JP7171433B2 - Ｈｅｒ－２発現固形腫瘍の処置のための組成物および方法 - Google Patents

Description

関連出願への相互参照
本願は、２０１５年１０月３０日に出願された米国仮出願第６２／２４８，９６４号の利益を主張し、その全体が本明細書中に参照によって組み込まれる。

分野
本開示は、ＨＥＲ２の細胞外（ＥＣ）ドメインおよび膜貫通（ＴＭ）ドメインを発現する組換えアデノウイルス、およびＨＥＲ２陽性癌処置のためのその使用に関する。

背景
ＨＥＲ２受容体チロシンキナーゼは、膜貫通受容体の上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）ファミリーのメンバーである。ＨＥＲ２（ＥＧＦＲ２、ＥＲＢＢ２、またはｎｅｕとしても公知）は、乳癌および多数の他のタイプの癌で過剰発現する（Ｓｌａｍｏｎら，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４４：７０７－７１２，１９８９）。Ｈｅｒ２の過剰発現は、ＨＥＲ２陽性乳房腫瘍に関連する侵襲的成長および臨床転帰の不良を意味している（Ｓｌａｍｏｎら，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３５：１７７－１８２，１９８７）。

ＨＥＲ２タンパク質は、３つのドメイン（細胞外（ＥＣ）ドメイン、膜貫通（ＴＭ）ドメイン、および細胞内（ＩＣ）ドメイン）を有し、腫瘍細胞に、その成長を促進し、細胞死を阻害するためのシグナルを送る。ＨＥＲ２を過剰発現する腫瘍は、侵襲性がより高い疾患であり、再発率がより高く、生存率が低い。ＦＤＡ承認された抗癌剤であるトラスツズマブ（ハーセプチン（商標））、ペルツズマブ（パージェタ（商標））、およびａｄｏ－トラスツズマブ・エムタンシン（カドサイラ（商標））は、ＨＥＲ２タンパク質の細胞外ドメインの２つの個別の小部分のうちの１つをそれぞれ認識するモノクローナル抗体である。これらのモノクローナル抗体は、効果を得るために繰り返し投与されなければならないが、ＨＥＲ２を発現する乳房腫瘍、胃腫瘍、および胃食道接合部腫瘍の患者において生存期間を延ばし、疾患の進行を低下または遅延させることが示されている。
トラスツズマブ、ペルツズマブ、およびａｄｏ－トラスツズマブ・エムタンシンは、いくつかの癌におけるその有効性にもかかわらず、誰にでも効き目があるわけではなく、有効である場合でさえ、一定期間後に効き目がなくなり得る。これらのモノクローナル抗体を、有利な治療効果を得るために３週間毎に継続して投与しなければならならず、患者は相当な不便および費用を負わされる。さらに、トラスツズマブは、単剤として投与した患者の３～７％における心機能の低下（心毒性）に関連しており、いくつかのタイプの化学療法と組み合わせて投与した場合、およそ２７％に増加する。

Ｓｌａｍｏｎら，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４４：７０７－７１２，１９８９ Ｓｌａｍｏｎら，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３５：１７７－１８２，１９８７

概要
ヒトＨＥＲ２タンパク質のＥＣドメインおよびＴＭドメイン（ＨＥＲ２ＥＣＴＭ）およびアデノウイルスタイプ３５ファイバータンパク質をコードする組換えアデノウイルスタイプ５ベクターを本明細書中に開示する。ＨＥＲ２ＥＣＴＭおよびＡｄ３５ファイバータンパク質（本明細書中で、「Ａｄ５ｆ３５ＨＥＲ２ＥＣＴＭ」、「ＡｄＨＥＲ２ＥＣＴＭ」、または「ＡｄＨＥＲ２」という）を発現する組換えアデノウイルス、ならびにＨＥＲ２ＥＣＴＭ発現組換えアデノウイルスで形質導入された単離された樹状細胞（本明細書中で「Ａｄ５ｆ３５ＨＥＲ２ＥＣＴＭ ＤＣ」、「ＡｄＨＥＲ２ＥＣＴＭ ＤＣ」、または「ＡｄＨＥＲ２ ＤＣ」という）も開示する。Ａｄ３５ファイバータンパク質が発現すると、組換えアデノウイルスの、樹状細胞および他の造血細胞に感染する能力が有意に増加する。組換えＨＥＲ２ＥＣＴＭ発現アデノウイルスまたは組換えＨＥＲ２ＥＣＴＭ発現アデノウイルスで形質導入された樹状細胞を含む組成物を使用して、被験体（ＨＥＲ２陽性腫瘍を有する被験体など）におけるＨＥＲ２特異的免疫応答を誘発することができる。

ヒトＨＥＲ２のＥＣドメインおよびＴＭドメインならびにＡｄ３５ファイバータンパク質をコードする組換えアデノウイルスベクターを本明細書中に提供する。いくつかの実施形態では、ベクターのヌクレオチド配列は、配列番号１を含むか、配列番号１から本質的になるか、配列番号１からなる（例えば、Ａｄ５ｆ３５ＨＥＲ２ＥＣＴＭベクター）。組換えアデノウイルスベクターでの単離された細胞の形質転換によって産生された組換えアデノウイルスも提供する。組換えアデノウイルスで形質導入された単離された樹状細胞を含む組成物をさらに提供する。いくつかの例では、組成物は、１つまたは複数のＡＢ同種血漿、薬学的に許容され得るキャリア、およびアジュバントをさらに含む。

ヒトＨＥＲ２のＥＣドメインおよびＴＭドメインならびにＡｄ３５ファイバータンパク質を発現する組換えＡｄ５で形質導入された単離された樹状細胞；およびＡＢ同種血漿を含む組成物も本明細書中に提供する。いくつかの実施形態では、組成物は、薬学的に許容され得るキャリア、アジュバント、またはその両方をさらに含む。

本明細書中に開示の組換えＨＥＲ２ＥＣＴＭ発現アデノウイルスで形質導入された単離された樹状細胞を含む組成物を投与することによる、被験体におけるＨＥＲ２特異的免疫応答を誘発する方法、および被験体におけるＨＥＲ２陽性癌を処置する方法をさらに提供する。いくつかの実施形態では、樹状細胞は、被験体から得た自家樹状細胞である。いくつかの例では、ＨＥＲ２陽性癌は、乳房、卵巣、頸部、結腸直腸、前立腺、腎細胞、膀胱、胃食道の癌、非小細胞肺癌、上衣腫、または肉腫である。

ＡＢ同種血漿を含む培養培地中で被験体から得た単球を培養することによって自家樹状細胞を調製する工程；ヒトＨＥＲ２のＥＣドメインおよびＴＭドメインならびにＡｄ３５ファイバータンパク質を発現する組換えＡｄ５で自家樹状細胞を形質導入する工程；および薬学的に許容され得るキャリア中に前記組換えアデノウイルスで形質導入された自家樹状細胞を含む組成物を被験体に投与する工程を含む、被験体におけるＨＥＲ２陽性癌を処置する方法も提供する。いくつかの実施形態では、組成物は、アジュバントをさらに含む。いくつかの例では、ＨＥＲ２陽性癌は、乳房、卵巣、頸部、結腸直腸、前立腺、腎細胞、膀胱、胃食道の癌、または非小細胞肺癌、上衣腫、もしくは肉腫である。

本明細書中に提供した方法のいくつかの実施形態では、被験体は、さらなる治療（照射、化学療法、他の抗癌免疫療法の実施（例えば、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＴＧＦβを標的にするチェックポイントインヒビター）、腫瘍崩壊ウイルス療法、または他の腫瘍抗原もしくはベクターベースの治療ワクチンなど）を受ける。
特定の実施形態では、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
被験体におけるＨＥＲ２陽性癌を処置する方法であって、
ＡＢ同種血漿を含む培養培地中で前記被験体から得た単球を培養することによって自家樹状細胞を調製する工程；
ヒトＨＥＲ２の細胞外（ＥＣ）ドメインおよび膜貫通（ＴＭ）ドメインならびにアデノウイルスタイプ３５（Ａｄ３５）ファイバータンパク質を発現する組換えアデノウイルスタイプ５（Ａｄ５）で前記自家樹状細胞を形質導入する工程；および
薬学的に許容され得るキャリア中に前記組換えアデノウイルスで形質導入された自家樹状細胞を含む組成物を前記被験体に投与する工程
を含む、方法。
（項目２）
前記ファイバータンパク質が、配列番号３のアミノ酸配列を含む、項目１に記載の方法。
（項目３）
前記組成物がアジュバントをさらに含む、項目１または項目２に記載の方法。
（項目４）
前記ＨＥＲ２陽性癌が、乳癌、卵巣癌、結腸直腸癌、前立腺癌、腎細胞癌、膀胱癌、胃食道癌、非小細胞肺癌、肉腫、または上衣腫である、項目１～３のいずれか１項に記載の方法。
（項目５）
前記癌が転移性である、項目４に記載の方法。
（項目６）
チェックポイントインヒビターを投与する工程をさらに含む、項目１～５のいずれか１項に記載の方法。
（項目７）
前記チェックポイントインヒビターが、抗細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ－４）剤、抗プログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ－１）剤、抗プログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）剤、抗Ｔ細胞イムノグロブリンおよびムチンドメイン３（ＴＩＭ－３）剤、または抗リンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ－３）剤である、項目６に記載の方法。
（項目８）
抗ＣＴＬＡ－４剤が、イピリムマブまたはトレメリムマブであり；
前記抗ＰＤ－１剤が、ペムブロリズマブ、ニボルマブ、またはＣＴ－０１１であり；または
前記抗ＰＤ－Ｌ１剤が、アベルマブまたはＭＥＤＩ４７３６である、項目７に記載の方法。
（項目９）
免疫抑制性サイトカインに特異的な抗体を投与する工程をさらに含む、項目１～８のいずれか１項に記載の方法。
（項目１０）
前記免疫抑制性サイトカインが、トランスフォーミング成長因子（ＴＧＦ）－β、インターロイキン（ＩＬ）－１３、またはＩＬ－１０である、項目９に記載の方法。
（項目１１）
調節性Ｔ細胞または骨髄性サプレッサー細胞を阻害するか枯渇させる薬剤を投与する工程をさらに含む、項目１～１０のいずれか１項に記載の方法。
（項目１２）
腫瘍崩壊ウイルスを投与する工程をさらに含む、項目１～１１のいずれか１項に記載の方法。
（項目１３）
腫瘍抗原特異的ワクチンを投与する工程をさらに含み、前記腫瘍抗原がＨＥＲ２ではない、項目１～１２のいずれか１項に記載の方法。
（項目１４）
放射線療法を施す工程、化学療法を施す工程、外科的切除を行う工程、β－マンノシルセラミドを投与する工程、またはその任意の組み合わせをさらに含む、項目１～１３のいずれか１項に記載の方法。
（項目１５）
ヒトＨＥＲ２の細胞外（ＥＣ）ドメインおよび膜貫通（ＴＭ）ドメインならびにアデノウイルスタイプ３５（Ａｄ３５）ファイバータンパク質をコードする組換えアデノウイルスベクターであって、前記ベクターのヌクレオチド配列が配列番号１を含む、組換えアデノウイルスベクター。
（項目１６）
単離された細胞を項目１５に記載の組換えアデノウイルスベクターで形質転換することによって産生された組換えアデノウイルス。
（項目１７）
項目１６に記載の組換えアデノウイルスで形質導入された単離された樹状細胞を含む組成物。
（項目１８）
ＡＢ同種血漿をさらに含む、項目１７に記載の組成物。
（項目１９）
組成物であって、
ヒトＨＥＲ２の細胞外（ＥＣ）ドメインおよび膜貫通（ＴＭ）ドメインならびにアデノウイルスタイプ３５（Ａｄ３５）ファイバータンパク質を発現する組換えアデノウイルスで形質導入された単離された樹状細胞；および
ＡＢ同種血漿
を含む、組成物。
（項目２０）
前記ファイバータンパク質が、配列番号３のアミノ酸配列を含む、項目１９に記載の組成物。
（項目２１）
薬学的に許容され得るキャリアをさらに含む、項目１７～２０のいずれか１項に記載の組成物。
（項目２２）
アジュバントをさらに含む、項目１７～２１のいずれか１項に記載の組成物。
（項目２３）
被験体におけるＨＥＲ２特異的免疫応答を誘発する方法であって、項目１７～２２のいずれか１項に記載の組成物を前記被験体に投与する工程を含む、方法。
（項目２４）
被験体におけるＨＥＲ２陽性癌を処置する方法であって、前記被験体に項目１７～２２のいずれか１項に記載の組成物を投与する工程を含む、方法。
（項目２５）
前記樹状細胞が、前記被験体から得た自家樹状細胞である、項目２３または項目２４に記載の方法。
（項目２６）
前記ＨＥＲ２陽性癌が、乳癌、卵巣癌、結腸直腸癌、前立腺癌、腎細胞癌、膀胱癌、胃食道癌、非小細胞肺癌、肉腫、または上衣腫である、項目２３～２５のいずれか１項に記載の方法。
（項目２７）
前記癌が転移性である、項目２６に記載の方法。
（項目２８）
チェックポイントインヒビターを投与する工程をさらに含む、項目２３～２７のいずれか１項に記載の方法。
（項目２９）
前記チェックポイントインヒビターが、抗細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ－４）剤、抗プログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ－１）剤、抗プログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）剤、抗Ｔ細胞イムノグロブリンおよびムチンドメイン３（ＴＩＭ－３）剤、または抗リンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ－３）剤である、項目２８に記載の方法。
（項目３０）
抗ＣＴＬＡ－４剤が、イピリムマブまたはトレメリムマブであり；
前記抗ＰＤ－１剤が、ペムブロリズマブ、ニボルマブ、またはＣＴ－０１１であり；または
前記抗ＰＤ－Ｌ１剤が、アベルマブまたはＭＥＤＩ４７３６である、項目２９に記載の方法。
（項目３１）
免疫抑制性サイトカインに特異的な抗体を投与する工程をさらに含む、項目２３～３０のいずれか１項に記載の方法。
（項目３２）
前記免疫抑制性サイトカインが、トランスフォーミング成長因子（ＴＧＦ）－β、インターロイキン（ＩＬ）－１３、またはＩＬ－１０である、項目３１に記載の方法。
（項目３３）
調節性Ｔ細胞または骨髄性サプレッサー細胞を阻害するか枯渇させる薬剤を投与する工程をさらに含む、項目２３～３２のいずれか１項に記載の方法。
（項目３４）
腫瘍崩壊ウイルスを投与する工程をさらに含む、項目２３～３３のいずれか１項に記載の方法。
（項目３５）
腫瘍抗原特異的ワクチンを投与する工程をさらに含み、前記腫瘍抗原がＨＥＲ２ではない、項目２３～３４のいずれか１項に記載の方法。
（項目３６）
放射線療法を施す工程、化学療法を施す工程、外科的切除を行う工程、またはその任意の組み合わせをさらに含む、項目２３～３５のいずれか１項に記載の方法。

本発明の前述および他の目的、特徴、および利点は、添付の図面を参照することにより、以下の詳細な説明からより明らかとなるであろう。

図１Ａ～１Ｃは、ヒトＨＥＲ２タンパク質の概略図を示す。ＨＥＲ２タンパク質は、細胞外（ＥＣ）ドメイン、膜貫通（ＴＭ）ドメイン、および細胞内（ＩＣ）ドメインを含む（図１Ａ）。ＨＥＲ２タンパク質を標的にする現在の治療抗体（トラスツズマブ（ハーセプチン（商標））、ペルツズマブ（パージェタ（商標））、およびａｄｏ－トラスツズマブ・エムタンシン（カドサイラ（商標））が含まれる）は、ＨＥＲ２ＥＣドメインの単一のエピトープに結合し、治療効果を得るために繰り返し投与されなければならない（図１Ｂ）。本明細書中に開示のＡｄＨＥＲ２ＥＣＴＭ樹状細胞ワクチンを、ポリクローナル抗ＨＥＲ２抗体応答を生じるように患者自身の免疫系を誘導し、それにより、ＨＥＲ２タンパク質の至る所の複数のエピトープに集合的に結合する抗体を産生するようにデザインする（図１Ｃ）。 図１Ａ～１Ｃは、ヒトＨＥＲ２タンパク質の概略図を示す。ＨＥＲ２タンパク質は、細胞外（ＥＣ）ドメイン、膜貫通（ＴＭ）ドメイン、および細胞内（ＩＣ）ドメインを含む（図１Ａ）。ＨＥＲ２タンパク質を標的にする現在の治療抗体（トラスツズマブ（ハーセプチン（商標））、ペルツズマブ（パージェタ（商標））、およびａｄｏ－トラスツズマブ・エムタンシン（カドサイラ（商標））が含まれる）は、ＨＥＲ２ＥＣドメインの単一のエピトープに結合し、治療効果を得るために繰り返し投与されなければならない（図１Ｂ）。本明細書中に開示のＡｄＨＥＲ２ＥＣＴＭ樹状細胞ワクチンを、ポリクローナル抗ＨＥＲ２抗体応答を生じるように患者自身の免疫系を誘導し、それにより、ＨＥＲ２タンパク質の至る所の複数のエピトープに集合的に結合する抗体を産生するようにデザインする（図１Ｃ）。 図１Ａ～１Ｃは、ヒトＨＥＲ２タンパク質の概略図を示す。ＨＥＲ２タンパク質は、細胞外（ＥＣ）ドメイン、膜貫通（ＴＭ）ドメイン、および細胞内（ＩＣ）ドメインを含む（図１Ａ）。ＨＥＲ２タンパク質を標的にする現在の治療抗体（トラスツズマブ（ハーセプチン（商標））、ペルツズマブ（パージェタ（商標））、およびａｄｏ－トラスツズマブ・エムタンシン（カドサイラ（商標））が含まれる）は、ＨＥＲ２ＥＣドメインの単一のエピトープに結合し、治療効果を得るために繰り返し投与されなければならない（図１Ｂ）。本明細書中に開示のＡｄＨＥＲ２ＥＣＴＭ樹状細胞ワクチンを、ポリクローナル抗ＨＥＲ２抗体応答を生じるように患者自身の免疫系を誘導し、それにより、ＨＥＲ２タンパク質の至る所の複数のエピトープに集合的に結合する抗体を産生するようにデザインする（図１Ｃ）。

図２は、Ａｄ５ｆ３５ＨＥＲ２ＥＣＴＭベクターのマップである。ベクターのヌクレオチド配列を、本明細書中に配列番号１として記載する。

図３は、樹状細胞トランスフェクションおよび成熟化条件の前臨床試験の概要である。各条件における樹状細胞の生存率および生成物の収量を、図４Ａおよび図４Ｂに示す。

図４Ａ～４Ｂは、各条件下でのトランスフェクション／成熟化後の樹状細胞の生存率（図４Ａ）および収量（図４Ｂ）を示すグラフである（図３に概要を示す）。

図５は、異なる条件にしたがって処理した樹状細胞中でのＨＥＲ２の発現を示すグラフである（図３に概要を示す）。

図６は、ＡｄＨＥＲ２ＥＣＴＭ ＤＣ第Ｉ相臨床試験デザインの略図である。この研究では、２つの患者コホートを逐次的に処置する（パートＩおよびパートＩＩ）。パートＩの患者は、任意のＨＥＲ２発現レベルを有し、事前のＨＥＲ２指向性治療（トラスツズマブなど）に対して未処置である。パートＩＩの被験体は、トラスツズマブ治療または類似の治療に失敗したＨＥＲ２発現レベル３＋の乳癌患者である。

図７は、ＡＢ同種血漿中で培養した場合のＨＥＲ２を発現する自家樹状細胞の百分率と比較した自家血漿中で培養した場合のＨＥＲ２を発現する自家樹状細胞（ＣＤ３４０）の百分率を示す表である。

図８Ａ～８Ｂは、用量コホート１、２、および３、ならびに拡大コホートについての臨床データをまとめた表である。パートＩ（図８Ａ）およびパートＩＩ（図８Ｂ）に参加した患者に関する結果は、臨床上の利点および抗腫瘍活性の証拠を示す。ＮＥＤ＝疾患の証拠なし；ＰＤ＝進行性疾患；ＮＲ＝応答なし；ｉｒＰＲ＝免疫関連部分奏効；ｉｒＳＤ＝免疫関連安定病態；ｉｒＣＲ＝免疫関連完全奏効． 図８Ａ～８Ｂは、用量コホート１、２、および３、ならびに拡大コホートについての臨床データをまとめた表である。パートＩ（図８Ａ）およびパートＩＩ（図８Ｂ）に参加した患者に関する結果は、臨床上の利点および抗腫瘍活性の証拠を示す。ＮＥＤ＝疾患の証拠なし；ＰＤ＝進行性疾患；ＮＲ＝応答なし；ｉｒＰＲ＝免疫関連部分奏効；ｉｒＳＤ＝免疫関連安定病態；ｉｒＣＲ＝免疫関連完全奏効．

図９Ａ～９Ｄは、循環腫瘍細胞（ＣＴＣ）と、ＡｄＨＥＲ２ＥＣＴＭ ＤＣワクチンを投与された臨床研究被験体の全生存との間の関連を示すグラフである。ＨＥＲ２ ＩＨＣ ２＋発現または３＋発現を有する被験体（Ｎ＝１５）は、１０ｍｌの末梢血あたり１１またはそれを超えるＨＥＲ２＋上皮細胞接着分子（ＥｐＣＡＭ）＋ＣＴＣが検出された場合に全生存期間がより短かった（図９Ａ）。１０ｍｌ血液あたり１１またはそれを超えるＨＥＲ２＋ＥｐＣＡＭ＋ＣＴＣ（図９Ｂ）またはＣＸＣＲ４＋ＥｐＣＡＭ＋ＣＴＣ（図９Ｃ）を有する非結腸直腸癌（ｎｏｎ－ＣＲＣ）被験体（Ｎ＝１１）は、全生存期間がより短かった（それぞれ、Ｐ＝０．００４６およびＰ＝０．００６７）。非ＣＲＣコホートでは、処置後にＨＥＲ２＋ＥｐＣＡＭ＋ＣＴＣが安定しているかまたは減少している患者（Ｎ＝９）は、ＯＳが改善する傾向があった（Ｐ＝０．０５８）（図９Ｄ）。 図９Ａ～９Ｄは、循環腫瘍細胞（ＣＴＣ）と、ＡｄＨＥＲ２ＥＣＴＭ ＤＣワクチンを投与された臨床研究被験体の全生存との間の関連を示すグラフである。ＨＥＲ２ ＩＨＣ ２＋発現または３＋発現を有する被験体（Ｎ＝１５）は、１０ｍｌの末梢血あたり１１またはそれを超えるＨＥＲ２＋上皮細胞接着分子（ＥｐＣＡＭ）＋ＣＴＣが検出された場合に全生存期間がより短かった（図９Ａ）。１０ｍｌ血液あたり１１またはそれを超えるＨＥＲ２＋ＥｐＣＡＭ＋ＣＴＣ（図９Ｂ）またはＣＸＣＲ４＋ＥｐＣＡＭ＋ＣＴＣ（図９Ｃ）を有する非結腸直腸癌（ｎｏｎ－ＣＲＣ）被験体（Ｎ＝１１）は、全生存期間がより短かった（それぞれ、Ｐ＝０．００４６およびＰ＝０．００６７）。非ＣＲＣコホートでは、処置後にＨＥＲ２＋ＥｐＣＡＭ＋ＣＴＣが安定しているかまたは減少している患者（Ｎ＝９）は、ＯＳが改善する傾向があった（Ｐ＝０．０５８）（図９Ｄ）。

配列表
添付の配列表に列挙した核酸配列およびアミノ酸配列を、連邦規則法典第３７巻§１．８２２に定義のヌクレオチド塩基の標準的な略称およびアミノ酸の三文字表記を使用して示す。各核酸配列について鎖を１つのみ示すが、表示の鎖を任意に参照することによって相補鎖が含まれると理解される。配列表を、ＡＳＣＩＩテキストファイル（２０１６年１０月３１日作成、６１．７ＫＢ）として提出し、この配列表は、本明細書中で参考として援用される。添付の配列表において、
配列番号１は、以下の特徴を有するＡｄ５ｆ３５ＨＥＲ２ＥＣＴＭベクターのヌクレオチド配列である：
ヌクレオチド１～１０３－５’逆位末端反復配列（ＩＴＲ）
ヌクレオチド６８３～１２７２－ＣＭＶプロモーター
ヌクレオチド１２７７～３３０４－ヒトＨＥＲ２ＥＣＴＭコード配列
ヌクレオチド３３０５～３６５１－ＢＧＨポリＡ
ヌクレオチド２８４３９～２９４７０－Ａｄ５／Ａｄ３５キメラファイバーコード配列
ヌクレオチド３２５６７～３２６３５－３’ＩＴＲ
配列番号２は、ヒトＨＥＲ２ＥＣＴＭのアミノ酸配列である。
配列番号３は、Ａｄ５テールドメインおよびＡｄ３５シャフトドメインおよびノブドメインを有するＡｄ５／Ａｄ３５キメラファイバータンパク質のアミノ酸配列である。

詳細な説明
Ｉ．略語
ＡＰＣ 抗原提示細胞
ＣＲＣ 結腸直腸癌
ＣＴ コンピュータ断層撮影
ＣＴＣ 循環腫瘍細胞
ＣＴＬＡ－４ 細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４
ＤＣ 樹状細胞
ＤＬＴ 用量制限毒性
ＥＣ 細胞外
ＥＧＦＲ 上皮成長因子受容体
ＥｐＣＡＭ 上皮細胞接着分子
ＦＩＳＨ 蛍光ｉｎ ｓｉｔｕハイブリッド形成
ＨＩ 熱失活
ＩＣ 細胞内
ｉＤＣ 未成熟樹状細胞
ＩＦＮ インターフェロン
ＩＨＣ 免疫組織化学
ＩＬ インターロイキン
ｉｒＣＲ 免疫関連完全奏効
ｉｒＰＤ 免疫関連進行性疾患
ｉｒＰＲ 免疫関連部分奏効
ｉｒＲＣ 免疫関連奏効基準
ｉｒＳＤ 免疫関連安定病態
ＩＴＲ 逆位末端反復配列
ＩＶ 静脈内
ＫＬＨ キーホールリンペットヘモシアニン
ＬＡＧ－３ リンパ球活性化遺伝子３
ＬＰＳ リポ多糖
ＬＶＥＦ 左室駆出分画
ＭＡｂ モノクローナル抗体
ｍＤＣ 成熟樹状細胞
ＭＦＩ 平均蛍光強度
ＭＨＣ 主要組織適合性遺伝子複合体
ＭＯＩ 感染多重度
ＭＴＤ 最大許容用量
ＮＥＤ 疾患の証拠なし
ＮＲ 奏効なし
ＮＳＣＬＣ 非小細胞性肺癌
ＯＲＲ 全奏効率
ＯＳ 全生存期間
ＰＤ 進行性疾患
ＰＤ－１ プログラム細胞死タンパク質１
ＰＤ－Ｌ１ プログラム死リガンド１
ＰＦＳ 無憎悪生存期間
ＳＡＥ 重度の有害事象
ＴＡＡ 腫瘍関連抗原
ＴＧＦ トランスフォーミング成長因子
ＴＩＭ－３ Ｔ細胞イムノグロブリンおよびムチンドメイン３
ＴＭ 膜貫通
ＴＴＰ 増殖抑制期間
ＶＰ ウイルス粒子

ＩＩ．用語および方法
別途記述がない限り、技術用語を、従来の用法にしたがって使用する。分子生物学における共通用語の定義を、Ｂｅｎｊａｍｉｎ Ｌｅｗｉｎ，Ｇｅｎｅｓ Ｖ，ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ ｂｙ Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，１９９４（ＩＳＢＮ ０－１９－８５４２８７－９）；Ｋｅｎｄｒｅｗら（ｅｄｓ．），Ｔｈｅ Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ ｂｙ Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｌｔｄ．，１９９４（ＩＳＢＮ ０－６３２－０２１８２－９）；およびＲｏｂｅｒｔ Ａ．Ｍｅｙｅｒｓ（ｅｄ．），Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：ａ Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ Ｄｅｓｋ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ，ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ ｂｙ ＶＣＨ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｉｎｃ．，１９９５（ＩＳＢＮ １－５６０８１－５６９－８）に見出すことができる。

本開示の種々の実施形態の再検討を容易にするために、特定の用語を以下に説明する。

アデノウイルス：線状二本鎖ＤＮＡゲノムおよび正二十面体キャプシドを有する無エンベロープウイルス。ヒトアデノウイルスには、現在６８の血清型が知られており、この血清型は７つの種（Ａ種、Ｂ種、Ｃ種、Ｄ種、Ｅ種、Ｆ種、およびＧ種）に分類されている。アデノウイルスの血清型の相違は、細胞親和性の相違および疾患タイプの相違に関連し、いくつかの血清型は、呼吸器疾患（主に、Ｂ種およびＣ種）、結膜炎（Ｂ種およびＤ種）、および／または胃腸炎（Ｆ種およびＧ種）を発症する。組換えアデノウイルスおよびアデノウイルスベクターを、一般に、遺伝子療法または治療ワクチン接種などにおいて異種遺伝子を細胞内に導入するために使用する。いくつかの場合、組換えアデノウイルスは、複製欠損である（複数ラウンドの複製が不可能である）。

アジュバント：抗原に対する免疫応答を非特異的に増強する物質またはビヒクル。アジュバントには、抗原が吸着されるミネラル（ミョウバン、水酸化アルミニウム、またはリン酸塩）の懸濁液；または抗原溶液を鉱油（例えば、フロイント不完全アジュバント）中に乳化し、時折、抗原性をさらに増強するために死滅させたマイコバクテリウム（フロイント完全アジュバント）を含む油中水型乳濁液が含まれ得る。免疫賦活性オリゴヌクレオチド（ＣｐＧモチーフを含むものなど）を、アジュバントとして使用することもできる（例えば、米国特許第６，１９４，３８８号；同第６，２０７，６４６号；同第６，２１４，８０６号；同第６，２１８，３７１号；同第６，２３９，１１６号；同第６，３３９，０６８号；同第６，４０６，７０５号；および同第６，４２９，１９９号を参照のこと）。アジュバントには、生体分子（共刺激分子など）も含まれる。生物学的アジュバントの例には、ＩＬ－２、ＲＡＮＴＥＳ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＴＮＦ－α、ＩＦＮ－γ、Ｇ－ＣＳＦ、ＬＦＡ－３、ＣＤ７２、Ｂ７－１、Ｂ７－２、ＯＸ－４０Ｌ、および４１ ＢＢＬが含まれる。本開示のいくつかの実施形態では、アジュバントは、天然に存在しないアジュバントである。

投与：選択された経路による被験体への組成物の導入。例えば、選択した経路が静脈内である場合、組成物を、被験体の静脈内への組成物の導入によって投与する。投与経路の例には、注射（皮下、筋肉内、皮内、腹腔内、および静脈内など）、経口経路、導管内経路、舌下経路、直腸経路、経皮経路、鼻腔内経路、膣経路、および吸入経路が含まれるが、これらに限定されない。本明細書中に開示の特定の実施形態では、投与経路は、皮下または筋肉内である。

同種の：同一の種に由来するが、抗原的に異なる個体、組織、または細胞をいう。ＡＢ同種血漿は、血液型ＡＢの健康な通常の（同種）ドナーから得た血漿である。ＡＢ血漿は、血液型Ａおよび血液型Ｂの両方に対する抗体を欠き、したがって、血漿レベルで血液型において普遍的に適用可能である。ＡＢ同種血漿は、単一のＡＢドナーまたはＡＢドナーのプールに由来し得る。血漿を試験し、感染性病原体（例えば、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、およびＨＩＶ）に対して陰性であることを確認する。本明細書中に開示の方法で使用されるＡＢ同種血漿は、熱失活されており（ＨＩ ＡＢ）、治療樹状細胞（ＤＣ）ワクチンの生成プロセスにおいて自家血漿（患者由来の血漿）の代わりに単球を成熟樹状細胞に培養するために使用される。

抗体：特定のアミノ酸配列を有するＢリンパ球系細胞によって産生されるイムノグロブリン分子。抗体は、特異的抗原（免疫原）によってヒトまたは他の動物内で誘起される。抗体は、いくつかの証明可能な方法での抗原との特異的反応によって特徴付けられ、抗体および抗原は、それぞれ、他方によって決定される。「抗体応答の誘発」は、抗原または他の分子が抗体の産生を誘導する能力をいう。

抗原：動物内での抗体の産生および／またはＣＤ４＋またはＣＤ８＋Ｔ細胞応答を刺激することができる化合物、組成物、または物質（動物内に注射または吸収される組成物が含まれる）。抗原は、特異的な体液性免疫または細胞性免疫の生成物と反応する（異種免疫原によって誘導される生成物が含まれる）。用語「抗原」には、全ての関連する抗原性エピトープが含まれる。「エピトープ」または「抗原決定基」は、Ｂ細胞および／またはＴ細胞が応答する抗原上の部位をいう。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、エピトープが主要組織適合性遺伝子複合体（ＭＨＣ）分子と併せて提示された場合にエピトープに応答する。

抗原提示細胞（ＡＰＣ）：主要組織適合性遺伝子複合体（ＭＨＣ）タンパク質と複合体を形成した抗原をその表面上に提示する細胞型。プロフェッショナルＡＰＣは、内在化抗原に対して非常に有能であり、この抗原をプロセシングし、次いで、ＭＨＣ分子に結合した抗原の小片（ペプチド）を細胞膜表面上に提示する。プロフェッショナルＡＰＣの３つの主なタイプには、ＤＣ、マクロファージ、および一定のＢ細胞が含まれる。ＤＣは、抗原提示範囲が最も広く、Ｔ細胞に提示するための抗原のプロセシングにおける最も重要なＡＰＣであり、Ｔ細胞は、そのＴ細胞受容体を使用して抗原－ＭＨＣ複合体を認識する。

自家：同一個体に由来すること。本開示の文脈では、被験体処置のために使用される「自家」ＤＣは、被験体を起源とするＤＣである。

膀胱癌：膀胱組織中に形成される癌。ほとんどの膀胱癌は、移行上皮癌（通常は膀胱の内壁を構成する細胞に発症する癌）である。他のタイプには、扁平上皮癌および腺癌が含まれる。扁平上皮癌および腺癌を形成する細胞は、慢性的な刺激および炎症の結果として膀胱の内壁で発達する。

乳癌：乳房組織の新生物状態であって、良性または悪性であり得る。最も一般的な乳癌型は、管癌である。腺管上皮内癌は、管の非侵襲性新生物状態である。小葉癌は、侵襲性疾患ではないが、癌腫発症の指標である。乳房の浸潤性（悪性）癌腫を、病期（Ｉ、ＩＩＡ、ＩＩＢ、ＩＩＩＡ、ＩＩＩＢ、およびＩＶ）に分類することができる。

癌：分化能を喪失して特徴的な退形成が生じ、成長が速く、周辺組織を侵襲し、転移し得る悪性新生物。例えば、前立腺癌は、前立腺組織中に生じるか前立腺組織から生じる悪性新生物であり、乳癌は、乳房組織中に生じるか乳房組織から生じる悪性新生物（管癌など）である。残存癌は、癌を減少させるか根絶するために被験体に施した任意の形態の処置後に被験体内に残存する癌である。転移性癌は、転移性癌が由来する、元の（原発性）癌の起源となる部位以外の体内の１つまたは複数の部位の癌である。

チェックポイントインヒビター：免疫応答の抑制で役割を果たすタンパク質を標的とする薬物クラス（典型的には、抗体）。免疫チェックポイントインヒビターには、例えば、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＴＩＭ－３、またはＬＡＧ－３を標的とする抗体が含まれる。

化学療法剤：異常細胞の成長によって特徴付けられる疾患の処置において治療有用性を有する任意の化学剤。かかる疾患には、腫瘍、新生物、および癌、ならびに乾癬などの過形成性の成長によって特徴付けられる疾患が含まれる。１つの実施形態では、化学療法剤は、ＨＥＲ２陽性癌（乳癌、胃癌、食道癌、卵巣癌、子宮内膜癌、胃がん、子宮癌、膵臓癌、前立腺癌、膀胱癌、結腸直腸癌、唾液腺癌、腎腺癌、乳腺癌腫、非小細胞性肺癌、または頭頸部癌腫など）の処置で使用される薬剤である。１つの実施形態では、化学療法剤は、放射性化合物である。当業者は、有益な化学療法剤を容易に同定することができる（例えば、Ｓｌａｐａｋ ａｎｄ Ｋｕｆｅ，Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｃｈａｐｔｅｒ ８６ ｉｎ Ｈａｒｒｉｓｏｎ’ｓ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｉｎｔｅｒｎａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，１４ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ；Ｐｅｒｒｙら，Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ，Ｃｈ．１７ ｉｎ Ａｂｅｌｏｆｆ，Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ ２ｎｄ ｅｄ．，(c) ２０００ Ｃｈｕｒｃｈｉｌｌ Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎｅ，Ｉｎｃ；Ｂａｌｔｚｅｒ，Ｌ．，Ｂｅｒｋｅｒｙ，Ｒ．（ｅｄｓ．）：Ｏｎｃｏｌｏｇｙ Ｐｏｃｋｅｔ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ，２ｎｄ ｅｄ．Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，Ｍｏｓｂｙ－Ｙｅａｒ Ｂｏｏｋ，１９９５；Ｆｉｓｃｈｅｒ，Ｄ．Ｓ．，Ｋｎｏｂｆ，Ｍ．Ｆ．，Ｄｕｒｉｖａｇｅ，Ｈ．Ｊ．（ｅｄｓ）：Ｔｈｅ Ｃａｎｃｅｒ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ Ｈａｎｄｂｏｏｋ，４ｔｈ ｅｄ．Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，Ｍｏｓｂｙ－Ｙｅａｒ Ｂｏｏｋ，１９９３を参照のこと）。多剤併用化学療法は、１つを超える癌処置剤の投与である。１つの例は、放射性化合物または化学物質と組み合わせて使用される、ＨＥＲ２に結合する抗体（またはイムノコンジュゲートもしくはＡＤＣ）の投与である。

キメラの：異なる起源の少なくとも２つの部分から構成されること。本開示の文脈では、「キメラファイバー」は、少なくとも２つの異なる血清型のアデノウイルスに由来するアミノ酸配列を有するアデノウイルスファイバータンパク質である。特定の実施形態では、キメラファイバーは、Ａｄ５テールドメインならびにＡｄ３５シャフトドメインおよびノブドメインから構成される。

結腸直腸癌：結腸および／または直腸に由来する癌。

接触：物理的に直接関連する配置；固体および液体の両方が含まれる。

細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ－４）：免疫チェックポイントとして免疫系を下方制御するように機能するＴ細胞表面上に見出されるタンパク質受容体。ＣＴＬＡ－４は、ＣＤ１５２としても公知である。

樹状細胞（ＤＣ）：一次免疫応答に関与する主要な（ｐｒｉｎｃｉｐｌｅ）プロフェッショナル抗原提示細胞（ＡＰＣ）。ＤＣは、その組成物の一部として、その細胞表面上に共刺激分子を発現するので、ＤＣはヘルパーＴ細胞応答の強力なアクチベーターである。その主な機能は、組織内の抗原を獲得し、リンパ系器官に移動し、抗原を提示してＴ細胞を活性化させることである。未成熟樹状細胞は、骨髄を起源とし、未成熟細胞として末梢に存在する。樹状細胞亜型には、形質細胞様樹状細胞および骨髄系樹状細胞が含まれる。

薬物：被験体において疾患または容態を処置、回復、または防止するために使用される任意の化合物。本明細書中のいくつかの実施形態では、薬物は、抗癌剤（例えば、抗有糸分裂剤または抗微小管剤などの細胞毒性薬）である。

上衣腫：脳室ならびに脳および脊髄の経路を裏打ちする上衣細胞から生じる稀なタイプの癌。

ファイバー：アデノウイルスファイバータンパク質は、細胞表面受容体への結合を媒介する三量体タンパク質である。ファイバータンパク質は、短いＮ末端テール、シャフトドメイン、およびＣ末端球状ノブドメインから構成される。本開示の文脈では、「Ａｄ３５ファイバータンパク質」は、少なくともノブドメインがＡｄ３５ファイバータンパク質由来のアミノ酸配列で構成されているアデノウイルスファイバータンパク質である。いくつかの例では、「Ａｄ３５ファイバータンパク質」は、Ａｄ３５シャフトドメインおよびＡｄ３５ノブドメインから構成される。さらなる他の例では、「Ａｄ３５ファイバータンパク質」は、実質的にまたは完全にＡｄ３５ファイバータンパク質である。特定の実施形態では、ファイバータンパク質は、Ａｄ５テールドメインならびにＡｄ３５シャフトドメインおよびＡｄ３５ノブドメインを有するキメラファイバーである。

胃食道癌：食道または胃を裏打ちする組織から生じる癌。

ＨＥＲ２：受容体チロシンキナーゼの上皮成長因子（ＥＧＦ）受容体ファミリーのメンバー。ＨＥＲ２は、細胞外（ＥＣ）ドメイン、膜貫通（ＴＭ）ドメイン、および細胞内（ＩＣ）ドメインを含む膜貫通タンパク質である（図１Ａを参照のこと）。このタンパク質は、それ自体のリガンド結合ドメインを持たず、したがって、成長因子に結合できない。しかし、このタンパク質は、他のリガンド結合ＥＧＦ受容体ファミリーメンバーとは強固に結合してヘテロ二量体を形成し、それにより、リガンド結合を安定化し、下流シグナル伝達経路（マイトジェン活性化プロテインキナーゼおよびホスファチジルイノシトール－３キナーゼが関与する経路など）のキナーゼ媒介活性化を増強する。ＨＥＲ２遺伝子の増幅および／または過剰発現は、多数の癌（乳房腫瘍および卵巣腫瘍が含まれる）で報告されている。例えば、ＨＥＲ２遺伝子の増幅は、およそ２０～２５％の原発性乳癌で報告されている。ＨＥＲ２はまた、ｖ－ｅｒｂ－ｂ２赤芽球性白血病ウイルス癌遺伝子ホモログ２、神経／膠芽細胞腫由来癌遺伝子、上皮成長因子受容体２（ＥＧＦＲ２）、ＥＲＢＢ２、およびＨｅｒ－２／ｎｅｕとしても公知である。

ＨＥＲ２陽性癌：ＨＥＲ２を過剰発現する癌。ＨＥＲ２陽性癌の例には、乳癌、胃癌、食道癌、卵巣癌、子宮内膜癌、胃がん、子宮癌、膵臓癌、前立腺癌、膀胱癌、結腸直腸癌、唾液腺癌、腎腺癌、乳腺癌腫、非小細胞性肺癌、および頭頸部癌腫が含まれるが、これらに限定されない。

免疫応答：免疫系の細胞（Ｂ細胞、Ｔ細胞、または単球など）の刺激に対する応答。１つの実施形態では、応答は、特定の抗原に特異的である（「抗原特異的応答」）。１つの実施形態では、免疫応答は、Ｔ細胞応答（ＣＤ４^＋応答またはＣＤ８^＋応答など）である。別の実施形態では、応答は、Ｂ細胞応答であり、この応答により、特異的抗体が産生される。

単離された：「単離された」生物学的構成要素（核酸、タンパク質（抗体が含まれる）、またはオルガネラなど）は、前述の構成要素が天然に存在する環境（細胞など）中の他の生物学的構成要素（すなわち、他の染色体および染色体外のＤＮＡおよびＲＮＡ、タンパク質、ならびにオルガネラ）から実質的に分離または精製されている。「単離されている」核酸およびタンパク質には、標準的な精製方法によって精製された核酸およびタンパク質が含まれる。この用語はまた、宿主細胞内での組換え発現によって調製された核酸およびタンパク質ならびに化学合成された核酸を包含する。

リンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ－３）：活性化したＴ細胞、ナチュラルキラー細胞、Ｂ細胞、および形質細胞様樹状細胞上で発現されるイムノグロブリンスーパーファミリーの細胞表面タンパク質。ＬＡＧ－３は、Ｔ細胞活性の負の制御因子として機能する。ＬＡＧ－３は、ＣＤ２２３としても公知である。

単球：通常はリンパ節、脾臓、骨髄、および疎性結合組織で見出される単核の食細胞白血球。単球は、循環血液中の白血球の３～７％を構成する。適切な培養条件下では、末梢血由来の単球は、樹状細胞に分化することができる。

新形成、悪性腫瘍、癌、または腫瘍：新生物は、過剰な細胞分裂に起因する組織または細胞の異常な成長である。新生物の成長が腫瘍を生成し得る。個体内の腫瘍量は、「全身腫瘍組織量」であり、これは、腫瘍の数、体積、または重量として測定することができる。転移しない腫瘍を、「良性」という。周囲の組織に進入し、そして／または転移することができる腫瘍を、「悪性」という。

非小細胞肺癌：最も一般的なタイプの肺癌。非小細胞肺癌の主なタイプは３つあり、扁平上皮癌、大細胞癌、および腺癌である。

腫瘍崩壊ウイルス：癌細胞に優先的に感染して死滅させるウイルス（概説としては、Ｃｈｉｏｃｃａ ａｎｄ Ｒａｂｋｉｎ、Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｓ ２（４）：２９５－３００、２０１４を参照のこと）。

作動可能に連結された：第１の核酸配列が第２の核酸配列と機能的関係にある場合、第１の核酸配列は第２の核酸配列と作動可能に連結されている。例えば、プロモーターがコード配列の転写または発現に影響を及ぼす場合、プロモーターはコード配列に作動可能に連結されている。一般に、作動可能に連結されたＤＮＡ配列は、２つのタンパク質コード領域を連結する必要がある場合、同一の読み枠内で連続している。

卵巣癌：卵巣組織内に形成される癌。ほとんどの卵巣癌は、卵巣上皮癌（卵巣表面上の細胞に発症する癌）または悪性胚細胞腫瘍（卵細胞に発症する癌）のいずれかである。

医薬品：被験体または細胞に適切に投与された場合に所望の治療効果または予防効果を誘導することができる化学物質または組成物。

薬学的に許容され得るキャリア：有用な薬学的に許容され得るキャリアは従来より存在する。Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，ｂｙ Ｅ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎ，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ，１５ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，１９７５は、本明細書中に開示の抗体および抱合体の薬学的送達に適切な組成物および処方物を記載している。

一般に、キャリアの性質は、使用される特定の投与様式に依存するであろう。例えば、非経口処方物は、通常、ビヒクルとして薬学的におよび生理学的に許容され得る流体（水、生理食塩水、平衡塩類溶液、デキストロース水溶液、またはグリセロールなど）を含む注射液を含む。固体組成物（散剤、丸薬、錠剤、またはカプセルの形態など）のための従来の非毒性固体キャリアには、例えば、医薬品グレードのマンニトール、ラクトース、デンプン、またはステアリン酸マグネシウムが含まれ得る。生物学的に中性のキャリアに加えて、投与すべき薬学的組成物は、少量の非毒性補助剤（湿潤剤または乳化剤、防腐剤、およびｐＨ緩衝剤など（例えば、酢酸ナトリウムまたはソルビタンモノラウラート））を含むことができる。

血漿：血球が懸濁される血液の流体部分。血漿は、血漿タンパク質、無機塩、栄養素および気体、ならびにホルモンおよび酵素を含む透明で淡黄色の液体である。

疾患の防止、処置、または回復：疾患の「防止」は、疾患の完全な発症の抑制をいう。「処置」は、疾患または病的状態が発症し始めた後に疾患または病的状態の徴候または症状を回復させる（全身腫瘍組織量の低下または転移サイズの減少など）治療的介入をいう。「回復」は、癌などの疾患の徴候または症状の数または重症度の低下をいう。

プログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ－１）：Ｔ細胞の活性化の防止によって免疫系を下方制御するように免疫チェックポイントとして機能するイムノグロブリンスーパーファミリーに属する細胞表面受容体。ＰＤ－１は、Ｔ細胞およびプロＢ細胞上で発現し、２つのリガンド（ＰＤ－Ｌ１およびＰＤ－Ｌ２）に結合する。ＰＤ－１は、ＣＤ２７９としても公知である。

プログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）：免疫系の抑制で役割を果たすタイプＩ膜貫通タンパク質。ＰＤ－Ｌ１は、ＣＤ２７４およびＢ７－Ｈ１としても公知である。ＰＤ－Ｌ１の受容体はＰＤ－１である。

前立腺癌：一般に前立腺の腺に由来する悪性腫瘍。前立腺癌には、腺癌および小細胞癌が含まれる。多くの前立腺癌は、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）、前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）、ＰＳＭＡ（前立腺特異的膜抗原）、前立腺酸性ホスファターゼ（ＰＡＰ）、ならびに他の腫瘍抗原を発現する。

精製された：精製されたという用語は、絶対的に純粋であることを必要とせず；むしろ、相対語であることを意図する。したがって、例えば、精製された調製物は、ペプチドまたはタンパク質が、このペプチドまたはタンパク質の細胞内の天然環境における存在量より豊富である調製物である。１つの実施形態では、ペプチドまたはタンパク質が調製物のペプチドまたはタンパク質の総含有量の少なくとも５０％であるように調製物を精製する。実質的精製は、他のタンパク質または細胞構成要素からの精製を示す。実質的に精製されたタンパク質の純度は、少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または９８％である。したがって、１つの非限定的な具体例では、実質的に精製されたタンパク質は、他のタンパク質や細胞構成要素のうちの９０％を含まない。

組換え：組換え核酸、組換えタンパク質、または組換えウイルスは、天然に存在しない配列を有するか、本来は分離されている２つの配列セグメントの人為的組み合わせによって作製された配列を有する核酸、タンパク質、またはウイルスである。例えば、化学合成によるか、例えば、遺伝子工学技術による単離された核酸セグメントの人為的操作によってこの人為的組み合わせを行うことができる。

腎細胞癌：最も一般的なタイプの腎臓癌。腎臓内の尿細管の内壁に発症する。尿細管は、血液を濾過し、尿を生成する。腎細胞癌は、副腎腫、腎細胞腺癌、および腎細胞癌とも呼ばれる。

肉腫：結合組織または他の非上皮組織の悪性腫瘍。

配列同一性：アミノ酸または核酸配列の間の類似性は、配列間の類似性に関して示され、配列同一性ともいう。配列同一性は、しばしば同一率（または類似性もしくは相同性）に関して測定され；同一率が高いほど２つの配列はより類似している。ポリペプチドまたは核酸分子のホモログまたはバリアントは、標準的な方法を使用してアラインメントした場合、比較的高い程度の配列同一性を有するであろう。

比較のための配列のアラインメント法は、当該分野で周知である。種々のプログラムおよびアラインメントのアルゴリズムは、以下に記載されている：Ｓｍｉｔｈ ａｎｄ Ｗａｔｅｒｍａｎ，Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．２：４８２，１９８１；Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ ａｎｄ Ｗｕｎｓｃｈ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３，１９７０；Ｐｅａｒｓｏｎ ａｎｄ Ｌｉｐｍａｎ，Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ． ８５：２４４４，１９８８；Ｈｉｇｇｉｎｓ ａｎｄ Ｓｈａｒｐ，Ｇｅｎｅ ７３：２３７，１９８８；Ｈｉｇｇｉｎｓ ａｎｄ Ｓｈａｒｐ，ＣＡＢＩＯＳ ５：１５１，１９８９；Ｃｏｒｐｅｔら，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １６：１０８８１，１９８８；およびＰｅａｒｓｏｎ ａｎｄ Ｌｉｐｍａｎ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ． ８５：２４４４，１９８８．Ａｌｔｓｃｈｕｌら，Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔ．６：１１９，１９９４は、配列アラインメント法および相同性計算の詳細な検討事項を示している。

ＮＣＢＩ Ｂａｓｉｃ Ｌｏｃａｌ Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ Ｓｅａｒｃｈ Ｔｏｏｌ（ＢＬＡＳＴ）（Ａｌｔｓｃｈｕｌら，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３，１９９０）は、いくつかの供給元（国立生物工学情報センター（ＮＣＢＩ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ）およびインターネットが含まれる）から利用可能であり、配列解析プログラムｂｌａｓｔｐ、ｂｌａｓｔｎ、ｂｌａｓｔｘ、ｔｂｌａｓｔｎ、およびｔｂｌａｓｔｘと併せて使用する。このプログラムを使用して配列同一性を決定する方法についての説明は、インターネット上のＮＣＢＩウェブサイトで利用可能である。

ＨＥＲ２またはそのフラグメントに特異的に結合する抗体のＶＬまたはＶＨのホモログおよびバリアントは、典型的には、ＮＣＢＩ Ｂｌａｓｔ ２．０、デフォルトパラメータに設定したギャップ挿入ｂｌａｓｔｐを使用した抗体のアミノ酸配列との全長アラインメントによってカウントして、少なくとも約７５％（例えば、少なくとも約８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、および９９％）の配列同一性を有することによって特徴付けられる。約３０アミノ酸を超えるアミノ酸配列の比較のために、デフォルトパラメータ（ギャップ伸長コスト１１、および残基あたりのギャップコスト１）に設定したデフォルトＢＬＯＳＵＭ６２行列を用いたＢｌａｓｔ２配列関数を使用する。短いペプチド（およそ３０アミノ酸未満）をアラインメントする場合、デフォルトパラメータ（オープンギャップ９、伸長ギャップ１ペナルティ）に設定したＰＡＭ３０行列を用いたＢｌａｓｔ２配列関数を使用してアラインメントを行うべきである。この方法によって査定した場合、タンパク質の基準配列との類似性がさらに大きいほど、同一率が増加するであろう（少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％配列同一性など）。全配列未満を配列同一性について比較する場合、ホモログおよびバリアントは、典型的には、１０～２０アミノ酸のショートウィンドウに対して少なくとも８０％の配列同一性を有し、基準配列とのその類似性に応じて、少なくとも８５％または少なくとも９０％または９５％の配列同一性を有し得る。かかるショートウィンドウに対する配列同一性の決定方法は、インターネット上のＮＣＢＩウェブサイトで利用可能である。当業者は、これらの配列同一性の範囲をガイダンスのみを目的として提供しており；提供された範囲外で非常に有意なホモログを得ることができることが十分にあり得ると認識するであろう。

Ｔ細胞イムノグロブリンおよびムチンドメイン３（ＴＩＭ－３）：Ｔｈ１細胞上に発現する免疫チェックポイント受容体。ＴＩＭ－３は、Ｔｈ１および細胞傷害性Ｔ細胞応答の持続時間および規模を制限する。

治療有効量：指定された薬剤で処置される被験体、細胞、または培養物において所望の効果を達成するために十分な前述の薬剤の量。本開示の文脈では、ＡｄＨＥＲ２ＥＣＴＭ ＤＣワクチンの治療有効量は、臨床応答（例えば、免疫細胞集団の増加、ＨＥＲ２に特異的に結合する抗体の産生、または全身腫瘍組織量の測定可能な低下）によって測定した場合に、免疫応答が誘導される量である。

形質導入された：形質導入された細胞は、分子生物学技術によって核酸分子が導入された細胞である。本明細書中で使用される場合、形質導入という用語は核酸分子をかかる細胞内に導入することができる全ての技術（ウイルスベクターでのトランスフェクション、プラスミドベクターでの形質転換、ならびにエレクトロポレーション、リポフェクション、および粒子銃加速による裸のＤＮＡの導入が含まれる）を包含する。

ベクター：宿主細胞内に導入され、それにより、形質転換された宿主細胞が産生される核酸分子。ベクターは、宿主細胞内で複製可能な核酸配列（複製起点など）を含み得る。ベクターはまた、１つまたは複数の選択マーカー遺伝子および当該分野で公知の他の遺伝要素を含み得る。

別段説明がない限り、本明細書中で使用される全ての技術用語および科学用語は、本開示に属する当業者が一般に理解している意味を有する。単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、文脈上そうでないと明確に示されない限り、複数形を含む。「ＡまたはＢを含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ Ａ ｏｒ Ｂ）」は、「Ａ、もしくはＢ、またはＡおよびＢを含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ Ａ，ｏｒ Ｂ，ｏｒ Ａ ａｎｄ Ｂ）」を意味する。核酸またはポリペプチドのために与えられた全ての塩基のサイズまたはアミノ酸のサイズ、および全ての分子量または分子質量の値は近似値であり、説明のために提供しているとさらに理解すべきである。本明細書中に記載の方法および材料に類似するかこれらと等価な方法および材料を、本開示の実施または試験で使用することができるが、適切な方法および材料を以下に記載する。本明細書中で言及した全ての刊行物、特許出願、特許、および他の文献は、その全体が参考として援用される。矛盾がある場合、用語説明を含む本明細書を優先するであろう。さらに、材料、方法、および実施例は、例示のみを目的とし、本発明を制限することを意図しない。

ＩＩＩ．いくつかの実施形態の概説
ヒトＨＥＲ２タンパク質のＥＣドメインおよびＴＭドメインならびにＡｄ３５ファイバータンパク質をコードする組換えＡｄ５ベースのベクターを本明細書中に開示する。本開示の文脈では、「Ａｄ３５ファイバータンパク質」は、少なくともノブドメインがＡｄ３５ファイバーノブ由来のアミノ酸配列で構成されているアデノウイルスファイバータンパク質である。いくつかの例では、「Ａｄ３５ファイバータンパク質」は、Ａｄ３５シャフトドメインおよびＡｄ３５ノブドメインから構成される。さらなる他の例では、「Ａｄ３５ファイバータンパク質」は、実質的にまたは完全にＡｄ３５ファイバータンパク質である。特定の実施形態では、組換えＡｄ５ベースのベクターは、Ａｄ５テールドメインならびにＡｄ３５シャフトドメインおよびノブドメインを有するキメラファイバータンパク質をコードする。

ＨＥＲ２ＥＣＴＭおよびＡｄ３５ファイバータンパク質を発現する組換えアデノウイルス、ならびにＨＥＲ２ＥＣＴＭ発現組換えアデノウイルスで形質導入された単離された樹状細胞も開示する。Ａｄ３５ファイバータンパク質が発現すると、組換えアデノウイルスのヒト樹状細胞および他の造血細胞を感染する能力が有意に増加する。組換えＨＥＲ２ＥＣＴＭ発現アデノウイルスまたは組換えＨＥＲ２ＥＣＴＭ発現アデノウイルスで形質導入された樹状細胞を含む組成物を使用して、被験体（ＨＥＲ２陽性腫瘍を有する被験体など）におけるＨＥＲ２特異的免疫応答を誘発することができる。

ヒトＨＥＲ２のＥＣドメインおよびＴＭドメインならびにＡｄ３５ファイバータンパク質をコードする組換えアデノウイルスベクターを提供する。いくつかの実施形態では、ベクターのヌクレオチド配列は、配列番号１と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一である。いくつかの例では、ベクターのヌクレオチド配列は、配列番号１のアミノ酸配列を含むか、配列番号１のアミノ酸配列からなる。本明細書中に開示の組換えアデノウイルスベクターでの単離された細胞の形質転換によって産生されたＨＥＲ２ＥＣＴＭを発現する組換えアデノウイルスをさらに提供する。いくつかの実施形態では、ＨＥＲ２ＥＣＴＭのアミノ酸配列は、配列番号２と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一である。具体例では、ＨＥＲ２ＥＣＴＭのアミノ酸配列は、配列番号２を含むか、配列番号２からなる。いくつかの実施形態では、単離された細胞は、哺乳動物細胞（ヒト胚腎臓細胞（例えば、ＨＥＫ－２９３細胞）など）である。ＨＥＲ２ＥＣＴＭを発現する組換えアデノウイルスで形質導入された単離された樹状細胞（すなわち、樹状細胞は末梢血単球から成長する）を含む組成物も提供する。いくつかの実施形態では、組成物は、ＡＢ同種血漿、薬学的に許容され得るキャリア、アジュバント、またはその任意の組み合わせをさらに含む。

ヒトＨＥＲ２のＥＣドメインおよびＴＭドメイン（ＨＥＲ２ＥＣＴＭ）ならびにＡｄ３５ファイバータンパク質を発現する組換えアデノウイルス（組換えＡｄ５など）で形質導入された単離された樹状細胞；およびＡＢ同種血漿を含む組成物も本明細書中に提供する。いくつかの実施形態では、ＨＥＲ２ＥＣＴＭのアミノ酸配列は、配列番号２と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一である。具体例では、ＨＥＲ２ＥＣＴＭのアミノ酸配列は、配列番号２を含むか、配列番号２からなる。いくつかの実施形態では、ファイバータンパク質のアミノ酸配列は、配列番号３と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一である。いくつかの例では、ファイバータンパク質のアミノ酸配列は、配列番号３を含むか、配列番号３からなる。いくつかの実施形態では、組成物は、薬学的に許容され得るキャリア、アジュバント、またはその両方をさらに含む。

本明細書中に開示の組換えＨＥＲ２ＥＣＴＭ発現アデノウイルスまたは組成物を被験体に投与することによる、被験体におけるＨＥＲ２特異的免疫応答を誘発する方法、および被験体におけるＨＥＲ２陽性癌を処置する方法をさらに提供する。いくつかの実施形態では、組成物は、本明細書中に開示のＨＥＲ２ＥＣＴＭを発現する組換えアデノウイルスで形質導入された樹状細胞を含む。いくつかの例では、樹状細胞は、被験体から得た自家樹状細胞である。いくつかの実施形態では、ＨＥＲ２ＥＣＴＭのアミノ酸配列は、配列番号２と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一である。具体例では、ＨＥＲ２ＥＣＴＭのアミノ酸配列は、配列番号２を含むか、配列番号２からなる。いくつかの実施形態では、組換えアデノウイルスによって発現されたファイバータンパク質のアミノ酸配列は、配列番号３と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一である。いくつかの例では、ファイバータンパク質のアミノ酸配列は、配列番号３を含むか、配列番号３からなる。方法のいくつかの実施形態では、組成物は、薬学的に許容され得るキャリア、アジュバント、またはその両方をさらに含む。

ＡＢ同種血漿を含む培養培地中で被験体から得た単球を培養することによって自家樹状細胞を調製すること；ヒトＨＥＲ２のＥＣドメインおよびＴＭドメインならびにＡｄ３５ファイバータンパク質を発現する組換えアデノウイルス（組換えＡｄ５など）で自家樹状細胞を形質導入すること；および前述の組換えアデノウイルスで形質導入された自家樹状細胞を含む薬学的に許容され得るキャリアを含む組成物を被験体に投与することによる、被験体におけるＨＥＲ２陽性癌を処置する方法も本明細書中に提供する。いくつかの実施形態では、培地は、ＧＭ－ＣＳＦおよびＩＬ－４をさらに含む。いくつかの実施形態では、ＨＥＲ２ＥＣＴＭのアミノ酸配列は、配列番号２と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一である。具体例では、ＨＥＲ２ＥＣＴＭのアミノ酸配列は、配列番号２を含むか、配列番号２からなる。いくつかの実施形態では、組換えアデノウイルスによって発現されたファイバータンパク質のアミノ酸配列は、配列番号３と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一である。いくつかの例では、ファイバータンパク質のアミノ酸配列は、配列番号３を含むか、配列番号３からなる。いくつかの実施形態では、組成物は、薬学的に許容され得るキャリア、アジュバント、またはその両方をさらに含む。

本明細書中に開示の方法のいくつかの実施形態では、ＨＥＲ２陽性癌は、乳癌、卵巣癌、結腸直腸癌、前立腺癌、腎細胞癌、膀胱癌、胃食道癌、肉腫、上衣腫、または非小細胞肺癌である。いくつかの例では、癌は転移性癌である。特定の非限定的な例では、癌は、ＨＥＲ２ １＋、２＋、または３＋（ＩＨＣによる）であり、そして／またはＶＹＳＩＳ（商標）ＦＩＳＨの結果が１．８を超える。

いくつかの実施形態では、処置すべき被験体は、進行性ＨＥＲ２発現転移性固形腫瘍（膀胱、乳房、頸部、結腸直腸、卵巣、非小細胞性肺癌（ＮＳＣＬＣ）、前立腺、腎細胞、胃食道の腫瘍など）、または胃腫瘍もしくは肉腫もしくは上衣腫を有する。

いくつかの実施形態では、処置すべき被験体は、トラスツズマブ、ペルツズマブ、ａｄｏ－トラスツズマブ・エムタンシン、および／または他のＨＥＲ２－標的療法に耐性を示すＨＥＲ２陽性乳癌患者である。

いくつかの実施形態では、ＡｄＨＥＲ２ＥＣＴＭ ＤＣワクチンを、アジュバント処置として投与する（疾患再発の発生を低下させるための治癒を意図して術後に投与する）。他の実施形態では、ＡｄＨＥＲ２ＥＣＴＭ ＤＣワクチンを、ネオアジュバント処置として投与する（治癒を意図して術前に投与し、完全な病理学的応答が実証されている）。

方法のいくつかの実施形態では、被験体を、１つまたは複数のさらなる治療または抗癌剤で処置する。いくつかの例では、さらなる治療は、照射、化学療法、外科的切除、またはその任意の組み合わせから選択される。いくつかの例では、さらなる治療は、チェックポイントインヒビター（抗ＣＴＬＡ－４、抗ＰＤ－１、抗ＰＤ－Ｌ１剤、抗ＬＡＧ－３剤、または抗ＴＩＭ－３剤（例えば、抗ＣＴＬＡ－４、抗ＰＤ－１、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＬＡＧ－３抗体、または抗ＴＩＭ－３抗体）などであるが、これらに限定されない）である。非限定的な具体例では、抗ＣＴＬＡ－４剤は、イピリムマブまたはトレメリムマブである；抗ＰＤ－１剤は、ペムブロリズマブ、ニボルマブ、またはＣＴ－０１１である；または抗ＰＤ－Ｌ１剤は、アベルマブまたはＭＥＤＩ４７３６である。さらなる他の例では、さらなる治療は、第２の治療ワクチン（ＨＥＲ２以外の腫瘍抗原を発現するワクチンなど）、腫瘍崩壊ウイルス、免疫抑制性サイトカインまたはその受容体に特異的な抗体（例えば、ＴＧＦ－β、ＩＬ－１３、またはＩＬ－１０に特異的な抗体）、調節性Ｔ細胞を阻害するか枯渇させる薬剤、または骨髄性サプレッサー細胞を阻害するか枯渇させる薬剤である。いくつかの実施形態では、さらなる治療は、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞アゴニスト（β－マンノシルセラミドなど）である。

ＩＶ．Ａｄ５ｆ３５ＨＥＲ２ＥＣＴＭベクターおよび自家ＤＣワクチン
ＨＥＲ２陽性の乳癌および胃癌患者の臨床転帰を実質的に改善する新規の処置の開発は過去１５年間で飛躍的に進歩しているが、さらなる固有の治療が依然として必要である。初期ＨＥＲ２陽性乳癌患者によっては、トラスツズマブベースのアジュバント治療（治癒を意図して術「後」に施す）またはネオアジュバント治療（治癒を意図して術「前」に施す）後の非常に早い時期に乳癌が進行するか再発し、トラスツズマブ処置の一次耐性が示唆される。また、実質的に全てのＨＥＲ２陽性転移性乳癌患者において、疾患は、最終的に進行する。さらに、トラスツズマブが承認されているＨＥＲ２陽性胃腫瘍および胃食道接合部腫瘍以外の非乳房ＨＥＲ２陽性固形腫瘍において承認されているＨＥＲ２標的剤は存在しない。これは、複数の腫瘍型におけるＨＥＲ２シグナル伝達を標的にするが、作用機序が異なる新規の治療が早急に必要であること浮き彫りにしている。

ＨＥＲ２を過剰発現する腫瘍は、侵襲性がより高い疾患であり、再発率がより高く、生存率が低い。ＦＤＡ承認された薬剤であるトラスツズマブ（ハーセプチン（登録商標））、ペルツズマブ（パージェタ（商標））、およびａｄｏ－トラスツズマブ・エムタンシン（カドサイラ（商標））は、ＨＥＲ２タンパク質の細胞外ドメインの２つの個別の小部分のうちの１つをそれぞれ認識するモノクローナル抗体である（図１Ｂを参照のこと）。これらのモノクローナル抗体は、効果を得るために繰り返し投与されなければならないが、ＨＥＲ２を発現する乳房腫瘍、胃腫瘍、および胃食道接合部腫瘍の患者において生存期間を延ばし、疾患の進行を低下または遅延させることが示されている。トラスツズマブ、ペルツズマブ、およびａｄｏ－トラスツズマブ・エムタンシンは、いくつかの癌におけるその有効性にもかかかわらず、誰にでも効き目があるわけではなく、有効である場合でさえ、しばらくして効き目がなくなり得る。これらのモノクローナル抗体を、有利な治療効果を得るために３週間毎に継続して投与しなければならならず、患者は相当な不便および費用を負わされる。さらに、トラスツズマブは、単剤として投与した患者の３～７％における心機能の低下（心毒性）に関連しており、いくつか化学療法と組み合わせて投与した場合、およそ２７％に増加する。患者自身の抗体を患者自身のＨＥＲ２発現腫瘍に指向させる治療的介入は現在のところ存在しない。

本明細書中に開示のヒトＡｄ５ｆ３５ＨＥＲ２ＥＣＴＭベクタープラットフォームは、ポリクローナル抗腫瘍応答を誘導するようにデザインされた固有の免疫原プラットフォームである（図１Ｃを参照のこと）。このワクチンは、ヒトＨＥＲ２タンパク質のＥＣ部分およびＴＭ部分（本明細書中で配列番号２として記載）を発現する組換えアデノウイルスベクター（Ａｄ５ｆ３５）を利用する。ＨＥＲ２タンパク質の細胞内（ＩＣ）部分は、腫瘍細胞に対する侵襲的な成長促進効果を担うと考えられるＨＥＲ２タンパク質領域であるので、安全性を考慮してこの部分を含めなかった。Ａｄ５ｆ３５アデノウイルスベクターは、ＨＥＲ２発現アデノウイルスがヒトの樹状細胞および他の造血細胞により多く形質導入され、被験体内の既存Ａｄ５抗体による中和のリスクも低減するためのＡｄ５テールドメインならびにＡｄ３５シャフトドメインおよびノブドメインを有する（それ故、Ａｄ５ｆ３５と命名）キメラファイバータンパク質を発現する複製能力のないＡｄ５ベースのベクターである。キメラファイバータンパク質のアミノ酸配列は、本明細書中で配列番号３として記載されている。組換えアデノウイルスが細胞（樹状細胞など）の内側に存在する時点で、ＨＥＲ２タンパク質は細胞表面上に発現され、それにより、ヒトＨＥＲ２タンパク質に指向する免疫応答（腫瘍表面上のＨＥＲ２を認識する抗体および細胞傷害性Ｔ細胞など）が得られる。

ヒトＨＥＲ２ ＤＮＡ、全ＨＥＲ２タンパク質、ＨＥＲ２タンパク質の一部（例えば、細胞内ドメインタンパク質）、ＨＥＲ２タンパク質の小片（ＨＥＲ２ペプチド）、ＨＥＲ２を発現する他のウイルスベクター（例えば、ＭＶＡ改変Ｖａｃｃｉｎｉａ Ａｎｋａｒａウイルス）、ＨＥＲ２を過剰発現する外来腫瘍細胞株（例えば、患者由来の同種ＧＭ－ＣＳＦ分泌性ＨＥＲ２陽性腫瘍細胞株）を使用した他のＨＥＲ２治療ワクチンプラットフォームは、当該分野で記載されている。ラットＨＥＲ２／ｎｅｕのＥＣドメインおよびＴＭドメインをコードするアデノウイルスベクターも、以前に記載されている（Ｐａｒｋら，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ６８：１９７９－１９８７，２００８；Ｓａｋａｉら，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ６４：８０２２－８０２８，２００４；ＷＯ ２００４／０４１０６５）。マウスにおいて巨大な樹立腫瘍を後退および縮小させるげっ歯類ＨＥＲ２ベクターでの処置（Ｐａｒｋら，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ６８：１９７９－１９８７，２００８）もまた、トランスジェニックマウスにおいて乳癌発症を防御することが示されている（Ｓａｋａｉら，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ６４：８０２２－８０２８，２００４）。マウス乳がんモデルを使用した別の研究において、ＨＥＲ２に対するワクチン誘導性抗体が抗腫瘍効果を担うのでＨＥＲ２－トランスジェニックマウスにおいて自然発生自家腫瘍が防止されること、および、ＣＤ４^＋Ｔｈ１細胞がこれらの抗体の開発で役割を果たすと判断された（Ｐａｒｋら，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １７４：４２２８－４２３６，２００５）。

本明細書中に開示のＡｄＨＥＲ２ＥＣＴＭベクタープラットフォームは、ヒトＨＥＲ２のＥＣドメインおよびＴＭドメインの全体をコードする。ＩＣドメインは、ＨＥＲ２が細胞を形質転換して細胞の死滅耐性を付与する能力を駆動する主な構成要素であると考えられているので、ヒトにおける安全性を最大にし、免疫を生じるためにＨＥＲ２タンパク質のより関連性の高い部分に免疫応答の照準をあわせるために、ＩＣドメインをワクチン生成物中に存在させない。さらに、アデノウイルスベクターは、Ａｄ３５シャフトドメインおよびノブドメインならびにＡｄ５ファイバーテールドメインを有するキメラＡｄ５／Ａｄ３５ファイバータンパク質（Ａｄ５ｆ３５）をコードする。Ａｄ５シャフトおよびノブの、Ａｄ３５のシャフトおよびノブ（その受容体がＣＤ４６である）との置換により、組換えアデノウイルスによるヒトの樹状細胞および造血細胞の形質導入を効率的且つ最大にできる。さらに、本明細書中に開示のヒトＡｄＨＥＲ２ＥＣＴＭ ＤＣワクチンは、リポ多糖およびＩＦＮ－γで成熟させ、且つキーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）を含むＡＢ同種血漿でパルスした自家樹状細胞からなる。

ＡｄＨＥＲ２ＥＣＴＭ自家ＤＣワクチンまたはＡｄＨＥＲ２ＥＣＴＭベクター（非細胞ワクチンとして）を、種々の異なる患者集団で使用することができる。患者集団の例には、進行性転移性ＨＥＲ２発現（（１＋～３＋）など）固形腫瘍（例えば、膀胱、乳房、頸部、結腸直腸、卵巣、ＮＳＣＬＣ、前立腺、腎細胞、胃食道、および胃の癌）を有する患者；トラスツズマブ、ペルツズマブ、およびａｄｏ－トラスツズマブ・エムタンシン、ならびに／または他のＨＥＲ２－標的療法に耐性を示すＨＥＲ２陽性乳癌患者；ＨＥＲ２陽性（１＋～３＋ＨＥＲ２陽性など）の膀胱、乳房、頸部、結腸直腸、卵巣、ＮＳＣＬＣ、前立腺、腎細胞、または胃の癌を有する患者（アジュバント処置（疾患再発の発生を低下させるための治癒を意図して術後に施す）として）；およびＨＥＲ２陽性（１＋～３＋ＨＥＲ２陽性など）の膀胱、乳房、頸部、結腸直腸、卵巣、ＮＳＣＬＣ、前立腺、腎細胞、胃食道、または胃の癌を有する患者（ネオアジュバント処置（治癒を意図して術前に施す）として）が含まれるが、これらに限定されない。

Ｖ．併用処置
本明細書中に開示のＡｄＨＥＲ２ＥＣＴＭワクチン組成物を、他の治療上の処置（腫瘍の外科的切除、放射線療法、化学療法、およびチェックポイントインヒビターなど）を施すことによって投与することができる。

いくつかの実施形態では、ＡｄＨＥＲ２ＥＣＴＭ樹状細胞ワクチンを、チェックポイントインヒビター（ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＬＡＧ－３、またはＴＩＭ－３を標的にする抗体（またはそのフラグメント）など）と組み合わせて使用する。いくつかの例では、チェックポイントインヒビターは、抗ＣＴＬＡ－４抗体である。ＣＴＬＡ－４は、Ｔ細胞表面上で見出されるタンパク質受容体である。ＣＴＬＡ－４は、活性化された場合、免疫系応答を抑制することができる。抗ＣＴＬＡ－４抗体は、このタンパク質を会合するのに必要な連結を遮断し、それにより、Ｔ細胞は、免疫応答を停止させるよりはむしろ癌細胞と戦い続けることが可能である。他の例では、チェックポイントインヒビターは、抗ＰＤ－１抗体である。ＰＤ－１チェックポイント経路は、Ｔ細胞免疫応答の別の経路である。Ｔ細胞表面上のＰＤ－１受容体が癌細胞または他の免疫細胞の表面上のＰＤ－Ｌ１分子と連結する場合、Ｔ細胞にシグナルが送られて応答を弱らせる。抗ＰＤ－１薬は、このタンパク質を会合するのに必要な連結を遮断し、それにより、Ｔ細胞は、癌細胞に対するその応答を継続することが可能である。さらなる他の例では、チェックポイントインヒビターは、抗ＰＤ－Ｌ１抗体である。癌細胞は、一定の分子（ＰＤ－１チェックポイント経路のＰＤＬ－１およびＰＤＬ－２が含まれる）を表面上に出現させる能力を有する。癌細胞はまた、癌付近の免疫細胞にＰＤ－Ｌ１を発現させることができる。これらの分子は、Ｔ細胞上のＰＤ－１に結合し、Ｔ細胞をオフにする。他の例では、チェックポイントインヒビターは、抗ＬＡＧ－３抗体である。ＬＡＧ－３は、Ｔ細胞活性の負の制御因子である。他の例では、チェックポイントインヒビターは、抗ＴＩＭ－３抗体である。ＴＩＭ－３は、Ｔｈ１および細胞傷害性Ｔ細胞応答の持続時間および規模を抑制し、それにより、抗腫瘍免疫応答を弱らせる免疫チェックポイント受容体である。

いくつかの実施形態では、チェックポイントインヒビターを、注射部位でＡｄＨＥＲ２ＥＣＴＭ樹状細胞ワクチンと局所に同時送達させる。他の例では、チェックポイントインヒビターを、ワクチンプラットフォーム内に同時に処方する。チェックポイントインヒビターの同時送達により、一般にこれらの薬剤の全身送達に関連する毒性を持つことなくワクチン応答が増強される。ＦＤＡ承認されているか治験薬である例示的なチェックポイントインヒビターのリストを以下に提供する：

いくつかの実施形態では、ＡｄＨＥＲ２ＥＣＴＭ樹状細胞ワクチンを、免疫抑制性サイトカイン（ＴＧＦ－β、ＩＬ－１３、ＩＬ－１０など）またはその受容体に指向する抗体と組み合わせて使用する。他の併用処置は、調節性Ｔ細胞（例えば、ＩＬ－２免疫毒素デニロイキンジフチトクス）を阻害するか枯渇させる薬剤および骨髄性サプレッサー細胞を阻害するか枯渇させる薬剤（骨髄性細胞マーカーを標的にする抗体、例えば、抗ＣＤ１１ｂ、抗Ｇｒ－１など）を含み得る。

いくつかの実施形態では、ＡｄＨＥＲ２ＥＣＴＭ ＤＣワクチンを、患者の腫瘍細胞によって同様に発現される異なる腫瘍抗原（ＨＥＲ２ではない）を発現する別の治療ワクチンと組み合わせて投与する。いくつかの例では、治療ワクチンは、およそ９５％の前立腺癌および５０％の乳癌で発現されるＴＡＲＰ（例えば、ＷＯ２０１５／０８９４６９号を参照のこと）に指向する。

いくつかの実施形態では、ＡｄＨＥＲ２ＥＣＴＭ ＤＣワクチンを、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞アゴニストと組み合わせて投与する。いくつかの例では、ＮＫＴ細胞アゴニストは、β－マンノシルセラミド（β－ＭａｎＣｅｒ；米国特許第８，８３５，６１３号（その全体が本明細書中で参考として援用される）を参照のこと）である。いくつかの場合、被験体に、β－マンノシルセラミドまたはその塩もしくは溶媒和物を含む薬学的に許容され得るキャリアを含む組成物を投与する。

いくつかの実施形態では、ＡｄＨＥＲ２ＥＣＴＭ ＤＣワクチンを、化学療法と組み合わせて投与する。いくつかの例では、化学療法を、転移性腫瘍を軽減するために最初に施す。

いくつかの実施形態では、ＡｄＨＥＲ２ＥＣＴＭ ＤＣワクチンを、癌細胞を特異的に標的にする腫瘍崩壊ウイルス、または別のベクターベースのワクチンと組み合わせて投与する。

いくつかの実施形態では、ＡｄＨＥＲ２ＥＣＴＭ ＤＣワクチンを、放射線療法と組み合わせて投与する。

他の実施形態では、ＡｄＨＥＲ２ＥＣＴＭ ＤＣワクチンを、別の抗癌剤と組み合わせて投与する。任意の適切な抗癌剤を、本明細書中に開示の組成物と組み合わせて投与することができる。例示的な抗癌剤には、化学療法剤（例えば、分裂阻止因子、アルキル化剤、代謝拮抗物質、挿入抗生物質、成長因子インヒビター、細胞周期インヒビター、酵素、トポイソメラーゼインヒビター、抗生存剤、生物学的応答調節物質、抗ホルモン（例えば、抗アンドロゲン）、および抗血管形成剤など）が含まれるが、これらに限定されない。他の抗癌処置には、放射線療法および癌細胞を特異的に標的にする他の抗体が含まれる。

アルキル化剤の非限定的な例には、ナイトロジェンマスタード（メクロレタミン、シクロホスファミド、メルファラン、ウラシルマスタード、またはクロラムブシルなど）、スルホン酸アルキル（ブスルファンなど）、ニトロソ尿素（カルムスチン、ロムスチン、セムスチン、ストレプトゾシン、またはダカルバジンなど）が含まれる。

代謝拮抗物質の非限定的な例には、葉酸アナログ（メトトレキサートなど）、ピリミジンアナログ（５－ＦＵまたはシタラビンなど）、およびプリンアナログ（メルカプトプリンまたはチオグアニンなど）が含まれる。

天然物の非限定的な例には、ビンカアルカロイド（ビンブラスチン、ビンクリスチン、またはビンデシンなど）、エピポドフィロトキシン（エトポシドまたはテニポシドなど）、抗生物質（ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、ブレオマイシン、プリカマイシン、またはマイトマイシンＣなど）、および酵素（Ｌ－アスパラギナーゼなど）が含まれる。

混合型薬剤の非限定的な例には、白金配位錯体（シスプラチンとしても公知のｃｉｓ－ジアミン－ジクロロ白金ＩＩなど）、置換尿素（ヒドロキシ尿素など）、メチルヒドラジン誘導体（プロカルバジンなど）、および副腎皮質（ａｄｒｅｎｏｃｒｏｔｉｃａｌ）抑制薬（ミトタンおよびアミノグルテチミドなど）が含まれる。

ホルモンおよびアンタゴニストの非限定的な例には、副腎皮質ステロイド（プレドニゾンなど）、プロゲスチン（カプロン酸ヒドロキシプロゲステロン、酢酸メドロキシプロゲステロン、および酢酸メゲストロール（ｍａｇｅｓｔｒｏｌ ａｃｅｔａｔｅ）など）、エストロゲン（ジエチルスチルベストロールおよびエチニルエストラジオールなど）、抗エストロゲン（タモキシフェンなど）、およびアンドロゲン（プロピオン酸テストステロン（ｔｅｓｔｅｒｏｎｅ ｐｒｏｐｒｉｏｎａｔｅ）およびフルオキシメステロンなど）が含まれる。最も一般的に使用される化学療法薬の例には、アドリアマイシン、アルケラン、Ａｒａ－Ｃ、ＢｉＣＮＵ、ブスルファン、ＣＣＮＵ、カルボプラチナム、シスプラチナム、サイトキサン、ダウノルビシン、ＤＴＩＣ、５－ＦＵ、フルダラビン、ハイドレア、イダルビシン、イフォスファミド、メトトレキサート、ミトラマイシン、マイトマイシン、ミトキサントロン、ナイトロジェンマスタード、タキソール（または他のタキサン（ドセタキセルなど））、ベルバン、ビンクリスチン、ＶＰ－１６が含まれ、いくつかのより新規の薬物には、ゲムシタビン（ジェムザール）、ハーセプチン、イリノテカン（カムプトサル、ＣＰＴ－１１）、ロイスタチン、ナベルビン、リツキサンＳＴＩ－５７１、タキソテール、トポテカン（ハイカムチン）、ゼローダ（カペシタビン）、ゼベリン、およびカルシトリオールが含まれる。

使用することができる免疫調節薬の非限定的な例には、ＡＳ－１０１（Ｗｙｅｔｈ－Ａｙｅｒｓｔ Ｌａｂｓ．）、ブロピリミン（Ｕｐｊｏｈｎ）、γインターフェロン（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、ＧＭ－ＣＳＦ（顆粒球マクロファージコロニー刺激因子；Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）、ＩＬ－２（ＣｅｔｕｓまたはＨｏｆｆｍａｎ－ＬａＲｏｃｈｅ）、ヒト免疫グロブリン（Ｃｕｔｔｅｒ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ）、イムレグ（Ｉｍｒｅｇ ｏｆ Ｎｅｗ Ｏｒｌｅａｎｓ、Ｌａ．）、ＳＫ＆Ｆ１０６５２８、およびＴＮＦ（腫瘍壊死因子；Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）が含まれる。

いくつかの癌型のための別の一般的な処置は、外科的処置（例えば、癌またはその一部の外科的切除）である。処置の別の例は、照射療法（例えば、腫瘍の根絶または外科的切除前の腫瘍の縮小を補助するための腫瘍部位への放射性物質またはエネルギー（体外放射線療法など）の投与）である。

本明細書中に開示の組成物を、他のＨＥＲ２指向治療（以下の節で考察した１つまたは複数の治療など）と組み合わせて投与することもできる。

ＶＩ．他のＨＥＲ２指向治療
ヒト上皮成長因子受容体２（ＨＥＲ２、ｃ－ｅｒｂＢ２またはｎｅｕとしても公知）は、細胞の成長、分化、および増殖を制御する受容体－受容体相互作用に関与する１８５－ｋｄ膜貫通（ＴＭ）チロシンキナーゼ受容体をコードする癌原遺伝子である。その過剰発現（ＨＥＲ２癌遺伝子の増幅および／またはＨＥＲ２タンパク質の過剰発現）は、腫瘍性形質転換に寄与する（Ｍｏａｓｓｅｒら，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ ２６：６４６９－６４８７，２００７）。ＨＥＲ２は、２５～３０％までのリンパ節陽性またはリンパ節陰性の原発性乳癌で過剰発現し、臨床的に侵襲的な乳癌、高再発率および生存率低下に関連する（Ｓｌａｍｏｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４４：７０７－７１２、１９８９）。ＨＥＲ２を標的にする薬剤の開発により、ＨＥＲ２過剰発現腫瘍患者の治療選択肢が拡大し、臨床転帰が改善した（Ｍｏａｓｓｅｒら，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ ２６：６５７７－６５９２，２００７）。現時点でＦＤＡに承認されている処置選択肢には、トラスツズマブ、ラパチニブ、およびペルツズマブが含まれる。

トラスツズマブ（ハーセプチン（商標））
トラスツズマブは、ＦＤＡで承認されたＨＥＲ２受容体のＥＣドメインに結合する組換えヒト化マウスモノクローナル抗体（ＭＡｂ）である。トラスツズマブは、リンパ節に拡大した（あるいは、腫瘍がハイリスクである場合、リンパ節への拡大なし）初期乳癌アジュバント処置ならびに転移性乳癌のための一次および二次治療／救済治療について承認されている。アジュバント療法において、トラスツズマブを、以下のいくつかの方法で使用する：
・ドキソルビシン、シクロホスファミド、およびパクリタキセルまたはドセタキセルのいずれかを用いる化学療法を含む処置クールの一部として使用する。
・「ＴＣＨ」として公知のレジメンにおいて化学療法薬ドセタキセルおよびカルボプラチンと共に使用する。
・複数の他の治療（アントラサイクリンに基づいた治療が含まれる）を用いた処置後に単独で使用する。

トラスツズマブは、以下の転移性乳癌における２種の使用が承認されている：
・パクリタキセルと組み合わせた一次処置としての使用
・転移性疾患のための１つまたはそれを超えるクールの化学療法を受けた患者における単剤としての使用

治療は、典型的には、初回量４ｍｇ／ｋｇ ＩＶおよびその後の２ｍｇ／ｋｇ ＩＶのトラスツズマブの毎週５２週間にわたる単独（救済治療）の投与または最初の１２週間（アジュバント治療および一次治療）のパクリタキセルと組み合わせた投与を含む。しかし、臨床的有効性は、免疫組織化学（ＩＨＣ）またはＶＹＳＩＳ（商標）蛍光ｉｎ ｓｉｔｕハイブリッド形成（ＦＩＳＨ）比２．２超によって実証された３＋ＨＥＲ２腫瘍発現患者に制限される。ＩＨＣは、ＨＥＲ２／ｎｅｕタンパク質の主観的測定であり、一方、ＦＩＳＨは、ＨＥＲ２癌遺伝子増幅の客観的測定である（Ｗｏｌｆｆら，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ ２５：１－２８，２００７）。化学療法との組み合わせは有効性レベルが高いにもかかわらず、ＨＥＲ２陽性転移性乳癌と診断され、且つ一次単剤としてトラスツズマブで処置された女性の全奏効率はたった２６％であり（Ｖｏｇｅｌら，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ ２０：７１９－７２６，２００５）、このことは、治療選択肢に改善の余地があることを明確に示している。さらに、かなりの数の患者はトラスツズマブに奏効せず、治療しても最終的に臨床的に進行する。これはおそらくトラスツズマブ耐性に起因し、その機序の理解は不十分である（Ｌａｎら，Ａｎｎ ＮＹ Ａｃａｄ Ｓｃｉ １０５９：７０－７５，２００５；Ｈａｒｒｉｓら，Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ １３：１１９８－１２０７，２００７；Ｂｅｒｎｓら，Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ １２：３９５－４０２，２００７）。トラスツズマブは、ＨＥＲ２陽性転移性胃がんまたは胃食道接合部癌の未処置患者におけるシスプラチンとカペシタビンまたは５－フルオロウラシルのいずれかと組み合わせた使用についても承認されている。しかし、患者自身の抗ＨＥＲ２抗体を誘導するワクチンは現在利用できない。

トラスツズマブの心毒性
モノクローナル抗体であるトラスツズマブが心毒性に関連することが十分に実証されていることを考慮して（Ｓｅｉｄｍａｎら，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ ２０：１２１５－１２２１，２００２；Ｐｉｃｃａｒｔ－Ｇｅｂｈａｒｔら，Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ３５３：１６５９－１６７２，２００５；Ｔａｎ－Ｃｈｉｕら，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ ２３：７８１１－７８１９，２００５）、本明細書中に開示のＡｄＨＥＲ２ＥＣＴＭ ＤＣワクチンを、最初に、毒性の交絡を最小にするために、単剤としての安全性について査定した。具体的には、７つの第ＩＩ相および第ＩＩＩ相トラスツズマブ臨床試験のいずれかに参加した患者の記録を遡及的に検討することにより、トラスツズマブで処置した患者は心機能障害の罹患リスクが増大することが明らかとなった（Ｓｅｉｄｍａｎら，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ ２０：１２１５－１２２１，２００２）。発生率はトラスツズマブおよびアントラサイクリン＋シクロホスファミドを同時投与した患者で最も高かったが（２７％）、パクリタキセルおよびトラスツズマブ（１３％）またはトラスツズマブのみ（３％～７％）を投与した患者では、そのほとんどが事前にアントラサイクリン治療を受けていたにもかかわらず、実質的により低かった。心機能障害を発症したほとんどのトラスツズマブ処置患者は症候性であり（７５％）、鬱血性心不全のための標準的な処置を用いるとほとんどが改善された（７９％）。したがって、ワクチン誘導性抗体に関連し得る任意の心臓の安全上の問題を同定するために２つのパートで臨床研究を行う。研究のパートＩは、心毒性に関する安全上有害な兆候が有意に存在するかどうかを決定するために、トラスツズマブまたは他のＨＥＲ２指向性薬剤に事前に曝露しない集団においてワクチン用量を漸増させる。心機能の査定は、ベースラインおよび定期的モニタリング間隔での左室駆出分画（ＬＶＥＦ）を決定するための連続心エコー検査法、さらに、最後のワクチン投与後少なくとも２年間のＬＶＥＦ測定を含む。この集団において心臓の安全性が確立された時点で、パートＩＩにおいて、同一のモニタリングおよび追跡基準を使用して、心毒性に関する安全上有害な兆候が存在するかどうかを決定するために、トラスツズマブに有意に事前曝露した集団においてワクチンの用量漸増を繰り返す。

ラパチニブ
ラパチニブは、ＨＥＲ２／ｎｅｕタンパク質および上皮成長因子受容体の両方の経口投与用チロシンキナーゼインヒビターである。ラパチニブは、トラスツズマブ処置後に進行した転移性ＨＥＲ２陽性乳癌患者におけるカペシタビンとの組み合わせにおいて活性が示されている（Ｇｅｙｅｒら，Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ３５５：２７３３－２７４３，２００６）。ラパチニブに特異的な一般的毒性には、下痢および発疹が含まれ；心毒性が認められるのは稀である。トラスツズマブと同様に、ラパチニブ耐性が記載されており、これらの両薬物に対する耐性は、複数の分子機序が根底にあるようである（Ｋｏｎｉｎｋｉら，Ｃａｎｃｅｒ Ｌｅｔｔ ２９４（２）：２１１－２１９，２０１０）。

ペルツズマブ
ペルツズマブは、初期および進行状態のＨＥＲ２陽性乳癌および進行性ＨＥＲ２陽性胃癌において研究されているヒト化モノクローナル抗体である。ペルツズマブは、ＨＥＲ２受容体の、他のＨＥＲ受容体（ＥＦＧＲ／ＨＥＲ１、ＨＥＲ３、およびＨＥＲ４）との対合（いくつかの異なる癌型の成長および形成で重要な役割を果たすと考えられる過程）を特異的に防止するようにデザインされた二量体化インヒビターである。受容体対合の防止により、ペルツズマブは、細胞シグナル伝達を遮断すると考えられており、この遮断が癌細胞成長を阻害するか、癌細胞を死滅させることができる。ペルツズマブのＨＥＲ２への結合は、体内の免疫系に癌細胞を破壊するシグナルを伝達することもできる。ペルツズマブおよびトラスツズマブの作用機序は、共にＨＥＲ２受容体に結合するが、異なる領域に結合するので、相互補完すると考えられる。ペルツズマブ／トラスツズマブ治療およびと化学療法との組み合わせの目的は、組み合わせによってＨＥＲシグナル伝達経路をより網羅的に遮断するかどうかを決定することである。

ＦＤＡ前のペルツズマブ適用は、中核的な第ＩＩＩ相ＣＬＥＯＰＡＴＲＡ（ペルツズマブおよびトラスツズマブの臨床評価（Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ Ｏｆ Ｐｅｒｔｕｚｕｍａｂ Ａｎｄ ＴＲＡｓｔｕｚｕｍａｂ））研究由来の結果に基づく（Ｂａｓｅｌｇａら，Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ３６６：１０９－１１９，２０１２）。ＣＬＥＯＰＡＴＲＡは、国際的な第ＩＩＩ相のランダム化された二重盲検のプラセボ対照研究である。この研究は、事前に無処置のＨＥＲ２陽性転移性乳癌患者８０８人においてトラスツズマブおよび化学療法＋プラセボと比較したペルツズマブベースのレジメンの有効性および安全性のプロフィールを評価した。研究の主要評価項目は、無憎悪生存期間（ＰＦＳ）であり、副次評価項目は、全生存期間（ＯＳ）、試験担当医師による査定によるＰＦＳ、安全性プロフィール、全奏効率（ＯＲＲ）、奏効期間、症状進行期間、およびバイオマーカーの臨床転帰との相関関係であった。ＣＬＥＯＰＡＴＲＡ研究では、ペルツズマブベースのレジメン（トラスツズマブおよびドセタキセルと組み合わせたペルツズマブ）を投与された患者のＰＦＳの中央値は、トラスツズマブおよびドセタキセルのみを投与された患者のＰＦＳの中央値と比較して６．１ヶ月の改善が証明された（ＰＦＳの中央値１８．５対１２．４ヶ月）。組み合わせを投与された患者はまた、疾患の悪化または死亡のリスクが３８％低下した（ＨＲ＝０．６２、ｐ値＜０．０００１）。ペルツズマブレジメンは、より高い心臓ＡＥ発生率と関連しなかった：左心室の機能障害は、トラスツズマブおよびドセタキセルのみの８．３％と比較して、ペルツズマブ含有レジメンにおいて４．４％であった。

トラスツズマブ・エムタンシン（ｅｍａｎｔａｎｓｉｎｅ）（Ｔ－ＤＭ１）
トラスツズマブ・エムタンシン（ｅｍａｎｔａｎｓｉｎｅ）（Ｔ－ＤＭ１）は、非還元性チオエーテル（ｔｈｉｏｔｅｔｈｅｒ）を介して細胞傷害性抗チューブリン剤メイタンシン（ＤＭ１）に連結したトラスツズマブからなる抗体－薬物抱合体である（ＬｏＲｕｓｓｏら，Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ １７：６４３７－６４４７，２０１１）。トラスツズマブ・エムタンシンは、いくつかの第ＩＩＩ相試験においてＨＥＲ２＋転移性乳癌の二次、一次、および三次処置について世界規模で開発中である。

無処置ＨＥＲ２＋転移性乳癌患者におけるＴ－ＤＭ１とトラスツズマブ＋ドセタキセル化学療法とを比較した１３７人の患者のＴ－ＤＭ１のランダム化第ＩＩ相研究の結果は、Ｔ－ＤＭ１のＰＦＳの中央値がトラスツズマブ／ドセタキセルと比較して改善されたことを証明していた：ＰＦＳの中央値は、それぞれ、１４．２ヶ月対９．２ヶ月；ｐ＝０．０３５。Ｔ－ＤＭ１は、トラスツズマブ／ドセタキセル組み合わせについて客観的奏効率６４．２％対５８％を達成し、より好ましい副作用プロフィールも有しており、重度の有害事象（ＳＡＥ）の頻度が低かった：それぞれ、４６．４％対８９．４％。Ｔ－ＤＭ１治療を用いて報告された最も頻度の高いＳＡＥは、血小板減少症（８．７％）および肝臓トランスアミナーゼの上昇（８．７％）であった。

ＶＩＩ．前臨床動物研究
以前に発表された研究において、げっ歯類ＨＥＲ２ｎｅｕの細胞外・膜貫通（ＥＣＴＭ）ドメインを発現する治療アデノウイルスベクターワクチンを使用して同系ＢＡＬＢ／ｃマウス内に樹立した巨大腫瘍の後退および治癒が実証された（Ｐａｒｋら，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ６８：１９７９－１９８７，２００８）。この抗腫瘍活性は、ＨＥＲ２リン酸化を阻害するポリクローナルワクチン誘導性抗体によって媒介され、トラスツズマブと異なり、Ｆｃ受容体非依存性である。多くのマウス腫瘍ワクチン研究によって腫瘍成長が防止されてきたが、これらの研究では、一般に、癌ワクチンを使用して直径１ｃｍを超える巨大な樹立腫瘍を治癒することはできなかった。げっ歯類ＨＥＲ２／ｎｅｕの細胞外・膜貫通（ＥＣＴＭ）ドメインを発現するアデノウイルスベクターワクチンを使用して、同系ＢＡＬＢ／ｃマウスにおいて直径２ｃｍまでのＴＵＢＯ乳腺癌腫および複数の巨大な樹立肺転移が治癒した。実質的に１００％のマウスの皮下腫瘍および肺腫瘍の両方が治癒した。このワクチンはまた、同一げっ歯類ｎｅｕ癌遺伝子を導入したＢＡＬＢ／ｃマウスにおける自発性同所性乳房癌腫を防止した（Ｐａｒｋら，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ６８：１９７９－１９８７，２００８；Ｐａｒｋら，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １７４：４２２８－４２３６，２００５）。

ワクチンの作用機序は抗体に媒介され、エフェクター機能においてＣＤ４Ｔ細胞またはＣＤ８Ｔ細胞は関与しない（ＣＤ４のみがワクチン接種時に抗体の誘導に役立つ）。抗体でのＣＤ８＋Ｔ細胞の枯渇や、ＣＤ８＋Ｔ細胞を欠くβ－２ミクログロブリンノックアウトマウスの使用はいずれも、ワクチン誘導性防御に影響を及ぼさなかった。

げっ歯類ＡｄｎｅｕＥＣＴＭ ＤＣワクチン接種
治療有効性抗体を、ＡｄｎｅｕＥＣＴＭベクターで形質導入された１００万個の同系樹状細胞の免疫化によって同様に誘導した。ＴＵＢＯ細胞を皮下投与し、次いで、腫瘍が５５～２５０ｍｍ^３に到達した時に５日目および７日目にワクチン接種したマウスは、腫瘍が完全に後退し、この後退は、遊離ＡｄＨＥＲ２によって誘導された後退と厳密に類似していた。腫瘍は、およそ１２日目にピークまで成長し続け、腫瘍が最大値７５６ｍｍ^３に到達した時、次いで、後退し始め、２２日後にベースラインレベルに到達した。この治療効果は、ＡｄｎｅｕＥＣＴＭ形質導入ＤＣのみの投与またはＩＬ－１５との投与のいずれであっても抗体依存性を示すことが認められた。したがって、ＡｄｎｅｕＥＣＴＭ形質導入ＤＣおよび遊離ＡｄｎｅｕＥＣＴＭでの免疫化は共に、類似の抗体媒介性腫瘍退縮を生じた。また、かかるＡｄｎｅｕＥＣＴＭ形質導入ＤＣで免疫化したマウス由来の血清は、ＴＵＢＯ細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏでの成長を阻害し、ＥｒｂＢ２－ｎｅｕオンコプロテインのリン酸化を阻害した。

トランスジェニックＨＥＲ２マウスモデルにおける中枢性寛容および末梢性寛容
ＨＥＲ２／ｎｅｕ－トランスジェニックマウスは、出生前から発現する（性的に成熟するまで癌遺伝子が発現しないいくつかのモデルと異なる）癌遺伝子に対して中枢性寛容または胸腺寛容を有する。ＨＥＲ２／ｎｅｕ－トランスジェニックマウスは、より小さく、より限定され、且つ非トランスジェニックマウスと異なるＴ細胞レパートリーを発現し、これは、中枢性自己寛容による多数のＴ細胞クローンの除去を反映している（Ｒｏｌｌａら，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １７７：７６２６－７６３３，２００６；Ｃａｖａｌｌｏら，Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｃａｎｃｅｒ ７：７０７－７１３，２００７）。したがって、ｎｅｕ－トランスジェニックマウスにおいて樹立された自然発生腫瘍を処置することはより困難であった（Ｐａｒｋら，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １７４：４２２８－４２３６，２００５；Ｓａｋａｉら，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ６４：８０２２－８０２８，２００４）。さらに、ＢＡＬＢ－ｎｅｕトランスジェニックモデルでは、癌遺伝子は、全乳腺の全乳房細胞内に発現する。結果として、乳腺細胞の絶え間なく続く悪性形質転換が誘導され、その後に１０の全マウス乳腺において非依存性の原発性腫瘍が生成され、それにより、全ての腫瘍を抑制するのが極めて困難になる。対照的に、組織病理診断によって既に癌遺伝子に起因する異常な乳腺異形成の発症（たとえ４週齢前に開始しても）が示されているときにワクチン接種を低年齢（約７週齢）で開始した場合、ｎｅｕ－トランスジェニックマウスにおける腫瘍の発達を事実上完全に抑制することが依然として可能である。おそらく、ワクチン誘導性抗体は、ｎｅｕ発現異形成細胞を根絶または阻害する。したがって、これは単なる予防モデルではなく、明らかに治療モデルである。この状況は、ＨＥＲ２／ｎｅｕ癌遺伝子が成人期の悪性形質転換まで発現されず、それにより、中枢性寛容を生じる機会がないというヒト乳癌の状況と対照的である。実際に、Ｄｉｓｉｓ ａｎｄ ｃｏｗｏｒｋｅｒｓ（Ｄｉｓｉｓら，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ５４：１６－２０，１９９４；Ｄｉｓｉｓら，Ｂｒｅａｓｔ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ Ｔｒｅａｔ ６２（３）：４５－５２，２０００）は、多数のＨＥＲ２＋乳癌患者がＨＥＲ２オンコプロテインに対して、自発的に抗体およびＴ細胞応答を生じることを証明しており、これは、中枢性寛容が存在しないことを証明している。さらに、乳癌を有するヒトは、一般に、トランスジェニックマウスにおいて見られるような１００％の乳腺導管上皮細胞中に発現される癌遺伝子を持たず、それにより、新規の非依存性の腫瘍を絶え間なく持続的に生成する。したがって、中枢性寛容を有するｎｅｕ－トランスジェニックマウスよりもＨＥＲ２＋乳癌患者においてワクチンがＨＥＲ２に対する治療有効性抗体をより有効に誘導することが期待される。

ワクチン誘導性抗体がＮ２０２－１Ａ腫瘍株（同一の癌遺伝子を発現する別のマウス乳がん）の成長を阻害するがことも証明されている。ワクチンの作用機序は純粋に抗体に媒介され、エフェクター機能においてＣＤ４Ｔ細胞またはＣＤ８Ｔ細胞は関与しない（ＣＤ４のみがワクチン接種時に抗体の誘導に役立つ）。ワクチン誘導性抗体は、トラスツズマブと作用が異なる：ワクチン誘導性抗体は、Ｆｃ受容体非依存性であり、他の細胞に頼らず腫瘍細胞を直接死滅させ、ＨＥＲ２リン酸化を阻害し、細胞表面から離れて調整される。したがって、このワクチンは、トラスツズマブまたはラパチニブが無効の患者で作用し得る。さらに、ワクチン誘導性抗体は、ポリクローナル抗体であり、ＭＡｂ様のトラスツズマブまたはペルツズマブよりも回避変異耐性が高いかもしれない。前臨床動物データは、ワクチン誘導性抗体はトラスツズマブよりも治療有効性がはるかに高い可能性があり、現時点でのこの処置に関連する高価で頻繁な注入が不要であることを示唆している。

樹状細胞ワクチン
治療癌ワクチンプラットフォームにおいて広く研究されているプラットフォームおよび免疫原は多種多様であり、以下が含まれる：ａ）全腫瘍細胞ワクチン、ｂ）樹状細胞（ＤＣ）ベースのプラットフォーム、ｃ）アジュバントと同時送達されるペプチドおよび融合タンパク質、およびｃ）腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）のための送達ビヒクルとしての機能を果たすウイルスベクター。古典的なペプチドおよびタンパク質の免疫原に加えて、腫瘍ライセート、腫瘍ｍＲＮＡ、およびＤＮＡの全てが利用されている。ＤＣは、先天免疫系と適応免疫系との間の架け橋としての機能を果たし、一方で、ナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞およびナイーブＣＤ８＋Ｔ細胞の活性化で重要な役割をはたす。結果として、癌免疫療法分野の研究者は、ＤＣの生物学、活性化、成熟化、および抗原提示を描写し、理解するために膨大な研究を行っている。全身腫瘍組織量が高いことによる免疫調節異常の結果として、ＤＣのｉｎ ｖｉｖｏでの広範な機能障害ために（Ｆｉｎｎ，Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ３５８：２７０４－２７１５，２００８）、ＤＣは、ＴＡＡを発現する多数の腫瘍細胞株（ＬＮＣａＰ、ＰＣ３）、ペプチド、タンパク質、ライセート、ｍＲＮＡ、およびウイルスベクターの送達のための最適なプラットフォームであった（Ｋｉｅｓｓｌｉｎｇら，Ｅｕｒ Ｕｒｏｌ ５３：６９４－７０８，２００８；Ｔａｎａｋａら，Ｃｌｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ １０１：１９２－２００，２００１）。シプロイセル－Ｔ（プロベンジ（商標））は、このプラットフォームアプローチのプロトタイプである：シプロイセル－Ｔは自家細胞免疫療法と見なされているにもかかわらず、その生成には樹状細胞ワクチンと類似の成熟化剤および共通の経路を利用している（Ｈｉｇａｎｏら，Ｎａｔ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ ９：５１３－５１４，２０１０）。

免疫基本原理のより深い理解により、腫瘍特異的免疫を増強する種々の技術が得られ、結果としてその後に臨床転帰が改善される可能性がある。この例にはシプロイセル－ＴのＦＤＡ承認が挙げられ、シプロイセル－Ｔは、癌分野において最初に許可された治療細胞免疫療法である。シプロイセル－Ｔの承認は、統計的に説得力があり、且つ臨床的に意味のある、第ＩＩＩ相試験における全生存期間（ＯＳ）の中央値の４．１ヶ月の改善に基づいていた（Ｋａｎｔｏｆｆら，Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ３６３（５）：４１１－４２２，２０１０）。シプロイセル－Ｔに関連するＯＳの改善は、ＣＤ５４上方制御（生成物の効力の基準）（Ｈｉｇａｎｏら，Ｃａｎｃｅｒ １１５：３６７０－３６７９，２００９）および抗原であるＰＡ２０２４（融合タンパク質）または前立腺酸性ホスファターゼ（ＰＡＰ）の免疫化に対してどの時点においても抗体価４００超を得られることと相関することが報告されている（Ｋａｎｔｏｆｆら，Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ３６３（５）：４１１－４２２，２０１０）。ＰＡ２０２４およびＰＡＰに対する非常に強力なＴ細胞の増殖応答もシプロイセル－Ｔを投与した患者で認められたにもかかわらず、いずれかの抗原に対してＴ細胞応答を示した患者とそうでない患者との間でその生存に相違や関連は実証されなかった。

ＤＣワクチン生成物は、静脈内（シプロイセル－Ｔなどの場合）、筋肉内、リンパ節内、皮内、および皮下に送達させている。げっ歯類のＡｄｎｅｕＥＣＴＭ ＤＣワクチン接種の前臨床モデルでは、ワクチンを皮下投与した。ヒトにおける皮内送達は皮下送達より最適であることを示唆する証拠が存在するので、本明細書中に開示のヒト自家ＡｄＨＥＲ２ＥＣＴＭ ＤＣワクチンを皮内投与する。

ＨＥＲ２治療ワクチン
トラスツズマブベースの抗ＨＥＲ２受動免疫療法および他のＨＥＲ２標的療法が臨床的に有効であったので、ＨＥＲ２に対するワクチン接種ストラテジーが開発された。それにより、抗腫瘍活性および腫瘍再発の防止に関連する免疫記憶が生じる強力な免疫が得られることが理想的であろう。現時点で調査中であり、且つ種々の臨床開発段階にある異なる抗ＨＥＲ２ワクチンストラテジーには、ＤＮＡ、ペプチド、全腫瘍細胞、および樹状細胞ワクチンならびにこれらの組み合わせ（例えば、ペプチド負荷ＤＣワクチン）（Ｌａｄｊｅｍｉら，Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ ５９：１２９５－１３１２，２０１０）が含まれる。ペプチドワクチンは、一価および多価のＨＥＲ２ペプチドを含んでおり、体液性免疫応答および細胞性免疫応答の発現に関連している。本明細書中に開示のＡｄＨＥＲ２ＥＤＴＭ ＤＣワクチンは、ＨＥＲ２のＥＣ構成要素およびＴＭ構成要素の両方に指向し、エピトープ拡大の結果として細胞内ドメイン（ＩＣ）にも指向する可能性があるポリクローナル抗体応答を誘導する能力を有することが利点である。この自家ワクチンプラットフォームによって標的にされる複数の固有のＨＥＲ２エピトープは、トラスツズマブ結合エピトープと異なる可能性が高く、特にＨＥＲ２発現レベルが低い（すなわち、ＩＨＣによって＜３＋）患者において、トラスツズマブよりも高い親和性および臨床活性を得ることができる。さらに、前臨床データは、ワクチン接種によって誘導された抗ＨＥＲ２抗体が、トラスツズマブと異なり、Ｆｃ受容体非依存性であり、且つＨＥＲ２発現およびリン酸化を妨害する機能活性を有することを示している。それ故、ワクチン誘導性抗ＨＥＲ２抗体は、トラスツズマブ、ラパチニブ（ｌａｐｉｔｉｎｉｂ）、または他のＨＥＲ２指向性治療に耐性を示す患者における臨床的に関連する抗腫瘍活性を有する。

Ｎｏｒｅｌｌら（Ｊ Ｔｒａｎｓｌ Ｍｅｄ ８：５３、２０１０）は、ＧＭ－ＣＳＦおよびＩＬ－２と共に投与されるＥＣドメイン、ＴＭドメイン、および変異細胞内（ＩＣｍｕｔａｔｅｄ）ドメイン（ＥＣＴＭＩＣｍｕｔａｔｅｄ）をコードするプラスミドＤＮＡヒトＨＥＲ２／ｎｅｕワクチンのパイロット臨床試験を記載している。安全対策として、癌原性を付与する自己リン酸化部位を除去するために、ＩＣドメイン内に２塩基対の変異を導入した。ワクチンを、全部で８人の患者に投与し、急性毒性、自己免疫、心毒性に関する臨床上の問題は全て同定されなかった。ワクチンは免疫原性を制限することが証明された：組換えヒトＨＥＲ２タンパク質でのｅｘ ｖｉｖｏ ＰＢＭＣのｉｎ ｖｉｔｒｏ刺激後の特異的Ｔ細胞増殖は、ワクチン接種によって誘導されなかった。実際に、３回の完全なワクチン接種サイクル直後に、ＨＥＲ２特異的ＣＤ４＋Ｔ細胞応答は認められなかったか、減少すらしたが、長期間の追跡調査においてＭＨＣクラスＩＩ拘束性ＨＥＲ２－Ｔ細胞応答は有意に増加した。研究中に同時トラスツズマブ療法が認められたので、トラスツズマブ干渉を伴わない内因性抗体産生を測定するためにλ－サブクラス特異的ＥＬＩＳＡを行った。患者のサブグループにおいて、ＨＥＲ２－ｐＤＮＡワクチン接種によってＨＥＲ２特異的抗体が誘導および追加免疫され、この抗体は、最後のワクチン投与から数年間検出することができた。

以下の実施例を、一定の特定の特徴および／または実施形態を例示するために提供する。これらの実施例は、本開示が記載の特定の特徴または実施形態に制限されると解釈すべきではない。

実施例１：前臨床ＡｄＨＥＲ２ＥＣＴＭベクター発現
自家治療ワクチン接種のためのＡｄＨＥＲ２ＥＣＴＭでトランスフェクションされた樹状細胞（本明細書中で「ＡｄＨＥＲ２ＥＣＴＭ ＤＣ」という）の生成の最適な生成条件を決定するために、前臨床実験を行った。健康な通常のドナー細胞を使用して異なる条件下で樹状細胞を生成し、それによって複数の実験においてＦＡＣＳまたはＥＬＩＳＡによってＨＥＲ２ｎｅｕ発現を確認した。これらの実験結果のまとめを以下に提供する。
・バッグ条件下またはフラスコ条件下でトランスフェクトしたＤＣのＨＥＲ２ｎｅｕ発現は等価であった。本明細書中に開示の研究は、バッグを使用して自家ＤＣワクチンのために解凍した単球からＤＣを生成した。
・この臨床試験のためのトランスフェクション比としてウイルス粒子（ＶＰ）：ＤＣ比３０００：１を選択したが、これは以下の表中のデータに基づいて妥当なＭＯＩで発現レベルが高かったからである。

・ＨＥＲ２ｎｅｕ平均蛍光性強度およびＨＥＲ２ｎｅｕについて陽性染色された細胞の比率は、以下の試験した２つの最も高い比で許容可能であった：

実施例２：前臨床ＨＥＲ２樹状細胞プラットフォーム
３人の健康な通常のヒトドナー（１１ＦＣ０００３９、１１ＦＣ０００４３、および１１ＦＣ０００５５）由来の細胞を利用して研究を実施して、最終ＤＣワクチン生成物における最適な生存率およびＨＥＲ２ｎｅｕ発現のためのＡｄＨＥＲ２ＥＣＴＭベクターのトランスフェクションおよび樹状細胞の成熟化の最良の順序を決定した。ＶＰ：ＤＣ比３０００にてＡｄＨＥＲ２ＥＣＴＭでトランスフェクトしたＤＣを、以下にまとめた（さらに図３に概要を示す）条件下で生成した：
－２４時間の未成熟樹状細胞（ｉＤＣ）のトランスフェクション：（２４ｈ）ウイルス使用ｉＤＣ
－ウイルストランスフェクションを用いない未成熟樹状細胞：ｉＤＣ
－ウイルストランスフェクションを用いない２４時間のＤＣの成熟化：ウイルスなしの（２４ｈ）ｍＤＣ
－２０時間目にトランスフェクションを用いた２４時間のＤＣの成熟化：（２０ｈ）ウイルス使用（２４ｈ）ｍＤＣ
－４時間のＤＣのトランスフェクション後のＤＣの成熟化：（２４ｈ）ウイルス使用（２０ｈ）ｍＤＣ

図４Ａに示すように、成熟ＤＣ（ｍＤＣ）のポストトランスフェクション生存率は、６０～８２％（平均７０～７５％）の範囲であった。歴史的に、トランスフェクトされたＤＣワクチン生成物の収量は、通常、開始単球集団の１０～４０％である。図４Ｂに示すように、ＤＣの成熟化／トランスフェクション後の収量は、ドナーによって変動した。

ＨＥＲ２ｎｅｕ発現も、異なる成熟化条件下で査定した。異なる成熟化条件下およびトランスフェクション条件下でのドナー内およびドナー間の発現には変動があり、未成熟ＤＣは、ＨＥＲ２ｎｅｕ発現の変動はより大きかった（すなわち、細胞あたりのＨＥＲ２発現の平均蛍光性強度は、未成熟ＤＣと成熟ＤＣとを比較するとさらに一致しなかった）。しかし、以下の図５で実証されるように、トランスフェクション条件と無関係に、トランスフェクトされた未成熟ＤＣおよび成熟ＤＣのＨＥＲ２ｎｅｕ発現（ＣＤ３４０）は１００％であった。

これらのＤＣ成熟化／トランスフェクション実験の一部としてさらなる特徴づけおよび査定も行って、以下のように最終ＨＥＲ２ｎｅｕ ＤＣワクチン生成物の定性的な機能的態様をより特徴づけた：
・最終ＤＣワクチン生成物上の分化のクラスター（ＣＤ）抗原：ＣＤ８６、ＣＤ８３、ＨＬＡ－ＤＲ、ＣＤ３８、ＣＤ５４、ＣＤ１４、およびＣＣＲ７
・サイトカインおよびケモカインＩＬ－６、ＩＬ－８、ＩＬ－１２ｐ７０、ＴＮＦ－α、ＩＰ１０、ＭＤＣ、およびＭＩＰ３βの発現（細胞数について発現を正規化した比として示す）。インターフェロン－α、ＩＬ－１０、ＩＬ－１３、およびＩＬ－１５は、非常に低濃度であった（通常、５ｐｇ／ｍｌ未満）。

この研究のためのＡｄＨＥＲ２ＥＣＴＭ ＤＣワクチンを、最初の４時間のＡｄＨＥＲ２ＥＣＴＭベクターのトランスフェクションおよびその後のＤＣ成熟化カクテルを使用して製造した（前の図中に（２４）ウイルス使用（２０）ｍＤＣと示す）。この決定は、上記のｉｎ ｖｉｔｒｏ研究由来の以下の所見に基づいていた：
・一般に、未成熟ＤＣ（すなわち、最適な抗原プロセシングを確実にするために成熟化カクテルを添加する前）をトランスフェクトするのはより容易である。
・ＭＦＩによって測定した場合の未成熟ＤＣと比較した成熟ＤＣのＨＥＲ２ｎｅｕ発現はより一貫しており、最終生成物がより均一になる。

実施例３：ヒト第Ｉ相臨床試験
本実施例は、自家ＡｄＨＥＲ２ＥＣＴＭ樹状細胞ワクチン接種の安全性および毒性を決定するためのヒト第Ｉ相臨床研究について記載する。具体的には、心毒性（生じる場合）を有する患者の割合がその後の試験で確実にさらに高まるのを十分に低下させるかどうかを決定する。心毒性は、ＬＶＥＦの１０％以上の減少または絶対ＬＶＥＦの５０％未満への減少（ＣＴＣＡＥｖ４．０によるＬＶＥＦのグレードＩＩへの低下に等価）として定義する。また、本研究を、ベースラインと比較して抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ抗体濃度（ｍｃｇ／ｍｌとして測定）の３倍増加または抗体希釈力価の４倍増加によって測定した場合の自家ＡｄＨＥＲ２ＥＣＴＭ樹状細胞ワクチン接種の免疫原性を決定するために開始した。

臨床研究のさらなる目的には、免疫関連奏効基準による安定病態、部分奏効、またはより良好な奏効を有する被験体の割合によって測定される自家ＡｄＨＥＲ２ＥＣＴＭ樹状細胞ワクチン接種の予備活性の決定；腫瘍成長速度定数および後退速度定数に及ぼす自家ＡｄＨＥＲ２ＥＣＴＭ樹状細胞ワクチン接種の影響の決定；ＨＥＲ２のＥＣドメイン、ＴＭドメイン、およびＩＣドメインに対する反応性を試験する、ＨＥＲ２ペプチドマイクロアレイを使用したワクチン誘導性抗体プロフィールの特徴付け；ならびに全血、循環腫瘍細胞中の機能関連ｍＲＮＡ、および臨床的奏効の他の潜在的な生物学的／免疫学的相関関係の特徴付けおよび測定が含まれる。ＡｄＨＥＲ２ＥＣＴＭ ＤＣワクチン接種試験のための研究デザインスキームを、図６に示す。

適格基準
選択基準パートＩ
利点が知られているが、トラスツズマブが臨床的に適応しない、標準的な治療に失敗したいくつかのＨＥＲ２／ｎｅｕ発現によって特徴付けられる以下の再発性または進行性の転移性固形腫瘍を有する少なくとも１８歳の成人：

・ＩＨＣによってＨＥＲ２ １＋、２＋、または３＋であるか、ＶＹＳＩＳ（商標）ＦＩＳＨの結果が１．８を超えることが公知の卵巣癌、結腸癌、非小細胞肺癌、腎細胞癌、膀胱癌、および前立腺癌の患者

・ＩＨＣによってＨＥＲ２ １＋または２＋であるか、ＶＹＳＩＳ（商標）ＦＩＳＨの結果が１．８～２．２未満であることが既知の乳癌患者

アジュバント療法において以下のＨＥＲ２＋膀胱癌を有する少なくとも１８歳の成人（アジュバント膀胱癌患者）：
・腫瘍ステージＴ３ａ、Ｔ３ｂ、Ｔ４ａ、Ｔ４ｂ、および腫瘍ステージとは無関係の任意のリンパ節陽性疾患。
・ＩＨＣによってＨＥＲ２ １＋、２＋、または３＋であるか、ＶＹＳＩＳ（商標）ＦＩＳＨの結果が１．８を超える腫瘍。
・状態－治癒を意図して一次膀胱切除後の状態
・ネオアジュバントシスプラチンベースの多剤併用化学療法を受けている場合または受けていない場合。
・ＮＣＣＮガイドラインによる病的リスクに基づいたアジュバント照射療法または化学療法を受けている場合または受けていない場合。
・治癒を意図した一次手術後６週間またはそれを超える状態。
－平均余命６ヶ月以上、
－パフォーマンスステータス：ＥＣＯＧが０～１。
－トラスツズマブ、ペルツズマブ、およびラパチニブ（ｌａｐａｔｎｉｂ）、または他の治験中のＨＥＲ２指向性治療（例えば、Ｔ－ＤＭ１）に対して未処置
－臨床的に有利であることが公知の事前の標準的な治療に対して再発性または進行性の疾患を有する（アジュバント膀胱癌集団を除く）。
－従来の技術を用いてＣＴスキャンによって２０ｍｍ以上の少なくとも１つの寸法（非リンパ節病変について記録された最長径およびリンパ節病変について記録された短軸）を正確に測定することができる少なくとも１つの病変および／または測定可能な臨床的に可視的な皮膚病変として定義される測定可能疾患が存在する、再発性転移性固形腫瘍を有する成人（一次化学療法を完了しており、測定可能疾患を持たないかもしれない転移性膀胱癌患者を除く）。
－二次元心エコー図による５５％を超えるベースラインＬＶＥＦ。
－転移性疾患のための標準的な処置または治験中の処置から１週間またはそれを超える期間経っている。
－ＥＲ＋状態のためのタモキシフェンまたはアロマターゼインヒビターの安定な同時使用が許容されている。
－血液学的パラメータ：ＡＮＣが１０００細胞／ｍｍ^３以上、ＡＬＣが５００細胞／ｍｍ^３以上、ヘモグロビンが９．０ｇｍ／ｄＬ以上、ＷＢＣが２，５００細胞／ｍｍ^３以上、血小板数が７５，０００／ｍｍ^３以上、ＰＴ／ＰＴＴが正常値の上限の１．５倍以下。
－化学パラメータ：ＳＧＯＴおよびＳＧＰＴが正常値の上限の３倍以下および総ビリルビンが１．５ｍｇ／ｄｌ以下、Ａｌｋ ＰＯ４が正常値の上限の２倍以下（骨への転移性疾患が実証された患者を除く）。
－妊娠可能な女性の場合、血清ＨＣＧが陰性であること。
－ＨＩＶ－１の血清学的検査が陰性であること。
－結果が事前のワクチン接種または完全に回復した事前の感染と一致しない限り、Ｂ型肝炎およびＣ型肝炎の血清学的検査が陰性であること。
－女性および男性の被験体が有効な避妊手段（例えば、経口避妊薬、バリアデバイス、子宮内器具、またはコンドーム）を、研究中および研究用ワクチンの最後の投与後３ヶ月間使用する意思があること。
－インフォームドコンセントを理解し、提出することができること。

選択基準パートＩＩ
－１８歳超
－ＩＨＣによって３＋ＨＥＲ２／ｎｅｕ発現を有するかＶＹＳＩＳ（商標）ＦＩＳＨの結果が２．２超である乳癌患者

－少なくとも１～２クールの、公知の臨床上の利点を有する標準的治療（すなわち、トラスツズマブまたはラパチニブ）、ａｄｏ－トラスツズマブ・エムタンシン（ＴＤＭ１）、または他の治験中のＨＥＲ２指向性治療（例えば、ＭＧＡＨ２２）後に再発性または進行性の転移性疾患を有すること。
－平均余命６ヶ月以上。
－パフォーマンスステータス：ＥＣＯＧが０～１。
－従来の技術を用いてＣＴスキャンによって２０ｍｍ超の少なくとも１つの寸法（非リンパ節病変について記録された最長径およびリンパ節病変について記録された短軸）を正確に測定することができる少なくとも１つの病変および／または測定可能な臨床的に可視的な皮膚病変として定義される測定可能疾患が存在すること。
－二次元心エコー図による５５％を超えるベースラインＬＶＥＦ。
－転移性または再発性の疾患のための標準的な処置または治験中のＨＥＲ２指向性治療を受けてから１週間またはそれを超える期間が経っている。
－ＥＲ＋状態のためのタモキシフェンまたはアロマターゼインヒビターの安定な同時使用が許容されている。
－血液学的パラメータ：ＡＮＣが１０００細胞／ｍｍ^３以上、ＡＬＣが５００細胞／ｍｍ^３以上、絶対ヘモグロビンが９．０ｇｍ／ｄＬ以上、ＷＢＣが２，５００細胞／ｍｍ^３以上、血小板数が７５，０００／ｍｍ^３以上、ＰＴ／ＰＴＴが正常値の上限の１．５倍以下。
－化学パラメータ：ＳＧＯＴおよびＳＧＰＴがＵＬＮの３倍以下、総ビリルビンがＵＬＮの１．５倍以下、およびＡｌｋ ＰＯ４がＵＬＮの２倍以下（骨への転移性疾患が実証された患者を除く）。
－妊娠可能な女性の場合、血清ＨＣＧが陰性であること。
－ＨＩＶ－１の血清学的検査が陰性であること。
－結果が事前のワクチン接種または完全に回復した事前の感染と一致しない限り、Ｂ型肝炎およびＣ型肝炎の血清学的検査が陰性であること。
女性の被験体が有効な避妊手段（例えば、経口避妊薬、バリアデバイス、子宮内器具、またはコンドーム）を、研究中および研究用ワクチンの最後の投与後３ヶ月間使用する意思があること。本発明者らは、被験体は、研究中、および治験ＡｄＨＥＲ２ＥＣＴＭ ＤＣワクチンの投与後３ヶ月間妊娠しないよう提案する。（ＦＤＡの要請）
－インフォームドコンセントを理解し、提出することができること。

除外基準
－妊娠中または授乳中の女性。
－積極的にまたは以前に処置されたＣＮＳの腫瘍の転移または軟膜併発を有する患者。
－治験責任医師の意見として急速に進行している疾患を有する患者。
－自家ＡｄＨＥＲ２ＥＣＴＭ ＤＣワクチン生成物を生成するために必要なアフェレーシスのための両側末梢静脈カテーテルまたは中心静脈カテーテルのアクセスが不適切な患者。
－処置を必要とするか、化学療法の中断を必要とするＮＹＨＡクラスＩＩを超える症状、アンギナ、鬱血性心不全、心筋梗塞、不整脈、または心機能障害の病歴として定義される臨床的に有意な心機能障害。
－トラスツズマブでの事前の処置中にベースラインＬＶＥＦの変化が起こった病歴を有すること。
－ドキソルビシンの累積用量が４００ｍｇ／ｍ^２超であるか、エピルビシンの累積用量が８００ｍｇ／ｍ^２超であること。
－研究登録の１週間以内に任意の標準的な化学療法または他の治験薬を使用したこと。
－研究登録の２週間以内に全身性コルチコステロイド療法を使用したこと（コルチコステロイド補充療法を受けた患者を含む）。注意：局所、吸入、および鼻腔内のステロイド療法のみは許可する。
－処置を必要とする活性な全身性のウイルス、細菌、または真菌の感染。

研究の概要およびデザイン
これは、ワクチンの安全性、免疫原性、および予備活性を決定するためにＡｄＨＥＲ２ＥＣＴＭで形質導入した自家樹状細胞（ＤＣ）ワクチンの非盲検、単施設、非ランダム化、２パート、第Ｉ相研究である。参加適格性が確認され、インフォームドコンセントを得た時点で、患者に対して逆流洗浄による１５～１８Ｌ単核球アフェレーシス回収を計画し、約３３３×１０^６細胞／バイアルとなるように少なくとも８つのバイアルに等分し、自家ＡｄＨＥＲ２ＥＣＴＭ ＤＣワクチン生成物をさらに調製するために凍結保存する。

パートＩの患者数Ｎ＝３０
研究のパートＩでは、いくつかのＨＥＲ２／ｎｅｕ発現によって特徴付けられるが、トラスツズマブが臨床的に適応しない以下の再発性または進行性の転移性固形腫瘍を有する成人およびアジュバント膀胱癌患者におけるワクチン用量漸増について調査する：
・ＩＨＣによってＨＥＲ２ １＋、２＋、または３＋であるか、ＶＹＳＩＳ（商標）ＦＩＳＨの結果が１．８を超えることが公知の卵巣癌、結腸癌、非小細胞肺癌、腎細胞癌、膀胱癌、および前立腺癌の患者
・ＨＥＲ２ ２＋または３＋であるか、ＶＹＳＩＳ（商標）ＦＩＳＨの結果が２．２未満であることが公知の乳癌患者

アジュバント膀胱癌患者は、ＡｄＨＥＲ２ＥＣＴＭ ＤＣワクチンの安全性が少なくとも１０人の患者において１２週間にわたって証明されるまで研究のパートＩに登録されない。

パートＩの目的は、ワクチンの免疫原性および臨床活性の予備査定に加えて、ＨＥＲ２指向性治療に対して未処置のこの患者集団において心毒性に関する有意な安全上の有害シグナルが先立って存在するかどうかを決定することである。許容され得る腫瘍には、乳癌、卵巣癌、結腸癌、非小細胞肺癌、腎細胞癌、膀胱癌、および前立腺癌が含まれる。ＨＥＲ２を発現する広範囲の腫瘍を含めることにより、より短期間に症例を集め、ワクチンの安全性および免疫原性を迅速に決定することが可能である。しかし、種々のＨＥＲ２発現レベルを有する多発性腫瘍型の被験体を含めることにより、生物学的に活性な至適用量の同定を妨げ得る。

投薬量および投与
この研究パートに、以下に概要を示したワクチン用量コホートにおいてコホートあたり６人の患者が参加する：
用量コホート１（患者数Ｎ＝６）：５×１０^６生存細胞／ワクチン
用量コホート２（患者数Ｎ＝６）：１０×１０^６生存細胞／ワクチン
用量コホート３（患者数Ｎ＝６）：２０×１０^６生存細胞／ワクチン

任意の活性が見出された場合、最大許容用量でさらに１２人まで患者を拡大する（全部で３０人）。

自家ＡｄＨＥＲ２ＥＣＴＭ ＤＣワクチンを、０、４、８、１６、および２４週目に皮内投与する。免疫関連奏効基準による安定病態、部分奏効、またはより良好な奏効の臨床上の証拠を得るための再病期分類を、８、１６、２４、３６、および４８週目の所見において、１２、２０、２８、４０、および５２週目の確証的調査（ｉｒＣＲまたはｉｒＰＲを確認するために示す場合）を用いて査定する。アジュバント膀胱癌患者に対して、８、１６、２４、３６、および４８週目に疾患再発の証拠を得るための再病期分類（再発が確証された場合に４週間後に確証的調査を用いる）を行う。ワクチン用量漸増は、以下に指定した手順に従う。

パートＩＩの患者数Ｎ＝３０
研究のパートＩＩを、ＩＨＣによる３＋ＨＥＲ２／ｎｅｕ発現を有するか、ＶＹＳＩＳ（商標）ＦＩＳＨの結果が２．２を超える再発性または進行性の転移性乳癌を有する成人において行う。ワクチン用量漸増を、トラスツズマブ、ペルツズマブ、ラパチニブ、ａｄｏ－トラスツズマブ・エムタンシン（ＴＤＭ１）への有意な事前の曝露および他の治験中のＨＥＲ２指向性治療（例えば、ＭＧＡＨ２２）を行った集団において同一の様式で繰り返して、ワクチンの免疫原性および臨床活性の査定に加えて、心毒性に関する安全上の有害シグナルが存在するかどうかを決定する。ワクチン用量ＭＴＤをパートＩで同定しない限り、ワクチン用量漸増、投与、および再病期分類査定は、パートＩで行ったものと同一である。

提案投薬量および投与
研究パートＩＩに、以下に概要を示したワクチン用量コホートにおいてコホートあたり６人の乳癌患者が参加する：
用量コホート１（患者数Ｎ＝６）：５×１０^６生存細胞／ワクチン
用量コホート２（患者数Ｎ＝６）：１０×１０^６生存細胞／ワクチン
用量コホート３（患者数Ｎ＝６）：２０×１０^６生存細胞／ワクチン

任意の活性が見出された場合、最大許容用量でさらに１２人まで患者を拡大する（全部で３０人）。

自家ＡｄＨＥＲ２ＥＣＴＭ ＤＣワクチンを、０、４、８、１６、および２４週目に皮内投与する。免疫関連奏効基準による安定病態、部分奏効、またはより良好な奏効の臨床上の証拠を得るための再病期分類を、８、１６、２４、３６、および４８週目の所見において、１２、２０、２８、４０、および５２週目の確証的調査（ｉｒＣＲまたはｉｒＰＲを確認するために示す場合）を用いて査定する。ワクチン用量漸増は、以下に指定した手順に従う。

用量漸増
転移性乳癌のためにトラスツズマブ単剤療法で処置した７％までのＨＥＲ２／ｎｅｕ発現腫瘍患者が臨床的に有意な心機能障害（鬱血性心不全が含まれる）を発症したと報告された。この研究のために提案された治療ＡｄＨＥＲ２ＥＣＴＭ ＤＣワクチンは、心毒性を生じるほどのレベルではない場合は許容されると見なされるであろうが、このレベルを超える場合、許容されない。限定数の患者を使用してこれを評価するために、早期中止規則を組み込んでいることが相違点である２パートデザインを実施した。研究のパートＩおよびパートＩＩのそれぞれに３０人の評価可能患者を追加し、実験ＡｄＨＥＲ２ＥＣＴＭ ＤＣワクチンで処置することを目的とする。早期中止規則を発動しない限り、臨床的に有意な心毒性を経験した患者の数を決定して心毒性の頻度を推定する。さらに、毒性が認められる用量レベルも試験する。

用量漸増を６人の患者のコホートで進行させる。用量コホート内の６人の患者中０人または６人の患者中１人で毒性が証明されない限り用量漸増を進行させ、コホート内の６人の患者中少なくとも３人が研究１２週目に到達した。任意の所与の用量コホートにおける６人の患者中２人が心毒性を発症した場合、その用量コホートへのさらなる追加を締め切り、同程度の用量を調査し、用量拡大のためのさらなる１２人の患者を、その次に低い用量のワクチンコホートに参加させて心毒性をさらに査定する。１８人の処置患者のうちの０～１人が心毒性を発症するワクチン用量を、最大許容用量（ＭＴＤ）と定義する。所与の用量での１８人のうちの２人またはそれを超える患者が心毒性を発症した場合、その用量はＭＴＤを超えており、その用量未満の用量レベルをＭＴＤと見なす。コホート３への登録に到達し、且つ６人の患者中０人または６人の患者中１人が毒性を示す場合、この最も高い用量コホートを、パートＩにおける最大目標患者数である３０人にするために、さらなる１２人の患者によって拡大する。

パートＩの３つ全てのコホートで用量漸増を進め、３０人の患者のうちの０～２人が心毒性を経験する場合、転移性乳癌を有し、且つＨＥＲ２指向性治療に事前に曝露した患者における研究のパートＩＩをパートＩと同一の様式で進める。あるワクチン用量でパートＩにおいて２＋／１８人が心毒性を示すことが見出された場合、パートＩ由来のＭＴＤは研究のパートＩＩで使用されるワクチン用量である。この場合、用量漸増を行わず、最大追加患者数である３０人をパートＩＩに登録する。

ＤＬＴが認められない場合、パート１およびパートＩＩ内の投与コホートを、免疫原性および臨床転帰を有する患者の割合について評価して生物学的に最適なワクチン用量を決定する。このワクチン用量を、各患者集団を含む任意の将来的な第ＩＩ相研究で使用するであろう。評価不可能患者の可能性を許容するために、追加上限６５を使用する。

研究の修正：
安全上の有害シグナルの証拠がなかったので、パートＩ拡大コホート（Ｎ＝１２）を、２０００万個生存ＤＣ／用量から４０００万個生存ＤＣ／用量に増加させた。

パートＩＩ研究コホート登録において、５×１０^６および１０×１０^６の各用量を排除して２０×１０^６生存ＤＣを投与し、次いで、拡大コホート（Ｎ＝２４）用量である４０×１０^６生存ＤＣ／用量に進めるように修正した。

薬物投与
０週目の来院時に全ての患者に対して１５～１８Ｌアフェレーシスを行って、樹状細胞調製物のために末梢血単球を除去し、同様に、フローサイトメトリーおよび免疫学的研究のために末梢血単核球を除去する。その後の樹状細胞成熟化のために使用する細胞は、最初のアフェレーシス中に凍結した単球に由来する。自家ＡｄＨＥＲ２ＥＣＴＭ樹状細胞ワクチンを、ｃＧＭＰ条件下で製造する。

自家ＡｄＨＥＲ２ＥＣＴＭ ＤＣワクチン調製物を、放出標準（有核細胞の数および濃度、外観、ＤＣ検証マーカーのフローサイトメトリーによる検証、生存率６０％以上、および生成物の無菌性および安全性試験）およびＨＥＲ２発現（ＨＥＲ２／ｎｅｕ発現細胞の比率およびアイソタイプコントロールに対するＨＥＲ２／ｎｅｕ発現の幾何平均蛍光性強度（ＭＦＩ）の比）について査定する。

研究のパートＩおよびパートＩＩの両方の患者について、自家ＡｄＨＥＲ２ＥＣＴＭ ＤＣワクチン接種を、登録投与コホート（５、１０、または２０×１０^６生存細胞／ワクチン）に従って行い、全部で４回のワクチン接種のために０、４、８、および２４週目に２つまでの注射部位に皮内投与する。ワクチンを投与し、患者を、その最初のＨＥＲ２ ＤＣワクチン投与後に２時間にわたって即時有害事象ワクチン反応（ＶＳ、臨床査定）についてモニタリングする。第１のワクチン接種で有害反応が認められない場合、患者を、全てのその後のワクチン接種について３０分間モニタリングする。

第１のワクチン接種後に有害反応が認められる場合、この反応を特徴付け、この反応が用量制限毒性（ＤＬＴ）と見なされるかどうかを判断する。この有害反応がＤＬＴではないと判断される場合、その後のワクチン接種のためのワクチン接種後モニタリングの持続時間を、最初のワクチン反応の重症度に応じて臨床的に示されるように決定する。

全ての患者にＡｄＨＥＲ２ＥＣＴＭ ＤＣワクチンレポートカードを配布し、各ＡｄＨＥＲ２ＥＣＴＭ ＤＣワクチン投与後の完了方法を説明する。パートＩおよびパートＩＩの両患者についてのその後の投与コホートへの登録を、安全性モニタリングが可能になるように調整する。用量コホート内の６人の患者のうちの０人または６人の患者のうちの１人に毒性の証拠がない限り用量漸増を進め、コホート内の６人の患者のうちの少なくとも３人が研究１２週目に到達した後に、次のワクチン用量コホートの登録を開始することができる。最初の３回のワクチン接種を含む１２週間の枠内で用量制限毒性が認められない場合、さらなる患者の登録を、上記に概説するように進める。

用量の修正および免疫化停止規則
トラスツズマブと異なり、ＡｄＨＥＲ２ＥＣＴＭワクチンは、ＨＥＲ２のＥＣドメインおよびＴＭドメインの両方を標的にする。乳癌の女性におけるトラスツズマブの使用は、小さいが有意な（約７％）心機能障害の発症リスクに関連することが示されている。どのようにしてトラスツズマブが心毒性を引き起こすのかについては正確には知られていない。この生成物を使用したワクチン接種の目的は、ＨＥＲ２を認識する抗体（潜在的にはキラー細胞も）を作製するように患者自身の免疫系を刺激することである。本研究の前に、患者自身の免疫系によって作製された抗体が心機能障害を引き起こすかどうかは知られていなかった。ＡｄＨＥＲ２ＥＣＴＭ ＤＣワクチン接種を受けた患者において用量の修正は行わない。被験体は、用量制限毒性（ＤＬＴ）を経験した場合、免疫化を停止する。

ＤＬＴを経験した患者の補助的管理：
グレード２またはそれを超えるアレルギー性ＤＬＴまたは自己免疫性ＤＬＴを経験している患者について、ＤＬＴがグレード１以下に回復するまで補助的臨床介入を行う。

グレード２またはそれを超える心ＤＬＴを経験している患者について、ＤＬＴがグレード１以下に回復するまで補助的臨床介入を行う。

患者はまた、ＬＶＥＦがベースライン機能に回復するまで、４週間間隔でＬＶＥＦ測定を繰り返す。その後、心機能を、研究１２４週目までモニタリングし続ける。

グレード２またはそれを超える心ＤＬＴを経験しており、且つグレード１以下に回復していない患者に臨床的補助を継続し、研究１２４週目までモニタリングする。

グレード３またはそれを超える器官（皮膚、胃腸、肝臓、肺、腎臓／尿生殖器、または神経）ＤＬＴを経験している患者について、ＤＬＴがグレード１以下に回復するまで補助的臨床介入を行う。

グレード３またはそれを超えるアナフィラキシーＤＬＴを経験している患者について、ＤＬＴがグレード２以下に回復するまで補助的臨床介入を行う。

グレード３またはそれを超える局所注射部位反応を経験している患者について、ＤＬＴがグレード１以下に回復するまで補助的臨床介入を行う。

プロトコル治療からの除外基準および研究離脱基準
プロトコル治療からの除外基準：
・３２週目の６０日間安全性来院を含むプロトコル治療（５回の自家ＡｄＨＥＲ２ＥＣＴＭ ＤＣワクチン投与）の完了。
・０週目の反復ＣＴスキャンにおいて５週目／４週目と０週目との間で疾患の進行が急速である（すなわち、全身腫瘍組織量（ＲＥＣＩＳＴ １．１）の２０％以上の増加）ことが確証されたとき。これらの患者を、研究から除去し、ＡｄＨＥＲ２ＥＣＴＭ ＤＣワクチン接種を回避する。
・免疫関連奏効基準（ｉｒＲＣ）（Ｗｏｌｃｈｏｋら，Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ １５：７４１２－７４２０，２００９）による疾患の進行。例外：３週目／２週目ベースラインと比較した全身腫瘍組織量が２５％以上増加したｉｒＰＤを有するか、８、１６、または２４週目の再病期分類において最低点を有する臨床的に安定した患者は、研究維持が許可される。３６週目またはそれ以降の再病期分類においてｉｒＰＤの基準を満たす患者を、進行性疾患のためのプロトコル治療から除去する。
・患者が用量制限毒性を経験していること。
・患者がおそらく、確実に、または明確にＡｄＨＥＲ２ＥＣＴＭ ＤＣワクチン接種と関連すると見なされるグレード３またはそれを超える有害事象／毒性を経験していること。
・患者が、未解決の処置関連毒性を経験していること。
・患者が、ＤＣワクチン製造に関する問題（例えば、必要とされるワクチン用量を生成するための樹状細胞の回収が不十分であること、ＤＣ生存率が継続的に減少してワクチン放出基準を満たすことができなくなることなど）のために処置から離れる場合。
・患者が、計画されたＡｄＨＥＲ２ＥＣＴＭ ＤＣワクチン投与の目標期日から４週間を超える処置の遅延を経験する場合。
・治験責任医師の意見として、許容不可能に処置リスクが増大する併発性疾病または医療状況（例えば、ＤＶＴ）。
・患者が研究要件を遵守しないこと。
・患者が著しく健康を損なったためにプロトコル指定の研究来院が不可能である場合。
・患者が研究中に妊娠したこと。
・患者がさらなる治療の停止を要求し、拒否した場合。
・患者が禁止併用薬を必要とすること。
・死亡した場合。

プロトコル治療から一旦離脱して潜在的な心毒性を調査するためのモニタリングの継続
・３．５．１節に概要を述べた理由のために患者を治療から除去した場合。
・患者がその後の研究週において指定した心モニタリング研究を受け続ける場合。
・ＨＰＥ査定およびＥＣＯＧ査定を含む心筋トロポニンレベル（４、８、１２、１６、２０、２４、２８、３２、４０、および４８週目）および心エコー図（４、１２、２０、２８、３２、４０、４８、７６、１００、および１２４週目）についての研究スキーム。
・心モニタリングを行う場合。

研究離脱基準
・計画された研究来院を完了した場合。
・患者がさらなる研究の参加の停止を要求し、拒否した場合。
・患者が研究要件を遵守しないこと。
・患者が著しく健康を損なったためにプロトコル指定の研究来院が不可能である場合。
・３．５．１．２で指定した急速進行性疾患に罹患している場合。
・死亡した場合。

併用投薬／措置
患者は、ＥＲ＋腫瘍状態のためのタモキシフェンまたはアロマターゼインヒビターとの併用治療が許容される。患者は、骨量減少を防止するための併用薬（ビスホスホネートおよびデノスマブが含まれる）を服用することができる。研究被験体は、局所注射部位または全身注射部位の反応の症状軽減のためにマルチビタミン、鎮痛薬（ＮＳＡＩＤＳまたはアセトアミノフェン）、解熱薬、および抗ヒスタミン薬の服用が許容される。患者は、慢性疾患（例えば、高血圧症、糖尿病、高コレステロール血症など）の処置で臨床的に適応される投薬を継続することが許容される。
除外される治療：研究登録の１週間以内のトラスツズマブ、ペルツズマブ、ラパチニブ、ａｄｏ－トラスツズマブ・エムタンシン（ＴＤＭ１）、または他の治験中のＨＥＲ２指向性治療（ＭＧＡＨ２２など）。
化学療法：この試験中は、化学療法の併用は許容されない。
抗癌放射性核種：この試験中は、抗癌放射性核種の併用は許容されない。患者は、新規の放射性核種造影剤（例えば、^１１１インジウムＣＨＸ－Ａ ＤＴＰＡトラスツズマブ）の研究の同時登録が許容される。
二次ホルモン治療：タモキシフェンまたはアロマターゼ（ａｒｏｍａｔｓｅ）インヒビター以外の補助ホルモン処置の併用は許容されない。
コルチコステロイド：この試験中は、慢性全身性コルチコステロイドの併用（臨床適応症のための緊急使用以外）は許容されない。しかし、コルチコステロイドの吸入、鼻腔内噴霧、および制限された身体部分への局所用クリームの使用は許容される。

ビタミンＤ３（コレカルシフェロール）補給
ビタミンＤは、摂取されたときに肝臓内で２５－ＯＨビタミンＤに代謝される。細胞内で、２５－ＯＨビタミンＤは１－ヒドロキシラーゼによってさらに代謝され、セコステロイドホルモンに変換される。このホルモンは、体内の多数の重要な細胞機能および免疫機能に重要である。細胞内において第２の酵素は２４－ヒドロキシラーゼであり、その機能は、ビタミンＤを減少させることであり、それにより、細胞内ビタミンＤホメオスタシスを維持する。ビタミンＤの古典的な機能は、カルシウムホメオスタシスならびに骨形成および骨吸収を制御することである。しかし、ビタミンＤのさらなる機能が証明されており、その機能には、細胞のアポトーシスおよび分化の促進によって免疫応答に影響を及ぼすことが含まれる。前立腺癌、乳房癌、結腸癌、および他の癌におけるビタミンＤ欠乏症の正確な役割には議論の余地があり、いくつかの研究所による研究ではある役割があることを示唆し、他の疫学的研究では役割がないか、補給を回避すべきである可能性すらあることを示唆している。Ｍａｒｓｈａｌｌ ａｎｄ ｃｏｌｌｅａｇｕｅｓによる最近の研究（Ｍａｒｓｈａｌｌら，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ Ｍｅｔａｂｌ ９７：２３１５－２３２４，２０１２）では、４．０００ＩＵ／日で１年間のビタミンＤ補給を、積極的サーベイランス下で前立腺癌リスクの低い男性（グリーソンスコア６、１２本中陽性コア数１～６および、ＰＳＡ１０未満）において試験した。１年後の再生検の際に、６０％で陽性コア数、グリーソンスコア、またはその両方が低下し、６％でこれらの因子は不変であった。さらに、ＰＳＡレベルは上昇しなかった。Ｖｉｅｔｈの研究チームによって報告された別の研究では（Ｗａｇｎｅｒら，ＬＢ－４３５，ＡＡＣＲ Ａｎｎｕａｌ Ｍｅｅｔｉｎｇ，Ｃｈｉｃａｇｏ，ＩＬ，Ａｐｒｉｌ ３，２０１２）、根治的前立腺摘除術を受ける予定の６６人の男性を、ビタミンＤの日用量４００、１０，０００、または４０，０００ＩＵ／日を３～８週間にわたって手術前に投与するために無作為に割り当てた。前立腺におけるカルシトリオールレベルは、ビタミンＤの用量が増加するにつれて漸増し、これは、Ｋｉ６７レベルがより低いことおよび特異的成長インヒビターｍｉｃｒｏＲＮＡレベルがより高いことに対応している。

いくつかの研究では、ビタミンＤレベルの低い女性は乳癌の発生リスクおよび死亡率が増加することが示されているが、研究はこの患者集団におけるビタミンＤレベルおよび予後変数（例えば、ホルモン受容体の状態）、Ｏｎｃｏｔｙｐｅ ＤＸなどの調査を欠いている。Ｐｅｐｐｏｎｅの研究チームによって実施された１９４人の乳癌手術後状態の女性および１９４人の癌のない対照の症例対照研究では（Ｐｅｐｐｏｎｅら，Ａｎｎ Ｓｕｒｇ Ｏｎｃｏｌ １９（８）：２５９０－２５９９，２０１２）、乳癌女性は、対照より２５－ＯＨビタミンレベルが有意に低いことが認められた（３２．７ｎｇ／ｍＬ対３７．４ｎｇ／ｍＬ、それぞれ、Ｐ＝０．０２）。

２５－ＯＨビタミンＤレベルが最適以下（＜３２ｎｇ／ｍＬ）の女性は、最適２５－ＯＨ Ｄ濃度を有する女性よりＥＲ陰性癌（ＯＲ＝２．５９、９５％信頼区間［９５％ＣＩ］＝１．０８～６．２３）およびトリプルネガティブ癌（ＯＲ＝３．１５、９５％ＣＩ＝１．０５～９．４９）を有するオッズが有意に増加した。さらに、基底細胞様表現型を有する女性は、ルミナルＡ表現型を有する女性よりも２５－ＯＨビタミンＤレベルが低かった（２４．２ｎｇ／ｍＬ対３２．８ｎｇ／ｍＬ、それぞれ、Ｐ＝０．０４）。要約すれば、侵襲性がより高い乳癌分子表現型（基底細胞様）および予後指標がより悪化した（ＥＲ陰性癌およびトリプルネガティブ癌）女性は、平均２５－ＯＨビタミンＤレベルがより低かった。その免疫機能における重要な役割および癌病態生理学における役割の可能性を考慮すると、全患者の２５－ＯＨビタミンＤレベルは、ベースラインで得られるレベルであった。健康に最適な２５－ＯＨビタミンＤの目標レベルについて議論の余地があるが、大多数のビタミンＤ専門家は、４０ｎｇ／ｍＬを超えるべきであることに同意している。

２５－ＯＨビタミンＤレベルが４０ｎｇ／ｍＬ未満の全ての患者に、検出されたビタミンＤ欠乏症の重症度に応じて、２０００ＩＵまたは４０００ＩＵ／日のいずれかのビタミンＤ３（コレカルシフェロール）の経口補給を開始する。２５－ＯＨビタミンＤレベルを、研究８、１６、２８、および５２週目に、モニタリングし続ける。

奏効基準
腫瘍の測定および奏効の評価を、１２週目および１６週目、２８週目および３２週目、ならびに４８週目および５２週目に行い（示す場合、４週間後に確証的調査を行う）、この測定および評価には、理学的検査、ＣＴ画像化、および骨スキャン画像化（２８週目および４８週目のみ）研究が含まれる。奏効を、免疫関連奏効基準（ｉｒＲＣ）（Ｗｏｌｃｈｏｋら，Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ １５：７４１２－７４２０，２００９）に基づいて決定する。ｉｒＲＣは、以下で概要を述べるように、ＷＨＯ基準を修正している。ｉｒＲＣにしたがった全奏効は、以下の時点奏効査定（全身腫瘍組織量に基づく）に由来する：
ｉｒＣＲ：実証第１日目から４週間もの反復した連続査定によって確認した全病変の完全な消失（測定可能であるかどうかと無関係、且つ新規の病変なし）。
ｉｒＰＲ：最初の実証から少なくとも４週間後の連続査定によって確認されたベースランと比較した５０％以上の全身腫瘍組織量の減少。
ｉｒＳＤ：ｉｒＰＤの非存在下でｉｒＣＲまたはｉｒＰＲの基準を満たさないこと。
ｉｒＰＤ：実証第１日目から４週間もの反復した連続査定によって確認した最低点（記録された最小全身腫瘍組織量）と比較した２５％以上の全身腫瘍組織量の増加。

８、１６、または２４週目の再病期分類における最低点と比較して全身腫瘍組織量が２５％以上増加したｉｒＰＤを有する臨床的に安定な患者は、前臨床動物研究におけるＡｄＨＥＲ２ＥＣＴＭ ＤＣワクチン接種に関連する固有の奏効プロフィール（最初に腫瘍が成長し、その後に後退する）のために、研究への残留が許容される。３６週目またはそれ以降の再病期分類においてｉｒＰＤ基準を満たす患者を、進行性疾患の研究から除去する。

有効性を査定する。全客観的奏効は、奏効がｉｒＲＣ慣習によって最初に実証されたてから少なくとも４週間後に行った確証的調査を有する。全客観的奏効を再検討し、確認する。

奏効の定義
奏効および進行を、前述の新規の免疫関連奏効基準を使用して本研究で評価する。注釈：病変を、以下の６．２．２節で概要を述べた疾患パラメータの基準を使用して、測定可能または測定不能のいずれかに分類する。測定可能性はさらなる意味や正確性を提供する用語ではないので、測定可能性に関する言及には用語「評価可能な」を使用する。

疾患パラメータ
測定不能な疾患：測定可能病変を、少なくとも１つの寸法（記録すべき最長径）で正確に測定することができる病変（胸部Ｘ線による２０ｍｍ以上、ＣＴスキャンで１０ｍｍ以上、またはカリパスで１０ｍｍ以上（測定可能な、臨床的に可視的な皮膚病変についての臨床検査による））と定義する。全ての腫瘍測定値を、ミリメートル（またはセンチメートルで表した小数）で記録する。以前に照射した領域に存在する腫瘍病変は、進行が実証されない限り、測定可能病変と見なさない。

悪性リンパ節：病理学的に拡大され、且つ測定可能であると見なされるためには、ＣＴスキャンによって査定した場合にリンパ節の短軸が１５ｍｍ以上でなければならない（ＣＴスキャン用切片の厚みは、５ｍｍほどでしかないことが推奨される）。ベースラインおよび追跡において、短軸のみを測定し、追跡する。

測定不能疾患：全ての他の病変（または罹患部位）（小病変（最長径１０ｍｍ未満または短軸が１０ｍｍ以上から１５ｍｍ未満の病的リンパ節）が含まれる）を測定不能疾患と見なす。骨病変、軟膜疾患、腹水、胸膜／心膜浸出液、真皮側リンパ管炎／肺炎、乳房の炎症性疾患、および腹部腫瘤（ＣＴまたはＭＲＩによって追跡されない）を、測定不能と見なす。定義によって嚢胞性病変は単純性嚢胞であるので、Ｘ線検査で定義された単純性嚢胞の基準を満たす嚢胞性病変を、悪性病変（測定可能でも不能でもない）と見なす。嚢胞性病変が上記の測定可能性の定義を満たす場合、嚢胞転移を示すと考えられる「嚢胞性病変」を、測定可能病変と見なすことができる。しかし、同一患者内に非嚢胞性病変が存在する場合、非嚢胞性病変を標的病変として選択することが好ましい。

標的病変：器官あたり最大で２病変までおよび全部で５病変の全ての測定可能病変（全関連器官の代表）を標的病変と定義し、ベースラインで記録および測定する。標的病変を、そのサイズ（最長径を有する病変）に基づいて選択し、標的病変は全関連器官の代表であるが、さらに、再現性のある反復測定に役立つ病変である。最大の病変自体が再現可能な測定に役立たない状況では、再現性よく測定することができる次に大きな病変を選択すべきであることは時折事実かもしれない。全標的病変についての直径（非リンパ節病変については最長径、リンパ節病変については短軸）の合計を計算し、ベースライン合計直径として報告する。リンパ節を合計に含める場合、短軸のみを合計に加える。ベースライン合計直径を参考として使用して、測定可能疾患の寸法で任意の客観的腫瘍退縮をさらに特徴づける。

非標的病変：全ての他の病変（または罹患部位）（５つの標的病変に加えて任意の測定可能病変を含む）を非標的病変と定義し、ベースラインで記録する。これらの病変の測定値は必要ないが、それぞれの病変のその存在、非存在、または稀な明確な進行を、追跡調査を通して記述する。

測定可能疾患の評価方法
定規またはカリパスを使用して全て採寸し、計量記号で記録する。可能な限り処置開始時に近い時点および処置開始前の４週間を決して超えない時点で、全てのベースライン評価を行う。同一の査定方法および同一の技術を使用して、ベースラインおよび追跡中にそれぞれの同定および報告された病変を特徴づける。追跡している病変を画像化できないが、臨床検査による査定は可能であるという場合を除いて、画像化ベースの評価が臨床検査による評価より好ましい。
従来のＣＴ：このガイドラインは、ＣＴ切片の厚さが５ｍｍまたはそれ未満であるという仮定に基づいたＣＴスキャンでの病変の測定可能性を定義している。ＣＴスキャンが５ｍｍを超える切片の厚さを有する場合、測定可能病変の最小サイズは、切片の厚さの２倍であるべきである。
臨床病変：臨床的に可視的な皮膚病変を、測定可能疾患の評価のために利用する。
胸部Ｘ線：胸部Ｘ線を、測定可能疾患の評価のために利用しない。
超音波：超音波を測定方法として利用しない。

奏効基準
奏効を、免疫関連奏効基準（ｉｒＲＣ）に基づいて決定する。ｉｒＲＣは、以下で概要を述べるように、ＷＨＯ基準を修正している。ｉｒＲＣにしたがった全奏効は、以下の時点奏効査定（全身腫瘍組織量に基づく）に由来する：
ｉｒＣＲ：実証第１日目から４週間もの反復した連続査定によって確認した全病変の完全な消失（測定可能であるかどうかと無関係、且つ新規の病変なし）。
ｉｒＰＲ：最初の実証から少なくとも４週間後の連続査定によって確認されたベースランと比較した５０％以上の全身腫瘍組織量の減少。
ｉｒＳＤ：ｉｒＰＤの非存在下でｉｒＣＲまたはｉｒＰＲの基準を満たさないこと。
ｉｒＰＤ：実証第１日目から４週間もの反復した連続査定によって確認した最低点（記録された最小全身腫瘍組織量）と比較した２５％以上の全身腫瘍組織量の増加。

８、１６、および２４週目の再病期分類における最低点と比較して全身腫瘍組織量が２５％以上増加したｉｒＰＤを有する臨床的に安定な患者は、前臨床動物研究におけるＡｄＨＥＲ２ＥＣＴＭ ＤＣワクチン接種に関連する固有の奏効プロフィール（最初に腫瘍が成長し、その後に後退する）のために、研究への残留が許容される。３６週目またはそれ以降の再病期分類においてｉｒＰＤ基準を満たす患者を、進行性疾患の研究から除去する。

最良総合効果の評価
最良総合効果は、処置開始から疾患の進行／再発まで記録した最良の奏効である（進行性疾患の参考として処置開始から記録した最小の測定値を採用する）。患者の最良奏効の割り当ては、測定および確認基準の両方の達成に依存する。この研究の目的のために、最良総合効果をｉｒＲＣにしたがって定義する。

確認測定／奏効期間
確認：ｉｒＰＲまたはｉｒＣＲの状態を割り当てるために、奏効基準を最初に満たしてから４週間行った反復査定によって腫瘍測定値の変化を確認する。ｉｒＳＤの場合、ｉｒＳＤ基準を再度満たすことを確認するための追跡測定のために反復査定を４週間後に行う。進行性疾患（ｉｒＰＤ）を、少なくとも４週間後の第２の観察によって確認しなければならない。

全奏効期間：全奏効期間を、測定基準がｉｒＣＲまたはｉｒＰＲを満たした時間（どちらかが最初に記録された時間）からｉｒＰＤが客観的に実証された最初の日まで測定する。全ｉｒＣＲ期間を、測定基準がｉｒＣＲを最初に満たした時間から再発性疾患が客観的に実証された最初の日まで測定する。再発性疾患または進行性疾患の発症後にｉｒＣＲ、ｉｒＰＲ、およびｉｒＳＤを有する患者の増殖抑制期間（ＴＴＰ）も記録する。

安定病態期間：安定病態（ｉｒＳＤ）を、処置開始から進行についてのｉｒＰＤ基準を満たすまで測定する。

無憎悪生存期間および全生存期間
無憎悪生存期間（ＰＦＳ）を、一次化学療法を完了している測定可能疾患を持たないアジュバント膀胱癌患者および転移性膀胱癌患者のみで査定する。全生存期間（ＯＳ）は、この臨床調査の一部として査定しない。

奏効の再検討
奏効を再検討する。自家ＡｄＨＥＲ２ＥＣＴＭ ＤＣワクチン接種の予備抗腫瘍活性の査定は、この第Ｉ相、２パート用量漸増研究の二次目的でしかないので、奏効は、研究から独立している専門家によって再検討されない。

薬学情報
ＡＤ５Ｆ３５ＨＥＲ２ＥＣＴＭ（ＡＤＨＥＲ２）
生成物名：Ａｄ５ｆ３５ＨＥＲ２ＥＣＴＭ
ベクターの誘導
Ａｄ５ｆ３５ＨＥＲ２ＥＣＴＭベクターを、ｃＧＭＰ条件下で産生した。Ａｄ３５のノブおよびファイバーを置換して組換えＡｄ５ｆ３５ベクターを得る。このベクターは、ウイルス親和性がより高く、ヒト樹状細胞（ＤＣ）への導入効率がより高い。

ベクター製造の概要
ベクターを、ｃＧＭＰ条件下で製造した。アデノウイルスベクターを、２ラウンドのプラーク単離によって最初に精製し、その後にヒト胚腎臓細胞（ＨＥＫ－２９３）上で連続的に増殖させた。最終増殖アデノウイルスベクターを、二重塩化セシウム勾配を使用した超遠心分離によって精製した。残存塩化セシウムを、処方緩衝液に対するベクター含有溶液の透析によって除去した。

Ａｄ５ｆ３５ＨＥＲ２ＥＣＴＭの初期マスターウイルスバンクを生成し（ＶＭ１００３）、２ラウンドのプラーク精製に供して最終的に精製マスターウイルスバンクバルクベクター（ＶＭＢ１００３）を生成し、その後にこのＶＭＢ１００３を使用して、第１のベクターの臨床クロットを産生し、次いで、臨床で使用するためにバイアルに入れて保存した。Ａｄｆ５３５ＨＥＲ２ＥＣＴＭ臨床用生成物は、ラベリングしたＶＭＣ１００３であり、１～１０^１２ウイルス粒子／ｍｌおよび０．２ｍｌ／バイアルを含む。Ａｄ５ｆ３５ＨＥＲ２ＥＣＴＭベクターのマップを図２に示し、ベクターのヌクレオチド配列を、本明細書中で配列番号１として記載する。

毒性
Ａｄ５ｆ３５ＨＥＲ２ＥＣＴＭベクターの毒性は知られていない。このベクターは、形質導入／形質転換するために使用される宿主細胞のゲノムＤＮＡに取り込まれない複製能力のないベクターである。樹状細胞を形質導入すると細胞生存率がいくらか低下する。この細胞生存率の低下は、前臨床研究に基づくとドナー依存性が高い。したがって、この研究において、提案される通常のドナーが使用する形質導入過程が特徴づけられる。

実施例４：ＡＢ同種血漿の使用
ＡＢ同種血漿を、血液型ＡＢの健康な通常のボランティアドナーから得た。この血漿を試験し、感染性病原体（Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、およびヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）など）に対して陰性であることを確認した。ＡＢ同種血漿を熱失活させ（ＨＩ ＡＢ）、この血漿を、治療樹状細胞（ＤＣ）ワクチンの生成過程における自家血漿（患者由来の血漿）使用に代わる手段として使用して、単球を成熟樹状細胞に培養する。解凍した単球を、９０％ＲＰＭＩ－１６４０、１０％自家ＨＩ血漿またはＨＩ ＡＢ同種血漿、２０００ＩＵ／ｍｌ ＩＬ－４、２０００ＩＵｍＬ ｒＧＭ－ＣＳＦ、および１０ｍｃｇ／ｍＬゲンタマイシン（初期培養用）を含む培地中に再懸濁した。

第Ｉ相臨床試験におけるＡｄＨＥＲ２ＥＣＴＭ（ＡｄＨＥＲ２）樹状細胞ワクチンプラットフォームを調査する過程において（上記実施例を参照のこと）、自家血漿の使用に関連する最終樹状細胞ワクチン生成物におけるＨＥＲ２の形質導入効率の不十分さおよび低発現（それぞれ、ＣＤ３４０％およびＣＤ３４０ ＭＦＩで示される）を熱失活ＡＢ同種（無関係）血漿の使用によって改善および克服することができると判断された。全ての被験体が自家血漿の使用による不十分なＨＥＲ２／ＣＤ３４０発現を示すわけではなく、不十分な発現の程度は、影響を受ける患者によって変動する。

最終ＡｄＨＥＲ２ ＤＣワクチン生成物における不十分なＨＥＲ２／ＣＤ３４０の形質導入および発現の克服に加えて、ＨＩ ＡＢ血漿はまた、ＡＤＨＥＲ２ ＤＣワクチンが皮内に送達された場合に先天免疫を誘発し、このワクチンに対する免疫応答の発生および強度を増強する能力を有する外来の「危険信号」をワクチンプラットフォーム中に提供する。

現時点で第１相試験に登録している全ての患者についてのＡｄＨＥＲ２ ＤＣワクチン最終生成物のまとめを提供している図７に述べるように、ＡＢ同種血漿の使用により、一般に、試験した全ての患者においてＨＥＲ２／ＣＤ３４０の形質導入および発現がより高くなった（しばしば、劇的により高くなった）。

同時刺激危険物質の送達に加えて最終ＤＣワクチン生成物におけるＨＥＲ２発現を最大にすることにより、ワクチンの治療効果が増強される。

実施例５：第Ｉ相臨床研究の結果
本明細書中に開示の２パート第Ｉ相研究（ＮＣＴ０１７３０１１８）のパートＩにおいて、ＨＥＲ２標的療法に対して未処置のＨＥＲ２＋転移固形腫瘍を有する被験体に、５用量までのＡｄＨＥＲ２ＥＣＴＭ ＤＣワクチンを０、４、８、１６、および２４週目に投与した。用量あたりＤＣで形質導入した５、１０、または２０×１０^６生存ＡｄＨＥＲ２ＥＣＴＭを利用して、３コホートの６または７人の患者に用量漸増を行った。コホート１～３は、用量制限や心毒性を生じずに完了した。４０×１０^６生存ＤＣ／ワクチンへさらに用量漸増させた拡大コホート（Ｎ＝１２）の登録を開始した。２人の膀胱癌患者を登録し、１０人を超える処置済み患者において１２週間の安全性が実証された後に、アジュバント療法において２０００万個のＤＣ用量でワクチン接種を受けさせた。免疫関連奏効基準（ｉｒＲＣ）を使用して奏効を査定した。

年齢の中央値６０歳（３６～７２歳の範囲）および事前処置レジメン数の中央値が３の全部で２１人の患者（結腸癌患者７人、卵巣癌患者５人、膀胱癌患者３人、および他の癌患者６人）に、２つまたはそれを超えるワクチン用量（中央値４用量、２～５用量の範囲）を投与した。被験体は、以下のＨＥＲ２ ＩＨＣを有する１４人の女性被験体および７人の男性被験体を含んでいた：１＋（Ｎ＝６）、２＋（Ｎ＝８）、または３＋（Ｎ＝７）。コホート１、２、および３において、６人中０人、６人中２人、および６人中４人の被験体に、全部で５回の計画されたワクチンをそれぞれ投与した。

患者の奏効は、臨床上の利点および抗腫瘍活性の証拠を示しており、図８Ａにまとめている。パートＩの各コホートで以下の奏効が認められた：
コホート１（５×１０^６：臨床的奏効なし。
コホート２（１０×１０^６）：胃食道癌患者において１つの部分奏効（ＰＲ）（－７１％が４４週間持続）；および２人の結腸癌患者において２４週間および２８週間持続する安定病態（ＳＤ）。
コホート３（２０×１０^６）：卵巣癌患者において１つの完全奏効（ＣＲ）（５２週間で進行）、および卵巣癌患者においてｉｒＲＣによる１つのＳＤ（３６週間で進行）。
拡大コホート（４０×１０^６）：１人の前立腺癌患者において１２週目で臨床的奏効なし；１人の子宮頸癌患者において１８週目で臨床的奏効なし（評価進行中）。

用量コホート２および３では、１１人の転移患者のうちの５人が、病勢コントロール率４３％となるＣＲ、ＰＲ、またはＳＤを有していた。全ＨＥＲ２発現範囲の被験体において奏効が認められた。２人のアジュバント膀胱癌患者は、６４週目および７６週目で疾患が認められないままであった。

有害事象は、注射部位反応に制限され（全てＧ２未満）、心エコー図によるＬＶＥＦの連続モニタリングおよび血清トロポニンＴレベルを使用した心安全性シグナルは検出されなかった。循環腫瘍細胞（ＣＴＣ）の減少は、１２週目に試験した１６人の患者中６人（３８％）で認められ、５人の患者中３人が疾患を制御されていた。これらのデータは、ＡｄＨＥＲ２ＥＣＴＭ ＤＣワクチンが安全で十分な忍容性があり、抗腫瘍活性（循環腫瘍細胞の減少が含まれる）に関連することを示している。

パートＩＩの被験体は、多剤ＨＥＲ２標的療法に失敗していたＨＥＲ２発現レベルが３＋の乳癌患者である。コホート１（患者数５）に、２０×１０^６生存ＤＣ／用量を投与した。５人の患者のうち３人（６０％）が、ｉｒＳＤの基準を満たし；他の２人の患者がｉｒＰＤを有するが、臨床的に安定している。これらの結果を図８Ｂにまとめている。

まとめると、これらの結果は、ＡｄＨＥＲ２ＥＣＴＭ ＤＣワクチンが、中央値３回の事前の化学療法レジメンに失敗しているＨＥＲ２＋進行性転移性固形腫瘍患者のうちの４６％～６０％で臨床上の利点を有することを証明している。このレベルの臨床上の利点は、第Ｉ相研究において予想外に高い。奏効期間が制限された奏効率２０～２５％またはそれ未満が、第Ｉ相用量漸増研究において、特に、重度の処置を経験した転移性疾患負荷の高い集団で典型的に認められる。

実施例６：転移性ＨＥＲ２^＋固形腫瘍患者におけるＡｄＨＥＲ２ＥＣＴＭ樹状細胞ワクチン接種前および後の、循環腫瘍細胞（ＣＴＣ）の全生存期間との関連
ＣＴＣレベルは、転移性乳癌（Ｃｒｉｓｔｏｆａｎｉｌｌｉら，Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ３５１：７８１－７９１，２００４）および前立腺癌（Ｓｃｈｅｒら，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ ３３：１－９，２０１５）における全生存期間（ＯＳ）に関連している。本実施例は、ＡｄＨＥＲ２ＥＣＴＭ自家ＤＣワクチンを投与した被験体におけるＣＴＣとＯＳとの間の関連について記載する。本研究の被験体は、１～３＋のＨＥＲ２発現を有する進行性転移性腫瘍を有する成人であった。

方法
非盲検、非ランダム化、２パート第Ｉ相研究（ＮＣＴ０１７３０１１８）において、ＨＥＲ２標的療法に対して未処置の１８人の（女性１１人、男性７人、年齢の中央値５７歳）ＨＥＲ２＋固形腫瘍（８人が結腸癌、１０人が他の癌；ＩＨＣ １＋ Ｎ＝３、２＋ Ｎ＝８、３＋ Ｎ＝７）を有する被験体に関するＣＴＣデータが利用可能であった；１６人に、少なくとも２用量の自家ＡｄＨＥＲ２ ＤＣワクチンを０、４、８、１６、および２４週目に投与した。５×１０^６、１０×１０^６、および２０×１０^６生存ＤＣ／ワクチンを利用して患者６人のコホートで用量漸増を行った。１０ｍｌ血液由来の上皮細胞接着分子（ＥｐＣＡＭ）＋、ＣＤ４５－ＣＴＣ、が、事前の磁性富化とフローサイトメトリー分析の組み合わせによって検出された。ＣＴＣを、ＨＥＲ２の発現および骨髄ホーミング分子ＣＸＣＲ４についてさらに特徴付けた。

結果
分析に利用可能な検体を有する進行性ＨＥＲ２＋転移性腫瘍の１８人の患者のうち、１７人（９４％）が、ＥｐＣＡＭ＋ＣＴＣを検出可能であった。ＨＥＲ２ ＩＨＣ２＋または３＋発現を有する被験体（Ｎ＝１５）において、１０ｍｌの末梢血あたり１１またはそれを超えるＨＥＲ２＋ＥｐＣＡＭ＋ＣＴＣを有する被験体の全生存期間はより短かった（Ｐ＝０．０２９）（図９Ａ）。非結腸直腸（ＣＲＣ）癌被験体（Ｎ＝１１）において、１０ｍｌの血液あたり１１またはそれを超えるＨＥＲ２＋ＥｐＣＡＭ＋ＣＴＣまたはＣＸＣＲ４＋ＥｐＣＡＭ＋ＣＴＣを有する患者の全生存期間はより短かった（それぞれ、Ｐ＝０．００４６およびＰ＝０．００６７）（それぞれ、図９Ｂおよび９Ｃ）。この同一の非ＣＲＣコホートでは、ＨＥＲ２＋ＥｐＣＡＭ＋ＣＴＣ数は、３用量のＡｄＨＥＲ２ ＤＣワクチンを投与した６人の患者において研究１２週目で減少に向かう傾向が示された（Ｐ＝０．０６３）。処置後にＨＥＲ２＋ＥｐＣＡＭ＋ＣＴＣが安定しているか減少している患者（Ｎ＝９）はまた、ＯＳがより良好に向かう傾向があった（Ｐ＝０．０５８）（図９Ｄ）。

これらの結果は、この進行性ＨＥＲ２＋転移性固形腫瘍の患者集団において、ベースラインで１１を超えるＨＥＲ２＋ＥｐＣＡＭ＋ＣＴＣがＨＥＲ２ ＩＨＣ２＋／３＋腫瘍患者または非ＣＲＣ腫瘍患者におけるより不良なＯＳと関連することを証明している。ＡｄＨＥＲ２ワクチン接種後のＨＥＲ２＋ＥｐＣＡＭ＋ＣＴＣの安定または減少は、生存期間が延長する傾向と関連する。

開示の発明の原理を適用することができる実施形態が多数存在する可能性を考慮して、例示の実施形態は本発明の好ましい例であることのみを目的とし、本発明の範囲を制限すると解釈されないと認識すべきである。むしろ、本発明の範囲は、以下の特許請求の範囲によって定義される。したがって、本発明者らは、本発明の全てがこれらの特許請求の範囲の範囲および意図に帰属すると主張する。

Claims (29)

1. 薬学的に許容され得るキャリア中に組換えアデノウイルスで形質導入された自家樹状細胞を含む、被験体におけるＨＥＲ２陽性癌を処置する方法において使用するための組成物であって、前記方法が、
   ＡＢ同種血漿を含む培養培地中で前記被験体から得た単球を培養することによって自家樹状細胞を調製する工程；および
   ヒトＨＥＲ２の細胞外（ＥＣ）ドメインおよび膜貫通（ＴＭ）ドメインならびにアデノウイルスタイプ３５（Ａｄ３５）ファイバータンパク質を発現する組換えアデノウイルスタイプ５（Ａｄ５）で前記自家樹状細胞を形質導入する工程
   を含む、組成物。
2. 前記ファイバータンパク質が、配列番号３のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の組成物。
3. 前記組成物がアジュバントをさらに含む、請求項１または請求項２に記載の組成物。
4. 前記ＨＥＲ２陽性癌が、乳癌、卵巣癌、結腸直腸癌、前立腺癌、腎細胞癌、膀胱癌、胃食道癌、非小細胞肺癌、肉腫、上衣腫、または、子宮内膜癌である、請求項１～３のいずれか１項に記載の組成物。
5. 前記癌が転移性である、請求項４に記載の組成物。
6. チェックポイントインヒビターと組み合わせて投与されることを特徴とする、請求項１～５のいずれか１項に記載の組成物。
7. 前記チェックポイントインヒビターが、抗細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ－４）剤、抗プログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ－１）剤、抗プログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）剤、抗Ｔ細胞イムノグロブリンおよびムチンドメイン３（ＴＩＭ－３）剤、または抗リンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ－３）剤である、請求項６に記載の組成物。
8. 前記抗ＣＴＬＡ－４剤が、イピリムマブまたはトレメリムマブであり；
   前記抗ＰＤ－１剤が、ペムブロリズマブ、ニボルマブ、またはＣＴ－０１１であり；または
   前記抗ＰＤ－Ｌ１剤が、アベルマブまたはＭＥＤＩ４７３６である、請求項７に記載の組成物。
9. 免疫抑制性サイトカインに特異的な抗体と組み合わせて投与されることを特徴とする、請求項１～８のいずれか１項に記載の組成物。
10. 前記免疫抑制性サイトカインが、トランスフォーミング成長因子（ＴＧＦ）－β、インターロイキン（ＩＬ）－１３、またはＩＬ－１０である、請求項９に記載の組成物。
11. 調節性Ｔ細胞または骨髄性サプレッサー細胞を阻害するか枯渇させる薬剤と組み合わせて投与されることを特徴とする、請求項１～１０のいずれか１項に記載の組成物。
12. 腫瘍崩壊ウイルスと組み合わせて投与されることを特徴とする、請求項１～１１のいずれか１項に記載の組成物。
13. 腫瘍抗原特異的ワクチンと組み合わせて投与されることを特徴とし、前記腫瘍抗原がＨＥＲ２ではない、請求項１～１２のいずれか１項に記載の組成物。
14. 放射線療法、化学療法、外科的切除、β－マンノシルセラミド、またはその任意の組み合わせと組み合わせて投与されることを特徴とする、請求項１～１３のいずれか１項に記載の組成物。
15. 被験体におけるＨＥＲ２特異的免疫応答を誘発するため、または、被験体におけるＨＥＲ２陽性癌を処置するための組成物であって、
    ヒトＨＥＲ２の細胞外（ＥＣ）ドメインおよび膜貫通（ＴＭ）ドメインならびにアデノウイルスタイプ３５（Ａｄ３５）ファイバータンパク質を発現する組換えアデノウイルスで形質導入された前記被験体から得た単離された自家樹状細胞；および
    ＡＢ同種血漿
    を含む、組成物。
16. 前記ファイバータンパク質が、配列番号３のアミノ酸配列を含む、請求項１５に記載の組成物。
17. 薬学的に許容され得るキャリアをさらに含む、請求項１５または請求項１６に記載の組成物。
18. アジュバントをさらに含む、請求項１５～１７のいずれか１項に記載の組成物
19. 前記ＨＥＲ２陽性癌が、乳癌、卵巣癌、結腸直腸癌、前立腺癌、腎細胞癌、膀胱癌、胃食道癌、非小細胞肺癌、肉腫、または上衣腫である、請求項１５～１８のいずれか１項に記載の組成物。
20. 前記癌が転移性である、請求項１９に記載の組成物。
21. チェックポイントインヒビターと組み合わせて投与されることを特徴とする、請求項１５～２０のいずれか１項に記載の組成物。
22. 前記チェックポイントインヒビターが、抗細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ－４）剤、抗プログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ－１）剤、抗プログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）剤、抗Ｔ細胞イムノグロブリンおよびムチンドメイン３（ＴＩＭ－３）剤、または抗リンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ－３）剤である、請求項２１に記載の組成物。
23. 前記抗ＣＴＬＡ－４剤が、イピリムマブまたはトレメリムマブであり；
    前記抗ＰＤ－１剤が、ペムブロリズマブ、ニボルマブ、またはＣＴ－０１１であり；または
    前記抗ＰＤ－Ｌ１剤が、アベルマブまたはＭＥＤＩ４７３６である、請求項２２に記載の組成物。
24. 免疫抑制性サイトカインに特異的な抗体と組み合わせて投与されることを特徴とする、請求項１５～２３のいずれか１項に記載の組成物。
25. 前記免疫抑制性サイトカインが、トランスフォーミング成長因子（ＴＧＦ）－β、インターロイキン（ＩＬ）－１３、またはＩＬ－１０である、請求項２４に記載の組成物。
26. 調節性Ｔ細胞または骨髄性サプレッサー細胞を阻害するか枯渇させる薬剤と組み合わせて投与されることを特徴とする、請求項１５～２５のいずれか１項に記載の組成物。
27. 腫瘍崩壊ウイルスと組み合わせて投与されることを特徴とする、請求項１５～２６のいずれか１項に記載の組成物。
28. 腫瘍抗原特異的ワクチンと組み合わせて投与されることを特徴とし、前記腫瘍抗原がＨＥＲ２ではない、請求項１５～２７のいずれか１項に記載の組成物。
29. 放射線療法、化学療法、外科的切除、またはその任意の組み合わせと組み合わせて投与されることを特徴とする、請求項１５～２８のいずれか１項に記載の組成物。

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