab’)2片段山羊抗人IgG；JackosonImmunoresearch,109-496-170)进行检测，其中使用新的抗原珠来测量每个样品。使用KINEXA机器固有的软件分析数据，其中使用高于和低于相互作用预期亲和力的不同起始的抗体浓度，即300pM和50pM(分别为浓度驱动和亲和力驱动的相互作用)进行多次运行并且其中在单次测定中具抗原的浓度的范围浓度能够使所有可用抗体饱和，导致几乎100％未结合(对于浓度驱动曲线为10nM至4.88pM，对于亲和力驱动曲线为1nM至0.49pM)。使用KINEXA机器固有的“n-plot”分析软件对来自多次运行的数据进行合并分析以测定KD和95％置信区间。
方法：与美泊利珠单抗竞争的28Y042-7F11-1的IL-5结合
为了确定28Y042-7F11-1与美泊利珠单抗结合人IL-5上的相同表位，使用FORTEBIO OCTET RED384生物层干涉仪(BLI)进行了竞争测定法。由于人IL-5是二聚体，因此使用串联测定法，其中将PBSF缓冲液中处于5μg/mL的生物素化人IL-5捕获到链霉亲和素表面(FORTEBIO，18-5019)上。该表面用PBSF中处于100nM的美泊利珠单抗，随后是处于100nM的28Y042-7F11-1饱和。用28Y042-7F11-1饱和的IL-5表面随后是美泊利珠单抗重复该过程，并且自结合(self-binning)对照也包括在内。分析于25℃运行，其中平板摇床速度为1000rpm。使用仪器的FORTEBIO数据分析来分析数据。
方法：SEC分析
进行分析尺寸排阻色谱法(SEC)以评估分子的纯度(％单体)和保留时间。滞留时间可以表明分子潜在的可开发性问题。使用TSK G3000SWXL，250A，5μm，30cm x 7.8mm柱在AGILENT 1100HPLC系统上进行SEC。运行条件为200mM NaH2PO4，250mM NaCl，pH 6.0，流速为0.5ml/min。每样品的负载为20μg，其中运行时间为30分钟。使用CHEMSTATION中的峰积分软件分析结果。
方法：通过PROTEON评价28Y042-7F11-1与人Fc受体的结合
使用PROTEON XPR36(BIORAD)生物传感器仪器评价28Y042-7F11-1与重组可溶性人Fc gamma受体(FcγR)的结合。针对含有野生型人IgG1 Fc区的阳性对照抗体和含有Fc区中降低与Fc gamma受体相互作用的两个点突变(L235A/G237A)的阴性对照抗体分析了抗体。在其Fc区中含有YTE突变的另一种对照抗体也包括在内(28Y042-7F11-1也包含YTE突变)。
通过伯胺偶联(GE Healthcare，BR-1000-50)将鼠抗聚组氨酸IgG(ANTI-TETRA-HIS；Qiagen，34670)固定化在GLM生物传感器芯片(Bio-Rad，176-5012)上。该表面用作经聚组氨酸标签的人Fc gamma受体的捕获表面(均为内部生成的试剂[CD64-Fc除外；R&DSystems，1257-FC])。将待测试的抗体用作分析物并以1024nM、256nM、64nM、16nM和4nM通过，其中0nM的注射(即单独的缓冲液)用于双重参考结合曲线。相互作用之间用100mM磷酸对鼠抗聚组氨酸IgG表面进行再生。使用HBS-EP(Teknova，H8022)作为运行缓冲液于25℃进行运行。分别分析每个受体的数据，设置整体R-max并使用PROTEON的分析软件固有的平衡模型。
方法：通过PROTEON评价28Y042-7F11-1与人类补体C1q的结合
使用PROTEOn XPR36(BioRadTM)生物传感器仪器评价28Y042-7F11-1与人重组可溶性补体C1q的结合。含有在其Fc区的YTE变化的对照抗体作为对照包括在内。
通过伯胺偶联(GE Healthcare，BR-1000-50)将待测试的抗体固定化在GLC芯片(Bio-Rad，176-5011)上。经重组C1q(Sigma，C1740)以512nM、128nM、32nM、8nM、2nM和0nM(即单独的缓冲液)通过固定化的抗体，并将空白的活化和失活流动池用于双重参考结合曲线。用于结合分析的运行缓冲液是具有10mM CaCl2的HBS-EP(pH7.4，Teknova，H8022)。将数据拟合至使用整体R-max值的PROTEON XPR36(BioRadTM)分析软件固有的平衡模型。
方法：FcRn结合
使用BIACORE T200仪器于37℃评价28Y042-7F11-1和美泊利珠单抗于pH 6.0和pH7.4与人FcRn的结合亲和力。将人重组IL-5在乙酸盐缓冲液pH 5.0中稀释，并通过胺偶联至CM5芯片(GE，BR100530)上而固定化至535RU的水平。通过使HBS-EP(Teknova，H8022)缓冲液中两者任一的mAb的100nM溶液流过芯片表面(5μl/min)24秒来捕获28Y042-7F11-1或美泊利珠单抗。经由固定化的IL-5捕获抗体后，不同浓度(0.5μM至32μM)的人FcRn的循环以5μl/min流过芯片表面120秒的接触时间，随后每个周期80秒解离。在每个循环完成时，使用10mM甘氨酸pH 1.5以50μl/min 5秒，随后是10mM NaOH以50μl/min 5秒对芯片表面进行再生。于pH 6.0(HBS-EP+，Teknova，目录：H8022，pH 6.0)和pH 7.4(HBS-EP)下对每种浓度进行FcRn循环。对于人FcRn使用42929Da的分子量进行计算。
方法：结合天然IL-5
测定了28Y042-7F11-1、美泊利珠单抗和阴性对照抗体(帕考利珠单抗和抗RSV)结合天然IL-5的能力。将28Y042-7F11-1、美泊利珠单抗或对照抗体在PBS中稀释至1μg/ml/200μl/孔的浓度，并在MAXISORP ELISA板(Nunc，10394751)上于4℃温育过夜，然后洗涤(所有洗涤步骤使用200μl/孔补充有0.05％ Tween 20的PBS)。将平板用300μl/孔补充有1％BSA(Sigma，A9576)的PBS封闭2小时，然后将1:2滴定的含有4ng/ml天然IL-5的培养上清液添加到平板。将上清液与抗体于室温温育1小时，洗涤，然后将以1μg/ml稀释于补充有0.5％BSA的PBS中100μl/孔的生物素化抗IL-5抗体(Fisher，MM550CB)添加到平板于室温1小时。1:5500稀释于补充有0.5％ BSA的PBS中的链霉亲和素-HRP(GE Healthcare，RPN4401V)用于检测(100μl/孔)，并于室温温育20分钟，随后添加100μl/孔TMB底物5分钟，然后使用100μl/孔的1M H2SO4终止反应。使用SPECTRAMAX读板器(Biomax，088261；所有点均一式两份进行)在450nm处读取吸光度。还评价了使用缺少IL-5或不存在捕获抗体(28Y042-7F11-1、美泊利珠单抗和阴性对照抗体)的培养上清液的对照条件。
通过用抗CD3和抗CD28抗体刺激人分离的PBMC生成天然IL-5。在肝素钠(1000IU/100ml)中获得来自健康志愿者供体(人)的血液(100ml)。按照制造商的指南，使用HISTOPAQUE FICOLL和LEUCOSEP管(Greiner，227290)通过密度梯度离心分离血液以分离PBMC，然后用RPMI(Gibco，31870074)1:1稀释。分离后，将PBMC用RPMI洗涤两次(于1200rpm旋转2x 5分钟)。第二次洗涤后，将细胞重悬于50ml RPMI(补充有10％胎牛血清，青霉素/链霉素和L-谷氨酰胺)中，从中取出500μl样品，并与TRYPLE EXPRESS(Gibco，12604-021)1:1混合，并在VICELL上运行以获取细胞计数。用1μg/ml抗CD3(内部的OKT3)和3μg/ml抗CD28(内部的)于37℃预包被平板60分钟，随后用PBS洗涤孔一次。将细胞稀释至1x106个/ml，并以200μl/孔(2x105个细胞)添加到预包被抗CD3/CD28的孔中，并于37℃，5％ CO2温育4天。刺激后，将细胞上清液汇集到50ml falcon管中并旋转(5分钟，1200rpm)。将上清液(45ml)回收到新的falcon管中并弃去细胞沉淀。将BSA(667μl，来自Sigma，A9576)添加到40ml上清液(0.5％最终浓度)中，并在2个VIVASPIN 20柱(Sartorius，VS0112)之间等分，并于3600g(4500rpm)离心2x 10分钟以浓缩上清液。汇集富集的上清液级分，于4℃储存。作为测定对照，将未旋转或未添加BSA的5ml原始上清液也于4℃储存。以与上述相同的方式旋转未经刺激的上清液样品，并于4℃储存以获得缺乏IL-5的对照上清液。使用QUANTIKINE ELISA试剂盒(R&D Systems，D5000B)对IL-5的浓度进行定量。
方法：通过流式细胞术测定IL-5介导的嗜酸性粒细胞形状变化的抑制
该测定法用于测量28Y042-7F11-1或美泊利珠单抗对人全血中重组IL-5介导的嗜酸性粒细胞形状变化的抑制(所有点均一式两份进行)。从GlaxoSmithKline Stevenage献血单位获得肝素钠中的来自健康志愿者供体(人；经过相关的适当同意)的血液(1000IU/100ml)。将28Y042-7F11-1、美泊利珠单抗以及对照抗体帕考利珠单抗和抗RSV各自稀释以获得10μg/ml的最终测定浓度。将抗体与等体积的重组IL-5(R&D Systems，批号091231202)以10ng/ml的最终浓度于37℃温育1小时。温育后，将每个20μl抗体/IL-5复合物的样品添加到96深孔聚丙烯板(Fisher Scientific，10007621)中的来自六个供体之一的80μl全血中。将平板于37℃温育30分钟，然后将其置于冰上，并使用1:9:30的CELL FIX:水:PBS稀释(该比例比制造商建议的稀释度高4倍，以提供不损害嗜酸性粒细胞完整性的条件)的CELL FIX(BD，340181)以250μl/孔固定2分钟。然后按照制造商的方案，以1ml/孔冰冷的PHARM LYSE(BioLegend，RBC裂解缓冲液，420301)裂解细胞。旋转样品并除去上清液，然后将其重悬于FACS缓冲液中，并通过它们在PE通道中的自发荧光在CANTO II门控嗜酸性粒细胞上获取数据。还使用单独的PBS测试了在不存在IL-5的情况下28Y042-7F11-1、美泊利珠单抗、帕考利珠单抗和抗RSV的作用。还使用单独的PBS测试了在不存在任何抗体的情况下IL-5对嗜酸性粒细胞形状变化的影响。
方法：血清稳定性研究
将28Y042-7F11-1稀释到纯的汇集的无菌人血清(GSK Stevenage献血单位)或纯的汇集的无菌食蟹猴血清(来自SeraLabs)中以给出4ml的以120μg/ml的目标浓度含有28Y042-7F11-1的每一个。然后将每个血清样品(人或食蟹猴)分成5x 750μl等分试样，放入无菌的2ml微量离心管中，并将盖子封牢。然后立即将每种血清种类的一份等分试样置于干冰上，并允许其冷冻，生成T0样品，然后转移至-80℃进行储存。将剩余的等分试样放置到设置在37℃，5％CO2的湿润组织培养箱中。在1、2、4和6周后，取出每种血清种类的1份等分试样，如前在干冰上冷冻，然后转移至-80℃进行储存。体外稳定性研究在取出并储存6周样品时完成。
为了在血清温育时间进程中对28Y042-7F11-1进行定量，在MSD(Meso ScaleDiscovery)IL-5捕获免疫测定法中测试了源自体外血清稳定性研究的样品。由于使用了生物素化的IL-5作为捕获试剂，因此仅捕获了具有针对IL-5的活性的分子，并随后对其进行了检测，因此，随时间推移检测到的回收率的任何变化都表示活性28Y042-7F11-1的丧失。在完成6周的温育后，所有样品均在单次测定法中一起测试。
使用96孔标准结合MSD板(MSD，#L15XA-6)进行IL-5捕获免疫测定法，该板用50μl的以2μg/ml稀释至组织培养等级PBS(Sigma-Aldrich，#D8537)中的NEUTRAVIDIN(Thermo-Fisher Scientific，#31000)包被。将板于+4℃放置过夜。使用自动洗板器(BiotekELx405)清洗包被的平板，其中每个孔均用300μl PBS+0.1％ TWEEN-20洗涤3次。洗涤后，将平板在纸巾上轻拍以除去残留的液体。然后将所有平板用150μl的测定缓冲液(PBS+5％BSA(Sigma-Aldrich，#A7030)+1％ TWEEN-20(Fisher Scientific，#BP337))封闭。将平板在设置为大约750rpm(自始至终使用)的平板摇臂(Heidolph TITRAMAX 1000)上于室温温育1小时，然后如前进行洗涤。在测定缓冲液中将生物素化的人IL-5(GSK试剂)稀释至100ng/ml，然后将此中的25μl添加到经封闭和洗涤的平板的所有孔中。然后将平板在平板摇杆上于室温温育至少1小时，然后如前所述洗涤。在与生物素化的IL5温育期间，制备了28Y042-7F11-1标准曲线和测试样品。通过在测定缓冲液中稀释至250ng/ml的最高浓度制备28Y042-7F11-1标准曲线。然后将此在总的11个稀释点上使用2.5的稀释因子进行系列稀释，其中第12个点是单独的测定缓冲液作为测定空白。使用2000、20,000和200,000的稀释因子将所有测试血清稳定性样品稀释到测定缓冲液中。每份纯的样品在稀释之间使用最少20μl，并通过使用不大于10的稀释倍数的连续稀释(即，通过3次连续的10倍稀释随后进行2倍稀释实现2000的稀释因子)进行稀释。一旦完成与生物素化的IL-5的温育并洗涤平板后，一式三份地添加25μl的28Y042-7F11-1标准曲线，随后是一式两份地25μl的处于各稀释度的每种测试样品。然后将平板在平板摇杆上于室温温育至少1小时，然后如前进行洗涤。为了检测结合的28Y042-7F11-1，将小鼠单克隆抗人Fc SULFOTAG(使用未标记抗体进行标记，来自Southern Biotech，#9040-01)在测定缓冲液中稀释至500ng/ml，并将25μl添加所有孔中。然后将平板在平板摇杆上于室温温育至少1小时，然后如前进行洗涤。将具有表面活性剂的MSD读取缓冲液T用蒸馏的H2O稀释至1x工作溶液，然后将150μl添加所有孔中。然后使用SECTOR 6000MSD成像仪读板。然后将在人或食蟹猴血清中测量的28Y042-7F11-1的平均浓度标准化为T0样品中测定的浓度的％，使用下式：
T0的％＝[测试样品中的浓度/T0样品中的浓度]*100
为了将针对28Y042-7F11-1生成的血清稳定性数据放在上下文中，将其与历史上针对美泊利珠单抗和IL-13特异性对照抗体生成的数据一起绘制。用于这些分子的血清稳定性设置与上述相同，除了使用的时间点为0、2、4和6周，并且使用的人和食蟹猴血清的批次不同。除了使用从500ng/ml起始的美泊利珠单抗标准曲线以及仅使用1000的稀释因子测试样品外，对美泊利珠单抗样品的分析如上所述。除了抗体标准曲线从500ng/ml起始，仅使用1000的稀释因子测试样品以及对于此处报告的数据使用IL-13捕获测定法(其中代替生物素化的IL-5，使用测定缓冲液中处于100ng/ml的生物素化的IL-13(GSK内部试剂))外，IL-13特异性对照抗体样品的分析如上所述。如上所述，将数据标准化为处于T0的值。
方法：食蟹猴体内PK/PD
研究包含4组食蟹猴(食蟹猕猴，2-5岁，体重2-6kg，原产于毛里求斯的目的繁殖)，每个研究组由2只雄性和2只雌性动物组成。以每围栏4只相同性别的动物圈养食蟹猴，具有丰富的环境以促进社交互动、游戏和探索。在研究期间，每只动物在整个研究平均可摄入200g/天的标准日粮(PMI营养国际认证的灵长类动物饮食编号5S48(25％蛋白质)和特殊饮食服务(SDS)Mazuri Expanded Short(MP(E)short SQC))饮食和随意饮水。在给药前测定完整的血液学细胞计数(包括嗜酸性粒细胞计数)，然后在给药后每1或2周进行测定(持续6个月)。在第1天通过静脉内推注向动物施用28Y042-7F11-1(0.05mg/kg或1mg/kg)、美泊利珠单抗(1mg/kg)或媒介物。除血液学细胞计数外，还进行了测试物质PK和总IL-5测量。
方法：PK数据
在第1天用测试物质向动物给药，并通过从股静脉提取血液而不添加抗凝剂来取样(参见表20和表21)。在下午期间(1-3pm之间)尽可能晚进行取样以符合血液学(嗜酸性粒细胞)血液取样时间表。允许样品于环境温度凝结至少1小时，然后于4℃以2500g离心10分钟。分离得到的血清，将其转移到唯一标记的标准Sarstedt管中，并立即在干冰上冷冻，然后于-80℃进行储存。
使用GYROLAB工作站(Gyros，P0004943)平台通过免疫测定法测定了来自食蟹猴血清样品的28Y042-7F11-1和美泊利珠单抗的浓度。将生物素化的重组人IL-5捕获物(内部试剂)和(食蟹猴血清中的)28Y042-7F11-1标准品稀释于REXXIP A缓冲液(Gyros，P0004820)中并且将ALEXA-647标记的抗人IgG检测(克隆JDC-10)稀释于REXXIP F缓冲液(Gyros，P0004825)中。在BIOAFFY 1000CD(Gyros，P0004253)上以对于28Y042-7F11-1，30-10,000ng/ml的范围和对于美泊利珠单抗，100-10,000ng/ml的范围验证了该测定法。28Y042-7F11-1的血清浓度值在预期范围内。表20说明/描述：PK和总IL-5测定法的食蟹猴血液取样时间表。血液提取量为0.7ml(*处为0.5ml)。表21说明/描述：血液学样品收集时间表。
表20.
表21.
方法：总IL-5数据
如对于PK数据收集所述，对动物进行给药、血液取样和处理。食蟹猴IL-5(2.44–10,000pg/ml最终浓度)的标准曲线是以x2最终浓度在汇集的食蟹猴血清(SeraLab，S-118-D)中按1/4进行系列稀释制备的。还使用汇集的食蟹猴血清(5000、500、50和0pg/ml IL-5)以所需的2x最终浓度(导致用抗体混合物进行1:2稀释)制备了四个QC加标(spiked)的IL 5对照。然后将每个标准品/QC加标对照/血清测试样品(50μl)转移到新的96孔聚丙烯板中。使用大鼠抗人IL-5-生物素偶联物mAb(Southern Biotech，10118-08)以0.5μg/ml的最终浓度作为捕获mAb以及大鼠抗人IL-5磺基标签的mAb(Southern Biotech，10118-14(内部磺基标签的MSD))以0.5μg/ml的最终浓度作为检测mAb制备捕获和检测抗体混合物。在测定缓冲液(RK/CI缓冲液：[6.4mM EDTA、5.1mM EGTA、50mM HEPES、149.2mM NaCl、1％ Triton X-100、1％ BSA，pH 7.4])中制备捕获抗体和检测抗体两者，其处于2x最终浓度，易导致标准品/样品/对照中的1:2稀释。将抗体混合物(50μl)添加到每个标准品/QC加标的对照/测试血清样品中，并于室温温育3小时，在黑暗中摇动(600rpm)。用150μl/孔MSD封闭缓冲液(PBS中的3％ MSD封闭剂A(Meso Scale Discovery，R93BA-1))封闭链霉亲和素金MSD板(MesoScale Discovery，L15SA-1)，并于室温温育1小时，伴随摇动(600rpm)。将抗体混合物和标准品/QC加标的对照/测试血清样品温育3小时后，将25μl/孔一式两份(或一式三份，对于QC加标的对照)转移至经封闭并洗涤的(SKAN WASHER 300，Skatron Instruments)MSD链霉亲和素金板上。然后将该板于室温温育1小时，伴随摇动(600rpm)。该温育后，然后洗涤平板(SKAN WASHER 300，Skatron Instruments)。制备读取缓冲液T(2x)，并将150μl/孔添加到MSD链霉亲和素金板的每个孔中。然后在15分钟内使用MSD Sector S 600(型号1201)对电化学发光进行定量。
方法：嗜酸性粒细胞计数
将嗜酸性粒细胞计数的减少用作28Y042-7F11-1介导的IL-5中和活性的生物标志物。在施用测试物质之前，对一组39只动物的嗜酸性粒细胞水平(第-51和-44天)进行了预筛选，并选择了具有嗜酸性粒细胞水平(≥180个嗜酸性粒细胞/μL)的动物进行研究。基于以下假设选择具有较高嗜酸性粒细胞计数的动物：它们将提供更大的测定窗口以测量嗜酸性粒细胞抑制的水平。令人担忧的是，由于这些动物是圈养繁殖并且生活在洁净室条件下，因此它们比野生动物具有较低的基线嗜酸性粒细胞计数，而这些较低的嗜酸性粒细胞计数值当受到药物抑制时可能下降至定量的最低水平以下。在预筛查阶段期间同样明显的是一些动物展现出嗜酸性粒细胞计数的大幅波动。这种变化的原因尚不清楚，但可以归因于多种因素，例如：环境、压力或激素变化。
一旦选择了16只动物进行研究，就将它们重新圈养在研究围栏中(每围栏4只相同性别的动物)，并允许其适应其新的环境。在适应时期期间，进行了3次给药前血液学计数(第-21、-14和-7天)。在第1天用测试物质对动物给药，并通过使用EDTA作为抗凝剂从股静脉中提取0.5ml血液进行取样。在下午期间(1-3pm之间)尽可能晚进行取样，以控制血液嗜酸性粒细胞水平的日变化。收集后，在每个时间点的最终样品采集的60分钟内对样品进行处理，并使用ADVIA120血液学分析仪(Siemens)使用过氧化物酶方法和嗜碱性粒细胞/小叶(lobularity)方法两者进行定量测量。
实施例2
还在4周单次剂量和26周重复剂量GLP毒性(10和100mg/kg/周)研究中评估了28Y042-7F11-1。在这些研究中，将28Y042-7F11-1皮下施用于食蟹猴。26周的研究的off-dose阶段仍在进行中(2017年5月)，因此，在此报告了一份中期报告，其展示了在预处理直至给药时期结束期间产生的数据。本研究中实现的系统性暴露展示于表22中。使用标准方法学进行了这些研究和相关分析。表22说明/描述：食蟹猴中皮下施用28Y042-7F11-1后平均系统性暴露的比较评价。表23说明/描述：在单次IV或SC注射后，食蟹猴中28Y042-7F11-1的平均药代动力学参数。表24说明/描述：将食蟹猴NOAEL数据与预测的待皮下注射剂量的人数据进行比较时的安全裕度(“安全覆盖”)。
表22.
表23.
NA＝不适用
1.CL/F
2.Vz/F
表24.
1-假设70kg受试者；2-剂量(以mg/kg表示)覆盖
实施例3
非正式序列表
下面的下划线根据CDR的Kabat定义，在抗体的可变重链和可变轻链部分或编码这些CDR序列的核酸序列中鉴定了CDR序列。例如，在SEQ ID NO:1中，框架和CDR从展示的序列的氨基近端部分到羧基末端部分依次展示为纯文本框架1、带下划线的CDR1、纯文本框架2、带下划线的CDR2、纯文本框架3、带下划线的CDR3和纯文本框架4。例如，该方案用于SEQ IDNO:1-4中。这些序列中所示的氨基末端甲硫氨酸残基可以被切割。因此，此处显示氨基末端甲硫氨酸残基的序列也应被认为公开了这些缺少此类氨基末端甲硫氨酸残基的蛋白质的切割形式。核酸序列表示为DNA核酸序列，并且包括“t”核酸残基，相应的RNA序列也应视为已公开，如此“t”核酸残基也可以视为公开“u”核酸残基。此外，5’近端“atg”起始密码子和3’近端“taa”、“tag”和“tga”终止密码子已从下面的cDNA核酸序列中省略。
28Y042-7F11-1全长重链
SEQ ID NO:1
28Y042-7F11-1全长轻链
SEQ ID NO:2
28Y042-7F11-1 VH
SEQ ID NO:3
28Y042-7F11-1 VL
SEQ ID NO:4
28Y042-7F11-1 CDRH1
SEQ ID NO:5
GSSVH
28Y042-7F11-1 CDRH2
SEQ ID NO:6
VIWASGGTDYNSALMS
28Y042-7F11-1 CDRH3
SEQ ID NO:7
DPPSGLLRLDY
28Y042-7F11-1 CDRL1
SEQ ID NO:8
KSSQSLLNSGNQKNYLA
28Y042-7F11-1 CDRL2
SEQ ID NO:9
GASTRES
28Y042-7F11-1 CDRL3
SEQ ID NO:10
QNVHSFPFT
人IL-5(成熟蛋白)
SEQ ID NO:11
人IL-5受体亚基ALPHA同等型1(成熟蛋白)SEQ ID NO:12
编码具有前导序列的28Y042-7F11-1全长重链的DNA SEQ ID NO:13
编码具有前导序列的28Y042-7F11-1全长轻链的DNA SEQ ID NO:14
编码28Y042-7F11-1重链可变区的DNA
SEQ ID NO:15
编码28Y042-7F11-1轻链可变区的DNA
SEQ ID NO:16
编码28Y042-7F11-1全长重链的DNA
SEQ ID NO:17
编码28Y042-7F11-1全长轻链的DNA
SEQ ID NO:18
28Y042-7F11-1重链前导序列
SEQ ID NO:19
MGWSCIILFLVATATGVHS
28Y042-7F11-1重链前导序列
SEQ ID NO:20
MGWSCIILFLVATATGVHS
28Y042-7F11-1重链FR4序列
SEQ ID NO:21
WGRGTLVTVSS
现在已经完全描述了本发明，对于本领域的普通技术人员将显而易见的是，在不脱离所附权利要求的精神或范围的情况下，可以对其进行许多变化和修改。
2017年5月26日创建的并具有21,851字节大小的，名称为“PU66209P_US_SeqList[,]”的ASCII文本文件中的材料通过引用以其整体并入本文。

Claims (12)

1.包含与药学上可接受的载体组合的与人IL-5结合的抗体的药物组合物在制备用于治疗有此需要的人受试者的慢性阻塞性肺疾病(COPD)的药物中的用途，其中所述抗体包含重链和轻链，其中
a)所述重链包含重链可变区，所述重链可变区具有SEQ ID NO:5中所示的CDRH1氨基酸序列，SEQ ID NO:6中所示的CDRH2氨基酸序列和SEQ ID NO:7中所示的CDRH3氨基酸序列；并且
b)所述轻链包含轻链可变区，所述轻链可变区具有SEQ ID NO:8中所示的CDRL1氨基酸序列，SEQ ID NO:9中所示的CDRL2氨基酸序列和SEQ ID NO:10中所示的CDRL3氨基酸序列，
其中所述抗体是人源化IgG1抗体。
2.权利要求1的用途，其中所述重链可变区进一步包含如SEQ ID NO:21中所示的重链FR4氨基酸序列。
3.权利要求1或权利要求2的用途，其中所述抗体包含重链和轻链，其中
a)所述重链包含由SEQ ID NO:3中所示的氨基酸序列组成的重链可变区序列；并且
b)所述轻链包含由SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列组成的轻链可变区序列。
4.权利要求3的用途，其中所述重链包含重链Fc结构域，所述重链Fc结构域具有位置252处的酪氨酸残基，位置254处的苏氨酸残基和位置256处的谷氨酸残基。
5.权利要求3或权利要求4的用途，其中所述抗体包含由SEQ ID NO:1中所示的氨基酸序列组成的重链和由SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列组成的轻链。
6.权利要求1-5中任一项的用途，其中所述抗体处于约75mg/mL至约150mg/mL之间的浓度。
7.权利要求1-6中任一项的用途，其中所述药学上可接受的载体包含处于约pH 5.5至约pH 6.0的水性液体配制剂，所述水性液体配制剂含有约40mM组氨酸、约180mM海藻糖、约100mM精氨酸、约8mM甲硫氨酸、比体积约0.02％重量的聚山梨酯80和约0.05mM EDTA。
8.权利要求1-7中任一项的用途，其中所述pH为约6.0并且所述抗体处于约150mg/mL的浓度。
9.权利要求1-8中任一项的用途，其中所述抗体以2mg至600mg的量施用。
10.权利要求9的用途，其中所述抗体每3个月一次或每6个月一次施用。
11.权利要求1-10中任一项的用途，其中所述抗体经皮下施用。
12.权利要求1-10中任一项的用途，其中所述抗体经静脉内施用。
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