JP7142840B2 - 細胞含有ハイドロゲル体及びその製造方法 - Google Patents
細胞含有ハイドロゲル体及びその製造方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP7142840B2 JP7142840B2 JP2018094499A JP2018094499A JP7142840B2 JP 7142840 B2 JP7142840 B2 JP 7142840B2 JP 2018094499 A JP2018094499 A JP 2018094499A JP 2018094499 A JP2018094499 A JP 2018094499A JP 7142840 B2 JP7142840 B2 JP 7142840B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- cell
- hydrogel
- cells
- aggregate
- droplet
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N11/00—Carrier-bound or immobilised enzymes; Carrier-bound or immobilised microbial cells; Preparation thereof
- C12N11/02—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier
- C12N11/04—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier entrapped within the carrier, e.g. gel or hollow fibres
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N11/00—Carrier-bound or immobilised enzymes; Carrier-bound or immobilised microbial cells; Preparation thereof
- C12N11/02—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier
- C12N11/08—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier the carrier being a synthetic polymer
- C12N11/098—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier the carrier being a synthetic polymer formed in the presence of the enzymes or microbial cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/28—Bone marrow; Haematopoietic stem cells; Mesenchymal stem cells of any origin, e.g. adipose-derived stem cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/36—Skin; Hair; Nails; Sebaceous glands; Cerumen; Epidermis; Epithelial cells; Keratinocytes; Langerhans cells; Ectodermal cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
- A61L27/14—Macromolecular materials
- A61L27/22—Polypeptides or derivatives thereof, e.g. degradation products
- A61L27/24—Collagen
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
- A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
- A61L27/38—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix containing added animal cells
- A61L27/3804—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix containing added animal cells characterised by specific cells or progenitors thereof, e.g. fibroblasts, connective tissue cells, kidney cells
- A61L27/3813—Epithelial cells, e.g. keratinocytes, urothelial cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
- A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
- A61L27/38—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix containing added animal cells
- A61L27/3804—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix containing added animal cells characterised by specific cells or progenitors thereof, e.g. fibroblasts, connective tissue cells, kidney cells
- A61L27/3834—Cells able to produce different cell types, e.g. hematopoietic stem cells, mesenchymal stem cells, marrow stromal cells, embryonic stem cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
- A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
- A61L27/38—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix containing added animal cells
- A61L27/3886—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix containing added animal cells comprising two or more cell types
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
- A61L27/50—Materials characterised by their function or physical properties, e.g. injectable or lubricating compositions, shape-memory materials, surface modified materials
- A61L27/52—Hydrogels or hydrocolloids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/0012—Cell encapsulation
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0625—Epidermal cells, skin cells; Cells of the oral mucosa
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0652—Cells of skeletal and connective tissues; Mesenchyme
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0652—Cells of skeletal and connective tissues; Mesenchyme
- C12N5/0662—Stem cells
- C12N5/0666—Mesenchymal stem cells from hair follicles
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0697—Artificial constructs associating cells of different lineages, e.g. tissue equivalents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L2430/00—Materials or treatment for tissue regeneration
- A61L2430/18—Materials or treatment for tissue regeneration for hair reconstruction
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2502/00—Coculture with; Conditioned medium produced by
- C12N2502/09—Coculture with; Conditioned medium produced by epidermal cells, skin cells, oral mucosa cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2513/00—3D culture
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2533/00—Supports or coatings for cell culture, characterised by material
- C12N2533/50—Proteins
- C12N2533/54—Collagen; Gelatin
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Transplantation (AREA)
- Oral & Maxillofacial Surgery (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Botany (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Virology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
Description
胎齢18日のC57BL/6マウス胎児より背部の皮膚組織を採取し、中尾らが報告した方法(Koh-ei Toyoshima et al. Nature Communication, 3, 784, 2012)を一部改変して、ディスパーゼ処理を4℃で1時間、30rpm震盪条件で行い、当該皮膚組織の上皮層と間葉層とを分離した。その後、上皮層に100U/mLのコラゲナーゼ処理を1時間20分施し、さらにトリプシン処理を10分施すことで、上皮系細胞を単離した。また、間葉層には100U/mLのコラゲナーゼ処理を1時間20分施すことで間葉系細胞を単離した。
上述のようにして採取した間葉系細胞をI型コラーゲン溶液(コラーゲンType1-A、新田ゼラチン株式会社製)に懸濁して、分散された当該間葉系細胞を1×104cells/2μLの密度で含む第一のハイドロゲル細胞懸濁液を調製した。次いで、大気中で、第一のハイドロゲル細胞懸濁液約2μLを、ポリスチレン基材の撥水性表面上に滴下して、分散された間葉系細胞を含む第一のハイドロゲル液滴を形成した。
上述のようにして形成された細胞含有ハイドロゲル体に、ピペットを用いて培養液を流し当てることにより、当該細胞含有ハイドロゲル体を撥水性表面から脱離させて回収し、培養液に分散した。培養液としては、DMEM培地とKG2培地との混合培地(10%ウシ胎児血清及び1%ペニシリン含有)を使用した。
図6A,図6B及び図6Cには、それぞれ培養初日(D0)、培養1日目(D1)及び培養3日目(D3)の細胞含有ハイドロゲル体の蛍光顕微鏡写真を示す。図6A~図6Cにおいて白っぽく示される部分は、予め蛍光色素(Vybrant(商標) DiI Cell-Labeling Solution)で細胞膜を染色された間葉系細胞である。また、図6A~図6Cにおいて白い破線で囲まれている部分が、細胞含有ハイドロゲル体である。図6A~図6Cのスケールバーは200μmを示す。
上述の実施例1と同様にして、胎齢18日のC57BL/6マウス胎児の皮膚組織から、上皮系細胞及び間葉系細胞をそれぞれ単離した。
上述の実施例1と同様にして、大気中、撥水性表面上において、分散された間葉系細胞を含む第一のハイドロゲル液滴と、分散された上皮系細胞を含む第二のハイドロゲル液滴とを連結させてハイドロゲル液滴連結体を形成し、さらに、当該ハイドロゲル液滴連結体をゲル化して、細胞含有ハイドロゲル体を形成した。
上述の実施例1と同様にして、細胞含有ハイドロゲル体を撥水性表面から脱離させて回収し、混合培地中で3日間、浮遊状態で培養した。
上述のようにして3日間培養した細胞含有ハイドロゲル体(生体外で製造した毛包原基)を回収して、ヌードマウスの皮内に移植した。すなわち、ヌードマウスにイソフルラン吸引麻酔を施し、その背部をイソジンで消毒した。次いで、Vランスマイクロメス(日本アルコン)を用いて、皮膚の表皮層から真皮層下部に至る移植創を形成した。そして、この移植創に、細胞含有ハイドロゲル体を1つずつ注入した。なお、ヌードマウスの飼育及び移植実験は、横浜国立大学動物実験委員会の指針を遵守して行った。
図8A、図8B及び図8Cには、それぞれ移植後11日目、移植後19日目及び移植後24日目における、ヌードマウスに移植した細胞含有ハイドロゲル体から生えた毛の写真を示す。
上述の実施例1と同様にして、胎齢18日のC57BL/6マウス胎児の皮膚組織から、上皮系細胞及び間葉系細胞をそれぞれ単離した。
上述の実施例1と同様にして、大気中、撥水性表面上において、分散された間葉系細胞を含む第一のハイドロゲル液滴と、分散された上皮系細胞を含む第二のハイドロゲル液滴とを連結させてハイドロゲル液滴連結体を形成し、さらに、当該ハイドロゲル液滴連結体をゲル化して、細胞含有ハイドロゲル体を形成した。
上述の実施例1と同様にして、混合培地中で3日間、細胞含有ハイドロゲル体の浮遊培養を行った。
一方、比較の対照として、予め形成された上皮系細胞スフェロイドと、間葉系細胞スフェロイドとを融合させることにより、スフェロイド融合組織を製造した。すなわち、まず上述の実施例1と同様にして、胎齢18日のC57BL/6マウス胎児の皮膚組織から上皮系細胞及び間葉系細胞をそれぞれ単離した。
図9A、図9B及び図9Cには、それぞれ培養1日目、3日目及び6日目におけるスフェロイド融合組織の蛍光顕微鏡写真を示す。図10A、図10B及び図10Cには、それぞれ培養1日目、3日目及び6日目における細胞含有ハイドロゲル体の蛍光顕微鏡写真を示す。各図において、白い破線で囲まれた部分が、スフェロイド融合組織又は細胞含有ハイドロゲル体である。また、各図のスフェロイド融合組織又は細胞含有ハイドロゲル体において白っぽく示される部分は、予め蛍光色素(Vybrant(商標) DiI Cell-Labeling Solution)で細胞膜を染色された間葉系細胞である。各図のスケールバーは、200μmを示す。
Claims (11)
- 気相中、基材の表面上に、分散された第一の細胞と、第一のハイドロゲル高分子とを含む第一のハイドロゲル液滴を形成すること、
気相中、前記表面上に、分散された第二の細胞と、第二のハイドロゲル高分子とを含み、前記第一のハイドロゲル液滴と連結した第二のハイドロゲル液滴を形成すること、
気相中、前記表面上で、前記第一のハイドロゲル液滴に由来する第一の液滴部と、前記第二のハイドロゲル液滴に由来する第二の液滴部とを含むハイドロゲル液滴連結体をゲル化させて、細胞含有ハイドロゲル体を形成すること、
を含む細胞含有ハイドロゲル体の製造方法。 - 前記細胞含有ハイドロゲル体内で前記第一の細胞及び前記第二の細胞を培養することをさらに含む、
請求項1に記載の細胞含有ハイドロゲル体の製造方法。 - 前記細胞含有ハイドロゲル体を前記表面から脱離させた後、前記細胞含有ハイドロゲル体内で前記第一の細胞及び前記第二の細胞を培養する、
請求項2に記載の細胞含有ハイドロゲル体の製造方法。 - 前記細胞含有ハイドロゲル体を前記表面から脱離させた後、浮遊状態の前記細胞含有ハイドロゲル体内で前記第一の細胞及び前記第二の細胞を培養する、
請求項3に記載の細胞含有ハイドロゲル体の製造方法。 - 前記細胞含有ハイドロゲル体内で前記第一の細胞及び前記第二の細胞を培養して、前記第一の細胞が凝集して形成された第一の細胞凝集塊、及び/又は、前記第二の細胞が凝集して形成された第二の細胞凝集塊、を含む細胞含有ハイドロゲル体を得る、
請求項2乃至4のいずれかに記載の細胞含有ハイドロゲル体の製造方法。 - 前記細胞含有ハイドロゲル体内で前記第一の細胞及び前記第二の細胞を培養して、下記(a)及び/又は(b)の特性:
(a)接着性細胞である前記第一の細胞が凝集して形成された前記第一の細胞凝集塊と、前記第一の細胞凝集塊を覆う第一のハイドロゲル被覆部とを含み、前記第一の細胞凝集塊の内部における、前記第一の細胞に対して細胞接着性を有する前記第一のハイドロゲル高分子の密度が、前記第一のハイドロゲル被覆部におけるそれより大きい;、
(b)接着性細胞である前記第二の細胞が凝集して形成された前記第二の細胞凝集塊と、前記第二の細胞凝集塊を覆う第二のハイドロゲル被覆部とを含み、前記第二の細胞凝集塊の内部における、前記第二の細胞に対して細胞接着性を有する前記第二のハイドロゲル高分子の密度が、前記第二のハイドロゲル被覆部におけるそれより大きい;、
を有する細胞含有ハイドロゲル体を得る、
請求項5に記載の細胞含有ハイドロゲル体の製造方法。 - 前記第一の細胞と前記第二の細胞との組み合わせが、上皮系細胞と間葉系細胞との組み合わせである、
請求項1乃至6のいずれかに記載の細胞含有ハイドロゲル体の製造方法。 - 第一の細胞と第一のハイドロゲル高分子とを含む第一のハイドロゲル液滴のゲル化体である第一のハイドロゲル部と、
第二の細胞と第二のハイドロゲル高分子とを含む第二のハイドロゲル液滴のゲル化体であり、前記第一のハイドロゲル部と連結した第二のハイドロゲル部と、
を含み、
前記第一のハイドロゲル高分子と前記第二のハイドロゲル高分子とは、異なる種類の高分子であり、
前記第一のハイドロゲル部は、前記第一の細胞の凝集体である第一の細胞凝集塊を含み、及び/又は、前記第二のハイドロゲル部は、前記第二の細胞の凝集体である第二の細胞凝集塊を含む、
細胞含有ハイドロゲル体。 - 下記(a)及び/又は(b)の特性:
(a)接着性細胞である前記第一の細胞が凝集して形成された前記第一の細胞凝集塊と、前記第一の細胞凝集塊を覆う第一のハイドロゲル被覆部とを含み、前記第一の細胞凝集塊の内部における、前記第一の細胞に対して細胞接着性を有する前記第一のハイドロゲル高分子の密度が、前記第一のハイドロゲル被覆部におけるそれより大きい;、
(b)接着性細胞である前記第二の細胞が凝集して形成された前記第二の細胞凝集塊と、前記第二の細胞凝集塊を覆う第二のハイドロゲル被覆部とを含み、前記第二の細胞凝集塊の内部における、前記第二の細胞に対して細胞接着性を有する前記第二のハイドロゲル高分子の密度が、前記第二のハイドロゲル被覆部におけるそれより大きい;、
を有する、
請求項8に記載の細胞含有ハイドロゲル体。 - 前記第一の細胞と前記第二の細胞との組み合わせが、上皮系細胞と間葉系細胞との組み合わせである、
請求項8又は9に記載の細胞含有ハイドロゲル体。 - 溶液中で浮遊状態にある、
請求項8乃至10のいずれかに記載の細胞含有ハイドロゲル体。
Priority Applications (4)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2018094499A JP7142840B2 (ja) | 2018-05-16 | 2018-05-16 | 細胞含有ハイドロゲル体及びその製造方法 |
PCT/JP2019/016332 WO2019220843A1 (ja) | 2018-05-16 | 2019-04-16 | 細胞含有ハイドロゲル体及びその製造方法 |
EP19803757.4A EP3795683A4 (en) | 2018-05-16 | 2019-04-16 | CELLULATED HYDROGEL BODY AND PROCESS FOR THE PRODUCTION THEREOF |
US17/047,761 US20210163918A1 (en) | 2018-05-16 | 2019-04-16 | Cell-Containing Hydrogel Body and Method for Producing Same |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2018094499A JP7142840B2 (ja) | 2018-05-16 | 2018-05-16 | 細胞含有ハイドロゲル体及びその製造方法 |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2019198267A JP2019198267A (ja) | 2019-11-21 |
JP2019198267A5 JP2019198267A5 (ja) | 2021-04-30 |
JP7142840B2 true JP7142840B2 (ja) | 2022-09-28 |
Family
ID=68540166
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2018094499A Active JP7142840B2 (ja) | 2018-05-16 | 2018-05-16 | 細胞含有ハイドロゲル体及びその製造方法 |
Country Status (4)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20210163918A1 (ja) |
EP (1) | EP3795683A4 (ja) |
JP (1) | JP7142840B2 (ja) |
WO (1) | WO2019220843A1 (ja) |
Families Citing this family (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2021201243A1 (ja) * | 2020-04-03 | 2021-10-07 | Jsr株式会社 | 細胞含有細胞外マトリックスの製造方法、細胞培養方法、細胞含有細胞外マトリックス製造装置及び制御プログラム |
US20240344033A1 (en) * | 2021-08-18 | 2024-10-17 | Tohoku University | Endometrial model, method for preparing endometrial model, and endometrial implantation model |
EP4446408A1 (en) * | 2021-12-06 | 2024-10-16 | Ricoh Company, Ltd. | Hydrogel, inkjet ink, method for producing cell culture body, and cell-containing gel particles and method for producing same |
Citations (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2003070466A (ja) | 2001-09-05 | 2003-03-11 | Shiseido Co Ltd | 人工毛球部及びその製造方法、並びに、人工毛球部を用いた薬剤の評価方法 |
WO2006129672A1 (ja) | 2005-05-30 | 2006-12-07 | Tokyo University Of Science Educational Foundation Administrative Organization | 歯の製造方法、歯の集合体及び組織の製造方法 |
JP2008029331A (ja) | 2006-06-27 | 2008-02-14 | Shiseido Co Ltd | 体性に由来する複数の細胞種からなる原始的な器官様をなし得る細胞塊 |
WO2012108069A1 (ja) | 2011-02-09 | 2012-08-16 | 株式会社オーガンテクノロジーズ | ガイドを有する移植用再生器官原基の製造方法、当該方法によって製造される、ガイドを有する移植用再生器官原基を含む組成物、およびガイドを有する移植用再生器官原基の移植方法 |
JP2016522682A (ja) | 2013-05-03 | 2016-08-04 | ザ ヘンリー エム. ジャクソン ファウンデーション フォー ザ アドヴァンスメント オブ ミリタリー メディシン インコーポレイテッド | 代用皮膚および毛包新生の方法 |
JP2017051160A (ja) | 2015-09-11 | 2017-03-16 | 国立大学法人横浜国立大学 | 細胞包埋ビーズ及びその製造方法 |
WO2017073625A1 (ja) | 2015-10-30 | 2017-05-04 | 国立大学法人横浜国立大学 | 再生毛包原基の集合体の製造方法、毛包組織含有シート、及び毛包組織含有シートの製造方法 |
WO2017217393A1 (ja) | 2016-06-17 | 2017-12-21 | 国立大学法人横浜国立大学 | 毛髪再生用細胞包埋ビーズ及びその製造方法、並びに毛髪再生用キット |
Family Cites Families (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1995018216A1 (fr) * | 1993-12-30 | 1995-07-06 | Nitta Gelatin Inc. | Procedes permettant d'enrober des cultures de cellules animales |
JP6000021B2 (ja) * | 2012-08-23 | 2016-09-28 | 国立大学法人東北大学 | Igfを含む成長因子による歯、再生歯および再生歯胚における歯冠および咬頭ならびに歯根の大きさおよび形の制御の方法 |
-
2018
- 2018-05-16 JP JP2018094499A patent/JP7142840B2/ja active Active
-
2019
- 2019-04-16 US US17/047,761 patent/US20210163918A1/en active Pending
- 2019-04-16 EP EP19803757.4A patent/EP3795683A4/en active Pending
- 2019-04-16 WO PCT/JP2019/016332 patent/WO2019220843A1/ja unknown
Patent Citations (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2003070466A (ja) | 2001-09-05 | 2003-03-11 | Shiseido Co Ltd | 人工毛球部及びその製造方法、並びに、人工毛球部を用いた薬剤の評価方法 |
WO2006129672A1 (ja) | 2005-05-30 | 2006-12-07 | Tokyo University Of Science Educational Foundation Administrative Organization | 歯の製造方法、歯の集合体及び組織の製造方法 |
JP2008029331A (ja) | 2006-06-27 | 2008-02-14 | Shiseido Co Ltd | 体性に由来する複数の細胞種からなる原始的な器官様をなし得る細胞塊 |
WO2012108069A1 (ja) | 2011-02-09 | 2012-08-16 | 株式会社オーガンテクノロジーズ | ガイドを有する移植用再生器官原基の製造方法、当該方法によって製造される、ガイドを有する移植用再生器官原基を含む組成物、およびガイドを有する移植用再生器官原基の移植方法 |
JP2016522682A (ja) | 2013-05-03 | 2016-08-04 | ザ ヘンリー エム. ジャクソン ファウンデーション フォー ザ アドヴァンスメント オブ ミリタリー メディシン インコーポレイテッド | 代用皮膚および毛包新生の方法 |
JP2017051160A (ja) | 2015-09-11 | 2017-03-16 | 国立大学法人横浜国立大学 | 細胞包埋ビーズ及びその製造方法 |
WO2017073625A1 (ja) | 2015-10-30 | 2017-05-04 | 国立大学法人横浜国立大学 | 再生毛包原基の集合体の製造方法、毛包組織含有シート、及び毛包組織含有シートの製造方法 |
WO2017217393A1 (ja) | 2016-06-17 | 2017-12-21 | 国立大学法人横浜国立大学 | 毛髪再生用細胞包埋ビーズ及びその製造方法、並びに毛髪再生用キット |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP3795683A1 (en) | 2021-03-24 |
US20210163918A1 (en) | 2021-06-03 |
JP2019198267A (ja) | 2019-11-21 |
EP3795683A4 (en) | 2022-04-06 |
WO2019220843A1 (ja) | 2019-11-21 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
KR101840078B1 (ko) | 가이드를 갖는 이식용 재생 기관 원기의 제조방법, 해당 방법에 의해 제조되는, 가이드를 갖는 이식용 재생 기관 원기를 포함하는 조성물 및 가이드를 갖는 이식용 재생 기관 원기의 이식방법 | |
JP5887333B2 (ja) | 毛色が制御された移植用再生毛包原基の製造方法、当該移植用再生毛包原基を含む組成物、およびその移植方法 | |
JP7142840B2 (ja) | 細胞含有ハイドロゲル体及びその製造方法 | |
JP6999132B2 (ja) | 再生毛包原基を有する培養皮膚の製造方法及びその使用 | |
JP6475322B2 (ja) | 3次元細胞培養システム及びこれを用いた細胞培養方法 | |
Ajmal et al. | Organ regeneration through stem cells and tissue engineering | |
JP7444367B2 (ja) | 増幅毛包間葉系細胞の製造方法及びその使用 | |
JP2018082638A (ja) | 毛細血管構造を有する再生毛包原基の集合体の製造方法、毛包組織含有シート、及び毛包組織含有シートの製造方法 | |
JP7403734B2 (ja) | ファイバー担体-細胞含有ゲル複合体及びその製造方法、並びにファイバー担体-細胞含有ゲル複合体製造用キット | |
WO2023058429A1 (ja) | 毛髪再生能を有する細胞凝集塊の製造方法及びこれに関連する方法 | |
JP7246595B2 (ja) | 毛包原基、毛包原基の製造方法、及び毛包原基に含まれる細胞の活性化方法 | |
WO2022070787A1 (ja) | 組織体の製造方法及び組織体を用いた疾患の治療方法 | |
Barhouse et al. | Home Away From Home: Bioengineering Advancements to Mimic the Developmental and Adult Stem Cell Niche | |
Bhaskar et al. | Testicular tissue engineering: An emerging solution for in vitro spermatogenesis | |
JP7303962B2 (ja) | 培養容器、及び細胞-担体複合体の製造方法 | |
JP7427180B2 (ja) | 毛包原基及びその製造方法 | |
WO2021065665A1 (ja) | 三次元細胞構造体の製造方法 | |
JP5249789B2 (ja) | 毛髪の形成方法及び生物材料 | |
JP2023056592A (ja) | 移植用毛様組織及びこれに関連する方法 | |
WO2020066818A1 (ja) | 毛包上皮性幹細胞の生体外増殖方法 | |
Buttery et al. | A brief introduction to different cell types | |
KR20240153589A (ko) | 증폭 모낭 간엽계 세포의 제조 방법 및 그 사용 | |
Semenov | Engineering mesenchymal stem cell sheets on functional polyelectrolyte multilayer substrates | |
Semenov | ETH Library |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20210312 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20210312 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20220329 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20220512 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20220823 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20220902 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 7142840 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |