JP7086517B2 - 卵殻膜含有粉末を有効成分として含む腸内フローラ改善用組成物 - Google Patents
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Description
さらに、腸内フローラの改善機能に加えて、III型コラーゲンの生成促進機能を有し、両機能の相乗効果により生体をさらに良好な状態に改善および/または維持することのできる組成物を提供することを課題とする。
(1)吸収されずに腸内に残る成分がある卵殻膜含有粉末を有効成分として含む組成物であって、該組成物が食品添加剤、飲食品、またはサプリメントであることを特徴とする、腸内細菌の多様性増加、かつ、病原性細菌数の減少のための組成物。。
(2)卵殻膜含有粉末が、体積平均粒子径が6μm以下、または体積最大粒子径が20μm以下の卵殻膜含有微粉末である、(1)に記載の組成物。
(3)さらに加水分解卵殻膜成分を含む、(1)または(2)に記載の組成物。
(4)加水分解卵殻膜成分が加水分解卵殻膜粉末である、(3)に記載の組成物。
(5)卵殻膜含有微粉末10~90重量%および加水分解卵殻膜粉末90~10重量%を含んでなる、(4)に記載の組成物。
(6)III型コラーゲン生成促進のための組成物でもある、(3)ないし(5)のいずれかに記載の組成物。
(7)経口投与される製剤である、請求項1ないし6のいずれかに記載の組成物。
(8)製剤が錠剤である、(7)に記載の組成物。
(9)卵殻膜含有粉末と加水分解卵殻膜粉末の合計の一日摂取量が10~48,000mgである、(3)ないし(8)のいずれかに記載の組成物。
卵殻膜含有粉末または微粉末と加水分解卵殻膜成分を併用すれば、卵殻膜含有粉末または微粉末の有する腸内フローラ改善機能およびIII型コラーゲンの生成促進機能と、加水分解卵殻膜成分の有するIII型コラーゲンの生成促進機能とが相乗的に作用して、血管、肺、肝臓、皮膚等におけるIII型コラーゲンの生成の促進と、腸内フローラの改善により美肌効果や老化防止効果が増強され、健康状態を改善および/または良好に維持することができる。この組成物は、食品添加剤、飲食品、サプリメント、可食性美容剤、医薬品として様々な形態で利用することができ、加水分解卵殻膜成分として加水分解卵殻膜粉末を用いれば、錠剤化も簡単に行うことができる。
賦形剤としては、公知の賦形剤が適宜使用できるが、化工澱粉および乳糖の少なくとも1種を、賦形性の観点から卵殻膜成分の重量に対して0.3~3倍用いることが好ましく、1~2.5倍であることがより好ましい。化工澱粉としては、焙焼デキストリンなどのデキストリン、酸化澱粉、低粘性変性澱粉などの1種または2種以上を用いることができる。賦形剤として化工澱粉と乳糖を併用する場合は、使用割合(重量比)が、1:5~5:1であることが好ましい。
結合剤としては、公知の結合剤が適宜使用できるが、たとえば、デンプン糊、アラビアゴム糊、ヒドロキシプロピルセルロースなどが挙げられる。
崩壊剤としては、公知の崩壊剤が適宜使用できるが、たとえば、セルロース類などを用いることができる。
滑沢剤としては、公知の滑沢剤が適宜使用できるが、たとえば、ステアリン酸マグネシウム、ショ糖脂肪酸エステル、ワックス類、タルク、ビタミンCなどが挙げられる。
さらに、本実施形態の錠剤は、錠剤中に含まれる成分の変質や分解を防止し、かつ、錠剤表面の耐傷つき性を向上させるため、コーティング皮膜で覆うことが好ましい。コーティング皮膜は、公知のコーティング皮膜が適宜使用できるが、たとえば、商品名「セラック」(岐阜セラック株式会社製)を用いることができる。本実施形態の錠剤は、糖衣で覆われていてもよく、着色してもよく、着色後に艶出し処理を施してもよい。
(1)卵殻膜含有微粉末の製造
卵殻膜含有粉末サンプルとして、商品名「EMパウダー300」(キユーピー株式会社製)をジェットミルで微粉砕したものを用いた。ジェットミルとしては、シングルトラックジェットミル(株式会社セイシン製、FS-4)を用いて、風量:1.2m3/min、動力:11kwにて、体積最大粒子径が800メッシュ(目開きで約20μm)程度となるまで粉砕を実施した。レーザー回折式粒度分布測定機(株式会社セイシン製、LMS-30)を用いて粉砕後の粒径を測定したところ、体積最大粒子径は19.6μm、体積平均粒子径は5.8μm(以下、「800メッシュ微粉末」という。)であった。
7週齢のオスC57BL6/Jマウスを購入し3日間順応させた後、平均体重が等しくなるように3つの群(n=8)に分けた。7日間、対照AIN-93G基礎常用飼料(DSS群)または8%の卵殻膜800メッシュ微粉末を補強した飼料(D-ESM8群)のどちらかを給餌した。その後9日間、両群に以前と同じ実験用飼料を与えながら、1.5%(W/V)のデキストラン硫酸ナトリウム(DSS)(分子量40KDa;MP Biomedicals,Irvine,CA)を含む飲料水を与えて、大腸炎を誘発させた。通常の対照マウス(CON群)には、実験の全過程において、AIN-93G基礎常用飼料と通常の飲料水を与えた。
8%の卵殻膜800メッシュ微粉末補強飼料は、カロリーとタンパク質バランスを維持するために、コーンスターチとカゼインで調節した。病気活性指数(disease activity index:DAI)は、マウスの体重、便の硬さ、血便の3つのスコアを用いて、DSS水を与えた日以降毎日モニターした。
メタゲノムDNAを、QIAamp Stool Minキット(Qiagen,Hilden,Germany)を用いて、マウスの盲腸の内容物から抽出した。16S rRNA遺伝子の可変領域3と4を増幅するために、(5’-CCTACGGGNGGCWGCAG-3’)と(5’-CAGGACTACHVGGGTATCTAATCC-3’)のプライマーを用いて増幅した。増幅物の長さが250bp以上で平均qualityスコアが30以上のDNA配列について配列決定した。
代表的な配列をGreengenes OTUデータベースにしたがって、Ribosomal Database Project(RDP)分類を用いて分類した。
セグメント細菌と数種の病原性細菌の変化を検出するために、定量的リアルタイムPCRを行った。
細菌門レベルの解析によれば、3つの実験群(D-ESM8、DSS、CON)の間で、最も広く行き渡っている3つの細菌門の相対量が著しく異なっていた。図1に示すように、Bacteriodetesは、CON群での67.0%から、DSS群では34.6%に減少し、D-ESM8群では55.2%に回復した。 Firmicutesは、CON群での26.5%から、DSS群では13.7%に減少し、D-ESM8群では18.6%に回復した。 Proteobacteriaは、CON群での0.9%から、DSS群では40.2%に増加し、D-ESM8群では8.0%に回復した。
次に、α多様性、β多様性の2つの分類を評価した。α多様性解析により、DSS群のマウスは3つの群のうちで細菌種の豊富さが最も低かった(図2)。
ヒトにおける炎症性腸疾患やマウスにおけるDSS誘発大腸炎を含む疾病状態に相関して、腸内の細菌種が減少することから、この結果は予想どおりであったが、意外なことに、卵殻膜摂取により細菌種の豊富さはCON群と同程度にまで回復した。
短鎖脂肪酸(SCFA)のような腸内細菌の代謝産物は大腸細胞の第一エネルギー源であり、宿主の遺伝子発現に直接影響を及ぼすことが考えられるので、SCFA産生菌の存在を評価した(図3の下段)。炎症性腸疾患で減少することが分かっているRuminococcaceae科やPorphyromonadaceae科などのSCFA産生菌がDSS群では減少していたが、卵殻膜摂取により、これらは改善した。
上記(4)の結果から、卵殻膜成分含有微粉末の摂取により、腸内細菌の多様性を増加させるだけでなく、大腸菌のような病原性細菌の絶対数を減少させ、セグメント化された糸状菌の異常繁殖を抑制することが示された。
このように、卵殻膜含有微粉末の摂取により、腸内菌共生バランス失調症、腸内毒素症を改善し、腸内フローラを改善することが示された。
卵殻膜800メッシュ微粉末と加水分解卵殻膜粉末のそれぞれを、1日1回、17日間マウスに経口摂取させて、サプリメント経口摂取実験を行った。加水分解卵殻膜粉末としてpHが3~6である加水分解卵殻膜粉末(特許文献3)を用いた。
各マウスから背部皮膚および肝臓サンプルを採取し、液体窒素中で粉砕した。全皮膚組織または全肝臓組織のホモジナイス後、総RNAを単離し、商品名「Takara PrimeScript RT reagent kit」を用いてcDNA合成を行った。リアルタイムPCR法は商品名「SYBR Premix Ex TaqTM II(Takara) on Thermal Cycler Dice Real Time System」(Takara)を用いて行った。プライマーとしてCol3a1(III型コラーゲン)をコードする遺伝子の増幅用に設計されたプライマーを用いた。内部標準として、ハウスキーピング遺伝子であるグリセルアルデヒド-3-ホスフェートデヒドロゲナーゼ(GAPDH)mRNAを同様に増幅した。PCRサイクルは、最初の変性を95℃で30秒、40サイクル(95℃で5秒の変性、60℃で1分のアニーリングおよび伸長反応)行った。
経口で加水分解卵殻膜粉末を摂取したマウスの背部皮膚において、III型コラーゲンをコードする遺伝子の発現が量依存的に上昇する(p=0.08)ことが示された。経口で卵殻膜800メッシュ微粉末を摂取したマウスよりも効果的に、III型コラーゲンをコードする遺伝子の発現を上昇させた。
実施例2で使用した卵殻膜800メッシュ微粉末と加水分解卵殻膜粉末を、それぞれ20.0重量部、商品名「ワキシa」(日食株式会社製)10.0重量部、商品名「パインファイバー」(松谷化学株式会社製)20.0重量部、乳糖(メグレ社製)25.9重量部、卵殻カルシウム 商品名「カルホープ」(キユーピー株式会社製)10.0重量部、β-カロチン5.0重量部、ビタミンB2 0.05重量部、ビタミンE0.05重量部、およびナイアシン2.0重量部を、V型混合機を用いて混合することにより、原料混合物を調製した。この原料混合物93重量部に対して、エチルアルコール15重量部を混合し、得られた混合物を湿式造粒装置を用いて造粒してから、温度50℃で約16時間乾燥して、打錠用の顆粒を製造した。
そして、加水分解卵殻膜成分と併用すれば、卵殻膜含有微粉末の有する腸内フローラ改善機能およびIII型コラーゲンの生成促進機能と、加水分解卵殻膜成分の有するIII型コラーゲンの生成促進機能とが相乗的に作用して、血管、肺、肝臓、皮膚等におけるIII型コラーゲンの生成の促進と、腸内フローラの改善が図られ、美肌効果や老化防止効果が増強され、健康状態を改善および/または良好に維持することができる組成物となる。この組成物は、食品添加剤、飲食品、サプリメント、可食性美容剤、医薬品等の様々な用途、形態で利用することができ、日常的に簡単に摂取することができる。
Claims (9)
- 吸収されずに腸内に残る成分がある卵殻膜含有粉末を有効成分として含む組成物であって、該組成物が食品添加剤、飲食品、またはサプリメントであることを特徴とする、腸内細菌の多様性増加、かつ、病原性細菌数の減少のための組成物。
- 卵殻膜含有粉末が、体積平均粒子径が6μm以下、または体積最大粒子径が20μm以下の卵殻膜含有微粉末である、請求項1に記載の組成物。
- さらに加水分解卵殻膜成分を含む、請求項1または2に記載の組成物。
- 加水分解卵殻膜成分が加水分解卵殻膜粉末である、請求項3に記載の組成物。
- 卵殻膜含有微粉末10~90重量%および加水分解卵殻膜粉末90~10重量%を含んでなる、請求項4に記載の組成物。
- III型コラーゲン生成促進のための組成物でもある、請求項3ないし5のいずれかに記載の組成物。
- 経口投与される製剤である、請求項1ないし6のいずれかに記載の組成物。
- 製剤が錠剤である、請求項7に記載の組成物。
- 卵殻膜含有粉末と加水分解卵殻膜粉末の合計の一日摂取量が10~48,000mgである、請求項3ないし8のいずれかに記載の組成物。
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