JP7016958B2 - アデノシンおよび/またはメチルチオアデノシンの酵素媒介枯渇方法 - Google Patents
アデノシンおよび/またはメチルチオアデノシンの酵素媒介枯渇方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP7016958B2 JP7016958B2 JP2020534518A JP2020534518A JP7016958B2 JP 7016958 B2 JP7016958 B2 JP 7016958B2 JP 2020534518 A JP2020534518 A JP 2020534518A JP 2020534518 A JP2020534518 A JP 2020534518A JP 7016958 B2 JP7016958 B2 JP 7016958B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- mtase
- enzyme
- tumor
- antibody
- mtap
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
- C07K16/2818—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against CD28 or CD152
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/10—Transferases (2.)
- C12N9/1048—Glycosyltransferases (2.4)
- C12N9/1077—Pentosyltransferases (2.4.2)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
- A61K38/45—Transferases (2)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
- A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
- A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
- A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
- A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
- A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
- A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
- A61K47/6849—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a receptor, a cell surface antigen or a cell surface determinant
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
- A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
- A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
- A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
- A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
- A61K47/6855—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell the tumour determinant being from breast cancer cell
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
- C07K16/3076—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells against structure-related tumour-associated moieties
- C07K16/3092—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells against structure-related tumour-associated moieties against tumour-associated mucins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/32—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against translation products of oncogenes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/96—Stabilising an enzyme by forming an adduct or a composition; Forming enzyme conjugates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
- C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
- C12Q1/6886—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material for cancer
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y204/00—Glycosyltransferases (2.4)
- C12Y204/02—Pentosyltransferases (2.4.2)
- C12Y204/02028—S-Methyl-5'-thioadenosine phosphorylase (2.4.2.28)
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/573—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for enzymes or isoenzymes
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
- C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
- C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/30—Non-immunoglobulin-derived peptide or protein having an immunoglobulin constant or Fc region, or a fragment thereof, attached thereto
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/31—Fusion polypeptide fusions, other than Fc, for prolonged plasma life, e.g. albumin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/33—Fusion polypeptide fusions for targeting to specific cell types, e.g. tissue specific targeting, targeting of a bacterial subspecies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/106—Pharmacogenomics, i.e. genetic variability in individual responses to drugs and drug metabolism
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/156—Polymorphic or mutational markers
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Oncology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Mycology (AREA)
Description
本出願は、2017年12月21日に出願された、米国特許仮出願番号第62/609,000号の優先権の利益を主張し、その内容全体が参照により本明細書に組み込まれている。
本発明は、アメリカ国立衛生研究所によって認可された助成金番号R01 CA189623のもとで、政府の支援によってなされた。政府は、本発明に特定の権利を有する。
本発明は概して、医学および生物学分野に関する。より具体的には、本発明は、アデノシンおよび/またはメチルチオアデノシン(MTA)を枯渇させる酵素による、癌またはSCIDを治療するための組成物に関する。更により具体的には、本発明は、ヒトの治療法に好適な、アデノシンおよび/またはMTA分解活性を有する、原核生物の酵素およびヒト酵素の改変、薬理学的最適化、および使用に関する。
メチルチオアデノシンホスホリラーゼ(MTAP)の染色体9p21における、ホモ接合の遺伝子欠失は、骨肉腫、肝癌、および脊索腫の約30~40%において観察される、一般的な事象であり、中皮腫、T細胞急性リンパ性白血病、および膠腫においては、より多くの喪失(60~75%)が伴う(Bertino et al.,2011)。MTAPは、ポリアミン合成の副産物であるメチルチオアデノシン(MTA)を、メチルチオリボース-1’-ホスフェート(MTR-1’-P)およびアデニンに分解し、これらはメチオニンおよびプリンサルベージ経路に再利用される。MTAPの喪失は、侵襲性の疾患およびより悪い転帰と相関している。充実性腫瘍およびリンパ腫におけるMTAPの枯渇は、その基質であるMTAの蓄積、および分泌の増加をもたらす(Stevens et al.,2008;Stevens et al.,2009;Stevens et al.,2010)。通常の組織よりも、腫瘍における著しく高いMTAの濃度は、一層顕著な、侵襲性および悪性の特徴と相関することを、黒色腫細胞における研究は報告した(Stevens et al.,2009)。同様に、肝細胞癌(HCC)におけるMTAPの欠損も、MTA量の増加およびHCC増殖との強力な相関を示し、肝臓の星細胞における、プロ腫瘍発生遺伝子発現プロファイルを増加させた(Kirovski et al.,2011)。
抗体にコンジュゲートされている、単離された改変MTase酵素。
[本発明1002]
前記MTaseが原核生物のMTANである、本発明1001の酵素。
[本発明1003]
前記原核生物のMTANが、配列番号3に対して少なくとも90%同一のアミノ酸配列を含む、本発明1002の酵素。
[本発明1004]
前記原核生物のMTANが、配列番号3に対して少なくとも95%同一のアミノ酸配列を含む、本発明1003の酵素。
[本発明1005]
前記原核生物のMTANが、配列番号3のアミノ酸配列を含む、本発明1004の酵素。
[本発明1006]
前記MTaseが哺乳類のMTAPである、本発明1001の酵素。
[本発明1007]
前記哺乳類のMTAPが、配列番号1に対して少なくとも90%同一のアミノ酸配列を含む、本発明1006の酵素。
[本発明1008]
前記哺乳類のMTAPが、配列番号1に対して少なくとも95%同一のアミノ酸配列を含む、本発明1007の酵素。
[本発明1009]
前記哺乳類のMTAPが、配列番号1のアミノ酸配列を含む、本発明1008の酵素。
[本発明1010]
前記抗体がscFv抗体である、本発明1001~1009のいずれかの酵素。
[本発明1011]
前記抗体またはscFv抗体が抗MUC1抗体、抗HER2抗体、抗CTLA4抗体、抗PD1抗体、または抗PDL1抗体である、本発明1001または1010の酵素。
[本発明1012]
異種ペプチドセグメントを更に含む、本発明1001~1011のいずれかの酵素。
[本発明1013]
前記異種ペプチドセグメントがXTENペプチド、IgG Fc、アルブミン、またはアルブミン結合ペプチドである、本発明1012の酵素。
[本発明1014]
ポリエチレングリコール(PEG)と結合している、本発明1001~1013のいずれかの酵素。
[本発明1015]
1つ以上のLysまたはCys残基を介してPEGに結合している、本発明1014の酵素。
[本発明1016]
本発明1001~1015のいずれかの酵素をコードするヌクレオチド配列を含む、核酸。
[本発明1017]
細菌、真菌、昆虫、または哺乳類での発現に最適化されたコドンである、本発明1016の核酸。
[本発明1018]
本発明1016または1017の核酸を含む、発現ベクター。
[本発明1019]
本発明1016または1017の核酸を含む、宿主細胞。
[本発明1020]
前記宿主細胞が細菌細胞、真菌細胞、昆虫細胞、または哺乳類細胞である、本発明1019の宿主細胞。
[本発明1021]
本発明1001~1015のいずれかのMTase-抗体コンジュゲートを含む、医薬製剤。
[本発明1022]
薬学的に許容できる担体中にMTaseポリペプチドを含む有効量の医薬製剤を患者に投与することを含む、腫瘍を有する患者の治療方法であって、前記MTaseポリペプチドが、配列番号1または3に対して少なくとも90%の同一性を有する配列を含み、前記MTaseポリペプチドがMTase活性を有する、前記方法。
[本発明1023]
前記MTaseポリペプチドが配列番号1または3に対して少なくとも95%の同一性を有し、前記ポリペプチドがMTase活性を有する、本発明1022の方法。
[本発明1024]
前記MTaseポリペプチドが配列番号1または3の配列を有する、本発明1023の方法。
[本発明1025]
前記MTaseが原核生物のMTANであり、前記原核生物のMTANが、配列番号3に対して少なくとも95%同一のアミノ酸配列を含み、かつMTase活性を有する、本発明1023の方法。
[本発明1026]
前記MTaseがヒトMTAPであり、前記ヒトMTAPが、配列番号1に対して少なくとも95%同一のアミノ酸配列を含み、かつMTase活性を有する、本発明1023の方法。
[本発明1027]
前記MTaseポリペプチドが、配列番号3の配列を有する原核生物のMTANである、本発明1024の方法。
[本発明1028]
前記MTaseポリペプチドが、配列番号1の配列を有する原核生物のMTAPである、本発明1024の方法。
[本発明1029]
前記MTaseがポリエチレングリコール(PEG)と結合している、本発明1022~1028のいずれかの方法。
[本発明1030]
前記MTaseが、1つ以上のLysまたはCys残基を介してPEGと結合している、本発明1029の方法。
[本発明1031]
前記MTaseが異種ペプチドセグメントを更に含む、本発明1022~1030のいずれかの方法。
[本発明1032]
前記異種ペプチドセグメントがXTENペプチド、IgG Fc、アルブミン、またはアルブミン結合ペプチドである、本発明1031の方法。
[本発明1033]
前記MTaseが抗体にコンジュゲートされている、本発明1022~1032のいずれかの方法。
[本発明1034]
前記抗体がscFv抗体である、本発明1033の酵素。
[本発明1035]
前記抗体またはscFv抗体が抗MUC1抗体、抗HER2抗体、抗CTLA4抗体、抗PD1抗体、または抗PDL1抗体である、本発明1033または1034の酵素。
[本発明1036]
前記腫瘍が充実性腫瘍である、本発明1022~1035のいずれかの方法。
[本発明1037]
前記腫瘍が血液腫瘍である、本発明1022~1035のいずれかの方法。
[本発明1038]
前記腫瘍が骨肉腫、膵癌、脊索腫、中皮腫、T細胞ALL、膠腫、腎細胞癌、黒色腫、扁平上皮細胞癌、胆嚢癌、胃癌、または肝細胞癌である、本発明1022~1035のいずれかの方法。
[本発明1039]
前記腫瘍が、参照レベルに対して低下したレベルのMTAPを有する、本発明1022~1038のいずれかの方法。
[本発明1040]
前記腫瘍がMTAP欠損を有する、本発明1039の方法。
[本発明1041]
前記腫瘍が、参照サンプルに対して増加したレベルのCD73を有する、本発明1022~1038のいずれかの方法。
[本発明1042]
前記腫瘍が、参照レベルに対して低下したレベルのMTAPを有する、本発明1041の方法。
[本発明1043]
前記腫瘍が、参照サンプルに対して増加したレベルのCD39を有する、本発明1022~1038のいずれかの方法。
[本発明1044]
前記腫瘍が、参照レベルに対して増加したレベルのMTAを有する、本発明1022~1038のいずれかの方法。
[本発明1045]
前記腫瘍が、参照レベルに対して増加したレベルのADOを有する、本発明1022~1038のいずれかの方法。
[本発明1046]
前記参照レベルが、前記患者の健全な組織におけるレベルである、本発明1039および1041~1045のいずれかの方法。
[本発明1047]
前記参照レベルが健全な対象におけるレベルである、本発明1039および1041~1045のいずれかの方法。
[本発明1048]
前記患者がヒト患者である、本発明1022~1047のいずれかの方法。
[本発明1049]
前記製剤が、吸入により、注射により、注入により、連続注入により、標的細胞を直接浸す局所潅流により、カテーテルを介して、または洗浄により、腫瘍内投与、静脈内投与、皮内投与、動脈内投与、腹腔内投与、病巣内投与、頭蓋内投与、関節内投与、前立腺内投与、胸膜内投与、気管内投与、眼内投与、鼻孔内投与、硝子体内投与、腟内投与、直腸内投与、筋肉内投与、皮下投与、結膜下投与、膀胱内投与、粘膜投与、心膜内投与、臍帯内投与、経口投与される、本発明1022~1048のいずれかの方法。
[本発明1050]
免疫療法に対する感度を増加させるための方法として更に定義される、本発明1022~1049のいずれかの方法。
[本発明1051]
前記患者が、以前に免疫チェックポイント阻害剤の投与に対して応答しなかった、本発明1049の方法。
[本発明1052]
前記対象に、少なくとも第2の抗癌治療法を施すことを更に含む、本発明1022~1051のいずれかの方法。
[本発明1053]
前記第2の抗癌治療法が外科療法、化学療法、放射線療法、凍結治療、ホルモン療法、免疫療法またはサイトカイン療法である、本発明1052の方法。
[本発明1054]
前記第2の抗癌治療法が、養子T細胞療法、抗PD1抗体、抗CTLA-4抗体、および/または抗PD-L1抗体を含む、本発明1052の方法。
[本発明1055]
前記抗PD-L1抗体が、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、BMS-036559、またはCK-301を含む、本発明1054の方法。
[本発明1056]
前記抗PD1抗体が、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、ピディリズマブ、AMP-223、AMP-514、セミプリマブ、またはPDR-001を含む、本発明1054の方法。
[本発明1057]
前記抗CTLA-4治療法が、イピリムマブまたはトレメリムマブを含む、本発明1054の方法。
[本発明1058]
転移の予防法として更に定義される、本発明1022~1057のいずれかの方法。
[本発明1059]
複合有効量のMTaseポリペプチドと免疫チェックポイント阻害剤を用いて治療するための腫瘍を有する患者を選択するための方法であって、
(a)前記患者の腫瘍が、参照レベルに対して、低下したレベルのMTAP、増加したレベルのCD73、増加したレベルのCD39、増加したレベルのMTA、または、増加したレベルのADOを有するか否かを判定することと、
(b)前記患者の腫瘍が、参照レベルに対して、低下したレベルのMTAP、増加したレベルのCD73、増加したレベルのCD39、増加したレベルのMTA、または、増加したレベルのADOを有する場合、治療のために前記患者を選択することと
を含み、前記MTaseポリペプチドが、配列番号1または3に対して少なくとも90%の同一性を有する配列を含み、前記MTaseポリペプチドがMTase活性を有する、前記方法。
[本発明1060]
複合有効量のMTaseポリペプチドおよび免疫チェックポイント阻害剤を、前記選択した患者に投与することを更に含む、本発明1059の方法。
[本発明1061]
前記患者が、以前に免疫チェックポイント阻害剤の投与に対して応答しなかった場合、治療のために前記患者を選択することを更に含む、本発明1059の方法。
[本発明1062]
前記患者が、以前に少なくとも一回の抗癌治療を受けている、本発明1059の方法。
[本発明1063]
前記MTaseポリペプチドが配列番号1または3に対して少なくとも95%の同一性を有し、前記MTaseポリペプチドがMTase活性を有する、本発明1059~1062のいずれかの方法。
[本発明1064]
前記MTaseポリペプチドが配列番号1または3の配列を有する、本発明1063の方法。
[本発明1065]
前記MTaseが原核生物のMTANであり、前記原核生物のMTANが、配列番号3に対して少なくとも95%同一のアミノ酸配列を含み、かつMTase活性を有する、本発明1063の方法。
[本発明1066]
前記MTaseがヒトMTAPであり、前記ヒトMTAPが、配列番号1に対して少なくとも95%同一のアミノ酸配列を含み、かつMTase活性を有する、本発明1063の方法。
[本発明1067]
前記MTaseポリペプチドが、配列番号3の配列を有する原核生物のMTANである、本発明1064の方法。
[本発明1068]
前記MTaseポリペプチドが、配列番号1の配列を有する原核生物のMTAPである、本発明1064の方法。
[本発明1069]
前記MTaseがポリエチレングリコール(PEG)と結合している、本発明1059~1068のいずれかの方法。
[本発明1070]
前記MTaseが、1つ以上のLysまたはCys残基を介してPEGと結合している、本発明1069の方法。
[本発明1071]
前記MTaseが異種ペプチドセグメントを更に含む、本発明1059~1070のいずれかの方法。
[本発明1072]
前記異種ペプチドセグメントがXTENペプチド、IgG Fc、アルブミン、またはアルブミン結合ペプチドである、本発明1071の方法。
[本発明1073]
前記MTaseが抗体にコンジュゲートされている、本発明1059~1072のいずれかの方法。
[本発明1074]
前記抗体がscFv抗体である、本発明1073の酵素。
[本発明1075]
前記抗体またはscFv抗体が抗MUC1抗体、抗HER2抗体、抗CTLA4抗体、抗PD1抗体、または抗PDL1抗体である、本発明1073または1074の酵素。
[本発明1076]
前記腫瘍が充実性腫瘍である、本発明1059~1075のいずれかの方法。
[本発明1077]
前記腫瘍が血液腫瘍である、本発明1059~1075のいずれかの方法。
[本発明1078]
前記腫瘍が骨肉腫、膵癌、脊索腫、中皮腫、T細胞ALL、膠腫、腎細胞癌、黒色腫、扁平上皮細胞癌、胆嚢癌、胃癌、または肝細胞癌である、本発明1059~1075のいずれかの方法。
[本発明1079]
前記腫瘍が、参照レベルに対して低下したレベルのMTAPを有する、本発明1059~1078のいずれかの方法。
[本発明1080]
前記腫瘍がMTAP欠損を有する、本発明1079の方法。
[本発明1081]
前記腫瘍が、参照サンプルに対して増加したレベルのCD73を有する、本発明1059~1078のいずれかの方法。
[本発明1082]
前記腫瘍が、参照レベルに対して低下したレベルのMTAPを有する、本発明1081の方法。
[本発明1083]
前記腫瘍が、参照サンプルに対して増加したレベルのCD39を有する、本発明1059~1078のいずれかの方法。
[本発明1084]
前記腫瘍が、参照レベルに対して増加したレベルのMTAを有する、本発明1059~1078のいずれかの方法。
[本発明1085]
前記腫瘍が、参照レベルに対して増加したレベルのADOを有する、本発明1059~1078のいずれかの方法。
[本発明1086]
前記参照レベルが、前記患者の健全な組織におけるレベルである、本発明1079および1081~1085のいずれかの方法。
[本発明1087]
前記参照レベルが健全な対象におけるレベルである、本発明1079および1081~1085のいずれかの方法。
[本発明1088]
前記患者がヒト患者である、本発明1059~1087のいずれかの方法。
[本発明1089]
前記MTaseポリペプチドが、吸入により、注射により、注入により、連続注入により、標的細胞を直接浸す局所潅流により、カテーテルを介して、または洗浄により、腫瘍内投与、静脈内投与、皮内投与、動脈内投与、腹腔内投与、病巣内投与、頭蓋内投与、関節内投与、前立腺内投与、胸膜内投与、気管内投与、眼内投与、鼻孔内投与、硝子体内投与、腟内投与、直腸内投与、筋肉内投与、皮下投与、結膜下投与、膀胱内投与、粘膜投与、心膜内投与、臍帯内投与、経口投与される、本発明1060~1088のいずれかの方法。
[本発明1090]
免疫療法に対する感度を増加させるための方法として更に定義される、本発明1060~1088のいずれかの方法。
[本発明1091]
前記患者が、以前に免疫チェックポイント阻害剤の投与に対して応答しなかった、本発明1090の方法。
[本発明1092]
前記対象に、少なくとも第2の抗癌治療法を施すことを更に含む、本発明1059~1091のいずれかの方法。
[本発明1093]
前記第2の抗癌治療法が外科療法、化学療法、放射線療法、凍結治療、ホルモン療法、免疫療法またはサイトカイン療法である、本発明1092の方法。
[本発明1094]
前記第2の抗癌治療法が、養子T細胞療法、抗PD1抗体、抗CTLA-4抗体、および/または抗PD-L1抗体を含む、本発明1092の方法。
[本発明1095]
前記抗PD-L1抗体が、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、BMS-036559、またはCK-301を含む、本発明1094の方法。
[本発明1096]
前記抗PD1抗体が、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、ピディリズマブ、AMP-223、AMP-514、セミプリマブ、またはPDR-001を含む、本発明1094の方法。
[本発明1097]
前記抗CTLA-4治療法が、イピリムマブまたはトレメリムマブを含む、本発明1094の方法。
[本発明1098]
転移の予防法として更に定義される、本発明1059~1097のいずれかの方法。
[本発明1099]
薬学的に許容できる担体中にMTaseポリペプチドを含む有効量の医薬製剤を対象に投与することを含む、重症複合型免疫不全(SCID)を有する患者の治療方法であって、前記MTaseポリペプチドが、配列番号1または3に対して少なくとも90%の同一性を有する配列を含み、前記MTaseポリペプチドがMTase活性を有する、前記方法。
[本発明1100]
前記患者がアデノシンデアミナーゼ遺伝子に少なくとも1つの変異を有する、本発明1099の方法。
[本発明1101]
前記MTaseポリペプチドが配列番号1または3に対して少なくとも95%の同一性を有し、前記ポリペプチドがMTase活性を有する、本発明1099または1100の方法。
[本発明1102]
前記MTaseポリペプチドが配列番号1または3の配列を有する、本発明1101の方法。
[本発明1103]
前記MTaseが原核生物のMTANであり、前記原核生物のMTANが、配列番号3に対して少なくとも95%同一のアミノ酸配列を含み、かつMTase活性を有する、本発明1101の方法。
[本発明1104]
前記MTaseがヒトMTAPであり、前記ヒトMTAPが、配列番号1に対して少なくとも95%同一のアミノ酸配列を含み、かつMTase活性を有する、本発明1101の方法。
[本発明1105]
前記MTaseポリペプチドが、配列番号3の配列を有する原核生物のMTANである、本発明1102の方法。
[本発明1106]
前記MTaseポリペプチドが、配列番号1の配列を有する原核生物のMTAPである、本発明1102の方法。
[本発明1107]
前記MTaseがポリエチレングリコール(PEG)と結合している、本発明1099~1106のいずれかの方法。
[本発明1108]
前記MTaseが、1つ以上のLysまたはCys残基を介してPEGと結合している、本発明1107の方法。
[本発明1109]
前記MTaseが異種ペプチドセグメントを更に含む、本発明1099~1108のいずれかの方法。
[本発明1110]
前記異種ペプチドセグメントがXTENペプチド、IgG Fc、アルブミン、またはアルブミン結合ペプチドである、本発明1109の方法。
[本発明1111]
前記MTaseが抗体にコンジュゲートされている、本発明1099~1110のいずれかの方法。
[本発明1112]
前記患者がヒト患者である、本発明1099~1111のいずれかの方法。
[本発明1113]
前記製剤が、吸入により、注射により、注入により、連続注入により、標的細胞を直接浸す局所潅流により、カテーテルを介して、または洗浄により、腫瘍内投与、静脈内投与、皮内投与、動脈内投与、腹腔内投与、病巣内投与、頭蓋内投与、関節内投与、前立腺内投与、胸膜内投与、気管内投与、眼内投与、鼻孔内投与、硝子体内投与、腟内投与、直腸内投与、筋肉内投与、皮下投与、結膜下投与、膀胱内投与、粘膜投与、心膜内投与、臍帯内投与、経口投与される、本発明1099~1112のいずれかの方法。
[本発明1114]
薬学的に許容できる担体中にMTaseポリペプチドを含む有効量の医薬製剤で治療するためのSCIDを有する患者を選択するための方法であって、
(a)前記患者が、アデノシンデアミナーゼ遺伝子に少なくとも1つの変異を有するか否かを判定することと、
(b)前記患者がアデノシンデアミナーゼ遺伝子に少なくとも1つの変異を有する場合、治療のために前記患者を選択することと
を含み、前記MTaseポリペプチドが、配列番号1または3に対して少なくとも90%の同一性を有する配列を含み、前記MTaseポリペプチドがMTase活性を有する、前記方法。
[本発明1115]
薬学的に許容できる担体中の有効量のMTaseポリペプチドを、前記選択した患者に投与することを更に含む、本発明1114の方法。
[本発明1116]
前記MTaseポリペプチドが配列番号1または3に対して少なくとも95%の同一性を有し、前記ポリペプチドがMTase活性を有する、本発明1114または1115の方法。
[本発明1117]
前記MTaseポリペプチドが配列番号1または3の配列を有する、本発明1116の方法。
[本発明1118]
前記MTaseが原核生物のMTANであり、前記原核生物のMTANが、配列番号3に対して少なくとも95%同一のアミノ酸配列を含み、かつMTase活性を有する、本発明1116の方法。
[本発明1119]
前記MTaseがヒトMTAPであり、前記ヒトMTAPが、配列番号1に対して少なくとも95%同一のアミノ酸配列を含み、かつMTase活性を有する、本発明1116の方法。
[本発明1120]
前記MTaseポリペプチドが、配列番号3の配列を有する原核生物のMTANである、本発明1117の方法。
[本発明1121]
前記MTaseポリペプチドが、配列番号1の配列を有する原核生物のMTAPである、本発明1117の方法。
[本発明1122]
前記MTaseがポリエチレングリコール(PEG)と結合している、本発明1114~1121のいずれかの方法。
[本発明1123]
前記MTaseが、1つ以上のLysまたはCys残基を介してPEGと結合している、本発明1122の方法。
[本発明1124]
前記MTaseが異種ペプチドセグメントを更に含む、本発明1099~1123のいずれかの方法。
[本発明1125]
前記異種ペプチドセグメントがXTENペプチド、IgG Fc、アルブミン、またはアルブミン結合ペプチドである、本発明1124の方法。
[本発明1126]
前記MTaseが抗体にコンジュゲートされている、本発明1099~1125のいずれかの方法。
[本発明1127]
前記患者がヒト患者である、本発明1099~1126のいずれかの方法。
[本発明1128]
前記製剤が、吸入により、注射により、注入により、連続注入により、標的細胞を直接浸す局所潅流により、カテーテルを介して、または洗浄により、腫瘍内投与、静脈内投与、皮内投与、動脈内投与、腹腔内投与、病巣内投与、頭蓋内投与、関節内投与、前立腺内投与、胸膜内投与、気管内投与、眼内投与、鼻孔内投与、硝子体内投与、腟内投与、直腸内投与、筋肉内投与、皮下投与、結膜下投与、膀胱内投与、粘膜投与、心膜内投与、臍帯内投与、経口投与される、本発明1099~1127のいずれかの方法。
本発明の他の目的、特徴および利点は、以下の詳細な説明から明らかになるだろう。しかし、本発明の趣旨および範囲内での種々の変化および変更が、この詳細の説明より当業者には明らかとなるため、詳細の説明および特定の実施例は、本発明の好ましい実施形態を示しているものの、実例としてのみ与えられることが理解されなければならない。
本発明は、腫瘍微小環境中、および/または血液中で、MTAおよび/またはADOを特異的に枯渇させるための酵素の使用を開示する。MTA/ADO枯渇酵素を使用して、MTAP欠損またはプロモーター抑制MTAPを有する腫瘍の処理のために、MTA/ADO濃度を低下させることで、腫瘍が媒介する寛容原性効果を防止し、代わりに、腫瘍切断プロ炎症性応答を媒介する。MTA/ADO枯渇酵素はまた、腫瘍が、CD39の量を増加して発現する癌患者、および/または、疾患が、アデノシンデアミナーゼ遺伝子の変異と関連する、CD73もしくはSCID患者の治療のためにも使用される。そのために、本発明は、アデノシンデアミナーゼの変異により引き起こされる癌またはSCIDなどの疾患を治療するための、MTA/ADOを分解する治療用酵素の使用方法を提供する。これらの方法は、腫瘍微小環境から、および/または血液循環から、MTA/ADOを取り除く。
本明細書で使用する場合、用語「タンパク質」および「ポリペプチド」とは、ペプチド結合を介して結合したアミノ酸を含む化合物を意味し、これらは同じ意味で用いられる。
ヒトは、機能がポリアミン合成の副生物であるメチルチオアデノシン(MTA)の、メチルチオリボース-1’-ホスフェート(MTR-1’-P)およびアデニンへの転換を触媒することである、メチルチオアデノシンホスホリラーゼ(MTAP)と呼ばれる酵素を有する。原核生物は、メチルチオアデノシンヌクレオシダーゼ(MTAN)と呼ばれる酵素を有し、これは、ポリアミン合成の副産物であるメチルチオアデノシン(MTA)の、メチルチオリボース(MTR)およびアデニンへの転換を触媒する機能を持つ。これらの酵素は、アデノシン(ADO)を分解することもまた可能である。
特定の態様において、MTA/ADOを分解する酵素と共に、ポリペプチドを癌またはSCIDなどの疾患の治療に使用することができる。そのために、MTA/ADO分解活性を有するMTaseを使用する治療方法を、本明細書で提供する。いくつかの実施形態では、治療効果を増加させるための、MTA/ADO分解活性を有する酵素を本明細書において提供する。抗癌応答は、腫瘍増殖の阻害;腫瘍細胞死の誘導;腫瘍の退縮;腫瘍再発、腫瘍増殖、腫瘍拡大の防止もしくは遅延;または腫瘍の除去であることができる。
本発明の組成物および方法は、例えば、異種ペプチドセグメントまたはポリマー(例えばポリエチレングリコール)とコンジュゲートを形成することによる改変MTaseを伴う。更なる態様において、MTaseをPEGに結合させ、酵素の流体力学的半径を増加させることにより血清耐性を増加させることができる。特定の態様において、開示したポリペプチドを、任意の標的化剤、例えば、特異的に、そして安定して、標的細胞の外部受容体または結合部位に結合する能力を有するリガンド(例えば、米国特許出願公開第2009/0304666号)とコンジュゲートしてよい。
本発明の特定の実施形態は、融合タンパク質に関する。これらの分子は、NまたはC末端にて異種ドメインに結合した、改変MTaseを有することができる。例えば、融合には他の種からのリーダー配列もまた用いて、異種宿主におけるタンパク質の組み換え発現を可能にすることができる。別の有用な融合としては、タンパク質親和性タグ(例えば血清アルブミン親和性タグもしくは6個のヒスチジン残基)、または、好ましくは切断可能であり、融合タンパク質の精製を促進する免疫活性ドメイン(例えば抗体エピトープ)の付加が挙げられる。非限定的な親和性タグとしては、ポリヒスチジン、キチン結合タンパク質(CBP)、マルトース結合タンパク質(MBP)、およびグルタチオン-S-トランスフェラーゼ(GST)が挙げられる。
特定の実施形態において、MTaseは、二官能性架橋試薬を用いて化学的にコンジュゲートされるか、またはペプチドリンカーによりタンパク質レベルで融合されることができる。
特定の本発明の態様において、MTaseのPEG化に関係する方法および組成物が開示される。例えば、本明細書で開示される方法に従いMTaseをPEG化することができる。
特定の実施形態において、本発明は、少なくとも1種のタンパク質またはペプチド、例えばMTaseを含む新規組成物に関する。これらのペプチドは、融合タンパク質に含まれるか、または上述の作用物質にコンジュゲートされてよい。
ある種の本発明の態様において、MTaseをコードする核酸配列またはMTaseを含有する融合タンパク質が開示され得る。使用する発現系に応じて、核酸配列を、従来の方法に基づいて選択することができる。例えば、MTaseが霊長類MTAPまたは原核生物のMTANに由来し、E.coliではほとんど利用されない複数のコドンを含有する場合、このことは、発現を妨げる場合がある。したがって、対応する遺伝子またはその多様体は、E.coliの発現に最適化されたコドンであってよい。様々なベクターもまた使用して、対象のタンパク質、例えばMTaseを発現することができる。例示的なベクターとしては、プラスミドベクター、ウイルスベクター、トランスポゾン、またはリポソーム系ベクターが挙げられるが、これらに限定されない。
宿主細胞は、MTaseとそのコンジュゲートの発現および分泌を可能にするよう形質転換され得る、任意の宿主細胞であってよい。宿主細胞は細菌、哺乳類細胞、酵母菌、または糸状菌であってよい。様々な細菌としては、EscherichiaおよびBacillusが挙げられる。Saccharomyces、Kiuyveromyces、Hansenula、またはPichia属に属する酵母菌は、適切な宿主細胞としての使用が見出される。以下の属を含む様々な種の糸状菌を、発現宿主として使用してよい:Aspergillus、Trichoderma、Neurospora、Penicillium、Cephalosporium、Achlya、Podospora、Endothia、Mucor、Cochliobolus、およびPyricularia。
タンパク質の精製技術は当業者には周知である。これらの技術は、あるレベルにおいて、細胞、組織または臓器の、ポリペプチドおよび非ポリペプチド画分への、均質化および粗分画を伴う。別途記載のない限り、対象のポリペプチドを、クロマトグラフおよび電気泳動技術を使用して更に精製し、部分的または完全な精製(または、精製による均質化)をもたらすことができる。純粋なペプチドの調製に特に適している分析方法は、イオン交換クロマトグラフィー、ゲル排除クロマトグラフィー、ポリアクリルアミドゲル電気泳動、親和性クロマトグラフィー、イムノアフィニティークロマトグラフィー、および等電点電気泳動である。特に効率的なペプチドの精製方法は、高速液体クロマトグラフィー(FPLC)、または更に高性能液体クロマトグラフィー(HPLC)である。
MTaseは、全身投与または局所投与し得ると企図されている。これらは、静脈内投与、髄腔内投与、および/または腹腔内投与することができる。
特定の実施形態において、本実施形態の組成物および方法は、第2の、または追加の治療法と組み合わせたMTaseの投与を伴う。併用療法を含む方法および組成物は、治療効果もしくは予防効果を高め、かつ/または別の治療の治療効果を増加させる。治療および予防方法および組成物を、所望の効果を達成するのに有効な組み合わせた量で提供することができる。本プロセスには、MTaseおよび第2の治療法の両方を投与することを伴ってよい。組織、臓器、または細胞を、1種以上の作用物質(即ち、MTaseもしくは第2の作用物質)を含む、1種以上の組成物または薬理学製剤(複数可)に曝露することができる、または、組織、臓器、および/もしくは細胞と、2種以上の異なる組成物もしくは配合物と接触させることができ、ここで、1つの組成物は、1)MTase、2)第2の作用物質、または3)MTaseと第2の作用物質の両方を提供する。また、このような併用療法を、外科療法と組み合わせて使用することができると企図されている。
多種多様な化学療法剤を、本発明の実施形態にしたがって使用してもよい。「化学療法」との用語は、癌を治療するための薬物の使用を指す。「化学療法剤」は、癌の治療において投与される化合物または組成物を暗示するために使用される。これらの作用物質または薬剤は、例えば、細胞周期に影響を与える段階で、細胞内のこれらの活性態様に分類される。または、ある作用物質は、DNAを直接的に架橋する能力、DNAにインターカレーションする能力、または核酸合成を行うことによって染色体および有糸分裂の異常を誘発する能力に基づいて特徴付けられてもよい。
DNA損傷を引き起こし、広範囲に使用されてきた他の因子としては、γ線、X腺として一般的に知られているもの、および/または腫瘍細胞への放射線同位体の指向性送達が挙げられる。マイクロ波、プロトンビーム照射(米国特許第5,760,395号および同第4,870,287号)、ならびにUV照射など、DNA損傷因子の他の形態も想定される。これらの因子の全てが、DNAに対し、DNAの前駆体に対し、DNAの複製および修復に対し、染色体のアセンブリおよび管理に対し、広範囲の損傷を与える可能性が最も高い。X線の投薬範囲は、長期間にわたって(3~4週間)1日線量が50~200レントゲンから、1回の線量が2000~6000レントゲンまでの範囲である。放射線同位体の投薬範囲は、非常に様々であり、同位体の半減期、発せられる放射線の強度および種類、新生物性細胞による取り込みに依存する。
当業者は、免疫療法を、実施形態の方法と組み合わせて、または共に使用してよいことを理解するであろう。癌治療の観点で、免疫療法は、一般的に、癌細胞を標的とし、破壊するための免疫エフェクター細胞および分子の使用に依存する。リツキシマブ(RITUXAN(登録商標))は、このような一例である。免疫エフェクターは、例えば、腫瘍細胞表面にあるいくつかのマーカーに特異的な抗体であってもよい。抗体のみが、治療のエフェクターとして役立ってもよく、または細胞の殺傷に実際に影響を与えるように、他の細胞を動員してもよい。抗体はまた、薬剤または毒素(化学療法薬、放射性核種、リシンA鎖、コレラ毒素、百日咳毒素など)に抱合され、単に標的化剤として役立ってもよい。または、エフェクターは、腫瘍細胞標的と直接的または間接的に相互作用する表面分子を保有するリンパ球であってもよい。種々のエフェクター細胞は、細胞傷害性T細胞およびNK細胞を含む。
癌を有するヒトの約60%が、いくつかの外科手術を受けており、予防手術、診断手術、または病気診断、治療、緩和の手術が含まれる。治療の手術は、癌組織の全てまたは一部を物理的に除去し、切除し、および/または破壊する切除術を含み、他の治療、例えば、本発明の実施形態の治療、化学療法、放射線療法、ホルモン療法、遺伝子療法、免疫療法および/または代替療法などと組み合わせて使用されてもよい。腫瘍切除は、腫瘍の少なくとも一部の物理的な除去を指す。腫瘍切除に加え、外科手術による治療としては、レーザー手術、凍結手術、電気手術、および顕微鏡下手術(モース手術)が挙げられる。
他の作用物質を、治療の治療効能を高めるために、本発明の実施形態の特定の態様と組み合わせて使用してもよいことが想定される。これらの更なる作用物質としては、細胞表面受容体およびGAP接合部の上方制御に影響を与える作用物質、細胞増殖抑制剤および分化剤、細胞接着阻害剤、アポトーシス誘発剤に対する過剰増殖性細胞の感度を高める作用物質、または他の生物学的作用物質が挙げられる。GAP接合部の数を増やすことによる、細胞内シグナル伝達の増加は、隣接する過剰増殖する細胞集団に対する抗過剰増殖効果を高めるだろう。他の実施形態では、治療の抗過剰増殖効能を高めるために、細胞増殖抑制剤および分化剤を、本発明の実施形態の特定の態様と組み合わせて使用してもよい。細胞接着の阻害剤は、本発明の実施形態の効能を高めると考えられる。細胞接着阻害剤の例は、焦点接着キナーゼ(FAK)阻害剤およびロバスタチンである。過剰増殖性細胞のアポトーシスに対する感度を高める他の作用物質、例えば、抗体c225を、治療効能を向上させるために、本発明の実施形態の特定の態様と組み合わせて使用してもよいことが更に想定される。
本発明の特定の態様は、治療用キットなどのキットを提供してよい。例えば、キットは、本明細書に記載した1種以上の医薬組成物、および場合により、それらの使用のための取扱説明書を含んでよい。キットは、このような組成物の投与を成し遂げるための、1種以上のデバイスを更に含んでよい。例えば、対象キットは、医薬組成物、および組成物を癌性腫瘍の直接静脈内注射を達成するためのカテーテルを含んでよい。別の実施形態において、対象キットは、送達デバイスと共に使用するために、MTaseが予充填された、場合により薬剤として製剤化された、または凍結乾燥したアンプルを含んでよい。
以下の実施例は、本発明の好ましい実施形態を示すために含まれている。以下の実施例に開示される技術は、本発明の実施において十分に機能するように本願発明者によって開発された技術を表し、そのため、その実施のための好ましい態様を構成すると考えることができることが、当業者によって理解されるべきである。しかし、当業者は、本開示の観点で、開示される具体的な実施形態において、本発明の精神および範囲から逸脱することなく、同じまたは同様の結果が依然として得られる多くの変更をなし得ることを理解するべきである。
IDTソフトウェアを使用して設計した、E.coliコドン最適化遺伝子ブロックのオーバーラップ伸長ポリメラーゼ連鎖反応(PCR)により、Homo sapiens由来のMTAP酵素(hs-MTAP;配列番号1)の発現のための遺伝子を構築した。完全長遺伝子は、N末端NcoI制限酵素部位、N末端His6タグ、E.coliコドン最適化hs-MTAP遺伝子、終止コドン、および、C末端EcoRI制限酵素部位を含む。上述の制限酵素部位を使用して、組み立てた遺伝子をpET-28a+ベクター(Novagen)内にクローニングした。この構築物を使用して次に、発現用のBL21(DE3)E.coliを形質転換した。細胞を、50mg/Lのカナマイシンを含むTerrific Broth(TB)培地内で210rpmで振盪しながら、37℃で増殖させた。OD600が約1.0に到達した際に、IPTG(0.5mMの終濃度)を加え、37℃で引き続き一晩撹拌することにより発現を誘発した。次に、細胞を遠心分離により回収し、50mMのリン酸ナトリウム(pH7.4)、300mMのNaCl、1mMのフッ化フェニルメチルスルホニル、および1μg/mLのDNaseからなる細胞溶解緩衝液内に再懸濁させた。細胞溶解をフレンチプレスにより完了させ、溶解物を20,000×gで4℃にて1時間遠心分離することにより、微粒子をきれいにした。次に上清を5μmの注射器フィルターに通して濾過し、50mMのリン酸ナトリウム(pH7.4)、300mMのNaCl中で予め平衡化したNi-NTA/アガロースカラム(Qiagen)にアプライした。溶解物をカラム上にロードした後、樹脂を5カラム体積(CV)の50mMのリン酸ナトリウム(pH7.4)、300mMのNaCl、20mMのイミダゾール緩衝液で洗浄した。次に、細菌発現系での典型的な汚染物質であるあらゆるリポ多糖体(LPS、即ち内毒素)を取り除くために、1%v/vTriton-X114を含有する、100CVの内毒素非含有のPBS(Corning)で、カラムをゆっくりと洗浄するように流速を設定した。洗浄した酵素を次に、250mMのイミダゾールを含む内毒素非含有のPBS(5CV)に溶出し、樹脂を、内毒素非含有PBSの第2の部分(5CV)で洗い流した。この時点で、酵素を新鮮なPBSに緩衝液交換してイミダゾールを取り除き、10%グリセロールを添加した。保存のために、アリコートを液体窒素中で-80℃で急速に凍結した。あるいは、酵素の緩衝液を速やかに、新鮮に作られた滅菌した100mMのリン酸ナトリウム(pH8.4)に交換して、共にイミダゾールを取り除き、PEG化のために調製した(実施例3に記載)。SDS-PAGE分析に基づくと通常の酵素純度は>95%であり、典型的な収率は平均で65mg/Lの培養物であった。Abs280nmを測定し、計算した酵素減衰係数29,950M-1cm-1を使用してタンパク質の量を測定した。
IDT製のソフトウェアを使用して設計した、E.coliコドン最適化遺伝子ブロックのオーバーラップ伸長ポリメラーゼ連鎖反応(PCR)により、サルモネラ・エンテリカからのMTAN酵素(se-MTAN;配列番号3)の発現のための遺伝子を得た。完全長遺伝子は、N末端NcoI制限酵素部位、N末端His6タグ、E.coliコドン最適化se-MTAN遺伝子、終止コドン、および、C末端EcoRI制限酵素部位を含む。上述の制限酵素部位を使用して、組み立てた遺伝子をpET-28a+ベクター(Novagen)内にクローニングした。この構築物を使用して次に、発現用のBL21(DE3)E.coliを形質転換した。細胞を、50mg/Lのカナマイシンを含むTerrific Broth(TB)培地内で210rpmで振盪しながら、37℃で増殖させた。OD600が約1.0に到達した際に、IPTG(0.5mMの終濃度)を加え、37℃で引き続き一晩撹拌することにより発現を誘発した。次に、細胞を遠心分離により回収し、50mMのリン酸ナトリウム(pH7.4)、300mMのNaCl、1mMのフッ化フェニルメチルスルホニル、および1μg/mLのDNaseからなる細胞溶解緩衝液内に再懸濁させた。細胞溶解をフレンチプレスにより完了させ、溶解物を20,000×gで4℃にて1時間遠心分離することにより、微粒子をきれいにした。次に上清を5μmの注射器フィルターに通して濾過し、50mMのリン酸ナトリウム(pH7.4)、300mMのNaCl中で予め平衡化したNi-NTA/アガロースカラム(Qiagen)にアプライした。溶解物をカラム上にロードした後、樹脂を5カラム体積(CV)の50mMのリン酸ナトリウム(pH7.4)、300mMのNaCl、20mMのイミダゾール緩衝液で洗浄した。次に、細菌発現系での典型的な汚染物質であるあらゆるリポ多糖体(LPS、即ち内毒素)を取り除くために、1%v/vTriton-X114を含有する、100CVの内毒素非含有のPBS(Corning)で、カラムをゆっくりと洗浄するように流速を設定した。洗浄した酵素を次に、250mMのイミダゾールを含む内毒素非含有のPBS(5CV)に溶出し、樹脂を、内毒素非含有PBSの第2の部分(5CV)で洗い流した。この時点で、酵素を新鮮なPBSに緩衝液交換してイミダゾールを取り除き、10%グリセロールを添加した。保存のために、アリコートを液体窒素中で-80℃で急速に凍結した。あるいは、酵素の緩衝液を速やかに、新鮮に作られた滅菌した100mMのリン酸ナトリウム(pH8.4)に交換して、共にイミダゾールを取り除き、PEG化のために調製する(実施例4に記載)。SDS-PAGE分析に基づくと通常の酵素純度は>5%であり、典型的な収率は平均で70mg/Lの培養物であった。Abs280nmを測定し、計算した酵素減衰係数6,210M-1cm-1を使用してタンパク質の量を測定した。
インビボでのヒト酵素の循環時間を向上させるために、hs-MTAPの流体力学的半径を、タンパク質内の表面反応性基をPEGにコンジュゲートすることにより官能化することで増加させた。一実施形態では、表面リジン残基をメトキシPEGサクシニミジルカーボネート5000MW(NANOCS)と反応させることによりhs-MTAPを官能化させた。精製した内毒素非含有酵素の緩衝液を、新鮮に調製した100mMのリン酸ナトリウム(pH8.4)に完全に交換し、5mg/mLに濃縮した。得られた溶液を、100:1でモル過剰の固体PEG試薬に直接加え、室温で1時間反応させた(図1)。100kDaのカットオフ遠心分離濾過装置(Amicon)内で緩衝液を新鮮な内毒素非含有のPBSに完全に交換することにより、未反応のPEGを溶液から取り除いた。Chromo-LALカイネティック比色式内毒素試験キット(Associates of Cape Cod,Inc.)を使用して内毒素の濃度を定量化した。上述の方法で洗浄した酵素は通常、精製したhs-MTAPにおいて<10EU/mgの内毒素レベルが得られた。
Salmonella酵素のインビボでの循環滞留時間を改善するために、se-MTANの流体力学的半径を、タンパク質内の表面反応性基をPEGにコンジュゲートすることにより官能化することで増加させた。一実施形態では、表面リジン残基をメトキシPEGサクシニミジルカーボネート5000MW(NOF Corporation)と反応させることによりse-MTANを官能化させた。精製した内毒素非含有酵素の緩衝液を、新鮮に調製した100mMのリン酸ナトリウム(pH8.4)に完全に交換し、5mg/mLに濃縮した。得られた溶液を、100:1でモル過剰の固体PEG試薬に直接加え、室温で1時間反応させた(図2)。100kDaのカットオフフィルター(Amicon)内で緩衝液を新鮮な内毒素非含有のPBSに完全に交換することにより、未反応のPEGを溶液から取り除いた。Chromo-LALカイネティック比色式内毒素試験キット(Associates of Cape Cod,Inc.)を使用して内毒素の濃度を定量化した。上述の方法で洗浄した酵素は通常、精製したse-MTANにおいて<10EU/mgの内毒素レベルが得られた。
分光光度アッセイにより、se-MTANおよびhs-MTAPの動態パラメータを定量化した。ここでは、酵素基質であるMTAの最大吸光度の減衰を、他の箇所で記載したとおりに時間の関数として監視した。(Singh et al.,2004)PBS(pH7.4)中でMTA溶液を調製し、6μM~200μMの範囲の終濃度を得た。MTAは、275nmのλmaxにおいて、このMTAP/MTAN分解生成物のアデニンから、1,600M-1cm-1の減衰係数の変化がある一方で、反応の他の生成物であるメチルチオリボース-1’-ホスフェート/メチルチオリボースは、275nmにて認識可能な程度にて吸収しない。酵素溶液(最終は約10nM)を加えることにより反応を開始し、酵素溶液を基質溶液と混合し、37℃における基質MTAの喪失を、時間の経過と共にAbs275nmを測定することにより監視した。得られたデータを加工し、反応速度定数を決定するためのミカエリス・メンテン式に当てはめた。これらの条件下にて、hs-MTAP酵素の動態は、1.0×105M-1s-1のkcat/KMを有することが分かり、se-MTANは、3.0×105M-1s-1のkcat/KMを有することが分かった。
精製したhs-MTAPおよびse-MTAN酵素の動態安定性を、酵素を37℃にて100mMのリン酸緩衝液(pH7.4)中でインキュベートすることにより測定した。4日間にわたって、hs-MTAPおよびse-MTANのアリコートをインキュベーションから取り除き、実施例5に記載したMTAの分解能を評価した。得られたデータを処理し、指数方程式に当てはめて減衰率を測定した。これらの条件下にて、hs-MTAP酵素は57時間の半減期(T1/2)を有することが分かり(図3)、se-MTANは56時間の、同様のT1/2を有することが分かった(図4)。
健全な8週齢のC57BL6マウスから解剖した脾臓を、70μmのFalcon(商標)で粉砕して単一細胞を得、これを、EasySep(商標)Mouse T-Cell Isolation Kit(Stem Cell)を使用して、更に単離した。単離したT細胞を、PBS中で1×106cells/mLの濃度にし、各細胞分裂による染料希釈に応じた増殖として測定する、CellTrace(商標)Violet Cell Proliferation Kitプロトコル(Thermo Fisher)に従い処理した。標識した細胞を次に再計数し、1×106cells/mLのRPMI培地に移動して、1mL/ウェルで配置し、この後、キットのプロトコルに従い、抗CD3/CD28ビーズ(Thermo Fisher製の、T細胞膨張および活性化用のDynabeads(登録商標)Mouse T-Activator CD3/CD28)を添加して、T細胞を活性化した。続いて、3つの異なるMTA濃度(0μMのMTA、125μMのMTA、または250μMのMTA)を、配置した細胞に添加した。最後に、MTAPおよびMTANを、5μM酵素の終濃度において適切なウェルに添加し、PBSを対照ウェルに添加した。5日間インキュベーションした後、細胞を収集して抗CD3、抗CD4、抗CD8、およびFixable Viability Dye eFluor(商標)520で染色し、FACSにより分析した。使用した抗体は、全てBiolegend製であった:PE抗マウスCD3(17A2)、APC抗マウスCD4(GK1.5)、APC/Fire(商標)750抗マウスCD8a(53-6.7)、およびBrilliant Violet 421(商標)抗マウスKi-67(16A8)。Thermo FisherからFixable Viability Dye eFluor(商標)520を購入した。
皮下脇腹注射により、非常に侵襲性のL1210マウス白血病細胞株の、5×104細胞を、DBA/2マウス(n=17)にそれぞれ播種した。更なる8日間で腫瘍を確立させた後(腫瘍平均=90mm3)、マウスを2つの群に分けた。腫瘍のサイズが≧2500mm3に達するまで、3日ごとの腫瘍周囲注射により、対照群(n=8)をPBSビヒクル対照で処理した。腫瘍のサイズが≧2500mm3のエンドポイントに達するまで、3日ごとの腫瘍範囲注射により、50mg/kgの活性PEG-se-MTANで処理したことを除いて、実験群(n=9)を同じ方法で処理した。L1210白血病腫瘍の増殖速度は、ビヒクル対照群と比較して、PEG-se-MTANを投与した治療群で3.5倍著しく遅くなり(図6A)、統計的に有意な寿命延長(p<0.0035)がもたらされた(図6B)。
いくつかの態様では、本発明はまた、異種アミノ酸配列に結合した改変細菌MTANまたは哺乳類のMTAPを含むポリペプチドを企図する。例えば、天然または改変MTAN/MTAPは、特異的細胞表面腫瘍抗原を結合する一本鎖可変断片(scFv)抗体に結合してよい。本実施形態において、既知の腫瘍抗原、好ましくは、より低速で内在化する腫瘍特異的抗原、例えばMUC-1に対して特異的親和性を有するタンパク質のscFv部分とのscFv-MTAP/MTAN融合タンパク質は、融合タンパク質のMTAN/MTAP部分が腫瘍細胞に送達され、MTAを分解することを可能にさせる。一例は、scFv部分が、ある種の乳癌において上方制御されるヒト上皮成長因子受容体2(HER2)を標的化して結合する、scFv-MTAN/MTAP融合タンパク質である。本実施形態において、天然または改変MTAN/MTAP-抗HER2-scFv融合タンパク質は、MTAN/MTAPを腫瘍表面に直接標的化して濃縮する役割を果たし、腫瘍が産生したMTAを分解する役割を果たす。
いくつかの態様では、本発明はまた、異種アミノ酸配列に結合した改変細菌MTANまたは哺乳類のMTAPを含むポリペプチドを企図する。例えば、天然または改変MTAP/MTANは、TヘルパーおよびT制御性細胞上にて細胞毒性Tリンパ球抗原4(CTLA-4)受容体に結合する、一本鎖可変断片(scFv)抗体に結合することができる。T細胞は表面受容体CD28を表し、これは、その共受容体に結合したとき、T細胞活性化のための刺激性シグナルとして機能する。対照的に、表面受容体CTLA-4は、その共受容体に結合したときに、阻害シグナルを、T細胞活性化を下方制御し、T細胞の、癌細胞の認識および攻撃を防止する細胞毒性Tリンパ球(CTL)に伝達する。拮抗化抗体または抗体断片によるCTLA-4の遮断により、阻害性T細胞シグナルの逆転が可能となり、CD28が継続してT細胞活性化を行うことが可能となる。本実施形態において、天然または改変MTAP/MTAN-抗CTLA4-scFv融合タンパク質は、阻害性CTLA-4シグナル伝達と阻害性MTAシグナル伝達の両方を取り除く役割を果たす。別の実施形態において、天然または改変MTAP/MTAN-抗CTLA4-scFv融合タンパク質は、阻害性CTLA-4シグナル伝達と阻害性ADOシグナル伝達の両方を取り除く役割を果たす。天然または改変MTAP/MTAN-抗CTLA4-scFv融合タンパク質の本実施形態は、T細胞活性化を潜在的に上方制御し、抗腫瘍応答を強力に促進することが予想される。
分光光度アッセイにより、se-MTANおよびhs-MTAPの動態パラメータを定量化した。ここでは、酵素基質であるアデノシン(ADO)の最大吸光度の減衰が、時間の関数として監視された。PBS(pH7.4)中でADO溶液を調製し、6μM~800μMの範囲の終濃度を得た。ADOは、275nmのλmaxにおける、このMTAP/MTAN分解生成物のアデニンから、615M-1cm-1の減衰係数の変化を有する一方で、反応の他の生成物であるリボース-1’-ホスフェート/リボースは、275nmにて認識可能な程度にて吸収しない。酵素溶液(最終は約20nM)を加えることにより反応を開始し、酵素溶液を基質溶液と混合し、37℃における基質MTAの喪失を、時間の経過と共にAbs275nmを測定することにより監視した。得られたデータを加工し、反応速度定数を決定するためのミカエリス・メンテン式の形式に当てはめた。これらの条件下にて、hs-MTAP酵素の動態は、5.0×104M-1s-1のkcat/KMを有することが分かり、se-MTANは、1.0×105M-1s-1のkcat/KMを有することが分かった。
L1210同種異系移植片を有するDBA/2マウスの腫瘍および腫瘍流入領域リンパ節(TDLN)からのFACS分析により、リンパ球パネルを観察し、続けて、PEG-MTANまたはビヒクル対照の3つの処理を評価した。PEG-MTAN投与により、インビトロ観察に一致する、CD4+および特にCD8+T細胞にて非常に増殖が強化された、腫瘍浸潤リンパ球(TIL)の集団の大きな増加がもたらされた。(図7A~C)非常に重要なことに、処理したTDLNは、T細胞の大きな増加もまた示し、強化されたT細胞の活性化を示す、骨髄由来細胞の集団の減少(図7D~F)もまた示した。
代謝、および宿主免疫系との相互作用の点において、B16は非常に良く特性決定されている細胞株であるため、この株におけるMTAPの枯渇により、腫瘍および宿主免疫系上の両方に対して代謝的に、MTAが蓄積した結果を評価する、関係するモデルが作られるという仮説が立てられた。ThermoFisherを通して購入したCas9タンパク質(TrueCut(商標)Cas9 Protein v2)および合成一本鎖ガイドRNAを、リポフェクタミン(Lipofectamine(商標)CRISPRMAX(商標)Cas9 Transfection Reagent)を使用して、B16-F10WT細胞にトランスフェクションした。トランスフェクションの2日後、制限希釈法を使用して、10個の96ウェルプレートに細胞を配置した。単一細胞クローンに関してプレートを毎日調査し、コンフルエンシーに達した後(トランスフェクションの10~14日後)、クローンを更に膨張し、ウェスタンブロッティングによりMTAP発現を分析し、MTAP発現を欠くクローンを、クローニングおよび配列決定により遺伝子破壊について確認した。
C57/BL6マウスのそれぞれの2つのコホートに、50,000WT B16-F10またはB16-F10 MTAP-/-細胞のいずれかを、皮下に播種した。55mm3の平均サイズに腫瘍が達したときに、2週間、腫瘍周辺注射により、ビヒクル(PBS)または50mg/kgのPEG-MTAPのいずれかを3回/週で、マウスに処理した。MTAPを非常に発現する腫瘍から予想されるように、WT B16-F10腫瘍の増殖において、PEG-MTAP処理は効果がないことが観察された(図8A)。しかし、PEG-MTAPをB16-F10 MTAP-/-同種異系移植片に投与することによって、腫瘍増殖が劇的に遅くなり、治療群において43%の完全寛解(CR)がもたらされた(3/7のCR)(図8B)。
B16-F10 MTAP-/-腫瘍サンプルを有するC57/BL6マウスをFACS分析して観察されたリンパ球パネルを、2用量のPEG-MTAPまたはビヒクルで処理した後に評価した(投与の24時間後に分析)。処理群は、ビヒクルで処理した対照と比較して、CD4+T細胞およびNK1.1+ナチュラルキラー細胞のパーセンテージの大きな増加、ならびに、増殖CD8+グランザイムB+T細胞のパーセンテージの大きな増加を示した(図9A~C)。
ADOの枯渇による腫瘍増殖の制御、および、抗CTLA4免疫チェックポイント阻害との組み合わせの有効性を評価するために、BALB/Cマウスの4つのコホートに、乳房脂肪パッド内で50,000個の4T1細胞を播種し、腫瘍を確立した。4T1は、腫瘍微小環境にてMTAではなくADOを有することが予想される場合において、MTAPhighCD73+腫瘍細胞である。ビヒクルの、PEG-MTAN(50mg/kg)、抗CTLA4(10mg/kg、クローンUC10-4F10-11、Bio X Cell)のいずれか、またはPEG-MTAN/抗CTLA4の組み合わせで、マウスを処理した。PEG-MTANおよび抗CTLA4単剤群の両方が原発腫瘍増殖を遅らせ、組み合わせはより効果的であり、少なくとも治療上の加算性を示す(図10A)。4T1は転移性肺腫瘍を形成するため、肺組織を調査して、腫瘍のコロニー形成を定量化した。ビヒクル対照群と比較して、処理群は全て、著しく少ない転移性肺腫瘍節を示し(図10B)、転移の際のADOの役割を例示している。
CT26細胞株は、CDKN2に対してホモ接合型ヌルであることが知られており(Castle et al.,2014)、これは通常、MTAPと共に欠損されている。しかし、MTAPは欠損していないが、その発現は非常に損なわれていることが発見された。更に、この細胞株はCD73を発現する(Sun et al.,2017)が故に、腫瘍微小環境においてアデノシンを産生することが予想されている。単剤として、または、抗PD1免疫チェックポイント阻害剤療法と組み合わせて、MTAPlowCD73+腫瘍モデルにおけるADOおよび/またはMTA枯渇の、あらゆる潜在的な有効性を調査するために、CT26腫瘍を有するBalb/cマウスの4つの群を、アイソタイプ対照抗体、PEG-MTAN(50mg/kgで3週)、抗PD-1(クローンRMP1-14、BioXCell # BE0146、10mg/kgで2週)、またはPEG-MTANと抗PD1の組み合わせ(合計2週間)で処理した。対照と比較して、抗PD1およびPEG-MTANは共に、分散不均一効果を誘発したが、重要なことに、両方の単剤群においては、完全な寛解(CR)が得られた。印象的なことに、抗PD1/PEG-MTANの組み合わせは、群全体における腫瘍増殖阻害を示し、加算または相乗効果を示唆する、3つの完全寛解(図11)をもたらした。
Claims (15)
- 酵素の血清半減期を増加させることができる化合物に結合している、メチルチオアデノシンをメチルチオリボース-ホスフェートおよびアデニンに加リン酸分解することができる該酵素を含む、メチルチオアデノシンホスホリラーゼ欠損癌を治療するための組成物であって、
該酵素が配列番号1に対して少なくとも90%の同一性を有する配列を含み、かつ
該酵素の血清半減期を増加させることができる該化合物が、該酵素の流体力学的半径を増加させるポリマーである、組成物。 - 前記酵素の血清半減期を増加させることができる前記化合物がポリエチレングリコールである、請求項1に記載の組成物。
- 前記ポリエチレングリコールが、前記酵素の1つ以上のリジン残基へのコンジュゲーションを介して前記酵素に結合している、請求項2に記載の組成物。
- 腫瘍を有する患者の治療における使用のための、配列番号1と少なくとも90%の同一性を有する配列を含む有効量のメチルチオアデノシンホスホリラーゼを含む組成物。
- 前記メチルチオアデノシンホスホリラーゼが、前記メチルチオアデノシンホスホリラーゼの血清半減期を増加させることができる化合物に結合している、請求項4に記載の組成物。
- 前記メチルチオアデノシンホスホリラーゼがポリエチレングリコールにコンジュゲートしている、請求項5に記載の組成物。
- 有効量の第2の抗癌治療法と組み合わせて用いられる、請求項6に記載の組成物。
- 前記第2の抗癌治療法が免疫チェックポイント阻害剤である、請求項7に記載の組成物。
- 前記免疫チェックポイント阻害剤が、抗PD1抗体、抗CTLA4抗体、または抗PD-L1抗体である、請求項8に記載の組成物。
- 前記腫瘍が以下を含む、請求項5に記載の組成物:
(a)メチルチオアデノシンホスホリラーゼ遺伝子の欠失、
(b)参照レベルに対して増加したレベルのメチルチオアデノシン、または
(c)参照レベルに対して低下したレベルのメチルチオアデノシンホスホリラーゼ。 - 前記メチルチオアデノシンホスホリラーゼ遺伝子の欠失が、染色体バンド9p21における相同な遺伝子欠失を含む、請求項10に記載の組成物。
- 前記参照レベルが、前記患者の健全な組織におけるレベルである、請求項10に記載の組成物。
- 前記参照レベルが、健全な個体におけるレベルである、請求項10に記載の組成物。
- 腫瘍を有する患者の治療における使用のための、配列番号1と少なくとも90%の同一性を有する配列を含む有効量の酵素を含む組成物であって、
前記腫瘍が、メチルチオアデノシンホスホリラーゼ遺伝子の染色体9p21における相同な遺伝子欠失を含み、かつ
前記酵素が、メチルチオアデノシンをメチルチオリボース-ホスフェートおよびアデニンに加リン酸分解することができる、組成物。 - 前記酵素が、前記酵素の1つ以上のリジン残基を介してポリエチレングリコールにコンジュゲートしている、請求項14に記載の組成物。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2022009836A JP7313497B2 (ja) | 2017-12-21 | 2022-01-26 | アデノシンおよび/またはメチルチオアデノシンの酵素媒介枯渇方法 |
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201762609000P | 2017-12-21 | 2017-12-21 | |
US62/609,000 | 2017-12-21 | ||
PCT/US2018/066731 WO2019126455A1 (en) | 2017-12-21 | 2018-12-20 | Enzyme-mediated depletion of adenosine and/or methylthioadenosine |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2022009836A Division JP7313497B2 (ja) | 2017-12-21 | 2022-01-26 | アデノシンおよび/またはメチルチオアデノシンの酵素媒介枯渇方法 |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2021506320A JP2021506320A (ja) | 2021-02-22 |
JP2021506320A5 JP2021506320A5 (ja) | 2022-01-06 |
JP7016958B2 true JP7016958B2 (ja) | 2022-02-07 |
Family
ID=66993826
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2020534518A Active JP7016958B2 (ja) | 2017-12-21 | 2018-12-20 | アデノシンおよび/またはメチルチオアデノシンの酵素媒介枯渇方法 |
JP2022009836A Active JP7313497B2 (ja) | 2017-12-21 | 2022-01-26 | アデノシンおよび/またはメチルチオアデノシンの酵素媒介枯渇方法 |
Family Applications After (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2022009836A Active JP7313497B2 (ja) | 2017-12-21 | 2022-01-26 | アデノシンおよび/またはメチルチオアデノシンの酵素媒介枯渇方法 |
Country Status (6)
Country | Link |
---|---|
US (3) | US20210054350A1 (ja) |
EP (1) | EP3727420A4 (ja) |
JP (2) | JP7016958B2 (ja) |
AU (1) | AU2018393093A1 (ja) |
CA (1) | CA3122502A1 (ja) |
WO (1) | WO2019126455A1 (ja) |
Families Citing this family (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP7016958B2 (ja) * | 2017-12-21 | 2022-02-07 | ボード オブ リージェンツ,ザ ユニバーシティ オブ テキサス システム | アデノシンおよび/またはメチルチオアデノシンの酵素媒介枯渇方法 |
CN115244175A (zh) | 2020-01-07 | 2022-10-25 | 得克萨斯大学体系董事会 | 用于癌症治疗的改进的人甲硫腺苷/腺苷消耗酶变体 |
Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2000509247A (ja) | 1996-03-08 | 2000-07-25 | ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア | 悪性メチルチオアデノシンホスホリラーゼ欠損細胞でアデニロコハク酸シンセターゼ活性を抑制する方法 |
WO2004074325A3 (en) | 2003-02-14 | 2005-01-27 | Salmedix Inc | Compositions and methods for the detection and treatment of methylthioadenosine phosphorylase deficient cancers |
JP2009528996A (ja) | 2006-02-24 | 2009-08-13 | インダストリアル リサーチ リミテッド | ヌクレオシドホスホリラーゼ及びヌクレオシダーゼの阻害剤を用いて疾患を処置する方法 |
WO2012131052A1 (en) | 2011-04-01 | 2012-10-04 | Universität Regensburg | A prognostic and therapeutic signature for malignant melanoma |
WO2016038550A1 (en) | 2014-09-11 | 2016-03-17 | Novartis Ag | Inhibition of prmt5 to treat mtap-deficiency-related diseases |
Family Cites Families (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CZ289155B6 (cs) * | 1993-12-29 | 2001-11-14 | The Regents Of The University Of California | Izolovaný polynukleotid, který kóduje methylthioadenosin fosforylázu, expresní vektor a protilátka |
US6870037B1 (en) | 1995-07-03 | 2005-03-22 | Arch Development Corporation | Methylthioadenosine phosphorylase compositions and methods of use in the diagnosis and treatment of proliferative disorders |
CN1321765A (zh) * | 2000-04-29 | 2001-11-14 | 上海博德基因开发有限公司 | 一种新的多肽——人甲硫基腺苷磷酸化酶37和编码这种多肽的多核苷酸 |
GB0620715D0 (en) * | 2006-10-18 | 2006-11-29 | Univ Durham | Ethanol production |
JP7016958B2 (ja) * | 2017-12-21 | 2022-02-07 | ボード オブ リージェンツ,ザ ユニバーシティ オブ テキサス システム | アデノシンおよび/またはメチルチオアデノシンの酵素媒介枯渇方法 |
-
2018
- 2018-12-20 JP JP2020534518A patent/JP7016958B2/ja active Active
- 2018-12-20 CA CA3122502A patent/CA3122502A1/en active Pending
- 2018-12-20 WO PCT/US2018/066731 patent/WO2019126455A1/en unknown
- 2018-12-20 EP EP18890088.0A patent/EP3727420A4/en active Pending
- 2018-12-20 US US16/956,340 patent/US20210054350A1/en not_active Abandoned
- 2018-12-20 AU AU2018393093A patent/AU2018393093A1/en active Pending
-
2020
- 2020-11-17 US US16/950,622 patent/US11118167B2/en active Active
-
2022
- 2022-01-26 JP JP2022009836A patent/JP7313497B2/ja active Active
- 2022-11-10 US US18/054,347 patent/US20230227796A1/en active Pending
Patent Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2000509247A (ja) | 1996-03-08 | 2000-07-25 | ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア | 悪性メチルチオアデノシンホスホリラーゼ欠損細胞でアデニロコハク酸シンセターゼ活性を抑制する方法 |
WO2004074325A3 (en) | 2003-02-14 | 2005-01-27 | Salmedix Inc | Compositions and methods for the detection and treatment of methylthioadenosine phosphorylase deficient cancers |
JP2009528996A (ja) | 2006-02-24 | 2009-08-13 | インダストリアル リサーチ リミテッド | ヌクレオシドホスホリラーゼ及びヌクレオシダーゼの阻害剤を用いて疾患を処置する方法 |
WO2012131052A1 (en) | 2011-04-01 | 2012-10-04 | Universität Regensburg | A prognostic and therapeutic signature for malignant melanoma |
WO2016038550A1 (en) | 2014-09-11 | 2016-03-17 | Novartis Ag | Inhibition of prmt5 to treat mtap-deficiency-related diseases |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
PNAS (1996) Vol.93, pp.6203-6208 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
US20230227796A1 (en) | 2023-07-20 |
EP3727420A4 (en) | 2022-04-06 |
JP2022069441A (ja) | 2022-05-11 |
US11118167B2 (en) | 2021-09-14 |
WO2019126455A1 (en) | 2019-06-27 |
JP7313497B2 (ja) | 2023-07-24 |
US20210054350A1 (en) | 2021-02-25 |
EP3727420A1 (en) | 2020-10-28 |
US20210095264A1 (en) | 2021-04-01 |
CA3122502A1 (en) | 2019-06-27 |
AU2018393093A1 (en) | 2020-08-06 |
JP2021506320A (ja) | 2021-02-22 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP7029316B2 (ja) | 腫瘍の治療のための、キヌレニンを枯渇させる酵素の投与 | |
JP6484634B2 (ja) | Il−15ヘテロ二量体タンパク質及びその用途 | |
JP7080053B2 (ja) | 腫瘍の治療のための、キヌレニンを枯渇させる酵素の投与 | |
KR20160045096A (ko) | 치료적 목적을 위한 조작된 영장류 l-메티오니나제 | |
KR20160046916A (ko) | 항신생물제로서 조작된 영장류 시스틴/시스테인 분해 효소 | |
US20230227796A1 (en) | Enzyme-mediated depletion of adenosine and/or methylthioadenosine | |
US11591579B2 (en) | Human methylthioadenosine/adenosine depleting enzyme variants for cancer therapy | |
TW202011973A (zh) | 人類犬尿胺酸酶及其用途 | |
NZ717492B2 (en) | Administration of kynurenine depleting enzymes for tumor therapy |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20200727 |
|
RD04 | Notification of resignation of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7424 Effective date: 20210121 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20211122 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20211122 |
|
A871 | Explanation of circumstances concerning accelerated examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A871 Effective date: 20211122 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20211227 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20220126 |