JP7169025B2 - 酵素によるキラル化合物の分割方法 - Google Patents
酵素によるキラル化合物の分割方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP7169025B2 JP7169025B2 JP2021532837A JP2021532837A JP7169025B2 JP 7169025 B2 JP7169025 B2 JP 7169025B2 JP 2021532837 A JP2021532837 A JP 2021532837A JP 2021532837 A JP2021532837 A JP 2021532837A JP 7169025 B2 JP7169025 B2 JP 7169025B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- liquid layer
- reaction
- methyl
- hydrophobic solvent
- products
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 title claims description 26
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 title description 10
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 75
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 53
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 52
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 34
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 31
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 30
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 claims description 27
- 239000004367 Lipase Substances 0.000 claims description 27
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 claims description 27
- 235000019421 lipase Nutrition 0.000 claims description 27
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 claims description 22
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 claims description 22
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 claims description 14
- NHTMVDHEPJAVLT-UHFFFAOYSA-N Isooctane Chemical compound CC(C)CC(C)(C)C NHTMVDHEPJAVLT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- JVSWJIKNEAIKJW-UHFFFAOYSA-N dimethyl-hexane Natural products CCCCCC(C)C JVSWJIKNEAIKJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- -1 amide compound Chemical class 0.000 claims description 12
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 12
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 12
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N Benzene Chemical compound C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 6
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 6
- ZXEKIIBDNHEJCQ-UHFFFAOYSA-N isobutanol Chemical compound CC(C)CO ZXEKIIBDNHEJCQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N propan-1-ol Chemical compound CCCO BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K tripotassium phosphate Chemical compound [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 6
- ZAFNJMIOTHYJRJ-UHFFFAOYSA-N Diisopropyl ether Chemical compound CC(C)OC(C)C ZAFNJMIOTHYJRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- ITATYELQCJRCCK-UHFFFAOYSA-N Mandelic Acid, Methyl Ester Chemical compound COC(=O)C(O)C1=CC=CC=C1 ITATYELQCJRCCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 5
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 claims description 5
- KYCQOKLOSUBEJK-UHFFFAOYSA-M 1-butyl-3-methylimidazol-3-ium;bromide Chemical compound [Br-].CCCCN1C=C[N+](C)=C1 KYCQOKLOSUBEJK-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 4
- CMWTZPSULFXXJA-VIFPVBQESA-N naproxen Chemical compound C1=C([C@H](C)C(O)=O)C=CC2=CC(OC)=CC=C21 CMWTZPSULFXXJA-VIFPVBQESA-N 0.000 claims description 4
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 claims description 3
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 claims description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 3
- HPXRVTGHNJAIIH-UHFFFAOYSA-N cyclohexanol Chemical compound OC1CCCCC1 HPXRVTGHNJAIIH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 claims description 3
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229940035429 isobutyl alcohol Drugs 0.000 claims description 3
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 claims description 3
- PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid;potassium Chemical compound [K].OP(O)(O)=O PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims description 3
- 229910000160 potassium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 235000011009 potassium phosphates Nutrition 0.000 claims description 3
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 3
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 claims description 3
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 3
- VRFOKYHDLYBVAL-UHFFFAOYSA-M 1-ethyl-3-methylimidazol-3-ium;ethyl sulfate Chemical compound CCOS([O-])(=O)=O.CCN1C=C[N+](C)=C1 VRFOKYHDLYBVAL-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 2
- KWGKDLIKAYFUFQ-UHFFFAOYSA-M lithium chloride Chemical compound [Li+].[Cl-] KWGKDLIKAYFUFQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 65
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 43
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 28
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 21
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 8
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 8
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 8
- 229940068918 polyethylene glycol 400 Drugs 0.000 description 7
- 108010031797 Candida antarctica lipase B Proteins 0.000 description 5
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 5
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 5
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 4
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 4
- 229960002009 naproxen Drugs 0.000 description 4
- TVMXDCGIABBOFY-UHFFFAOYSA-N octane Chemical compound CCCCCCCC TVMXDCGIABBOFY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- IUUULXXWNYKJSL-UHFFFAOYSA-N 4-methoxy-alpha-methylbenzyl alcohol Chemical compound COC1=CC=C(C(C)O)C=C1 IUUULXXWNYKJSL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 3
- 238000006555 catalytic reaction Methods 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 3
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 3
- JESIHYIJKKUWIS-UHFFFAOYSA-N 1-(4-Methylphenyl)ethanol Chemical compound CC(O)C1=CC=C(C)C=C1 JESIHYIJKKUWIS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IQQRAVYLUAZUGX-UHFFFAOYSA-N 1-butyl-3-methylimidazolium Chemical compound CCCCN1C=C[N+](C)=C1 IQQRAVYLUAZUGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NJMWOUFKYKNWDW-UHFFFAOYSA-N 1-ethyl-3-methylimidazolium Chemical compound CCN1C=C[N+](C)=C1 NJMWOUFKYKNWDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WXMVWUBWIHZLMQ-UHFFFAOYSA-N 3-methyl-1-octylimidazolium Chemical compound CCCCCCCCN1C=C[N+](C)=C1 WXMVWUBWIHZLMQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 2
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 2
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 2
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- HOKHCDLSYKTSOU-UHFFFAOYSA-N 1-(4-methylphenyl)ethyl acetate Chemical compound CC(=O)OC(C)C1=CC=C(C)C=C1 HOKHCDLSYKTSOU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OXFBEEDAZHXDHB-UHFFFAOYSA-M 3-methyl-1-octylimidazolium chloride Chemical compound [Cl-].CCCCCCCCN1C=C[N+](C)=C1 OXFBEEDAZHXDHB-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000222175 Diutina rugosa Species 0.000 description 1
- 125000000066 S-methyl group Chemical group [H]C([H])([H])S* 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010924 continuous production Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 1
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 1
- 108010005400 cutinase Proteins 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 238000005265 energy consumption Methods 0.000 description 1
- 239000002360 explosive Substances 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 229940057847 polyethylene glycol 600 Drugs 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 238000004064 recycling Methods 0.000 description 1
- 238000012827 research and development Methods 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y301/00—Hydrolases acting on ester bonds (3.1)
- C12Y301/01—Carboxylic ester hydrolases (3.1.1)
- C12Y301/01003—Triacylglycerol lipase (3.1.1.3)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P41/00—Processes using enzymes or microorganisms to separate optical isomers from a racemic mixture
- C12P41/001—Processes using enzymes or microorganisms to separate optical isomers from a racemic mixture by metabolizing one of the enantiomers
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/62—Carboxylic acid esters
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
- C12P13/02—Amides, e.g. chloramphenicol or polyamides; Imides or polyimides; Urethanes, i.e. compounds comprising N-C=O structural element or polyurethanes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P41/00—Processes using enzymes or microorganisms to separate optical isomers from a racemic mixture
- C12P41/003—Processes using enzymes or microorganisms to separate optical isomers from a racemic mixture by ester formation, lactone formation or the inverse reactions
- C12P41/004—Processes using enzymes or microorganisms to separate optical isomers from a racemic mixture by ester formation, lactone formation or the inverse reactions by esterification of alcohol- or thiol groups in the enantiomers or the inverse reaction
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P41/00—Processes using enzymes or microorganisms to separate optical isomers from a racemic mixture
- C12P41/003—Processes using enzymes or microorganisms to separate optical isomers from a racemic mixture by ester formation, lactone formation or the inverse reactions
- C12P41/005—Processes using enzymes or microorganisms to separate optical isomers from a racemic mixture by ester formation, lactone formation or the inverse reactions by esterification of carboxylic acid groups in the enantiomers or the inverse reaction
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/02—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a hydroxy group
- C12P7/04—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a hydroxy group acyclic
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/02—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a hydroxy group
- C12P7/22—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a hydroxy group aromatic
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/40—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a carboxyl group including Peroxycarboxylic acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/40—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a carboxyl group including Peroxycarboxylic acids
- C12P7/42—Hydroxy-carboxylic acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/16—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1)
- C12N9/18—Carboxylic ester hydrolases (3.1.1)
- C12N9/20—Triglyceride splitting, e.g. by means of lipase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y301/00—Hydrolases acting on ester bonds (3.1)
- C12Y301/01—Carboxylic ester hydrolases (3.1.1)
- C12Y301/01074—Cutinase (3.1.1.74)
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Description
本発明は生物工学と食品技術の分野に属し、酵素の分離と応用技術、特に酵素を利用したキラル化合物の分割方法に関する。
ここ数十年、キラル化合物の開発は爆発的な進展を見せており、世界中で開発されている薬の中で、３分の２以上はキラル化合物で、現在その市場規模は２５００億ドルを超えている。薬の効果がより高く、副作用がより小さい単一なキラル化合物が、伝統的なラセミ混合薬物に取って代わることが発展の必然的な傾向になっている。中国では、キラル化合物に対する大きな需要があり、関連の基礎的資源もあるが、技術が遅れていて、製品の品質が悪いなどの問題で、ほとんどの製品がヨーロッパ諸国と競争できるレベルに至っておらず、産業のレベルアップが急務となっている。
現在、単一配置異性体の調製は、主に結晶化や化学的分割を誘導するなどの方法でラセミ体の分割により行われている。伝統的なプロセスとしては、通常、キラル分割剤を用いて分割するが、効率が悪く、基準に達するのに何度も繰り返して純化する必要があり、プロセスが極めて複雑で、コストが非常に高い難点（非特許文献１）があった。酵素分割は、条件が温和で、生成物の純度が高い利点があり、大きな期待を寄せられているが、一方で、キラル生成物は、光学異性体副生成物の理化学的性質に非常に近いため、従来の分離手段では生成物と副生成物を同時に分離して反応の選択性を高めることが困難であった。キラル選択剤を加えて抽出・分割する方法は、一定の潜在力があるが、リパーゼ触媒は界面触媒であるため、二相系においてその生成物が反応に対する強い抑制作用を有するので、従来の反応系を利用して生成物の抑制作用を除去し、触媒の効率を高めることは困難である。一方、キラル分割は、生成物の光学的純度に対する要求が非常に高く、通常、単一旋光性生成物の純度が９９％より大きくなる必要があり、反応の進行につれて、目標基質の含有量が次第に低下し、生成物が次第に蓄積されるため、ほとんどの反応において副生物が多く、生成物の純度が低く、転化率が悪いなどの難題が生じている。したがって、数少ない選択性の高い酵素（通常Ｅ≧１００）を持ってこそ工業化の可能性があるものの、研究開発がなかなか難しいのが現状である（非特許文献２）。また、伝統的な酵素触媒は、制御が困難で、生成物の分離や酵素の再利用が難しいなどの難題があり、更なる進展を厳しく制限している。そのため、効率的で制御可能な触媒及び分離反応系を開発し、時代の発展に合致させる必要がある（非特許文献３）。
Ｊ．Ｍｏｌ．Ｃａｔａｌ．Ｂ：Ｅｎｚｙｍ．２０１０，６２（２）：１６２－１６８，Ｏｒｇ．Ｂｉｏｍｏｌ．Ｃｈｅｍ．２０１４，１２，６６３４－６４２，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｃａｔａｌ．Ｂ：Ｅｎｚｙｍ．２０１０，６５（１／４）：４９－５１
Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ ２００７、６３：１７２１－１７５４
Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃａｔａｌｙｓｉｓ Ｂ：Ｅｎｚｙｍａｔｉｃ、２０１２、４：７８－８２、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ ２００７、６３：１７２１-１７５４
酵素によるキラル化合物の分割方法を用いて、従来の酵素によるキラル分割の、効率が悪く、コストが高く、キラリティ選択性が悪く、回収率が低く、工業化が実現しにくいという課題を解決した。
本発明の目的は、現在の酵素によるキラル化合物の分割過程における、コストが高く、連続化生産が困難で、生成物の抑制作用によって反応効率が低下し、反応時間が長いなどの問題を解決するために、酵素によるキラル化合物の効率的かつスピーディーな分割製造方法を提供することである。
本発明の目的は、以下の技術手段により実現される。
酵素によるキラル化合物の分割方法は、
リパーゼ濃度が１－３，０００Ｕ／ｍＬの酵素液を調製し、酵素液に、可溶性塩、親水性溶媒および疎水性溶媒を加え、三成分液体系にするステップ（１）であって、前記可溶性塩、親水性溶媒および疎水性溶媒と酵素液の質量比はそれぞれ０．１－０．９、０．１－５、０．１－１０であり、前記疎水性溶媒にはラセミキラル化合物からなるエステル類またはアミド類化合物が含まれている前記ステップ（１）と、
三成分液体系を撹拌しながら酵素反応を起こし、反応終了後、静置または遠心分離で上液層、中液層、下液層の三層に分け、加水分解後の単一旋光性キラル生成物は主に中液層または下液層に集まり、上液層の生成物は別の単一旋光性キラル生成物を含むエステル類またはアミド類生成物であるステップ（２）と、を含む。
酵素によるキラル化合物の分割方法は、
リパーゼ濃度が１－３，０００Ｕ／ｍＬの酵素液を調製し、酵素液に、可溶性塩、親水性溶媒および疎水性溶媒を加え、三成分液体系にするステップ（１）であって、前記可溶性塩、親水性溶媒および疎水性溶媒と酵素液の質量比はそれぞれ０．１－０．９、０．１－５、０．１－１０であり、前記疎水性溶媒にはラセミキラル化合物からなるエステル類またはアミド類化合物が含まれている前記ステップ（１）と、
三成分液体系を撹拌しながら酵素反応を起こし、反応終了後、静置または遠心分離で上液層、中液層、下液層の三層に分け、加水分解後の単一旋光性キラル生成物は主に中液層または下液層に集まり、上液層の生成物は別の単一旋光性キラル生成物を含むエステル類またはアミド類生成物であるステップ（２）と、を含む。
好ましくは、ステップ（１）の前記親水性溶媒は、ポリエチレングリコール、ポリプロピルグリコール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール、ブタノール、イソブチルアルコール、エチレングリコールおよびアセトンのうちの１種または２種類以上である。または、親水性溶媒は、１－ブチル－３－メチルイミダゾリウムブロミド（［ＢＭＩＭ］Ｂｒ）、１－ブチル－３－メチルイミダゾリウムテトラフルオロボラート（［ＢＭＩＭ］ＢＦ４
）、１－エチル－３－メチルイミダゾリウムエチルスルファート（［ＥＭＩＭ］ＥＴＳＯ４
）、１－メチル－３－オクチルイミダゾリウムクロリド（［ＯＭＩＭ］Ｃｌ）のうちの１種または２種類以上である。
好ましくは、ステップ（１）の前記可溶性塩は、クエン酸ナトリウム、塩化ナトリウム、硫酸アンモニウム、炭酸ナトリウム、リン酸水素二カリウム、リン酸カリウム、リン酸二水素カリウムおよびリン酸水素二カリウムのうちの１種または２種類以上である。
好ましくは、ステップ（１）の前記疎水性溶媒は、ヘキサン、エチルエーテル、イソプロピルエーテル、酢酸エチル、シクロヘキサノール、石油エーテル、イソオクタン、ベンゼンおよびトルエンのうちの１種または２種類以上である。
好ましくは、ステップ（２）の反応条件は、温度３０－４５℃で、反応時間は、２０分－４時間である。
反応操作は、通常、溶剤の揮発温度より低い条件で行う。キラル生成物の除去と改質効果をできるだけ最適に近づけるために、反応系のｐＨを調節することができ、好ましくは、ステップ（１）の三成分液体系のｐＨは、５－９である。
好ましくは、ステップ（１）の前記リパーゼ濃度は、５－２０００Ｕ／ｍＬである。
好ましくは、前記可溶性塩、親水性溶媒および疎水性溶媒と酵素液の質量比は、それぞれ０．２－０．８、０．２－０．８、０．２－４である。
好ましくは、前記ラセミキラル化合物からなるエステル類またはアミド類化合物は、ＤＬ－マンデル酸メチル、ＤＬ－ナプロキセンメチル、ＤＬ－（４－メトキシフェニル）－１－酢酸エチル、ＤＬ－１－（４－メトキシフェニル）酢酸エチル、ＤＬ－６－メチル－５－ヘプテン－２－酢酸エチルから選択される１種または２種類以上のいずれかである。
好ましくは、前記ラセミキラル化合物からなるエステル類またはアミド類化合物は、疎水性溶媒質量の０．１－１０％、好ましくは１％－５％である。
上述のリパーゼ触媒反応において、リパーゼは天然由来のものであってもよく、人工発酵によって作られたものでもよく、発酵液、簡単に純化された粗酵素、あるいは純化された純化酵素のいずれでもよい。
本発明は、以下の有益な効果がある。
本発明は、従来の酵素によって分割され、かつキラル化合物を同時に回収する過程に存在する、コストが高く、連続化生産が困難で、生成物の抑制作用により反応効率が低下し、反応時間が長いといった難題を解決し、粗酵素液からリパーゼを分離し、そしてリパーゼを用いてキラル化合物を分割して製造する方法を提供する。プロセスが簡略化され、分離時間が短くなり、コストが低下し、経済的に実行することを可能にした。具体的には、三成分液体系を利用して、単一旋光性キラル生成物のエステル類またはアミド類基質を疎水層に、リパーゼを富溶媒相または富塩相に移動させ、加水分解後の単一旋光性キラル生成物を主に他の相に集まらせ、簡単な遠心分離や静置などの方法で生成物を回収することができる。当該プロセスは、酵素の純化と回収を簡単にすることができるばかりでなく、触媒の効率を向上させ、酵素の損失と純化コストを大幅に低減することができる。当該方法は、エネルギーの消費が少なく、原料の利用率が高く、反応条件が温和などの利点があり、従来の酵素分割によるキラル化合物の工業化生産が困難となっている技術的問題を解決した。
本発明は、従来の酵素によって分割され、かつキラル化合物を同時に回収する過程に存在する、コストが高く、連続化生産が困難で、生成物の抑制作用により反応効率が低下し、反応時間が長いといった難題を解決し、粗酵素液からリパーゼを分離し、そしてリパーゼを用いてキラル化合物を分割して製造する方法を提供する。プロセスが簡略化され、分離時間が短くなり、コストが低下し、経済的に実行することを可能にした。具体的には、三成分液体系を利用して、単一旋光性キラル生成物のエステル類またはアミド類基質を疎水層に、リパーゼを富溶媒相または富塩相に移動させ、加水分解後の単一旋光性キラル生成物を主に他の相に集まらせ、簡単な遠心分離や静置などの方法で生成物を回収することができる。当該プロセスは、酵素の純化と回収を簡単にすることができるばかりでなく、触媒の効率を向上させ、酵素の損失と純化コストを大幅に低減することができる。当該方法は、エネルギーの消費が少なく、原料の利用率が高く、反応条件が温和などの利点があり、従来の酵素分割によるキラル化合物の工業化生産が困難となっている技術的問題を解決した。
以下、具体的な実施形態に合わせて本発明をより詳細に説明するが、本発明の実施形態は、これらに限定されるものではなく、特に明記されていない技術的パラメータについては、従来の技術を参照されたい。
本実施の形態で使用したＣＡＬＢ（Ｃａｎｄｉｄａ ａｎｔａｒｃｔｉｃａ ｌｉｐａｓｅ Ｂ）、Ｎｏｖｏｚｙｍｅ－５１０３２（Ｃｕｔｉｎａｓｅ）リパーゼはＮｏｖｏｚｙｍｅ社、リパーゼＡＹ３０（Ｃａｎｄｉｄａ ｒｕｇｏｓａ ｌｉｐａｓｅｓ）は日本天野エンザイム（株）より入手した。
（実施例１）
適量のリパーゼＣＡＬＢを三角フラスコに入れ、１０００倍の水を加えて均一にかき混ぜた後、粗酵素液（酵素濃度５Ｕ／ｍＬ）１ｇとリン酸水素二カリウム０．６ｇを加えて、均一にかき混ぜた後、さらにポリエチレングリコール４００ ０．４ｇと、ＤＬ－マンデル酸メチル５％を含むジイソプロピルエーテル溶液０．４ｇを添加し、蓋つき三角フラスコに入れてかき混ぜて、混合溶液のｐＨは８．９であった。回転速度２００ｒｐｍの恒温振盪培養機に入れ、３０℃に制御して２時間反応させた。コントロールとして、粗酵素液（５Ｕ／ｍＬ）１ｇを取り、ＤＬ－マンデル酸メチル５％を含むイソプロピルエーテル溶液０．４ｇを加え、水で同じ体積に希釈して、同一条件で反応させた。反応終了後、５０００ｒｐｍで５分遠心分離して、順次に上液層、中液層、下液層の３層に分かれ、加水分解後の単一旋光性キラル化合物は主に中液層または下液層に集まり、上液層の生成物は別の単一旋光性キラル生成物のエステル類あるいはアミド類生成物であった。リパーゼは主に中液層に分布し、中下液層の分配係数は４．７５であった。中下液層の酵素活性と上液層マンデル酸メチルの旋光度を測定したところ、疎水層のＳ－マンデル酸メチルの旋光度は９９．５％に達したが、コントロールの場合、上下二つの層にのみ分けられており、生成物は両層に分布し、Ｓ－マンデル酸メチルの旋光度は４３％しかなかった。
適量のリパーゼＣＡＬＢを三角フラスコに入れ、１０００倍の水を加えて均一にかき混ぜた後、粗酵素液（酵素濃度５Ｕ／ｍＬ）１ｇとリン酸水素二カリウム０．６ｇを加えて、均一にかき混ぜた後、さらにポリエチレングリコール４００ ０．４ｇと、ＤＬ－マンデル酸メチル５％を含むジイソプロピルエーテル溶液０．４ｇを添加し、蓋つき三角フラスコに入れてかき混ぜて、混合溶液のｐＨは８．９であった。回転速度２００ｒｐｍの恒温振盪培養機に入れ、３０℃に制御して２時間反応させた。コントロールとして、粗酵素液（５Ｕ／ｍＬ）１ｇを取り、ＤＬ－マンデル酸メチル５％を含むイソプロピルエーテル溶液０．４ｇを加え、水で同じ体積に希釈して、同一条件で反応させた。反応終了後、５０００ｒｐｍで５分遠心分離して、順次に上液層、中液層、下液層の３層に分かれ、加水分解後の単一旋光性キラル化合物は主に中液層または下液層に集まり、上液層の生成物は別の単一旋光性キラル生成物のエステル類あるいはアミド類生成物であった。リパーゼは主に中液層に分布し、中下液層の分配係数は４．７５であった。中下液層の酵素活性と上液層マンデル酸メチルの旋光度を測定したところ、疎水層のＳ－マンデル酸メチルの旋光度は９９．５％に達したが、コントロールの場合、上下二つの層にのみ分けられており、生成物は両層に分布し、Ｓ－マンデル酸メチルの旋光度は４３％しかなかった。
（実施例２）
適量のリパーゼＡＹ３０を三角フラスコに入れ、１００倍の水を加えて均一にかき混ぜた後、粗酵素液（酵素濃度１００Ｕ／ｍＬ）０．９７５ｇと硫酸ナトリウム０．２２５ｇを加えて、均一にかき混ぜた後、ポリエチレングリコール４００ ０．３ｇと、ＤＬ－ナプロキセンメチル０．５％を含むイソオクタン溶液０．３ｇを添加し、蓋つき三角フラスコに入れてかき混ぜて、混合溶液のｐＨは７．０であった。回転速度２００ｒｐｍの恒温振盪培養機に入れ、３７℃に制御して４時間反応させた。コントロールとして、粗酵素液（２００Ｕ／ｍＬ）０．９７５ｇを取り、ＤＬ－ナプロキセンメチル０．５％を含むイソオクタン溶液０．３ｇを加え、水で同じ体積に希釈して、同一条件で反応させた。反応終了後、３０００ｒｐｍで１分遠心分離して、順次に上液層、中液層、下液層の３層に分かれ、加水分解後の単一旋光性キラル化合物は主に中液層に集まり、上液層の生成物は別の単一旋光性キラル生成物のエステル類あるいはアミド類生成物であった。リパーゼは主に中液層に分布し、中下液層の分配係数は４８．９であった。反応系のＲ－ナプロキセン生成物の旋光度と光学異性体選択率Ｅ値はそれぞれ９２．９％と４６に達しているが、コントロールの場合、上下２つの層にのみ分けられ、生成物は両層に分布しており、生成物の旋光度と光学異性体選択率Ｅ値はわずか８６．５％と１８であった。
適量のリパーゼＡＹ３０を三角フラスコに入れ、１００倍の水を加えて均一にかき混ぜた後、粗酵素液（酵素濃度１００Ｕ／ｍＬ）０．９７５ｇと硫酸ナトリウム０．２２５ｇを加えて、均一にかき混ぜた後、ポリエチレングリコール４００ ０．３ｇと、ＤＬ－ナプロキセンメチル０．５％を含むイソオクタン溶液０．３ｇを添加し、蓋つき三角フラスコに入れてかき混ぜて、混合溶液のｐＨは７．０であった。回転速度２００ｒｐｍの恒温振盪培養機に入れ、３７℃に制御して４時間反応させた。コントロールとして、粗酵素液（２００Ｕ／ｍＬ）０．９７５ｇを取り、ＤＬ－ナプロキセンメチル０．５％を含むイソオクタン溶液０．３ｇを加え、水で同じ体積に希釈して、同一条件で反応させた。反応終了後、３０００ｒｐｍで１分遠心分離して、順次に上液層、中液層、下液層の３層に分かれ、加水分解後の単一旋光性キラル化合物は主に中液層に集まり、上液層の生成物は別の単一旋光性キラル生成物のエステル類あるいはアミド類生成物であった。リパーゼは主に中液層に分布し、中下液層の分配係数は４８．９であった。反応系のＲ－ナプロキセン生成物の旋光度と光学異性体選択率Ｅ値はそれぞれ９２．９％と４６に達しているが、コントロールの場合、上下２つの層にのみ分けられ、生成物は両層に分布しており、生成物の旋光度と光学異性体選択率Ｅ値はわずか８６．５％と１８であった。
（実施例３）
適量のリパーゼＡＹ３０を三角フラスコに入れ、１００倍の水を加えて均一にかき混ぜた後、粗酵素液（酵素濃度２００Ｕ／ｍＬ）０．９７５ｇと硫酸ナトリウム０．２４ｇを加えて、均一にかき混ぜた後、ポリエチレングリコール６００ ０．２８５ｇと、ＤＬ－（４－メトキシフェニル）－１－酢酸エチル０．５％を含むイソオクタン溶液０．３ｇを添加し、蓋つき三角フラスコに入れてかき混ぜて、混合溶液のｐＨは７．０であった。回転速度２００ｒｐｍの恒温振盪培養機に入れ、４５℃に制御して２０分反応させた。コントロールとして、粗酵素液（１００Ｕ／ｍＬ）０．９７５ｇを取り、ＤＬ－（４－メトキシフェニル）－１－酢酸エチル０．５％を含むイソオクタン溶液０．３ｇを加え、水で同じ体積に希釈して、同一条件で反応させた。反応終了後、９０００ｒｐｍで３分遠心分離して、順次に上液層、中液層、下液層の３層に分かれ、加水分解後の単一旋光性キラル化合物は主に中液層に集まり、上液層の生成物は別の単一旋光性キラル生成物のエステル類あるいはアミド類生成物であった。リパーゼは主に中液層に分布し、中下液層の分配係数は１４９．１であった。反応系の（４－メトキシフェニル）－１－エタノールの旋光度と光学異性体選択率Ｅ値はそれぞれ９８．１３％と２３２．８に達しているが、コントロールの場合、上下２つの層にのみ分けられ、生成物は両層に分布しており、生成物の旋光度と光学異性体選択率Ｅ値はわずか９４．１３％と６９．３９であった。
適量のリパーゼＡＹ３０を三角フラスコに入れ、１００倍の水を加えて均一にかき混ぜた後、粗酵素液（酵素濃度２００Ｕ／ｍＬ）０．９７５ｇと硫酸ナトリウム０．２４ｇを加えて、均一にかき混ぜた後、ポリエチレングリコール６００ ０．２８５ｇと、ＤＬ－（４－メトキシフェニル）－１－酢酸エチル０．５％を含むイソオクタン溶液０．３ｇを添加し、蓋つき三角フラスコに入れてかき混ぜて、混合溶液のｐＨは７．０であった。回転速度２００ｒｐｍの恒温振盪培養機に入れ、４５℃に制御して２０分反応させた。コントロールとして、粗酵素液（１００Ｕ／ｍＬ）０．９７５ｇを取り、ＤＬ－（４－メトキシフェニル）－１－酢酸エチル０．５％を含むイソオクタン溶液０．３ｇを加え、水で同じ体積に希釈して、同一条件で反応させた。反応終了後、９０００ｒｐｍで３分遠心分離して、順次に上液層、中液層、下液層の３層に分かれ、加水分解後の単一旋光性キラル化合物は主に中液層に集まり、上液層の生成物は別の単一旋光性キラル生成物のエステル類あるいはアミド類生成物であった。リパーゼは主に中液層に分布し、中下液層の分配係数は１４９．１であった。反応系の（４－メトキシフェニル）－１－エタノールの旋光度と光学異性体選択率Ｅ値はそれぞれ９８．１３％と２３２．８に達しているが、コントロールの場合、上下２つの層にのみ分けられ、生成物は両層に分布しており、生成物の旋光度と光学異性体選択率Ｅ値はわずか９４．１３％と６９．３９であった。
（実施例４）
適量のＡＹ３０リパーゼを三角フラスコに入れ、１００倍の水を加えて均一にかき混ぜた後、粗酵素液（酵素濃度１００Ｕ／ｍＬ）０．９７５ｇと硫酸ナトリウム０．２２５ｇを加えて、均一にかき混ぜた後、［ＢＭＩＭ］ＢＦ４０．３ｇと、ＤＬ－ナプロキセンメチル０．５％を含むイソオクタン溶液０．３ｇを添加し、蓋つき三角フラスコに入れてかき混ぜて，回転速度２００ｒｐｍの恒温振盪培養機に入れ、３７℃に制御して４時間反応させた。反応終了後、３０００ｒｐｍで１分遠心分離して、順次に上液層、中液層、下液層の３層に分かれ、加水分解後の単一旋光性キラル化合物は主に中液層に集まり、上液層の生成物は別の単一旋光性キラル生成物のエステル類生成物であった。リパーゼは主に下液層に分布し、下液層の酵素回収率は９８．５％であった。反応系のＲ－ナプロキセン生成物の旋光度と光学異性体選択率Ｅ値はそれぞれ８２．１％と１１に達した。
適量のＡＹ３０リパーゼを三角フラスコに入れ、１００倍の水を加えて均一にかき混ぜた後、粗酵素液（酵素濃度１００Ｕ／ｍＬ）０．９７５ｇと硫酸ナトリウム０．２２５ｇを加えて、均一にかき混ぜた後、［ＢＭＩＭ］ＢＦ４０．３ｇと、ＤＬ－ナプロキセンメチル０．５％を含むイソオクタン溶液０．３ｇを添加し、蓋つき三角フラスコに入れてかき混ぜて，回転速度２００ｒｐｍの恒温振盪培養機に入れ、３７℃に制御して４時間反応させた。反応終了後、３０００ｒｐｍで１分遠心分離して、順次に上液層、中液層、下液層の３層に分かれ、加水分解後の単一旋光性キラル化合物は主に中液層に集まり、上液層の生成物は別の単一旋光性キラル生成物のエステル類生成物であった。リパーゼは主に下液層に分布し、下液層の酵素回収率は９８．５％であった。反応系のＲ－ナプロキセン生成物の旋光度と光学異性体選択率Ｅ値はそれぞれ８２．１％と１１に達した。
（実施例５）
適量のリパーゼＮｏｖｏｚｙｍｅ－５１０３２を三角フラスコに入れ、１００倍の水を加えて均一にかき混ぜた後、粗酵素液（酵素濃度５Ｕ／ｍＬ）０．９７５ｇと硫酸ナトリウム０．２４ｇを加えて、均一にかき混ぜた後、ポリエチレングリコール４００ ０．２８５ｇと、ＤＬ－１－（４－メトキシフェニル）酢酸エチル０．５％を含むイソオクタン溶液０．３ｇを添加し、蓋つき三角フラスコに入れてかき混ぜて、混合溶液のｐＨは７．０であった。回転速度９０００ｒｐｍの恒温振盪培養機に入れ、４５℃に制御して２０分反応させた。コントロールとして、粗酵素液（５Ｕ／ｍＬ）０．９７５ｇを取り、ＤＬ－１－（４－メトキシフェニル）酢酸エチル０．５％を含むイソオクタン溶液０．３ｇを加え、水で同じ体積に希釈して、同一条件で反応させた。反応終了後、９０００ｒｐｍで３分遠心分離して、順次に上液層、中液層、下液層の３層に分かれ、加水分解後の単一旋光性キラル化合物は主に中液層に集まり、上液層の生成物は別の単一旋光性キラル生成物のエステル類あるいはアミド類生成物であった。中下液層の酵素活性と上液層の１－（４－メトキシフェニル）エタノールの旋光度を測定し、疎水層の１－（４－メトキシフェニル）エタノールの旋光度と光学異性体選択率Ｅ値はそれぞれ９６．０７％と８０．９６に達しているが、コントロールの場合、上下２つの層にのみ分けられ、生成物は両層に分布しており、生成物の旋光度と光学異性体選択率Ｅ値はわずか８５．７２％と１７．０１であった。
適量のリパーゼＮｏｖｏｚｙｍｅ－５１０３２を三角フラスコに入れ、１００倍の水を加えて均一にかき混ぜた後、粗酵素液（酵素濃度５Ｕ／ｍＬ）０．９７５ｇと硫酸ナトリウム０．２４ｇを加えて、均一にかき混ぜた後、ポリエチレングリコール４００ ０．２８５ｇと、ＤＬ－１－（４－メトキシフェニル）酢酸エチル０．５％を含むイソオクタン溶液０．３ｇを添加し、蓋つき三角フラスコに入れてかき混ぜて、混合溶液のｐＨは７．０であった。回転速度９０００ｒｐｍの恒温振盪培養機に入れ、４５℃に制御して２０分反応させた。コントロールとして、粗酵素液（５Ｕ／ｍＬ）０．９７５ｇを取り、ＤＬ－１－（４－メトキシフェニル）酢酸エチル０．５％を含むイソオクタン溶液０．３ｇを加え、水で同じ体積に希釈して、同一条件で反応させた。反応終了後、９０００ｒｐｍで３分遠心分離して、順次に上液層、中液層、下液層の３層に分かれ、加水分解後の単一旋光性キラル化合物は主に中液層に集まり、上液層の生成物は別の単一旋光性キラル生成物のエステル類あるいはアミド類生成物であった。中下液層の酵素活性と上液層の１－（４－メトキシフェニル）エタノールの旋光度を測定し、疎水層の１－（４－メトキシフェニル）エタノールの旋光度と光学異性体選択率Ｅ値はそれぞれ９６．０７％と８０．９６に達しているが、コントロールの場合、上下２つの層にのみ分けられ、生成物は両層に分布しており、生成物の旋光度と光学異性体選択率Ｅ値はわずか８５．７２％と１７．０１であった。
（実施例６）
適量のリパーゼＣＡＬＢを取って三角フラスコに入れ、１００倍の水を加えて均一にかき混ぜた後、粗酵素液（酵素濃度５Ｕ／ｍＬ）０．９７５ｇと硫酸ナトリウム０．２４ｇを加えて、均一にかき混ぜた後、ポリエチレングリコール４００ ０．２８５ｇと、ＤＬ－６－メチル－５－ヘプテン－２－酢酸エチル０．５％を含むオクタン溶液０．３ｇを添加し、蓋つき三角フラスコに入れてかき混ぜて、回転速度９０００ｒｐｍの恒温振盪培養機に入れ、４５℃に制御して２０分反応させた。コントロールとして、粗酵素液（５Ｕ／ｍＬ）０．９７５ｇを取り、ＤＬ－６－メチル－５－ヘプテン－２－酢酸エチル０．５％を含むオクタン溶液０．３ｇを加え、水で同じ体積に希釈して、同一条件で反応させた。反応終了後、９０００ｒｐｍで３分遠心分離して、順次に上液層、中液層、下液層の３層に分かれ、加水分解後の単一旋光性キラル化合物は主に中液層に集まり、上液層の生成物は別の単一旋光性キラル生成物のエステル類あるいはアミド類生成物であった。中下液層の酵素活性と上液層の６－メチル－５－ヘプテン－２エタノールの旋光度を測定し、疎水層の６－メチル－５－ヘプテン－２エタノールの旋光度と光学異性体選択率Ｅ値はそれぞれ９６．４９％と７２．８５に達しているが、コントロールの場合、上下２つの層にのみ分けられ、生成物は両層に分布しており、生成物の旋光度と光学異性体選択率Ｅ値はわずか８８．０９％と１８．４７であった。
適量のリパーゼＣＡＬＢを取って三角フラスコに入れ、１００倍の水を加えて均一にかき混ぜた後、粗酵素液（酵素濃度５Ｕ／ｍＬ）０．９７５ｇと硫酸ナトリウム０．２４ｇを加えて、均一にかき混ぜた後、ポリエチレングリコール４００ ０．２８５ｇと、ＤＬ－６－メチル－５－ヘプテン－２－酢酸エチル０．５％を含むオクタン溶液０．３ｇを添加し、蓋つき三角フラスコに入れてかき混ぜて、回転速度９０００ｒｐｍの恒温振盪培養機に入れ、４５℃に制御して２０分反応させた。コントロールとして、粗酵素液（５Ｕ／ｍＬ）０．９７５ｇを取り、ＤＬ－６－メチル－５－ヘプテン－２－酢酸エチル０．５％を含むオクタン溶液０．３ｇを加え、水で同じ体積に希釈して、同一条件で反応させた。反応終了後、９０００ｒｐｍで３分遠心分離して、順次に上液層、中液層、下液層の３層に分かれ、加水分解後の単一旋光性キラル化合物は主に中液層に集まり、上液層の生成物は別の単一旋光性キラル生成物のエステル類あるいはアミド類生成物であった。中下液層の酵素活性と上液層の６－メチル－５－ヘプテン－２エタノールの旋光度を測定し、疎水層の６－メチル－５－ヘプテン－２エタノールの旋光度と光学異性体選択率Ｅ値はそれぞれ９６．４９％と７２．８５に達しているが、コントロールの場合、上下２つの層にのみ分けられ、生成物は両層に分布しており、生成物の旋光度と光学異性体選択率Ｅ値はわずか８８．０９％と１８．４７であった。
（実施例７）
適量のリパーゼＣＡＬＢを取って三角フラスコに入れ、１００倍の体積の水を加えて均一にかき混ぜた後、粗酵素液（酵素濃度５Ｕ／ｍＬ）０．９７５ｇと硫酸ナトリウム０．２４ｇを加えて、均一にかき混ぜた後、ポリエチレングリコール４００ ０．２８５ｇと、１－（４－メチルフェニル）－酢酸エチル０．５％を含むオクタン溶液０．３ｇを添加し、蓋つき三角フラスコに入れてかき混ぜて、回転速度９０００ｒｐｍの恒温振盪培養機に入れ、４５℃に制御して２０分反応させた。コントロールとして、粗酵素液（５Ｕ／ｍＬ）０．９７５ｇを取り、ＤＬ－１－（４－メチルフェニル）－酢酸エチル０．５％を含むオクタン溶液０．３ｇを添加し、水で同じ体積に希釈して、同一条件で反応させた。反応終了後、９０００ｒｐｍで３分遠心分離して、順次に上液層、中液層、下液層の３層に分かれ、加水分解後の単一旋光性キラル化合物は主に中液層に集まり、上液層の生成物は別の単一旋光性キラル生成物のエステル類あるいはアミド類生成物であった。反応系の１－（４－メチルフェニル）エタノールの旋光度と光学異性体選択率Ｅ値はそれぞれ９５．８７％と１５６．８７に達しているが、コントロールの場合、上下２つの層にのみ分けられ、生成物は両層に分布しており、生成物の旋光度と光学異性体選択率Ｅ値はわずか９５．４５％と７６．１８であった。
適量のリパーゼＣＡＬＢを取って三角フラスコに入れ、１００倍の体積の水を加えて均一にかき混ぜた後、粗酵素液（酵素濃度５Ｕ／ｍＬ）０．９７５ｇと硫酸ナトリウム０．２４ｇを加えて、均一にかき混ぜた後、ポリエチレングリコール４００ ０．２８５ｇと、１－（４－メチルフェニル）－酢酸エチル０．５％を含むオクタン溶液０．３ｇを添加し、蓋つき三角フラスコに入れてかき混ぜて、回転速度９０００ｒｐｍの恒温振盪培養機に入れ、４５℃に制御して２０分反応させた。コントロールとして、粗酵素液（５Ｕ／ｍＬ）０．９７５ｇを取り、ＤＬ－１－（４－メチルフェニル）－酢酸エチル０．５％を含むオクタン溶液０．３ｇを添加し、水で同じ体積に希釈して、同一条件で反応させた。反応終了後、９０００ｒｐｍで３分遠心分離して、順次に上液層、中液層、下液層の３層に分かれ、加水分解後の単一旋光性キラル化合物は主に中液層に集まり、上液層の生成物は別の単一旋光性キラル生成物のエステル類あるいはアミド類生成物であった。反応系の１－（４－メチルフェニル）エタノールの旋光度と光学異性体選択率Ｅ値はそれぞれ９５．８７％と１５６．８７に達しているが、コントロールの場合、上下２つの層にのみ分けられ、生成物は両層に分布しており、生成物の旋光度と光学異性体選択率Ｅ値はわずか９５．４５％と７６．１８であった。
（実施例８）
適量のリパーゼＡＹ３０を三角フラスコに入れ、１００倍の水を加えて均一にかき混ぜた後、粗酵素液（酵素濃１００Ｕ／ｍＬ）０．９ｇと硫酸ナトリウム０．３ｇを加えて、均一にかき混ぜた後、ポリエチレングリコール４００ ０．３ｇとＤＬ－ナプロキセンメチル０．５％を含むイソオクタン溶液０．３ｇを添加し、蓋つき三角フラスコに入れてかき混ぜて、回転速度２００ｒｐｍの恒温振盪培養機に入れ、３７℃に制御して４時間反応させた。コントロールとして、粗酵素液（１００Ｕ／ｍＬ）０．９７５ｇを取り、ＤＬ－ナプロキセンメチル０．５％を含むイソオクタン溶液０．３ｇを加え、水で同じ体積に希釈して、同一条件で反応させた。反応終了後、３０００ｒｐｍで１分遠心分離して、順次に上液層、中液層、下液層の３層に分かれ、加水分解後の単一旋光性キラル化合物は主に中液層に集まり、上液層の生成物は別の単一旋光性キラル生成物のエステル類あるいはアミド類生成物であった。リパーゼは主に中液層に分布し、中下液層の分配係数は２１．４であった。反応系のＲ－ナプロキセン生成物の旋光度と光学異性体選択率Ｅ値はそれぞれ８９．９％と２８に達しているが、コントロールの場合、上下２つの層にのみ分けられ、生成物は両層に分布しており、生成物の旋光度と光学異性体選択率Ｅ値はわずか８６．５％と１８であった。
適量のリパーゼＡＹ３０を三角フラスコに入れ、１００倍の水を加えて均一にかき混ぜた後、粗酵素液（酵素濃１００Ｕ／ｍＬ）０．９ｇと硫酸ナトリウム０．３ｇを加えて、均一にかき混ぜた後、ポリエチレングリコール４００ ０．３ｇとＤＬ－ナプロキセンメチル０．５％を含むイソオクタン溶液０．３ｇを添加し、蓋つき三角フラスコに入れてかき混ぜて、回転速度２００ｒｐｍの恒温振盪培養機に入れ、３７℃に制御して４時間反応させた。コントロールとして、粗酵素液（１００Ｕ／ｍＬ）０．９７５ｇを取り、ＤＬ－ナプロキセンメチル０．５％を含むイソオクタン溶液０．３ｇを加え、水で同じ体積に希釈して、同一条件で反応させた。反応終了後、３０００ｒｐｍで１分遠心分離して、順次に上液層、中液層、下液層の３層に分かれ、加水分解後の単一旋光性キラル化合物は主に中液層に集まり、上液層の生成物は別の単一旋光性キラル生成物のエステル類あるいはアミド類生成物であった。リパーゼは主に中液層に分布し、中下液層の分配係数は２１．４であった。反応系のＲ－ナプロキセン生成物の旋光度と光学異性体選択率Ｅ値はそれぞれ８９．９％と２８に達しているが、コントロールの場合、上下２つの層にのみ分けられ、生成物は両層に分布しており、生成物の旋光度と光学異性体選択率Ｅ値はわずか８６．５％と１８であった。
（実施例９）
適量のリパーゼＡＹ３０を三角フラスコに入れ、ｐＨ８のリン酸塩緩衝液（１００ｍＭ）２０倍を加えて均一にかき混ぜた後、粗酵素液（酵素濃５００Ｕ／ｍＬ）０．９６ｇと硫酸ナトリウム０．１８ｇを加えて、均一にかき混ぜた後、ポリエチレングリコール４００ ０．３６ｇとＤＬ－ナプロキセンメチル０．５％を含むイソオクタン溶液０．３ｇを添加し、蓋つき三角フラスコに入れてかき混ぜて、回転速度２００ｒｐｍの恒温振盪培養機に入れ、３７℃に制御して４時間反応させた。コントロールとして、適量のリパーゼＡＹ３０を三角フラスコに取り、ｐＨ５と１０のリン酸塩緩衝液（１００ｍＭ）２０倍を別々に加えて、粗酵素液（酵素濃５００Ｕ／ｍＬ）０．９６ｇを別々に取り、上述の方法と同じ比例でｐＨの異なる三成分液体系を調製し、同一条件で反応させた。反応終了後、３０００ｒｐｍで１分遠心分離して、順次に上液層、中液層、下液層の３層に分かれ、加水分解後の単一旋光性キラル化合物は主に中液層に集まり、上液層の生成物は別の単一旋光性キラル生成物のエステル類あるいはアミド類生成物であった。リパーゼは主に中液層に分布し、ｐＨ８の場合、中下液層の分配係数は８８であったが、コントロールの場合わずか６２と４２であった。反応系のＲ－ナプロキセン生成物の旋光度は９８．５％に達し、転化率は３２％であった。ｐＨ５の場合、旋光度はわずか９２％で、ｐＨ１０の場合、類似の旋光度が得られたものの、転化率はわずか１２％であった。
適量のリパーゼＡＹ３０を三角フラスコに入れ、ｐＨ８のリン酸塩緩衝液（１００ｍＭ）２０倍を加えて均一にかき混ぜた後、粗酵素液（酵素濃５００Ｕ／ｍＬ）０．９６ｇと硫酸ナトリウム０．１８ｇを加えて、均一にかき混ぜた後、ポリエチレングリコール４００ ０．３６ｇとＤＬ－ナプロキセンメチル０．５％を含むイソオクタン溶液０．３ｇを添加し、蓋つき三角フラスコに入れてかき混ぜて、回転速度２００ｒｐｍの恒温振盪培養機に入れ、３７℃に制御して４時間反応させた。コントロールとして、適量のリパーゼＡＹ３０を三角フラスコに取り、ｐＨ５と１０のリン酸塩緩衝液（１００ｍＭ）２０倍を別々に加えて、粗酵素液（酵素濃５００Ｕ／ｍＬ）０．９６ｇを別々に取り、上述の方法と同じ比例でｐＨの異なる三成分液体系を調製し、同一条件で反応させた。反応終了後、３０００ｒｐｍで１分遠心分離して、順次に上液層、中液層、下液層の３層に分かれ、加水分解後の単一旋光性キラル化合物は主に中液層に集まり、上液層の生成物は別の単一旋光性キラル生成物のエステル類あるいはアミド類生成物であった。リパーゼは主に中液層に分布し、ｐＨ８の場合、中下液層の分配係数は８８であったが、コントロールの場合わずか６２と４２であった。反応系のＲ－ナプロキセン生成物の旋光度は９８．５％に達し、転化率は３２％であった。ｐＨ５の場合、旋光度はわずか９２％で、ｐＨ１０の場合、類似の旋光度が得られたものの、転化率はわずか１２％であった。
上記実施形態は、本発明のより良い実施形態であるが、本発明の実施形態は上記の実施形態の制限を受けることなく、その他のいかなる本発明の精神的本質と原理を逸脱せずに行った変更、修飾、代替、組合せ、簡略化は、すべて本発明の保護範囲に含まれるものである。
（付記）
（付記１）
リパーゼ濃度が１－３０００Ｕ／ｍＬの酵素液を調製し、酵素液に可溶性塩、親水性溶媒および疎水性溶媒を加え、三成分液体系にするステップ（１）であって、前記可溶性塩、親水性溶媒および疎水性溶媒と酵素液の質量比はそれぞれ０．１－０．９、０．１－５、０．１－１０であり、前記疎水性溶媒にはラセミキラル化合物からなるエステル類またはアミド類化合物が含まれている前記ステップ（１）と、
三成分液体系を撹拌しながら酵素反応を起こし、反応終了後、静置または遠心分離で上液層、中液層、下液層の３層に分け、加水分解後の単一旋光性キラル生成物は主に中液層または下液層に集まり、上液層の生成物は別の単一旋光性キラル生成物を含むエステル類またはアミド類であるステップ（２）と、を含むことを特徴とする、酵素によるキラル化合物の分割方法。
（付記１）
リパーゼ濃度が１－３０００Ｕ／ｍＬの酵素液を調製し、酵素液に可溶性塩、親水性溶媒および疎水性溶媒を加え、三成分液体系にするステップ（１）であって、前記可溶性塩、親水性溶媒および疎水性溶媒と酵素液の質量比はそれぞれ０．１－０．９、０．１－５、０．１－１０であり、前記疎水性溶媒にはラセミキラル化合物からなるエステル類またはアミド類化合物が含まれている前記ステップ（１）と、
三成分液体系を撹拌しながら酵素反応を起こし、反応終了後、静置または遠心分離で上液層、中液層、下液層の３層に分け、加水分解後の単一旋光性キラル生成物は主に中液層または下液層に集まり、上液層の生成物は別の単一旋光性キラル生成物を含むエステル類またはアミド類であるステップ（２）と、を含むことを特徴とする、酵素によるキラル化合物の分割方法。
（付記２）
ステップ（１）の前記親水性溶媒は、ポリエチレングリコール、ポリプロピルグリコール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール、ブタノール、イソブチルアルコール、エチレングリコールおよびアセトンのうちの１種または２種類以上か、または、前記親水性溶媒は、［ＢＭＩＭ］Ｂｒ、［ＢＭＩＭ］ＢＦ４、［ＥＭＩＭ］ＥＴＳＯ４、［ＯＭＩＭ］Ｃｌのうちの１種または２種類以上であることを特徴とする、付記１に記載の方法。
ステップ（１）の前記親水性溶媒は、ポリエチレングリコール、ポリプロピルグリコール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール、ブタノール、イソブチルアルコール、エチレングリコールおよびアセトンのうちの１種または２種類以上か、または、前記親水性溶媒は、［ＢＭＩＭ］Ｂｒ、［ＢＭＩＭ］ＢＦ４、［ＥＭＩＭ］ＥＴＳＯ４、［ＯＭＩＭ］Ｃｌのうちの１種または２種類以上であることを特徴とする、付記１に記載の方法。
（付記３）
ステップ（１）の前記可溶性塩は、クエン酸ナトリウム、塩化ナトリウム、硫酸アンモニウム、炭酸ナトリウム、リン酸水素二カリウム、リン酸カリウム、リン酸二水素カリウムのうちの１種または２種類以上であることを特徴とする、付記１に記載の方法。
ステップ（１）の前記可溶性塩は、クエン酸ナトリウム、塩化ナトリウム、硫酸アンモニウム、炭酸ナトリウム、リン酸水素二カリウム、リン酸カリウム、リン酸二水素カリウムのうちの１種または２種類以上であることを特徴とする、付記１に記載の方法。
（付記４）
ステップ（１）の前記疎水性溶媒は、ヘキサン、エチルエーテル、イソプロピルエーテル、酢酸エチル、シクロヘキサノール、石油エーテル、イソオクタン、ベンゼンおよびトルエンのうちの１種または２種類以上であることを特徴とする、付記１に記載の方法。
ステップ（１）の前記疎水性溶媒は、ヘキサン、エチルエーテル、イソプロピルエーテル、酢酸エチル、シクロヘキサノール、石油エーテル、イソオクタン、ベンゼンおよびトルエンのうちの１種または２種類以上であることを特徴とする、付記１に記載の方法。
（付記５）
ステップ（２）の反応条件は、温度３０－４５℃、反応時間は２０分－４時間であることを特徴とする、付記１または２または３または４に記載の方法。
ステップ（２）の反応条件は、温度３０－４５℃、反応時間は２０分－４時間であることを特徴とする、付記１または２または３または４に記載の方法。
（付記６）
ステップ（１）の前記三成分液体系のｐＨは、５－９であることを特徴とする、付記５に記載の方法。
ステップ（１）の前記三成分液体系のｐＨは、５－９であることを特徴とする、付記５に記載の方法。
（付記７）
ステップ（１）の前記リパーゼ濃度は、５－２０００Ｕ／ｍＬであることを特徴とする、付記６に記載の方法。
ステップ（１）の前記リパーゼ濃度は、５－２０００Ｕ／ｍＬであることを特徴とする、付記６に記載の方法。
（付記８）
前記可溶性塩、親水性溶媒および疎水性溶媒と酵素液の質量比は、それぞれ０．２－０．８、０．２－０．８、０．２－４であることを特徴とする、付記７に記載の方法。
前記可溶性塩、親水性溶媒および疎水性溶媒と酵素液の質量比は、それぞれ０．２－０．８、０．２－０．８、０．２－４であることを特徴とする、付記７に記載の方法。
（付記９）
前記ラセミキラル化合物からなるエステル類またはアミド類化合物は、ＤＬ－マンデル酸メチル、ＤＬ－ナプロキセンメチル、ＤＬ－（４－メトキシフェニル）－１－酢酸エチル、ＤＬ－１－（４－メトキシフェニル）酢酸エチル、ＤＬ－６－メチル－５－ヘプテン－２－酢酸エチルの１種または２種類以上であることを特徴とする、付記１または２または３または４に記載の方法。
前記ラセミキラル化合物からなるエステル類またはアミド類化合物は、ＤＬ－マンデル酸メチル、ＤＬ－ナプロキセンメチル、ＤＬ－（４－メトキシフェニル）－１－酢酸エチル、ＤＬ－１－（４－メトキシフェニル）酢酸エチル、ＤＬ－６－メチル－５－ヘプテン－２－酢酸エチルの１種または２種類以上であることを特徴とする、付記１または２または３または４に記載の方法。
（付記１０）
前記ラセミキラル化合物からなるエステル類またはアミド類化合物は、疎水性溶媒の質量の０．１％－１０％で、好ましくは、１％－５％であることを特徴とする、付記１または２または３または４に記載の方法。
前記ラセミキラル化合物からなるエステル類またはアミド類化合物は、疎水性溶媒の質量の０．１％－１０％で、好ましくは、１％－５％であることを特徴とする、付記１または２または３または４に記載の方法。
Claims (9)
- リパーゼ濃度が１－３０００Ｕ／ｍＬの酵素液を調製し、酵素液に可溶性塩、親水性溶媒および疎水性溶媒を加え、三成分液体系にするステップ（１）であって、前記可溶性塩、親水性溶媒および疎水性溶媒と酵素液の質量比はそれぞれ０．１８－０．６、０．２９－０．４、０．３－０．４であり、前記疎水性溶媒にはラセミキラル化合物からなるエステル類またはアミド類化合物が含まれている前記ステップ（１）と、
三成分液体系を撹拌しながら酵素反応を起こし、反応終了後、静置または遠心分離で上液層、中液層、下液層の３層に分け、加水分解後の単一旋光性キラル生成物は主に中液層または下液層に集まり、上液層の生成物は別の単一旋光性キラル生成物を含むエステル類またはアミド類であるステップ（２）と、を含むことを特徴とする、酵素によるキラル化合物の分割方法。 - ステップ（１）の前記親水性溶媒は、ポリエチレングリコール、ポリプロピルグリコール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール、ブタノール、イソブチルアルコール、エチレングリコールおよびアセトンのうちの１種または２種類以上か、または、前記親水性溶媒は、１－ブチル－３－メチルイミダゾリウムブロミド、１－ブチル－３－メチルイミダゾリウムテトラフルオロボラート、１－エチル－３－メチルイミダゾリウムエチルスルファート、１－メチル－３－オクチルイミダゾリウムクロリドのうちの１種または２種類以上であることを特徴とする、請求項１に記載の方法。
- ステップ（１）の前記可溶性塩は、クエン酸ナトリウム、塩化ナトリウム、硫酸アンモニウム、炭酸ナトリウム、リン酸水素二カリウム、リン酸カリウム、リン酸二水素カリウムのうちの１種または２種類以上であることを特徴とする、請求項１に記載の方法。
- ステップ（１）の前記疎水性溶媒は、ヘキサン、エチルエーテル、イソプロピルエーテル、酢酸エチル、シクロヘキサノール、石油エーテル、イソオクタン、ベンゼンおよびトルエンのうちの１種または２種類以上であることを特徴とする、請求項１に記載の方法。
- ステップ（２）の反応条件は、温度３０－４５℃、反応時間は２０分－４時間であることを特徴とする、請求項１または２または３または４に記載の方法。
- ステップ（１）の前記三成分液体系のｐＨは、５－９であることを特徴とする、請求項５に記載の方法。
- ステップ（１）の前記リパーゼ濃度は、５－２０００Ｕ／ｍＬであることを特徴とする、請求項６に記載の方法。
- 前記ラセミキラル化合物からなるエステル類またはアミド類化合物は、ＤＬ－マンデル酸メチル、ＤＬ－ナプロキセンメチル、ＤＬ－（４－メトキシフェニル）－１－酢酸エチル、ＤＬ－１－（４－メトキシフェニル）酢酸エチル、ＤＬ－６－メチル－５－ヘプテン－２－酢酸エチルの１種または２種類以上であることを特徴とする、請求項１または２または３または４に記載の方法。
- 前記ラセミキラル化合物からなるエステル類またはアミド類化合物は、疎水性溶媒の質量の０．１％－１０％であることを特徴とする、請求項１または２または３または４に記載の方法。
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201811500754.8 | 2018-12-10 | ||
| CN201811500754.8A CN109628508B (zh) | 2018-12-10 | 2018-12-10 | 一种酶法拆分手性物质的方法 |
| PCT/CN2019/113139 WO2020119280A1 (zh) | 2018-12-10 | 2019-10-25 | 一种酶法拆分手性物质的方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2022511911A JP2022511911A (ja) | 2022-02-01 |
| JP7169025B2 true JP7169025B2 (ja) | 2022-11-10 |
Family
ID=66072344
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2021532837A Active JP7169025B2 (ja) | 2018-12-10 | 2019-10-25 | 酵素によるキラル化合物の分割方法 |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20220017935A1 (ja) |
| JP (1) | JP7169025B2 (ja) |
| CN (1) | CN109628508B (ja) |
| WO (1) | WO2020119280A1 (ja) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN109628508B (zh) * | 2018-12-10 | 2021-08-10 | 华南理工大学 | 一种酶法拆分手性物质的方法 |
| CN112048527B (zh) * | 2020-08-19 | 2022-04-22 | 华南理工大学 | 一种双酶联用拆分手性物质的方法 |
| CN113684231B (zh) * | 2021-10-26 | 2022-03-29 | 华南理工大学 | 一种多液相酶法酯化合成酯类物质的方法 |
| CN113862117B (zh) * | 2021-10-26 | 2024-03-12 | 华南理工大学 | 一种多液相体系连续化酶法拆分手性物质的装置及方法 |
| CN114380697A (zh) * | 2021-11-30 | 2022-04-22 | 上海毕得医药科技股份有限公司 | 一种n-甲基乙基胺盐酸盐的制备工艺 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2005176758A (ja) | 2003-12-22 | 2005-07-07 | Sanwa Kagaku Kenkyusho Co Ltd | 光学活性を有する４−オキソクロマン−２−カルボン酸誘導体の製法 |
| WO2009099140A1 (ja) | 2008-02-06 | 2009-08-13 | Mitsubishi Gas Chemical Company, Inc. | 光学活性インドリン－２－カルボン酸類またはその誘導体の製造方法 |
| JP2015177742A (ja) | 2012-08-06 | 2015-10-08 | 日産化学工業株式会社 | エピ体含有量の多いジャスモン酸メチルの製造方法 |
Family Cites Families (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH03148270A (ja) * | 1989-08-25 | 1991-06-25 | E I Du Pont De Nemours & Co | ペルフルオロオレフインの３液相エポキシ化 |
| US5342780A (en) * | 1990-01-26 | 1994-08-30 | University Of New Mexico | Methods of enzymatically separating stereoisomers of a racemic mixture of a reactive ester |
| US5928933A (en) * | 1998-06-26 | 1999-07-27 | E. I. Du Pont De Nemours & Company | Process for the enzymatic resolution of N-(alkoxycarbonyl)-4-ketoproline alkyl esters or N-(alkoxycarbonyl)-4-hydroxyproline alkyl esters using Candida antarctica lipase B |
| PT1119635E (pt) * | 1998-10-09 | 2012-07-24 | Gilead Sciences Inc | Sistemas não homogéneos para a resolução de misturas enantioméricas |
| CN101220382B (zh) * | 2008-02-02 | 2010-08-04 | 河北工业大学 | 一种r-(-)-扁桃酸的制备方法 |
| WO2009153325A1 (en) * | 2008-06-19 | 2009-12-23 | Dsm Ip Assets B.V. | Optical resolution of a mixture of enantiomers of butynol or butenol |
| CN102559520B (zh) * | 2011-12-15 | 2013-11-20 | 江南大学 | 一种利用微生物催化制备(s)-(4-氯苯基)-(吡啶-2-基)-甲醇的方法 |
| CN103184245B (zh) * | 2013-03-01 | 2014-12-31 | 华南理工大学 | 一种三液相脂肪酶催化体系水解脂类生产脂肪酸的方法 |
| CN105506052A (zh) * | 2015-11-23 | 2016-04-20 | 浙江理工大学 | 一种提高有机相中游离脂肪酶催化拆分性能的方法 |
| CN106520898A (zh) * | 2016-11-01 | 2017-03-22 | 湖北中烟工业有限责任公司 | 一种新型薄荷脑的精制方法 |
| CN109628508B (zh) * | 2018-12-10 | 2021-08-10 | 华南理工大学 | 一种酶法拆分手性物质的方法 |
-
2018
- 2018-12-10 CN CN201811500754.8A patent/CN109628508B/zh active Active
-
2019
- 2019-10-25 JP JP2021532837A patent/JP7169025B2/ja active Active
- 2019-10-25 US US17/311,835 patent/US20220017935A1/en active Pending
- 2019-10-25 WO PCT/CN2019/113139 patent/WO2020119280A1/zh active Application Filing
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2005176758A (ja) | 2003-12-22 | 2005-07-07 | Sanwa Kagaku Kenkyusho Co Ltd | 光学活性を有する４−オキソクロマン−２−カルボン酸誘導体の製法 |
| WO2009099140A1 (ja) | 2008-02-06 | 2009-08-13 | Mitsubishi Gas Chemical Company, Inc. | 光学活性インドリン－２－カルボン酸類またはその誘導体の製造方法 |
| JP2015177742A (ja) | 2012-08-06 | 2015-10-08 | 日産化学工業株式会社 | エピ体含有量の多いジャスモン酸メチルの製造方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2022511911A (ja) | 2022-02-01 |
| US20220017935A1 (en) | 2022-01-20 |
| CN109628508A (zh) | 2019-04-16 |
| WO2020119280A1 (zh) | 2020-06-18 |
| CN109628508B (zh) | 2021-08-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP7169025B2 (ja) | 酵素によるキラル化合物の分割方法 | |
| Kurbanoglu et al. | Asymmetric reduction of substituted acetophenones using once immobilized Rhodotorula glutinis cells | |
| Zhang et al. | Significant enhancement of (R)-mandelic acid production by relieving substrate inhibition of recombinant nitrilase in toluene–water biphasic system | |
| CN109295030B (zh) | 一种基于液态固定化酶富集鱼油中dha和epa的方法 | |
| Poessl et al. | Non‐racemic halohydrins via biocatalytic hydrogen‐transfer reduction of halo‐ketones and one‐pot cascade reaction to enantiopure epoxides | |
| CN101372676B (zh) | 一株红球菌以及利用该菌株制备光学纯手性亚砜的用途 | |
| de Miranda et al. | Continuous flow dynamic kinetic resolution of rac-1-phenylethanol using a single packed-bed containing immobilized CAL-B lipase and VOSO 4 as racemization catalysts | |
| Choi et al. | Biocatalytic enantioconvergent separation of racemic mandelic acid | |
| US11919835B2 (en) | Method for preparing pregabalin | |
| Xu et al. | Efficient preparation of (R)‐α‐monobenzoyl glycerol by lipase catalyzed asymmetric esterification: Optimization and operation in packed bed reactor | |
| Xu et al. | Biocatalytic resolution of glycidyl aryl ethers by Trichosporon loubierii: cell/substrate ratio influences the optical purity of (R)-epoxides | |
| Deregnaucourt et al. | Enzymatic Transformations 63. High‐Concentration Two Liquid‐Liquid Phase Aspergillus niger Epoxide Hydrolase‐Catalysed Resolution: Application to Trifluoromethyl‐Substituted Aromatic Epoxides | |
| Jeong et al. | Lipase-catalyzed reaction in the packed-bed reactor with continuous extraction column to overcome a product inhibition | |
| Jacobsen et al. | Enantiopure derivatives of 1, 2‐alkanediols: Substrate requirements of lipase B from Candida antarctica | |
| CN112921064A (zh) | 一种固定化酶催化合成维生素a棕榈酸酯的方法 | |
| Cardus et al. | Microbial deracemisation of N-(1-hydroxy-1-phenylethyl) benzamide | |
| JP5266875B2 (ja) | 有機カルボン酸エステルからの光学活性有機カルボン酸の製造方法 | |
| JP2010532992A (ja) | ３，４−エポキシ酪酸エチルの微生物速度論的分割 | |
| Koesoema et al. | Application of Nonaqueous Media in Biocatalysis | |
| CN107406861B (zh) | 手性-1,1-二氟-2-丙醇的工业的制造方法 | |
| Zhangde et al. | Immobilization of Serratia marcescens lipase and catalytic resolution of trans-3-(4′-methoxyphenyl) glycidic acid methyl ester | |
| Ghorpade et al. | Desymmetrization of meso-cyclopenten-cis-1, 4-diol to 4-(R)-hydroxycyclopent-2-en-1-(S)-acetate by irreversible transesterification using Chirazyme® | |
| Swetha et al. | Enantioselective conversion of racemic Sotalol to R (−)-Sotalol by lipase AP6 | |
| CN113755539B (zh) | 一种二氢嘧啶氨基水解酶及其应用 | |
| CN102559553A (zh) | 一株无色杆菌及其不对称催化还原碳碳双键的方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20210609 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20220726 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20220823 |
|
| TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20221004 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20221021 |
|
| R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 7169025 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |