JP7066641B2 - 高αリノレン酸亜麻 - Google Patents
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Description
本出願は、先に出願された米国特許仮出願第61/300,364号(2016年2月26日出願)に対する優先権を主張するものであり、本願はその全体が本明細書において参照により援用されている。
プライマー対の配列番号:1および配列番号:2によって定義された単純配列反復パターンは、約231塩基対に等しいかまたはそれを上回る;
プライマー対の配列番号:2および配列番号:4によって定義された単純配列反復パターンは、約197塩基対に等しいかまたはそれを上回る;
プライマー対の配列番号:9および配列番号:10によって定義された単純配列反復パターンは、約371塩基対に等しい。
別の好ましい実施形態は、第1の実施形態とほぼ同じであるが、ただしプライマー対の配列番号:13および配列番号:14によって定義された単純配列反復パターンは約305塩基対を上回る。
「高リノレン酸リンシード油」、「高リノレン酸亜麻の種子油」および「高αリノレン酸亜麻(リンシード)油という用語は、本明細書中で同義に用いられており、例えば非改質油または天然油のような油であって、すなわち亜麻の種子からの抽出後にαリノレン酸含量を増加させるように化学的、酵素的もしくは他の方法で改変されておらず、総脂肪酸中にαリノレン酸を少なくとも65%、あるいはαリノレン酸を65~95%、αリノレン酸を65~94%、αリノレン酸を65~93%、αリノレン酸を65~92%、αリノレン酸を65~91%、αリノレン酸を65~90%、αリノレン酸を65~89%、αリノレン酸を65~88%、αリノレン酸を65~87%、αリノレン酸を65~86%、αリノレン酸を65~85%、αリノレン酸を65~84%、αリノレン酸を65~83%、αリノレン酸を65~82%、αリノレン酸を65~81%、αリノレン酸を65~80%、αリノレン酸を65~79%、αリノレン酸を65~78%、αリノレン酸を65~77%、αリノレン酸を65~76%、αリノレン酸を65~75%、αリノレン酸を65~74%、αリノレン酸を65~73%、αリノレン酸を65~72%、αリノレン酸を65~71%、αリノレン酸を65~70%、αリノレン酸を65~69%、αリノレン酸を65~68%、αリノレン酸を65~67%、αリノレン酸を65~66%、αリノレン酸を67~95%、αリノレン酸を67~94%、αリノレン酸を67~93%、αリノレン酸を67~92%、αリノレン酸を67~91%、αリノレン酸を67~90%、αリノレン酸を67~89%、αリノレン酸を67~88%、αリノレン酸を67~87%、αリノレン酸を67~86%、αリノレン酸を67~85%、αリノレン酸を67~84%、αリノレン酸を67~83%、αリノレン酸を67~82%、αリノレン酸を67~81%、αリノレン酸を67~80%、αリノレン酸を67~79%、αリノレン酸を67~78%、αリノレン酸を67~77%、αリノレン酸を67~76%、αリノレン酸を67~75%、αリノレン酸を67~74%、αリノレン酸を67~73%、αリノレン酸を67~72%、αリノレン酸を67~71%、αリノレン酸を67~70%、αリノレン酸を67~69%、αリノレン酸を67~68%、αリノレン酸を70~95%、αリノレン酸を70~94%、αリノレン酸を70~93%、αリノレン酸を70~92%、αリノレン酸を70~91%、αリノレン酸を70~90%、αリノレン酸を70~89%、αリノレン酸を70~88%、αリノレン酸を70~87%、αリノレン酸を70~86%、αリノレン酸を70~85%、αリノレン酸を70~84%、αリノレン酸を70~83%、αリノレン酸を70~82%、αリノレン酸を70~81%、αリノレン酸を70~80%、αリノレン酸を70~79%、αリノレン酸を70~78%、αリノレン酸を70~77%、αリノレン酸を70~76%、αリノレン酸を70~75%、αリノレン酸を70~74%、αリノレン酸を70~73%、αリノレン酸を70~72%、またはαリノレン酸を70~71%を有する亜麻の種子由来の油を指す。
亜麻は、染色体数2n=30の自己受粉二倍体種であり、亜麻の栽培品種はホモ接合体である。繊維亜麻における亜麻ゲノムは完全に特徴付けされている。従来の植物育種法を用いて開発されたのが、高αリノレン酸亜麻である。そのような方法は、連続的な世代にまたがって近親交配することを含むものであり、当業者に周知となっている。高αリノレン酸亜麻は、αリノレン酸含有率が65%、70%、75%またはそれを上回る油を含む種子を生産する亜麻栽培品種として定義されている。図1に、高αリノレン酸亜麻の脂肪酸プロファイルおよび特性を示す。比較の目的に、様々な栽培品種の全油分含量/脂肪酸プロファイル/αリノレン酸含量の例を、図1に示す。亜麻の様々な亜種および栽培品種は、様々なレベルのALA、および様々な脂肪酸プロファイルを有する油を含有する種子を産生する。成熟種子中のALAのレベルは、二重結合を触媒する機能を有するポリペプチドまたはタンパク質を産生するアミノ酸配列をコードするFAD3a遺伝子およびFAD3b遺伝子の活性に強く影響される。そのうえ、高αリノレン酸亜麻のゲノムは、単純配列反復領域の一意的なパターンによって特徴付けられる。
FAD3遺伝子は、リノール酸(C18:2)からリノレン酸(C18:3)への不飽和化に関与する酵素である小胞体ω3/Δ15デサチュラーゼをコードする。亜麻植物において2通りのFAD3遺伝子(FAD3AおよびFAD3B)は、特にリノレン含量を制御することが報告されている。FAD3AおよびFAD3Bは、約95%の同一性で、高度の保存性を示す。亜麻の低リノレン酸栽培品種において、これらの遺伝子は不活性であることが示されている。
SSR(単純配列反復)は、典型的には2~7ヌクレオチドの反復配列要素を含むゲノム遺伝子座である。反復単位である各配列要素は、SSR内で少なくとも一度繰り返される。亜麻のSSR配列の例としては、限定されないが、(AAT)5x、(TC)6x、(TA)8x、(TTA)5x、(GAG)6x、(TAT)5x、(TTC)6x、(CTC)5x、(TA)6x、(AT)10xが挙げられる。
M6552栽培品種の亜麻は、カナダのマニトバ州モーデンのMorden Research Station, Agriculture and Agri-Food Canadaで開発された。M6552亜麻仁油で天然のものは、トリアシルグリセリド形態の脂肪酸の混合物から構成される。M6552亜麻仁中の脂肪酸残基は、70±3%のαリノレン酸(ALA)、10±2%のリノール酸(LA)、12±2%のオレイン酸、4±2%のステアリン酸、および4±2%パルミチン酸を主成分とする。栽培品種M6552亜麻仁油は、図10の表中では、従来の亜麻仁油と比較対照して示してあり、また、図11の表中では、キャノーラ油、コーン油、オリーブ油、ピーナッツ油、ベニバナ油、ダイズ油、ヒマワリ油およびクルミ油のような他の植物油と比較対照されている。M6552亜麻仁油は加工処理され、液体油として調製される。M6552亜麻仁油は、主としてトリアシルグリセリド形態である脂肪酸の混合物である。脂肪酸は、αリノレン酸、リノール酸、オレイン酸、ステアリン酸およびパルミチン酸を主成分とする。存在する脂肪酸中、αリノレン酸は68~73%、リノール酸は9~12%、オレイン酸は9~14%、ステアリン酸は2~6%、パルミチン酸は3~6%を占める。少量(1~2%)存在する成分としては、ほかにも、ステロール、トコフェロール、色素および他の微量成分が挙げられる。M6552亜麻仁油は、脂肪酸の混合物である。主要脂肪酸成分であるαリノレン酸、リノール酸、オレイン酸、ステアリン酸およびパルミチン酸の分子式は本明細書中に記載されており、図12に記載されている。
本出願は、例えば以下の発明を提供する。
[1] 70重量%超のαリノレン酸と10重量%超のリノール酸と10重量%超のオレイン酸との組成物を有する高αリノレン酸亜麻油であって、高αリノレン酸亜麻の種子のコールドプレスを含む、高αリノレン酸亜麻油。
[2] 前記高αリノレン酸亜麻の種子のコールドプレスからなる、[1]に記載の高αリノレン酸亜麻油。
[3] 前記高αリノレン酸亜麻の種子が、308bpのLU17 SSRを含むアマ(Linum usitatissium)植物からの種子である、[1]に記載の高αリノレン酸亜麻油。
[4] 前記アマ植物が、図3の「高α」列に描かれているSSRのパターン全体を含む、[3]に記載の高αリノレン酸亜麻油。
[5] 前記高αリノレン酸亜麻の種子が、配列番号:35および配列番号:41に記載されている改変遺伝子を有し、配列番号:36および配列番号:42に記載されているアミノ酸配列を発現する高αリノレン酸亜麻植物からの種子である、[1]に記載の高αリノレン酸亜麻油。
[6] 前記高αリノレン酸亜麻の種子が、BeFad3A.proまたはNmFad3A.proと比較した場合に、図8に示すNoFad3A.proの突然変異のうちの少なくとも1つを含むFAD3bタンパク質を発現する高αリノレン酸亜麻植物からの種子である、[1]に記載の高αリノレン酸亜麻油。
[7] 前記FAD3bタンパク質がリノール脂肪酸における二重結合の形成を触媒する、[6]に記載の高αリノレン酸亜麻油。
[8] 前記高αリノレン酸亜麻の種子が、BeFad3B.proまたはNmFad3B.proと比較した場合に、図9に示すNoFad3B.proの突然変異のうちの少なくとも1つを含むFAD3bタンパク質を発現する高αリノレン酸亜麻植物からの種子である、[1]に記載の高αリノレン酸亜麻油。
[9] 前記FAD3bタンパク質がリノール脂肪酸における二重結合の形成を触媒する、[8]に記載の高αリノレン酸亜麻油。
[10] 前記高αリノレン酸亜麻の種子が、配列番号1および配列番号:2、配列番号:3および配列番号:4、配列番号:5および配列番号:6、配列番号:7および配列番号:8、配列番号:9および配列番号:10、配列番号:11および配列番号:12、配列番号:13および配列番号:14、配列番号:15および配列番号:16、配列番号:17および配列番号:18、配列番号:19および配列番号:20、配列番号:21および配列番号:22、配列番号:23および配列番号:24、配列番号:25および配列番号:26、配列番号:27および配列番号:28、配列番号:29および配列番号:30、配列番号:31および配列番号:32、配列番号:33および配列番号:34のプライマー対によって規定された遺伝子座における栽培品種M6552の単純配列反復パターンの塩基対長に対して85%の等価性を有する単純配列反復パターンを含むゲノムを特徴とする高αリノレン酸亜麻植物からの種子である、[1]に記載の高αリノレン酸亜麻油。
[11] 少なくとも70重量%のαリノレン酸と少なくとも10重量%のリノール酸と少なくとも10重量%のオレイン酸とからなる組成物を有する油を含む、高αリノレン酸亜麻の種子。
[12] 前記種子が、308bpのLU17 SSRを含むアマ(Linum usitatissium)植物からのものである、[11]に記載の高αリノレン酸亜麻の種子。
[13] 前記アマ植物が、図3の「高α」列に描かれているSSRのパターン全体を含む、[11]に記載の高αリノレン酸亜麻の種子。
[14] 前記種子が、配列番号:35および配列番号:41に記載されている改変遺伝子を有し、且つ配列番号:36および配列番号:42に記載されているアミノ酸配列を発現する高αリノレン酸亜麻植物からのものである、[11]に記載の高αリノレン酸亜麻の種子。
[15] 前記種子が、BeFad3A.proまたはNmFad3A.proと比較した場合に、図8に示すNoFad3A.proの突然変異の少なくとも1つを含むFAD3bタンパク質を発現する高αリノレン酸亜麻植物からのものである、[11]に記載の高αリノレン酸亜麻の種子。
[16] 前記FAD3bタンパク質が、リノール脂肪酸における二重結合の形成を触媒する、[15]に記載の高αリノレン酸亜麻の種子。
[17] 前記種子が、BeFad3B.proまたはNmFad3B.proと比較した場合に、図9に示すNoFad3B.proの突然変異のうちの少なくとも1つを含むFAD3bタンパク質を発現する高αリノレン酸亜麻植物からのものである、[11]に記載の高αリノレン酸亜麻の種子。
[18] 前記FAD3bタンパク質が、リノール脂肪酸における二重結合の形成を触媒する、[17]に記載の高αリノレン酸亜麻の種子。
Claims (15)
- 高αリノレン酸亜麻の1栽培品種の種子のコールドプレス物からなり、70重量%超のαリノレン酸と10重量%超のリノール酸と10重量%超のオレイン酸との組成を有する、高αリノレン酸亜麻油。
- 70重量%超のαリノレン酸と10重量%超のリノール酸と10重量%超のオレイン酸との組成を有する高αリノレン酸亜麻油であって、高αリノレン酸亜麻の種子のコールドプレス物を含み、前記高αリノレン酸亜麻の種子が、308bpのLU17 SSRを含むアマ(Linum usitatissium)植物からの種子である、高αリノレン酸亜麻油。
- 前記アマ植物が、図3の「高α」列に描かれているSSRのパターン全体を含む、請求項2に記載の高αリノレン酸亜麻油。
- 70重量%超のαリノレン酸と10重量%超のリノール酸と10重量%超のオレイン酸との組成を有する高αリノレン酸亜麻油であって、高αリノレン酸亜麻の種子のコールドプレス物を含み、前記高αリノレン酸亜麻の種子が、配列番号:35および配列番号:41に記載されている改変遺伝子を有し、配列番号:36および配列番号:42に記載されているアミノ酸配列を発現する高αリノレン酸亜麻植物からの種子である、高αリノレン酸亜麻油。
- 70重量%超のαリノレン酸と10重量%超のリノール酸と10重量%超のオレイン酸との組成を有する高αリノレン酸亜麻油であって、高αリノレン酸亜麻の種子のコールドプレス物を含み、前記高αリノレン酸亜麻の種子が、配列番号:42に記載されているアミノ酸配列、または配列番号:42に記載されているアミノ酸配列と99%以上の同一性を有するアミノ酸配列を有するFAD3bタンパク質を発現する、高αリノレン酸亜麻油。
- 70重量%超のαリノレン酸と10重量%超のリノール酸と10重量%超のオレイン酸との組成を有する高αリノレン酸亜麻油であって、高αリノレン酸亜麻の種子のコールドプレス物を含み、前記高αリノレン酸亜麻の種子が、BeFad3B.proまたはNmFad3B.proと比較した場合に、図9に示すNoFad3B.proの突然変異のうちの少なくとも1つを含むFAD3bタンパク質を発現する高αリノレン酸亜麻植物からの種子である、高αリノレン酸亜麻油。
- 前記FAD3bタンパク質がリノール脂肪酸における二重結合の形成を触媒する、請求項6に記載の高αリノレン酸亜麻油。
- 70重量%超のαリノレン酸と10重量%超のリノール酸と10重量%超のオレイン酸との組成を有する高αリノレン酸亜麻油であって、高αリノレン酸亜麻の種子のコールドプレス物を含み、前記高αリノレン酸亜麻の種子が、配列番号1および配列番号:2、配列番号:3および配列番号:4、配列番号:5および配列番号:6、配列番号:7および配列番号:8、配列番号:9および配列番号:10、配列番号:11および配列番号:12、配列番号:13および配列番号:14、配列番号:15および配列番号:16、配列番号:17および配列番号:18、配列番号:19および配列番号:20、配列番号:21および配列番号:22、配列番号:23および配列番号:24、配列番号:25および配列番号:26、配列番号:27および配列番号:28、配列番号:29および配列番号:30、配列番号:31および配列番号:32、配列番号:33および配列番号:34のプライマー対によって規定された遺伝子座における栽培品種M6552の単純配列反復パターンの塩基対長に対して85%の等価性を有する単純配列反復パターンを含むゲノムを特徴とする高αリノレン酸亜麻植物からの種子である、高αリノレン酸亜麻油。
- 少なくとも70重量%のαリノレン酸と少なくとも10重量%のリノール酸と少なくとも10重量%のオレイン酸とからなる組成を有する油を含む、高αリノレン酸亜麻の1栽培品種の種子。
- 少なくとも70重量%のαリノレン酸と少なくとも10重量%のリノール酸と少なくとも10重量%のオレイン酸とからなる組成を有する油を含む、高αリノレン酸亜麻の種子であって、前記種子が、308bpのLU17 SSRを含むアマ(Linum usitatissium)植物からのものである、高αリノレン酸亜麻の種子。
- 少なくとも70重量%のαリノレン酸と少なくとも10重量%のリノール酸と少なくとも10重量%のオレイン酸とからなる組成を有する油を含む、高αリノレン酸亜麻の種子であって、前記アマ植物が、図3の「高α」列に描かれているSSRのパターン全体を含む、高αリノレン酸亜麻の種子。
- 少なくとも70重量%のαリノレン酸と少なくとも10重量%のリノール酸と少なくとも10重量%のオレイン酸とからなる組成を有する油を含む、高αリノレン酸亜麻の種子であって、前記種子が、配列番号:35および配列番号:41に記載されている改変遺伝子を有し、且つ配列番号:36および配列番号:42に記載されているアミノ酸配列を発現する高αリノレン酸亜麻植物からのものである、高αリノレン酸亜麻の種子。
- 少なくとも70重量%のαリノレン酸と少なくとも10重量%のリノール酸と少なくとも10重量%のオレイン酸とからなる組成を有する油を含む、高αリノレン酸亜麻の種子であって、前記種子が、配列番号:42に記載されているアミノ酸配列、または配列番号:42に記載されているアミノ酸配列と99%以上の同一性を有するアミノ酸配列を有するFAD3bタンパク質を発現する高αリノレン酸亜麻植物からのものである、高αリノレン酸亜麻の種子。
- 少なくとも70重量%のαリノレン酸と少なくとも10重量%のリノール酸と少なくとも10重量%のオレイン酸とからなる組成物を有する油を含む、高αリノレン酸亜麻の種子であって、前記種子が、BeFad3B.proまたはNmFad3B.proと比較した場合に、図9に示すNoFad3B.proの突然変異のうちの少なくとも1つを含むFAD3bタンパク質を発現する高αリノレン酸亜麻植物からのものである、高αリノレン酸亜麻の種子。
- 前記FAD3bタンパク質が、リノール脂肪酸における二重結合の形成を触媒する、請求項14に記載の高αリノレン酸亜麻の種子。
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