JP2019514401A - B型肝炎ウイルス(hbv)感染を治療するための試薬およびその使用 - Google Patents
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Abstract
Description
本願は、2016年5月5日に出願の米国仮出願第62/332,245号の優先権を主張し、その内容全体を参照として本明細書に援用する。
少なくとも17ヌクレオチド長のエフェクター配列;
エフェクター相補配列;
ステムループ配列;および
プライマリーマイクロRNA(pri−miRNA)主鎖
を含み、エフェクター配列は、配列番号1〜10、38、40、42、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、および133のいずれかに示すRNA転写物に実質的に相補的である。好ましくは、エフェクター配列は30ヌクレオチド長よりも短い。たとえば、好適なエフェクター配列は17〜29ヌクレオチド長の範囲であってもよい。好ましくは、エフェクター配列は20ヌクレオチド長である。より好ましくは、エフェクター配列は21ヌクレオチド長であり、かつエフェクター相補配列は20ヌクレオチド長である。
(i)配列番号12に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号12に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で1、2、3、4、5、または6塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列;および(ii)該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるshmiR;
(i)配列番号14に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号14に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で1、2、3、4、5、または6塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列;および(ii)該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるshmiR;
(i)配列番号16に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号16に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で1、2、3、4、5または6塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列;および(ii)該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるshmiR;
(i)配列番号18に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号18に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で1、2、3、4、5、または6塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列;および(ii)該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるshmiR;
(i)配列番号20に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号20に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で1、2、3、4、5、または6塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列;および(ii)該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるshmiR;
(i)配列番号22に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号22に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で1、2、3、4、5、または6塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列;および(ii)該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるshmiR;
(i)配列番号24に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号24に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で1、2、3、4、5、または6塩基のミスマッチを有するエフェクター配列;および(ii)該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるshmiR;
(i)配列番号26に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号26に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で1、2、3、4、5、または6塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列;および(ii)該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるshmiR;
(i)配列番号28に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号28に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で1、2、3、4、5、または6塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列;および(ii)該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるshmiR;
(i)配列番号30に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号30に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で1、2、3、4、5、または6塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列;および(ii)該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるshmiR;
(i)配列番号32に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号32に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で1、2、3、4、5、または6塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列;および(ii)該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるshmiR;
(i)配列番号34に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号34に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で1、2、3、4、5、または6塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列;および(ii)該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるshmiR;
(i)配列番号36に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号36に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で1、2、3、4、5、または6塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列;および(ii)該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるshmiR;
(i)配列番号38に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号38に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で1、2、3、4、5、または6塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列;および(ii)該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるshmiR;
(i)配列番号40に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号40に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で1、2、3、4、5、または6塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列;および(ii)該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるshmiR;
(i)配列番号42に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号42に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で1、2、3、4、5、または6塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列;および(ii)該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるshmiR;
(i)配列番号111に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号111に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で1、2、3、4、5、または6塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列;および(ii)該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるshmiR;
(i)配列番号113に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号113に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で1、2、3、4、5、または6塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列;および(ii)該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるshmiR;
(i)配列番号115に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号115に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で1、2、3、4、5、または6塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列;および(ii)該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるshmiR;
(i)配列番号117に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号117に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で1、2、3、4、5、または6塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列;および(ii)該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるshmiR;
(i)配列番号119に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号119に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で1、2、3、4、5、または6塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列;および(ii)該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるshmiR;
(i)配列番号121に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号121に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で1、2、3、4、5、または6塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列;および(ii)該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるshmiR;
(i)配列番号123に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号123に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で1、2、3、4、5、または6塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列;および(ii)該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるshmiR;
(i)配列番号125に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号125に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で1、2、3、4、5、または6塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列;および(ii)該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるshmiR;
(i)配列番号127に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号127に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で1、2、3、4、5、または6塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列;および(ii)該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるshmiR;
(i)配列番号129に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号129に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で1、2、3、4、5、または6塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列;および(ii)該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるshmiR;
(i)配列番号131に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号131に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で1、2、3、4、5、または6塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列;および(ii)該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるshmiR;および
(i)配列番号133に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号133に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で1、2、3、4、5、または6塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列;および(ii)該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるshmiR。
配列番号11に示すエフェクター配列、および配列番号11に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列、を含んでいるshmiR;
配列番号13に示すエフェクター配列、および配列番号13に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列、を含んでいるshmiR;
配列番号15に示すエフェクター配列、および配列番号15に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列、を含んでいるshmiR;
配列番号17に示すエフェクター配列、および配列番号17に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列、を含んでいるshmiR;
配列番号19に示すエフェクター配列、および配列番号19に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列、を含んでいるshmiR;
配列番号21に示すエフェクター配列、および配列番号21に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列、を含んでいるshmiR;
配列番号23に示すエフェクター配列、および配列番号23に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列、を含んでいるshmiR;
配列番号25に示すエフェクター配列、および配列番号25に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列、を含んでいるshmiR;
配列番号27に示すエフェクター配列、および配列番号27に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列、を含んでいるshmiR;
配列番号29に示すエフェクター配列、および配列番号29に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列、を含んでいるshmiR;
配列番号31に示すエフェクター配列、および配列番号31に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列、を含んでいるshmiR;
配列番号33に示すエフェクター配列、および配列番号33に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列、を含んでいるshmiR;
配列番号35に示すエフェクター配列、および配列番号35に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列、を含んでいるshmiR;
配列番号37に示すエフェクター配列、および配列番号37に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列、を含んでいるshmiR;
配列番号39に示すエフェクター配列、および配列番号39に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列、を含んでいるshmiR;
配列番号41に示すエフェクター配列、および配列番号41に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列、を含んでいるshmiR;
配列番号110に示すエフェクター配列、および配列番号110に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列、を含んでいるshmiR;
配列番号112に示すエフェクター配列、および配列番号112に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列、を含んでいるshmiR;
配列番号114に示すエフェクター配列、および配列番号114に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列、を含んでいるshmiR;
配列番号116に示すエフェクター配列、および配列番号116に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列、を含んでいるshmiR;
配列番号118に示すエフェクター配列、および配列番号118に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列、を含んでいるshmiR;
配列番号120に示すエフェクター配列、および配列番号120に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列、を含んでいるshmiR;
配列番号122に示すエフェクター配列、および配列番号122に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列、を含んでいるshmiR;
配列番号124に示すエフェクター配列、および配列番号124に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列、を含んでいるshmiR;
配列番号126に示すエフェクター配列、および配列番号126に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列、を含んでいるshmiR;
配列番号128に示すエフェクター配列、および配列番号128に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列、を含んでいるshmiR;
配列番号130に示すエフェクター配列、および配列番号130に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列、を含んでいるshmiR;および
配列番号132に示すエフェクター配列、および配列番号132に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列、を含んでいるshmiR。
配列番号11に示すエフェクター配列、および配列番号12に示すエフェクター相補配列を含んでいるshmiR;
配列番号13に示すエフェクター配列、および配列番号14に示すエフェクター相補配列を含んでいるshmiR;
配列番号15に示すエフェクター配列、および配列番号16に示すエフェクター相補配列を含んでいるshmiR;
配列番号17に示すエフェクター配列、および配列番号18に示すエフェクター相補配列を含んでいるshmiR;
配列番号19に示すエフェクター配列、および配列番号20に示すエフェクター相補配列を含んでいるshmiR;
配列番号21に示すエフェクター配列、および配列番号22に示すエフェクター相補配列を含んでいるshmiR;
配列番号23に示すエフェクター配列、および配列番号24に示すエフェクター相補配列を含んでいるshmiR;
配列番号25に示すエフェクター配列、および配列番号26に示すエフェクター相補配列を含んでいるshmiR;
配列番号27に示すエフェクター配列、および配列番号28に示すエフェクター相補配列を含んでいるshmiR;
配列番号29に示すエフェクター配列、および配列番号30に示すエフェクター相補配列を含んでいるshmiR;
配列番号31に示すエフェクター配列、および配列番号32に示すエフェクター相補配列を含んでいるshmiR;
配列番号33に示すエフェクター配列、および配列番号34に示すエフェクター相補配列を含んでいるshmiR;
配列番号35に示すエフェクター配列、および配列番号36に示すエフェクター相補配列を含んでいるshmiR;
配列番号37に示すエフェクター配列、および配列番号38に示すエフェクター相補配列を含んでいるshmiR;
配列番号39に示すエフェクター配列、および配列番号40に示すエフェクター相補配列を含んでいるshmiR;および
配列番号41に示すエフェクター配列、および配列番号42に示すエフェクター相補配列を含んでいるshmiR;
配列番号110に示すエフェクター配列、および配列番号111に示すエフェクター相補配列を含んでいるshmiR;
配列番号112に示すエフェクター配列、および配列番号113に示すエフェクター相補配列を含んでいるshmiR;
配列番号114に示すエフェクター配列、および配列番号115に示すエフェクター相補配列を含んでいるshmiR;
配列番号116に示すエフェクター配列、および配列番号117に示すエフェクター相補配列を含んでいるshmiR;
配列番号118に示すエフェクター配列、および配列番号119に示すエフェクター相補配列を含んでいるshmiR;
配列番号120に示すエフェクター配列、および配列番号121に示すエフェクター相補配列を含んでいるshmiR;
配列番号122に示すエフェクター配列、および配列番号123に示すエフェクター相補配列を含んでいるshmiR;
配列番号124に示すエフェクター配列、および配列番号125に示すエフェクター相補配列を含んでいるshmiR;
配列番号126に示すエフェクター配列、および配列番号127に示すエフェクター相補配列を含んでいるshmiR;
配列番号128に示すエフェクター配列、および配列番号129に示すエフェクター相補配列を含んでいるshmiR;
配列番号130に示すエフェクター配列、および配列番号131に示すエフェクター相補配列を含んでいるshmiR;および
配列番号132に示すエフェクター配列、および配列番号133に示すエフェクター相補配列を含んでいるshmiR。
pri−miRNA主鎖の5’隣接配列;
エフェクター相補配列;
ステムループ配列;
エフェクター配列;および
pri−miRNA主鎖の3’隣接配列
を含むことができる。
(a)本明細書に記載する少なくとも1つの核酸;および
(b)
(i)本明細書に記載する核酸による核酸;または
(ii)少なくとも17ヌクレオチド長のエフェクター配列およびエフェクター相補配列を含み、該エフェクター配列は配列番号1〜10、38、40、42、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、および133のいずれかに示すRNA配列に実質的に相補的である、ショートヘアピン型RNA(shRNA)をコードするDNA配列を含む核酸
から選択される少なくとも1つのさらなる核酸
を含む、複数の核酸が提供され、
(a)の核酸によってコードされるshmiRと(b)の核酸によってコードされるshmiRまたはshRNAは異なるエフェクター配列を含んでいる。
(i)配列番号12に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号12に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で1、2、3、4、5、または6塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列;および(ii)該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるshRNA;
(i)配列番号14に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号14に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で1、2、3、4、5、または6塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列;および(ii)該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるshRNA;
(i)配列番号16に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号16に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で1、2、3、4、5、または6塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列;および(ii)該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるshRNA;
(i)配列番号18に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号18に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で1、2、3、4、5、または6塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列;および(ii)該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるshRNA;
(i)配列番号20に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号20に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で1、2、3、4、5、または6塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列;および(ii)該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるshRNA;
(i)配列番号22に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号22に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で1、2、3、4、5、または6塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列;および(ii)該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるshRNA;
(i)配列番号24に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号24に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で1、2、3、4、5、または6塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列;および(ii)該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるshRNA;
(i)配列番号26に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号26に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で1、2、3、4、5、または6塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列;および(ii)該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるshRNA;
(i)配列番号28に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号28に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で1、2、3、4、5、または6塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列;および(ii)該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるshRNA;
(i)配列番号30に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号30に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で1、2、3、4、5、または6塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列;および(ii)該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるshRNA;
(i)配列番号32に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号32に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で1、2、3、4、5、または6塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列;および(ii)該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるshRNA;
(i)配列番号34に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号34に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で1、2、3、4、5、または6塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列;および(ii)該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるshRNA;
(i)配列番号36に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号36に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で1、2、3、4、5、または6塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列;および(ii)該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるshRNA;
(i)配列番号38に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号38に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で1、2、3、4、5、または6塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列;および(ii)該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるshRNA;
(i)配列番号40に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号40に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で1、2、3、4、5、または6塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列;および(ii)該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるshRNA;
(i)配列番号42に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号42に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で1、2、3、4、5、または6塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列;および(ii)該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるshRNA;
(i)配列番号111に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号111に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で1、2、3、4、5、または6塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列;および(ii)該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるshRNA;
(i)配列番号113に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号113に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で1、2、3、4、5、または6塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列;および(ii)該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるshRNA;
(i)配列番号115に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号115に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で1、2、3、4、5、または6塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列;および(ii)該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるshRNA;
(i)配列番号117に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号117に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で1、2、3、4、5、または6塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列;および(ii)該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるshRNA;
(i)配列番号119に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号119に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で1、2、3、4、5、または6塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列;および(ii)該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるshRNA;
(i)配列番号121に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号121に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で1、2、3、4、5、または6塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列;および(ii)該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるshRNA;
(i)配列番号123に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号123に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で1、2、3、4、5、または6塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列;および(ii)該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるshRNA;
(i)配列番号125に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号125に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で1、2、3、4、5、または6塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列;および(ii)該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるshRNA;
(i)配列番号127に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号127に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で1、2、3、4、5、または6塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列;および(ii)該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるshRNA;
(i)配列番号129に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号129に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で1、2、3、4、5、または6塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列;および(ii)該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるshRNA;
(i)配列番号131に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号131に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で1、2、3、4、5、または6塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列;および(ii)該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるshRNA;および
(i)配列番号133に示す配列に実質的に相補的なエフェクター配列であって、ただし配列番号133に示す配列とデュプレックスを形成できるという条件で1、2、3、4、5、または6塩基のミスマッチを有する、エフェクター配列、および(ii)該エフェクター配列に実質的に相補的な配列を含むエフェクター相補配列、を含んでいるshRNA。
配列番号11に示すエフェクター配列、および配列番号11に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列を含んでいるshRNA;
配列番号13に示すエフェクター配列、および配列番号13に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列を含んでいるshRNA;
配列番号15に示すエフェクター配列、および配列番号15に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列を含んでいるshRNA;
配列番号17に示すエフェクター配列、および配列番号17に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列を含んでいるshRNA;
配列番号19に示すエフェクター配列、および配列番号19に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列を含んでいるshRNA;
配列番号21に示すエフェクター配列、および配列番号21に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列を含んでいるshRNA;
配列番号23に示すエフェクター配列、および配列番号23に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列を含んでいるshRNA;
配列番号25に示すエフェクター配列、および配列番号25に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列を含んでいるshRNA;
配列番号27に示すエフェクター配列、および配列番号27に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列を含んでいるshRNA;
配列番号29に示すエフェクター配列、および配列番号29に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列を含んでいるshRNA;
配列番号31に示すエフェクター配列、および配列番号31に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列を含んでいるshRNA;
配列番号33に示すエフェクター配列、および配列番号33に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列を含んでいるshRNA;
配列番号35に示すエフェクター配列、および配列番号35に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列を含んでいるshRNA;
配列番号37に示すエフェクター配列、および配列番号37に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列を含んでいるshRNA;
配列番号39に示すエフェクター配列、および配列番号39に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列を含んでいるshRNA;
配列番号41に示すエフェクター配列、および配列番号41に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列を含んでいるshRNA;
配列番号110に示すエフェクター配列、および配列番号110に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列を含んでいるshRNA;
配列番号112に示すエフェクター配列、および配列番号112に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列を含んでいるshRNA;
配列番号114に示すエフェクター配列、および配列番号114に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列を含んでいるshRNA;
配列番号116に示すエフェクター配列、および配列番号116に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列を含んでいるshRNA;
配列番号118に示すエフェクター配列、および配列番号118に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列を含んでいるshRNA;
配列番号120に示すエフェクター配列、および配列番号120に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列を含んでいるshRNA;
配列番号122に示すエフェクター配列、および配列番号122に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列を含んでいるshRNA;
配列番号124に示すエフェクター配列、および配列番号124に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列を含んでいるshRNA;
配列番号126に示すエフェクター配列、および配列番号126に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列を含んでいるshRNA;
配列番号128に示すエフェクター配列、および配列番号128に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列を含んでいるshRNA;
配列番号130に示すエフェクター配列、および配列番号130に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列を含んでいるshRNA;および
配列番号132に示すエフェクター配列、および配列番号132に示す該配列に実質的に相補的であり該配列とデュプレックスを形成できるエフェクター相補配列を含んでいるshRNA。
配列番号11に示すエフェクター配列、および配列番号12に示すエフェクター相補配列を含んでいるshRNA;
配列番号13に示すエフェクター配列、および配列番号14に示すエフェクター相補配列を含んでいるshRNA;
配列番号15に示すエフェクター配列、および配列番号16に示すエフェクター相補配列を含んでいるshRNA;
配列番号17に示すエフェクター配列、および配列番号18に示すエフェクター相補配列を含んでいるshRNA;
配列番号19に示すエフェクター配列、および配列番号20に示すエフェクター相補配列を含んでいるshRNA;
配列番号21に示すエフェクター配列、および配列番号22に示すエフェクター相補配列を含んでいるshRNA;
配列番号23に示すエフェクター配列、および配列番号24に示すエフェクター相補配列を含んでいるshRNA;
配列番号25に示すエフェクター配列、および配列番号26に示すエフェクター相補配列を含んでいるshRNA;
配列番号27に示すエフェクター配列、および配列番号28に示すエフェクター相補配列を含んでいるshRNA;
配列番号29に示すエフェクター配列、および配列番号30に示すエフェクター相補配列を含んでいるshRNA;
配列番号31に示すエフェクター配列、および配列番号32に示すエフェクター相補配列を含んでいるshRNA;
配列番号33に示すエフェクター配列、および配列番号34に示すエフェクター相補配列を含んでいるshRNA;
配列番号35に示すエフェクター配列、および配列番号36に示すエフェクター相補配列を含んでいるshRNA;
配列番号37に示すエフェクター配列、および配列番号38に示すエフェクター相補配列を含んでいるshRNA;
配列番号39に示すエフェクター配列、および配列番号40に示すエフェクター相補配列を含んでいるshRNA;
配列番号41に示すエフェクター配列、および配列番号42に示すエフェクター相補配列を含んでいるshRNA;
配列番号110に示すエフェクター配列、および配列番号111に示すエフェクター相補配列を含んでいるshRNA;
配列番号112に示すエフェクター配列、および配列番号113に示すエフェクター相補配列を含んでいるshRNA;
配列番号114に示すエフェクター配列、および配列番号115に示すエフェクター相補配列を含んでいるshRNA;
配列番号116に示すエフェクター配列、および配列番号117に示すエフェクター相補配列を含んでいるshRNA;
配列番号118に示すエフェクター配列、および配列番号119に示すエフェクター相補配列を含んでいるshRNA;
配列番号120に示すエフェクター配列、および配列番号121に示すエフェクター相補配列を含んでいるshRNA;
配列番号122に示すエフェクター配列、および配列番号123に示すエフェクター相補配列を含んでいるshRNA;
配列番号124に示すエフェクター配列、および配列番号125に示すエフェクター相補配列を含んでいるshRNA;
配列番号126に示すエフェクター配列、および配列番号127に示すエフェクター相補配列を含んでいるshRNA;
配列番号128に示すエフェクター配列、および配列番号129に示すエフェクター相補配列を含んでいるshRNA;
配列番号130に示すエフェクター配列、および配列番号131に示すエフェクター相補配列を含んでいるshRNA;および
配列番号132に示すエフェクター配列、および配列番号133に示すエフェクター相補配列を含んでいるshRNA。
(a)該複数のddRNAiコンストラクトのうちの少なくとも1つが、本明細書に記載する複数の核酸のうちの第1の核酸を含み;かつ
(b)該複数のddRNAiコンストラクトのうちの少なくとも1つが、本明細書に記載する複数の核酸のうちの第2の核酸を含み、
該第1の核酸と該第2の核酸は、互いに異なるshmiRをコードする。
(a)配列番号48に示す配列を含むかまたはそれからなるshmiRをコードする核酸;および
(b)配列番号54に示す配列を含むかまたはそれからなるshmiRをコードする核酸
を含むことができる。
(a)配列番号48に示す配列を含むかまたはそれからなるshmiRをコードする核酸:
(b)本明細書に記載するshmiRまたはshRNAをコードするDNA配列を含んでいる核酸;および
(c)配列番号54に示す配列を含むかまたはそれからなるshmiRをコードする核酸
を含み、(b)の核酸は、(a)および(c)の核酸によってコードされるshmiRのエフェクター配列とは異なるエフェクター配列を有するshmiRまたはshRNAをコードする。
(a)配列番号48に示す配列を含むかまたはそれからなるshmiRをコードする核酸:
(b)配列番号57に示す配列を含むかまたはそれからなるshmiRをコードする核酸;および
(c)配列番号54に示す配列を含むかまたはそれからなるshmiRをコードする核酸を含むことができる。
(a)配列番号64に示す配列を含むかまたはそれからなる核酸:
(b)配列番号73に示す配列を含むかまたはそれからなる核酸;および
(c)配列番号70に示す配列を含むかまたはそれからなる核酸
を含むことができる。
(a)配列番号48に示す配列を含むかまたはそれからなるshmiRをコードする核酸:、
(b)配列番号49に示す配列を含むかまたはそれからなるshmiRをコードする核酸;および
(c)配列番号54に示す配列を含むかまたはそれからなるshmiRをコードする核酸
を含むことができる。
(a)配列番号64に示す配列を含むかまたはそれからなる核酸:
(b)配列番号65に示す配列を含むかまたはそれからなる核酸;および
(c)配列番号70に示す配列を含むかまたはそれからなる核酸
を含むことができる。
(a)配列番号48に示す配列を含むかまたはそれからなるshmiRをコードする核酸:
(b)配列番号137に示す配列を含むかまたはそれからなるshmiRをコードする核酸;および
(c)配列番号141に示す配列を含むかまたはそれからなるshmiRをコードする核酸
を含む。一例では、(a)から(c)は、ddRNAiコンストラクトにおいて5’から3’の方向で提供される。
(a)配列番号64に示す配列を含むかまたはそれからなる核酸:
(b)配列番号149に示す配列を含むかまたはそれからなる核酸;および
(c)配列番号153に示す配列を含むかまたはそれからなる核酸
を含むことができる。
(a)配列番号48に示す配列を含むかまたはそれからなるshmiRをコードする核酸;
(b)配列番号39に示すエフェクター配列、および配列番号40に示すエフェクター相補配列を含んでいるshRNAをコードする核酸;および
(c)配列番号54に示す配列を含むかまたはそれからなるshmiRをコードする核酸
を含むことができる。
(a)配列番号48に示す配列を含むかまたはそれからなるshmiRをコードする核酸:
(b)配列番号92に示す配列からなるshRNAをコードする核酸;および
(c)配列番号54に示す配列を含むかまたはそれからなるshmiRをコードする核酸
を含むことができる。
(a)配列番号64に示す配列を含むかまたはそれからなる核酸:
(b)配列番号108に示す配列を含むかまたはそれからなる核酸;および
(c)配列番号70に示す配列を含むかまたはそれからなる核酸を含むことができる。
(a)配列番号64に示す配列を含むかまたはそれからなる核酸の上流のU6−9プロモーター:
(b)配列番号73に示す配列を含むかまたはそれからなる核酸の上流のU6−1プロモーター;および
(c)配列番号70に示す配列を含むかまたはそれからなる核酸の上流のU6−8プロモーター
を含む。
(a)配列番号64に示す配列を含むかまたはそれからなる核酸の上流のU6−9プロモーター:
(b)配列番号65に示す配列を含むかまたはそれからなる核酸の上流のU6−1プロモーター;および
(c)配列番号70に示す配列を含むかまたはそれからなる核酸の上流のU6−8プロモーター
を含む。
(a)配列番号64に示す配列を含むかまたはそれからなる核酸の上流のU6−9プロモーター:
(b)配列番号149に示す配列を含むかまたはそれからなる核酸の上流のU6−1プロモーター;および
(c)配列番号153に示す配列を含むかまたはそれからなる核酸の上流のU6−8プロモーター
を含む。
配列番号1:HBVゲノム内の標的領域1のRNA転写物。
配列番号2:HBVゲノム内の標的領域2のRNA転写物。
配列番号3:HBVゲノム内の標的領域3のRNA転写物。
配列番号4:HBVゲノム内の標的領域4のRNA転写物。
配列番号5:HBVゲノム内の標的領域5のRNA転写物。
配列番号6:HBVゲノム内の標的領域6のRNA転写物。
配列番号7:HBVゲノム内の標的領域7のRNA転写物。
配列番号8:HBVゲノム内の標的領域8のRNA転写物。
配列番号9:HBVゲノム内の標的領域9のRNA転写物。
配列番号10:HBVゲノム内の標的領域10のRNA転写物。
配列番号11:shmiR−1のRNAエフェクター配列。
配列番号12:shmiR−1のRNAエフェクター相補配列。
配列番号13:shmiR−2のRNAエフェクター配列。
配列番号14:shmiR−2のRNAエフェクター相補配列。
配列番号15:shmiR−3のRNAエフェクター配列。
配列番号16:shmiR−3のRNAエフェクター相補配列。
配列番号17:shmiR−4のRNAエフェクター配列。
配列番号18:shmiR−4のRNAエフェクター相補配列。
配列番号19:shmiR−5のRNAエフェクター配列。
配列番号20:shmiR−5のRNAエフェクター相補配列。
配列番号21:shmiR−6のRNAエフェクター配列。
配列番号22:shmiR−6のRNAエフェクター相補配列。
配列番号23:shmiR−7のRNAエフェクター配列。
配列番号24:shmiR−7のRNAエフェクター相補配列。
配列番号25:shmiR−8のRNAエフェクター配列。
配列番号26:shmiR−8のRNAエフェクター相補配列。
配列番号27:shmiR−9のRNAエフェクター配列。
配列番号28:shmiR−9のRNAエフェクター相補配列。
配列番号29:shmiR−10のRNAエフェクター配列。
配列番号30:shmiR−10のRNAエフェクター相補配列。
配列番号31:shmiR−11のRNAエフェクター配列。
配列番号32:shmiR−11のRNAエフェクター相補配列。
配列番号33:shmiR−12のRNAエフェクター配列。
配列番号34:shmiR−12のRNAエフェクター相補配列。
配列番号35:shmiR−13のRNAエフェクター配列。
配列番号36:shmiR−13のRNAエフェクター相補配列。
配列番号37:shmiR−14のRNAエフェクター配列。
配列番号38:shmiR−14のRNAエフェクター相補配列。
配列番号39:shmiR−15のRNAエフェクター配列。
配列番号40:shmiR−15のRNAエフェクター相補配列。
配列番号41:shmiR−16のRNAエフェクター配列。
配列番号42:shmiR−16のRNAエフェクター相補配列。
配列番号43:shmiR−1のRNA配列。
配列番号44:shmiR−2のRNA配列。
配列番号45:shmiR−3のRNA配列。
配列番号46:shmiR−4のRNA配列。
配列番号47:shmiR−5のRNA配列。
配列番号48:shmiR−6のRNA配列。
配列番号49:shmiR−7のRNA配列。
配列番号50:shmiR−8のRNA配列。
配列番号51:shmiR−9のRNA配列。
配列番号52:shmiR−10のRNA配列。
配列番号53:shmiR−11のRNA配列。
配列番号54:shmiR−12のRNA配列。
配列番号55:shmiR−13のRNA配列。
配列番号56:shmiR−14のRNA配列。
配列番号57:shmiR−15のRNA配列。
配列番号58:shmiR−16のRNA配列。
配列番号59:shmiR−1をコードするDNA配列。
配列番号60:shmiR−2をコードするDNA配列。
配列番号61:shmiR−3をコードするDNA配列。
配列番号62:shmiR−4をコードするDNA配列。
配列番号63:shmiR−5をコードするDNA配列。
配列番号64:shmiR−6をコードするDNA配列。
配列番号65:shmiR−7をコードするDNA配列。
配列番号66:shmiR−8をコードするDNA配列。
配列番号67:shmiR−9をコードするDNA配列。
配列番号68:shmiR−10をコードするDNA配列。
配列番号69:shmiR−11をコードするDNA配列。
配列番号70:shmiR−12をコードするDNA配列。
配列番号71:shmiR−13をコードするDNA配列。
配列番号72:shmiR−14をコードするDNA配列。
配列番号73:shmiR−15をコードするDNA配列。
配列番号74:shmiR−16をコードするDNA配列。
配列番号75:shmiRのステムループRNA配列。
配列番号76:pri−miR−30a主鎖の5’隣接配列。
配列番号77:pri−miR−30a主鎖の3’隣接配列。
配列番号78:shRNA−1とされるshRNAのRNA配列。
配列番号79:shRNA−2とされるshRNAのRNA配列。
配列番号80:shRNA−3とされるshRNAのRNA配列。
配列番号81:shRNA−4とされるshRNAのRNA配列。
配列番号82:shRNA−5とされるshRNAのRNA配列。
配列番号83:shRNA−6とされるshRNAのRNA配列。
配列番号84:shRNA−7とされるshRNAのRNA配列。
配列番号85:shRNA−8とされるshRNAのRNA配列。
配列番号86:shRNA−9とされるshRNAのRNA配列。
配列番号87:shRNA−10とされるshRNAのRNA配列。
配列番号88:shRNA−11とされるshRNAのRNA配列。
配列番号89:shRNA−12とされるshRNAのRNA配列。
配列番号90:shRNA−13とされるshRNAのRNA配列。
配列番号91:shRNA−14とされるshRNAのRNA配列。
配列番号92:shRNA−15とされるshRNAのRNA配列。
配列番号93:shRNA−16とされるshRNAのRNA配列。
配列番号94:shRNA−1とされるshRNAをコードするDNA配列。
配列番号95:shRNA−2とされるshRNAをコードするDNA配列。
配列番号96:shRNA−3とされるshRNAをコードするDNA配列。
配列番号97:shRNA−4とされるshRNAをコードするDNA配列。
配列番号98:shRNA−5とされるshRNAをコードするDNA配列。
配列番号99:shRNA−6とされるshRNAをコードするDNA配列。
配列番号100:shRNA−7とされるshRNAをコードするDNA配列。
配列番号101:shRNA−8とされるshRNAをコードするDNA配列。
配列番号102:shRNA−9とされるshRNAをコードするDNA配列。
配列番号103:shRNA−10とされるshRNAをコードするDNA配列。
配列番号104:shRNA−11とされるshRNAをコードするDNA配列。
配列番号105:shRNA−12とされるshRNAをコードするDNA配列。
配列番号106:shRNA−13とされるshRNAをコードするDNA配列。
配列番号107:shRNA−14とされるshRNAをコードするDNA配列。
配列番号108:shRNA−15とされるshRNAをコードするDNA配列。
配列番号109:shRNA−16とされるshRNAをコードするDNA配列。
配列番号110:shmiR−17のRNAエフェクター配列。
配列番号111:shmiR−17のRNAエフェクター相補配列。
配列番号112:shmiR−18のRNAエフェクター配列。
配列番号113:shmiR−18のRNAエフェクター相補配列。
配列番号114:shmiR−19のRNAエフェクター配列。
配列番号115:shmiR−19のRNAエフェクター相補配列。
配列番号116:shmiR−20のRNAエフェクター配列。
配列番号117:shmiR−20のRNAエフェクター相補配列。
配列番号118:shmiR−21のRNAエフェクター配列。
配列番号119:shmiR−21のRNAエフェクター相補配列。
配列番号120:shmiR−22のRNAエフェクター配列。
配列番号121:shmiR−22のRNAエフェクター相補配列。
配列番号122:shmiR−23のRNAエフェクター配列。
配列番号123:shmiR−23のRNAエフェクター相補配列。
配列番号124:shmiR−24のRNAエフェクター配列。
配列番号125:shmiR−24のRNAエフェクター相補配列
配列番号126:shmiR−25のRNAエフェクター配列。
配列番号127:shmiR−25のRNAエフェクター相補配列
配列番号128:shmiR−26のRNAエフェクター配列。
配列番号129:shmiR−26のRNAエフェクター相補配列。
配列番号130:shmiR−27のRNAエフェクター配列。
配列番号131:shmiR−27のRNAエフェクター相補配列。
配列番号132:shmiR−28のRNAエフェクター配列。
配列番号133:shmiR−28のRNAエフェクター相補配列。
配列番号134:shmiR−17のRNA配列。
配列番号135:shmiR−18のRNA配列。
配列番号136:shmiR−19のRNA配列。
配列番号137:shmiR−20のRNA配列。
配列番号138:shmiR−21のRNA配列。
配列番号139:shmiR−22のRNA配列。
配列番号140:shmiR−23のRNA配列。
配列番号141:shmiR−24のRNA配列。
配列番号142:shmiR−25のRNA配列。
配列番号143:shmiR−26のRNA配列。
配列番号144:shmiR−27のRNA配列。
配列番号145:shmiR−28のRNA配列。
配列番号146:shmiR−17をコードするDNA配列。
配列番号147:shmiR−18をコードするDNA配列。
配列番号148:shmiR−19をコードするDNA配列。
配列番号149:shmiR−20をコードするDNA配列。
配列番号150:shmiR−21をコードするDNA配列。
配列番号151:shmiR−22をコードするDNA配列。
配列番号152:shmiR−23をコードするDNA配列。
配列番号153:shmiR−24をコードするDNA配列。
配列番号154:shmiR−25をコードするDNA配列。
配列番号155:shmiR−26をコードするDNA配列。
配列番号156:shmiR−27をコードするDNA配列。
配列番号157:shmiR−28をコードするDNA配列。
配列番号158:HBVフォワード・プライマーのDNA配列。
配列番号159:HBVリバース・プライマーのDNA配列。
配列番号160:HBV TaqmanプローブのDNA配列。
配列番号161:HBV cccDNAフォワード・プライマーのDNA配列。
配列番号162:HBV cccDNAリバース・プライマーのDNA配列。
配列番号163:HBV cccDNA TaqmanプローブのDNA配列。
配列番号164:隣接配列を含む、shRNA−6をコードするDNA配列。
配列番号165:shRNA−6エフェクター種1に対応するDNA配列。
配列番号166:shRNA−6エフェクター種2に対応するDNA配列。
配列番号167:shRNA−6エフェクター種3に対応するDNA配列。
配列番号168:shRNA−6エフェクター種4に対応するDNA配列。
配列番号169:shRNA−6エフェクター種5に対応するDNA配列。
配列番号170:shRNA−6エフェクター種6に対応するDNA配列。
配列番号171:shRNA−6エフェクター種7に対応するDNA配列。
配列番号172:shRNA−6エフェクター種8に対応するDNA配列。
配列番号173:shRNA−6エフェクター種9に対応するDNA配列。
配列番号174:shRNA−6エフェクター種10に対応するDNA配列。
配列番号175:shRNA−6エフェクター種11に対応するDNA配列。
配列番号176:miRNA主鎖の隣接配列を含む、shmiR−6をコードするDNA配列。
配列番号177:shmiR−6エフェクター種1に対応するDNA配列。
配列番号178:shmiR−6エフェクター種2に対応するDNA配列。
配列番号179:shmiR−6エフェクター種3に対応するDNA配列。
配列番号180:shmiR−6エフェクター種4に対応するDNA配列。
配列番号181:shmiR−6エフェクター種5に対応するDNA配列。
配列番号182:隣接配列を含む、shRNA−15をコードするDNA配列。
配列番号183:shRNA−15エフェクター種1に対応するDNA配列。
配列番号184:shRNA−15エフェクター種2に対応するDNA配列。
配列番号185:shRNA−15エフェクター種3に対応するDNA配列。
配列番号186:shRNA−15エフェクター種4に対応するDNA配列。
配列番号187:shRNA−15エフェクター種5に対応するDNA配列。
配列番号188:shRNA−15エフェクター種6に対応するDNA配列。
配列番号189:shRNA−15エフェクター種7に対応するDNA配列。
配列番号190:shRNA−15エフェクター種8に対応するDNA配列。
配列番号191:shRNA−15エフェクター種9に対応するDNA配列。
配列番号192:shRNA−15エフェクター種10に対応するDNA配列。
配列番号193:shRNA−15エフェクター種11に対応するDNA配列。
配列番号194:shRNA−15エフェクター種12に対応するDNA配列。
配列番号195:shRNA−15エフェクター種13に対応するDNA配列。
配列番号196:shRNA−15エフェクター種14に対応するDNA配列。
配列番号197:shRNA−15エフェクター種15に対応するDNA配列。
配列番号198:shRNA−15エフェクター種16に対応するDNA配列。
配列番号199:shRNA−15エフェクター種17に対応するDNA配列。
配列番号200:shRNA−15エフェクター種18に対応するDNA配列。
配列番号201:shRNA−15エフェクター種19に対応するDNA配列。
配列番号202:miRNA主鎖の隣接配列を含む、shmiR−15をコードするDNA配列。
配列番号203:shmiR−15エフェクター種1に対応するDNA配列。
配列番号204:shmiR−15エフェクター種2に対応するDNA配列。
配列番号205:shmiR−15エフェクター種3に対応するDNA配列。
配列番号206:shmiR−15エフェクター種4に対応するDNA配列。
配列番号207:shmiR−15エフェクター種5に対応するDNA配列。
配列番号208:shmiR−15エフェクター種6に対応するDNA配列。
配列番号209:隣接配列を含む、shRNA−12をコードするDNA配列。
配列番号210:shRNA−12エフェクター種1に対応するDNA配列。
配列番号211:shRNA−12エフェクター種2に対応するDNA配列。
配列番号212:shRNA−12エフェクター種3に対応するDNA配列。
配列番号213:shRNA−12エフェクター種4に対応するDNA配列。
配列番号214:shRNA−12エフェクター種5に対応するDNA配列。
配列番号215:shRNA−12エフェクター種6に対応するDNA配列。
配列番号216:shRNA−12エフェクター種7に対応するDNA配列。
配列番号217:shRNA−12エフェクター種8に対応するDNA配列。
配列番号218:shRNA−12エフェクター種9に対応するDNA配列。
配列番号219:shRNA−12エフェクター種10に対応するDNA配列。
配列番号220:shRNA−12エフェクター種11に対応するDNA配列。
配列番号221:shRNA−12エフェクター種12に対応するDNA配列。
配列番号222:shRNA−12エフェクター種13に対応するDNA配列。
配列番号223:shRNA−12エフェクター種14に対応するDNA配列。
配列番号224:miRNA主鎖の隣接配列を含む、shmiR−12をコードするDNA配列。
配列番号225:shmiR−12エフェクター種1に対応するDNA配列。
配列番号226:shmiR−12エフェクター種2に対応するDNA配列。
配列番号227:shmiR−12エフェクター種3に対応するDNA配列。
配列番号228:shmiR−12エフェクター種4に対応するDNA配列。
配列番号229:shmiR−12エフェクター種5に対応するDNA配列。
一般事項
本明細書の全体で、特に別途記載しない限り、また内容的に必要のない限り、1つのステップ、特徴、物質の組成、諸ステップ群、または物質の諸特性や諸組成の群への言及は、そういった諸ステップ、諸特性、物質の諸組成、諸ステップ群、物質の諸特性や諸組成の諸群の1つおよび複数(すなわち1つ以上)を包含するものとする。
「RNA」とは、少なくとも1つのリボヌクレオチド残基を含む分子を意味する。「リボヌクレオチド」とは、β−D−リボ−フラノース部分の2’位にヒドロキシル基を有するヌクレオチドを意味する。これらの用語には、二本鎖RNA、一本鎖RNA、部分精製RNAなどの単離されたRNA、本質的に純粋なRNA、合成RNA、組換えにより生産されたRNA、および1つ以上のヌクレオチドの付加、欠失、置換および/または改変によって天然のRNAとは異なるように改変されたRNAが含まれる。そのような改変としては、たとえばsiRNAの末端(複数可)に、または内部に、たとえばRNAの1つ以上のヌクレオチドに、非ヌクレオチド物質を付加することであってもよい。本開示のRNA分子のヌクレオチドは、非標準ヌクレオチド、たとえば非天然ヌクレオチドまたは化学的に合成されたヌクレオチドまたはデオキシヌクレオチドを含むこともできる。これらの改変されたRNAは、アナログ、または天然RNAのアナログと呼ぶこともできる。
一例では、本開示は、ショートヘアピンマイクロRNA(shmiR)をコードするDNA配列を含む核酸を提供し、前記shmiRは、
少なくとも17ヌクレオチド長のエフェクター配列;
エフェクター相補配列;
ステムループ配列;および
プライマリーマイクロRNA(pri−miRNA)主鎖
を含み、エフェクター配列は、配列番号1〜10、38、40、42、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、および133のいずれかに示すRNA転写物に実質的に相補的である。好ましくは、エフェクター配列は30ヌクレオチド長よりも短い。たとえば、好適なエフェクター配列は17〜29ヌクレオチド長の範囲であってもよい。特に好ましい例では、エフェクター配列は21ヌクレオチド長である。より好ましくは、エフェクター配列は21ヌクレオチド長であり、かつエフェクター相補配列は20ヌクレオチド長である。
pri−miRNA主鎖の5’隣接配列;
エフェクター相補配列;
ステムループ配列;
エフェクター配列;および
pri−miRNA主鎖の3’隣接配列
を含むことができる。
(a)本明細書に記載する少なくとも1つの核酸;および
(b)
(i)本明細書に記載するshmiRをコードするDNA配列を含む核酸;または
(ii)少なくとも17ヌクレオチド長のエフェクター配列およびエフェクター相補配列を含むショートヘアピン型RNA(shRNA)をコードするDNA配列を含み、エフェクター配列は配列番号1〜10、38、40、42、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、および133のいずれかに示すRNA配列に実質的に相補的である、核酸
から選択される少なくとも1つのさらなる核酸
を含む複数の核酸を提供し、(a)の核酸によってコードされるshmiRおよび(b)の核酸によってコードされるshmiRまたはshRNAは、異なるエフェクター配列を含んでいる。好ましくは、配列番号1〜10、38、40、42、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、および133のいずれかに示すRNA配列に実質的に相補的な(b)(ii)のshRNAのエフェクター配列は、30ヌクレオチド長よりも短い。たとえば、shRNAの好適なエフェクター配列は、17〜29ヌクレオチド長の範囲であってもよい。
(i)配列番号21に示す配列からなるエフェクター配列、および配列番号22に示す配列からなるエフェクター相補配列を含むshmiRをコードするDNA配列を含んでいる核酸;および
(ii)配列番号33に示す配列からなるエフェクター配列、および配列番号34に示す配列からなるエフェクター相補配列を含むshmiRをコードするDNA配列を含んでいる核酸
を含む。
(i)配列番号21に示す配列からなるエフェクター配列、および配列番号22に示す配列からなるエフェクター相補配列を含むshmiRをコードするDNA配列を含んでいる核酸;
(ii)配列番号33に示す配列からなるエフェクター配列、および配列番号34に示す配列からなるエフェクター相補配列を含むshmiRをコードするDNA配列を含んでいる核酸;および
(iii)HBVゲノムのRNA転写物に実質的に相補的な少なくとも17ヌクレオチド長のエフェクター配列を含むshmiRまたはshRNAをコードするDNA配列を含む少なくとも1つの他の核酸
を含む。
(i)配列番号21に示す配列からなるエフェクター配列、および配列番号22に示す配列からなるエフェクター相補配列を含むshmiRをコードするDNA配列を含んでいる核酸;
(ii)配列番号39に示す配列からなるエフェクター配列、および配列番号40に示す配列からなるエフェクター相補配列を含むshmiRをコードするDNA配列を含んでいる核酸;および
(iii)配列番号33に示す配列からなるエフェクター配列、および配列番号34に示す配列からなるエフェクター相補配列を含むshmiRをコードするDNA配列を含んでいる核酸
を含む。
(i)配列番号21に示す配列からなるエフェクター配列、および配列番号22に示す配列からなるエフェクター相補配列、を含むshmiRをコードするDNA配列を含んでいる核酸;
(ii)配列番号23に示す配列からなるエフェクター配列、および配列番号24に示す配列からなるエフェクター相補配列、を含むshmiRをコードするDNA配列を含んでいる核酸;および
(iii)配列番号33に示す配列からなるエフェクター配列、および配列番号34に示す配列からなるエフェクター相補配列、を含むshmiRをコードするDNA配列を含んでいる核酸
を含む。
(i)配列番号21に示す配列からなるエフェクター配列、および配列番号22に示す配列からなるエフェクター相補配列、を含むshmiRをコードするDNA配列を含んでいる核酸;
(ii)配列番号39に示す配列からなるエフェクター配列、および配列番号40に示す配列からなるエフェクター相補配列、を含むshRNAをコードするDNA配列を含んでいる核酸;および
(iii)配列番号33に示す配列からなるエフェクター配列、および配列番号34に示す配列からなるエフェクター相補配列、を含むshmiRをコードするDNA配列を含んでいる核酸
を含む。
(i)配列番号21に示す配列からなるエフェクター配列、および配列番号22に示す配列からなるエフェクター相補配列、を含むshmiRをコードするDNA配列を含んでいる核酸;および
(ii)配列番号116に示す配列からなるエフェクター配列、および配列番号117に示す配列からなるエフェクター相補配列、を含むshmiRをコードするDNA配列を含んでいる核酸
を含む。
(i)配列番号21に示す配列からなるエフェクター配列、および配列番号22に示す配列からなるエフェクター相補配列、を含むshmiRをコードするDNA配列を含んでいる核酸;および
(ii)配列番号124に示す配列からなるエフェクター配列、および配列番号125に示す配列からなるエフェクター相補配列、を含むshmiRをコードするDNA配列を含んでいる核酸
を含む。
(i)配列番号21に示す配列からなるエフェクター配列、および配列番号22に示す配列からなるエフェクター相補配列、を含むshmiRをコードするDNA配列を含んでいる核酸;
(ii)配列番号116に示す配列からなるエフェクター配列、および配列番号117に示す配列からなるエフェクター相補配列、を含むshmiRをコードするDNA配列を含んでいる核酸;および
(iii)配列番号124に示す配列からなるエフェクター配列、および配列番号125に示す配列からなるエフェクター相補配列、を含むshmiRをコードするDNA配列を含んでいる核酸
を含む。
(i)配列番号64に示す配列を含むかまたはそれからなるDNA配列(配列番号48に示す配列を含むかまたはそれからなるshmiRをコードする)を含んでいる核酸;および
(ii)配列番号70に示す配列を含むかまたはそれからなるDNA配列(配列番号54に示す配列を含むかまたはそれからなるshmiRをコードする)を含んでいる核酸
を含む。
(i)配列番号64に示す配列を含むかまたはそれからなるDNA配列(配列番号48に示す配列を含むかまたはそれからなるshmiRをコードする)を含んでいる核酸;
(ii)配列番号73に示す配列を含むかまたはそれからなるDNA配列(配列番号57に示す配列を含むかまたはそれからなるshmiRをコードする)を含んでいる核酸;および
(iii)配列番号70に示す配列を含むかまたはそれからなるDNA配列(配列番号54に示す配列を含むかまたはそれからなるshmiRをコードする)を含んでいる核酸
を含む。
(i)配列番号64に示す配列を含むかまたはそれからなるDNA配列(配列番号48に示す配列を含むかまたはそれからなるshmiRをコードする)を含んでいる核酸;
(ii)配列番号73に示す配列を含むかまたはそれからなるDNA配列(配列番号57に示す配列を含むかまたはそれからなるshmiRをコードする)を含んでいる核酸;および
(iii)配列番号70に示す配列を含むかまたはそれからなるDNA配列(配列番号54に示す配列を含むかまたはそれからなるshmiRをコードする)を含んでいる核酸
を含む。
(i)配列番号64に示す配列を含むかまたはそれからなるDNA配列(配列番号48に示す配列を含むかまたはそれからなるshmiRをコードする)を含んでいる核酸;
(ii)配列番号99に示す配列を含むかまたはそれからなるDNA配列(配列番号83に示す配列を含むかまたはそれからなるshRNAをコードする)を含んでいる核酸;および
(iii)配列番号70に示す配列を含むかまたはそれからなるDNA配列(配列番号54に示す配列を含むかまたはそれからなるshmiRをコードする)を含んでいる核酸
を含む。
(i)配列番号64に示す配列を含むかまたはそれからなるDNA配列(配列番号48に示す配列を含むかまたはそれからなるshmiRをコードする)を含んでいる核酸;および
(ii)配列番号149に示す配列を含むかまたはそれからなるDNA配列(配列番号137に示す配列を含むかまたはそれからなるshmiRをコードする)を含んでいる核酸
を含む。
(i)配列番号64に示す配列を含むかまたはそれからなるDNA配列(配列番号48に示す配列を含むかまたはそれからなるshmiRをコードする)を含んでいる核酸;および
(ii)配列番号153に示す配列を含むかまたはそれからなるDNA配列(配列番号141に示す配列を含むかまたはそれからなるshmiRをコードする)を含んでいる核酸
を含む。
(i)配列番号64に示す配列を含むかまたはそれからなるDNA配列(配列番号48に示す配列を含むかまたはそれからなるshmiRをコードする)を含んでいる核酸;
(ii)配列番号149に示す配列を含むかまたはそれからなるDNA配列(配列番号137に示す配列を含むかまたはそれからなるshmiRをコードする)を含んでいる核酸;および
(iii)配列番号153に示す配列を含むかまたはそれからなるDNA配列(配列番号141に示す配列を含むかまたはそれからなるshmiRをコードする)を含んでいる核酸
を含む。
一例では、本開示の該または各核酸は、DNA指向性RNAi(ddRNAi)コンストラクトの形態で提供される、またはddRNAiコンストラクトに含まれる。したがって、一例では、本開示は、本明細書に記載する核酸を含むddRNAiコンストラクトを提供する。別の例では、本開示は、本明細書に記載する複数の核酸を含むddRNAiコンストラクトを提供する。HBV転写物を標的とするエフェクター配列を含むshmiRまたはshRNAをコードする例示的な核酸は、本明細書に記載されており、本開示のこの例に必要に応じて変更を加えて応用できるものする。
(a)配列番号48に示す配列を含むかまたはそれからなるshmiR(shmiR−6)をコードする核酸;および
(b)配列番号54に示す配列を含むかまたはそれからなるshmiR(shmiR−12)をコードする核酸
を含む。
(a)配列番号64に示す配列(shmiR−6をコードする)を含むかまたはそれからなる核酸;および
(b)配列番号70に示す配列(shmiR−12をコードする)を含むかまたはそれからなる核酸
を含む。
(a)配列番号48に示す配列を含むかまたはそれからなるshmiR(shmiR−6)をコードする核酸;および
(b)配列番号137に示す配列を含むかまたはそれからなるshmiR(shmiR−20)をコードする核酸
を含む。
(a)配列番号64に示す配列(shmiR−6をコードする)を含むかまたはそれからなる核酸;および
(b)配列番号149に示す配列(shmiR−20をコードする)を含むかまたはそれからなる核酸
を含むことができる。
(a)配列番号48に示す配列を含むかまたはそれからなるshmiR(shmiR−6)をコードする核酸;および
(b)配列番号141に示す配列を含むかまたはそれからなるshmiR(shmiR−24)をコードする核酸
を含む。
(a)配列番号64に示す配列(shmiR−6をコードする)を含むかまたはそれからなる核酸;および
(b)配列番号153に示す配列(shmiR−24をコードする)を含むかまたはそれからなる核酸
を含むことができる。
(a)配列番号48に示す配列(shmiR−6)を含むかまたはそれからなるshmiRをコードする核酸:
(b)本明細書に記載するshmiRまたはshRNAをコードするDNA配列を含んでいる核酸;および
(c)配列番号54に示す配列(shmiR−12)を含むかまたはそれからなるshmiRをコードする核酸
を含み、
(b)の核酸は、(a)および(c)の核酸によってコードされるshmiRのエフェクター配列とは異なるエフェクター配列を有するshmiRまたはshRNAをコードする
ddRNAiコンストラクトを提供する。
(a)配列番号48に示す配列(shmiR−6)を含むかまたはそれからなるshmiRをコードする核酸;
(b)配列番号57に示す配列(shmiR−15)を含むかまたはそれからなるshmiRをコードする核酸;および
(c)配列番号54に示す配列(shmiR−12)を含むかまたはそれからなるshmiRをコードする核酸
を含む。
(a)配列番号64に示す配列(shmiR−6をコードする)を含むかまたはそれからなる核酸;
(b)配列番号73に示す配列(shmiR−15をコードする)を含むかまたはそれからなる核酸;および
(c)配列番号70に示す配列(shmiR−12をコードする)を含むかまたはそれからなる核酸
を含むことができる。
(a)配列番号48に示す配列(shmiR−6)を含むかまたはそれからなるshmiRをコードする核酸;
(b)配列番号49に示す配列(shmiR−7)を含むかまたはそれからなるshmiRをコードする核酸;および
(c)配列番号54に示す配列(shmiR−12)を含むかまたはそれからなるshmiRをコードする核酸
を含む。
(a)配列番号64に示す配列(shmiR−6をコードする)を含むかまたはそれからなる核酸;
(b)配列番号65に示す配列(shmiR−7をコードする)を含むかまたはそれからなる核酸;および
(c)配列番号70に示す配列(shmiR−12をコードする)を含むかまたはそれからなる核酸
を含むことができる。一例では、本開示は、ddRNAiコンストラクトであって、
(a)配列番号48に示す配列(shmiR−6)を含むかまたはそれからなるshmiRをコードする核酸:
(b)本明細書に記載するshmiRまたはshRNAをコードするDNA配列を含んでいる核酸;および
(c)配列番号141(shmiR−24)に示す配列を含むかまたはそれからなるshmiRをコードする核酸を含んでおり、
(b)の核酸は、(a)および(c)の核酸によってコードされるshmiRのエフェクター配列とは異なるエフェクター配列を有するshmiRまたはshRNAをコードする、
ddRNAiコンストラクトを提供する。
(a)配列番号48に示す配列(shmiR−6)を含むかまたはそれからなるshmiRをコードする核酸:
(b)本明細書に記載するshmiRまたはshRNAをコードするDNA配列を含んでいる核酸;および
(c)配列番号137に示す配列(shmiR−20)を含むかまたはそれからなるshmiRをコードする核酸
を含んでおり、
(b)の核酸は、(a)および(c)の核酸によってコードされるshmiRのエフェクター配列とは異なるエフェクター配列を有するshmiRまたはshRNAをコードする、
ddRNAiコンストラクトを提供する。
(a)配列番号48に示す配列(shmiR−6)を含むかまたはそれからなるshmiRをコードする核酸;
(b)配列番号137に示す配列(shmiR−20)を含むかまたはそれからなるshmiRをコードする核酸;および
(c)配列番号141に示す配列(shmiR−24)を含むかまたはそれからなるshmiRをコードする核酸
を含む。
(a)配列番号64に示す配列(shmiR−6をコードする)を含むかまたはそれからなる核酸;
(b)配列番号149に示す配列(shmiR−20をコードする)を含むかまたはそれからなる核酸;および
(c)配列番号153に示す配列(shmiR−24をコードする)を含むかまたはそれからなる核酸
を含むことができる。
(a)配列番号48に示す配列を含むかまたはそれからなるshmiRをコードする核酸;
(b)配列番号39に示すエフェクター配列、および配列番号40に示すエフェクター相補配列を含んでいるshRNAをコードする核酸;および
(c)配列番号54に示す配列を含むかまたはそれからなるshmiRをコードする核酸
を含むことができる。
(a)配列番号48に示す配列を含むかまたはそれからなるshmiRをコードする核酸:
(b)配列番号92に示す配列からなるshRNAをコードする核酸;および
(c)配列番号54に示す配列を含むかまたはそれからなるshmiRをコードする核酸
を含むことができる。
(a)配列番号64に示す配列を含むかまたはそれからなる核酸:
(b)配列番号108に示す配列を含むかまたはそれからなる核酸;および
(c)配列番号70に示す配列を含むかまたはそれからなる核酸
を含むことができる。
(a)たとえばU6−9プロモーターなどのU6プロモーターに機能的に連結された、配列番号48に示す配列を含むかまたはそれからなるshmiRをコードする核酸;および
(b)たとえばU6−8プロモーターなどのU6プロモーターに機能的に連結された、配列番号54に示す配列を含むかまたはそれからなるshmiRをコードする核酸
を含むことができる。
(a)たとえばU6−9プロモーターなどのU6プロモーターに機能的に連結された、配列番号64に示す配列を含むかまたはそれからなる核酸;および
(b)たとえばU6−8プロモーターなどのU6プロモーターに機能的に連結された、配列番号70に示す配列を含むかまたはそれからなる核酸
を含むことができる。
(a)たとえばU6−9プロモーターなどのU6プロモーターに機能的に連結された、配列番号48に示す配列(shmiR−6)を含むかまたはそれからなるshmiRをコードする核酸;および
(b)たとえばU6−8プロモーターなどのU6プロモーターに機能的に連結された、配列番号141に示す配列(shmiR−24)を含むかまたはそれからなるshmiRをコードする核酸
を含むことができる。
(a)たとえばU6−9プロモーターなどのU6プロモーターに機能的に連結された、配列番号64に示す配列(shmiR−6をコードする)を含むかまたはそれからなる核酸;および
(b)たとえばU6−8プロモーターなどのU6プロモーターに機能的に連結された、配列番号153に示す配列(shmiR−24をコードする)を含むかまたはそれからなる核酸
を含むことができる。
(a)たとえばU6−9プロモーターなどのU6プロモーターに機能的に連結された、配列番号48に示す配列(shmiR−6)を含むかまたはそれからなるshmiRをコードする核酸;および
(b)たとえばU6−1プロモーターなどのU6プロモーターに機能的に連結された、配列番号137に示す配列(shmiR−20)を含むかまたはそれからなるshmiRをコードする核酸
を含むことができる。
(a)たとえばU6−9プロモーターなどのU6プロモーターに機能的に連結された、配列番号64に示す配列(shmiR−6をコードする)を含むかまたはそれからなる核酸;および
(b)たとえばU6−1プロモーターなどのU6プロモーターに機能的に連結された、配列番号149に示す配列(shmiR−20をコードする)を含むかまたはそれからなる核酸
を含むことができる。
(a)たとえばU6−9プロモーターなどのU6プロモーターに機能的に連結された、配列番号48に示す配列(shmiR−6)を含むかまたはそれからなるshmiRをコードする核酸;
(b)たとえばU6−1プロモーターなどのU6プロモーターに機能的に連結された、配列番号57に示す配列(shmiR−15)を含むかまたはそれからなるshmiRをコードする核酸;および
(c)たとえばU6−8プロモーターなどのU6プロモーターに機能的に連結された、配列番号54に示す配列(shmiR−12)を含むかまたはそれからなるshmiRをコードする核酸
を含む。
(a)たとえばU6−9プロモーターなどのU6プロモーターに機能的に連結された、配列番号64に示す配列(shmiR−6をコードする)を含むかまたはそれからなる核酸;
(b)たとえばU6−1プロモーターなどのU6プロモーターに機能的に連結された、配列番号73に示す配列(shmiR−15をコードする)を含むかまたはそれからなる核酸;および
(c)たとえばU6−8プロモーターなどのU6プロモーターに機能的に連結された、配列番号70に示す配列(shmiR−12をコードする)を含むかまたはそれからなる核酸
を含むことができる。
(a)たとえばU6−9プロモーターなどのU6プロモーターに機能的に連結された、配列番号48に示す配列(shmiR−6)を含むかまたはそれからなるshmiRをコードする核酸;
(b)たとえばU6−1プロモーターなどのU6プロモーターに機能的に連結された、配列番号137に示す配列(shmiR−20)を含むかまたはそれからなるshmiRをコードする核酸;および
(c)たとえばU6−8プロモーターなどのU6プロモーターに機能的に連結された、配列番号141に示す配列(shmiR−24)を含むかまたはそれからなるshmiRをコードする核酸
を含む。
(a)たとえばU6−9プロモーターなどのU6プロモーターに機能的に連結された、配列番号64に示す配列(shmiR−6をコードする)を含むかまたはそれからなる核酸;
(b)たとえばU6−1プロモーターなどのU6プロモーターに機能的に連結された、配列番号149に示す配列(shmiR−20をコードする)を含むかまたはそれからなる核酸;および
(c)たとえばU6−8プロモーターなどのU6プロモーターに機能的に連結された、配列番号153に示す配列(shmiR−24をコードする)を含むかまたはそれからなる核酸
を含むことができる。
(a)たとえばU6−9プロモーターなどのU6プロモーターに機能的に連結された、配列番号48に示す配列(shmiR−6)を含むかまたはそれからなるshmiRをコードする核酸;
(b)たとえばU6−1プロモーターなどのU6プロモーターに機能的に連結された、配列番号49に示す配列(shmiR−7)を含むかまたはそれからなるshmiRをコードする核酸;および
(c)たとえばU6−8プロモーターなどのU6プロモーターに機能的に連結された、配列番号54に示す配列(shmiR−12)を含むかまたはそれからなるshmiRをコードする核酸
を含む。
(a)たとえばU6−9プロモーターなどのU6プロモーターに機能的に連結された、配列番号64に示す配列(shmiR−6をコードする)を含むかまたはそれからなる核酸;
(b)たとえばU6−1プロモーターなどのU6プロモーターに機能的に連結された、配列番号65に示す配列(shmiR−7をコードする)を含むかまたはそれからなる核酸;および
(c)たとえばU6−8プロモーターなどのU6プロモーターに機能的に連結された、配列番号70に示す配列(shmiR−12をコードする)を含むかまたはそれからなる核酸
を含むことができる。
(a)配列番号64に示す配列を含むかまたはそれからなる核酸の上流のU6−9プロモーター:
(b)配列番号73に示す配列を含むかまたはそれからなる核酸の上流のU6−1プロモーター;および
(c)配列番号70に示す配列を含むかまたはそれからなる核酸の上流のU6−8プロモーター
を含む。
(a)配列番号64に示す配列を含むかまたはそれからなる核酸の上流のU6−9プロモーター:
(b)配列番号149に示す配列を含むかまたはそれからなる核酸の上流のU6−1プロモーター;および
(c)配列番号159に示す配列を含むかまたはそれからなる核酸の上流のU6−8プロモーター
を含む。
(a)配列番号64に示す配列を含むかまたはそれからなる核酸の上流のU6−9プロモーター:
(b)配列番号65に示す配列を含むかまたはそれからなる核酸の上流のU6−1プロモーター;および
(c)配列番号70に示す配列を含むかまたはそれからなる核酸の上流のU6−8プロモーター
を含む。
(a)たとえばU6−9プロモーターなどのU6プロモーターに機能的に連結された、配列番号48に示す配列を含むかまたはそれからなるshmiRをコードする核酸;
(b)たとえばU6−1プロモーターなどのU6プロモーターに機能的に連結された、配列番号92に示す配列を含むかまたはそれからなるshRNAをコードする核酸;および
(c)たとえばU6−8プロモーターなどのU6プロモーターに機能的に連結された、配列番号54に示す配列を含むかまたはそれからなるshmiRをコードする核酸
を含むことができる。
(a)たとえばU6−9プロモーターなどのU6プロモーターに機能的に連結された、配列番号64に示す配列を含むかまたはそれからなる核酸;
(b)たとえばU6−1プロモーターなどのU6プロモーターに機能的に連結された、配列番号108に示す配列を含むかまたはそれからなる核酸;および
(c)たとえばU6−8プロモーターなどのU6プロモーターに機能的に連結された、配列番号70に示す配列を含むかまたはそれからなる核酸
を含むことができる。
(a)たとえばU6−9プロモーターなどのU6プロモーターに機能的に連結された、配列番号48に示す配列(shmiR−6)を含むかまたはそれからなるshmiRをコードする核酸を含むddRNAiコンストラクト;および
(b)たとえばU6−8プロモーターなどのU6プロモーターに機能的に連結された、配列番号54に示す配列(shmiR−12)を含むかまたはそれからなるshmiRをコードする核酸を含むddRNAiコンストラクト
を含む。
(a)たとえばU6−9プロモーターなどのU6プロモーターに機能的に連結された、配列番号64に示す配列(shmiR−6をコードする)を含むかまたはそれからなる核酸を含むddRNAiコンストラクト;および
(b)たとえばU6−8プロモーターなどのU6プロモーターに機能的に連結された、配列番号70に示す配列(shmiR−12をコードする)を含むかまたはそれからなる核酸を含むddRNAiコンストラクト
を含むことができる。
(a)たとえばU6−9プロモーターなどのU6プロモーターに機能的に連結された、配列番号48に示す配列(shmiR−6)を含むかまたはそれからなるshmiRをコードする核酸を含むddRNAiコンストラクト;および
(b)たとえばU6−1プロモーターなどのU6プロモーターに機能的に連結された、配列番号57に示す配列(shmiR−15)を含むかまたはそれからなるshmiRをコードする核酸を含むddRNAiコンストラクト
を含む。
(a)たとえばU6−9プロモーターなどのU6プロモーターに機能的に連結された、配列番号64に示す配列(shmiR−6をコードする)を含むかまたはそれからなる核酸を含むddRNAiコンストラクト;および
(b)たとえばU6−1プロモーターなどのU6プロモーターに機能的に連結された、配列番号73に示す配列(shmiR−15をコードする)を含むかまたはそれからなる核酸を含むddRNAiコンストラクト
を含むことができる。
(a)たとえばU6−8プロモーターなどのU6プロモーターに機能的に連結された、配列番号54に示す配列(shmiR−12)を含むかまたはそれからなるshmiRをコードする核酸を含むddRNAiコンストラクト;および
(b)たとえばU6−1プロモーターなどのU6プロモーターに機能的に連結された、配列番号57に示す配列(shmiR−15)を含むかまたはそれからなるshmiRをコードする核酸を含むddRNAiコンストラクト
を含む。
(a)たとえばU6−8プロモーターなどのU6プロモーターに機能的に連結された、配列番号54に示す配列(shmiR−12)を含むかまたはそれからなるshmiRをコードする核酸を含むddRNAiコンストラクト;および
(b)たとえばU6−1プロモーターなどのU6プロモーターに機能的に連結された、配列番号73に示す配列(shmiR−15をコードする)を含むかまたはそれからなる核酸を含むddRNAiコンストラクト
を含むことができる。
(a)たとえばU6−9プロモーターなどのU6プロモーターに機能的に連結された、配列番号48に示す配列(shmiR−6)を含むかまたはそれからなるshmiRをコードする核酸を含むddRNAiコンストラクト;および
(b)たとえばU6−1プロモーターなどのU6プロモーターに機能的に連結された、配列番号137に示す配列(shmiR−20)を含むかまたはそれからなるshmiRをコードする核酸を含むddRNAiコンストラクト
を含む。
(a)たとえばU6−9プロモーターなどのU6プロモーターに機能的に連結された、配列番号64に示す配列(shmiR−6をコードする)を含むかまたはそれからなる核酸を含むddRNAiコンストラクト;および
(b)たとえばU6−1プロモーターなどのU6プロモーターに機能的に連結された、配列番号149に示す配列(shmiR−20をコードする)を含むかまたはそれからなる核酸を含むddRNAiコンストラクト
を含むことができる。
(a)たとえばU6−9プロモーターなどのU6プロモーターに機能的に連結された、配列番号48に示す配列(shmiR−6)を含むかまたはそれからなるshmiRをコードする核酸を含むddRNAiコンストラクト;および
(b)たとえばU6−8プロモーターなどのU6プロモーターに機能的に連結された、配列番号141に示す配列(shmiR−24)を含むかまたはそれからなるshmiRをコードする核酸を含むddRNAiコンストラクト
を含む。
(a)たとえばU6−9プロモーターなどのU6プロモーターに機能的に連結された、配列番号64に示す配列(shmiR−6をコードする)を含むかまたはそれからなる核酸を含むddRNAiコンストラクト;および
(b)たとえばU6−8プロモーターなどのU6プロモーターに機能的に連結された、配列番号153に示す配列(shmiR−24をコードする)を含むかまたはそれからなる核酸を含むddRNAiコンストラクト
を含むことができる。複数のddRNAiコンストラクトが3つのddRNAiコンストラクトを含む一例によれば、複数のddRNAiコンストラクトは、
(a)たとえばU6−9プロモーターなどのU6プロモーターに機能的に連結された、配列番号48に示す配列(shmiR−6)を含むかまたはそれからなるshmiRをコードする核酸を含むddRNAiコンストラクト;
(b)たとえばU6−1プロモーターなどのU6プロモーターに機能的に連結された、配列番号57に示す配列(shmiR−15)を含むかまたはそれからなるshmiRをコードする核酸を含むddRNAiコンストラクト;および
(c)たとえばU6−8プロモーターなどのU6プロモーターに機能的に連結された、配列番号54に示す配列(shmiR−12)を含むかまたはそれからなるshmiRをコードする核酸を含むddRNAiコンストラクト
を含む。
(a)たとえばU6−9プロモーターなどのU6プロモーターに機能的に連結された、配列番号64に示す配列(shmiR−6をコードする)を含むかまたはそれからなる核酸を含むddRNAiコンストラクト;
(b)たとえばU6−1プロモーターなどのU6プロモーターに機能的に連結された、配列番号73に示す配列(shmiR−15をコードする)を含むかまたはそれからなる核酸を含むddRNAiコンストラクト;および
(c)たとえばU6−8プロモーターなどのU6プロモーターに機能的に連結された、配列番号70に示す配列(shmiR−12をコードする)を含むかまたはそれからなる核酸を含むddRNAiコンストラクト
を含むことができる。
(a)たとえばU6−9プロモーターなどのU6プロモーターに機能的に連結された、配列番号48に示す配列(shmiR−6)を含むかまたはそれからなるshmiRをコードする核酸を含むddRNAiコンストラクト;
(b)たとえばU6−1プロモーターなどのU6プロモーターに機能的に連結された、配列番号49に示す配列(shmiR−7)を含むかまたはそれからなるshmiRをコードする核酸を含むddRNAiコンストラクト;および
(c)たとえばU6−8プロモーターなどのU6プロモーターに機能的に連結された、配列番号54に示す配列(shmiR−12)を含むかまたはそれからなるshmiRをコードする核酸を含むddRNAiコンストラクト
を含む。
(a)たとえばU6−9プロモーターなどのU6プロモーターに機能的に連結された、配列番号64に示す配列(shmiR−6をコードする)を含むかまたはそれからなる核酸を含むddRNAiコンストラクト;
(b)たとえばU6−1プロモーターなどのU6プロモーターに機能的に連結された、配列番号65に示す配列(shmiR−7をコードする)を含むかまたはそれからなる核酸を含むddRNAiコンストラクト;および
(c)たとえばU6−8プロモーターなどのU6プロモーターに機能的に連結された、配列番号70に示す配列(shmiR−12をコードする)を含むかまたはそれからなる核酸を含むddRNAiコンストラクト
を含むことができる。
(a)たとえばU6−9プロモーターなどのU6プロモーターに機能的に連結された、配列番号48に示す配列(shmiR−6)を含むかまたはそれからなるshmiRをコードする核酸を含むddRNAiコンストラクト;
(b)たとえばU6−1プロモーターなどのU6プロモーターに機能的に連結された、配列番号92に示す配列(shRNA−15)を含むかまたはそれからなるshRNAをコードする核酸を含むddRNAiコンストラクト;および
(c)たとえばU6−8プロモーターなどのU6プロモーターに機能的に連結された、配列番号54に示す配列(shmiR−12)を含むかまたはそれからなるshmiRをコードする核酸を含むddRNAiコンストラクト
を含むことができる。
(a)たとえばU6−9プロモーターなどのU6プロモーターに機能的に連結された、配列番号64に示す配列(shmiR−6をコードする)を含むかまたはそれからなる核酸を含むddRNAiコンストラクト;
(b)たとえばU6−1プロモーターなどのU6プロモーターに機能的に連結された、配列番号108に示す配列(shRNA−15をコードする)を含むかまたはそれからなる核酸を含むddRNAiコンストラクト;および
(c)たとえばU6−8プロモーターなどのU6プロモーターに機能的に連結された、配列番号70に示す配列(shmiR−12をコードする)を含むかまたはそれからなる核酸を含むddRNAiコンストラクト
を含むことができる。
(a)たとえばU6−9プロモーターなどのU6プロモーターに機能的に連結された、配列番号48に示す配列(shmiR−6)を含むかまたはそれからなるshmiRをコードする核酸を含むddRNAiコンストラクト;
(b)たとえばU6−1プロモーターなどのU6プロモーターに機能的に連結された、配列番号137に示す配列(shmiR−20)を含むかまたはそれからなるshmiRをコードする核酸を含むddRNAiコンストラクト;および
(c)たとえばU6−8プロモーターなどのU6プロモーターに機能的に連結された、配列番号141に示す配列(shmiR−24)を含むかまたはそれからなるshmiRをコードする核酸を含むddRNAiコンストラクト
を含む。
(a)たとえばU6−9プロモーターなどのU6プロモーターに機能的に連結された、配列番号64に示す配列(shmiR−6をコードする)を含むかまたはそれからなる核酸を含むddRNAiコンストラクト;
(b)たとえばU6−1プロモーターなどのU6プロモーターに機能的に連結された、配列番号149に示す配列(shmiR−20をコードする)を含むかまたはそれからなる核酸を含むddRNAiコンストラクト;および
(c)たとえばU6−8プロモーターなどのU6プロモーターに機能的に連結された、配列番号153に示す配列(shmiR−24をコードする)を含むかまたはそれからなる核酸を含むddRNAiコンストラクト
を含むことができる。
一例では、本開示のddRNAiコンストラクトは、発現ベクター内に含まれている。
細胞培養モデル
HBVは培養液中の細胞には感染しない。しかし、HBV DNAを(ヘッド・トゥー・テールの二量体として、または100%を上回る「オーバーレングス」ゲノムとして)HuH7またはHepG2肝細胞にトランスフェクションすると、ウイルス遺伝子が発現し、HBVビリオンが生産され培地中に放出される。そのような細胞株の一例は、安定的に完全HBVゲノム(血清型ayw、遺伝子型D)を有するHepG2ヒト肝細胞癌細胞株のサブ細胞株、HepG2.2.15である。HepG2.2.15は、全HBVウイルスRNAおよびタンパク質を発現し、ウイルスゲノムを生産し、ウイルス様粒子を分泌する。本明細書で例示するように、本開示の核酸またはddRNAiコンストラクトから発現されるshmiRの活性は、核酸またはddRNAiコンストラクトを細胞に投与した後、HBVゲノムによってコードされるRNAまたはタンパク質の発現レベルを測定することによって、決定することができる。細胞内HBV遺伝子発現は、Taqman(商標)アッセイか他のリアルタイムPCRアッセイによりHBV RNAを、またはELISAによりHBVタンパク質を、検定することができる。細胞外ウイルスは、PCRによりDNAを、またはELISAによりタンパク質を、検定することができる。HBV表面抗原とコアタンパク質の抗体は市販されている。当業界では、トランスフェクション効率およびサンプル回収率の差異を正規化する様々な手段が知られている。初代ヒト肝細胞を用いる細胞培養系の最近の進歩のおかげで、HBV治療剤の活性の決定能も向上しよう。
HBV複製の研究に用いることができる小動物モデルがいくつかある。その一つは、放射線照射マウスへのHBV感染肝臓組織の移植である。ウイルス血症(エビデンスはPCRでHBV DNAを測定)は、移植後8日目に最初に検出され、18〜25日目にピークになる(Ilan et al.,1999,Hepatology,29,553−562)。
いくつかの例では、本開示の核酸またはddRNAiコンストラクトまたは発現ベクターのうちの1つ以上は、担体を含む組成物として提供される。
本開示の1つ以上の核酸、ddRNAiコンストラクト、または発現ベクターは、HBV感染の予防または治療のための組成物に使用することができる。本発明の治療用組成物は、単独で使用することもできるし、他の抗ウイルス剤などの1種以上の物質と併用することもできる。現在HBVの治療で認可されているのは、エンテカビル、テノホビル、ラミブジン、アデホビルジピボキシル、およびインターフェロンアルファ(たとえば、PEG化インターフェロンアルファ)である。本開示の核酸、ddRNAiコンストラクト、または発現ベクターは、他の認可薬とは異なる機構でHBVに作用するので、本発明の剤と他の抗ウイルス剤の併用治療で治療の有効性は大きく向上する一方で、たとえば長期ラミブジン治療の大きな問題となっているラミブジン耐性の発生などの薬剤耐性の発生は大きく抑制されることが期待される。
本開示はまた、本開示の核酸、ddRNAiコンストラクトおよび/または発現ベクターをキットの形態で提供する。キットは、容器を含む場合がある。典型的なキットには、本開示の1つ以上の核酸、ddRNAiコンストラクトまたは発現ベクターと、投与に関する説明書とが含まれる。いくつかの例では、キットには、本開示の2種以上の核酸、ddRNAiコンストラクトまたは発現ベクターおよび/または本開示の別の核酸、ddRNAiコンストラクトまたは発現ベクターが含まれる。いくつかの例では、キットには、(本明細書に記載する)HBV感染の治療のための別の化合物と一緒にパッケージングされた本開示の2種以上の核酸、ddRNAiコンストラクトまたは発現ベクターが含まれる。たとえば、HBV感染の治療で知られている他の治療剤は、エンテカビル、テノホビル、ラミブジン、アデホビルおよび/またはPEG化インターフェロンから選択することができる。
本開示のシングルのshmiRを発現できるddRNAiコンストラクトを製造するために、shmiRをコードするDNA配列を合成し、U6プロモーター(たとえば、U6−1、U6−8、またはU6−9)の下流にクローン化する。ddRNAiコンストラクトをそれぞれHBV−shmiR1からHBV−shmiR16と称する。
HBV転写物をノックダウンするための本開示のshmiRまたはshRNAを発現するddRNAiコンストラクトの有効性をHEK293細胞中でデュアルルシフェラーゼ・レポーター・アッセイを使用して決定する。
3つのddRNAiコンストラクト(すなわち、それぞれshmiR6、shmiR15、及びshmiR12を発現するddRNAi shmiRコンストラクト)の高機能特性をHEK293細胞中で評価した。
shmiR−12(配列番号54)及びshmiR−15(配列番号57)の鎖選好活性を向上させるために、エフェクター相補(センス)配列を1または2ヌクレオチド上流または下流のいずれかにシフトさせることによって、shmiR−12及びshmiR−15のバリアントを製造した。shmiR−15のバリアントをshmiR−17からshmiR−22(それぞれ配列番号134〜139)と称し、shmiR−12のバリアントをshmiR−23からshmiR−28(それぞれ配列番号140〜145)と称する。
実施例1に記載のddRNAi発現コンストラクト(すなわち、HBV−shmiR1からHBV−shmiR16、HBV−shmiRx3−v1、及びHBV−shmiRx3−v2と称するddRNAiコンストラクト)をウイルス生産用アデノウイルス(AdV)コンストラクト(Vector Biolabs社、ペンシルバニア州モルバーン)中にサブクローン化することによって、シングル及びトリプルのshmiR AdVベクターを作製する。
実施例1に記載のddRNAi発現コンストラクト(すなわち、HBV−shmiR1からHBV−shmiR16、HBV−shRNA1−HBV−shRNA16、HBV−shmiRx3−v1、HBV−shmiRx3−v2、及びHBV−shRNAx3−v1と称するddRNAiコンストラクト)をウイルス生産用アデノウイルス(AdV)コンストラクト(Vector Biolabs社、ペンシルバニア州モルバーン)中にサブクローン化することによって、シングル及びトリプルのshmiRまたはshRNAのAdVベクターを作製した。
実施例1のトリプルHBV shmiR ddRNAiコンストラクトをscAAV2骨格中にサブクローン化することによって、本開示の3つのshmiRを発現する自己相補的なアデノ随伴ウイルス2型(scAAV2)プラスミドを作製する。
HBV−shmiRx3−v1と称する実施例1のトリプルHBV shmiR ddRNAiコンストラクトをssAAV8の骨格中にサブクローン化することによって、本開示の3つのshmiRを発現する一本鎖アデノ随伴ウイルス2型(ssAAV2)プラスミドを作製した。同様に、HBV−shRNAx3−v1と称する実施例1のトリプルHBV shRNA ddRNAiコンストラクトをssAAV2またはscAAV2の骨格中にサブクローン化することによって、HBV−shRNAx3−v1のshmiRに対応する3つのshRNAを発現するssAAV8及び自己相補的アデノ随伴ウイルス2型(scAAV2)プラスミドを作製した。図5に示すように、組換えAAV一本鎖DNAゲノムとして発現するようにDNAを設計した。
scAAV−HBV−shmiRx3−v1及びscAAV−HBV−shmiRx3−v2と称するscAAV shmiR発現粒子の、(i)HBVウイルス転写物の発現、(ii)細胞外HBsAg及びHBeAg、(iii)細胞外及び細胞内HBV DNA、及び(iv)cccDNAの形成に及ぼすインビボの効果を、新規にHBV接種により感染させたPXBマウスモデルにおいて決定する。
scAAV−HBV−shmiRx3−v1及びscAAV−HBV−shmiRx3−v2と称するscAAV shmiR発現粒子を実施例7にしたがって作製する。
(i)−1日(すなわちHBV接種後27日)時点で体重が15g以上である;
(ii)−7日(すなわちHBV接種後21日)時点で血清HBV DNA濃度が少なくとも1.0E+6コピー数/mLである;及び
(iii)−7日(すなわちHBV接種後21日)時点でh−Albの測定値が10mg/mL以上である。
第1群: 200μlのシングルボーラスの生理食塩水のみ;
第2群:IV注射によって尾静脈に送達される2.0E+13(vg/kg)のssAAV−HBV−shmiRx3−v1ウイルス粒子を含有する200μlのシングルボーラスの生理食塩水;及び
第3群:IV注射によって尾静脈に送達される2.0E+13(vg/kg)のscAAV−HBV−shmiRx3−v2ウイルス粒子を含有する200μlのシングルボーラスの生理食塩水。
(図5に示すような)抗HBV shmiRまたはshRNA発現AAV粒子のインビボの効果を、新規にHBV接種により感染させたPXBキメラマウスモデルにおいて決定した。様々なHBVのパラメーターの阻害を評価した:(i)HBVウイルス転写物の発現、(ii)細胞外HbsAg、HBcAg、及びHBeAg、(iii)細胞外及び細胞内HBV DNA、及び(iv)cccDNAの形成。
(1)HBV−shRNAx3−v1を含有するssAAV8(ssAAV8−HBV−shRNAx3−v1);
(2)HBV−shRNAx3−v1を含有するscAAV8(scAAV8−HBV−shRNAx3−v1):及び
(3)HBV−shmiRx3−v1を含有するssAAV8(ssAAV8−HBV−shmiRx3−v1)。
キメラPXBマウス(PXBマウス(登録商標))をPhoenixBio社から入手した。すべてのマウスは、実験の間中、温度23±5℃、湿度55±25%下で個別に収容し、12時間の明暗サイクルに置き、自由に餌と水を取らせた。肝細胞移植の約10週間後にヒト血清アルブミンの測定を使用して、開始時の肝臓が少なくとも80%のヒト肝細胞から構成されることを確実にした。ヒト肝細胞の組成のこの閾値を通過したすべてのキメラ動物をHBV遺伝子型Cに感染させ、4週間インキュベートして、ベースラインのHBV感染を作った。ベースラインのHBV感染を決定するために、マウスから−28日目、−21日目、−14日目、及び−7日目(すなわち、それぞれ接種後0日目、7日目、14日目、及び21日目)に採血し、ヒトアルブミン(h−Alb)濃度、ならびにHBV DNA、HBsAg、及びHBeAgの血清濃度を決定した。これらは、試験動物中の肝臓損傷の検出を可能とする。有害な反応は検出されなかった。
(i)−1日(すなわちHBV接種後27日)時点で体重が15g以上であった;
(ii)−7日(すなわちHBV接種後21日)時点で血清HBV DNA濃度が少なくとも1.0E+6コピー数/mLであった;及び
(iii)−7日(すなわちHBV接種後21日)時点でh−Alb測定値が10mg/mL以上であった。
簡潔性のために、scAAV8−HBV−shRNAx3−v1及びssAAV8−HBV−shmiRx3−v1について得られた鍵となるデータポイントのみを提示する。
Claims (43)
- ショートヘアピン型マイクロRNA(shmiR)をコードするDNA配列を含む核酸であって、前記shmiRが、
少なくとも17ヌクレオチド長のエフェクター配列;
エフェクター相補配列;
ステムループ配列;及び
プライマリーマイクロRNA(pri−miRNA)主鎖;
を含み、前記エフェクター配列は、配列番号1〜10、38、40、及び42のいずれか1つに示すRNA転写物に実質的に相補的である、前記核酸。 - 前記shmiRが、
配列番号11に示すエフェクター配列、及び配列番号12に示すエフェクター相補配列を含んでいるshmiR;
配列番号13に示すエフェクター配列、及び配列番号14に示すエフェクター相補配列を含んでいるshmiR;
配列番号15に示すエフェクター配列、及び配列番号16に示すエフェクター相補配列を含んでいるshmiR;
配列番号17に示すエフェクター配列、及び配列番号18に示すエフェクター相補配列を含んでいるshmiR;
配列番号19に示すエフェクター配列、及び配列番号20に示すエフェクター相補配列を含んでいるshmiR;
配列番号21に示すエフェクター配列、及び配列番号22に示すエフェクター相補配列を含んでいるshmiR;
配列番号23に示すエフェクター配列、及び配列番号24に示すエフェクター相補配列を含んでいるshmiR;
配列番号25に示すエフェクター配列、及び配列番号26に示すエフェクター相補配列を含んでいるshmiR;
配列番号27に示すエフェクター配列、及び配列番号28に示すエフェクター相補配列を含んでいるshmiR;
配列番号29に示すエフェクター配列、及び配列番号30に示すエフェクター相補配列を含んでいるshmiR;
配列番号31に示すエフェクター配列、及び配列番号32に示すエフェクター相補配列を含んでいるshmiR;
配列番号33に示すエフェクター配列、及び配列番号34に示すエフェクター相補配列を含んでいるshmiR;
配列番号35に示すエフェクター配列、及び配列番号36に示すエフェクター相補配列を含んでいるshmiR;
配列番号37に示すエフェクター配列、及び配列番号38に示すエフェクター相補配列を含んでいるshmiR;
配列番号39に示すエフェクター配列、及び配列番号40に示すエフェクター相補配列を含んでいるshmiR;及び
配列番号41に示すエフェクター配列、及び配列番号42に示すエフェクター相補配列を含んでいるshmiR
からなる群から選択される、請求項1に記載の核酸。 - 前記shmiRが、5’から3’の方向に、
前記pri−miRNA主鎖の5’隣接配列;
前記エフェクター相補配列;
前記ステムループ配列;
前記エフェクター配列;及び
前記pri−miRNA主鎖の3’隣接配列
を含んでいる、請求項1または2に記載の核酸。 - 前記ステムループ配列が、配列番号75に示す配列である、請求項1〜3のいずれか1項に記載の核酸。
- 前記pri−miRNA主鎖が、pri−miR−30a主鎖である、請求項1〜4のいずれか1項に記載の核酸。
- 前記pri−miRNA主鎖の前記5’隣接配列が、配列番号76に示すものであり、前記pri−miRNA主鎖の前記3’隣接配列が、配列番号77に示すものである、請求項3〜5のいずれか1項に記載の核酸。
- 前記shmiRが、配列番号43〜58のいずれか1つに示す配列を含んでいる、請求項3〜5のいずれか1項に記載の核酸。
- 前記shmiRをコードする前記DNA配列が、配列番号59〜74のいずれか1つに示すものである、請求項1〜7のいずれか1項に記載の核酸。
- 複数の核酸であって、
(a)請求項1〜8のいずれか1項に記載の少なくとも1つの核酸、及び
(b)少なくとも1つのさらなる核酸であって、
(i)請求項1〜8のいずれか1項に記載の核酸;または
(ii)少なくとも17ヌクレオチド長のエフェクター配列及びエフェクター相補配列を含むショートヘアピン型RNA(shRNA)をコードするDNA配列を含む核酸であって、前記エフェクター配列は、配列番号1〜10、38、40、及び42のいずれか1つに示すRNA転写物に実質的に相補的である、前記核酸
から選択される前記少なくとも1つのさらなる核酸
を含み、
前記(a)の核酸によってコードされる前記shmiR及び前記(b)の核酸によってコードされる前記shmiRまたはshRNAが異なるエフェクター配列を含んでいる、
前記複数の核酸。 - 請求項9の(b)(ii)で規定される前記核酸が、
配列番号11に示すエフェクター配列、及び配列番号12に示すエフェクター相補配列を含んでいるshRNA;
配列番号13に示すエフェクター配列、及び配列番号14に示すエフェクター相補配列を含んでいるshRNA;
配列番号15に示すエフェクター配列、及び配列番号16に示すエフェクター相補配列を含んでいるshRNA;
配列番号17に示すエフェクター配列、及び配列番号18に示すエフェクター相補配列を含んでいるshRNA;
配列番号19に示すエフェクター配列、及び配列番号20に示すエフェクター相補配列を含んでいるshRNA;
配列番号21に示すエフェクター配列、及び配列番号22に示すエフェクター相補配列を含んでいるshRNA;
配列番号23に示すエフェクター配列、及び配列番号24に示すエフェクター相補配列を含んでいるshRNA;
配列番号25に示すエフェクター配列、及び配列番号26に示すエフェクター相補配列を含んでいるshRNA;
配列番号27に示すエフェクター配列、及び配列番号28に示すエフェクター相補配列を含んでいるshRNA;
配列番号29に示すエフェクター配列、及び配列番号30に示すエフェクター相補配列を含んでいるshRNA;
配列番号31に示すエフェクター配列、及び配列番号32に示すエフェクター相補配列を含んでいるshRNA;
配列番号33に示すエフェクター配列、及び配列番号34に示すエフェクター相補配列を含んでいるshRNA;
配列番号35に示すエフェクター配列、及び配列番号36に示すエフェクター相補配列を含んでいるshRNA;
配列番号37に示すエフェクター配列、及び配列番号38に示すエフェクター相補配列を含んでいるshRNA;
配列番号39に示すエフェクター配列、及び配列番号40に示すエフェクター相補配列を含んでいるshRNA;及び
配列番号41に示すエフェクター配列、及び配列番号42に示すエフェクター相補配列を含んでいるshRNA
からなる群から選択されるshRNAをコードする、請求項9に記載の複数の核酸。 - 請求項9の(b)(ii)で規定される前記shRNAが、前記エフェクター配列と前記エフェクター相補配列との間に位置するステムループ配列を含んでいる、請求項9または10に記載の複数の核酸。
- 請求項1〜8のいずれか1項に記載の核酸または請求項9〜11のいずれか1項に記載の複数の核酸を含んでいる、DNA指向性RNA干渉(ddRNAi)コンストラクト。
- 請求項1〜8のいずれか1項に記載の少なくとも2つの核酸を含み、前記核酸のそれぞれが異なるshmiRをコードする、請求項12に記載のddRNAiコンストラクト。
- 請求項1〜8のいずれか1項に記載の少なくとも3つの核酸を含み、前記核酸のそれぞれが異なるshmiRをコードする、請求項12または13に記載のddRNAiコンストラクト。
- 前記ddRNAiコンストラクトが、5’から3’の方向に、
(a)配列番号48に示す配列を含むかまたはそれからなるshmiRをコードする核酸;
(b)配列番号57に示す配列を含むかまたはそれからなるshmiRをコードする核酸;及び
(c)配列番号54に示す配列を含むかまたはそれからなるshmiRをコードする核酸
を含んでいる、請求項14に記載のddRNAiコンストラクト。 - 前記ddRNAiコンストラクトが、5’から3’の方向に、
(a)配列番号64に示す配列を含むかまたはそれからなる核酸;
(b)配列番号73に示す配列を含むかまたはそれからなる核酸;及び
(c)配列番号70に示す配列を含むかまたはそれからなる核酸
を含んでいる、請求項14または15に記載のddRNAiコンストラクト。 - 前記ddRNAiコンストラクトが、5’から3’の方向に、
(a)配列番号48に示す配列を含むかまたはそれからなるshmiRをコードする核酸;
(b)配列番号49に示す配列を含むかまたはそれからなるshmiRをコードする核酸;及び
(c)配列番号54に示す配列を含むかまたはそれからなるshmiRをコードする核酸
を含んでいる、請求項14に記載のddRNAiコンストラクト。 - 前記ddRNAiコンストラクトが、5’から3’の方向に、
(a)配列番号64に示す配列を含むかまたはそれからなる核酸;
(b)配列番号65に示す配列を含むかまたはそれからなる核酸;及び
(c)配列番号70に示す配列を含むかまたはそれからなる核酸
を含んでいる、請求項14または17に記載のddRNAiコンストラクト。 - 前記ddRNAiコンストラクトが、
請求項1〜8のいずれか1項に記載の少なくとも1つの核酸;及び
請求項9〜11のいずれか1項の(b)(ii)で規定される少なくとも1つの核酸
を含んでいる、請求項12に記載のddRNAiコンストラクト。 - 前記ddRNAiコンストラクトが、
それぞれが異なるshmiRをコードする、請求項1〜8のいずれか1項に記載の少なくとも2つの核酸;及び
請求項9〜11のいずれか1項の(b)(ii)で規定される少なくとも1つの核酸
を含んでいる、請求項12または19に記載のddRNAiコンストラクト。 - 前記ddRNAiコンストラクトが、5’から3’の方向に、
(a)配列番号48に示す配列を含むかまたはそれからなるshmiRをコードする核酸;
(b)配列番号39に示すエフェクター配列、及び配列番号40に示すエフェクター相補配列を含んでいるshRNAをコードする核酸;及び
(c)配列番号54に示す配列を含むかまたはそれからなるshmiRをコードする核酸、
を含んでいる、請求項20に記載のddRNAiコンストラクト。 - shmiRをコードする前記または各核酸の上流のRNA pol IIIプロモーター、及びshRNAをコードする前記または各核酸の上流のRNA pol IIIプロモーターを含んでいる、請求項12〜21のいずれか1項に記載のddRNAiコンストラクト。
- 前記または各RNA pol IIIプロモーターが、U6プロモーター及びH1プロモーターから選択される、請求項22に記載のddRNAiコンストラクト。
- 前記または各RNA pol IIIプロモーターが、U6−9プロモーター、U6−1プロモーター、及びU6−8プロモーターから選択されるU6プロモーターである、請求項22または23に記載のddRNAiコンストラクト。
- 前記ddRNAiコンストラクトが、5’から3’の方向に、
(a)配列番号64に示す配列を含むかまたはそれからなる核酸の上流のU6−9プロモーター;
(b)配列番号73に示す配列を含むかまたはそれからなる核酸の上流のU6−1プロモーター;及び
(c)配列番号70に示す配列を含むかまたはそれからなる核酸の上流のU6−8プロモーター
を含んでいる、請求項24に記載のddRNAiコンストラクト。 - 前記ddRNAiコンストラクトが、5’から3’の方向に、
(a)配列番号64に示す配列を含むかまたはそれからなる核酸の上流のU6−9プロモーター;
(b)配列番号65に示す配列を含むかまたはそれからなる核酸の上流のU6−1プロモーター;及び
(c)配列番号70に示す配列を含むかまたはそれからなる核酸の上流のU6−8プロモーター
を含んでいる、請求項24に記載のddRNAiコンストラクト。 - 請求項12〜26のいずれか1項に記載のddRNAiコンストラクトを含んでいる、発現ベクター。
- 複数の発現ベクターであって、各発現ベクターが、1つ以上のshmiR及び/またはshRNAを発現できる請求項12〜27のいずれか1項に記載のddRNAiコンストラクトを含んでいる、前記複数の発現ベクター。
- 前記または各発現ベクターが、プラスミドまたはミニサークルである、請求項27に記載の発現ベクターまたは請求項28に記載の複数の発現ベクター。
- 前記または各発現ベクターが、アデノ随伴ウイルス(AAV)ベクター、レトロウイルスベクター、アデノウイルス(AdV)ベクター、及びレンチウイルス(LV)ベクターからなる群から選択されるウイルスベクターである、請求項27に記載の発現ベクターまたは請求項28に記載の複数の発現ベクター。
- 請求項12〜26のいずれか1項に記載のDNA指向性RNA干渉(ddRNAi)コンストラクト、または請求項27、29もしくは30に記載の発現ベクター、または請求項28〜30のいずれか1項に記載の複数の発現ベクターを含む、組成物。
- さらに、1種以上の製薬上許容される担体を含んでいる、請求項31に記載の組成物。
- HBV感染を治療するための公知の1つ以上の他の治療剤をさらに含む、請求項31または31に記載の組成物。
- HBV感染を治療するための公知の前記1つ以上の他の治療剤が、エンテカビル、テノホビル、ラミブジン、アデホビル、及びPEG化インターフェロンからなる群から選択される、請求項33に記載の組成物。
- 対象のB型肝炎ウイルス(HBV)感染を治療する方法であって、前記対象に、治療有効量の、請求項1〜8のいずれか1項に記載の核酸、または請求項9〜11のいずれか1項に記載の複数の核酸、または請求項12〜26のいずれか1項に記載のddRNAiコンストラクト、または請求項27、29もしくは請求項30に記載の発現ベクター、または請求項28〜30のいずれか1項に記載の複数の発現ベクター、または請求項31〜34のいずれか1項に記載の組成物を投与することを含んでいる、前記方法。
- 前記対象が、急性HBV感染に苦しんでいる、請求項35に記載の方法。
- 前記対象が、慢性HBV感染に苦しんでいる、請求項35に記載の方法。
- B型肝炎ウイルス(HBV)に感染している対象におけるB型肝炎ウイルス負荷を低下させる方法であって、前記対象に、治療有効量の、請求項1〜8のいずれか1項に記載の核酸、または請求項9〜11のいずれか1項に記載の複数の核酸、または請求項12〜26のいずれか1項に記載のddRNAiコンストラクト、または請求項27、29もしくは30に記載の発現ベクター、または請求項28〜30のいずれか1項に記載の複数の発現ベクター、または請求項31〜34のいずれか1項に記載の組成物を投与することを含んでいる、前記方法。
- B型肝炎ウイルス(HBV)感染に苦しむ対象のHBV感染に関連する症状の重症度を軽減する方法であって、前記対象に、治療有効量の、請求項1〜8のいずれか1項に記載の核酸、または請求項9〜11のいずれか1項に記載の複数の核酸、または請求項12〜26のいずれか1項に記載のddRNAiコンストラクト、または請求項27、29もしくは30に記載の発現ベクター、または請求項28〜30のいずれか1項に記載の複数の発現ベクター、または請求項31〜34のいずれか1項に記載の組成物を投与することを含んでいる、前記方法。
- B型肝炎ウイルス(HBV)に感染した対象のHBV感染力(infectivity)を低下させる方法であって、前記対象に、治療有効量の、請求項1〜8のいずれか1項に記載の核酸、または請求項9〜11のいずれか1項に記載の複数の核酸、または請求項12〜26のいずれか1項に記載のddRNAiコンストラクト、または請求項27、29もしくは30に記載の発現ベクター、または請求項28〜30のいずれか1項に記載の複数の発現ベクター、または請求項31〜34のいずれか1項に記載の組成物を投与することを含んでいる、前記方法。
- 1つ以上のHBV遺伝子の発現を阻害または低下させることを含んでいる、請求項33〜40のいずれか1項に記載の方法。
- 請求項1〜8のいずれか1項に記載の核酸、または請求項9〜11のいずれか1項に記載の複数の核酸、または請求項12〜26のいずれか1項に記載のddRNAiコンストラクト、または請求項27、29もしくは30に記載の発現ベクター、または請求項28〜30のいずれか1項に記載の複数の発現ベクター、または請求項31または32に記載の組成物が、HBV感染の治療用のさらなる治療剤と共に投与される、請求項33〜41のいずれか1項に記載の方法。
- 前記HBV感染の治療用のさらなる治療剤が、エンテカビル、テノホビル、ラミブジン、アデホビル、及びPEG化インターフェロンからなる群から選択される、請求項42に記載の方法。
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