JP7191690B2 - B型肝炎ウイルス(hbv)感染を治療するための試薬及びその使用 - Google Patents
B型肝炎ウイルス(hbv)感染を治療するための試薬及びその使用 Download PDFInfo
- Publication number
- JP7191690B2 JP7191690B2 JP2018509947A JP2018509947A JP7191690B2 JP 7191690 B2 JP7191690 B2 JP 7191690B2 JP 2018509947 A JP2018509947 A JP 2018509947A JP 2018509947 A JP2018509947 A JP 2018509947A JP 7191690 B2 JP7191690 B2 JP 7191690B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- sequence
- seq
- effector
- rna
- shrna
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
- A61K31/7105—Natural ribonucleic acids, i.e. containing only riboses attached to adenine, guanine, cytosine or uracil and having 3'-5' phosphodiester links
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
- A61K31/713—Double-stranded nucleic acids or oligonucleotides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
- A61K48/005—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'active' part of the composition delivered, i.e. the nucleic acid delivered
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
- C12N15/1131—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing against viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/10—Type of nucleic acid
- C12N2310/14—Type of nucleic acid interfering N.A.
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/50—Physical structure
- C12N2310/51—Physical structure in polymeric form, e.g. multimers, concatemers
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/50—Physical structure
- C12N2310/53—Physical structure partially self-complementary or closed
- C12N2310/531—Stem-loop; Hairpin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2320/00—Applications; Uses
- C12N2320/10—Applications; Uses in screening processes
- C12N2320/11—Applications; Uses in screening processes for the determination of target sites, i.e. of active nucleic acids
Description
本願は、2015年5月6日出願の豪州特許仮出願第2015901617号及び2016年4月8日出願の米国特許仮出願第62/319,971号の優先権を主張し、それらの内容を参照としてすべて本明細書に援用する。
(i)配列番号12に示す配列に相補的なエフェクター配列であって、配列番号12に示す配列とデュプレックスを形成できるならば1、2、3または4塩基のミスマッチを有していてもよい、エフェクター配列;及び(ii)該エフェクター配列にほぼ相補的な配列を含むエフェクター相補配列を含んでいるRNA;
(i)配列番号14に示す配列に相補的なエフェクター配列であって、配列番号14に示す配列とデュプレックスを形成できるならば1、2、3または4塩基のミスマッチを有していてもよい、エフェクター配列;及び(ii)該エフェクター配列にほぼ相補的な配列を含むエフェクター相補配列を含んでいるRNA;
(i)配列番号16に示す配列に相補的なエフェクター配列であって、配列番号16に示す配列とデュプレックスを形成できるならば1、2、3または4塩基のミスマッチを有していてもよい、エフェクター配列;及び(ii)該エフェクター配列にほぼ相補的な配列を含むエフェクター相補配列を含んでいるRNA;
(i)配列番号18に示す配列に相補的なエフェクター配列であって、配列番号18に示す配列とデュプレックスを形成できるならば1、2、3または4塩基のミスマッチを有していてもよい、エフェクター配列;及び(ii)該エフェクター配列にほぼ相補的な配列を含むエフェクター相補配列を含んでいるRNA;
(i)配列番号20に示す配列に相補的なエフェクター配列であって、配列番号20に示す配列とデュプレックスを形成できるならば1、2、3または4塩基のミスマッチを有していてもよい、エフェクター配列;及び(ii)該エフェクター配列にほぼ相補的な配列を含むエフェクター相補配列を含んでいるRNA;
(i)配列番号22に示す配列に相補的なエフェクター配列であって、配列番号22に示す配列とデュプレックスを形成できるならば1、2、3または4塩基のミスマッチを有していてもよい、エフェクター配列;及び(ii)該エフェクター配列にほぼ相補的な配列を含むエフェクター相補配列を含んでいるRNA;
(i)配列番号24に示す配列に相補的なエフェクター配列であって、配列番号24に示す配列とデュプレックスを形成できるならば1、2、3または4塩基のミスマッチを有していてもよい、エフェクター配列;及び(ii)該エフェクター配列にほぼ相補的な配列を含むエフェクター相補配列を含んでいるRNA;
(i)配列番号26に示す配列に相補的なエフェクター配列であって、配列番号26に示す配列とデュプレックスを形成できるならば1、2、3または4塩基のミスマッチを有していてもよい、エフェクター配列;及び(ii)該エフェクター配列にほぼ相補的な配列を含むエフェクター相補配列を含んでいるRNA;
(i)配列番号28に示す配列に相補的なエフェクター配列であって、配列番号28に示す配列とデュプレックスを形成できるならば1、2、3または4塩基のミスマッチを有していてもよい、エフェクター配列;及び(ii)該エフェクター配列にほぼ相補的な配列を含むエフェクター相補配列を含んでいるRNA;
(i)配列番号30に示す配列に相補的なエフェクター配列であって、配列番号30に示す配列とデュプレックスを形成できるならば1、2、3または4塩基のミスマッチを有していてもよい、エフェクター配列;及び(ii)該エフェクター配列にほぼ相補的な配列を含むエフェクター相補配列を含んでいるRNA;
(i)配列番号32に示す配列に相補的なエフェクター配列であって、配列番号32に示す配列とデュプレックスを形成できるならば1、2、3または4塩基のミスマッチを有していてもよい、エフェクター配列;及び(ii)該エフェクター配列にほぼ相補的な配列を含むエフェクター相補配列を含んでいるRNA;
(i)配列番号34に示す配列に相補的なエフェクター配列であって、配列番号34に示す配列とデュプレックスを形成できるならば1、2、3または4塩基のミスマッチを有していてもよい、エフェクター配列;及び(ii)該エフェクター配列にほぼ相補的な配列を含むエフェクター相補配列を含んでいるRNA;
(i)配列番号36に示す配列に相補的なエフェクター配列であって、配列番号36に示す配列とデュプレックスを形成できるならば1、2、3または4塩基のミスマッチを有していてもよい、エフェクター配列;及び(ii)該エフェクター配列にほぼ相補的な配列を含むエフェクター相補配列を含んでいるRNA;
(i)配列番号38に示す配列に相補的なエフェクター配列であって、配列番号38に示す配列とデュプレックスを形成できるならば1、2、3または4塩基のミスマッチを有していてもよい、エフェクター配列;及び(ii)該エフェクター配列にほぼ相補的な配列を含むエフェクター相補配列を含んでいるRNA;
(i)配列番号40に示す配列に相補的なエフェクター配列であって、配列番号40に示す配列とデュプレックスを形成できるならば1、2、3または4塩基のミスマッチを有していてもよい、エフェクター配列;及び(ii)該エフェクター配列にほぼ相補的な配列を含むエフェクター相補配列を含んでいるRNA;
(i)配列番号42に示す配列に相補的なエフェクター配列であって、配列番号42に示す配列とデュプレックスを形成できるならば1、2、3または4塩基のミスマッチを有していてもよい、エフェクター配列;及び(ii)該エフェクター配列にほぼ相補的な配列を含むエフェクター相補配列を含んでいるRNA;
(i)配列番号44に示す配列に相補的なエフェクター配列であって、配列番号44に示す配列とデュプレックスを形成できるならば1、2、3または4塩基のミスマッチを有していてもよい、エフェクター配列;及び(ii)該エフェクター配列にほぼ相補的な配列を含むエフェクター相補配列を含んでいるRNA;
(i)配列番号46に示す配列に相補的なエフェクター配列であって、配列番号46に示す配列とデュプレックスを形成できるならば1、2、3または4塩基のミスマッチを有していてもよい、エフェクター配列;及び(ii)該エフェクター配列にほぼ相補的な配列を含むエフェクター相補配列を含んでいるRNA;
(i)配列番号48に示す配列に相補的なエフェクター配列であって、配列番号48に示す配列とデュプレックスを形成できるならば1、2、3または4塩基のミスマッチを有していてもよい、エフェクター配列;及び(ii)該エフェクター配列にほぼ相補的な配列を含むエフェクター相補配列を含んでいるRNA;
(i)配列番号50に示す配列に相補的なエフェクター配列であって、配列番号50に示す配列とデュプレックスを形成できるならば1、2、3または4塩基のミスマッチを有していてもよい、エフェクター配列;及び(ii)該エフェクター配列にほぼ相補的な配列を含むエフェクター相補配列を含んでいるRNA;及び
(i)配列番号52に示す配列に相補的なエフェクター配列であって、配列番号52に示す配列とデュプレックスを形成できるならば1、2、3または4塩基のミスマッチを有していてもよい、エフェクター配列;及び(ii)該エフェクター配列にほぼ相補的な配列を含むエフェクター相補配列を含んでいるRNA。
配列番号11に示すエフェクター配列、及び配列番号11に示す該配列にほぼ相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列を含んでいるRNA;
配列番号13に示すエフェクター配列、及び配列番号13に示す該配列にほぼ相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列を含んでいるRNA;
配列番号15に示すエフェクター配列、及び配列番号15に示す該配列にほぼ相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列を含んでいるRNA;
配列番号17に示すエフェクター配列、及び配列番号17に示す該配列にほぼ相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列を含んでいるRNA;
配列番号19に示すエフェクター配列、及び配列番号19に示す該配列にほぼ相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列を含んでいるRNA;
配列番号21に示すエフェクター配列、及び配列番号21に示す該配列にほぼ相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列を含んでいるRNA;
配列番号23に示すエフェクター配列、及び配列番号23に示す該配列にほぼ相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列を含んでいるRNA;
配列番号25に示すエフェクター配列、及び配列番号25に示す該配列にほぼ相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列を含んでいるRNA;
配列番号27に示すエフェクター配列、及び配列番号27に示す該配列にほぼ相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列を含んでいるRNA;
配列番号29に示すエフェクター配列、及び配列番号29に示す該配列にほぼ相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列を含んでいるRNA;
配列番号31に示すエフェクター配列、及び配列番号31に示す該配列にほぼ相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列を含んでいるRNA;
配列番号33に示すエフェクター配列、及び配列番号33に示す該配列にほぼ相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列を含んでいるRNA;
配列番号35に示すエフェクター配列、及び配列番号35に示す該配列にほぼ相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列を含んでいるRNA;
配列番号37に示すエフェクター配列、及び配列番号37に示す該配列にほぼ相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列を含んでいるRNA;
配列番号39に示すエフェクター配列、及び配列番号39に示す該配列にほぼ相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列を含んでいるRNA;
配列番号41に示すエフェクター配列、及び配列番号41に示す該配列にほぼ相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列を含んでいるRNA;
配列番号43に示すエフェクター配列、及び配列番号43に示す該配列にほぼ相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列を含んでいるRNA;
配列番号45に示すエフェクター配列、及び配列番号45に示す該配列にほぼ相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列を含んでいるRNA;
配列番号47に示すエフェクター配列、及び配列番号47に示す該配列にほぼ相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列を含んでいるRNA;
配列番号49に示すエフェクター配列、及び配列番号49に示す該配列にほぼ相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列を含んでいるRNA;及び
配列番号51に示すエフェクター配列、及び配列番号51に示す該配列にほぼ相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列を含んでいるRNA。
配列番号11に示すエフェクター配列、及び配列番号12に示すエフェクター相補配列を含んでいるRNA;
配列番号13に示すエフェクター配列、及び配列番号14に示すエフェクター相補配列を含んでいるRNA;
配列番号15に示すエフェクター配列、及び配列番号16に示すエフェクター相補配列を含んでいるRNA;
配列番号17に示すエフェクター配列、及び配列番号18に示すエフェクター相補配列を含んでいるRNA;
配列番号19に示すエフェクター配列、及び配列番号20に示すエフェクター相補配列を含んでいるRNA;
配列番号21に示すエフェクター配列、及び配列番号22に示すエフェクター相補配列を含んでいるRNA;
配列番号23に示すエフェクター配列、及び配列番号24に示すエフェクター相補配列を含んでいるRNA;
配列番号25に示すエフェクター配列、及び配列番号26に示すエフェクター相補配列を含んでいるRNA;
配列番号27に示すエフェクター配列、及び配列番号28に示すエフェクター相補配列を含んでいるRNA;
配列番号29に示すエフェクター配列、及び配列番号30に示すエフェクター相補配列を含んでいるRNA;
配列番号31に示すエフェクター配列、及び配列番号32に示すエフェクター相補配列を含んでいるRNA;
配列番号33に示すエフェクター配列、及び配列番号34に示すエフェクター相補配列を含んでいるRNA;
配列番号35に示すエフェクター配列、及び配列番号36に示すエフェクター相補配列を含んでいるRNA;
配列番号37に示すエフェクター配列、及び配列番号38に示すエフェクター相補配列を含んでいるRNA;
配列番号39に示すエフェクター配列、及び配列番号40に示すエフェクター相補配列を含んでいるRNA;
配列番号41に示すエフェクター配列、及び配列番号42に示すエフェクター相補配列を含んでいるRNA;
配列番号43に示すエフェクター配列、及び配列番号44に示すエフェクター相補配列を含んでいるRNA;
配列番号45に示すエフェクター配列、及び配列番号46に示すエフェクター相補配列を含んでいるRNA;
配列番号47に示すエフェクター配列、及び配列番号48に示すエフェクター相補配列を含んでいるRNA;
配列番号49に示すエフェクター配列、及び配列番号50に示すエフェクター相補配列を含んでいるRNA;及び
配列番号51に示すエフェクター配列、及び配列番号52に示すエフェクター相補配列を含んでいるRNA。
(a)本明細書で説明する少なくとも1つのRNA;及び
(b)
(i)本明細書で説明するRNAと同じRNA;または
(ii)少なくとも17ヌクレオチド長のエフェクター配列及びエフェクター相補配列を含み、該エフェクター配列は配列番号54、56、58、60、62及び64のいずれかに示すRNA配列にほぼ相補的であるRNA
から選択される少なくとも1つのRNA
を含む、複数のRNAが提供され、
(a)のRNAと(b)のRNAは異なるエフェクター配列を含んでいる。
(a)
配列番号11に示すエフェクター配列、及び配列番号12に示すエフェクター相補配列を含んでいるRNA;
配列番号13に示すエフェクター配列、及び配列番号14に示すエフェクター相補配列を含んでいるRNA;
配列番号15に示すエフェクター配列、及び配列番号16に示すエフェクター相補配列を含んでいるRNA;
配列番号17に示すエフェクター配列、及び配列番号18に示すエフェクター相補配列を含んでいるRNA;
配列番号19に示すエフェクター配列、及び配列番号20に示すエフェクター相補配列を含んでいるRNA;
配列番号21に示すエフェクター配列、及び配列番号22に示すエフェクター相補配列を含んでいるRNA;
配列番号23に示すエフェクター配列、及び配列番号24に示すエフェクター相補配列を含んでいるRNA;
配列番号25に示すエフェクター配列、及び配列番号26に示すエフェクター相補配列を含んでいるRNA;
配列番号27に示すエフェクター配列、及び配列番号28に示すエフェクター相補配列を含んでいるRNA;
配列番号29に示すエフェクター配列、及び配列番号30に示すエフェクター相補配列を含んでいるRNA;
配列番号31に示すエフェクター配列、及び配列番号32に示すエフェクター相補配列を含んでいるRNA;
配列番号33に示すエフェクター配列、及び配列番号34に示すエフェクター相補配列を含んでいるRNA;
配列番号35に示すエフェクター配列、及び配列番号36に示すエフェクター相補配列を含んでいるRNA;
配列番号37に示すエフェクター配列、及び配列番号38に示すエフェクター相補配列を含んでいるRNA;
配列番号39に示すエフェクター配列、及び配列番号40に示すエフェクター相補配列を含んでいるRNA;
配列番号41に示すエフェクター配列、及び配列番号42に示すエフェクター相補配列を含んでいるRNA;
配列番号43に示すエフェクター配列、及び配列番号44に示すエフェクター相補配列を含んでいるRNA;
配列番号45に示すエフェクター配列、及び配列番号46に示すエフェクター相補配列を含んでいるRNA;
配列番号47に示すエフェクター配列、及び配列番号48に示すエフェクター相補配列を含んでいるRNA;
配列番号49に示すエフェクター配列、及び配列番号50に示すエフェクター相補配列を含んでいるRNA;及び
配列番号51に示すエフェクター配列、及び配列番号52に示すエフェクター相補配列を含んでいるRNA
からなる群より選択される少なくとも1つのRNA:ならびに
(b)
(i)(a)に記載の群から選択されるRNA;または
(ii)少なくとも17ヌクレオチド長のエフェクター配列及びエフェクター相補配列を含み、該エフェクター配列は配列番号54、56、58、60、62及び64のいずれかに示すRNA配列にほぼ相補的であるRNA
から選択される少なくとも1つのRNA
を含み、
(a)のRNAと(b)のRNAは異なるエフェクター配列を含んでいる。
配列番号53に示すエフェクター配列、及び配列番号54に示すエフェクター相補配列を含んでいるRNA;
配列番号55に示すエフェクター配列、及び配列番号56に示すエフェクター相補配列を含んでいるRNA;
配列番号57に示すエフェクター配列、及び配列番号58に示すエフェクター相補配列を含んでいるRNA;
配列番号59に示すエフェクター配列、及び配列番号60に示すエフェクター相補配列を含んでいるRNA;
配列番号61に示すエフェクター配列、及び配列番号62に示すエフェクター相補配列を含んでいるRNA;及び
配列番号63に示すエフェクター配列、及び配列番号64に示すエフェクター相補配列を含んでいるRNAからなる群より選択することができる。
(a)配列番号65~98のいずれかに示す配列を含むshRNAである少なくとも1つのRNA;及び
(b)
(i)配列番号65~98のいずれかに示す配列を含むshRNAであるRNA;または
(ii)配列番号99~104のいずれかに示す配列を含むshRNAであるRNA
から選択される少なくとも1つのRNA
を含むことができ、
(a)のshRNAと(b)のshRNAは異なっている。
(a)本明細書で説明するRNAをコードする配列を含む第1の核酸;及び
(b)第2の核酸であって、
(i)本明細書で説明するRNA;または
(ii)少なくとも17ヌクレオチド長のエフェクター配列及びエフェクター相補配列を含み、該エフェクター配列は配列番号54、56、58、60、62及び64のいずれかに示すRNA配列にほぼ相補的であるRNA
から選択されるRNAをコードする配列を含む第2の核酸
を含む複数の核酸を提供し、
該第1の核酸によってコードされるRNAと該第2の核酸によってコードされるRNAは、異なるエフェクター配列を含んでいる。たとえば、該第2の核酸によってコードされるRNAは、30ヌクレオチド長よりも短いエフェクター配列を含んでいる。たとえば、好適なエフェクター配列は、17~29ヌクレオチド長の範囲であってもよい。
配列番号53に示すエフェクター配列、及び配列番号54に示すエフェクター相補配列を含んでいるRNA;
配列番号55に示すエフェクター配列、及び配列番号56に示すエフェクター相補配列を含んでいるRNA;
配列番号57に示すエフェクター配列、及び配列番号58に示すエフェクター相補配列を含んでいるRNA;
配列番号59に示すエフェクター配列、及び配列番号60に示すエフェクター相補配列を含んでいるRNA;
配列番号61に示すエフェクター配列、及び配列番号62に示すエフェクター相補配列を含んでいるRNA;及び
配列番号63に示すエフェクター配列、及び配列番号64に示すエフェクター相補配列を含んでいるRNA
からなる群より選択することができる。
(a)配列番号65~98のいずれかに示す配列を含むshRNAをコードする配列を含む第1の核酸;及び
(b)第2の核酸であって、
(i)配列番号65~98のいずれかに示す配列を含むshRNA;または
(ii)配列番号99~104のいずれかに示す配列を含むshRNA
から選択されるshRNAをコードする配列を含む第2の核酸
を含み、
該第1の核酸によってコードされるshRNAと該第2の核酸によってコードされるshRNAは異なっている。
(a)該複数のddRNAiコンストラクトのうちの少なくとも1つが、本明細書で説明する複数の核酸のうちの第1の核酸を含み;かつ
(b)該複数のddRNAiコンストラクトのうちの少なくとも1つが、本明細書で説明する複数の核酸のうちの第2の核酸を含み、
該第1の核酸と該第2の核酸は互いに異なっている。
(a)配列番号65~98のいずれかに示す配列を含む第1のshRNAをコードする核酸;及び
(b)第2のshRNAをコードするDNA配列を含む核酸であって、該第2のshRNAは、少なくとも17ヌクレオチド長のエフェクター配列及びエフェクター相補配列を含み、該エフェクター配列は、B型肝炎ウイルスのゲノムによってコードされるRNA転写物の領域にほぼ相補的である、核酸
を含み、
該第1のshRNAと該第2のshRNAは異なっている。
(a)配列番号92に示す配列を含むかまたはそれからなるshRNAをコードする核酸:
(b)本明細書で説明する複数の核酸のいずれかの核酸から選択される核酸;及び
(c)配列番号78に示す配列を含むかまたはそれからなるshRNAをコードする核酸
が含まれ、
(b)の核酸は、(a)の核酸及び(c)の核酸によってコードされるshRNAとは異なるshRNAをコードする。
(a)配列番号92に示す配列を含むかまたはそれからなるshRNAをコードする第1の核酸:
(b)配列番号101に示す配列を含むかまたはそれからなるshRNAをコードする第2の核酸;及び
(c)配列番号78に示す配列を含むかまたはそれからなるshRNAをコードする第3の核酸を含んでいる。
(a)配列番号92に示す配列を含むかまたはそれからなるshRNAをコードする第1の核酸:
(b)配列番号79に示す配列を含むかまたはそれからなるshRNAをコードする第2の核酸;及び
(c)配列番号78に示す配列を含むかまたはそれからなるshRNAをコードする第3の核酸を含んでいる。
(a)配列番号78に示す配列を含むかまたはそれからなるshRNAをコードする第1の核酸:
(b)配列番号101に示す配列を含むかまたはそれからなるshRNAをコードする第2の核酸;及び
(c)配列番号92に示す配列を含むかまたはそれからなるshRNAをコードする第3の核酸を含んでいる。
(a)配列番号78に示す配列を含むかまたはそれからなるshRNAをコードする第1の核酸:
(b)配列番号79に示す配列を含むかまたはそれからなるshRNAをコードする第2の核酸;及び
(c)配列番号92に示す配列を含むかまたはそれからなるshRNAをコードする第3の核酸を含んでいる。
(a)U6プロモーターに機能的に連結された、配列番号78に示す配列を含むかまたはそれからなるshRNAをコードする第1の核酸:
(b)U6プロモーターに機能的に連結された、配列番号101に示す配列を含むかまたはそれからなるshRNAをコードする第2の核酸;及び
(c)U6プロモーターに機能的に連結された、配列番号92に示す配列を含むかまたはそれからなるshRNAをコードする第3の核酸を含んでいる。
(a)U6プロモーターに機能的に連結された、配列番号78に示す配列を含むかまたはそれからなるshRNAをコードする第1の核酸:
(b)U6プロモーターに機能的に連結された、配列番号79に示す配列を含むかまたはそれからなるshRNAをコードする第2の核酸;及び
(c)U6プロモーターに機能的に連結された、配列番号92に示す配列を含むかまたはそれからなるshRNAをコードする第3の核酸を含んでいる。
配列番号1:領域1とされるHBVゲノム内の標的領域のDNA配列。
配列番号2:領域2とされるHBVゲノム内の標的領域のDNA配列。
配列番号3:領域3とされるHBVゲノム内の標的領域のDNA配列。
配列番号4:領域4とされるHBVゲノム内の標的領域のDNA配列。
配列番号5:領域5とされるHBVゲノム内の標的領域のDNA配列。
配列番号6:領域6とされるHBVゲノム内の標的領域のDNA配列。
配列番号7:領域7とされるHBVゲノム内の標的領域のDNA配列。
配列番号8:領域8とされるHBVゲノム内の標的領域のDNA配列。
配列番号9:領域9とされるHBVゲノム内の標的領域のDNA配列。
配列番号10:領域10とされるHBVゲノム内の標的領域のDNA配列。
配列番号11:shRNA1及びshRNA4とされる各shRNAのRNAエフェクター配列。
配列番号12:shRNA1及びshRNA4とされる各shRNAのRNAエフェクター相補配列。
配列番号13:shRNA2とされるshRNAのRNAエフェクター配列。
配列番号14:shRNA2とされるshRNAのRNAエフェクター相補配列。
配列番号15:shRNA3とされるshRNAのRNAエフェクター配列。
配列番号16:shRNA3とされるshRNAのRNAエフェクター相補配列。
配列番号17:shRNA5及びshRNA6とされる各shRNAのRNAエフェクター配列。
配列番号18:shRNA5及びshRNA6とされる各shRNAのRNAエフェクター相補配列。
配列番号19:shRNA7及びshRNA8とされる各shRNAのRNAエフェクター配列。
配列番号20:shRNA7及びshRNA8とされる各shRNAのRNAエフェクター相補配列。
配列番号21:shRNA9及びshRNA10とされる各shRNAのRNAエフェクター配列。
配列番号22:shRNA9及びshRNA10とされる各shRNAのRNAエフェクター相補配列。
配列番号23:shRNA11及びshRNA12とされる各shRNAのRNAエフェクター配列。
配列番号24:shRNA11及びshRNA12とされる各shRNAのRNAエフェクター相補配列。
配列番号25:shRNA13とされるshRNAのRNAエフェクター配列。
配列番号26:shRNA13とされるshRNAのRNAエフェクター相補配列
配列番号27:shRNA14とされるshRNAのRNAエフェクター配列。
配列番号28:shRNA14とされるshRNAのRNAエフェクター相補配列
配列番号29:shRNA15及びshRNA18とされる各shRNAのRNAエフェクター配列。
配列番号30:shRNA15及びshRNA18とされる各shRNAのRNAエフェクター相補配列。
配列番号31:shRNA16とされるshRNAのRNAエフェクター配列。
配列番号32:shRNA16とされるshRNAのRNAエフェクター相補配列。
配列番号33:shRNA17とされるshRNAのRNAエフェクター配列。
配列番号34:shRNA17とされるshRNAのRNAエフェクター相補配列。
配列番号35:shRNA19及びshRNA20とされる各shRNAのRNAエフェクター配列。
配列番号36:shRNA19及びshRNA20とされる各shRNAのRNAエフェクター相補配列。
配列番号37:shRNA21とされるshRNAのRNAエフェクター配列。
配列番号38:shRNA21とされるshRNAのRNAエフェクター相補配列。
配列番号39:shRNA22とされるshRNAのRNAエフェクター配列。
配列番号40:shRNA22とされるshRNAのRNAエフェクター相補配列。
配列番号41:shRNA23及びshRNA24とされる各shRNAのRNAエフェクター配列。
配列番号42:shRNA23及びshRNA24とされる各shRNAのRNAエフェクター相補配列。
配列番号43:shRNA25及びshRNA26とされる各shRNAのRNAエフェクター配列。
配列番号44:shRNA25及びshRNA26とされる各shRNAのRNAエフェクター相補配列。
配列番号45:shRNA27及びshRNA30とされる各shRNAのRNAエフェクター配列。
配列番号46:shRNA27及びshRNA30とされる各shRNAのRNAエフェクター相補配列。
配列番号47:shRNA28及びshRNA31とされる各shRNAのRNAエフェクター配列。
配列番号48:shRNA28及びshRNA31とされる各shRNAのRNAエフェクター相補配列。
配列番号49:shRNA29及びshRNA32とされる各shRNAのRNAエフェクター配列。
配列番号50:shRNA29及びshRNA32とされる各shRNAのRNAエフェクター相補配列。
配列番号51:shRNA33及びshRNA34とされる各shRNAのRNAエフェクター配列。
配列番号52:shRNA33及びshRNA34とされる各shRNAのRNAエフェクター相補配列。
配列番号53:shRNA35とされるshRNAのRNAエフェクター配列。
配列番号54:shRNA35とされるshRNAのRNAエフェクター相補配列。
配列番号55:shRNA36とされるshRNAのRNAエフェクター配列。
配列番号56:shRNA35とされるshRNAのRNAエフェクター相補配列。
配列番号57:shRNA37とされるshRNAのRNAエフェクター配列。
配列番号58:shRNA37とされるshRNAのRNAエフェクター相補配列。
配列番号59:shRNA38とされるshRNAのRNAエフェクター配列。
配列番号60:shRNA38とされるshRNAのRNAエフェクター相補配列。
配列番号61:shRNA39とされるshRNAのRNAエフェクター配列。
配列番号62:shRNA39とされるshRNAのRNAエフェクター相補配列。
配列番号63:shRNA40とされるshRNAのRNAエフェクター配列。
配列番号64:shRNA40とされるshRNAのRNAエフェクター相補配列。
配列番号65:shRNA1とされるshRNAのRNA配列。
配列番号66:shRNA2とされるshRNAのRNA配列
配列番号67:shRNA3とされるshRNAのRNA配列
配列番号68:shRNA4とされるshRNAのRNA配列
配列番号69:shRNA5とされるshRNAのRNA配列
配列番号70:shRNA6とされるshRNAのRNA配列
配列番号71:shRNA7とされるshRNAのRNA配列
配列番号72:shRNA8とされるshRNAのRNA配列
配列番号73:shRNA9とされるshRNAのRNA配列
配列番号74:shRNA10とされるshRNAのRNA配列
配列番号75:shRNA11とされるshRNAのRNA配列
配列番号76:shRNA12とされるshRNAのRNA配列
配列番号77:shRNA13とされるshRNAのRNA配列
配列番号78:shRNA14とされるshRNAのRNA配列
配列番号79:shRNA15とされるshRNAのRNA配列
配列番号80:shRNA16とされるshRNAのRNA配列
配列番号81:shRNA17とされるshRNAのRNA配列
配列番号82:shRNA18とされるshRNAのRNA配列
配列番号83:shRNA19とされるshRNAのRNA配列
配列番号84:shRNA20とされるshRNAのRNA配列
配列番号85:shRNA21とされるshRNAのRNA配列
配列番号86:shRNA22とされるshRNAのRNA配列
配列番号87:shRNA23とされるshRNAのRNA配列
配列番号88:shRNA24とされるshRNAのRNA配列
配列番号89:shRNA25とされるshRNAのRNA配列
配列番号90:shRNA26とされるshRNAのRNA配列
配列番号91:shRNA27とされるshRNAのRNA配列
配列番号92:shRNA28とされるshRNAのRNA配列
配列番号93:shRNA29とされるshRNAのRNA配列
配列番号94:shRNA30とされるshRNAのRNA配列
配列番号95:shRNA31とされるshRNAのRNA配列
配列番号96:shRNA32とされるshRNAのRNA配列
配列番号97:shRNA33とされるshRNAのRNA配列
配列番号98:shRNA34とされるshRNAのRNA配列
配列番号99:shRNA35とされるshRNAのRNA配列
配列番号100:shRNA36とされるshRNAのRNA配列
配列番号101:shRNA37とされるshRNAのRNA配列
配列番号102:shRNA38とされるshRNAのRNA配列
配列番号103:shRNA39とされるshRNAのRNA配列
配列番号104:shRNA40とされるshRNAのRNA配列
配列番号105:pBL183_HBV_トリプル_V2のDNA配列
配列番号106:pBL183_HBV_トリプル_V1のDNA配列
一般事項
本明細書の全体で、特に別途記載しない限り、また内容的に必要のない限り、1つのステップ、特徴、物質の組成、諸ステップ群、または物質の諸特性や諸組成の群への言及は、そういった諸ステップ、諸特性、物質の諸組成、諸ステップ群、物質の諸特性や諸組成の諸群の1つ及び複数(すなわち1つ以上)を包含するものとする。
「RNA」とは、少なくとも1つのリボヌクレオチド残基を含む分子を意味する。「リボヌクレオチド」とは、β-D-リボ-フラノース部分の2’位にヒドロキシル基を有するヌクレオチドを意味する。これらの用語には、二本鎖RNA、一本鎖RNA、一部精製RNAなどの単離されたRNA、基本的に純粋なRNA、合成RNA、組換えにより生産されたRNA、及び1つ以上のヌクレオチドの付加、欠失、置換及び/または改変によって天然のRNAとは異なるように改変されたRNAが含まれる。そのような改変としては、たとえばsiNAの末端(複数可)に、または内部に、たとえばRNAの1つ以上のヌクレオチドに、非ヌクレオチド物質を付加することであってもよい。本開示のRNA分子のヌクレオチドは、非標準ヌクレオチド、たとえば自然に生じないヌクレオチドまたは化学的に合成されたヌクレオチドまたはデオキシヌクレオチドを含むこともできる。これらの改変されたRNAは、アナログ、または天然RNAのアナログと呼ぶこともできる。一例では、RNAの全残基はリボヌクレオチドである。
一例では、本開示は、RNAを、すなわちRNAiを誘発できるRNAを提供し、該RNAは、少なくとも17ヌクレオチド長のエフェクター配列及びエフェクター相補配列を含み、該エフェクター配列は表1に示すHBVゲノムのある領域によってコードされるRNA転写物にほぼ相補的である。たとえば、本開示のRNAは、30ヌクレオチド長よりも短いエフェクター配列を含むことになる。たとえば、好適なエフェクター配列は、17~29ヌクレオチド長の範囲であってもよい。
(i)少なくとも1つのRNAが、少なくとも17ヌクレオチド長のエフェクター配列及びエフェクター相補配列を含み、各RNAのエフェクター配列は表1に示すHBVゲノムのある領域によってコードされるRNA転写物にほぼ相補的であり;
(ii)少なくとも1つのRNAがエフェクター配列及びエフェクター相補配列を含み、各RNAのエフェクター配列は、表4の「エフェクター」と表示したコラムに示す配列を含むかまたはそれからなる。一例では、RNAのエフェクター相補配列は、表4の「エフェクター相補配列」と表示したコラムに示す配列を含むかまたはそれからなる。
(i)少なくとも1つのRNAがエフェクター配列及びエフェクター相補配列を含み、該RNAのエフェクター配列は、表2の「エフェクター」と表示したコラムに示す配列からなり(一例では、各RNAのエフェクター相補配列は、表2の「エフェクター相補配列」と表示したコラムに示す配列からなり);
(ii)少なくとも1つのRNAがエフェクター配列及びエフェクター相補配列を含み、該RNAのエフェクター配列は、表4の「エフェクター」と表示したコラムに示す配列からなる(一例では、該RNAのエフェクター相補配列は、表4の「エフェクター相補配列」と表示したコラムに示す配列を含むかまたはそれからなる)。
(i)配列番号47に示す配列からなるエフェクター配列、及び配列番号48に示す配列からなるエフェクター相補配列を含むRNA;及び
(ii)配列番号27に示す配列からなるエフェクター配列、及び配列番号28に示す配列からなるエフェクター相補配列を含むRNAを含む。
(i)配列番号47に示す配列からなるエフェクター配列、及び配列番号48に示す配列からなるエフェクター相補配列を含むRNA;
(ii)配列番号27に示す配列からなるエフェクター配列、及び配列番号28に示す配列からなるエフェクター相補配列を含むRNA;及び
(iii)配列番号29に示す配列からなるエフェクター配列、及び配列番号30に示す配列からなるエフェクター相補配列を含むRNAを含む。
(i)配列番号47に示す配列からなるエフェクター配列、及び配列番号48に示す配列からなるエフェクター相補配列を含むRNA;
(ii)配列番号27に示す配列からなるエフェクター配列、及び配列番号28に示す配列からなるエフェクター相補配列を含むRNA;及び
(iii)配列番号57に示す配列からなるエフェクター配列、及び配列番号58に示す配列からなるエフェクター相補配列を含むRNAを含む。
(i)配列番号92に示す配列を含むかまたはそれからなるshRNA;
(ii)配列番号78に示す配列を含むかまたはそれからなるshRNA;及び
(iii)本開示の少なくとも1つの他のRNA
を含む。
(i)配列番号92に示す配列を含むかまたはそれからなるshRNA;
(ii)配列番号78に示す配列を含むかまたはそれからなるshRNA;及び
(iii)配列番号79に示す配列を含むかまたはそれからなるshRNA
を含むかまたはそれからなる。
(i)配列番号92に示す配列を含むかまたはそれからなるshRNA;
(ii)配列番号78に示す配列を含むかまたはそれからなるshRNA;及び
(iii)配列番号101に示す配列を含むかまたはそれからなるshRNA
を含むかまたはそれからなる。
本開示のRNAは核酸から転写することができる。したがって、一例では、本開示は本開示のRNAをコードする核酸を提供する。
(i)少なくとも1つのRNAがエフェクター配列及びエフェクター相補配列を含み、該RNAのエフェクター配列は表2の「エフェクター」と表示したコラムに示す配列からなり(一例では、各RNAのエフェクター相補配列は表2の「エフェクター相補配列」と表示したコラムに示す配列からなり);
(ii)少なくとも1つのRNAがエフェクター配列及びエフェクター相補配列を含み、該RNAのエフェクター配列は表4の「エフェクター」と表示したコラムに示す配列からなる(一例では、該RNAのエフェクター相補配列は表4の「エフェクター相補配列」と表示したコラムに示す配列を含むかまたはそれからなる)。
(i)配列番号47に示す配列からなるエフェクター配列、及び配列番号48に示す配列からなるエフェクター相補配列を含むRNAをコードする配列;及び
(ii)配列番号27に示す配列からなるエフェクター配列、及び配列番号28に示す配列からなるエフェクター相補配列を含むRNAをコードする配列
を含む。
(i)配列番号47に示す配列からなるエフェクター配列、及び配列番号48に示す配列からなるエフェクター相補配列を含むRNAをコードする配列;
(ii)配列番号27に示す配列からなるエフェクター配列、及び配列番号28に示す配列からなるエフェクター相補配列を含むRNAをコードする配列;及び
(iii)配列番号29に示す配列からなるエフェクター配列、及び配列番号30に示す配列からなるエフェクター相補配列を含むRNAをコードする配列
を含む。
(i)配列番号27に示す配列からなるエフェクター配列、及び配列番号28に示す配列からなるエフェクター相補配列を含むRNAをコードするDNA配列;
(ii)配列番号29に示す配列からなるエフェクター配列、及び配列番号30に示す配列からなるエフェクター相補配列を含むRNAをコードするDNA配列;及び
(iii)配列番号47に示す配列からなるエフェクター配列、及び配列番号48に示す配列からなるエフェクター相補配列を含むRNAをコードするDNA配列
を含むことができる。
(i)配列番号47に示す配列からなるエフェクター配列、及び配列番号48に示す配列からなるエフェクター相補配列を含むRNAをコードする配列;
(ii)配列番号27に示す配列からなるエフェクター配列、及び配列番号28に示す配列からなるエフェクター相補配列を含むRNAをコードする配列;及び
(iii)配列番号57に示す配列からなるエフェクター配列、及び配列番号58に示す配列からなるエフェクター相補配列を含むRNAをコードする配列
を含む。
(i)配列番号27に示す配列からなるエフェクター配列、及び配列番号28に示す配列からなるエフェクター相補配列を含むRNAをコードするDNA配列;
(ii)配列番号57に示す配列からなるエフェクター配列、及び配列番号58に示す配列からなるエフェクター相補配列を含むRNAをコードするDNA配列;及び
(iii)配列番号47に示す配列からなるエフェクター配列、及び配列番号48に示す配列からなるエフェクター相補配列を含むRNAをコードするDNA配列
を含むことができる。
(i)配列番号92に示す配列を含むかまたはそれからなるshRNA;
(ii)配列番号78に示す配列を含むかまたはそれからなるshRNA;及び
(iii)本開示の少なくとも1つの他のRNA
を含む。
(i)配列番号92に示す配列を含むかまたはそれからなるshRNA;
(ii)配列番号78に示す配列を含むかまたはそれからなるshRNA;及び
(iii)配列番号79に示す配列を含むかまたはそれからなるshRNA
を含む。
(i)配列番号92に示す配列を含むかまたはそれからなるshRNA;
(ii)配列番号78に示す配列を含むかまたはそれからなるshRNA;及び
(iii)配列番号101に示す配列を含むかまたはそれからなるshRNA
を含む。
(i)U6プロモーター、1つのグアニン残基を含む転写開始配列、及び連続する5つのチミジン残基を含むターミネーターに機能的に連結されている、配列番号92に示す配列を含むかまたはそれからなるshRNAをコードする配列;
(ii)U6プロモーター及び連続する6つのチミジン残基を含むターミネーターに機能的に連結されている、配列番号78に示す配列を含むかまたはそれからなるshRNAをコードする配列;及び
(iii)プロモーター、少なくとも5つのチミジン残基を含むターミネーター、及び任意選択の転写開始配列に機能的に連結されている、本開示の少なくとも1つの他のRNAをコードする配列
を含む。
(i)U6プロモーター及び連続する6つのチミジン残基を含むターミネーターに機能的に連結されている、配列番号78に示す配列を含むかまたはそれからなるshRNAをコードする配列;
(ii)U6プロモーター、1つのグアニン残基を含む転写開始配列、及び連続する6つのチミジン残基を含むターミネーターに機能的に連結されている、配列番号79に示す配列を含むかまたはそれからなるshRNAをコードする配列;及び
(iii)U6プロモーター、1つのグアニン残基を含む転写開始配列、及び連続する5つのチミジン残基を含むターミネーターに機能的に連結されている、配列番号92に示す配列を含むかまたはそれからなるshRNAをコードする配列
を含む。
(i)U6プロモーター及び連続する6つのチミジン残基を含むターミネーターに機能的に連結されている、配列番号78に示す配列を含むかまたはそれからなるshRNAをコードする配列;
(ii)U6プロモーター、1つのグアニン残基を含む転写開始配列、及び連続する6つのチミジン残基を含むターミネーターに機能的に連結されている、配列番号79に示す配列を含むかまたはそれからなるshRNAをコードする配列;及び
(iii)U6プロモーター、1つのグアニン残基を含む転写開始配列、及び連続する5つのチミジン残基を含むターミネーターに機能的に連結されている、配列番号92に示す配列を含むかまたはそれからなるshRNAをコードする配列
を含む。
(i)U6プロモーター及び連続する6つのチミジン残基を含むターミネーターに機能的に連結されている、配列番号78に示す配列を含むかまたはそれからなるshRNAをコードする配列;
(ii)U6プロモーター、1つのグアニン残基を含む転写開始配列、及び連続する5つのチミジン残基を含むターミネーターに機能的に連結されている、配列番号101に示す配列を含むかまたはそれからなるshRNAをコードする配列;及び
(iii)U6プロモーター、1つのグアニン残基を含む転写開始配列、及び連続する5つのチミジン残基を含むターミネーターに機能的に連結されている、配列番号92に示す配列を含むかまたはそれからなるshRNAをコードする配列
を含む。
(i)U6プロモーター及び連続する6つのチミジン残基を含むターミネーターに機能的に連結されている、配列番号78に示す配列を含むかまたはそれからなるshRNAをコードする配列;
(ii)U6プロモーター、1つのグアニン残基を含む転写開始配列、及び連続する5つのチミジン残基を含むターミネーターに機能的に連結されている、配列番号101に示す配列を含むかまたはそれからなるshRNAをコードする配列;及び
(iii)U6プロモーター、1つのグアニン残基を含む転写開始配列、及び連続する5つのチミジン残基を含むターミネーターに機能的に連結されている、配列番号92に示す配列を含むかまたはそれからなるshRNAをコードする配列
を含む。
(i)U6プロモーター、1つのグアニン残基を含む転写開始配列、及び連続する5つのチミジン残基を含むターミネーター配列に機能的に連結されている配列番号92に示す配列を含むかまたはそれからなるshRNAをコードする配列を含むddRNAiコンストラクト;及び
(ii)プロモーター、少なくとも5つのチミジン残基を含むターミネーター、及び任意選択の転写開始配列に機能的に連結されている本開示の少なくとも1つの他のRNAをコードする配列を含むddRNAiコンストラクト;または
(iii)U6プロモーター、1つのグアニン残基を含む転写開始配列、及び連続する5つのチミジン残基を含むターミネーターに機能的に連結されている配列番号101に示す配列を含むかまたはそれからなるshRNAをコードする配列を含むddRNAiコンストラクト
を含む。
(i)U6プロモーター及び連続する6つのチミジン残基を含むターミネーターに機能的に連結されている配列番号78に示す配列を含むかまたはそれからなるshRNAをコードする配列を含むddRNAiコンストラクト;及び
(ii)プロモーター、少なくとも5つのチミジン残基を含むターミネーター、及び任意選択の転写開始配列に機能的に連結されている本開示の少なくとも1つの他のRNAをコードする配列を含むddRNAiコンストラクト;または
(iii)U6プロモーター、1つのグアニン残基を含む転写開始配列、及び連続する5つのチミジン残基を含むターミネーターに機能的に連結されている配列番号101に示す配列を含むかまたはそれからなるshRNAをコードする配列を含むddRNAiコンストラクト
を含む。
(i)U6プロモーター、1つのグアニン残基を含む転写開始配列、及び連続する6つのチミジン残基を含むターミネーターに機能的に連結されている配列番号79に示す配列を含むかまたはそれからなるshRNAをコードする配列を含むddRNAiコンストラクト;及び
(ii)プロモーター、少なくとも5つのチミジン残基を含むターミネーター、及び任意選択の転写開始配列に機能的に連結されている本開示の少なくとも1つの他のRNAをコードする配列を含むddRNAiコンストラクト;または
(iii)U6プロモーター、1つのグアニン残基を含む転写開始配列、及び連続する5つのチミジン残基を含むターミネーターに機能的に連結されている配列番号101に示す配列を含むかまたはそれからなるshRNAをコードする配列を含むddRNAiコンストラクト
を含む。
(i)U6プロモーター、1つのグアニン残基を含む転写開始配列、及び連続する5つのチミジン残基を含むターミネーターに機能的に連結されている配列番号92に示す配列を含むかまたはそれからなるshRNAをコードする配列を含むddRNAiコンストラクト;
(ii)U6プロモーター及び連続する6つのチミジン残基を含むターミネーターに機能的に連結されている配列番号78に示す配列を含むかまたはそれからなるshRNAをコードする配列を含むddRNAiコンストラクト;及び
(iii)プロモーター、少なくとも5つのチミジン残基を含むターミネーター、及び任意選択の転写開始配列に機能的に連結されている本開示の少なくとも1つの他のRNAをコードする配列を含むddRNAiコンストラクト
を含む。
(i)U6プロモーター、1つのグアニン残基を含む転写開始配列、及び連続する5つのチミジン残基を含むターミネーターに機能的に連結されている配列番号92に示す配列を含むかまたはそれからなるshRNAをコードする配列を含むddRNAiコンストラクト;
(ii)U6プロモーター及び連続する6つのチミジン残基を含むターミネーターに機能的に連結されている配列番号78に示す配列を含むかまたはそれからなるshRNAをコードする配列を含むddRNAiコンストラクト;及び
(iii)U6プロモーター、1つのグアニン残基を含む転写開始配列、及び連続する6つのチミジン残基を含むターミネーターに機能的に連結されている配列番号79に示す配列を含むかまたはそれからなるshRNAをコードする配列を含むddRNAiコンストラクト
を含む。
(i)U6プロモーター、1つのグアニン残基を含む転写開始配列、及び連続する5つのチミジン残基を含むターミネーターに機能的に連結されている配列番号92に示す配列を含むかまたはそれからなるshRNAをコードする配列を含むddRNAiコンストラクト;
(ii)U6プロモーター及び連続する6つのチミジン残基を含むターミネーターに機能的に連結されている配列番号78に示す配列を含むかまたはそれからなるshRNAをコードする配列を含むddRNAiコンストラクト;及び
(iii)U6プロモーター、1つのグアニン残基を含む転写開始配列、及び連続する5つのチミジン残基を含むターミネーターに機能的に連結されている配列番号101に示す配列を含むかまたはそれからなるshRNAをコードする配列を含むddRNAiコンストラクト
を含む。
一例では、本開示のddRNAiコンストラクトは、発現コンストラクト内に含まれている。
細胞培養モデル
HBVは培養液中の細胞には感染しない。しかし、HBV DNAを(ヘッド・トゥー・テールの二量体として、または100%を上回る「オーバーレングス」ゲノムとして)HuH7またはHepG2肝細胞にトランスフェクションすると、ウイルス遺伝子が発現し、HBVビリオンが生産され培地中に放出される。そのような細胞株の一例は、安定的に完全HBVゲノム(血清型ayw、遺伝子型D)を有するHepG2ヒト肝細胞癌細胞株のサブ細胞株、HepG2.2.15である。HepG2.2.15は、全HBVウイルスRNA及びタンパク質を発現し、ウイルスゲノムを生産し、ウイルス様粒子を分泌する。本明細書で例示するように、本開示のRNAの活性は、RNAを細胞に投与した後、HBVゲノムによってコードされるRNAまたはタンパク質の発現レベルを測定することによって、決定される。細胞内HBV遺伝子発現は、Taqman(商標)アッセイか他のリアルタイムPCRアッセイによりHBV RNAを、またはELISAによりHBVタンパク質を、検定することができる。細胞外ウイルスは、PCRによりDNAを、またはELISAによりタンパク質を、検定することができる。HBV表面抗原とコアタンパク質の抗体は市販されている。当業界では、トランスフェクション効率及びサンプル回収率の差異を正規化する様々な手段が知られている。最近の初代ヒト肝細胞を用いる細胞培養系の進歩のおかげで、HBV治療剤の活性の決定能も向上しよう。
HBV複製の研究に用いることができる小動物モデルがいくつかある。その一つは、放射線照射マウスへのHBV感染肝臓組織の移植である。ウイルス血症(エビデンスはPCRでHBV DNAを測定)は、移植後8日目に最初に検出され、18~25日目にピークになる(Ilan et al., 1999, Hepatology, 29, 553-562)。
いくつかの例では、本開示のRNAまたはddRNAiまたは発現コンストラクトは、担体を含む組成物中に存在する。
本開示のRNAまたはddRNAiまたは発現コンストラクトは、HBV感染の予防または治療のための組成物に使用される。本開示の治療組成物は、単独で使用することもできるし、他の抗ウイルス剤などの1種以上の物質と併用することもできる。現在HBVの治療で認可されているのは、ラミブジン、アデホビルジピボキシル、及びインターフェロンアルファである。本開示のRNAまたはddRNAiまたは発現コンストラクトは、他の認可薬とは異なる機構でHBVに作用するので、本開示の剤と他の抗ウイルス剤の併用治療で治療の有効性は大きく向上する一方で、たとえば長期ラミブジン治療の大きな問題となっているラミブジン耐性の発生などの薬物耐性の発生は大きく抑制されることが期待される。
本開示はまた、本開示のRNAまたはddRNAiまたは発現コンストラクトをキットで提供する。キットは、容器を含む場合がある。典型的なキットには、本開示のRNAまたはddRNAiまたは発現コンストラクトと、投与に関する指示とが含まれる。いくつかの例では、キットには、本開示の2種以上のRNAまたはddRNAiまたは発現コンストラクト及び/または本開示の別のRNAまたはddRNAiまたは発現コンストラクトが含まれる。
ddRNAiコンストラクト設計の標的となり得る配列を、全長HBVゲノムから特定した。簡単に説明すると、占有登録のされていない公開されているドメインソースから検索した配列から、HBV配列のデータベースを編纂した。最初のコレクションは、GenbankのRelease202.0(2014年6月15日)から検索ワード{hepatitis b virus complete genome}及び{hepatitis b virus complete genome + genotype}で編纂し、ヒトHBV配列のみを含めた。最初の配列アラインメントを、Sequence Assembly、Clustal、MUSCLE and SEQUENCHER、Release 5.0.1/5.2を用いて実施した。最初のアラインメントは、フォーマット化による配列差異(たとえば、配列開始部位のばらつき)、人工的ウイルス配列(たとえば、HBVベースのコンストラクト)、明白な外れ値(たとえば、質の悪いアラインメントまたは配列の質が悪いことを意味するNを有するアラインメント)及び二重のエントリーなどアノテーションに誤りのある配列をそれぞれ除去するように手動で精選した。全HBV遺伝子型(A~H)の4345配列を含む残りの配列を、CLUSTALW(高速と低速の両方)及びMegalign、Lasergene、Release12で再度アラインメントした。アラインメント結果は、全遺伝子型で、最も保存性の高い領域(少なくとも18/20ヌクレオチド)をスキャンした。最も保存性の高い10領域をshRNA設計の標的として選択した。特定したこれらの標的領域の配列を表1に示す。
表1に記載の標的領域にほぼ相補的なエフェクター配列を含むsiRNAデュプレックスを設計した。これを表2に示す。siRNAデュプレックスは、2ヌクレオチドの3’dTdTオーバーハングを用いて合成した。
本開示のsiRNAがHBV転写物の発現をノックダウンする有効性を試験するために、HEK293細胞でデュアルルシフェラーゼ・レポーター・アッセイを実施した。
本開示のsiRNAがHBV遺伝子の発現をノックダウンする有効性を試験するために、HepG2.2.15に本開示の代表的なsiRNAをトランスフェクションし、HBV遺伝子発現の阻害を検定した。
本開示のshRNAを発現するddRNAi発現コンストラクトがHBV転写物をノックダウンする有効性を試験するために、HEK293細胞でデュアルルシフェラーゼ・レポーター・アッセイを実施した。
実験1:HEK293細胞に、shRNA:標的の比を1:1~1:5000としてトランスフェクションした。
実験2:HEK293細胞に、shRNA:標的の比を10:1~1:500としてトランスフェクションした。
HEK293細胞は、トランスフェクションの1日前に、96ウェルの培養プレートに2.5x104細胞/ウェルの密度で播種した。7つのddRNAi発現コンストラクトの各々について、0.3uLのリポフェクタミン2000試薬(Life Technologies社、カリフォルニア州カールスバッド)をメーカーの指示通りに用いて、HEK293細胞を含むウェルに、50ng、25ng、10ng、2.5ng、0.83ng、0.28ng、0.09ng、0.03ng、または0.01ngのそれぞれのddRNAi発現コンストラクト、及び50ngの対応するルシフェラーゼ・レポーター・コンストラクトを、同時トランスフェクションした。細胞には、1ngのRenillaレポーター・コンストラクト(ローディング・コントロールとした)もトランスフェクションした。トランスフェクションから48時間後、細胞ライセートを回収し、Dual Luciferase Reporter Assay System(Promega社、ウィスコンシン州マディソン)で解析した。各ウェルのホタル/Renillaの活性比を決定し、ddRNAi発現コンストラクトの阻害効率を計算した。
HEK293細胞は、トランスフェクションの1日前に、96ウェルの培養プレートに2.5x104細胞/ウェルの密度で播種した。7つのddRNAi発現コンストラクトの各々について、0.3uLのリポフェクタミン2000試薬(Life Technologies社、カリフォルニア州カールスバッド)をメーカーの指示通りに用いて、HEK293細胞を含むウェルに、100ng、50ng、20ng、5ng、1.67ng、0.56ng、0.19ng、0.06ng、または0.02ngのそれぞれのddRNAi発現コンストラクト、及び10ngの対応するルシフェラーゼ・レポーター・コンストラクトを、同時トランスフェクションした。細胞には、1ngのRenillaレポーター・コンストラクト(ローディング・コントロールとした)もトランスフェクションした。トランスフェクションから48時間後、細胞ライセートを回収し、Dual Luciferase Reporter Assay System(Promega社、ウィスコンシン州マディソン)で解析した。各ウェルのホタル/Renillaの活性比を決定し、ddRNAi発現コンストラクトの阻害効率を計算した。
実施例5で説明した7つのリードddRNAiコンストラクトの機能亢進特性を、次に、HEK293細胞にU69-PSE7fix-Random100(pBL-153)フィラー・プラスミドと同時トランスフェクトした場合について評価した。
2つのバリアントshRNAを設計し、shRNA9(配列番号73)及びshRNA20(配列番号84)とされる各shRNAについて調製した。調製したバリアントは以下の通りであった:
shRNA13(配列番号77);
shRNA14(配列番号78);
shRNA21(配列番号85);及び
shRNA22(配列番号86)。
shRNA14、shRNA15、shRNA37、shRNA28とされる各shRNAのHBV shRNA配列を合成し、修飾U6-1、U6-8、またはU6-9プロモーターの下流でクローン化した。発現カセット全体をVector Biolabs社(ペンシルバニア州モルバーン)のウイルス生産用アデノウイルス(AdV)コンストラクト中にサブクローン化した。
実施例8にしたがい、shRNA14、shRNA15、shRNA37、shRNA28とされる各shRNAのHBV shRNA AdVベクターを調製した。
実施例8にしたがい、shRNA14、shRNA15、shRNA37、shRNA28とされる各shRNAのシングルHBV shRNA AdVベクターを調製した。
発明者らは、新規にHBV接種により感染させた細胞モデルで、shRNA14/shRNA37/shRNA28を発現するトリプルHBV shRNA AdVベクターが共有結合閉環状DNA(cccDNA)の形成に及ぼす効果を決定した。
shRNA14/shRNA37/shRNA28を発現するトリプルHBV shRNA AdVベクターが(i)HBVウイルス転写物の発現、(ii)細胞外HBsAg及びHBeAg、(iii)細胞外及び細胞内のHBV DNA、及び(iv)cccDNAの形成のそれぞれに及ぼすインビボの効果を、新規にHBV接種により感染させたPXBマウスモデルで決定した。
shRNA14/shRNA37/shRNA28を発現するトリプルHBV shRNA AdVベクターを実施例10にしたがい調製した。
(i)-1日(すなわちHBV接種後27日)時点で体重が15g以上である;
(ii)-7日(すなわちHBV接種後21日)時点で血清HBV DNA濃度が少なくとも1.0E+6複製物/mLである;及び
(iii)-7日(すなわちHBV接種後21日)時点でh-Alb測定値が10mg/mL以上である。
第1群:無処置;
第2群:2.00E+11vg/mLのトリプルHBV shRNA AdVベクターを含有する10μL/体重グラムの用量のシングルボーラスをIV注射により尾静脈に送達;
第3群:2.00E+12vg/mLのトリプルHBV shRNA AdVベクターを含有する10μL/体重グラムの用量のシングルボーラスをIV注射により尾静脈に送達。
処置の間中、どの動物も開始レベルの80%以上の体重を維持した。さらに、第2群と第3群の体重の最低平均値は、処置を受けなかったコントロール群よりもわずかに低かった。
本発明は以下の態様も提供する。
[1] 少なくとも17ヌクレオチド長のエフェクター配列及びエフェクター相補配列を含むRNAであって、前記エフェクター配列は、B型肝炎ウイルス(HBV)ゲノムのある領域によってコードされるRNA転写物にほぼ相補的であり、前記領域は、配列番号1~10のいずれかに示す配列を含んでいる、前記RNA。
[2] 配列番号11に示すエフェクター配列、及び配列番号12に示すエフェクター相補配列を含んでいるRNA;
配列番号13に示すエフェクター配列、及び配列番号14に示すエフェクター相補配列を含んでいるRNA;
配列番号15に示すエフェクター配列、及び配列番号16に示すエフェクター相補配列を含んでいるRNA;
配列番号17に示すエフェクター配列、及び配列番号18に示すエフェクター相補配列を含んでいるRNA;
配列番号19に示すエフェクター配列、及び配列番号20に示すエフェクター相補配列を含んでいるRNA;
配列番号21に示すエフェクター配列、及び配列番号22に示すエフェクター相補配列を含んでいるRNA;
配列番号23に示すエフェクター配列、及び配列番号24に示すエフェクター相補配列を含んでいるRNA;
配列番号25に示すエフェクター配列、及び配列番号26に示すエフェクター相補配列を含んでいるRNA;
配列番号27に示すエフェクター配列、及び配列番号28に示すエフェクター相補配列を含んでいるRNA;
配列番号29に示すエフェクター配列、及び配列番号30に示すエフェクター相補配列を含んでいるRNA;
配列番号31に示すエフェクター配列、及び配列番号32に示すエフェクター相補配列を含んでいるRNA;
配列番号33に示すエフェクター配列、及び配列番号34に示すエフェクター相補配列を含んでいるRNA;
配列番号35に示すエフェクター配列、及び配列番号36に示すエフェクター相補配列を含んでいるRNA;
配列番号37に示すエフェクター配列、及び配列番号38に示すエフェクター相補配列を含んでいるRNA;
配列番号39に示すエフェクター配列、及び配列番号40に示すエフェクター相補配列を含んでいるRNA;
配列番号41に示すエフェクター配列、及び配列番号42に示すエフェクター相補配列を含んでいるRNA;
配列番号43に示すエフェクター配列、及び配列番号44に示すエフェクター相補配列を含んでいるRNA;
配列番号45に示すエフェクター配列、及び配列番号46に示すエフェクター相補配列を含んでいるRNA;
配列番号47に示すエフェクター配列、及び配列番号48に示すエフェクター相補配列を含んでいるRNA;
配列番号49に示すエフェクター配列、及び配列番号50に示すエフェクター相補配列を含んでいるRNA;及び
配列番号51に示すエフェクター配列、及び配列番号52に示すエフェクター相補配列を含んでいるRNA
からなる群より選択される、[1]に記載のRNA。
[3] 低分子ヘアピン型RNA(shRNA)である、[1]または[2]に記載のRNA。
[4] 前記エフェクター配列と前記エフェクター相補配列の間に配置されたループ配列を含んでいる、[3]に記載のRNA。
[5] 前記shRNAは配列番号65~98のいずれかに示す配列を含んでいる、[3]または[4]に記載のRNA。
[6] 複数のRNAであって、
(a)少なくとも1つの[1]~[5]のいずれか一に記載のRNA;及び
(b)
(i)[1]~[5]のいずれか一に記載のRNA;または
(ii)少なくとも17ヌクレオチド長のエフェクター配列及びエフェクター相補配列を含み、前記エフェクター配列は配列番号54、56、58、60、62及び64のいずれかに示すRNA配列にほぼ相補的であるRNA
から選択される少なくとも1つのRNA
を含み、
前記(a)のRNAと前記(b)のRNAは異なるエフェクター配列を含んでいる、
前記複数のRNA。
[7] 前記(b)(ii)のRNAは、
配列番号53に示すエフェクター配列、及び配列番号54に示すエフェクター相補配列を含んでいるRNA;
配列番号55に示すエフェクター配列、及び配列番号56に示すエフェクター相補配列を含んでいるRNA;
配列番号57に示すエフェクター配列、及び配列番号58に示すエフェクター相補配列を含んでいるRNA;
配列番号59に示すエフェクター配列、及び配列番号60に示すエフェクター相補配列を含んでいるRNA;
配列番号61に示すエフェクター配列、及び配列番号62に示すエフェクター相補配列を含んでいるRNA;及び
配列番号63に示すエフェクター配列、及び配列番号64に示すエフェクター相補配列を含んでいるRNA
からなる群より選択される、[6]に記載の複数のRNA。
[8] 低分子ヘアピン型RNA(shRNA)である、[6]または[7]に記載の複数のRNA。
[9] 前記エフェクター配列と前記エフェクター相補配列の間に配置されたループ配列を含んでいる、[8]に記載の複数のRNA。
[10]
(a)少なくとも1つのRNAは[5]に記載のshRNAであり;
(b)少なくとも1つのRNAは
(i)[5]に記載のshRNA;または
(ii)配列番号99~104のいずれかに示す配列を含むshRNA
から選択され、
前記(a)のshRNAと前記(b)のshRNAは異なっている、
[8]または[9]に記載の複数のRNA。
[11] [1]~[5]のいずれか一に記載のRNAをコードするDNA配列を含む、核酸。
[12] 複数の核酸であって、
(a)[1]~[5]のいずれか一に記載のRNAをコードするDNA配列を含む第1の核酸;及び
(b)第2の核酸であって、
(i)[1]~[5]のいずれか一に記載のRNA;または
(ii)少なくとも17ヌクレオチド長のエフェクター配列及びエフェクター相補配列を含み、前記エフェクター配列は配列番号54、56、58、60、62及び64のいずれかに示すRNA配列にほぼ相補的であるRNA
から選択されるRNAをコードするDNA配列を含む前記第2の核酸
を含み、
前記第1の核酸によってコードされるRNAと前記第2の核酸によってコードされるRNAは、異なるエフェクター配列を含んでいる、
前記複数の核酸。
[13] 前記(b)(ii)のRNAは、
配列番号53に示すエフェクター配列、及び配列番号54に示すエフェクター相補配列を含んでいるRNA;
配列番号55に示すエフェクター配列、及び配列番号56に示すエフェクター相補配列を含んでいるRNA;
配列番号57に示すエフェクター配列、及び配列番号58に示すエフェクター相補配列を含んでいるRNA;
配列番号59に示すエフェクター配列、及び配列番号60に示すエフェクター相補配列を含んでいるRNA;
配列番号61に示すエフェクター配列、及び配列番号62に示すエフェクター相補配列を含んでいるRNA;及び
配列番号63に示すエフェクター配列、及び配列番号64に示すエフェクター相補配列を含んでいるRNA
からなる群より選択される、[12]に記載の複数の核酸。
[14] 各核酸によってコードされる前記RNAは、低分子ヘアピン型RNA(shRNA)である、[12]または[13]に記載の複数の核酸。
[15] 各核酸によってコードされる前記RNAは、前記エフェクター配列と前記エフェクター相補配列の間に配置されたループ配列を含んでいる、[14]に記載の複数の核酸。
[16]
(a)前記第1の核酸は、[5]に記載のshRNAをコードするDNA配列を含み、
(b)前記第2の核酸は、
(i)[5]に記載のshRNA;または
(ii)配列番号99~104のいずれかに示す配列を含むshRNA
から選択されるshRNAをコードするDNA配列を含み、
前記第1の核酸によってコードされるshRNAと前記第2の核酸によってコードされるshRNAは異なっている、
[14]または[15]に記載の複数の核酸。
[17] [11]に記載の核酸を含んでいる、DNA指向性RNA干渉(ddRNAi)コンストラクト。
[18] 複数のDNA指向性RNA干渉(ddRNAi)コンストラクトであって、
(a)少なくとも1つのddRNAiコンストラクトが、[12](a)に定められる複数の核酸の第1の核酸を含み、
(b)少なくとも1つのddRNAiコンストラクトが、[12](b)に定められる複数の核酸の第2の核酸を含んでいる、
前記複数のDNA指向性RNA干渉(ddRNAi)コンストラクト。
[19] 少なくとも2つの低分子ヘアピン型RNA(shRNA)をコードするDNA指向性RNA干渉(ddRNAi)コンストラクトであって、
(a)第1のshRNAをコードする、[11]に記載の核酸;及び
(b)第2のshRNAをコードするDNA配列を含む核酸であって、前記第2のshRNAは、少なくとも17ヌクレオチド長のエフェクター配列及びエフェクター相補配列を含み、前記エフェクター配列は、B型肝炎ウイルスのゲノムによってコードされるRNA転写物のある領域にほぼ相補的である、前記核酸
を含み、
前記第1のshRNAと前記第2のshRNAは異なっている、
前記DNA指向性RNA干渉(ddRNAi)コンストラクト。
[20] [12]~[16]のいずれか一に記載の複数の核酸を含んでいる、[19]に記載のddRNAiコンストラクト。
[21] 第3のshRNAをコードするDNA配列を含む核酸を含み、前記第3のshRNAは、少なくとも17ヌクレオチド長のエフェクター配列及びエフェクター相補配列を含み、前記エフェクター配列は、B型肝炎ウイルスのゲノムによってコードされるRNA転写物のある領域にほぼ相補的であり、
前記第3のshRNAは、前記第1のshRNA及び前記第2のshRNAとは異なっている、
[19]または[20]に記載のddRNAiコンストラクト。
[22] 前記第3のshRNAをコードする前記核酸は、[12]~[16]のいずれか一に記載の複数の核酸のうちのいずれかの核酸から選択される核酸である、[21]に記載のddRNAiコンストラクト。
[23]
(a)配列番号92に示す配列を含むかまたはそれからなるshRNAをコードする核酸:
(b)[12]~[16]のいずれか一に記載の複数の核酸のうちのいずれかの核酸から選択される核酸;及び
(c)配列番号78に示す配列を含むかまたはそれからなるshRNAをコードする核酸を含み、
前記shRNAはそれぞれ、互いに異なっている、
[19]に記載のddRNAiコンストラクト。
[24] 5’から3’の方向に、
(a)配列番号92に示す配列を含むかまたはそれからなるshRNAをコードする第1の核酸:
(b)配列番号101に示す配列を含むかまたはそれからなるshRNAをコードする第2の核酸;及び
(c)配列番号78に示す配列を含むかまたはそれからなるshRNAをコードする第3の核酸
を含んでいる、[19]に記載のddRNAiコンストラクト。
[25] 5’から3’の方向に、
(a)配列番号92に示す配列を含むかまたはそれからなるshRNAをコードする第1の核酸:
(b)配列番号79に示す配列を含むかまたはそれからなるshRNAをコードする第2の核酸;及び
(c)配列番号78に示す配列を含むかまたはそれからなるshRNAをコードする第3の核酸
を含んでいる、[19]に記載のddRNAiコンストラクト。
[26] shRNAをコードする各核酸の上流にRNA pol IIIプロモーターを含んでいる、[17]~[25]のいずれか一に記載のddRNAiコンストラクト。
[27] 前記または各RNA pol IIIプロモーターは、U6プロモーター及びH1プロモーターから選択される、[26]に記載のddRNAiコンストラクト。
[28] [17]~[27]のいずれか一に記載されるddRNAiコンストラクトを含んでいる、発現ベクター。
[29] 複数の発現ベクターであって、
(a)少なくとも1つの発現ベクターが、[18](a)に定められるddRNAiコンストラクトを含み、
(b)少なくとも1つの発現ベクターが、[18](b)に定められるddRNAiコンストラクトを含んでいる、
前記複数の発現ベクター。
[30] 前記または各発現ベクターは、プラスミドまたは小環である、[28]に記載の発現ベクターまたは[29]に記載の複数の発現ベクター。
[31] 前記または各発現ベクターは、アデノ随伴ウイルス(AAV)ベクター、レトロウイルスベクター、アデノウイルス(AdV)ベクター及びレンチウイルス(LV)ベクターからなる群より選択されるウイルスベクターである、[28]に記載の発現ベクターまたは[29]に記載の複数の発現ベクター。
[32] 前記または各発現ベクターは、カチオン性DNA結合ポリマーと複合体をなしている、[28]または[30]に記載の発現ベクター、または[29]または[30]に記載の複数の発現ベクター。
[33] [11]~[20]のいずれか一に記載のDNA指向性RNA干渉(ddRNAi)コンストラクト、または[21]~[24]のいずれか一に記載の発現ベクターを含む、組成物。
[34] さらに、1種以上の製薬上許容される担体を含んでいる、[33]に記載の組成物。
[35] 対象のB型肝炎ウイルス(HBV)感染を治療する方法であって、前記対象に、治療有効量の、[1]~[5]のいずれか一に記載のRNA、または[6]~[10]のいずれか一に記載の複数のRNA、または[11]に記載の核酸、または[12]~[17]のいずれか一に記載の複数の核酸、または[18]もしくは[20]~[27]のいずれか一に記載のddRNAiコンストラクト、または[19]に記載の複数のddRNAiコンストラクト、または[28]もしくは[30]~[32]のいずれか一に記載の発現ベクター、または[29]~[32]のいずれか一に記載の複数の発現ベクター、または[33]もしくは[34]に記載の組成物を投与することを含んでいる、前記方法。
[36] 前記対象は、急性HBV感染に苦しんでいる、[35]に記載の方法。
[37] 前記対象は、慢性HBV感染に苦しんでいる、[35]に記載の方法
[38] B型肝炎ウイルス(HBV)に感染している対象のB型肝炎ウイルス負荷を低下させる方法であって、前記対象に、治療有効量の、[1]~[5]のいずれか一に記載のRNA、または[6]~[10]のいずれか一に記載の複数のRNA、または[11]に記載の核酸、または[12]~[17]のいずれか一に記載の複数の核酸、または[18]もしくは[20]~[27]のいずれか一に記載のddRNAiコンストラクト、または[19]に記載の複数のddRNAiコンストラクト、または[28]もしくは[30]~[32]のいずれか一に記載の発現ベクター、または[29]~[32]のいずれか一に記載の複数の発現ベクター、または[33]もしくは[34]に記載の組成物を投与することを含んでいる、前記方法。
[39] B型肝炎ウイルス(HBV)感染に苦しむ対象のHBV関連の症状の重症度を軽減する方法であって、前記対象に、治療有効量の、[1]~[5]のいずれか一に記載のRNA、または[6]~[10]のいずれか一に記載の複数のRNA、または[11]に記載の核酸、または[12]~[17]のいずれか一に記載の複数の核酸、または[18]もしくは[20]~[27]のいずれか一に記載のddRNAiコンストラクト、または[19]に記載の複数のddRNAiコンストラクト、または[28]もしくは[30]~[32]のいずれか一に記載の発現ベクター、または[29]~[32]のいずれか一に記載の複数の発現ベクター、または[33]もしくは[34]に記載の組成物を投与することを含んでいる、前記方法。
[40] B型肝炎ウイルス(HBV)に感染した対象の感染力を低下させる方法であって、前記対象に、治療有効量の、[1]~[5]のいずれか一に記載のRNA、または[6]~[10]のいずれか一に記載の複数のRNA、または[11]に記載の核酸、または[12]~[17]のいずれか一に記載の複数の核酸、または[18]もしくは[20]~[27]のいずれか一に記載のddRNAiコンストラクト、または[19]に記載の複数のddRNAiコンストラクト、または[28]もしくは[30]~[32]のいずれか一に記載の発現ベクター、または[29]~[32]のいずれか一に記載の複数の発現ベクター、または[33]もしくは[34]に記載の組成物を投与することを含んでいる、前記方法。
[41] 1種以上のHBV遺伝子の発現を阻害することを含んでいる、[35]~[40]のいずれか一に記載の方法。
Claims (24)
- 複数の核酸を含むDNA指向性RNA干渉(ddRNAi)コンストラクトであって、(a)配列番号4に示す配列によってコードされるRNA転写物に相補的であるか、または1、2、3もしくは4塩基のミスマッチを除いて配列番号4に示す配列によってコードされるRNA転写物に相補的である少なくとも17ヌクレオチド長のエフェクター配列を含む低分子ヘアピン型RNA(shRNA)をコードするDNA配列を含む第1の核酸;
(b)配列番号9に示す配列によってコードされるRNA転写物に相補的であるか、または1、2、3もしくは4塩基のミスマッチを除いて配列番号9に示す配列によってコードされるRNA転写物に相補的である少なくとも17ヌクレオチド長のエフェクター配列を含むshRNAをコードするDNA配列を含む第2の核酸;及び
(c)配列番号58に示す配列によってコードされるRNA転写物に相補的であるか、または1、2、3もしくは4塩基のミスマッチを除いて配列番号58に示す配列によってコードされるRNA転写物に相補的である少なくとも17ヌクレオチド長のエフェクター配列を含むshRNAをコードするDNA配列を含む第3の核酸
を含む、
前記DNA指向性RNA干渉(ddRNAi)コンストラクト。 - 第1の核酸が、配列番号28に示す配列に相補的であるか、または1、2、3もしくは4塩基のミスマッチを除いて配列番号28に示す配列に相補的であるエフェクター配列であって、ただし配列番号28に示す配列とデュプレックスを形成できるエフェクター配列を含むshRNAをコードするDNA配列を含む、請求項1に記載のddRNAiコンストラクト。
- 第1の核酸が、配列番号28に示す配列に相補的であるエフェクター配列を含むshRNAをコードするDNA配列を含む、請求項1に記載のddRNAiコンストラクト。
- 第1の核酸が、配列番号27に示すエフェクター配列を含むshRNAをコードするDNA配列を含む、請求項1~3のいずれか1項に記載のddRNAiコンストラクト。
- 第1の核酸が、配列番号27に示すエフェクター配列、及び配列番号28に示すエフェクター相補配列を含むshRNAをコードするDNA配列を含む、請求項1~4のいずれか1項に記載のddRNAiコンストラクト。
- 第2の核酸が、配列番号48に示す配列に相補的であるか、または1、2、3もしくは4塩基のミスマッチを除いて配列番号48に示す配列に相補的であるエフェクター配列であって、ただし配列番号48に示す配列とデュプレックスを形成できるエフェクター配列を含むshRNAをコードするDNA配列を含む、請求項1~5のいずれか1項に記載のddRNAiコンストラクト。
- 第2の核酸が、配列番号48に示す配列に相補的であるエフェクター配列を含むshRNAをコードするDNA配列を含む、請求項1~5のいずれか1項に記載のddRNAiコンストラクト。
- 第2の核酸が、配列番号47に示すエフェクター配列、及び配列番号48に示すエフェクター相補配列を含むshRNAをコードするDNA配列を含む、請求項1~7のいずれか1項に記載のddRNAiコンストラクト。
- 第3の核酸が、配列番号58に示す配列に相補的であるエフェクター配列を含むshRNAをコードするDNA配列を含む、請求項1~8のいずれか1項に記載のddRNAiコンストラクト。
- 第3の核酸が、配列番号57に示すエフェクター配列、及び配列番号58に示すエフェクター相補配列を含むshRNAをコードするDNA配列を含む、請求項1~9のいずれか1項に記載のddRNAiコンストラクト。
- (a)配列番号27に示すエフェクター配列、及び配列番号28に示すエフェクター相補配列を含むshRNAをコードするDNA配列を含む、第1の核酸;
(b)配列番号47に示すエフェクター配列、及び配列番号48に示すエフェクター相補配列を含むshRNAをコードするDNA配列を含む、第2の核酸;及び
(c)配列番号57に示すエフェクター配列、及び配列番号58に示すエフェクター相補配列を含むshRNAをコードするDNA配列を含む、第3の核酸
を含む、請求項1~10のいずれか1項に記載のddRNAiコンストラクト。 - (a)配列番号78に示す配列を含むかまたはそれからなるshRNAをコードする第1の核酸;
(b)配列番号92に示す配列を含むかまたはそれからなるshRNAをコードする第2の核酸;及び
(c)配列番号101に示す配列を含むかまたはそれからなるshRNAをコードする第3の核酸
を含む、請求項11に記載のddRNAiコンストラクト。 - shRNAをコードする各核酸の上流にRNA pol IIIプロモーターを含んでいる、請求項1~請求項12のいずれか1項に記載のddRNAiコンストラクト。
- 前記または各RNA pol IIIプロモーターは、U6プロモーター及びH1プロモーターから選択される、請求項13に記載のddRNAiコンストラクト。
- 請求項1~請求項14のいずれか1項に記載されるddRNAiコンストラクトを含んでいる、発現ベクター。
- (i)前記発現ベクターは、プラスミドまたは小環であり、または
(ii)前記発現ベクターは、アデノ随伴ウイルス(AAV)ベクター、レトロウイルスベクター、アデノウイルス(AdV)ベクター及びレンチウイルス(LV)ベクターからなる群より選択されるウイルスベクターであり、
任意選択で、前記発現ベクターは、カチオン性DNA結合ポリマーと複合体をなしている、
請求項15に記載の発現ベクター。 - (i)請求項1~14のいずれか1項に記載のDNA指向性RNA干渉(ddRNAi)コンストラクト、または請求項15もしくは16に記載の発現ベクター、ならびに(ii)1種以上の製薬上許容される担体を含む、医薬組成物。
- 対象のB型肝炎ウイルス(HBV)感染を治療する方法に使用するための医薬組成物であって、(i)請求項1~14のいずれか1項に記載のDNA指向性RNA干渉(ddRNAi)コンストラクト、または請求項15もしくは16に記載の発現ベクター、ならびに(ii)1種以上の製薬上許容される担体を含む、医薬組成物。
- B型肝炎ウイルス(HBV)感染を患う対象において1種以上のHBV遺伝子の発現を低下させる方法に使用するための医薬組成物であって、(i)請求項1~14のいずれか1項に記載のDNA指向性RNA干渉(ddRNAi)コンストラクト、または請求項15もしくは16に記載の発現ベクター、ならびに(ii)1種以上の製薬上許容される担体を含む、医薬組成物。
- B型肝炎ウイルス(HBV)感染を患う対象のHBVウイルス負荷を低下させる方法に使用するための医薬組成物であって、(i)請求項1~14のいずれか1項に記載のDNA指向性RNA干渉(ddRNAi)コンストラクト、または請求項15もしくは16に記載の発現ベクター、ならびに(ii)1種以上の製薬上許容される担体を含む、医薬組成物。
- B型肝炎ウイルス(HBV)感染を患う対象のHBV感染に関連する1つ以上の症状の重症度を軽減する方法に使用するための医薬組成物であって、(i)請求項1~14のいずれか1項に記載のDNA指向性RNA干渉(ddRNAi)コンストラクト、または請求項15もしくは16に記載の発現ベクター、ならびに(ii)1種以上の製薬上許容される担体を含む、医薬組成物。
- B型肝炎ウイルス(HBV)感染を患う対象のHBVの感染力を低下させる方法に使用するための医薬組成物であって、(i)請求項1~14のいずれか1項に記載のDNA指向性RNA干渉(ddRNAi)コンストラクト、または請求項15もしくは16に記載の発現ベクター、ならびに(ii)1種以上の製薬上許容される担体を含む、医薬組成物。
- 前記対象は、急性HBV感染を患っている、請求項18~22のいずれか1項に記載の医薬組成物。
- 前記対象は、慢性HBV感染を患っている、請求項18~22のいずれか1項に記載の医薬組成物。
Applications Claiming Priority (5)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
AU2015901617A AU2015901617A0 (en) | 2015-05-06 | Reagents for treatment of hepatitis B virus (HBV) infection and use thereof | |
AU2015901617 | 2015-05-06 | ||
US201662319971P | 2016-04-08 | 2016-04-08 | |
US62/319,971 | 2016-04-08 | ||
PCT/AU2016/050340 WO2016176745A1 (en) | 2015-05-06 | 2016-05-06 | Reagents for treatment of hepatitis b virus (hbv) infection and use thereof |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2018515136A JP2018515136A (ja) | 2018-06-14 |
JP7191690B2 true JP7191690B2 (ja) | 2022-12-19 |
Family
ID=57217350
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2018509947A Active JP7191690B2 (ja) | 2015-05-06 | 2016-05-06 | B型肝炎ウイルス(hbv)感染を治療するための試薬及びその使用 |
Country Status (11)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US10898505B2 (ja) |
EP (1) | EP3292202A4 (ja) |
JP (1) | JP7191690B2 (ja) |
KR (1) | KR20170141257A (ja) |
CN (1) | CN107683336A (ja) |
AU (2) | AU2016257150B2 (ja) |
CA (1) | CA2984512A1 (ja) |
HK (1) | HK1251010A1 (ja) |
IL (1) | IL255366B (ja) |
SG (1) | SG11201708679YA (ja) |
WO (1) | WO2016176745A1 (ja) |
Families Citing this family (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2019514401A (ja) | 2016-05-05 | 2019-06-06 | ベニテック バイオファーマ リミテッド | B型肝炎ウイルス(hbv)感染を治療するための試薬およびその使用 |
EP3538654A1 (en) * | 2016-11-11 | 2019-09-18 | Janssen BioPharma, Inc. | Oligonucleotide targeting strategy for hbv cccdna |
EP3873488A4 (en) * | 2018-10-31 | 2022-08-03 | The University of Sydney | COMPOSITIONS AND METHODS FOR THE TREATMENT OF VIRUS INFECTION |
CN110592289A (zh) * | 2019-10-31 | 2019-12-20 | 苏州健雄职业技术学院 | 一种高灵敏度hbv dna数字pcr定量检测试剂盒及其应用 |
CN112280896A (zh) * | 2020-09-30 | 2021-01-29 | 浙江大学 | 一种基于微滴式数字pcr技术的乙型肝炎病毒t216c突变检测方法 |
WO2023122805A1 (en) | 2021-12-20 | 2023-06-29 | Vestaron Corporation | Sorbitol driven selection pressure method |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2012055362A1 (en) | 2010-10-28 | 2012-05-03 | Benitec Biopharma Limited | Hbv treatment |
WO2012109798A1 (en) | 2011-02-18 | 2012-08-23 | Benitec Biopharma Limited | Hbv treatment |
JP2013507933A (ja) | 2009-10-16 | 2013-03-07 | グラクソ グループ リミテッド | Hbvアンチセンス阻害剤 |
WO2013159109A1 (en) | 2012-04-20 | 2013-10-24 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Modulation of hepatitis b virus (hbv) expression |
Family Cites Families (48)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5677437A (en) | 1990-07-27 | 1997-10-14 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Heteroatomic oligonucleoside linkages |
AU667459B2 (en) | 1990-08-03 | 1996-03-28 | Sanofi | Compounds and methods for inhibiting gene expression |
US7015315B1 (en) | 1991-12-24 | 2006-03-21 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Gapped oligonucleotides |
US5539082A (en) | 1993-04-26 | 1996-07-23 | Nielsen; Peter E. | Peptide nucleic acids |
US5714331A (en) | 1991-05-24 | 1998-02-03 | Buchardt, Deceased; Ole | Peptide nucleic acids having enhanced binding affinity, sequence specificity and solubility |
US5719262A (en) | 1993-11-22 | 1998-02-17 | Buchardt, Deceased; Ole | Peptide nucleic acids having amino acid side chains |
US5633360A (en) | 1992-04-14 | 1997-05-27 | Gilead Sciences, Inc. | Oligonucleotide analogs capable of passive cell membrane permeation |
CA2135646A1 (en) | 1992-05-11 | 1993-11-25 | Kenneth G. Draper | Method and reagent for inhibiting viral replication |
US5977343A (en) | 1992-05-14 | 1999-11-02 | Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. | Synthesis, deprotection, analysis and purification of RNA and ribozymes |
US20030206887A1 (en) * | 1992-05-14 | 2003-11-06 | David Morrissey | RNA interference mediated inhibition of hepatitis B virus (HBV) using short interfering nucleic acid (siNA) |
WO1994022891A1 (en) | 1993-03-31 | 1994-10-13 | Sterling Winthrop Inc. | Oligonucleotides with amide linkages replacing phosphodiester linkages |
US5820873A (en) | 1994-09-30 | 1998-10-13 | The University Of British Columbia | Polyethylene glycol modified ceramide lipids and liposome uses thereof |
US5753613A (en) | 1994-09-30 | 1998-05-19 | Inex Pharmaceuticals Corporation | Compositions for the introduction of polyanionic materials into cells |
US5885613A (en) | 1994-09-30 | 1999-03-23 | The University Of British Columbia | Bilayer stabilizing components and their use in forming programmable fusogenic liposomes |
US6001311A (en) | 1997-02-05 | 1999-12-14 | Protogene Laboratories, Inc. | Apparatus for diverse chemical synthesis using two-dimensional array |
US6054576A (en) | 1997-10-02 | 2000-04-25 | Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. | Deprotection of RNA |
DE69941447D1 (de) | 1998-01-05 | 2009-11-05 | Univ Washington | Erhöhter transport unter benutzung membranzerstörender stoffe |
US7273933B1 (en) | 1998-02-26 | 2007-09-25 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Methods for synthesis of oligonucleotides |
AU3751299A (en) | 1998-04-20 | 1999-11-08 | Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. | Nucleic acid molecules with novel chemical compositions capable of modulating gene expression |
US6867294B1 (en) | 1998-07-14 | 2005-03-15 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Gapped oligomers having site specific chiral phosphorothioate internucleoside linkages |
US6995259B1 (en) | 1998-10-23 | 2006-02-07 | Sirna Therapeutics, Inc. | Method for the chemical synthesis of oligonucleotides |
US6465628B1 (en) | 1999-02-04 | 2002-10-15 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Process for the synthesis of oligomeric compounds |
AU2001227965A1 (en) | 2000-01-21 | 2001-07-31 | Geron Corporation | 2'-arabino-fluorooligonucleotide n3'-p5'phosphoramidates: their synthesis and use |
EP1313752B1 (en) | 2000-09-01 | 2011-04-20 | Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. | Methods for synthesizing nucleoside derivatives |
US20020130430A1 (en) | 2000-12-29 | 2002-09-19 | Castor Trevor Percival | Methods for making polymer microspheres/nanospheres and encapsulating therapeutic proteins and other products |
US20030077829A1 (en) | 2001-04-30 | 2003-04-24 | Protiva Biotherapeutics Inc.. | Lipid-based formulations |
US7060498B1 (en) | 2001-11-28 | 2006-06-13 | Genta Salus Llc | Polycationic water soluble copolymer and method for transferring polyanionic macromolecules across biological barriers |
US6989442B2 (en) | 2002-07-12 | 2006-01-24 | Sirna Therapeutics, Inc. | Deprotection and purification of oligonucleotides and their derivatives |
RU2005106999A (ru) | 2002-08-29 | 2005-08-27 | Дзе Борд Оф Трастиз Оф Дзе Лелэнд Стэнфорд Джуниор Юниверсити (Us) | Кольцевые векторы нуклеиновой кислоты и способы их создания и использования |
US7816337B2 (en) | 2003-02-18 | 2010-10-19 | Roche Madison Inc. | Reversible attachment of a membrane active polymer to a polynucleotide |
US8575327B2 (en) * | 2003-06-12 | 2013-11-05 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Conserved HBV and HCV sequences useful for gene silencing |
US8350021B2 (en) * | 2003-06-12 | 2013-01-08 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Conserved HBV and HCV sequences useful for gene silencing |
CN1322898C (zh) * | 2003-06-17 | 2007-06-27 | 杭州新瑞佳生物医药技术开发有限公司 | 攻击人类乙型肝炎病毒的小干扰RNA分子(SiRNA)及其应用 |
WO2006069064A2 (en) * | 2004-12-22 | 2006-06-29 | Nucleonics, Inc. | Conserved hbv and hcv sequences useful for gene silencing |
JP5042863B2 (ja) | 2005-02-14 | 2012-10-03 | サーナ・セラピューティクス・インコーポレイテッド | 生物学的に活性な分子をデリバリーするための脂質ナノ粒子系組成物および方法 |
US8008468B2 (en) | 2005-02-16 | 2011-08-30 | Benitec, Inc. | RNAi expression constructs with liver-specific enhancer/promoter |
US8129510B2 (en) | 2006-03-30 | 2012-03-06 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Minigene expression cassette |
AU2007285782B2 (en) | 2006-08-18 | 2010-06-24 | Arrowhead Research Corporation | Polyconjugates for in vivo delivery of polynucleotides |
CN101322847A (zh) * | 2008-06-23 | 2008-12-17 | 淮安市第四人民医院 | 基于siRNA池干扰的复合载体介导的抗乙肝病毒基因药物 |
EP2326331A4 (en) | 2008-08-18 | 2013-05-15 | Merck Sharp & Dohme | NOVEL LIPID NANOPARTICLES AND NEW COMPONENTS FOR NUCLEIC ACID ADMINISTRATION |
CA2984026C (en) | 2008-10-09 | 2020-02-11 | Arbutus Biopharma Corporation | Improved amino lipids and methods for the delivery of nucleic acids |
WO2010080724A1 (en) | 2009-01-12 | 2010-07-15 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Novel lipid nanoparticles and novel components for delivery of nucleic acids |
WO2010105209A1 (en) | 2009-03-12 | 2010-09-16 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | LIPID FORMULATED COMPOSITIONS AND METHODS FOR INHIBITING EXPRESSION OF Eg5 AND VEGF GENES |
WO2011005861A1 (en) | 2009-07-07 | 2011-01-13 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Oligonucleotide end caps |
EP3072881A1 (en) | 2009-08-20 | 2016-09-28 | Sirna Therapeutics, Inc. | Novel cationic lipids with various head groups for oligonucleotide delivery |
CA2807307C (en) * | 2010-08-17 | 2021-02-09 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Rna interference mediated inhibition of hepatitis b virus (hbv) gene expression using short interfering nucleic acid (sina) |
US8809293B2 (en) * | 2011-06-30 | 2014-08-19 | Arrowhead Madison Inc. | Compositions and methods for inhibiting gene expression of hepatitis B virus |
CN103014045B (zh) * | 2012-12-30 | 2014-09-17 | 中国人民解放军第三军医大学 | 表达特异性HBV shRNA的重组HBV载体及其构建方法和应用 |
-
2016
- 2016-05-06 KR KR1020177035149A patent/KR20170141257A/ko unknown
- 2016-05-06 SG SG11201708679YA patent/SG11201708679YA/en unknown
- 2016-05-06 CA CA2984512A patent/CA2984512A1/en active Pending
- 2016-05-06 WO PCT/AU2016/050340 patent/WO2016176745A1/en active Application Filing
- 2016-05-06 US US15/572,143 patent/US10898505B2/en active Active
- 2016-05-06 JP JP2018509947A patent/JP7191690B2/ja active Active
- 2016-05-06 AU AU2016257150A patent/AU2016257150B2/en not_active Ceased
- 2016-05-06 CN CN201680036346.4A patent/CN107683336A/zh active Pending
- 2016-05-06 EP EP16788971.6A patent/EP3292202A4/en not_active Withdrawn
-
2017
- 2017-10-31 IL IL255366A patent/IL255366B/en unknown
-
2018
- 2018-08-13 HK HK18110340.6A patent/HK1251010A1/zh unknown
-
2020
- 2020-12-16 US US17/124,066 patent/US20210177885A1/en not_active Abandoned
-
2022
- 2022-05-30 AU AU2022203678A patent/AU2022203678A1/en not_active Abandoned
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2013507933A (ja) | 2009-10-16 | 2013-03-07 | グラクソ グループ リミテッド | Hbvアンチセンス阻害剤 |
WO2012055362A1 (en) | 2010-10-28 | 2012-05-03 | Benitec Biopharma Limited | Hbv treatment |
WO2012109798A1 (en) | 2011-02-18 | 2012-08-23 | Benitec Biopharma Limited | Hbv treatment |
WO2013159109A1 (en) | 2012-04-20 | 2013-10-24 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Modulation of hepatitis b virus (hbv) expression |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
IL255366A0 (en) | 2017-12-31 |
SG11201708679YA (en) | 2017-11-29 |
CA2984512A1 (en) | 2016-11-10 |
US10898505B2 (en) | 2021-01-26 |
IL255366B (en) | 2021-10-31 |
CN107683336A (zh) | 2018-02-09 |
US20190022124A1 (en) | 2019-01-24 |
HK1251010A1 (zh) | 2019-01-18 |
AU2016257150B2 (en) | 2022-03-31 |
US20210177885A1 (en) | 2021-06-17 |
AU2022203678A1 (en) | 2022-06-16 |
EP3292202A1 (en) | 2018-03-14 |
KR20170141257A (ko) | 2017-12-22 |
AU2016257150A1 (en) | 2017-11-09 |
JP2018515136A (ja) | 2018-06-14 |
WO2016176745A1 (en) | 2016-11-10 |
EP3292202A4 (en) | 2019-04-10 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP7191690B2 (ja) | B型肝炎ウイルス(hbv)感染を治療するための試薬及びその使用 | |
US10093923B2 (en) | Modulation of HSP47 expression | |
CA2558771C (en) | Multiple promoter expression cassettes for simultaneous delivery of rnai agents | |
US20190300882A1 (en) | Methods of treating neuroblastoma and reagents therefor | |
JP7431359B2 (ja) | 眼咽頭型筋ジストロフィー(opmd)を治療するための試薬及びその使用 | |
JP7236195B2 (ja) | 眼咽頭筋ジストロフィー(opmd)の処置のための試薬およびその使用 | |
US20230093951A1 (en) | Reagents for treatment of hepatitis b virus (hbv) infection and use thereof | |
JP2008541754A (ja) | Hcv特異的な低分子干渉rnaおよびそれを含むc型肝炎の治療剤 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
RD01 | Notification of change of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7426 Effective date: 20180622 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20180622 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20190507 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20200728 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20201026 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20210406 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20210806 |
|
C60 | Trial request (containing other claim documents, opposition documents) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: C60 Effective date: 20210806 |
|
A911 | Transfer to examiner for re-examination before appeal (zenchi) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911 Effective date: 20210818 |
|
C21 | Notice of transfer of a case for reconsideration by examiners before appeal proceedings |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: C21 Effective date: 20210824 |
|
A912 | Re-examination (zenchi) completed and case transferred to appeal board |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A912 Effective date: 20211029 |
|
C211 | Notice of termination of reconsideration by examiners before appeal proceedings |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: C211 Effective date: 20211102 |
|
C22 | Notice of designation (change) of administrative judge |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: C22 Effective date: 20220628 |
|
C23 | Notice of termination of proceedings |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: C23 Effective date: 20221018 |
|
C03 | Trial/appeal decision taken |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: C03 Effective date: 20221122 |
|
C30A | Notification sent |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: C3012 Effective date: 20221122 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20221207 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 7191690 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |