JP6992960B2 - キナーゼ阻害剤の用途 - Google Patents
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Description
本発明は、レセプター型チロシンキナーゼ阻害剤である化合物群の用途に関する。具体的には、本発明は、一つまたは複数のキナーゼの機能効果が上昇する一つまたは複数の疾患の治療または予防における、そのような化合物の用途に関する。
ヒトゲノム内で今日までに特定されている全てのプロテインキナーゼは、約３００アミノ酸の高度に保存された触媒ドメインを共有している。このドメインは二葉構造に折り畳まれており、ここにＡＴＰ結合部位および触媒部位は存在している。プロテインキナーゼ制御の複雑さは、活性化リガンドとの競合、正の制御因子および負の制御因子の調節、タンパク質二量体化の妨害、並びに基質結合部位またはＡＴＰ結合部位におけるアロステリックまたは競合的な阻害を含む、多くの潜在的な阻害機構を可能としている。
Ａｘｌ（ＵＦＯ、ＡＲＫ、およびＴｙｒｏ７としても知られている；ヌクレオチド受入番号ＮＭ＿０２１９１３およびＮＭ＿００１６９９；タンパク質受入番号ＮＰ＿０６８７１３およびＮＰ＿００１６９０）は、Ｎ末端細胞外リガンド結合ドメイン、および触媒ドメインを含有するＣ末端細胞質領域を含むレセプター型チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）である。Ａｘｌおよびその２つの近縁種、ＭｅｒＴＫ／ＮｙｋおよびＳｋｙ（Ｔｙｒｏ３／Ｒｓｅ／Ｄｔｋ）（まとめてＲＴＫのＴＡＭファミリーとして知られている）は、全て、凝固カスケード制御因子であるプロテインＳと有意な類似性を有する約７６ｋＤａの分泌タンパク質、Ｇａｓ６（growth arrest specific-6）という同一のリガンドにより、様々な程度に、結合し刺激される。リガンドへの結合に加えて、Ａｘｌ細胞外ドメインは、細胞凝集を媒介する同種親和性相互作用を引き起こすことが示されており、このことは、Ａｘｌの１つの重要な機能が細胞間接着の仲介であり得ることを示唆している。
国際公開第２００８／０８３３６７号では、ある化合物群がＡｘｌの阻害剤として開示されている。このような阻害は抗悪性腫瘍効果をもたらすことが示されている。しかし、Ａｘｌ阻害性化合物が他のキナーゼに対する作用を有し得るという示唆はなされていない。
本発明の第一の態様により、一つまたは複数のキナーゼの活性化、変異および／または過剰発現と関連した疾患の治療、予防または管理に使用するための化合物、その単離された立体異性体もしくは混合物、またはその互変異性体もしくは混合物、またはその薬剤的に許容できる塩もしくはＮ－オキシドが提供され、前記疾患がＡｘｌ過剰発現と関連している場合、前記疾患は一つまたは複数の他のキナーゼの活性化、変異および／または過剰発現とも関連しており、前記化合物は式（Ｉ）の構造を有し、
式中、
Ｒ１、Ｒ４およびＲ５はそれぞれ独立して、水素、アルキル、アルケニル、アリール、アラルキル、－Ｃ（Ｏ）Ｒ８、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ６）Ｒ７、および－Ｃ（＝ＮＲ６）Ｎ（Ｒ６）Ｒ７からなる群から選択され；
Ｒ２およびＲ３はそれぞれ独立して、オキソ、チオキソ、シアノ、ニトロ、ハロ、ハロアルキル、アルキル、置換されていてもよいシクロアルキル、置換されていてもよいシクロアルキルアルキル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいアラルキル、置換されていてもよいヘテロアリール、置換されていてもよいヘテロシクリル、－Ｒ９－ＯＲ８、－Ｒ９－Ｏ－Ｒ１０－ＯＲ８、－Ｒ９－Ｏ－Ｒ１０－Ｏ－Ｒ１０－ＯＲ８、－Ｒ９－Ｏ－Ｒ１０－ＣＮ、－Ｒ９－Ｏ－Ｒ１０－Ｃ（Ｏ）ＯＲ８、－Ｒ９－Ｏ－Ｒ１０－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ６）Ｒ７、－Ｒ９－Ｏ－Ｒ１０－Ｓ（Ｏ）ｐＲ８（式中、ｐは０、１または２である）、－Ｒ９－Ｏ－Ｒ１０－Ｎ（Ｒ６）Ｒ７、－Ｒ９－Ｏ－Ｒ１０－Ｃ（ＮＲ１１）Ｎ（Ｒ１１）Ｈ、－Ｒ９－ＯＣ（Ｏ）－Ｒ８、－Ｒ９－Ｎ（Ｒ６）Ｒ７、－Ｒ９－Ｃ（Ｏ）Ｒ８、－Ｒ９－Ｃ（Ｏ）ＯＲ８、－Ｒ９－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ６）Ｒ７、－Ｒ９－Ｎ（Ｒ６）Ｃ（Ｏ）ＯＲ８、－Ｒ９－Ｎ（Ｒ６）Ｃ（Ｏ）Ｒ８、－Ｒ９－Ｎ（Ｒ６）Ｓ（Ｏ）ｔＲ８（式中、ｔは１または２である）、－Ｒ９－Ｓ（Ｏ）ｔＯＲ８（式中、ｔは１または２である）、－Ｒ９－Ｓ（Ｏ）ｐＲ８（式中、ｐは０、１または２である）、および－Ｒ９－Ｓ（Ｏ）ｔＮ（Ｒ６）Ｒ７（式中、ｔは１または２である）からなる群から選択される一つまたは複数の置換基により置換されていてもよい１５個以上の環原子を含有する多環式ヘテロアリールであり；
あるいは、Ｒ２は上記のような１５個以上の環原子を含有する多環式ヘテロアリールであり、Ｒ３はアリールおよびヘテロアリールからなる群から選択され、ここで前記アリールおよび前記ヘテロアリールはそれぞれ独立して、アルキル、アルケニル、アルキニル、ハロ、ハロアルキル、ハロアルケニル、ハロアルキニル、オキソ、チオキソ、シアノ、ニトロ、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいアラルキル、置換されていてもよいアラルケニル、置換されていてもよいアラルキニル、置換されていてもよいシクロアルキル、置換されていてもよいシクロアルキルアルキル、置換されていてもよいシクロアルキルアルケニル、置換されていてもよいシクロアルキルアルキニル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリルアルキル、置換されていてもよいヘテロシクリルアルケニル、置換されていてもよいヘテロシクリルアルキニル、置換されていてもよいヘテロアリール、置換されていてもよいヘテロアリールアルキル、置換されていてもよいヘテロアリールアルケニル、置換されていてもよいヘテロアリールアルキニル、－Ｒ１３－ＯＲ１２、－Ｒ１３－ＯＣ（Ｏ）－Ｒ１２、－Ｒ１３－Ｏ－Ｒ１４－Ｎ（Ｒ１２）２、－Ｒ１３－Ｎ（Ｒ１２）－Ｒ１４－Ｎ（Ｒ１２）２、－Ｒ１３－Ｎ（Ｒ１２）－Ｒ１４－Ｎ（Ｒ１２）２、－Ｒ１３－Ｎ（Ｒ１２）２、－Ｒ１３－Ｃ（Ｏ）Ｒ１２、－Ｒ１３－Ｃ（Ｏ）ＯＲ１２、－Ｒ１３－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１２）２、－Ｒ１３－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１２）－Ｒ１４－Ｎ（Ｒ１２）Ｒ１３、－Ｒ１３－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１２）－Ｒ１４－ＯＲ１２、－Ｒ１３－Ｎ（Ｒ１２）Ｃ（Ｏ）ＯＲ１２、－Ｒ１３－Ｎ（Ｒ１２）Ｃ（Ｏ）Ｒ１２、－Ｒ１３－Ｎ（Ｒ１２）Ｓ（Ｏ）ｔＲ１２（式中、ｔは１または２である）、－Ｒ１３－Ｓ（Ｏ）ｔＯＲ１２（式中、ｔは１または２である）、－Ｒ１３－Ｓ（Ｏ）ｐＲ１２（式中、ｐは０，１または２である）、および－Ｒ１３－Ｓ（Ｏ）ｔＮ（Ｒ１２）２（式中、ｔは１または２である）からなる群から選択される一つまたは複数の置換基により置換されていてもよく；
あるいは、Ｒ３は上記のような１５個以上の環原子を含有する多環式ヘテロアリールであり、Ｒ２はアリールおよびヘテロアリールからなる群から選択され、ここで前記アリールおよび前記ヘテロアリールはそれぞれ独立して、アルキル、アルケニル、アルキニル、ハロ、ハロアルキル、ハロアルケニル、ハロアルキニル、オキソ、チオキソ、シアノ、ニトロ、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいアラルキル、置換されていてもよいアラルケニル、置換されていてもよいアラルキニル、置換されていてもよいシクロ
アルキル、置換されていてもよいシクロアルキルアルキル、置換されていてもよいシクロアルキルアルケニル、置換されていてもよいシクロアルキルアルキニル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリルアルキル、置換されていてもよいヘテロシクリルアルケニル、置換されていてもよいヘテロシクリルアルキニル、置換されていてもよいヘテロアリール、置換されていてもよいヘテロアリールアルキル、置換されていてもよいヘテロアリールアルケニル、置換されていてもよいヘテロアリールアルキニル、－Ｒ１３－ＯＲ１２、－Ｒ１３－ＯＣ（Ｏ）－Ｒ１２、－Ｒ１３－Ｏ－Ｒ１４－Ｎ（Ｒ１２）２、－Ｒ１３－Ｎ（Ｒ１２）－Ｒ１４－Ｎ（Ｒ１２）２、－Ｒ１３－Ｎ（Ｒ１２）－Ｒ１４－Ｎ（Ｒ１２）２、－Ｒ１３－Ｎ（Ｒ１２）２、－Ｒ１３－Ｃ（Ｏ）Ｒ１２、－Ｒ１３－Ｃ（Ｏ）ＯＲ１２、－Ｒ１３－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１２）２、－Ｒ１３－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１２）－Ｒ１４－Ｎ（Ｒ１２）Ｒ１３、－Ｒ１３－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１２）－Ｒ１４－ＯＲ１２、－Ｒ１３－Ｎ（Ｒ１２）Ｃ（Ｏ）ＯＲ１２、－Ｒ１３－Ｎ（Ｒ１２）Ｃ（Ｏ）Ｒ１２、－Ｒ１３－Ｎ（Ｒ１２）Ｓ（Ｏ）ｔＲ１２（式中、ｔは１または２である）、－Ｒ１３－Ｓ（Ｏ）ｔＯＲ１２（式中、ｔは１または２である）、－Ｒ１３－Ｓ（Ｏ）ｐＲ１２（式中、ｐは０，１または２である）、および－Ｒ１３－Ｓ（Ｏ）ｔＮ（Ｒ１２）２（式中、ｔは１または２である）からなる群から選択される一つまたは複数の置換基により置換されていてもよく；
それぞれのＲ６およびＲ７は独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、ハロアルキル、ハロアルケニル、ハロアルキニル、ヒドロキシアルキル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいアラルキル、置換されていてもよいアラルケニル、置換されていてもよいアラルキニル、置換されていてもよいシクロアルキル、置換されていてもよいシクロアルキルアルキル、置換されていてもよいシクロアルキルアルケニル、置換されていてもよいシクロアルキルアルキニル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリルアルキル、置換されていてもよいヘテロシクリルアルケニル、置換されていてもよいヘテロシクリルアルキニル、置換されていてもよいヘテロアリール、置換されていてもよいヘテロアリールアルキル、置換されていてもよいヘテロアリールアルケニル、置換されていてもよいヘテロアリールアルキニル、－Ｒ１０－ＯＲ８、－Ｒ１０－ＣＮ、－Ｒ１０－ＮＯ２、－Ｒ１０－Ｎ（Ｒ８）２、－Ｒ１０－Ｃ（Ｏ）ＯＲ８および－Ｒ１０－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ８）２からなる群から選択され、あるいは、あらゆるＲ６およびＲ７は、それらが共に結合している共通の窒素と一緒になって、置換されていてもよいＮ－ヘテロアリールまたは置換されていてもよいＮ－ヘテロシクリルを形成し；
各Ｒ８は独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、ハロアルキル、ハロアルケニル、ハロアルキニル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいアラルキル、置換されていてもよいアラルケニル、置換されていてもよいアラルキニル、置換されていてもよいシクロアルキル、置換されていてもよいシクロアルキルアルキル、置換されていてもよいシクロアルキルアルケニル、置換されていてもよいシクロアルキルアルキニル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリルアルキル、置換されていてもよいヘテロシクリルアルケニル、置換されていてもよいヘテロシクリルアルキニル、置換されていてもよいヘテロアリール、置換されていてもよいヘテロアリールアルキル、置換されていてもよいヘテロアリールアルケニル、および置換されていてもよいヘテロアリールアルキニルからなる群から選択され；
各Ｒ９は独立して、直接的な結合、置換されていてもよい直鎖または分岐状のアルキレン鎖、置換されていてもよい直鎖または分岐状のアルケニレン鎖および置換されていてもよい直鎖または分岐状のアルキニレン鎖からなる群から選択され；
各Ｒ１０は独立して、置換されていてもよい直鎖または分岐状のアルキレン鎖、置換されていてもよい直鎖または分岐状のアルケニレン鎖および置換されていてもよい直鎖または分岐状のアルキニレン鎖からなる群から選択され；
各Ｒ１１は独立して、水素、アルキル、シアノ、ニトロおよび－ＯＲ８からなる群から選択され；
各Ｒ１２は独立して、水素、アルキル、アルケニル、ハロアルキル、置換されていてもよいシクロアルキル、置換されていてもよいシクロアルキルアルキル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいアラルキル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリルアルキル、置換されていてもよいヘテロアリール、置換されていてもよいヘテロアリールアルキル、－Ｒ１０－ＯＲ８、－Ｒ１０－ＣＮ、－Ｒ１０－ＮＯ２、－Ｒ１０－Ｎ（Ｒ８）２、－Ｒ１０－Ｃ（Ｏ）ＯＲ８および－Ｒ１０－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ８）２からなる群から選択され、あるいは、２つのＲ１２は、それらが共に結合している共通の窒素と一緒になって、置換されていてもよいＮ－ヘテロシクリルまたは置換されていてもよいＮ－ヘテロアリールを形成し；
各Ｒ１３は独立して、直接的な結合、置換されていてもよい直鎖または分岐状のアルキレン鎖および置換されていてもよい直鎖または分岐状のアルケニレン鎖からなる群から選択され；
各Ｒ１４は独立して、置換されていてもよい直鎖または分岐状のアルキレン鎖および置換されていてもよい直鎖または分岐状のアルケニレン鎖からなる群から選択される。
Ｒ１、Ｒ４およびＲ５はそれぞれ独立して、水素、アルキル、アルケニル、アリール、アラルキル、－Ｃ（Ｏ）Ｒ８、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ６）Ｒ７、および－Ｃ（＝ＮＲ６）Ｎ（Ｒ６）Ｒ７からなる群から選択され；
Ｒ２およびＲ３はそれぞれ独立して、オキソ、チオキソ、シアノ、ニトロ、ハロ、ハロアルキル、アルキル、置換されていてもよいシクロアルキル、置換されていてもよいシクロアルキルアルキル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいアラルキル、置換されていてもよいヘテロアリール、置換されていてもよいヘテロシクリル、－Ｒ９－ＯＲ８、－Ｒ９－Ｏ－Ｒ１０－ＯＲ８、－Ｒ９－Ｏ－Ｒ１０－Ｏ－Ｒ１０－ＯＲ８、－Ｒ９－Ｏ－Ｒ１０－ＣＮ、－Ｒ９－Ｏ－Ｒ１０－Ｃ（Ｏ）ＯＲ８、－Ｒ９－Ｏ－Ｒ１０－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ６）Ｒ７、－Ｒ９－Ｏ－Ｒ１０－Ｓ（Ｏ）ｐＲ８（式中、ｐは０、１または２である）、－Ｒ９－Ｏ－Ｒ１０－Ｎ（Ｒ６）Ｒ７、－Ｒ９－Ｏ－Ｒ１０－Ｃ（ＮＲ１１）Ｎ（Ｒ１１）Ｈ、－Ｒ９－ＯＣ（Ｏ）－Ｒ８、－Ｒ９－Ｎ（Ｒ６）Ｒ７、－Ｒ９－Ｃ（Ｏ）Ｒ８、－Ｒ９－Ｃ（Ｏ）ＯＲ８、－Ｒ９－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ６）Ｒ７、－Ｒ９－Ｎ（Ｒ６）Ｃ（Ｏ）ＯＲ８、－Ｒ９－Ｎ（Ｒ６）Ｃ（Ｏ）Ｒ８、－Ｒ９－Ｎ（Ｒ６）Ｓ（Ｏ）ｔＲ８（式中、ｔは１または２である）、－Ｒ９－Ｓ（Ｏ）ｔＯＲ８（式中、ｔは１または２である）、－Ｒ９－Ｓ（Ｏ）ｐＲ８（式中、ｐは０、１または２である）、および－Ｒ９－Ｓ（Ｏ）ｔＮ（Ｒ６）Ｒ７（式中、ｔは１または２である）からなる群から選択される一つまたは複数の置換基により置換されていてもよい１５個以上の環原子を含有する多環式ヘテロアリールであり；
あるいは、Ｒ２は上記のような１５個以上の環原子を含有する多環式ヘテロアリールであり、Ｒ３はアリールおよびヘテロアリールからなる群から選択され、ここで前記アリールおよび前記ヘテロアリールはそれぞれ独立して、アルキル、アルケニル、アルキニル、ハロ、ハロアルキル、ハロアルケニル、ハロアルキニル、オキソ、チオキソ、シアノ、ニトロ、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいアラルキル、置換されていてもよいアラルケニル、置換されていてもよいアラルキニル、置換されていてもよいシクロアルキル、置換されていてもよいシクロアルキルアルキル、置換されていてもよいシクロアルキルアルケニル、置換されていてもよいシクロアルキルアルキニル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリルアルキル、置換されていてもよいヘテロシクリルアルケニル、置換されていてもよいヘテロシクリルアルキニル、置換されていてもよいヘテロアリール、置換されていてもよいヘテロアリールアルキル、置換されていてもよいヘテロアリールアルケニル、置換されていてもよいヘテロアリールアルキニル、－Ｒ１３－ＯＲ１２、－Ｒ１３－ＯＣ（Ｏ）－Ｒ１２、－Ｒ１３－Ｏ－Ｒ１４－Ｎ（Ｒ１２）２、－Ｒ１３－Ｎ（Ｒ１２）－Ｒ１４－Ｎ（Ｒ１２）２、－Ｒ１３－Ｎ（Ｒ１２）－Ｒ１４－Ｎ（Ｒ１２）２、－Ｒ１３－Ｎ（Ｒ１２）２、－Ｒ１３－Ｃ（Ｏ）Ｒ１２、－Ｒ１３－Ｃ（Ｏ）ＯＲ１２、－Ｒ１３－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１２）２、－Ｒ１３－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１２）－Ｒ１４－Ｎ（Ｒ１２）Ｒ１３、－Ｒ１３－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１２）－Ｒ１４－ＯＲ１２、－Ｒ１３－Ｎ（Ｒ１２）Ｃ（Ｏ）ＯＲ１２、－Ｒ１３－Ｎ（Ｒ１２）Ｃ（Ｏ）Ｒ１２、－Ｒ１３－Ｎ（Ｒ１２）Ｓ（Ｏ）ｔＲ１２（式中、ｔは１または２である）、－Ｒ１３－Ｓ（Ｏ）ｔＯＲ１２（式中、ｔは１または２である）、－Ｒ１３－Ｓ（Ｏ）ｐＲ１２（式中、ｐは０，１または２である）、および－Ｒ１３－Ｓ（Ｏ）ｔＮ（Ｒ１２）２（式中、ｔは１または２である）からなる群から選択される一つまたは複数の置換基により置換されていてもよく；
あるいは、Ｒ３は上記のような１５個以上の環原子を含有する多環式ヘテロアリールであり、Ｒ２はアリールおよびヘテロアリールからなる群から選択され、ここで前記アリールおよび前記ヘテロアリールはそれぞれ独立して、アルキル、アルケニル、アルキニル、ハロ、ハロアルキル、ハロアルケニル、ハロアルキニル、オキソ、チオキソ、シアノ、ニトロ、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいアラルキル、置換されていてもよいアラルケニル、置換されていてもよいアラルキニル、置換されていてもよいシクロ
アルキル、置換されていてもよいシクロアルキルアルキル、置換されていてもよいシクロアルキルアルケニル、置換されていてもよいシクロアルキルアルキニル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリルアルキル、置換されていてもよいヘテロシクリルアルケニル、置換されていてもよいヘテロシクリルアルキニル、置換されていてもよいヘテロアリール、置換されていてもよいヘテロアリールアルキル、置換されていてもよいヘテロアリールアルケニル、置換されていてもよいヘテロアリールアルキニル、－Ｒ１３－ＯＲ１２、－Ｒ１３－ＯＣ（Ｏ）－Ｒ１２、－Ｒ１３－Ｏ－Ｒ１４－Ｎ（Ｒ１２）２、－Ｒ１３－Ｎ（Ｒ１２）－Ｒ１４－Ｎ（Ｒ１２）２、－Ｒ１３－Ｎ（Ｒ１２）－Ｒ１４－Ｎ（Ｒ１２）２、－Ｒ１３－Ｎ（Ｒ１２）２、－Ｒ１３－Ｃ（Ｏ）Ｒ１２、－Ｒ１３－Ｃ（Ｏ）ＯＲ１２、－Ｒ１３－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１２）２、－Ｒ１３－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１２）－Ｒ１４－Ｎ（Ｒ１２）Ｒ１３、－Ｒ１３－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１２）－Ｒ１４－ＯＲ１２、－Ｒ１３－Ｎ（Ｒ１２）Ｃ（Ｏ）ＯＲ１２、－Ｒ１３－Ｎ（Ｒ１２）Ｃ（Ｏ）Ｒ１２、－Ｒ１３－Ｎ（Ｒ１２）Ｓ（Ｏ）ｔＲ１２（式中、ｔは１または２である）、－Ｒ１３－Ｓ（Ｏ）ｔＯＲ１２（式中、ｔは１または２である）、－Ｒ１３－Ｓ（Ｏ）ｐＲ１２（式中、ｐは０，１または２である）、および－Ｒ１３－Ｓ（Ｏ）ｔＮ（Ｒ１２）２（式中、ｔは１または２である）からなる群から選択される一つまたは複数の置換基により置換されていてもよく；
それぞれのＲ６およびＲ７は独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、ハロアルキル、ハロアルケニル、ハロアルキニル、ヒドロキシアルキル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいアラルキル、置換されていてもよいアラルケニル、置換されていてもよいアラルキニル、置換されていてもよいシクロアルキル、置換されていてもよいシクロアルキルアルキル、置換されていてもよいシクロアルキルアルケニル、置換されていてもよいシクロアルキルアルキニル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリルアルキル、置換されていてもよいヘテロシクリルアルケニル、置換されていてもよいヘテロシクリルアルキニル、置換されていてもよいヘテロアリール、置換されていてもよいヘテロアリールアルキル、置換されていてもよいヘテロアリールアルケニル、置換されていてもよいヘテロアリールアルキニル、－Ｒ１０－ＯＲ８、－Ｒ１０－ＣＮ、－Ｒ１０－ＮＯ２、－Ｒ１０－Ｎ（Ｒ８）２、－Ｒ１０－Ｃ（Ｏ）ＯＲ８および－Ｒ１０－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ８）２からなる群から選択され、あるいは、あらゆるＲ６およびＲ７は、それらが共に結合している共通の窒素と一緒になって、置換されていてもよいＮ－ヘテロアリールまたは置換されていてもよいＮ－ヘテロシクリルを形成し；
各Ｒ８は独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、ハロアルキル、ハロアルケニル、ハロアルキニル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいアラルキル、置換されていてもよいアラルケニル、置換されていてもよいアラルキニル、置換されていてもよいシクロアルキル、置換されていてもよいシクロアルキルアルキル、置換されていてもよいシクロアルキルアルケニル、置換されていてもよいシクロアルキルアルキニル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリルアルキル、置換されていてもよいヘテロシクリルアルケニル、置換されていてもよいヘテロシクリルアルキニル、置換されていてもよいヘテロアリール、置換されていてもよいヘテロアリールアルキル、置換されていてもよいヘテロアリールアルケニル、および置換されていてもよいヘテロアリールアルキニルからなる群から選択され；
各Ｒ９は独立して、直接的な結合、置換されていてもよい直鎖または分岐状のアルキレン鎖、置換されていてもよい直鎖または分岐状のアルケニレン鎖および置換されていてもよい直鎖または分岐状のアルキニレン鎖からなる群から選択され；
各Ｒ１０は独立して、置換されていてもよい直鎖または分岐状のアルキレン鎖、置換されていてもよい直鎖または分岐状のアルケニレン鎖および置換されていてもよい直鎖または分岐状のアルキニレン鎖からなる群から選択され；
各Ｒ１１は独立して、水素、アルキル、シアノ、ニトロおよび－ＯＲ８からなる群から選択され；
各Ｒ１２は独立して、水素、アルキル、アルケニル、ハロアルキル、置換されていてもよいシクロアルキル、置換されていてもよいシクロアルキルアルキル、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいアラルキル、置換されていてもよいヘテロシクリル、置換されていてもよいヘテロシクリルアルキル、置換されていてもよいヘテロアリール、置換されていてもよいヘテロアリールアルキル、－Ｒ１０－ＯＲ８、－Ｒ１０－ＣＮ、－Ｒ１０－ＮＯ２、－Ｒ１０－Ｎ（Ｒ８）２、－Ｒ１０－Ｃ（Ｏ）ＯＲ８および－Ｒ１０－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ８）２からなる群から選択され、あるいは、２つのＲ１２は、それらが共に結合している共通の窒素と一緒になって、置換されていてもよいＮ－ヘテロシクリルまたは置換されていてもよいＮ－ヘテロアリールを形成し；
各Ｒ１３は独立して、直接的な結合、置換されていてもよい直鎖または分岐状のアルキレン鎖および置換されていてもよい直鎖または分岐状のアルケニレン鎖からなる群から選択され；
各Ｒ１４は独立して、置換されていてもよい直鎖または分岐状のアルキレン鎖および置換されていてもよい直鎖または分岐状のアルケニレン鎖からなる群から選択される。
式（Ｉ）の化合物は国際公開第２００８／０８３３６７号に開示されている。この文書の内容、具体的には式（Ｉ）の化合物の合成および特徴づけの詳細は、それら内容の全体が参照により本明細書に援用される。
式（Ｉ）の化合物は、Ａｘｌの他に、いくつかのキナーゼを阻害可能であることが分かっている。この驚くべき発見は、前記化合物のいくつかの新たな用途を切り開くものである。治療、管理または予防される疾患は、Ａｘｌ過剰発現と関連していても関連していなくてもよい。本発明によれば、治療される疾患がＡｘｌの過剰発現と関連している場合、前記疾患は一つまたは複数の他のキナーゼの活性化、変異および／または過剰発現とも関連している。そのような疾患において、この二重の（または多重の）キナーゼ阻害は、前記疾患に対する前記化合物の活性増強をもたらし得る。Ａｘｌ過剰発現が主役ではない疾患であっても、一つまたは複数の他のキナーゼの阻害は、前記病状の予防または減弱をもたらす可能性がある。
複数のキナーゼを阻害できる化合物により、種々の疾患のより効果的な治療が提供され得る。このような化合物は、細胞内の複数の経路を調節することが可能であり、特に、これらのキナーゼのうちの１つの阻害剤に対する耐性を獲得した標的細胞に使用され得る。
本発明を、添付の図面を参照して、例示のみを目的として、以下でより詳細に説明する。
一実施形態では、治療、管理または予防される疾患はＡｘｌ過剰発現と関連していない。
特定の実施形態では、前記疾患は、がんまたは前がん性新生物等の腫瘍性疾患である。一実施形態では、前記疾患は、急性リンパ芽球白血病、多発性骨髄腫、腎明細胞癌、骨髄異形成症候群、甲状腺髄様癌、消化管間質腫瘍、褐色細胞腫、骨髄性白血病、例えば、慢性骨髄性白血病もしくは急性骨髄性白血病、メラノーマ、非小細胞肺癌またはリンパ腫であり得る。例えば、前記疾患は、急性リンパ芽球白血病、多発性骨髄腫、腎明細胞癌、骨髄異形成症候群、甲状腺髄様癌、消化管間質腫瘍、または褐色細胞腫であり得る。具体的には、前記疾患は、消化管間質腫瘍、または褐色細胞腫であり得る。一実施形態では、前記疾患は骨髄性白血病であり得る。
本発明により治療、管理または予防され得る非腫瘍性疾患としては、炎症性疾患（例えば、関節リウマチ）、子宮内膜症、血管疾患／損傷（例えば、限定はされないが、再狭窄、アテローム性動脈硬化症および血栓症）、乾癬、黄斑変性、糖尿病性網膜症および未熟児網膜症による視力障害、腎疾患（例えば、限定はされないが、糸球体腎炎、糖尿病性腎
症および腎移植拒絶反応）、肺障害（例えば、ＣＯＰＤ）、骨粗しょう症、変形性関節症、ウイルス感染、線維症（例えば、肝線維症）並びに白内障が挙げられる。
症および腎移植拒絶反応）、肺障害（例えば、ＣＯＰＤ）、骨粗しょう症、変形性関節症、ウイルス感染、線維症（例えば、肝線維症）並びに白内障が挙げられる。
ある実施形態では、治療される疾患は、以下の遺伝子にコードされるキナーゼから選択される一つまたは複数のキナーゼの活性化、変異および／または過剰発現と関連している場合がある：ＭＥＲＴＫ（ＥＮＳＧ０００００１５３２０８）、ＴＥＫ（ＥＮＳＧ０００００１２０１５６）、ＹＥＳ１（ＥＮＳＧ０００００１７６１０５）、ＦＬＴ１（ＥＮＳＧ０００００１０２７５５）、ＦＬＴ３（ＥＮＳＧ０００００１２２０２５）、ＦＬＴ４（ＥＮＳＧ００００００３７２８０）、ＢＭＸ（ＥＮＳＧ０００００１０２０１０）、ＡＢＬ１（ＥＮＳＧ００００００９７００７）、ＲＥＴ（ＥＮＳＧ０００００１６５７３１）、ＫＩＴ（ＥＮＳＧ０００００１５７４０４）、ＹＳＫ４（ＥＮＳＧ０００００１７６６０１）、ＳＬＫ（ＥＮＳＧ００００００６５６１３）、ＷＥＥ１（ＥＮＳＧ０００００１６６４８３）、ＷＥＥ２（ＥＮＳＧ０００００２１４１０２）、ＭＡＰ３Ｋ２（ＥＮＳＧ０００００１６９９６７）、ＭＡＰ４Ｋ１（ＥＮＳＧ０００００１０４８１４）、ＳＴＫ１０（ＥＮＳＧ００００００７２７８６）、およびＬＣＫ（ＥＮＳＧ０００００１８２８６６）。
式（Ｉ）の化合物は、上記で同定されたキナーゼ全てにおいて阻害活性を有することが分かっている。本明細書に示される遺伝子同定番号は、Ｅｎｓｅｍｂｌデータベース（ｗｗｗ．ｅｎｓｅｍｂｌ．ｏｒｇ）を参照している。これらのキナーゼのスプライスバリアントも、この列挙に包含されることが意図される。
本明細書においてＡｂｌ（または対応遺伝子、ＡＢＬ）に対する言及がなされる場合、これは、キナーゼ（または対応遺伝子）Ａｂｌ１（ＡＢＬ１）を意味すると理解されたい。さらに、変異型Ａｂｌ１は、Ｂｃｒ－Ａｂｌ１（ＢＣＲ－ＡＢＬ１）融合タンパク質（遺伝子）、すなわちフィラデルフィア染色体内に存在するもの、を包含することが意図される。さらに、この変異キナーゼに対する言及には、「二重」変異型のキナーゼ、すなわち、Ｂｃｒ－Ａｂｌ１（ＢＣＲ－ＡＢＬ１）融合タンパク質（遺伝子）それ自体が、例えば既存のキナーゼ阻害剤（例えば、イマチニブ）に対する耐性をもたらし得るさらなる変異（例えばＴ１３５Ｉ等）を含有しているキナーゼも包含される。
本発明の実施形態では、前記疾患は一つまたは複数の変異キナーゼと関連している。関連がある具体的な変異キナーゼとしては、以下の遺伝子にコードされる変異キナーゼが挙げられる：ＡＢＬ１（Ｔ３１５Ｉ）、ＡＢＬ１（Ｑ２５２Ｈ）、ＡＢＬ１（Ｈ３９６Ｐ）、ＡＢＬ１（Ｙ２５３Ｆ）、ＡＢＬ１（Ｍ３５１Ｔ）、ＡＢＬ１（Ｅ２５５Ｋ）、ＫＩＴ（Ａ８２９Ｐ）、ＫＩＴ（Ｄ８１６Ｈ）、ＫＩＴ（Ｖ５６０Ｇ）、ＫＩＴ（Ｄ８１６Ｖ）、ＫＩＴ（Ｖ６５４Ａ）、ＦＬＴ３（Ｄ８３５Ｙ）、ＦＬＴ３（Ｄ８３５Ｈ）、ＦＬＴ３（Ｋ６６３Ｑ）、ＦＬＴ３（Ｎ８４１Ｉ）、ＲＥＴ（Ｖ８０４Ｌ）、ＲＥＴ（Ｖ８０４Ｍ）、ＲＥＴ（Ｍ９１８Ｔ）、ＴＥＫ（Ｙ８９７Ｓ）、およびＴＥＫ（Ｒ８４９Ｗ）。
変異キナーゼを定義するために本明細書で使用される命名法において、括弧の前の文字は当該キナーゼを示し、括弧内の最初の文字は、括弧内の数字により示される位置に存在する野生型キナーゼのアミノ酸残基（アミノ酸の標準的な一文字略語体系を使用）を表し、前記数字の右側の文字は変異キナーゼ内のその位置に存在するアミノ酸残基を示している。従って、ＡＢＬ１（Ｔ３１５Ｉ）は、野生型ＡＢＬ１の３１５位に存在するスレオニンがイソロイシンにより置換されているＡＢＬ１変異キナーゼを表す。本明細書で定義される変異キナーゼは、野生型遺伝子の対立遺伝子多型の発現産物であり、この対立遺伝子内では、遺伝暗号は所定のアミノ酸置換がタンパク質産物の中に存在するように変化している。
当業者であれば理解されることであるが、キナーゼは、同一のキナーゼタンパク質（または遺伝子）に関することであっても、複数の名称で称される場合がある。ＮＣＢＩ Ｇｅｎｅデータベース（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｇｅｎｅ）では、特定のキナーゼの様々な名称の間に関連付けがなされている。
いくつかの場合で、式（Ｉ）の化合物が、対応する野生型キナーゼと比較して、変異キナーゼにおいて増強された阻害活性を示すことが測定されている。式（Ｉ）の化合物が一つまたは複数のキナーゼの変異と関連した疾患において使用される場合、この特性によって、前記変異キナーゼを発現する細胞に対する前記化合物の選択性の向上がもたらされ得る。例えば、前記化合物が変異キナーゼが関与する腫瘍性疾患において使用される場合、細胞情報伝達、増殖および／または分裂に対する前記化合物の効果は、前記新形成と関連する細胞では増強され、それに対応して非新生細胞では低減され得る。これにより、副作用の減少および治療濃度域の改善がもたらされるであろう。
本発明において、式Ｉの化合物は、一つまたは複数の追加の医薬品有効成分との順次または同時の組合せにおいて使用され得る。そのような追加の活性成分は同じ疾患に適用される場合もあるし、あるいは合併性の治療に用いられる場合もある。
特定の実施形態では、式（Ｉ）の化合物は以下からなる群から選択され得る：
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（７－（ピロリジン－１－イル）－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（（７－（Ｓ）－ピロリジン－１－イル）－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（（７－（Ｒ）－ピロリジン－１－イル）－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ピリド［２’，３’：６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（３－フルオロ－４－（４－（ピロリジン－１－イル）ピペリジン－１－イル）フェニル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ５－（７－（ピロリジン－１－イル）－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－１－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ５－（７－（Ｓ）－ピロリジン－１－イル－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（（７Ｓ）－７－（ｔ－ブトキシカルボニルアミノ）－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（７－（アセトアミド）－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジア
ミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（７－（（２Ｒ）－２－（メトキシカルボニル）ピロリジン－１－イル）－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（７－（４，４－ジフルオロピペリジン－１－イル）－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（７－（（メトキシカルボニルメチル）（メチル）アミノ）－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（７－（（２Ｒ）－２－（カルボキシ）ピロリジン－１－イル）－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（７－（４－（エトキシカルボニル）ピペリジン－１－イル）－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（７－（４－（カルボキシ）ピペリジン－１－イル）－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（７－（（カルボキシメチル）（メチル）アミノ）－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（７－（４－（エトキシカルボニルメチル）ピペラジン－１－イル）－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（７－（４－（カルボキシメチル）ピペラジン－１－イル）－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（７－（ピロリジン－１－イル）－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－１－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（（７Ｓ）－７－アミノ－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（（７ｓ）－７－（ジ（シクロプロピルメチル）アミノ）－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジ
ン－３－イル）－Ｎ３－（（７Ｓ）－７－（（２－メチルプロピル）アミノ）－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（（７Ｓ）－７－（（プロピル）アミノ）－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（（７Ｓ）－７－（ジプロピルアミノ）－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（（７Ｓ）－７－（ジエチルアミノ）－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（（７Ｓ）－７－（シクロヘキシルアミノ）－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（（７Ｓ）－７－（シクロペンチルアミノ）－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（（７Ｓ）－７－（（１－シクロペンチルエチル）アミノ）－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（（７Ｓ）－７－（２－プロピルアミノ）－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（（７Ｓ）－７－（（３，３－ジメチルブタ－２－イル）アミノ）－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（（７Ｓ）－７－（（シクロヘキシルメチル）アミノ）－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（（７Ｓ）－７－（ジ（シクロヘキシルメチル）アミノ）－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（（７Ｓ）－７－（（５－クロロチエノ－２－イル）メチル）アミノ－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（（７Ｓ）－７－（（２－カルボキシフェニル）メチル）アミノ－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１
，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（（７Ｓ）－７－（（３－ブロモフェニル）メチル）アミノ－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（（７Ｓ）－７－（ジメチルアミノ）－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（（７Ｓ）－７－（シクロブチルアミノ）－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（（７Ｓ）－７－（３－ペンチルアミノ）－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（（７Ｓ）－７－（（２，２－ジメチルプロピル）アミノ）－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（（７Ｓ）－７－（ジ（シクロペンチルメチル）アミノ）－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（（７Ｓ）－７－（（シクロペンチルメチル）アミノ）－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（（７Ｓ）－７－（ジ（ビシクロ［２．２．１］ヘプタ－２－エン－５－イルメチル）アミノ）－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（（７Ｓ）－７－（（ビシクロ［２．２．１］ヘプタ－２－エン－５－イルメチル）アミノ）－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（（７Ｓ）－７－（３－メチルブチルアミノ）－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（（７Ｓ）－７－（ジ（３－メチルブチル）アミノ）－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（（７Ｓ）－７－（２－エチルブチルアミノ）－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジ
ン－３－イル）－Ｎ３－（（７Ｓ）－７－（ブタ－２－エニルアミノ）－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（（７Ｓ）－７－（ブチル（ブタ－２－エニル）アミノ）－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ピリド［２’，３’：６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ５－（（７Ｓ）－７－（ｔ－ブトキシカルボニルアミノ）－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ピリド［２’，３’：６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（（７Ｓ）－７－アミノ－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ピリド［２’，３’：６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（（７Ｓ）－７－（ジメチルアミノ）－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ピリド［２’，３’：６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（（７Ｓ）－７－（ジエチルアミノ）－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ピリド［２’，３’：６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（（７Ｓ）－７－（ジプロピルアミノ）－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ピリド［２’，３’：６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（（７Ｓ）－７－（ジ（シクロプロピルメチル）アミノ）－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ピリド［２’，３’：６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（（７Ｓ）－７－（ジ（３－メチルブチル）アミノ）－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ピリド［２’，３’：６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（（７Ｓ）－７－（シクロブチルアミノ）－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ピリド［２’，３’：６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（（７Ｓ）－７－（シクロヘキシルアミノ）－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ピリド［２’，３’：６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（（７Ｓ）－７－（（メチルエチル）アミノ）－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ピリド［２’，３’：６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（（７Ｓ）－７－（シクロペンチルアミノ）－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，
４－トリアゾール－３，５－ジアミン；および
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ピリド［２’，３’：６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（（７Ｓ）－７－（２－ブチルアミノ）－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン。
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（７－（ピロリジン－１－イル）－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（（７－（Ｓ）－ピロリジン－１－イル）－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（（７－（Ｒ）－ピロリジン－１－イル）－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ピリド［２’，３’：６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（３－フルオロ－４－（４－（ピロリジン－１－イル）ピペリジン－１－イル）フェニル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ５－（７－（ピロリジン－１－イル）－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－１－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ５－（７－（Ｓ）－ピロリジン－１－イル－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（（７Ｓ）－７－（ｔ－ブトキシカルボニルアミノ）－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（７－（アセトアミド）－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジア
ミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（７－（（２Ｒ）－２－（メトキシカルボニル）ピロリジン－１－イル）－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（７－（４，４－ジフルオロピペリジン－１－イル）－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（７－（（メトキシカルボニルメチル）（メチル）アミノ）－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（７－（（２Ｒ）－２－（カルボキシ）ピロリジン－１－イル）－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（７－（４－（エトキシカルボニル）ピペリジン－１－イル）－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（７－（４－（カルボキシ）ピペリジン－１－イル）－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（７－（（カルボキシメチル）（メチル）アミノ）－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（７－（４－（エトキシカルボニルメチル）ピペラジン－１－イル）－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（７－（４－（カルボキシメチル）ピペラジン－１－イル）－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（７－（ピロリジン－１－イル）－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－１－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（（７Ｓ）－７－アミノ－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（（７ｓ）－７－（ジ（シクロプロピルメチル）アミノ）－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジ
ン－３－イル）－Ｎ３－（（７Ｓ）－７－（（２－メチルプロピル）アミノ）－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（（７Ｓ）－７－（（プロピル）アミノ）－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（（７Ｓ）－７－（ジプロピルアミノ）－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（（７Ｓ）－７－（ジエチルアミノ）－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（（７Ｓ）－７－（シクロヘキシルアミノ）－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（（７Ｓ）－７－（シクロペンチルアミノ）－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（（７Ｓ）－７－（（１－シクロペンチルエチル）アミノ）－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（（７Ｓ）－７－（２－プロピルアミノ）－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（（７Ｓ）－７－（（３，３－ジメチルブタ－２－イル）アミノ）－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（（７Ｓ）－７－（（シクロヘキシルメチル）アミノ）－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（（７Ｓ）－７－（ジ（シクロヘキシルメチル）アミノ）－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（（７Ｓ）－７－（（５－クロロチエノ－２－イル）メチル）アミノ－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（（７Ｓ）－７－（（２－カルボキシフェニル）メチル）アミノ－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１
，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（（７Ｓ）－７－（（３－ブロモフェニル）メチル）アミノ－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（（７Ｓ）－７－（ジメチルアミノ）－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（（７Ｓ）－７－（シクロブチルアミノ）－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（（７Ｓ）－７－（３－ペンチルアミノ）－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（（７Ｓ）－７－（（２，２－ジメチルプロピル）アミノ）－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（（７Ｓ）－７－（ジ（シクロペンチルメチル）アミノ）－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（（７Ｓ）－７－（（シクロペンチルメチル）アミノ）－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（（７Ｓ）－７－（ジ（ビシクロ［２．２．１］ヘプタ－２－エン－５－イルメチル）アミノ）－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（（７Ｓ）－７－（（ビシクロ［２．２．１］ヘプタ－２－エン－５－イルメチル）アミノ）－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（（７Ｓ）－７－（３－メチルブチルアミノ）－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（（７Ｓ）－７－（ジ（３－メチルブチル）アミノ）－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（（７Ｓ）－７－（２－エチルブチルアミノ）－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジ
ン－３－イル）－Ｎ３－（（７Ｓ）－７－（ブタ－２－エニルアミノ）－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（（７Ｓ）－７－（ブチル（ブタ－２－エニル）アミノ）－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ピリド［２’，３’：６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ５－（（７Ｓ）－７－（ｔ－ブトキシカルボニルアミノ）－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ピリド［２’，３’：６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（（７Ｓ）－７－アミノ－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ピリド［２’，３’：６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（（７Ｓ）－７－（ジメチルアミノ）－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ピリド［２’，３’：６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（（７Ｓ）－７－（ジエチルアミノ）－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ピリド［２’，３’：６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（（７Ｓ）－７－（ジプロピルアミノ）－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ピリド［２’，３’：６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（（７Ｓ）－７－（ジ（シクロプロピルメチル）アミノ）－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ピリド［２’，３’：６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（（７Ｓ）－７－（ジ（３－メチルブチル）アミノ）－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ピリド［２’，３’：６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（（７Ｓ）－７－（シクロブチルアミノ）－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ピリド［２’，３’：６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（（７Ｓ）－７－（シクロヘキシルアミノ）－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ピリド［２’，３’：６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（（７Ｓ）－７－（（メチルエチル）アミノ）－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン；
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ピリド［２’，３’：６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（（７Ｓ）－７－（シクロペンチルアミノ）－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，
４－トリアゾール－３，５－ジアミン；および
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ピリド［２’，３’：６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（（７Ｓ）－７－（２－ブチルアミノ）－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン。
式（Ｉ）の化合物は、例えば、１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（７－（ピロリジン－１－イル）－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミンであり得る。具体的には、前記化合物は１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（７－（Ｓ）－（ピロリジン－１－イル）－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミンであり得る。
本発明の第二の態様によって、予防、治療または管理を必要とする対象において、一つまたは複数のキナーゼの活性化、変異および／または過剰発現と関連した疾患を予防、治療または管理する方法が提供され、前記疾患がＡｘｌ過剰発現と関連している場合、前記疾患は一つまたは複数の他のキナーゼの活性化、変異および／または過剰発現とも関連しており、前記方法は前記対象に治療有効量または予防有効量の上記で定義された式（Ｉ）の構造を有する化合物を投与することを含む。
本発明の第一の態様に関連する上記の全ての実施形態は、必要に応じて第二の態様にも適用可能である。従って、上記の特定の病型、特定のキナーゼ、特定の化合物等は全て、第二の態様に適用可能である。
本発明の第三の態様により、遺伝子：ＭＥＲＴＫ（ＥＮＳＧ０００００１５３２０８）、ＴＥＫ（ＥＮＳＧ０００００１２０１５６）、ＹＥＳ１（ＥＮＳＧ０００００１７６１０５）、ＦＬＴ１（ＥＮＳＧ０００００１０２７５５）、ＦＬＴ３（ＥＮＳＧ０００００１２２０２５）、ＦＬＴ４（ＥＮＳＧ００００００３７２８０）、ＢＭＸ（ＥＮＳＧ０００００１０２０１０）、ＡＢＬ１（ＥＮＳＧ００００００９７００７）、ＲＥＴ（ＥＮＳＧ０００００１６５７３１）、ＫＩＴ（ＥＮＳＧ０００００１５７４０４）、ＹＳＫ４（ＥＮＳＧ０００００１７６６０１）、ＳＬＫ（ＥＮＳＧ００００００６５６１３）、ＷＥＥ１（ＥＮＳＧ０００００１６６４８３）、ＷＥＥ２（ＥＮＳＧ０００００２１４１０２）、ＭＡＰ３Ｋ２（ＥＮＳＧ０００００１６９９６７）、ＭＡＰ４Ｋ１（ＥＮＳＧ０００００１０４８１４）、ＳＴＫ１０（ＥＮＳＧ００００００７２７８６）、およびＬＣＫ（ＥＮＳＧ０００００１８２８６６）にコードされるキナーゼから選択される一つまたは複数のキナーゼの活性を減少させるための方法が提供され、前記方法は、前記キナーゼを阻害有効量の上記で定義された式（Ｉ）の構造を有する化合物と接触させることを含む。
第三の態様のいくつかの実施形態では、前記方法はインビトロで実行される。他の実施形態では、第三の態様の方法は、そのようなキナーゼ活性減少を必要としている対象への、治療有効量または予防有効量の式（Ｉ）の化合物の投与を含む。
また、第三の態様により、第三の態様に関連して列挙されたキナーゼのうちの一つまたは複数の活性の減少において使用される、式（Ｉ）の化合物が提供される。
第三の態様の方法によって、インビトロまたはインビボにおける、上記の列挙されたキナーゼのうちの一つまたは複数の活性の減少が可能となる。インビボ環境において、前記方法は、前記キナーゼの活性と（因果関係において）関連している、病状の症状軽減、予
防または治療を提供し得る。第三の態様の特定の実施形態では、前記キナーゼの活性が他の健常者集団における正常な活性レベルと比較して増加される。活性の増加は、例えば、前記キナーゼの過剰発現または変異によるものであり得る。
防または治療を提供し得る。第三の態様の特定の実施形態では、前記キナーゼの活性が他の健常者集団における正常な活性レベルと比較して増加される。活性の増加は、例えば、前記キナーゼの過剰発現または変異によるものであり得る。
第四の態様において、本発明は、一つまたは複数のキナーゼの活性化、変異および／または過剰発現と関連した疾患を治療、予防または管理するための薬剤の調製における、上記で定義された式（Ｉ）の構造を有する化合物の用途を提供し、前記疾患がＡｘｌ過剰発現と関連している場合、前記疾患は一つまたは複数の他のキナーゼの活性化、変異および／または過剰発現とも関連している。
第五の態様において、本発明は、上記で定義された式（Ｉ）の構造を有する化合物を用いた予防、管理または治療に適した対象を特定する方法も提供し、前記方法は、試験対象における、または試験対象から得られた生物試料中の一つまたは複数のキナーゼの活性化、変異および／または過剰発現の存在を判定することを含み、前記一つまたは複数のキナーゼの活性化、変異および／または過剰発現の存在は、前記予防、管理または治療に対する前記対象の潜在的な適合性を示し、前記試験対象がＡｘｌ過剰発現を示す場合、前記方法は一つまたは複数の他のキナーゼの活性化、変異および／または過剰発現の存在の判定も含む。
第五の態様の一実施形態では、前記方法は、一つまたは複数のキナーゼの活性化、変異および／または過剰発現と関連した疾患の予防、管理または治療を目的として、判定段階の後に、前記対象に上記で定義された式（Ｉ）の構造を有する化合物を投与するというさらなる段階を含む。
第五の態様の方法が試験対象から得られた生物試料を使用する場合、前記試料は、血液、組織（例えば、組織生検）、腫瘍細胞（例えば、腫瘍生検）、骨髄、痰、唾液または糞便を含み得る。
試験対象における、または試験対象から得られた生物試料中の一つまたは複数のキナーゼの活性化、変異および／または過剰発現を測定するのに適した手法は、当業者に公知である。発現レベルの測定において、このような手法には、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）に基づく方法（例えば、定量ＰＣＲ）、蛍光インサイツハイブリダイゼーション法、転写レベル（すなわち、ｍＲＮＡ）配列決定法が含まれる。変異状態の判定においては、以下のアプローチが典型的である：ＰＣＲに基づく増幅および配列決定（例えば、変異特異的プライマーを使用）、ＰＣＲおよび一本鎖ＤＮＡ高次構造多型、全ゲノム（具体的には、腫瘍ゲノム）配列決定、多重ハイスループット遺伝子変異解析、融解曲線解析。
より詳細には、本明細書で定義される式（Ｉ）の化合物を用いた処置に感受性が高い対象の選択は、適切な方法を用いてキナーゼの変異状態および発現レベルを評価することによって決定され得る。キナーゼの変異状態および発現レベルを調べるための多数の方法が存在し、以下の段階の列挙は例示のみを意図している：（ｉ）細胞、細胞集団、動物モデルもしくはヒトの、ホルマリン固定、パラフィン包埋された標本または新鮮な、凍結された、もしくはアルコール固定された切片からの試料の単離；（ｉｉ）十分な性能特性を有する試験法による目的のキナーゼ（例えば、表４に列挙されるキナーゼ）の発現レベルの測定。発現レベルを測定するためのこのような方法には以下が含まれ得る：定量的ポリメラーゼ連鎖反応（ｑＰＣＲ）による転写レベル解析（Arne G, et al., Int J Cancer. Sep 1;129(5):1149-61 (2011); Ouerhani S, Cancer Genet. Sep;205(9):436-41 (2012)）、免疫組織化学（ＩＨＣ）（Zhang H, et al. J Cancer Res Clin Oncol. Feb;135(2):249-53. (2009)）、蛍光インサイツハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）診断（Floisand Y
et al., Scand J Clin Lab Invest. 68(2):93-8 (2008)）または転写レベル配列決定法
；（ｉｉｉ）十分な性能特性を有する試験法によるキナーゼ（例えば、表４に列挙されるキナーゼ）の変異状態の判定。変異状態を判定するためのこのような方法には、以下が含まれ得る：ＰＣＲに基づく増幅および配列決定（Guo JJ, et al. J Clin Oncol. Aug 10;29(23):e672-4 (2011); Ouerhani S, Cancer Genet. Sep;205(9):436-41 (2012); Sritana N, Exp Mol Pathol. Dec;85(3):227-31. (2008); Bains A, et al., Am J Clin Pathol. Jan;135(1):62-9. (2011)）、ＰＣＲおよび一本鎖ＤＮＡ高次構造多型（ＳＳＣＰ）（ｓｓ二次構造解析）（Stirewalt DL, et al., Nat Rev Cancer. Sep;3(9):650-65.(2003)2.）、腫瘍ゲノム配列決定（Love C, et al., Nat Genet. Dec;44(12):1321-5. (2012); Kanagal-Shamanna R et al., Mod Pathol. Aug 2. (2013)）、多重ハイスループット遺伝子変異解析（Dunlap J, et al., Hum Pathol. Dec;43(12):2167-76 (2012)）、融解曲線解析（Polakova KM, et al., Leuk Res. Aug;32(8):1236-43 (2008)）。
et al., Scand J Clin Lab Invest. 68(2):93-8 (2008)）または転写レベル配列決定法
；（ｉｉｉ）十分な性能特性を有する試験法によるキナーゼ（例えば、表４に列挙されるキナーゼ）の変異状態の判定。変異状態を判定するためのこのような方法には、以下が含まれ得る：ＰＣＲに基づく増幅および配列決定（Guo JJ, et al. J Clin Oncol. Aug 10;29(23):e672-4 (2011); Ouerhani S, Cancer Genet. Sep;205(9):436-41 (2012); Sritana N, Exp Mol Pathol. Dec;85(3):227-31. (2008); Bains A, et al., Am J Clin Pathol. Jan;135(1):62-9. (2011)）、ＰＣＲおよび一本鎖ＤＮＡ高次構造多型（ＳＳＣＰ）（ｓｓ二次構造解析）（Stirewalt DL, et al., Nat Rev Cancer. Sep;3(9):650-65.(2003)2.）、腫瘍ゲノム配列決定（Love C, et al., Nat Genet. Dec;44(12):1321-5. (2012); Kanagal-Shamanna R et al., Mod Pathol. Aug 2. (2013)）、多重ハイスループット遺伝子変異解析（Dunlap J, et al., Hum Pathol. Dec;43(12):2167-76 (2012)）、融解曲線解析（Polakova KM, et al., Leuk Res. Aug;32(8):1236-43 (2008)）。
具体例として、Ｂｃｒ－Ａｂｌ変異状態の検査では、まず、血液または骨髄試料が対象から入手する。ＴｒｉＲｅａｇｅｎｔ（シグマ－アルドリッチ社）を用いてＲＮＡを単離し、ＭＭＬＶ逆転写酵素（プロメガ社）を用いてｃＤＮＡ合成を行う。以下のプライマーを用いてポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を行う：（５’－ＧＡＡＧＣＴＴＣＴＣＣＣＴＧＡＣＡＴＣＣＧＴ－３’）および（５’－ＧＣＣＡＧ ＧＣＴＣＴＣＧＧＧＴＧＣＡＧＴＣＣ－３’）。電気泳動の後に、得られる１．３ｋｂ断片を低融点アガロースゲルから切り取る。プライマー（５’－ＧＣＧＣＡＡＣＡＡＧＣＣＣＡＣＴＧＴＣＴＡＴＧＧ－３’）および（５’－ＧＣＣＡＧ ＧＣＴＣＴＣＧＧＧＴＧＣＡＧＴＣＣ－３’）を用いてＡｂｌキナーゼドメインに特異的なゲル精製された１．３ｋｂ断片に対して標準的なサンガー配列決定を行い、ピーク高さによりＴ３１５Ｉ変異およびホモ／ヘテロ接合体を解析する。
第一の態様と関連した上記の特定のキナーゼ、キナーゼ変異、特定の化合物、特定の病型等は、全て、第三、第四および第五の態様に適用可能である。
実施例１
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（７－（Ｓ）－（ピロリジン－１－イル）－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン（以下、「化合物Ａ」）は、０．４ｎＭのＫｄ（ＫｉｎｏｍｅＳｃａｎ（商標）法）、および血清タンパク質の非存在下におけるキナーゼ活性の阻害において５～１５ｎＭのＩＣ５０（ＫｉｎａｓｅＰｒｏｆｉｌｅｒ（商標）および細胞ベースアッセイ）を有する、Ａｘｌキナーゼの強力な選択的阻害剤である。
１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（７－（Ｓ）－（ピロリジン－１－イル）－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン（以下、「化合物Ａ」）は、０．４ｎＭのＫｄ（ＫｉｎｏｍｅＳｃａｎ（商標）法）、および血清タンパク質の非存在下におけるキナーゼ活性の阻害において５～１５ｎＭのＩＣ５０（ＫｉｎａｓｅＰｒｏｆｉｌｅｒ（商標）および細胞ベースアッセイ）を有する、Ａｘｌキナーゼの強力な選択的阻害剤である。
４～１０倍より高い濃度では、他の非変異キナーゼ（例えば、Ｙｓｋ４、ＭｅｒＴＫ、Ｓｔｋ１０、ＴＥＫ、Ｗｅｅ１、およびＹｅｓ）を結合／阻害する可能性がある。
化合物Ａはまた、Ａｘｌと比較して１０倍より高い濃度で、慢性骨髄性白血病における「ゲートキーパー」変異、Ａｂｌ１（Ｔ３１５Ｉ）、ｃＫｉｔ（Ｄ８１６Ｈ）、Ｆｌｔ３（Ｄ８３５Ｙ）、Ｒｅｔ（Ｖ８０４ＬおよびＭ）およびＴＥＫ（Ｙ８９７ＳおよびＲ８４９Ｗ）を含むいくつかの変異キナーゼと結合しそれを阻害したが、このことは、いくつかの変異キナーゼがこの化合物の代替標的となり得ることを示唆している。Ａｂｌ（Ｔ３１５Ｉ）は、ＣＭＬにおけるＡｂｌキナーゼ阻害剤イマチニブへの耐性発現時にしばしば見られ、一方、ｃＫｉｔ（Ｄ８１６Ｈ）は、ＧＩＳＴにおけるイマチニブおよびスニチニブへの耐性発現後にしばしば見られる。
本明細書に含まれる実施例はＡｘｌ以外に複数のキナーゼを阻害する化合物Ａの能力を
示しているが、これらの結果は他の式（Ｉ）の化合物の阻害活性も示していると見なされるべきである。国際公開第２００８／０８３３６７号に示されているように、種々様々な式（Ｉ）の化合物がＡｘｌにおいて同様の結合および活性を有しているため、このような同種の一連の化合物は、他のキナーゼの阻害において、化合物Ａについて本明細書で示されるものと同様の適用性を有すると予想される。
示しているが、これらの結果は他の式（Ｉ）の化合物の阻害活性も示していると見なされるべきである。国際公開第２００８／０８３３６７号に示されているように、種々様々な式（Ｉ）の化合物がＡｘｌにおいて同様の結合および活性を有しているため、このような同種の一連の化合物は、他のキナーゼの阻害において、化合物Ａについて本明細書で示されるものと同様の適用性を有すると予想される。
背景
化合物Ａは、例えばがん治療に適した、経口投与可能なＡｘｌキナーゼ阻害剤である。前記化合物は、原発腫瘍および転移性腫瘍の増殖制限において、単剤活性および他の抗がん剤と組み合わせた活性を示している。
化合物Ａは、例えばがん治療に適した、経口投与可能なＡｘｌキナーゼ阻害剤である。前記化合物は、原発腫瘍および転移性腫瘍の増殖制限において、単剤活性および他の抗がん剤と組み合わせた活性を示している。
化合物Ａのキナーゼ選択性は、オンターゲット活性およびオフターゲット活性に関して、安全性および有効性上の重要な意味を有する。第二のキナーゼ活性はさらなる抗腫瘍活性に寄与する可能性がある。
これらの実施例は、異なる生化学分析法を用いるＥＭＤミリポア社（米国マサチューセッツ州ビルリカ）およびディスカバーエックス社（DiscoveRx Corporation）（米国カリフォルニア州サンディエゴ）によって行われた試験からの、キナーゼ選択性データを報告している。様々な試験が以下の表１に列挙される。
なお、これらのアッセイが、様々な方法で、そして様々な条件下（例えば、ＡＴＰ濃度、血清中濃度）で化合物Ａの作用を測定するものである。結果として、得られる値はアッセイによって異なる可能性がある。これは、アッセイが血清を含む場合に特に顕著である：化合物Ａは動物およびヒトの血漿タンパク質（＞９９％）に強固に結合し、これは、これらのアッセイにおける薬剤の効果的な遊離濃度に影響する。キナーゼ活性に対する化合物Ａの効果を測定するＫｉｎａｓｅＰｒｏｆｉｌｅｒアッセイとは対照的に、Ｋｉｎｏｍ
ｅＳｃａｎアッセイは、化合物Ａと前記キナーゼとの結合定数Ｋｄを評価する。
ｅＳｃａｎアッセイは、化合物Ａと前記キナーゼとの結合定数Ｋｄを評価する。
材料および方法
詳細なアッセイ方法は、必要に応じて、本明細書で引用される関連の参考文献、またはＥＭＤミリポア社（ｗｗｗ．ｅｍｄｍｉｌｌｉｐｏｒｅ．ｃｏｍ）もしくはＫｉｎｏｍｅＳｃａｎウェブサイト（ｗｗｗ．ｋｉｎｏｍｅｓｃａｎ．ｃｏｍ）から入手できるＫｉｎａｓｅＰｒｏｆｉｌｅｒ Ｓｅｒｖｉｃｅ Ａｓｓａｙ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ（ｖ５４、２０１１）に見出すことができる（ＫＩＮＯＭＥｓｃａｎのアッセイ方法のより詳細な説明については、Fabian et al. A small molecule-kinase interaction map for clinical
kinase inhibitors. Nat. Biotechnol. 23, 329-336 (2005)を参照されたい）。概要を以下に示す。
詳細なアッセイ方法は、必要に応じて、本明細書で引用される関連の参考文献、またはＥＭＤミリポア社（ｗｗｗ．ｅｍｄｍｉｌｌｉｐｏｒｅ．ｃｏｍ）もしくはＫｉｎｏｍｅＳｃａｎウェブサイト（ｗｗｗ．ｋｉｎｏｍｅｓｃａｎ．ｃｏｍ）から入手できるＫｉｎａｓｅＰｒｏｆｉｌｅｒ Ｓｅｒｖｉｃｅ Ａｓｓａｙ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ（ｖ５４、２０１１）に見出すことができる（ＫＩＮＯＭＥｓｃａｎのアッセイ方法のより詳細な説明については、Fabian et al. A small molecule-kinase interaction map for clinical
kinase inhibitors. Nat. Biotechnol. 23, 329-336 (2005)を参照されたい）。概要を以下に示す。
ＫｉｎａｓｅＰｒｏｆｉｌｅｒ（商標）アッセイ（ＥＭＤミリポア社、マサチューセッツ州ビルリカ）は純化又は部分的に純化されたヒトキナーゼを用いた放射性リガンド結合試験である。ＫｉｎａｓｅＰｒｏｆｉｌｅｒ（商標）アッセイの多くは、２０ｍＭ ＭＯＰＳ、１ｍＭ ＥＤＴＡ、０．０１％Ｂｒｉｊ－３５、５％グリセロール、０．１％ｂ－メルカプトエタノール、１ｍｇ／ｍＬ ＢＳＡにおいて行われる。前記アッセイは、γ－３２Ｐ－ＡＴＰから標的ペプチドへの３２Ｐの移行、その後の洗浄および標識されたペプチドのフィルター上でのトラップを含む。使用したγ－３２Ｐ－ＡＴＰの濃度は、ＡＴＰの確立されたＫｍであった。個々のキナーゼに対する具体的なアッセイプロトコルは、上記のｗｗｗ．ｅｍｄｍｉｌｌｉｐｏｒｅ．ｃｏｍを参照することにより見出すことができる。
ＫｉｎｏｍｅＳｃａｎ（商標）アッセイ（ディスカバーエックス社（米国カリフォルニア州サンディエゴ）は、活性部位特異的な競合結合アッセイである。簡潔に説明すると、キナーゼ活性部位に結合している化合物Ａは、直接的（立体的）にまたは間接的（アロステリック）に、固定されたリガンドへのキナーゼ結合を阻止し、固相上に捕捉されるＤＮＡ標識キナーゼの量を減少させ得る。前記キナーゼと結合しない試験分子は、固相上に捕捉されるキナーゼの量に影響を及ぼさない。対照試料中に対する、試験試料中の捕捉されるキナーゼの量は、各キナーゼ分子上の結合したＤＮＡ標識を検出するｑＰＣＲ法を用いて測定される。試験化合物－キナーゼ相互作用の解離定数（Ｋｄ）は、試験化合物濃度の関数として、固相上に捕捉されるキナーゼの量を測定することにより算出される。Ａｘｌについて１１点のＫｄ測定を行い（０．００５ｎＭ～３００ｎＭ）、その後、４５１種のキナーゼパネル全てについて５点（０．４、４、４０、４００、４０００ｎＭ）の測定を行った。これらのデータに基づき、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍを用いてＩＣ５０を推定した。
結果
Ａｘｌキナーゼに対する作用強度
試験２における１１点のＫｄ測定は、ＫｉｎｏｍｅＳｃａｎアッセイにおける０．４ｎＭのＫｄ（図１Ａ）を示している。４５１種のキナーゼの全検討で使用された５点測定から推定された値は、０．７ｎＭにおいて、ほぼ一致している。
Ａｘｌキナーゼに対する作用強度
試験２における１１点のＫｄ測定は、ＫｉｎｏｍｅＳｃａｎアッセイにおける０．４ｎＭのＫｄ（図１Ａ）を示している。４５１種のキナーゼの全検討で使用された５点測定から推定された値は、０．７ｎＭにおいて、ほぼ一致している。
３つのＫｉｎａｓｅＰｒｏｆｉｌｅｒに基づく試験（１、３および４）において、９０μＭのＡＴＰ（Ａｘｌキナーゼに対するＡＴＰの確立されたＫｍ）の存在下で、ＩＣ５０は４．６±１．５ｎＭであった（図１Ｂ）。Holland et. al. Cancer Res. 70: 1544-54 (2010)において、Ａｘｌに対する化合物ＡのＩＣ５０値が１４ｎＭであることが報告された。
他の野生型キナーゼに対する作用強度
以下の表２は、本明細書で要約された様々な試験で得られた結果を比較している。前記生化学分析の少なくとも１つにおいて、Ａｘｌキナーゼの反応の１０倍以内の平均ＩＣ５０またはＫｄで、化合物Ａと明らかに反応する種々の野生型キナーゼを表に列挙する。同じアッセイで同じキナーゼが複数回試験された場合は、平均値を示す。Ｔｙｒｏ３キナーゼは、受容体型チロシンキナーゼのＴＡＭファミリー（Ａｘｌと最も密接な関係があるキナーゼ（Ｔｙｒｏ３、Ａｘｌ、ＭｅｒＴＫ））のメンバーであるため、表に含まれる。また、前記キナーゼについて得られた値と、同じアッセイでＡｘｌについて得られた平均値が、何倍の差であるかも示される。
以下の表２は、本明細書で要約された様々な試験で得られた結果を比較している。前記生化学分析の少なくとも１つにおいて、Ａｘｌキナーゼの反応の１０倍以内の平均ＩＣ５０またはＫｄで、化合物Ａと明らかに反応する種々の野生型キナーゼを表に列挙する。同じアッセイで同じキナーゼが複数回試験された場合は、平均値を示す。Ｔｙｒｏ３キナーゼは、受容体型チロシンキナーゼのＴＡＭファミリー（Ａｘｌと最も密接な関係があるキナーゼ（Ｔｙｒｏ３、Ａｘｌ、ＭｅｒＴＫ））のメンバーであるため、表に含まれる。また、前記キナーゼについて得られた値と、同じアッセイでＡｘｌについて得られた平均値が、何倍の差であるかも示される。
結合アッセイ（ＫｉｎｏｍｅＳｃａｎ）において、化合物ＡはＡｘｌおよびＹｓｋ４に強く結合した。しかし、キナーゼ活性に基づく生化学分析（ＫｉｎａｓｅＰｒｏｆｉｌｅｒ）では、８つのさらなるキナーゼが、Ａｘｌに対するＩＣ５０の１０倍未満のＩＣ５０での阻害を示した。
変異キナーゼに対する作用強度
ＫｉｎｏｍｅＳｃａｎ試験番号２はヒト腫瘍で見られるいくつかの変異キナーゼを含んでいるが、そのうちのいくつかはがん増殖を駆動する変異であることが知られている。こ
れらのうちのいくつかは、これらの野生型よりも予想外に高い化合物Ａ結合を示した。従って、利用可能である場合は、これらおよび関連する変異キナーゼもＫｉｎａｓｅＰｒｏｆｉｌｅｒアッセイ（試験３）で試験して、第二のアッセイ系での確認を得た。結果を表３に要約する。
ＫｉｎｏｍｅＳｃａｎ試験番号２はヒト腫瘍で見られるいくつかの変異キナーゼを含んでいるが、そのうちのいくつかはがん増殖を駆動する変異であることが知られている。こ
れらのうちのいくつかは、これらの野生型よりも予想外に高い化合物Ａ結合を示した。従って、利用可能である場合は、これらおよび関連する変異キナーゼもＫｉｎａｓｅＰｒｏｆｉｌｅｒアッセイ（試験３）で試験して、第二のアッセイ系での確認を得た。結果を表３に要約する。
本アッセイにおける化合物Ａは、いくつかの変異キナーゼの強力な阻害剤であることが示された。具体的には、化合物Ａは、Ａｘｌそれ自体のその阻害と同様の作用強度で、Ａｂｌキナーゼのゲートキーパー変異であるＡｂｌ（Ｔ３１５Ｉ）を阻害する。いくつかの他のＡｂｌキナーゼ変異もＡｘｌの１０倍の範囲内で阻害される。ｃＫｉｔ変異体であるｃ－Ｋｉｔ（Ｄ８１６Ｈ）も、Ａｘｌと同じ濃度範囲内で阻害される。ｃ－Ｋｉｔ（Ｄ８１６Ｈ）変異は、イマチニブおよびスニチニブ療法に対し獲得耐性を発現している、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）を有する患者において検出されている（Gajiwala et. al. Proc.
Natl. Acad. Sci. 106:1542-7 (2009)）。
Natl. Acad. Sci. 106:1542-7 (2009)）。
考察
Ａｘｌ阻害に加えて、化合物Ａは、いくつかの他のキナーゼに対する有意な活性も示した。いくつかの場合において、化合物Ａは、がんに関連する変異キナーゼに対して有意な活性を示したが、未変異キナーゼに対しては有意な活性を示さなかった。
Ａｘｌ阻害に加えて、化合物Ａは、いくつかの他のキナーゼに対する有意な活性も示した。いくつかの場合において、化合物Ａは、がんに関連する変異キナーゼに対して有意な活性を示したが、未変異キナーゼに対しては有意な活性を示さなかった。
キナーゼ活性部位ＡＴＰ－結合ポケットに対するＡｘｌの結合の程度を測定する競合結合アッセイ（ＫｉｎｏｍｅＳｃａｎ（商標））によると、化合物Ａは、Ａｘｌ（Ｋｄ＝０．４ｎＭ）およびＹｓｋ４（Ｋｄ＝１．６ｎＭ）に対し強力な結合を示す。Ｙｓｋ４はＳＴＥキナーゼファミリーのメンバーである。
１３０超のキナーゼに対して行われたキナーゼ阻害のＫｉｎａｓｅＰｒｏｆｉｌｅｒ（商標）アッセイは、４６ｎＭ未満のＩＣ５０（４．６ｎＭであるＡｘｌ ＩＣ５０の１０倍）で化合物Ａによって阻害される可能性がある少なくとも９種を特定した：Ａｘｌ、ＭｅｒＴＫ、Ｓｔｋ１０（ＬＯＫ）、ＴＥＫ、Ｗｅｅ１、Ｒｅｔ、Ｆｌｔ１、Ｆｌｔ４、Ｙｅｓ。
証拠を組み合わせることにより、Ａｘｌ阻害に加えて、化合物Ａは、Ａｘｌ阻害に必要とされる濃度の４～１０倍の濃度で、少なくともＹｓｋ４、ＭｅｒＴＫ、Ｓｔｋ１０、ＴＥＫ、Ｗｅｅ１、Ｒｅｔ、Ｆｌｔ１、Ｆｌｔ４およびＹｅｓキナーゼを阻害し得ることが示唆される。
これらの野生型キナーゼに加えて、化合物Ａがいくつかの変異キナーゼを、これらの野生型の親よりもさらに強力に阻害するという証拠がある。これらのうち最も有意なものは、Ａｂｌ（Ｔ３１５Ｉ）の強力な阻害（ＩＣ５０＝４ｎＭ）である。Ａｂｌ（Ｔ３１５Ｉ）変異は、イマチニブによる治療からの慢性骨髄性白血病の回避におけるその役割において、「ゲートキーパー」変異として知られている。同様に、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）を有する患者におけるイマチニブおよびスニチニブに対する獲得耐性と共に生じる変異である、Ｋｉｔ（Ｄ８１６Ｈ）に対して強力な阻害が見られた。耐性の発現中に生じるＡｂｌキナーゼの他の変異も、１６～３２ｎＭ化合物Ａの範囲で阻害された。Ｆｌｔ３変異Ｄ８３５Ｈ、Ｄ８３５Ｙ、Ｋ６６３Ｑ、およびＡ８２９Ｐも全て、８～２９ｎＭの範囲で阻害された。未変異キナーゼではなく、がんに関連する変異型キナーゼに対する化合物Ａの活性は、正常組織が影響を受けないはずであることから、望まれない副作用を起こしにくい。これらの活性は、これらの変異キナーゼに対する化合物Ａの適用の可能性を示唆するものである。
例として、変異キナーゼと病状との関連を以下の表４にまとめる。
変異キナーゼを発現する細胞に対する化合物Ａの選択性
図２は、Ｔ３１５Ｉ変異型Ｂｃｒ－Ａｂｌ１融合タンパク質を発現するＢａ／Ｆ３骨髄由来マウス細胞が、非変異型Ｂｃｒ－Ａｂｌ１キナーゼ（ＩＣ５０ ７９６ｎＭ）を発現する細胞と比較して、化合物Ａに対してより感受性が高い（ＩＣ５０ ５７０ｎＭ）ことを示している。
図２は、Ｔ３１５Ｉ変異型Ｂｃｒ－Ａｂｌ１融合タンパク質を発現するＢａ／Ｆ３骨髄由来マウス細胞が、非変異型Ｂｃｒ－Ａｂｌ１キナーゼ（ＩＣ５０ ７９６ｎＭ）を発現する細胞と比較して、化合物Ａに対してより感受性が高い（ＩＣ５０ ５７０ｎＭ）ことを示している。
Ｂｃｒ－Ａｂｌ１（Ａ）または変異型Ｂｃｒ－Ａｂｌ１ Ｔ３１５Ｉ（Ｂ）を安定に過剰発現するＢａ／Ｆ３細胞を、２ｍＭグルタミン、１００Ｕ／ｍＬペニシリンおよび１０
０μｇ／ｍＬストレプトマイシン（シグマ－アルドリッチ社）を添加した血清非含有ＲＰＭＩ－１６４０培地中で、一晩培養した。次の日、細胞を、９６ウェルプレート内に、各ウェルが１００μｌ体積の血清非含有ＲＭＰＩ培地中で２０００個の細胞を含むように、播種した。続いて、異なる濃度の化合物Ａを含有する５０μｌの血清非含有ＲＰＭＩ培地を加えた（３連）。各ウェルの化合物Ａの最終濃度は、０、２５０、５００、１０００、２０００、３０００、４０００および５０００ｎＭであった。９６ウェルプレートを４８時間インキュベートし、細胞生存率をＷＳＴ－１アッセイ（ロシュ社）で測定した。簡潔に説明すると、５μｌのＷＳＴ－１溶液を各ウェルに加え、９６ウェルプレートをさらに２時間インキュベートした。読み取りは４８０ｎｍ（測定）／６２０ｎｍ（基準）でＥＬＳＡリーダー内で行った。その後、Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ Ｅｘｃｅｌ ２００３およびＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ４．０を用いてデータ解析を行った。
０μｇ／ｍＬストレプトマイシン（シグマ－アルドリッチ社）を添加した血清非含有ＲＰＭＩ－１６４０培地中で、一晩培養した。次の日、細胞を、９６ウェルプレート内に、各ウェルが１００μｌ体積の血清非含有ＲＭＰＩ培地中で２０００個の細胞を含むように、播種した。続いて、異なる濃度の化合物Ａを含有する５０μｌの血清非含有ＲＰＭＩ培地を加えた（３連）。各ウェルの化合物Ａの最終濃度は、０、２５０、５００、１０００、２０００、３０００、４０００および５０００ｎＭであった。９６ウェルプレートを４８時間インキュベートし、細胞生存率をＷＳＴ－１アッセイ（ロシュ社）で測定した。簡潔に説明すると、５μｌのＷＳＴ－１溶液を各ウェルに加え、９６ウェルプレートをさらに２時間インキュベートした。読み取りは４８０ｎｍ（測定）／６２０ｎｍ（基準）でＥＬＳＡリーダー内で行った。その後、Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ Ｅｘｃｅｌ ２００３およびＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ４．０を用いてデータ解析を行った。
これらの結果により、式（Ｉ）の化合物が、変異を有さない等価な細胞と比較して、変異キナーゼを発現する細胞に対してより大きな細胞毒性を示すことが確認される。
結論
化合物Ａは、血清タンパク質非存在下でのキナーゼ活性の阻害において０．４ｎＭのＫｄおよび５～１５ｎＭのＩＣ５０を有する、Ａｘｌキナーゼの強力な阻害剤である。他の非変異型キナーゼ（例えば、Ｙｓｋ４、ＭｅｒＴＫ、Ｓｔｋ１０、ＴＥＫ、Ｗｅｅ１、およびＹｅｓ）への結合／阻害は、４～１０倍より高い濃度範囲で生じ得る。化合物Ａはまた、Ａｘｌ阻害と比較して１０倍未満のより高い濃度で、慢性骨髄性白血病における「ゲートキーパー」変異、Ａｂｌ（Ｔ３１５Ｉ）、ｃＫｉｔ（Ｄ８１６Ｈ）、Ｆｌｔ３（Ｄ８３５Ｙ）、Ｒｅｔ（Ｖ８０４ＬおよびＭ）およびＴＥＫ（Ｙ８９７ＳおよびＲ８４９Ｗ）を含むいくつかの変異キナーゼと結合しそれを阻害したが、このことは、いくつかの変異キナーゼがこの化合物および式（I）の関連化合物の代替標的となり得ることを示唆している。Ａｂｌ（Ｔ３１５Ｉ）は、ＣＭＬにおけるＡｂｌキナーゼ阻害剤イマチニブへの耐性発現時にしばしば見られ、一方、ｃＫｉｔ（Ｄ８１６Ｈ）は、ＧＩＳＴにおけるイマチニブおよびスニチニブへの耐性発現後にしばしば見られる。
化合物Ａは、血清タンパク質非存在下でのキナーゼ活性の阻害において０．４ｎＭのＫｄおよび５～１５ｎＭのＩＣ５０を有する、Ａｘｌキナーゼの強力な阻害剤である。他の非変異型キナーゼ（例えば、Ｙｓｋ４、ＭｅｒＴＫ、Ｓｔｋ１０、ＴＥＫ、Ｗｅｅ１、およびＹｅｓ）への結合／阻害は、４～１０倍より高い濃度範囲で生じ得る。化合物Ａはまた、Ａｘｌ阻害と比較して１０倍未満のより高い濃度で、慢性骨髄性白血病における「ゲートキーパー」変異、Ａｂｌ（Ｔ３１５Ｉ）、ｃＫｉｔ（Ｄ８１６Ｈ）、Ｆｌｔ３（Ｄ８３５Ｙ）、Ｒｅｔ（Ｖ８０４ＬおよびＭ）およびＴＥＫ（Ｙ８９７ＳおよびＲ８４９Ｗ）を含むいくつかの変異キナーゼと結合しそれを阻害したが、このことは、いくつかの変異キナーゼがこの化合物および式（I）の関連化合物の代替標的となり得ることを示唆している。Ａｂｌ（Ｔ３１５Ｉ）は、ＣＭＬにおけるＡｂｌキナーゼ阻害剤イマチニブへの耐性発現時にしばしば見られ、一方、ｃＫｉｔ（Ｄ８１６Ｈ）は、ＧＩＳＴにおけるイマチニブおよびスニチニブへの耐性発現後にしばしば見られる。
実施例２：ＦＬＴ３変異型Ｂａ／Ｆ３細胞における化合物Ａのインビトロ評価
目的
本研究の目的は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）の治療において、Ａｘｌ受容体型チロシンキナーゼの新規の高度に選択的な小分子阻害剤である化合物Ａの評価を行うことであった。化合物Ａへの暴露後の、４つの異なるＢａ／Ｆ３細胞株（野生型Ｂａ／Ｆ３細胞または野生型もしくは変異型ＦＬＴ３を発現するＢａ／Ｆ３細胞）の細胞生存率を評価することにより、化合物Ａの有効性を評価することが望まれた。化合物Ａを８つの濃度（０、０．０１、０．１、０．３、０．５、１、３、１０μＭ）でＢａ／Ｆ３細胞に添加し、４８時間インキュベートした。処理したＢａ／Ｆ３細胞を、増殖（ＷＳＴ－１および３Ｈ－チミジン取り込み）について、並びにアポトーシスマーカーであるアネキシンＶおよびヨウ化プロピジウム（ＰＩ）の検出についてアッセイして、ＥＣ５０値およびＩＣ５０値を決定した。
目的
本研究の目的は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）の治療において、Ａｘｌ受容体型チロシンキナーゼの新規の高度に選択的な小分子阻害剤である化合物Ａの評価を行うことであった。化合物Ａへの暴露後の、４つの異なるＢａ／Ｆ３細胞株（野生型Ｂａ／Ｆ３細胞または野生型もしくは変異型ＦＬＴ３を発現するＢａ／Ｆ３細胞）の細胞生存率を評価することにより、化合物Ａの有効性を評価することが望まれた。化合物Ａを８つの濃度（０、０．０１、０．１、０．３、０．５、１、３、１０μＭ）でＢａ／Ｆ３細胞に添加し、４８時間インキュベートした。処理したＢａ／Ｆ３細胞を、増殖（ＷＳＴ－１および３Ｈ－チミジン取り込み）について、並びにアポトーシスマーカーであるアネキシンＶおよびヨウ化プロピジウム（ＰＩ）の検出についてアッセイして、ＥＣ５０値およびＩＣ５０値を決定した。
材料および方法
細胞株
マウスのプロＢリンパ球系Ｂａ／Ｆ３野生型（Ｂａ／Ｆ３ ＷＴ）、および野生型ヒトＦＬＴ３（Ｂａ／Ｆ３ ＦＬＴ３ ＷＴ細胞）またはタンパク質の恒常的な機能的活性化をもたらすＩＴＤ変異（Ｂａ／Ｆ３－ＩＴＤ細胞）もしくはＤ８３５Ｙ（Ｂａ／Ｆ３ Ｄ８３５Ｙ細胞）点変異を含有するヒトＦＬＴ３をコードする発現ベクターにより安定に形質導入されたＢａ／Ｆ３系を、Ｂｊoｒｎ Ｔｏｒｅ Ｇｊｅｒｔｓｅｎ（臨床科学科、血液学部門、 ベルゲン大学、ベルゲン、ノルウェイ）から入手した。Ｂａ／Ｆ３ ＷＴ
細胞、Ｂａ／Ｆ３ ＦＬＴ３ ＷＴ細胞およびＢａ／Ｆ３ ８３５Ｙ細胞を、１０％ウシ胎仔血清（ＦＣＳ、ハイクローン社（ＨｙＣｌｏｎｅ）、ユタ州ローガン）、２ｍＭ Ｌ－グルタミンおよび５０Ｕ／ｍＬペニシリン－ストレプトマイシン（シグマ－アルドリッチ社、米国ミズーリ州セントルイス）、並びにマウスインターロイキン－３（ｍＩＬ－３）の供給源としての１０％ＷＥＨＩ－３Ｂ条件培地を含有するＲＰＭＩ－１６４０培地中で維持した。Ｂａ／Ｆ３－ＩＴＤ細胞はｍＩＬ－３非存在下で維持した。
細胞株
マウスのプロＢリンパ球系Ｂａ／Ｆ３野生型（Ｂａ／Ｆ３ ＷＴ）、および野生型ヒトＦＬＴ３（Ｂａ／Ｆ３ ＦＬＴ３ ＷＴ細胞）またはタンパク質の恒常的な機能的活性化をもたらすＩＴＤ変異（Ｂａ／Ｆ３－ＩＴＤ細胞）もしくはＤ８３５Ｙ（Ｂａ／Ｆ３ Ｄ８３５Ｙ細胞）点変異を含有するヒトＦＬＴ３をコードする発現ベクターにより安定に形質導入されたＢａ／Ｆ３系を、Ｂｊoｒｎ Ｔｏｒｅ Ｇｊｅｒｔｓｅｎ（臨床科学科、血液学部門、 ベルゲン大学、ベルゲン、ノルウェイ）から入手した。Ｂａ／Ｆ３ ＷＴ
細胞、Ｂａ／Ｆ３ ＦＬＴ３ ＷＴ細胞およびＢａ／Ｆ３ ８３５Ｙ細胞を、１０％ウシ胎仔血清（ＦＣＳ、ハイクローン社（ＨｙＣｌｏｎｅ）、ユタ州ローガン）、２ｍＭ Ｌ－グルタミンおよび５０Ｕ／ｍＬペニシリン－ストレプトマイシン（シグマ－アルドリッチ社、米国ミズーリ州セントルイス）、並びにマウスインターロイキン－３（ｍＩＬ－３）の供給源としての１０％ＷＥＨＩ－３Ｂ条件培地を含有するＲＰＭＩ－１６４０培地中で維持した。Ｂａ／Ｆ３－ＩＴＤ細胞はｍＩＬ－３非存在下で維持した。
化合物
化合物ＡをＤＭＳＯ中に溶解し－２０℃で保存した。細胞培養の作業で使用する場合、ＤＭＳＯの最終濃度は０．０５％を超えないようにした。
化合物ＡをＤＭＳＯ中に溶解し－２０℃で保存した。細胞培養の作業で使用する場合、ＤＭＳＯの最終濃度は０．０５％を超えないようにした。
アポトーシス検出および細胞増殖アッセイ
Ｂａ／Ｆ３細胞を、０．１ｎｇ／ｍＬのｍＩＬ－３（プロスペックＢＩＯ社（Prospec BIO）、米国）を含有する培地中で、治療期間の前に一晩および治療期間の間、インキュベートした。
Ｂａ／Ｆ３細胞を、０．１ｎｇ／ｍＬのｍＩＬ－３（プロスペックＢＩＯ社（Prospec BIO）、米国）を含有する培地中で、治療期間の前に一晩および治療期間の間、インキュベートした。
アポトーシス／細胞死アッセイ
アポトーシス細胞および壊死細胞の定量化は、Ａｌｅｘａ（登録商標）Ｆｌｕｏｒ６４７（インビトロジェン社、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ、米国オレゴン州）結合型アネキシンＶでホスファチジルセリンの外在化を測定することにより、およびヨウ化プロピジウム（ＰＩ；シグマ－アルドリッチ社）を死細胞対比染色剤として用いて、定量した。インビトロでＢａ／Ｆ３細胞（ＷＴ、ＦＬＴ３ ＷＴ、ＦＬＴ３－ＩＴＤ、Ｄ８３５Ｙ）の細胞生存率を評価するために、細胞を２４ウェルプレート上に１ｘ１０５細胞／培地ｍｌの密度で播種し、その後、化合物Ａ（０、０．０１、０．１、０．３、０．５、１、３、１０μＭ）で４８時間処理した。薬剤処理の後、細胞を製造会社のプロトコルに従って染色し、その後、Ａｃｃｕｒｉ Ｃ６フローサイトメーター（ベクトン・ディッキンソン・イミュノサイトメトリー・システムズ社（Becton Dickinson Immunocytometry Systems）、米国カリフォルニア州サンノゼ）で解析した。ＦｌｏｗＪｏソフトウェアバージョン１０（ツリースター社（Tree Star, Inc.）、米国オレゴン州アシュランド）をデータ解析に用いた。早期アポトーシス細胞（アネキシンＶ陽性、ＰＩ陰性）、後期アポトーシス細胞（アネキシンＶ陽性およびＰＩ陽性）の両方および壊死細胞（アネキシンＶ陰性およびＰＩ陽性）を細胞死判定に含めた。生細胞率は単独の実験で行われた未処理細胞の割合として表した。ＩＣ５０値を阻害剤のＥＣ５０として決定した；最大（図３Ａ上段）反応と最大阻害（図３Ａ下段）反応の中間の反応を誘発する濃度。
アポトーシス細胞および壊死細胞の定量化は、Ａｌｅｘａ（登録商標）Ｆｌｕｏｒ６４７（インビトロジェン社、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ、米国オレゴン州）結合型アネキシンＶでホスファチジルセリンの外在化を測定することにより、およびヨウ化プロピジウム（ＰＩ；シグマ－アルドリッチ社）を死細胞対比染色剤として用いて、定量した。インビトロでＢａ／Ｆ３細胞（ＷＴ、ＦＬＴ３ ＷＴ、ＦＬＴ３－ＩＴＤ、Ｄ８３５Ｙ）の細胞生存率を評価するために、細胞を２４ウェルプレート上に１ｘ１０５細胞／培地ｍｌの密度で播種し、その後、化合物Ａ（０、０．０１、０．１、０．３、０．５、１、３、１０μＭ）で４８時間処理した。薬剤処理の後、細胞を製造会社のプロトコルに従って染色し、その後、Ａｃｃｕｒｉ Ｃ６フローサイトメーター（ベクトン・ディッキンソン・イミュノサイトメトリー・システムズ社（Becton Dickinson Immunocytometry Systems）、米国カリフォルニア州サンノゼ）で解析した。ＦｌｏｗＪｏソフトウェアバージョン１０（ツリースター社（Tree Star, Inc.）、米国オレゴン州アシュランド）をデータ解析に用いた。早期アポトーシス細胞（アネキシンＶ陽性、ＰＩ陰性）、後期アポトーシス細胞（アネキシンＶ陽性およびＰＩ陽性）の両方および壊死細胞（アネキシンＶ陰性およびＰＩ陽性）を細胞死判定に含めた。生細胞率は単独の実験で行われた未処理細胞の割合として表した。ＩＣ５０値を阻害剤のＥＣ５０として決定した；最大（図３Ａ上段）反応と最大阻害（図３Ａ下段）反応の中間の反応を誘発する濃度。
ＷＳＴ－１細胞増殖アッセイ
生細胞内のミトコンドリア脱水素酵素によって色素生産性ホルマザン色素へと切断されるテトラゾリウム塩ＷＳＴ－１を用いて、細胞の増殖を評価した。Ｂａ／Ｆ３細胞を、９６ウェルプレート上に１ウェル当たり１００μＬの培地中１０×１０３細胞の密度で３連で播種し、化合物Ａ（０、０．０１、０．１、０．３、０．５、１、３、１０μＭ）で４８時間処理し、１：１１希釈したＷＳＴ－１（ロシュ社、バーゼル、スイス）を治療期間の最後の４時間各ウェルに添加した。試料の吸光度をＳｐｅｃｔｒａｍａｘ Ｐｌｕｓ ３８４分光光度計（モレキュラーデバイス社．、米国カリフォルニア州サニーベール）で測定し、増殖の割合を以下の式を用いて算出した：
生細胞内のミトコンドリア脱水素酵素によって色素生産性ホルマザン色素へと切断されるテトラゾリウム塩ＷＳＴ－１を用いて、細胞の増殖を評価した。Ｂａ／Ｆ３細胞を、９６ウェルプレート上に１ウェル当たり１００μＬの培地中１０×１０３細胞の密度で３連で播種し、化合物Ａ（０、０．０１、０．１、０．３、０．５、１、３、１０μＭ）で４８時間処理し、１：１１希釈したＷＳＴ－１（ロシュ社、バーゼル、スイス）を治療期間の最後の４時間各ウェルに添加した。試料の吸光度をＳｐｅｃｔｒａｍａｘ Ｐｌｕｓ ３８４分光光度計（モレキュラーデバイス社．、米国カリフォルニア州サニーベール）で測定し、増殖の割合を以下の式を用いて算出した：
（任意単位（ＡＵ）の処理試料－ＡＵのバックグラウンド対照）／（ＡＵの未処理試料－ＡＵのバックグラウンド対照）。
３Ｈ－チミジン取り込みによる細胞増殖アッセイ
Ｂａ／Ｆ３細胞を９６ウェルプレート上に１ウェル当たり１００μＬの培地中１０×１
０３細胞の密度で３連で播種し、化合物Ａ（０、０．０１、０．１、０．３、０．５、１、３、１０μＭ）で３０時間処理し、３Ｈ－チミジン（１μＣｉ／ウェル；ＴＲＡ３１０、アマシャム・インターナショナル社（Amersham International）、アマーシャム、ＵＫ）を添加した。１８時間のインキュベーションの後、ＤＮＡを回収し、放射活性を液体シンチレーション計測（Ｐａｃｋａｒｄ Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ Ｓｃｉｎｔｉｌｌａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ ｃｏｕｎｔｅｒ、パーキンエルマー・ライフ・アンド・アナリティカル・サイエンス社（Perkin Elmer Life and Analytical Science, Inc.）、米国ウォルサム）で評価した。
Ｂａ／Ｆ３細胞を９６ウェルプレート上に１ウェル当たり１００μＬの培地中１０×１
０３細胞の密度で３連で播種し、化合物Ａ（０、０．０１、０．１、０．３、０．５、１、３、１０μＭ）で３０時間処理し、３Ｈ－チミジン（１μＣｉ／ウェル；ＴＲＡ３１０、アマシャム・インターナショナル社（Amersham International）、アマーシャム、ＵＫ）を添加した。１８時間のインキュベーションの後、ＤＮＡを回収し、放射活性を液体シンチレーション計測（Ｐａｃｋａｒｄ Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ Ｓｃｉｎｔｉｌｌａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ ｃｏｕｎｔｅｒ、パーキンエルマー・ライフ・アンド・アナリティカル・サイエンス社（Perkin Elmer Life and Analytical Science, Inc.）、米国ウォルサム）で評価した。
統計解析
Ｐｒｉｓｍ Ｖｅｒｓｉｏｎ ５．０ソフトウェア（グラフパッド・ソフトウェア社、カリフォルニア州ラ・ホーヤ）を用いて統計解析を行った。増殖アッセイの結果を平均値±ＳＥＭとして示す。独立した両側スチューデントｔ検定を用いてデータを比較した。Ｐ＝０．０５よりも大きな差異を有意と見なした。
Ｐｒｉｓｍ Ｖｅｒｓｉｏｎ ５．０ソフトウェア（グラフパッド・ソフトウェア社、カリフォルニア州ラ・ホーヤ）を用いて統計解析を行った。増殖アッセイの結果を平均値±ＳＥＭとして示す。独立した両側スチューデントｔ検定を用いてデータを比較した。Ｐ＝０．０５よりも大きな差異を有意と見なした。
結果
アポトーシス検出および細胞増殖アッセイ
化合物Ａ処理（０、０．０１、０．１、０．３、０．５、１、３および１０μＭ）から４８時間後の生存率を、４つのＢａ／Ｆ３細胞株クローンについて、アネキシンＶ－ＰＩアッセイを用いて評価した。用量反応曲線（図３Ａおよび図３Ｃ）は、調べられたＢａ／Ｆ３細胞株における、化合物Ａの狭い治療濃度域（０．５～３μＭ）を示した。１μＭの化合物Ａでの４８時間の処理が、細胞株間で有効性における最も大きな差異を示した（図３Ｂおよび図３Ｄ）。変異型Ｂａ／Ｆ３ Ｄ８３５Ｙ細胞株が、化合物Ａ処理に対して最も感受性が高いと思われる（図３）。
アポトーシス検出および細胞増殖アッセイ
化合物Ａ処理（０、０．０１、０．１、０．３、０．５、１、３および１０μＭ）から４８時間後の生存率を、４つのＢａ／Ｆ３細胞株クローンについて、アネキシンＶ－ＰＩアッセイを用いて評価した。用量反応曲線（図３Ａおよび図３Ｃ）は、調べられたＢａ／Ｆ３細胞株における、化合物Ａの狭い治療濃度域（０．５～３μＭ）を示した。１μＭの化合物Ａでの４８時間の処理が、細胞株間で有効性における最も大きな差異を示した（図３Ｂおよび図３Ｄ）。変異型Ｂａ／Ｆ３ Ｄ８３５Ｙ細胞株が、化合物Ａ処理に対して最も感受性が高いと思われる（図３）。
より高い用量のＡｘｌ阻害剤（３μＭ以上）と一緒にインキュベートした場合、ＦＬＴ３状態にかかわらず、全ての細胞株において大規模なアポトーシス誘導が観察された。デブリを含まず単一細胞のみを含む対象母集団から生細胞および死細胞をゲーティングした。生細胞は両方のアポトーシスマーカーに対しダブルネガティブであるという特徴を有し、一方、死細胞は早期アポトーシス細胞（アネキシンＶ＋／ＰＩ－）、後期アポトーシス細胞（アネキシンＶ＋／ＰＩ＋）および壊死細胞（アネキシンＶ－／ＰＩ＋）を含んだ。
ＷＳＴ－１および３Ｈ－チミジン取り込みによる細胞増殖アッセイ
細胞増殖アッセイの結果は、Ｂａ／Ｆ３細胞が非常に狭い化合物Ａの濃度範囲内で極めて応答性が高いことを示している。３μＭの化合物Ａにより、細胞株に関係なく全ての細胞が死滅する。それでもなお、Ｂａ／Ｆ３ ＦＬＴ３ Ｄ８３５Ｙ細胞株が最も感受性が高いことが分かる。Ｂａ／Ｆ３ ＦＬＴ３ ＩＴＤは、Ｂａ／Ｆ３ ＷＴおよびＢａＦ３
ＦＬＴ３ ＷＴに匹敵する感受性を示す（図４）。
細胞増殖アッセイの結果は、Ｂａ／Ｆ３細胞が非常に狭い化合物Ａの濃度範囲内で極めて応答性が高いことを示している。３μＭの化合物Ａにより、細胞株に関係なく全ての細胞が死滅する。それでもなお、Ｂａ／Ｆ３ ＦＬＴ３ Ｄ８３５Ｙ細胞株が最も感受性が高いことが分かる。Ｂａ／Ｆ３ ＦＬＴ３ ＩＴＤは、Ｂａ／Ｆ３ ＷＴおよびＢａＦ３
ＦＬＴ３ ＷＴに匹敵する感受性を示す（図４）。
結論
本研究では、Ａｘｌ受容体型チロシンキナーゼの高度に選択的な小分子阻害剤である化合物Ａが、調べられたＢａ／Ｆ３細胞株クローンにおいて狭い治療濃度域（０．５～３μＭ）を有することが示された。アポトーシスアッセイおよび増殖アッセイの両方が類似の結果を示し、Ｂａ／Ｆ３ Ｄ８３５Ｙ細胞株が化合物Ａ処理によるＡｘｌ阻害に対し最も感受性が高いということが確認された。
本研究では、Ａｘｌ受容体型チロシンキナーゼの高度に選択的な小分子阻害剤である化合物Ａが、調べられたＢａ／Ｆ３細胞株クローンにおいて狭い治療濃度域（０．５～３μＭ）を有することが示された。アポトーシスアッセイおよび増殖アッセイの両方が類似の結果を示し、Ｂａ／Ｆ３ Ｄ８３５Ｙ細胞株が化合物Ａ処理によるＡｘｌ阻害に対し最も感受性が高いということが確認された。
実施例３
図５は、化合物Ａが、骨髄細胞にＴ３１５Ｉ変異型ＢＣＲ－ＡＢＬ１を含有するコンストラクトをレトロウイルスによって形質導入した侵襲性前臨床ＣＭＬモデルにおける白血病細胞負荷量を減少させたことを示している。
図５は、化合物Ａが、骨髄細胞にＴ３１５Ｉ変異型ＢＣＲ－ＡＢＬ１を含有するコンストラクトをレトロウイルスによって形質導入した侵襲性前臨床ＣＭＬモデルにおける白血病細胞負荷量を減少させたことを示している。
方法
６～８週齢の雄Ｂａｌｂ／ｃマウスを亜致死線量照射し、０．５ｘ１０６個のレトロウイルス導入性ＢＭ細胞（ｐＭＳＣＶ＿ｇｆｐ／ＢＣＲ－ＡＢＬ＿Ｔ３１５Ｉ）を静脈内注射した。３日後、マウスを無作為化し、化合物Ａ（２５（または５０）ｍｇ／Ｋｇマウス）またはプラセボで１日に２回処置した。
６～８週齢の雄Ｂａｌｂ／ｃマウスを亜致死線量照射し、０．５ｘ１０６個のレトロウイルス導入性ＢＭ細胞（ｐＭＳＣＶ＿ｇｆｐ／ＢＣＲ－ＡＢＬ＿Ｔ３１５Ｉ）を静脈内注射した。３日後、マウスを無作為化し、化合物Ａ（２５（または５０）ｍｇ／Ｋｇマウス）またはプラセボで１日に２回処置した。
骨髄ドナーマウス：ドナー骨髄を回収するため、マウスに５－ＦＵ（１５０ｍｇ／ｋｇマウス）を皮下注射した。骨髄を５日後に単離し、所望のレトロウイルスコンストラクトで形質導入した[Daley, G.Q., R.A. Van Etten, and D. Baltimore, Induction of chronic myelogenous leukemia in mice by the P210bcr/abl gene of the Philadelphia chromosome. Science, 1990. 247(4944): p. 824-30]。
実施例４
図６は、化合物ＡがＴ３１５Ｉ変異型および野生型ＣＭＬをインビボで阻害し得ることを示している。
図６は、化合物ＡがＴ３１５Ｉ変異型および野生型ＣＭＬをインビボで阻害し得ることを示している。
方法
６～８週齢の雄ＮＳＧマウスの右脇腹に、マウス当たり１×１０７個のＢａＦ３／ｗｔ－ＢＣＲ－ＡＢＬ細胞または１×１０７個のＢａＦ３／Ｔ３１５Ｉ細胞を皮下移植した。移植の５日後、マウスをおよそ１００ｍｍ３の平均体積を有する群に無作為化した。動物には化合物Ａ（２５（または５０）ｍｇ／ｋｇマウス）またはプラセボを（胃管栄養法で）１日２回処置した。腫瘍体積を２～３毎に測定した。動物を１２日目に屠殺し、腫瘍を組織学的検査用に包埋した。
６～８週齢の雄ＮＳＧマウスの右脇腹に、マウス当たり１×１０７個のＢａＦ３／ｗｔ－ＢＣＲ－ＡＢＬ細胞または１×１０７個のＢａＦ３／Ｔ３１５Ｉ細胞を皮下移植した。移植の５日後、マウスをおよそ１００ｍｍ３の平均体積を有する群に無作為化した。動物には化合物Ａ（２５（または５０）ｍｇ／ｋｇマウス）またはプラセボを（胃管栄養法で）１日２回処置した。腫瘍体積を２～３毎に測定した。動物を１２日目に屠殺し、腫瘍を組織学的検査用に包埋した。
Claims (3)
- Ａｘｌの過剰発現ならびにＡｂｌ１の活性化、変異および／または過剰発現と関連した疾患の治療または予防に使用するための医薬であって、
前記疾患が、線維症であって、ならびに
前記医薬が、
（ａ）１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（７－（ピロリジン－１－イル）－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン、および
（ｂ）１－（６，７－ジヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［６，７］シクロヘプタ［１，２－ｃ］ピリダジン－３－イル）－Ｎ３－（（７－（Ｓ）－ピロリジン－１－イル）－６，７，８，９－テトラヒドロ－５Ｈ－ベンゾ［７］アヌレン－２－イル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－３，５－ジアミン、から成る群から選択される化合物を含む、
医薬。 - 前記線維症が肝線維症である、請求項１に記載の医薬。
- 前記化合物が、一つまたは複数の追加の医薬品有効成分との順次または同時の組合せにおいて使用される、請求項１又は２に記載の医薬。
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