JP7075575B2 - 脂質代謝改善用又は肝臓脂質蓄積抑制用の食品組成物 - Google Patents
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Description
項2.前記柑橘類が、河内晩柑、温州みかん、ポンカン、清見、不知火、伊予柑、オレンジ、レモン、ライム、柚子、甘夏、八朔、文旦、グレープフルーツ、甘平、及び愛媛果試28号からなる群から選択される少なくとも1種である、項1に記載の食品組成物。
<実験方法>
・実験飼料
(1)河内晩柑果皮(ミキサー処理)
冷凍した河内晩柑果皮を解凍後、約1.5 cm幅の短冊状に切り、10分間沸騰水中でブランチングを実施した。果皮重量の50%の水を添加し、0.1%になるようビタミンCを添加後、フッドプロセッサーによりミキサー処理を行い、捏ね機を用いてよく混合し、果皮繊維群の飼料原料とした。
以下のディスクミル処理条件で(1)のミキサー処理後の試料をナノファイバー化した。1回目は一律に水分量95%でスタートしたが、以降は粘度などの感触を確認しつつ水を添加し、計3回ディスクミル処理を行い果皮ナノファイバー群の飼料原料とした。なお、ナノファイバー化していることの確認はFE-SEMによって行った(図1)。
使用装置:増幸(株)社製、スーパーマスコロイダー(型番:MKCA6-2)
使用したディスク型:GC6-120
回転数:1800 rpm
クリアランス条件:1回目180μm、2回目150μm、3回目150μm
※クラアランスの設定方法は、上下ディスクがすれすれで接触した位置で目盛ダイアルを3に合わせ、この位置をクリアランス300μmと定義した。その位置からさらに目盛ダイアルを狭め、短い目盛を10μmとしてクリアランスの数値とした。
(i) 蒸留水で約1000倍希釈(固形分0.005%程度)した河内晩柑果皮ナノファイバーを0.1μmろ紙(ADVANTEC H010A025A)を用いてろ過した。
(ii) ろ過後、エタノールでろ紙を洗い、エタノールで満たしたシャーレに移し、さらにエタノールを捨て、シャーレを再度エタノールで満たした。
(iii) シャーレのエタノールを捨て、t-ブチルアルコールに置換する操作を5回実施した。
(iv) t-ブチルアルコール置換後、冷蔵庫に入れ凍結させた。
(v) 凍結後、シャーレを温め、ろ紙をメスで5 mm四方にカットし凍結乾燥用カップに移し、凍結乾燥を行った。
(vi) 凍結乾燥後のろ紙をSEM用のプレートに貼り、プレートごとオスミウム蒸着し、観察用試料とした。
Sprague-Dawley (SD系)ラット(日本SLC株式会社)、雄(4週齢)を32匹搬入し、室温22±1℃、12時間の明暗サイクル(明期3:00-15:00)において、ステンレスケージ内で個別飼育した。実験動物搬入後、5日間飼育環境下でAIN-76に基づく無繊維飼料を与え、環境に馴化させた。その後、AIN-76に基づく無繊維飼料を与える群(コントロール群)、ろ紙粉末を3質量%添加した飼料を与える群(ろ紙粉末セルロース群)、河内晩柑果皮を飼料中の繊維含量が3質量%になるように添加した飼料を与える群(果皮繊維群)、河内晩柑果皮ナノファイバーを3質量%添加した飼料を与える群(果皮NF群)の4群に分け(n=8)、14日間本飼育を行った。飼料は1000 gに対して600 mLの脱イオン水を加えて捏ね、これを固めたものを与えた。飼料及び飲料水は自由摂取させ、体重及び飼料摂取量は毎日測定した。
(1) 血清脂質濃度測定
血清総コレステロール、中性脂肪(TG)及びリン脂質(PL)濃度は、それぞれ酵素法に基づく市販のキット(コレステロールEテストワコー、TG-Eテストワコー、PL-Cテストワコー:和光純薬工業株式会社)を用いて測定した。
肝臓中の脂質抽出はFolch et al.の方法に従い行った。肝臓約1 gに15 mLのクロロホルム及びメタノールの混合液(クロロホルム:メタノール=2:1(v/v))で氷冷下、2分30秒間ホモジナイザーでホモジネートした後、ろ過し、脂質抽出液にクロロホルム及びメタノールの混合液を加え25 mLに定容し、0.37 %塩化カリウム水溶液4 mLを加え、一晩静置した。その後、水層を除去し、クロロホルム、メタノール及び水の混合液(クロロホルム:メタノール:水=3:48:47(v/v/v)) 3 mLを静かに加え、数回洗い込み、予め恒量したビーカー(W1)に移した。ホットプレート上で溶媒を除去した後に、105℃に合わせたオーブンに一晩入れて乾燥させた重量(g)を測定した(W2)。
肝臓1 gあたりの脂質重量は以下の式より算出した。
脂質重量(g/g Liver)=(W2-W1)/サンプル重量(g)
また、肝臓総コレステロール及び中性脂肪量を分析するために、肝臓脂質抽出液5 mLを分析まで-50 ℃で保存した。
肝臓総脂質測定の際のクロロホルム:メタノール抽出液400μLを試験管に採取し、遠心エバポレーターで蒸発乾固させた。これに10%トリトンX-100含有2-プロパノールを200μL加え、シリコン栓をしてボルテックスで十分に攪拌した。乾固物が完全に溶解しているかを確認した後に、肝臓総コレステロール、TG及びPL量は、上記と同じキットを用いて測定した。
解剖前3日間採取したものを凍結乾燥した後、重量を測定した。
糞中の脂質抽出もFolch et al.の方法に従い行った。凍結乾燥後、重量を測定した後に粉砕した。糞約0.5 gにクロロホルム及びメタノールの混合液(クロロホルム:メタノール=2:1(v/v))を5 mL加え、十分に撹拌し、室温で1晩放置した。翌日、再び撹拌し、更に5分間超音波で撹拌して、スピンダウンした。上澄みをろ過し、沈殿にクロロホルム及びメタノールの混合液を3 mL加える操作を3回繰り返した。その後、20 mLに定容し、0.37%塩化カリウム水溶液4 mLを加え、一晩静置した。その後、水層を除去し、クロロホルム、メタノール及び水の混合液(クロロホルム:メタノール:水=3:48:47(v/v/v)) 3 mLを静かに加え、数回洗い込み、予め恒量したビーカー(W1)に移した。ホットプレート上で溶媒を除去した後に、105℃に合わせたオーブンに一晩入れて乾燥させた重量(g)を測定した(W2)。
糞重量1 gあたりの脂質重量は以下の式より算出した。
脂質重量(g/g feces)=(W2-W1)/サンプル重量(g)
糞重量を測定した後に粉砕し、0.05 gをスクリューキャップ付試験管に採取した。これにクロロホルム:メタノール=1:1溶液を5 mL加え、60℃の恒温槽で60時間抽出した後、Sheltawy and Losowskyらの方法に従って測定した。
実験結果は各群の平均値±標準誤差で表した(n=8)。各データの統計処理はt-検定法を用いて行い、P<0.05を有意とし、P≦0.10を傾向とした。
(1) 体重増加量・飼料摂取量・飼料効率
結果を表2に示す。体重増加量、飼料摂取量、飼料効率は、いずれの群間でも有意な差はなかった。
結果を表3に示す。内臓脂肪組織重量と肝臓重量は、いずれの群間でも有意な差はなかった。
結果を表4に示す。本飼育開始11日目の尾静脈より得た血液において、血清総コレステロール濃度と血清TG濃度は、いずれの群間でも有意な差はなかった。14日目に断頭採血により得た血液では、血清総コレステロール濃度において有意な差はなかったが、血清TG濃度においてコントロール群と比較して果皮NF群で減少傾向が見られた。
結果を表5及び図2に示す。肝臓総脂質量は、コントロール群と比較して果皮繊維群、果皮NF群で有意に減少した。肝臓総コレステロール量は、コントロール群と比較して果皮繊維群で減少傾向が見られ、果皮NF群で有意に減少した。肝臓トリグリセリド量は、コントロール群と比較して果皮繊維群及び果皮NF群で有意に減少していた。肝臓PL量は、コントロール群と比較して他の群で有意な差はなかった。
結果を表6に示す。糞重量と糞中総脂質量において、コントロール群に対してろ紙粉末セルロース群、果皮繊維群で有意に増加した。糞中胆汁酸量において、コントロール群と比較してろ紙粉末セルロース群、果皮繊維群及び果皮NF群で有意に増加した。
<実験方法>
以下の表7に示す実験飼料を使用した以外は試験例1と同様の実験を行った。
肝臓脂質量に関する結果を図3に示す。肝臓トリグリセリド量は、コントロール群と比較して3種の果皮繊維群で有意に減少していた。なお、体重増加量、飼料摂取量、肝臓重量、及び白色脂肪組織重量は、コントロール群と他の群において有意な差は無かった。
Claims (2)
- 柑橘類の果皮のナノファイバーを有効成分として含有する脂質代謝改善用又は肝臓脂質蓄積抑制用の食品組成物。
- 前記柑橘類が、河内晩柑、温州みかん、ポンカン、清見、不知火、伊予柑、オレンジ、レモン、ライム、柚子、甘夏、八朔、文旦、グレープフルーツ、甘平、及び愛媛果試28号からなる群から選択される少なくとも1種である、請求項1に記載の食品組成物。
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日本食品科学工学会誌,2004年,51(3),pp.161-166 |
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