JP7065862B2 - 癌の再発および進行のモニタリング - Google Patents
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Description
[1]対象において、一定期間の処置後の癌の再発を含む腫瘍または他の癌の存在の指標として好中球機能レベルを評価する方法であって、
(a)上記対象から得た好中球を含む検査用サンプルと、好中球におけるスーパーオキシド産生を刺激することが可能な誘発物質を、そのような刺激に適切な条件下で接触させるステップ、
(b)一定期間後、上記検査用サンプル中の基礎値を超えたスーパーオキシド産生の増加を決定して、第1の結果を得るステップ、および
(c)上記第1の結果を第2の比較用結果と比較するステップ
を含み、これにより上記対象における、好中球機能に影響を及ぼすことが可能な腫瘍もしくは他の癌が存在すること、または腫瘍もしくは他の癌が存在しないことを決定する、方法。
[2]一定期間の癌処置後に、同じ対象に対してステップ(a)~(c)を繰り返すことをさらに含む上記[1]に記載の方法であって、ステップ(c)において、上記検査用サンプル中の基礎値を超えたスーパーオキシド産生の増加を第2の対照結果と比較し、これにより対照結果と比較した上記検査用サンプル中の誘発されたスーパーオキシド産生増加の減少が、好中球機能レベルに対する上記処置の抑制効果を示す、方法。
[3]癌の再発と関係した生理学的状態の変化の指標として、癌処置後の対象の好中球機能レベルを評価するための上記[1]に記載の方法であって、上記検査用サンプル中の基礎値を超えたスーパーオキシド産生の増加を癌処置後のより早い時点でかつ上記対象の癌が寛解していると考えられる期間に採取した第2の比較用サンプル中の基礎値を超えたスーパーオキシド産生の増加と比較し、
上記第2の比較用サンプルと比較した上記検査用サンプル中の誘発されたスーパーオキシド産生の増加が癌再発の指標となる、方法。
[4]上記検査用サンプルが全血サンプルである、上記[1]から[3]のいずれか一項に記載の方法。
[5]上記対象がヒトである、上記[1]から[4]のいずれか一項に記載の方法。
[6]疾患進行に基づいて癌患者をランク付けする方法であって、上記患者が処置後に寛解の可能性を含む特定の癌タイプの様々な進行度合いにあると予想される患者群であり、上記[1]に記載の方法を上記患者由来のサンプルに適用することを含み、ステップ(c)が、上記第1の結果を疾患進行を示す1つまたは複数の判断基準と相関させることにより各サンプルを1つのランクに割り当てることをさらに含む、方法。
[7]上記サンプルが全血サンプルである、上記[6]に記載の方法。
[8]上記1つまたは複数の判断基準が、1つまたは複数の腫瘍サイズ範囲、転移ありおよび転移なしから選択される、上記[6]または上記[7]に記載の方法。
[9]上記患者がヒト前立腺癌患者である、上記[6]から[8]のいずれか一項に記載の方法。
[10]転移癌を有する癌患者を特定することができる、上記[8]または上記[9]に記載の方法。
[11]癌を有することが疑われるもしくは分かっている対象、または癌が寛解したことがあら
かじめ分かっている対象の癌の状態を評価する方法であって、上記[1]に記載の方法を上記対象に適用し、上記方法は
(a)上記対象から得た好中球を含む検査用サンプルと、好中球におけるスーパーオキシド産生を刺激することが可能な誘発物質を、そのような刺激に適切な条件下で接触させるステップ、
(b)一定期間後、上記検査用サンプル中の基礎値を超えたスーパーオキシド産生の増加を決定して、第1の結果を得るステップ、および
(c)上記第1の結果を、癌の状態に対応する1つまたは複数の判断基準と相関する予め定められた閾値である第2の比較用結果と比較して、それにより癌の状態を決定するステップ
を含む、方法。
[12]上記検査用サンプルが全血サンプルである、上記[11]に記載の方法。
[13]上記1つまたは複数の判断基準が、腫瘍サイズ範囲、転移ありおよび転移なしから選択される、上記[11]または上記[12]に記載の方法。
[14]ヒトの前立腺癌状態を評価するための、上記[11]から[13]のいずれか一項に記載の方法。
[15]上記癌状態が転移に進展しているまたは転移なしである、上記[14]に記載の方法。
[16]好中球におけるスーパーオキシド産生を刺激することが可能な上記誘発物質が、ホルボールミリステートアセテート(PMA)、N-ホルミル-メチオニル-ロイシル-フェニルアラニン(fMLP 走化性ペプチド)、ザイモサン、リポ多糖またはアドレナリンである、上記[1]から[15]のいずれか一項に記載の方法。
[17]スーパーオキシド産生をルミノールまたはイソルミノールを用いて検出し、得られた化学発光を測定する、上記[1]から[16]のいずれか一項に記載の方法。
[18]好中球におけるスーパーオキシド産生を刺激することが可能な上記誘発物質がホルボールミリステートアセテート(PMA)であり、スーパーオキシド産生をルミノールを増幅剤として用いて検出し、得られた化学発光を測定する、上記[16]または上記[17]に記載の方法。
[19]化学発光の定量的な検出のための光子検出器、および結果を解析して癌のリスクまたは癌の状態と関連付けられた好中球機能レベルに関して警告を発するためのシステムを備えた上記[17]または上記[18]に記載の方法を実施するのに適したシステム。
[20]上記光子検出器が持ち運び可能なルミノメーターである、上記[12]に記載のシステム。
上記したように、本発明は、全血中の好中球、または好ましくは全白血球成分が、適切なインビトロの化学物質チャレンジに応答してスーパーオキシドを産生する能力を評価することによる。全血サンプルによるこのような定量された応答は、一般に白血球対処能力(LCC)スコアと呼ばれる。しかし、これは主として好中球がこのような外部刺激に対して活性酸素種(ROS)を産生するという能力により決定されるため、代わりに個体の好中球機能レベル(neutrophil functionality level)を参照してもよい。好中球機能レベルがより高い個体はより多くのスーパーオキシドを産生する可能性があることになり、生理学的に好中球機能がより高いということになる。
(a)前記対象から得た好中球を含む検査用サンプルと、好中球におけるスーパーオキシド産生を刺激することが可能な誘発物質を、そのような刺激に適切な条件下で接触させるステップ、
(b)一定期間後、前記検査用サンプル中の基礎値を超えたスーパーオキシド産生の増加を決定して、第1の結果を得るステップ、および
(c)前記第1の結果を第2の比較用結果と比較するステップ
を含み、これにより前記対象における、好中球機能に影響を及ぼすことが可能な腫瘍もしくは他の癌が存在すること、または腫瘍もしくは他の癌が存在しないことを決定する、方法を提供する。
(i)患者から得た好中球を含む検査用サンプル、好ましくは全血サンプルと、好中球におけるスーパーオキシド産生を刺激することが可能な誘発物質を、そのような刺激に適切な条件下で接触させるステップ、
(ii)一定期間後、前記検査用サンプル中の基礎値を超えたスーパーオキシド産生の増加を決定して、第1の結果を得るステップ、および
(iii)前記第1の結果を第2の対照結果と比較するステップ
これにより、対照結果と比較した前記検査用サンプル中にて誘発されたスーパーオキシド産生増加の減少が好中球機能レベルに対する処置の抑制効果を示す。
(a)前記対象から得た好中球を含む検査用サンプル、好ましくは全血サンプルと、好中球におけるスーパーオキシド産生を刺激することが可能な誘発物質を、そのような刺激に適切な条件下で接触させるステップ、
(b)一定期間後、前記検査用サンプル中の基礎値を超えたスーパーオキシド産生の増加を決定するステップ、および
(c)前記検査用サンプル中の基礎値を超えたスーパーオキシド産生の増加を第2の比較用サンプル中の基礎値を超えたスーパーオキシド産生の増加と同一時点および同一条件下で比較するステップであって、前記第2の比較用サンプルが癌処置後のより早い時点でかつ対象の癌が寛解していると考えられる期間に採取したサンプルである、ステップ
を含み、ここで、前記第2の比較用サンプルと比較した前記検査用サンプル中の誘発されたスーパーオキシド産生の増加が癌再発の指標となる、方法を提供する。
1.癌の攻撃性および再発の予測因子としての白血球検査。
2.治療の有効性の客観的マーカーとしての白血球検査。
3.治療のエンドポイントとしての白血球検査の使用。
4.(単に細胞を数えるまたは構造を調べる代わりに)細胞機能を最適化し、治療介入(例えば、化学療法セッション間および放射線療法セッション間の時間間隔)のバランスをとり加減するための白血球検査。
5.治療中の制御されたチェックポイントとしての白血球検査。
6.癌治療中のミクロ環境のセンサーとしての白血球検査。
7.癌罹患中の治療介入を最適化するための白血球検査。
・癌の早期発見に使用可能である。
・至適奏効を判断するための家庭でのモニターとして使用可能である
・ライフスタイル(食べ物、運動、リラクセーション法)を調整して、最適な応答(個人に合わせた最適な結果)を決定することが可能である。
・癌のオーダーメイド処置(個別化医療)の助けとすることが可能である。例えば、限定するわけではないが、別の治療を用いた従来の医療の最適化である。
・別の医学的アプローチを組み合わせる(例えば従来のアプローチと食事療法)ために使用可能である。
・癌のホリスティック処置(ライフスタイル、従来のまたは別の養生法)を組み合わせ、最適化することが可能である。
・家庭でのモニタリングを定期的に実施して、処置の有効性をモニターし、最適化し、かつ追跡することが可能である。
・寛解後の再発を早期警告するものとして機能することが可能である。
・簡単で、使用しやすい。10分で結果を得ることができ、低侵襲性である。
・プロトコル用の装置は実験室ベースではなく持ち運び可能であり、そのため費用を最小限にできる。
・臨床的に関連のある好中球機能の客観的な評価に基づいて、処置(従来の、代わりの、ライフスタイル)の統合を可能にするための最初の技術である。
・真に個別化した客観的な癌治療を容易なものとする。
(a)前記対象から得た好中球を含む検査用サンプル、好ましくは全血サンプルと、好中球におけるスーパーオキシド産生を刺激することが可能な誘発物質を、そのような刺激に適切な条件下で接触させるステップ、
(b)一定期間後、前記検査用サンプル中の基礎値を超えたスーパーオキシド産生の増加を決定して、第1の結果を得るステップ、および
(c)前記第1の結果を、癌の状態に対応する1つまたは複数の判断基準、例えばサイズ範囲および/または転移と関連した予め定められた閾値である第2の比較用結果と比較して、それにより癌の状態を決定するステップ
を含む、方法を提供する。
全血サンプル中の好中球機能レベルを評価するためのPMAチャレンジを使用するプロトコル例
バックグラウンドの血液の化学発光レベルを測定するため、全血10μlをシリコンの反射防止チューブ(anti-reflective tube)に移す。リン酸緩衝液で希釈した10-4Mのルミノール(5-アミノ-2,3-ジヒドロファラジン(dihydrophalazine)、Sigma)90μlを加える。その後、チューブを穏やかに振盪する。PMAチャレンジに応答して発生する化学発光を測定するため、10-3Mの濃度のPMA(Sigma)20μlを加える。各チューブについて、ルミノメーター内で5分毎に30秒間、合計30分間化学発光を測定してもよい。ルミノメーター内に入れていないときには、チューブを37.5℃で、例えばドライブロックヒーター内でインキュベートする。
LCCスコアを使用した前立腺癌患者の層別化
試験は地域の倫理委員会により承認され、ロンドンにあるNHS管轄の実習病院にて実施した。前立腺の根治放射線治療後、救済治療前に生化学的再発がみられた70人の男性を試験に採用した。試験に同意後、かつ全身のマルチパラメトリックMRI(WB-MRI)を実施する前に、指先穿刺による血液サンプル(10マイクロリットル)を各患者から3度ずつ得、LCCスコアリング用にOxford MediStressから市販されている凍結乾燥したPMA/ルミノール試薬組成物を用いて好中球機能レベルを分析した。これには、血液と凍結乾燥したPMA/ルミノール混合物を含有する試薬の緩衝溶液(100マイクロリットル)との混合を必要とした。ドライブロックヒーター内にて37.5℃で10分間インキュベート後、持ち運び可能なルミノメーター(3M Clean Trace(商標))を用いて測定した活性酸素種の産生に関してサンプルを評価した。各検査対象から、1セットのサンプル(3つ)を得た。
- 転移なし、再発の可能性は低い
- 転移なし、最大コア腫瘍長(MCCL)<4mm
- MCCLが4mm~10mmの間
- MCCL>10mm
- 転移あり
- データは、LCCスコアと疾患重症度の増加との間の強い相関関係を示す。
- LCCスコア>450の患者18人中17人が、MCCL>4または転移ありと同等の重大な疾患に罹患していた。
- 転移のある患者由来のサンプルと、癌なしまたは低グレードの癌の患者群(転移なし/再発なしもしくはMCCL<4)由来のサンプルとの間に、統計的に有意な差(t検定により)が示された。
Claims (7)
- 癌を有することが疑われるもしくは分かっている対象、または癌が寛解したことがあらかじめ分かっている対象の癌の状態を決定するための方法であって、前記方法は
(a)前記対象から得た検査用全血サンプルと、好中球におけるスーパーオキシド産生を刺激することが可能な誘発物質を、そのような刺激に適切な条件下で、前記サンプル中で接触させるステップ、
(b)一定期間後、前記検査用サンプル中の基礎値を超えたスーパーオキシド産生の増加を決定して、第1の結果を得るステップ、および
(c)前記第1の結果を、癌の状態に対応する1つまたは複数の基準と相関する予め定められた閾値である第2の比較用結果と比較するステップ
を含み、
前記1つまたは複数の基準が、腫瘍なし、腫瘍サイズ範囲、転移ありまたは転移なしから選択され、
好中球におけるスーパーオキシド産生を刺激することが可能な前記誘発物質が、ホルボールミリステートアセテート(PMA)であり、スーパーオキシド産生が、ルミノールを増幅剤として用いて検出され、得られた化学発光が測定され、
それにより、ステップ(a)の前記条件が、腫瘍のサイズまたは転移への進行に基づく癌進行のランク付けが基礎値を超えて増加した化学発光に関連付けられるようなものである、方法。 - ヒトの前立腺癌の状態を評価するための、請求項1に記載の方法。
- ヒトの乳癌の状態を評価するための、請求項1に記載の方法。
- 前記癌の状態が転移に進展しているまたは転移なしである、請求項2に記載の方法。
- 持ち運び可能なルミノメーターを用いて化学発光が測定される、請求項1から4のいずれか一項に記載の方法。
- 化学発光の定量的な検出のための光子検出器、および結果を解析して腫瘍なし、腫瘍サイズの範囲、転移ありまたは転移なしから選択される興味のある癌の状態と関連付けられた好中球機能レベルに関して警告を発するように構成されたシステムを備えた請求項1から5のいずれか一項に記載の方法を実施するのに適したシステム。
- 前記光子検出器が持ち運び可能なルミノメーターである、請求項6に記載のシステム。
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