JP7049389B2 - 上皮成長因子受容体に特異的に結合する抗体を有効成分として含む、癌の転移を抑制するための医薬組成物 - Google Patents

Description

技術分野
本発明は、上皮成長因子受容体に特異的に結合する抗体を有効成分として含む、癌の転移を抑制するための医薬組成物、および該組成物を用いる癌の転移を抑制する方法に関する。

背景技術
ある組織に癌が生じ、それが別の組織に移動し増殖する場合、それは転移と呼ばれる。転移が起こると、治療が効果的でないばかりではなく、再発の可能性も高まる。癌転移のプロセスは、遊走、接着、浸潤等のステップを含み、いずれか１つのステップを阻止すれば癌転移を阻止することができる。

上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）は、１７０ｋＤの１型膜タンパク質で、さまざまなタイプの腫瘍において過剰発現される。ＥＧＦＲは、リガンドであるＥＧＦ（上皮成長因子）およびＴＧＦ－α（腫瘍増殖因子－α）の結合により、腫瘍細胞の増殖を導くよう活性化されることが報告されている。したがって、ＥＧＦＲは、腫瘍増殖抑制のための標的として研究されている。

しかしながら、ＥＧＦＲを標的とすることができる抗体を癌転移抑制のために使用できるかどうかは判っていない。そこで本発明者は、ＥＧＦＲを標的とする抗体が胃癌細胞系の浸潤を抑制することを確認し、本発明に至った。

技術的課題
本発明の目的は、上皮成長因子受容体に特異的に結合する抗体を有効成分として含む、癌の転移を抑制するための医薬組成物、および該組成物を用いる癌の転移を抑制する方法を提供することである。

課題の解決手段
本発明の上記目的を達成するために、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）に特異的に結合する抗体を有効成分として含む、癌の転移を抑制するための医薬組成物において、抗体が、ａ）配列番号１、配列番号２および配列番号３のアミノ酸配列でそれぞれ表されるＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、配列番号４、配列番号５および配列番号６のアミノ酸配列でそれぞれ表されるＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域、重鎖定常領域、ならびに軽鎖定常領域、またはｂ）配列番号１、配列番号２および配列番号３のアミノ酸配列でそれぞれ表されるＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、配列番号９、配列番号５および配列番号６のアミノ酸配列でそれぞれ表されるＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域、重鎖定常領域、ならびに軽鎖定常領域を含む、組成物を提供する。

本発明はまた、本発明の組成物を投与することを含む、癌の転移を抑制する方法を提供する。
本発明はまた、癌の転移を抑制するための医薬の製造における本発明の組成物の使用を提供する。

発明の有利な効果
本発明の、癌の転移を抑制するための組成物、または癌の転移を抑制する方法は、ＥＧＦＲリガンドにより誘発されるさまざまな胃癌細胞系の遊走および浸潤を抑制するのに有効である。したがって、本発明の組成物または方法は、癌転移の抑制のために効果的に用いることができる。

図１は、ＮＣＩ－Ｎ８７細胞系に加えたＨＢ－ＥＧＦの濃度に依存する、細胞遊走の程度を示すグラフである。 図２は、ＮＣＩ－Ｎ８７細胞系に加えたＴＧＦ－αの濃度に依存する、細胞遊走の程度を示すグラフである。 図３は、ＮＣＩ－Ｎ８７細胞系に加えたＡＲＥＧの濃度に依存する、細胞遊走の程度を示すグラフである。 図４は、ＨＢ－ＥＧＦで細胞遊走を誘導したＮＣＩ－Ｎ８７細胞系に加えたＧＣ１１１８の濃度に依存する、細胞遊走の程度を、対照群と比較して示すグラフである。 図５は、ＴＧＦ－αで細胞遊走を誘導したＮＣＩ－Ｎ８７細胞系に加えたＧＣ１１１８の濃度に依存する、細胞遊走の程度を、対照群と比較して示すグラフである。 図６は、ＡＲＥＧで細胞遊走を誘導したＮＣＩ－Ｎ８７細胞系に加えたＧＣ１１１８の濃度に依存する、細胞遊走の程度を、対照群と比較して示すグラフである。 図７は、ＮＣＩ－Ｎ８７細胞系にさまざまなＥＧＦＲ抗体またはＨＥＲ２抗体を加えた場合の細胞遊走の程度を、対照群と比較して示すグラフである。 図８は、ＡＧＳ細胞系に加えたＨＢ－ＥＧＦ、ＴＧＦ－αまたはＡＲＥＧの濃度に依存する、細胞遊走の程度を示すグラフである。 図９は、ＨＢ－ＥＧＦで細胞遊走を誘導したＡＧＳ細胞系に加えたＧＣ１１１８の濃度に依存する、細胞遊走の程度を、対照群と比較して示すグラフである。 図１０は、ＡＲＥＧで細胞遊走を誘導したＡＧＳ細胞系に加えたＧＣ１１１８の濃度に依存する、細胞遊走の程度を、対照群と比較して示すグラフである。 図１１は、ＡＧＳ細胞系にさまざまなＥＧＦＲ抗体またはＨＥＲ２抗体を加えた場合の細胞遊走の程度を、対照群と比較して示すグラフである。 図１２は、ＮＵＧＣ３細胞系に加えたＨＢ－ＥＧＦの濃度に依存する、細胞遊走の程度を示すグラフである。 図１３は、ＮＵＧＣ３細胞系に加えたＴＧＦ－αの濃度に依存する、細胞遊走の程度を示すグラフである。 図１４は、ＮＵＧＣ３細胞系に加えたＡＲＥＧの濃度に依存する、細胞遊走の程度を示すグラフである。 図１５は、ＨＢ－ＥＧＦで細胞遊走を誘導したＮＵＧＣ３細胞系にさまざまなＥＧＦＲ抗体またはＨＥＲ２抗体を加えた場合の細胞遊走の程度を、対照群と比較して示すグラフである。 図１６は、ＴＧＦ－αで細胞遊走を誘導したＮＵＧＣ３細胞系にさまざまなＥＧＦＲ抗体またはＨＥＲ２抗体を加えた場合の細胞遊走の程度を、対照群と比較して示すグラフである。 図１７は、ＡＲＥＧで細胞遊走を誘導したＮＵＧＣ３細胞系にさまざまなＥＧＦＲ抗体またはＨＥＲ２抗体を加えた場合の細胞遊走の程度を、対照群と比較して示すグラフである。 図１８は、ＡＧＳ細胞系に加えたＨＢ－ＥＧＦの濃度に依存する、細胞浸潤の程度を示すグラフである。 図１９は、ＡＧＳ細胞系に加えたＴＧＦ－αの濃度に依存する、細胞浸潤の程度を示すグラフである。 図２０は、ＨＢ－ＥＧＦにより浸潤を誘導したＡＧＳ細胞系にさまざまなＥＧＦＲ抗体またはＨＥＲ２抗体を加えた場合の細胞浸潤の程度を、対照群と比較して示すグラフである。 図２１は、ＴＧＦ－αにより浸潤を誘導したＡＧＳ細胞系にさまざまなＥＧＦＲ抗体またはＨＥＲ２抗体を加えた場合の細胞浸潤の程度を、対照群と比較して示すグラフである。 図２２は、ＡＲＥＧにより浸潤を誘導したＡＧＳ細胞系にさまざまなＥＧＦＲ抗体またはＨＥＲ２抗体を加えた場合の細胞浸潤の程度を、対照群と比較して示すグラフである。 図２３は、ＮＵＧＣ３細胞系に加えたＨＢ－ＥＧＦの濃度に依存する、細胞浸潤の程度を示すグラフである。 図２４は、ＮＵＧＣ３細胞系に加えたＴＧＦ－αの濃度に依存する、細胞浸潤の程度を示すグラフである。 図２５は、ＮＵＧＣ３細胞系に加えたＡＲＥＧの濃度に依存する、細胞浸潤の程度を示すグラフである。 図２６は、ＨＢ－ＥＧＦにより浸潤を誘導したＮＵＧＣ３細胞系にさまざまなＥＧＦＲ抗体またはＨＥＲ２抗体を加えた場合の細胞浸潤の程度を、対照群と比較して示すグラフである。 図２７は、ＴＧＦ－αにより浸潤を誘導したＮＵＧＣ３細胞系にさまざまなＥＧＦＲ抗体またはＨＥＲ２抗体を加えた場合の細胞浸潤の程度を、対照群と比較して示すグラフである。 図２８は、ＡＲＥＧにより浸潤を誘導したＮＵＧＣ３細胞系にさまざまなＥＧＦＲ抗体またはＨＥＲ２抗体を加えた場合の細胞浸潤の程度を、対照群と比較して示すグラフである。

本発明を実施するための最良の形態
以下、本発明をより詳細に説明する。
本発明は、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）に特異的に結合する抗体を有効成分として含む、癌の転移を抑制するための医薬組成物において、抗体が、ａ）配列番号１、配列番号２および配列番号３のアミノ酸配列でそれぞれ表されるＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、配列番号４、配列番号５および配列番号６のアミノ酸配列でそれぞれ表されるＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域、重鎖定常領域、ならびに軽鎖定常領域、またはｂ）配列番号１、配列番号２および配列番号３のアミノ酸配列でそれぞれ表されるＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、配列番号９、配列番号５および配列番号６のアミノ酸配列でそれぞれ表されるＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域、重鎖定常領域、ならびに軽鎖定常領域を含む、組成物を提供する。

特に、本発明の抗体は、ａ）配列番号７のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域、配列番号８のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域、重鎖定常領域、および軽鎖定常領域、またはｂ）配列番号７のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域、配列番号１０のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域、重鎖定常領域、および軽鎖定常領域を含みうる。重鎖定常領域および軽鎖定常領域は、既知のヒト抗体の重鎖定常領域または軽鎖定常領域でありうる。特に、重鎖定常領域および軽鎖定常領域は、配列番号１１および配列番号１２でそれぞれ示されるアミノ酸配列を有しうる。

本発明において、用語「癌の転移」は、癌細胞が原発臓器から他の臓器に移動し増殖することを意味する。他の身体部位への癌細胞の移動は、周囲の臓器に直接浸潤する、原発癌における癌組織の増殖、および血管またはリンパ管に沿った、他の遠隔臓器への癌の転移を包含する。

本発明の組成物は、癌転移を抑制するために使用することができる。ここで、転移は、ＥＧＦＲリガンドによって誘発または促進されるものでありうる。ＥＧＦＲリガンドは、ＨＢ－ＥＧＦ（ヘパリン結合性ＥＧＦ様増殖因子）、ＴＧＦ－α（トランスフォーミング増殖因子－α）、ＡＲＥＧ（アンフィレグリン）またはそれらの組み合わせでありうる。癌は、固形癌であり得、これには肺癌、乳癌、大腸癌、胃癌、脳腫瘍、膀胱癌、頭頸部癌、卵巣癌、前立腺癌、結腸直腸癌等が含まれうる。癌は特に胃癌でありうる。

本発明の組成物は癌転移を効果的に抑制するので、本発明の組成物は、癌転移を抑制する効果を有することが知られている薬剤を１つまたはそれ以上さらに含みうる。

本発明の医薬組成物は、本発明の抗体に加え、薬学的に許容しうる担体をさらに含みうる。

本発明の医薬組成物に含まれる薬学的に許容しうる担体は、その処方において通常用いられる。担体の例は、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、デンプン、アカシアガム、リン酸カルシウム、アルギネート、ゼラチン、珪酸カルシウム、微結晶セルロース、ポリビニルピロリドン、セルロース、水、シロップ、メチルセルロース、ヒドロキシ安息香酸メチル、ヒドロキシ安息香酸プロピル、タルク、ステアリン酸マグネシウム、鉱油等を含むが、それらに限定されない。

本発明の医薬組成物は、賦形剤、滑沢剤、湿潤剤、甘味剤、香味剤および保存剤からなる群から選択される薬学的に許容しうる添加剤１つまたはそれ以上をさらに含みうる。本発明の組成物は、従来の方法にしたがって調製しうる。特に、本発明の組成物は、哺乳動物への投与後に、速やかな、持続的な、または遅延された活性成分放出を提供するように、既知の方法を選択して調製しうる。ここで、製剤は、油性もしくは水性媒体中の、溶液、懸濁液、シロップもしくはエマルジョンの形態、またはエキス、粉末、顆粒、錠剤もしくはカプセル剤の形態でありうる。分散剤または安定剤をさらに加えてもよい。また、本発明の組成物は、単独の処置剤として、または他の処置剤と組み合わせて、投与することができ、また、従来の処置剤と連続して、または同時に、投与することができる。

担体は、本発明の医薬組成物の総重量の約１重量％～約９０重量％、または約８０重量％～約８９．９９重量％を占めることができ、薬学的に許容しうる添加剤は、本発明の医薬組成物の総重量の約０．１重量％～約２０重量％を占めることができる。

本発明は、前記組成物を対象に投与するステップを含む、癌の転移を抑制する方法も提供する。

対象は、哺乳動物、特にヒトでありうる。本発明の抗体の投与経路および用量については、患者の状態および副作用に応じてさまざまな方法および量で対象に投与することができ、当業者は適当な投与方法および用量範囲を選択することができる。また、本発明の抗体は、他の薬物または生理学的活性物質（処置する疾患に対し処置効果を有することが知られるもの）と組み合わせて投与することができ、またはコンビネーション医薬の形態に調製することができる。

本発明の抗体を非経口的（腸管外）に投与する場合、その例には、皮下投与、腹腔内投与、筋肉内投与、経口投与、直腸投与、脊椎内投与、くも膜下投与、静脈内投与が含まれる。

上記の投与は、２週間に１回またはそれ以上、特に２週間に１回または２回の分割用量で行いうる。特に、投与は１週間に１回、または２週間に１回行いうる。ここで、１週間に１回投与する場合、用量は１～６ｍｇ／ｋｇ体重、または３～５ｍｇ／ｋｇ体重でありうる。２週間に１回投与する場合、用量は３～１５ｍｇ／ｋｇ体重、５～１２ｍｇ／ｋｇ体重、６～１０ｍｇ／ｋｇ体重、または７～９ｍｇ／ｋｇ体重でありうる。

本発明は、癌の転移を抑制するための医薬の製造における、前記医薬組成物の使用も提供する。

本発明の組成物は、ＥＧＦＲリガンドにより促進される癌の遊走および浸潤を抑制することにより癌の転移を抑制する医薬を製造するために使用することができる。癌は、固形癌であり、これには肺癌、乳癌、大腸癌、胃癌、脳腫瘍、膀胱癌、頭頸部癌、卵巣癌、前立腺癌、結腸直腸癌等を包含しうる。癌は特に胃癌でありうる。

本発明の態様
以下、本発明を実施例により詳細に説明する。以下の実施例は、本発明を、その範囲を限定することなくさらに説明することを意図したものである。

実施例１．抗ＥＧＦＲ抗体のスクリーニングおよび調製
ＥＧＦＲに特異的に結合する抗体のスクリーニングのために、抗体遺伝子ライブラリを構築した。そのために、ヒト骨髄ＲＮＡ、ヒト胸腺ＲＮＡ、ヒト脾臓ＲＮＡおよびヒトＢ細胞ＲＮＡを混合した。該ＲＮＡ遺伝子ライブラリから単離したＲＮＡ遺伝子をテンプレートとしてｃＤＮＡを合成し、次いで、そのｃＤＮＡをテンプレートとし、ｓｃＦｖ領域、重鎖可変領域および軽鎖可変領域用にそれぞれ設計されたプライマーを用いて、抗体ＤＮＡを合成した。合成した抗体ＤＮＡをファージディスプレイベクターｐＫＳ４Ｈ（韓国Green Crossの韓国特許番号１０－０６３５３７０参照）に導入して、抗体ＤＮＡライブラリを調製した。該抗体ＤＮＡライブラリを用いてパニング技術によってＥＧＦＲに結合する抗体を選択した。パニングは４回行い、最終的に選択したＤＮＡライブラリを含むコロニーからの抗体の発現を誘導した。ここで、抗体の発現は、ＥＧＦＲコーティングした９６ウェルプレートを用いてＥＬＩＳＡによって測定した。

選択した抗体フラグメントを用いて完全な形態の免疫グロブリンを構成するために、Green Cross Inc.の抗体発現ベクターであるｐＲＣ１３およびｐＫＣ１２（Ｂ型肝炎ウイルス表面抗原に対するヒト抗体の可変領域を挿入することができる抗体発現プラスミド、韓国特許番号１０－５２３７３２；寄託番号ＫＣＬＲＦ－ＢＰ－０００５４）を用いた。抗体フラグメントをベクターに挿入し、ＣＨＯ細胞に導入し、完全な形態の免疫グロブリンとして発現させ、発現した抗体を、プロテインＡ－アガロースカラム（米国Amersham Pharmacia Biotech）によって精製した（抗体の選択および調製の具体的な方法は、韓国特許番号１０－００９２４０１に記載されている）。

選択し調製した抗体を、ＧＣ１１１８と名付けた。この抗体は、配列番号１、配列番号２および配列番号３のアミノ酸配列でそれぞれ表されるＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、配列番号４、配列番号５および配列番号６のアミノ酸配列でそれぞれ表されるＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域、配列番号１１のアミノ酸配列で表される重鎖定常領域、ならびに配列番号１２のアミノ酸配列で表される軽鎖定常領域を含む。

Ｉ．抗ＥＧＦＲ抗体の胃癌細胞系遊走抑制効果の試験
試験実施例１：抗ＥＧＦＲ抗体投与のＮＣＩ－Ｎ８７胃癌細胞系遊走抑制効果の試験
１－１．ＥＧＦＲリガンドによるＮＣＩ－Ｎ８７胃癌細胞系遊走の誘導
胃癌細胞系であるＮＣＩ－Ｎ８７細胞系の癌細胞遊走がＥＧＦＲリガンドによって誘導される条件を確立するために、細胞遊走解析を行った。

最初に、ＮＣＩ－Ｎ８７細胞系（米国ＡＴＣＣ）を、１０％ウシ胎仔血清、１００Ｕ／ｍｌペニシリンおよび１００μｇ／ｍｌストレプトマイシンを補充したＲＰＭＩ１６４０培地中で、３７℃および５％ＣＯ_２の条件下に培養した。培養した細胞を、Ｔ１７５フラスコにその７０％を占めるまで入れた。２４時間後、細胞を１×ＰＢＳで洗い、培地を血清不含有ＲＰＭＩ１６４０培地と交換し、上記と同じ条件下に細胞を培養および調製した。

一方で、５μｇ／ｍｌの１型コラーゲンを１×ＰＢＳで希釈し、希釈したコラーゲン２５０μｌをトランスウェルインサートに入れ、冷蔵庫内で２４時間置いた。Ｉ型コラーゲンコーティングしたトランスウェルインサートを１×ＰＢＳ １ｍｌで洗い、クリーンベンチ内で乾燥した。前記の調製したＮＣＩ－Ｎ８７細胞系をトリプシン処理し、採取し、血清不含有培地に再懸濁し、トランスウェルインサート１個につき４×１０^６個の細胞数で入れた。さらに、２４ウェルプレートに血清不含有培地７５０μｌを入れ、そこにＥＧＦＲリガンドを加え、その中にトランスウェルインサートを配置した。ここで、ＨＢ－ＥＧＦ（ヘパリン結合性ＥＧＦ様増殖因子、２５９－ＨＥ－２５０、米国R&D Systems）およびＴＧＦ－α（トランスフォーミング増殖因子－α、２３９－Ａ－１００、米国R&D Systems）を０、２０、１００または５００ｎｇ／ｍｌで加え、ＡＲＥＧ（アンフィレグリン、２６２－ＡＲ、米国R&D Systems）を０、４０、２００または１０００ｎｇ／ｍｌで加えた。２４ウェルプレートを上記と同じ条件下に６時間インキュベートし、次いで、遊走が誘導された細胞を特定するために染色した。

具体的には、２４ウェルプレートの培地を除去し、１×ＰＢＳ ７００μｌを入れ、トランスウェルインサートをそれに浸して洗った。１×ＰＢＳを除去し、４％パラホルムアルデヒド５００μｌを入れ、インサートを１５分間浸すことによって細胞を固定した。パラホルムアルデヒドを除去し、同量の１×ＰＢＳでインサートを再度洗った。０．１％クリスタルバイオレット溶液５００μｌを入れ、インサートを３０分間浸して細胞を染色した。その後、蒸留水を５００ｍｌビーカーに入れ、インサートを洗った。洗ったインサートの内部に残存する細胞を綿棒で拭った。染色された細胞を１０％酢酸溶液１００μｌで溶離し、ＥＬＩＳＡプレートリーダーを用いて波長５９５ｎｍでＯＤ値を測定した。リガンドとしてＨＢ－ＥＧＦ、ＴＧＦ－αまたはＡＲＥＧを加えた場合の測定されたＯＤ値を図１～３にそれぞれ示す。

図１～３からわかるように、ＮＣＩ－Ｎ８７細胞系の遊走を誘導するために加えるべきＨＢ－ＥＧＦ、ＴＧＦ－αおよびＡＲＥＧリガンドの濃度はそれぞれ、２０ｎｇ／ｍｌ、２０ｎｇ／ｍｌおよび５００ｎｇ／ｍｌと決定された。

１－２．ＨＢ－ＥＧＦにより遊走を誘導したＮＣＩ－Ｎ８７胃癌細胞系における、ＧＣ１１１８抗体の遊走抑制効果の試験
ＮＣＩ－Ｎ８７細胞系を、細胞遊走誘導のために２０ｎｇ／ｍｌのＨＢ－ＥＧＦで処理した。０．０４μｇ／ｍｌ、０．２μｇ／ｍｌ、１μｇ／ｍｌもしくは５μｇ／ｍｌのＧＣ１１１８、または比較例として０．０４μｇ、０．２μｇ、１μｇもしくは５μｇのセツキシマブ（ＣＴＸ；米国Merck）および５μｇ／ｍｌのパニツムマブ（Ｐａｎｉ；米国Amgen）を加えた。ＧＣ１１１８による癌細胞遊走抑制を、試験実施例１－１と同じ条件および方法で調べた。

遊走抑制効果について、ＨＢ－ＥＧＦのみを加えた場合に対する、各抗体で処理した場合の遊走細胞の比をＯＤ値のパーセンテージとして計算した。結果を図４に示す。

図４に示されるように、ＧＣ１１１８およびセツキシマブはいずれも、濃度依存的に癌細胞遊走を抑制した。具体的には、０．０４μｇ／ｍｌで、セツキシマブは遊走を抑制しなかったが、ＧＣ１１１８は細胞遊走を２０％抑制した。５μｇ／ｍｌでは、セツキシマブおよびパニツムマブは癌細胞遊走を４０％抑制したのに対し、ＧＣ１１１８は６０％抑制した。

１－３．ＴＧＦ－αにより遊走を誘導したＮＣＩ－Ｎ８７胃癌細胞系における、ＧＣ１１１８抗体の遊走抑制効果の試験
ＨＢ－ＥＧＦの代わりに２０ｎｇ／ｍｌのＴＧＦ－αで細胞遊走を誘導し、比較例としてセツキシマブを加えたことを除いては、試験実施例１－２と同じ条件および方法で試験を行った。

遊走抑制効果について、ＴＧＦ－αのみを加えた場合に対する、各抗体で処理した場合の遊走細胞の比をＯＤ値のパーセンテージとして計算した。結果を図５に示す。

図５に示されるように、ＧＣ１１１８およびセツキシマブはいずれも、濃度依存的に癌細胞遊走を抑制した。具体的には、セツキシマブおよびＧＣ１１１８は、０．０４μｇ／ｍｌでは遊走抑制効果を示さなかったが、５μｇ／ｍｌでは効果を示した。

１－４．ＡＲＥＧにより遊走を誘導したＮＣＩ－Ｎ８７胃癌細胞系における、ＧＣ１１１８抗体の遊走抑制効果の試験
ＨＢ－ＥＧＦの代わりに５００ｎｇ／ｍｌのＡＲＥＧで細胞遊走を誘導したことを除いては、試験実施例１－２と同じ条件および方法で試験を行った。

遊走抑制効果について、ＡＲＥＧのみを加えた場合に対する、各抗体で処理した場合の遊走細胞の比をＯＤ値のパーセンテージとして計算した。結果を図６に示す。

図６に示されるように、ＧＣ１１１８およびセツキシマブはいずれも、濃度依存的に癌細胞遊走を抑制した。具体的には、セツキシマブおよびＧＣ１１１８は、０．０４μｇ／ｍｌでは遊走抑制効果を示さなかったが、０．２μｇ／ｍｌまたはそれ以上では効果を示した。

１－５．ＧＣ１１１８および他のＥＧＦＲ抗体の癌細胞遊走抑制効果の比較
癌細胞のＥＧＦＲまたはＨＥＲ２を標的とするＧＣ１１１８抗体および他の抗体の、癌細胞遊走抑制効果を比較した。

最初に、癌細胞の遊走を誘導するために、２０ｎｇ／ｍｌのＨＢ－ＥＧＦもしくはＴＧＦ－α、または５００ｎｇ／ｍｌのＡＲＥＧを加えた。そこに１μｇ／ｍｌのセツキシマブ、パニツムマブ、トラスツズマブ（Ｔｒａｓｔ；米国Roche）またはＧＣ１１１８を加え、対照として免疫グロブリンを用いた。それ以外は試験実施例１－１と同じ条件および方法で試験を行った。

遊走抑制効果について、ＥＧＦＲリガンドのみを加えた場合に対する、各抗体で処理した場合の遊走細胞の比をＯＤ値のパーセンテージとして計算した。結果を図７に示す。

図７に示されるように、ＥＧＦＲを標的とする抗体であるセツキシマブ、パニツムマブおよびＧＣ１１１８は細胞遊走を抑制したが、ＨＥＲ２を標的とする抗体トラスツズマブは効果をほとんど示さなかった。ＨＢ－ＥＧＦによって誘導された細胞遊走を抑制したのはＧＣ１１１８のみであった。ＴＧＦ－αまたはＡＲＥＧによって誘導された細胞遊走に対する効果においては、ＥＧＦＲを標的とする抗体の間に差はなかった。

試験実施例２．抗ＥＧＦＲ抗体のＡＧＳ胃癌細胞系遊走抑制効果の試験
２－１．ＥＧＦＲリガンドによるＡＧＳ胃癌細胞系遊走の誘導
ＥＧＦＲリガンドによりＡＧＳ細胞系（米国ATCC）の癌細胞遊走を誘導する条件を確立した。トランスウェルインサート１個につき３×１０^６個の細胞を入れた以外は、試験実施例１－１と同じ条件および方法で試験を行った。リガンドとしてＨＢ－ＥＧＦ、ＴＧＦ－αまたはＡＲＥＧを加え、ＯＤ値を測定した結果を図８に示す。

図８からわかるように、ＡＧＳ細胞系の遊走を誘導するために加えるべきＨＢ－ＥＧＦ、ＴＧＦ－αおよびＡＲＥＧリガンドの濃度はそれぞれ、２０ｎｇ／ｍｌ、２０ｎｇ／ｍｌおよび５００ｎｇ／ｍｌと決定された。

２－２．ＨＢ－ＥＧＦにより遊走を誘導したＡＧＳ胃癌細胞系における、ＧＣ１１１８抗体の遊走抑制効果の試験
ＡＧＳ細胞系を用いたことを除いては、試験実施例１－２と同じ条件および方法で試験を行った。遊走抑制効果について、ＨＢ－ＥＧＦのみを加えた場合に対する、各抗体で処理した場合の遊走細胞の比をＯＤ値のパーセンテージとして計算した。結果を図９に示す。

図９に示されるように、ＧＣ１１１８はセツキシマブと比較して優れたＡＧＳ細胞系遊走抑制効果を示した。具体的には、セツキシマブは、０．０４μｇ／ｍｌで遊走抑制効果を示さず、５μｇ／ｍｌでは癌細胞遊走を約４０％抑制した。これに対し、ＧＣ１１１８は、０．０４μｇ／ｍｌおよび５μｇ／ｍｌでそれぞれ、癌細胞遊走を４０％および９０％抑制した。

２－３．ＡＲＥＧにより遊走を誘導したＡＧＳ胃癌細胞系における、ＧＣ１１１８抗体の遊走抑制効果の試験
ＡＧＳ胃癌細胞系を用い、細胞遊走を１０００ｎｇ／ｍｌのＡＲＥＧで誘導したことを除いては、試験実施例１－４と同じ条件および方法で試験を行った。遊走抑制効果について、ＡＲＥＧを加えた場合に対する、各抗体で処理した場合の遊走細胞の比をＯＤ値のパーセンテージとして計算した。結果を図１０に示す。

図１０に示されるように、ＧＣ１１１８およびセツキシマブはいずれも、癌細胞遊走を濃度依存的に抑制した。特に、いずれの抗体も、０．０４μｇ／ｍｌでさえ６０％という、優れた癌細胞遊走効果を示した。

２－４．ＧＣ１１１８抗体および他のＥＧＦＲ抗体の癌細胞遊走抑制効果の比較
セツキシマブ、パニツムマブ、トラスツズマブまたはＧＣ１１１８を０．２μｇ／ｍｌの濃度で加えたことを除いては、試験実施例１－５と同じ条件および方法で試験を行った。遊走抑制効果について、ＥＧＦＲリガンドのみを加えた場合に対する、各抗体で処理した場合の遊走細胞の比をＯＤ値のパーセンテージとして計算した。結果を図１１に示す。

図１１に示されるように、ＥＧＦＲを標的とする抗体であるセツキシマブ、パニツムマブおよびＧＣ１１１８は細胞遊走を抑制したが、ＨＥＲ２を標的とする抗体トラスツズマブは抑制効果を示さなかった。また、細胞染色の結果としては、ＧＣ１１１８は、セツキシマブまたはパニツムマブよりも遊走細胞数を低く抑えたが、そのＯＤ値には、他の抗体の値との有意差はなかった。遊走した細胞の数が少な過ぎてＯＤ値に有意差が出なかったものと考えられる。

試験実施例３：ＥＧＦＲリガンドによるＮＵＧＣ３胃癌細胞系遊走の抑制試験
３－１．ＥＧＦＲリガンドによるＮＵＧＣ３胃癌細胞系遊走の誘導
ＥＧＦＲリガンドによりＮＵＧＣ３細胞系（ATCC、米国）の癌細胞の遊走を誘導する条件を確立した。トランスウェルインサート１個につき２×１０^６個の細胞を入れ、ＨＢ－ＥＧＦおよびＴＧＦ－αは０、０．４、２、１０、５０および２５０ｎｇ／ｍｌで、ＡＲＥＧは０、１．６、８、４０、２００および１０００ｎｇ／ｍｌで加えた。それ以外は、試験実施例１－１と同じ条件および方法で試験を行った。リガンドとしてＨＢ－ＥＧＦ、ＴＧＦ－αまたはＡＲＥＧ加え、ＯＤ値を測定した結果を図１２に示す。

図１２～１４からわかるように、ＡＧＳ細胞系の遊走を誘導するために加えるべきＨＢ－ＥＧＦ、ＴＧＦ－αおよびＡＲＥＧリガンドの濃度はそれぞれ、５０ｎｇ／ｍｌ、５０ｎｇ／ｍｌおよび５００ｎｇ／ｍｌと決定された。

３－２．ＨＢ－ＥＧＦにより遊走を誘導したＮＵＧＣ３胃癌細胞系におけるＧＣ１１１８抗体の遊走抑制効果の比較
ＮＵＧＣ３細胞系において５０ｎｇ／ｍｌのＨＢ－ＥＧＦで細胞遊走を誘導したことを除いては、試験実施例１－５と同じ条件および方法で試験を行った。遊走抑制効果について、ＥＧＦＲリガンドのみを加えた場合に対する、各抗体で処理した場合の遊走細胞の比をＯＤ値のパーセンテージとして計算した。結果を図１５に示す。

図１５に示されるように、セツキシマブ、パニツムマブおよびトラスツズマブは、ＨＢ－ＥＧＦ誘導細胞遊走を抑制しなかったが、ＧＣ１１１８は細胞遊走を４０％抑制した。

３－３．ＴＧＦ－αにより誘導したＮＵＧＣ３胃癌細胞遊走に対するＧＣ１１１８抗体の遊走抑制効果の試験
ＨＢ－ＥＧＦの代わりに５０ｎｇ／ｍｌのＴＧＦ－αで細胞遊走を誘導したことを除いては、試験実施例３－２と同じ条件および方法で試験を行った。

遊走抑制効果について、ＥＧＦＲリガンドのみを加えた場合に対する、各抗体で処理した場合の遊走細胞の比をＯＤ値のパーセンテージとして計算した。結果を図１６に示す。

図１６に示されるように、セツキシマブ、パニツムマブ、トラスツズマブおよびＧＣ１１１８は、ＴＧＦ－α誘導細胞遊走を抑制したが、トラスツズマブは細胞遊走を抑制しなかった。

３－４．ＡＲＥＧにより遊走を誘導したＮＵＧＣ３胃癌細胞系におけるＧＣ１１１８抗体の遊走抑制効果の比較
ＨＢ－ＥＧＦの代わりに５００ｎｇ／ｍｌのＡＲＥＧで細胞遊走を誘導したことを除いては、試験実施例３－２と同じ条件および方法で試験を行った。

遊走抑制効果について、ＥＧＦＲリガンドのみを加えた場合に対する、各抗体で処理した場合の遊走細胞の比をＯＤ値のパーセンテージとして計算した。結果を図１７に示す。

図１７に示されるように、ＥＧＦＲを標的とする抗体であるセツキシマブ、パニツムマブ、トラスツズマブおよびＧＣ１１１８抗体は細胞遊走を抑制したが、ＨＥＲ２を標的とする抗体トラスツズマブは抑制効果を示さなかった。

ＩＩ．抗ＥＧＦＲ抗体の胃癌細胞系転移抑制効果
試験実施例４．抗ＥＧＦＲ抗体投与のＡＧＳ胃癌細胞系転移抑制効果の試験
４－１．ＥＧＦＲリガンドによるＡＧＳ癌細胞浸潤の誘導
胃癌細胞系であるＡＧＳ細胞系の癌細胞の浸潤がＥＧＦＲリガンドによって誘導される条件を確立するために、マトリゲルチャンバー解析を行った。

最初に、胃癌細胞系であるＡＧＳ細胞系を、１０％ウシ胎仔血清、１００Ｕ／ｍｌペニシリンおよび１００μｇ／ｍｌストレプトマイシンを補充したＲＰＭＩ１６４０培地中で、３７℃および５％ＣＯ_２の条件下に培養した。培養した細胞を、Ｔ１７５フラスコにその６０％を占めるまで入れた。２４時間後、細胞を１×ＰＢＳで洗い、血清不含有ＲＰＭＩ１６４０培地との交換を行い、上記と同じ条件下に細胞を培養した。

一方、マトリゲルチャンバー（カタログ番号３５４４８３、米国Corning）にウシ胎仔血清０．５ｍｌを補充したＲＰＭＩ１６４０培地（浸潤培地）を入れ、２時間再水和した後、培地を除去した。調製した細胞をトリプシン処理により採取し、０．１％ウシ血清アルブミンを補充した血清不含有培地に再懸濁した。２４ウェルプレートに浸潤培地７５０μｌを入れ、ＨＢ－ＥＧＦおよびＴＧＦ－αを１０、２０または５０ｎｇ／ｍｌで加えた。浸潤培地５００μｌを含む２４ウェルプレート上にチャンバーを配置し、再懸濁細胞を、チャンバー１個につき細胞３×１０^６個で入れた。細胞を前記と同じ条件下に２４時間培養し、次いで、浸潤が誘導された細胞を特定するために染色した。

具体的には、２４ウェルプレートの培地を除去し、１×ＰＢＳ ５００ μｌを入れ、チャンバーを浸して洗った。１×ＰＢＳを除去し、２４ウェルプレートに４％パラホルムアルデヒド５００μｌを入れ、１０分間浸すことによって細胞を固定した。パラホルムアルデヒドを除去し、０．１％クリスタルバイオレット溶液５００μｌを入れ、チャンバーを１０分間浸して細胞を染色した。その後、蒸留水を５００ｍｌビーカーに入れ、チャンバーを洗った。洗ったチャンバーの内部の非浸潤細胞を綿棒で拭い、室温で１時間乾燥した。さらに、染色された細胞を１０％酢酸溶液１００μｌで溶離し、ＥＬＩＳＡプレートリーダーを用いて波長５９５ｎｍでＯＤ値を測定した。リガンドとしてＨＢ－ＥＧＦおよびＴＧＦ－αを加えた場合の測定されたＯＤ値を、図１８および図１９にそれぞれ示す。

図１８および図１９に示されるように、ＡＧＳ細胞系の浸潤がＨＢ－ＥＧＦおよびＴＧＦ－αにより誘導された。ＨＢ－ＥＧＦを１０、２０および５０ｎｇ／ｍｌで加えた場合は、浸潤がそれぞれ、対照と比較して４．１倍、４．５倍および３．９倍増加した。同じ濃度でＴＧＦ－αを加えた場合は、浸潤がそれぞれ、対照と比較して１．８倍、１．８倍および１．９倍増加した。

４－２．ＨＢ－ＥＧＦにより浸潤を誘導したＡＧＳ胃癌細胞系における、ＧＣ１１１８抗体の浸潤抑制効果の試験
２０ｎｇ／ｍｌのＨＢ－ＥＧＦで浸潤を誘導したことを除いては、試験実施例４－１と同じ条件および方法で試験を行った。試験群には１μｇ／ｍｌのＧＣ１１１８を加え、比較例としては１μｇ／ｍｌのセツキシマブ、１μｇ／ｍｌのパニツムマブ、および１μｇ／ｍｌのトラスツズマブを用いた。試験を２セットで３回繰り返し、平均値を示した。

浸潤抑制効果について、ＨＢ－ＥＧＦのみを加えた場合に対する、各抗体で処理した場合の浸潤細胞の比をＯＤ値のパーセンテージとして計算した。結果を表１および図２０に示す。

表１および図２０に示されるように、ＨＢ－ＥＧＦにより誘導したＡＧＳ細胞系の浸潤に対し、ＧＣ１１１８は優れた抑制効果を示した。具体的には、セツキシマブ、パニツムマブおよびトラスツズマブは細胞浸潤をそれぞれ６％、４．７％および１０．５％抑制したのに対し、ＧＣ１１１８は５０．４％抑制した。

４－３．ＴＧＦ－αにより浸潤を誘導したＡＧＳ胃癌細胞系における、ＧＣ１１１８抗体の浸潤抑制効果の試験
ＨＢ－ＥＧＦの代わりに２０ｎｇ／ｍｌのＴＧＦ－αで浸潤を誘導したことを除いては、試験実施例４－２と同じ条件および方法で試験を行った。

浸潤抑制効果について、ＴＧＦ－αのみを加えた場合に対する、各抗体で処理した場合の浸潤細胞の比をＯＤ値のパーセンテージとして計算した。結果を表２および図２１に示す。

表２および図２１に示されるように、ＴＧＦ－αにより誘導したＡＧＳ細胞系の浸潤に対し、ＧＣ１１１８は優れた抑制効果を示した。具体的には、セツキシマブおよびトラスツズマブは細胞浸潤をそれぞれ３５％および６．１％抑制したのに対し、ＧＣ１１１８は、パニツムマブ（５４．１％抑制した）と同等に５５．９％抑制した。

４－４．ＡＲＥＧにより浸潤を誘導したＡＧＳ胃癌細胞系における、ＧＣ１１１８抗体の浸潤抑制効果の試験
ＨＢ－ＥＧＦの代わりに１０００ｎｇ／ｍｌのＡＲＥＧで浸潤を誘導し、試験を２セットで２回繰り返したことを除いては、試験実施例４－２と同じ条件および方法で試験を行った。

浸潤抑制効果について、ＡＲＥＧのみを加えた場合に対する、各抗体で処理した場合の浸潤細胞の比をＯＤ値のパーセンテージとして計算した。結果を表３および図２２に示す。

表３および図２２に示されるように、ＡＲＥＧにより誘導したＡＧＳ細胞系の浸潤に対し、ＧＣ１１１８は優れた抑制効果を示した。具体的には、ＧＣ１１１８は細胞浸潤を４４．６％抑制し、これは、対照群セツキシマブ（４２％）またはパニツムマブ（４２．８％）の抑制レベルと同等であった。

試験実施例５．抗ＥＧＦＲ抗体投与のＮＵＧＣ３胃癌細胞系転移抑制効果の試験
５－１．ＥＧＦＲリガンドによるＮＵＧＣ３癌細胞浸潤の誘導
胃癌細胞系であるＮＵＧＣ３細胞系の癌細胞の浸潤がＥＧＦＲリガンドによって誘導される条件を確立するために、マトリゲルチャンバー解析を行った。浸潤誘導のために、ＥＧＦＲリガンドであるＨＢ－ＥＧＦおよびＴＧＦ－αを１０、２０または５０ｎｇ／ｍｌで、ＡＲＥＧを４０、２００または５００ｎｇ／ｍｌで加えた。それ以外は試験実施例４－１と同じ条件および方法で試験を行った。リガンドとしてＨＢ－ＥＧＦ、ＴＧＦ－αおよびＡＲＥＧを加えた場合の測定されたＯＤ値を図２３～２５にそれぞれ示す。

図２３～２５に示されるように、ＮＵＧＣ３細胞系の浸潤がＨＢ－ＥＧＦ、ＴＧＦ－αまたはＡＲＥＧリガンドにより誘導された。具体的には、細胞を１０、２０および５０ｎｇ／ｍｌのＨＢ－ＥＧＦで処理した場合は、細胞浸潤がそれぞれ２．３倍、３．５倍および４．８倍増加し、細胞を１０、２０および５０ｎｇ／ｍｌのＴＧＦ－αで処理した場合は、細胞浸潤がそれぞれ１．７倍、１．９倍および１．９倍増加した。４０、２００および５００ｎｇ／ｍｌのＡＲＥＧで処理した場合は、細胞浸潤がそれぞれ１．２倍、１．３倍および１．５倍増加した。

５－２．ＨＢ－ＥＧＦにより浸潤を誘導したＮＵＧＣ３胃癌細胞系における、ＧＣ１１１８抗体の浸潤抑制効果の試験
ＮＵＧＣ３細胞系を５０ｎｇ／ｍｌのＨＢ－ＥＧＦで処理することにより浸潤を誘導したことを除いては、試験実施例４－２と同じ条件および方法で試験を行った。

浸潤抑制効果について、ＨＢ－ＥＧＦのみを加えた場合に対する、各抗体で処理した場合の浸潤細胞の比をＯＤ値のパーセンテージとして計算した。結果を表４および図２６に示す。

表４および図２６に示されるように、ＨＢ－ＥＧＦにより誘導したＮＵＧＣ３細胞系の浸潤に対し、ＧＣ１１１８は優れた抑制効果を示した。具体的には、セツキシマブ、パニツムマブおよびトラスツズマブは細胞浸潤をそれぞれ９．４％、８．１％および１１．３％抑制したのに対し、ＧＣ１１１８は６０．８％抑制した。すなわち、ＨＢ－ＥＧＦにより誘導したＮＵＧＣ３細胞系の細胞浸潤の抑制効果は、ＧＣ１１１８において顕著であった。

５－３．ＴＧＦ－αにより浸潤を誘導したＮＵＧＣ３胃癌細胞系における、ＧＣ１１１８抗体の浸潤抑制効果の試験
ＨＢ－ＥＧＦの代わりに５０ｎｇ／ｍｌの濃度のＴＧＦ－αを加えて処理したことを除いては、ＧＣ１１１８による癌細胞浸潤抑制を試験実施例５－２と同じ方法で試験した。

浸潤抑制効果について、ＴＧＦ－αのみを加えた場合に対する、各抗体で処理した場合の浸潤細胞の比をＯＤ値のパーセンテージとして計算した。結果を表５および図２７に示す。

表５および図２７に示されるように、ＴＧＦ－αにより誘導したＮＵＧＣ３細胞系の浸潤に対し、ＧＣ１１１８は優れた抑制効果を示した。具体的には、ＧＣ１１１８は細胞浸潤を６７．５％抑制し、これは対照群セツキシマブ（６３．５％）またはパニツムマブ（６５．７％）の抑制レベルと同等であった。

５－４．ＡＲＥＧにより浸潤を誘導したＮＵＧＣ３胃癌細胞系における、ＧＣ１１１８抗体の浸潤抑制効果の試験
ＨＢ－ＥＧＦの代わりに５００ｎｇ／ｍｌの濃度のＡＲＥＧを加えて処理したことを除いては、ＧＣ１１１８による癌細胞浸潤抑制を試験実施例４－４と同じ方法で試験した。

浸潤抑制効果を調べるために、ＡＲＥＧのみを加えた場合に対する、各抗体で処理した場合の浸潤細胞の比をＯＤ値のパーセンテージとして計算した。結果を表６および図２８に示す。

表６および図２８に示されるように、ＡＲＥＧにより誘導したＮＵＧＣ３細胞系の浸潤に対し、ＧＣ１１１８は優れた抑制効果を示した。具体的には、ＧＣ１１１８は細胞浸潤を４５．２％抑制し、これは対照群セツキシマブ（４１．８％）またはパニツムマブ（４３．５％）の抑制レベルと同等であった。

Claims (7)

1. 上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）に特異的に結合する抗体を有効成分として含む、結腸直腸癌の転移を抑制するための医薬組成物において、抗体が、
   ａ）配列番号１、配列番号２および配列番号３のアミノ酸配列でそれぞれ表されるＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、配列番号４、配列番号５および配列番号６のアミノ酸配列でそれぞれ表されるＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域、重鎖定常領域、ならびに軽鎖定常領域；または
   ｂ）配列番号１、配列番号２および配列番号３のアミノ酸配列でそれぞれ表されるＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、配列番号９、配列番号５および配列番号６のアミノ酸配列でそれぞれ表されるＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域、重鎖定常領域、ならびに軽鎖定常領域
   を含む、組成物。
2. 抗体が、
   ａ）配列番号７のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域、配列番号８のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域、重鎖定常領域、および軽鎖定常領域；または
   ｂ）配列番号７のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域、配列番号１０のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域、重鎖定常領域、および軽鎖定常領域
   を含む、請求項１に記載の組成物。
3. 転移が、ＥＧＦＲリガンドによって誘発または促進される、請求項１に記載の組成物。
4. ＥＧＦＲリガンドが、ヘパリン結合性ＥＧＦ様増殖因子（ＨＢ－ＥＧＦ）、トランスフォーミング増殖因子－α（ＴＧＦ－α）、アンフィレグリン（ＡＲＥＧ）、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項３に記載の組成物。
5. 組成物が、薬学的に許容しうる担体、賦形剤、滑沢剤、湿潤剤、甘味剤、香味剤、保存剤、およびそれらの混合物からなる群から選択されるものをさらに含む、請求項１に記載の組成物。
6. 結腸直腸癌の転移を抑制するための医薬の製造における、ＥＧＦＲに特異的に結合する抗体の使用において、抗体が、
   ａ）配列番号１、配列番号２および配列番号３のアミノ酸配列でそれぞれ表されるＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、配列番号４、配列番号５および配列番号６のアミノ酸配列でそれぞれ表されるＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域、重鎖定常領域、ならびに軽鎖定常領域；または
   ｂ）配列番号１、配列番号２および配列番号３のアミノ酸配列でそれぞれ表されるＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、配列番号９、配列番号５および配列番号６のアミノ酸配列でそれぞれ表されるＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域、重鎖定常領域、ならびに軽鎖定常領域
   を含む、使用。
7. 抗体が、
   ａ）配列番号７のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域、配列番号８のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域、重鎖定常領域、および軽鎖定常領域；または
   ｂ）配列番号７のアミノ酸配列で表される重鎖可変領域、配列番号１０のアミノ酸配列で表される軽鎖可変領域、重鎖定常領域、および軽鎖定常領域
   を含む、請求項６に記載の使用。

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